蛋白层析柱拖尾

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色谱峰的前沿与拖尾问题

1.产生前沿和拖尾的原因一般有哪些？拖尾：1 干扰峰，优化条件分离2 色谱柱塌陷，更换色谱柱 3 流动相pH不合适，调节pH值 4 管路没有接好，存在较大的死体积，可以重新接一下前沿：1 溶剂选择不合适，选择合适的溶剂 2 样品过载，降低进样量 3 柱温太低，升高柱温4 色谱柱损坏，更换色谱柱5 干扰峰，优化色谱条件分离可能的问题：1.柱子问题2.流动相不恰当3.定容样品的溶剂不合适产生峰前沿的原因：柱过载，柱头塌陷，溶剂选择不对产生峰拖尾的原因：存在杂质未分开，柱污染，柱子选择不对。

拖尾峰与柱子有关，可能是过载，稀释样品再做，或换新柱做吧一般产生托尾峰往往是有机性相近杂质没有分开，可以优化分析方法，或更换柱子试一试；也可能由于柱子使用时间太久柱效下降出现塌陷等原因；再有也会根样品本身性质有关，基团需要流动相中添加能与之结合优化峰形的化学物质，要根据具体情况而定。

柱子可能污染了吧，溶剂也可能有，或柱效下降。

图谱前沿和拖尾的原因主要是流动相选择不合适，可以相应调整流动相的极性，或者适当加入酸来调整，可以得到较好的改善。

一般来讲，酸碱在流动相中对于前沿和拖尾影响较大。

柱前沿是可能因为柱超载，拖尾是可能因为样品被污染，选择合适的流动相，调节好PH能够改善这以情况。

液相拖尾峰出现原因及解决办法：1.柱头有空隙。

解决办法：使用填料或玻璃珠填充柱顶部。

2.柱上样品超载。

解决办法：使用更高负载量的固定相。

增加色谱柱内径、减少样品量。

3.单峰- 存在干扰性组分。

解决办法：净化样品；预分离。

4.存在未扫的死体积。

解决办法：减少接头的数量、确保进样器密封垫紧密、确保接头正确固定。

5.碱性化合物- 硅醇相互作用。

解决办法：换成聚合物固定相。

6.碱性基质- 硅醇相互作用。

解决办法：使用更强的流动相或添加竞争碱（例如，三甲胺）。

7.硅胶基- 柱降解。

解决办法：使用特种色谱柱；聚合物柱或空间位阻。

8.溶剂相极性不匹配。

较早流出的峰或靠近溶剂前沿的峰更容易出现拖尾，解决办法：改变样品溶剂。

层析柱的一些总结

多数微生物碱性蛋白酶不耐热，碱土金属，特别是钙对碱性蛋白酶有明显的热稳定作用碱性蛋白酶是加酶洗涤剂的主要添加剂之一，在丝绸、制革工业中也有广泛用途热稳定性将酶液分别置于不同的温度条件下（30℃，40℃，50℃，60℃，70℃）保温10min 后，立即在0℃冰浴中冷却，然后在40℃下测碱性蛋白酶活力，以剩余的酶活性作为评价酶的热稳定性的指标。

测量三个重复求平均值，将最高的酶活力定义为100%，分别计算不同温度条件下蛋白酶的剩余酶活性与最高酶活性的比值。

以ph7的缓冲液为例,如果你的目标蛋白等电点小于7,呢就带负电荷,用阴离子交换的柱子,如果是大于7,那选择阳离子交换的柱子,如果等电点是7,那上样的缓冲液pH大于它的等电点用阴离子,小于7的用阳离子,如此类推就可以缓冲液的PH＝pI值＋1，上阴离子柱，＝pI值－1，上阳离子柱，一般缓冲液ph范围在6.5～8.5之间，与PI值相差1个PH是比较理想的。

如果不清楚PI值，可以将蛋白溶到PH梯度的缓冲液里，然后分别试阳离子和阴离子填料（50ul左右得体积就够了），看那个PH下挂得好。

强离子交换剂: 在宽pH范围内载量稳定，所以他的优点是不同pH下载量恒定，可控性好，平衡过程快速、简单。

弱离子交换介质的缺点：适用的pH范围比较小，随着pH不同载量发生变化。

但是大部分蛋白等电点在5.5 ~ 7.5 。

因此强/弱离子交换介质都可以使用弱离子交换介质（DEAE、ANX、CM)优点在于：和强离子交换介质的选择性不同，因此我们一般先使用强离子交换，如果优化条件还是达不到理想的分离效果，可以尝试弱离子交换，用选择性不同的介质尝试一下。

因此弱离子交换与强离子交换由于选择性不同，可以说是对不同蛋白的结合力有差异。

S技术规格离子交换剂类型Q Sepharose FF 季氨基，强阴离子DEAE Sepharose FF 二乙基氨基乙基，弱阴离子ANX Sepharose 4FF 二乙基氨基丙基，弱阴离子SP Sepharose FF 磺丙基，强阳离子CM Sepharose FF 羟甲基，弱阳离子离子容量Q Sepharose FF 0.18-0.25mmol（Cl-）/mlDEAE Sepharose FF 0.11-0.16mmol（Cl-）/mlANX Sepharose 4 FF 0.13-0.18mmol（Cl-）/mlSP Sepharose FF 0.18-0.25mmol（H+）/mlCM Sepharose FF 0.09-0.13mmol（H+）/ml动态载量Q Sepharose FF 120mg HSA/ml 填料DEAE Sepharose FF 110mg HSA/ml 填料ANX Sepharose 4 FF 5mg 甲状腺球蛋白/ml 填料SP Sepharose FF 70mg RNAase/ml 填料CM Sepharose FF 50mg RNAase/ml 填料压力/流速Q Sepharose FF 400-700cm/h，100kpa，XK50/30层析柱，柱床高15cmDEAE Sepharose FF 300-600cm/h，100kpa，XK50/30层析柱，柱床高15cmANX Sepharose 4 FF 至少200cm/h，100kpa，XK50/60层析柱，柱床高25cmSP Sepharose FF 400-700cm/h，100kpa，XK50/30层析柱，柱床高15cmCM Sepharose FF 300-600cm/h，100kpa，XK50/30层析柱，柱床高15cm平均颗粒大小 90um（45-165um）基质Sepharose FF 高度交联琼脂糖，6%Sepharose 4 FF 高度交联琼脂糖，4%PH稳定性Q Sepharose FF 1-14（短期），2-12（长期）DEAE Sepharose FF 1-14（短期），2-13（长期）ANX Sepharose 4 FF 2-14（短期），3-13（长期）SP Sepharose FF 3-14（短期），4-13（长期）CM Sepharose FF 2-14（短期），4-13（长期）化学稳定性在所有常用的水溶液缓冲液中稳定：8M尿素、6M盐酸胍、70%乙醇、1M NaOH和1M醋酸20%乙醇（Q , DEAE,ANX,CM ）,含0.2M醋酸钠的20%乙醇（SP）保存保存温度4℃-30℃l 1M NaOH和醋酸仅在清洗时使用Phenyl-Sepharose HP产品名称：苯基-琼脂糖凝胶6FF性状：白色微球凝胶类型：疏水层析介质粒径：45-165µm工作PH值：3-13应用：疏水层析介质，快流速，适合生物大分子和疫苗的分离纯化等产品名称：苯基-琼脂糖凝胶H.P.性状：白色微球凝胶类型：疏水层析填料粒径：24-44µm工作PH值：3-13应用：疏水层析介质，高分辨率，适合生物大分子和疫苗的分离纯化等产品名称：苯基-琼脂糖凝胶CL-4B性状：白色微球凝胶类型：疏水层析填料粒径：45-165µm工作PH值：3-13应用：疏水层析介质，适合生物大分子和疫苗的分离纯化等。

液相色谱峰拖尾的原因

液相色谱峰拖尾的原因
1.样品组分的不均一性：样品组分的分子量分布不均一性、极性或疏
水性的变化，以及表面活性剂等添加剂的存在，都可能导致峰拖尾现象。

2.色谱柱的选择：柱填充材料的不均一性或不适当的填充剂粒径大小、固定相表面官能团密度、载液的缓冲性能，都会影响到样品的保留与分离，从而导致峰拖尾现象。

3.操作条件的选择：流速过高、柱温过高、pH过高或过低，以及过
高的载液浓度等操作条件都可能导致峰拖尾现象。

4.柱效应：当样品中存在吸附性物质时，这些物质会在柱表面吸附并
难以解吸，从而导致峰拖尾现象。

对于液相色谱峰拖尾问题，可以采取以下措施进行解决和改善：
1.选择合适的色谱柱：根据样品的特性选择适合的色谱柱，如使用亲
水性柱或疏水性柱进行适当的尝试和比较。

2.调整操作条件：优化流速、温度和pH条件，适当降低载液浓度或
者添加缓冲剂等。

3.优化样品前处理：对于复杂的样品，可以采取前处理步骤，如溶剂
萃取、样品稀释等，以减少样品中的干扰物。

4.柱前附加剂：可以尝试添加适量的有机溶剂或胶体物质作为柱前附
加剂，以提高样品与固定相的相容性，从而减少峰拖尾现象。

5.使用合适的检测器：采用合适的检测器，如质谱检测器、荧光检测
器等，可以提高检测精度和分离度，从而减少峰拖尾现象的影响。

综上所述，液相色谱峰拖尾的原因是多方面的，需要综合考虑柱的选择、操作条件、样品处理等因素，采取相应的措施进行改善。

液相色谱中的拖尾因子

液相色谱中的拖尾因子
液相色谱是一种广泛应用于分析化学、生物化学和制药化学的分析技术。

然而，液相色谱中常常会出现一些奇怪的现象，比如所谓的拖尾现象。

这个现象一般表现为峰形的后面出现一个长长的尾巴，这对于分析精度和灵敏度都会带来一些影响。

拖尾现象的出现主要是因为样品在某些条件下被吸附到了柱壁或者固定相上，导致了样品组分在某些位置停滞时间过长，从而形成了拖尾现象。

为了解决这个问题，可以采取一些措施，比如优化流动相组成，改变柱子温度，调整采样体积和浓度等等。

总之，了解和掌握拖尾因子对于液相色谱分析是非常重要的，只有掌握了这个知识点，才能更好地进行分析和解决问题。

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液相色谱峰形拖尾解决方案

峰形后拖解决方案和实例继前一篇《峰形前拖解决方案》，我们对峰形后拖的情况及其解决方案也进行了总结。

与《峰形前拖解决方案》相同，在这里我们也同样的撇开所有的污染、塌陷、死体积等其它因素，假设系统是好的，柱子是新的、好的，单纯探讨液相方法与峰形后拖之间的关系，通过调整液相方法来解决峰形前拖的问题。

这样有利于厘清拖尾产生的根本原因，对峰形拖尾的问题提供一些经验上解决方案。

首先让我们了解一下峰形后拖的几种常见形式，三种常见的拖尾如下：系统是好的，柱子是好的，为什么会产生后拖？我们还是回顾一下，色谱分离的一般过程，正常的峰形应该是样品在色谱柱上均匀前移的情况下得到的，浓度分布在整个通过色谱柱柱床的过程中任何时候都呈正态分布，如下图所示：色谱分离是一个物理过程，样品分子经过在固定相与流动相之间的多次分配、吸附解吸，由于不同分子与固定相和流动相之间的相互作用力的差异而使它们在色谱柱中的移动速度不同，以此实现分离的目的。

相同色谱条件下，有些化合物容易产生拖尾，有些则不产生拖尾，这说明拖尾的产生跟样品本身的性质是密切相关的，通常非极性和弱极性的化合物能获得良好的峰形，而带有－COOH、－NH2、－NHR、－NR2等极性基团的化合物则比较容易产生拖尾。

可以想象一下，样品分子在分析过程所处的环境，一是流动相，二是固定相，流动相可以自由流动的，均一性比较好，因此可以认为样品分子四周都被相同组成的流动相所包围，其对每个样品分子的相互作用力也是均匀的、对称的，不应该是引起浓度分布发生变化的主要原因。

考虑固定相，固定相中除了C18长链外还有填料键合时残余的硅羟基，由于C18长链是非极性的，其与样品分子的相互作用力也是很微弱的范德华力，而硅羟基则具有一定的极性Si－Oδ－Hδ＋，在pH一定的条件下甚至还会发生电离，形成－Si－O－形式的离子态。

Si－Oδ－Hδ＋和－Si－O－对于极性化合物之间的作用力则是一种极性的静电作用力，这种作用力比范德华力要强得多，同时，因为硅胶表面键合了C18长链，由于空间位阻作用，样品分子中能接触到残余硅羟基的机会不会很多，只有少部分的分子才能与残余硅羟基产生作用。

蛋白层析柱拖尾

拖尾1.吸附有点厉害极性调大点看看2.加大洗脱液极性，酸度。

3.流速调慢点试试看！4.凝胶用旧了也会加剧拖尾。

5.拖尾现象的出现的内在影响原因是层析的分辨力不高，应该从提高层析分辨力着手去解决。

这就涉及到很多问题了，本人觉得具体问题要具体分析。

生物工程下游是更多的是一种技术和实现，而不是科学。

6.降低上样量可以解决这个问题7.蛋白质层析拖尾主要原因是层析柱的问题，其次是洗脱条件，还有上样量8.拖尾是常见的现象，你可以改变你的洗脱条件试一试9.拖尾一般是怎么形成的,我认为主要有1\你的色谱仪器设置条件不合适会引起.你在试验中会发现,改变色谱柱温度的变化要大于色谱柱流量的变化.你要解决上述问题,可以适当改变温度及流量,基本上可以解决上述问题.供你参考.10.减小点样量；11.若是酸碱物质，加一些酸或碱，如甲酸或氨试液12.另外试样中如果有盐分存在会有严重的拖尾现象产生。

13.层析柱滤板下的死体积应尽可能的小，如果支掌滤板下的死体积大，被分离组分之间重新混合的可能性就大，其结果是影响洗脱峰形，出现拖尾出象，降低分辩力。

在精确分离时，死体积不能超过总床体积的1/1000。

14.拖尾现象是指展层，显色后在层析分配图上，所看到的某一种氨基酸的分子位移，不是如标准图谱所示的那样，完整地显示在某一位置上，而是形成象笤帚似的那样，前端粗圆而逐渐细小下来，宛如拖着一个尾巴。

其图所呈颜色也是由浓渐淡。

其图象的出现，原认为是在实验中，对影响Rf值的主要因素要求，掌握不够所致。

15.诸如，物质结构与极性对Rf值的影响，层析溶剂对Rf值的影响，PH对Rf值的影响(溶剂、滤纸和样品的PH值)，温度对Rf值的影响，滤纸的质地是否均匀，薄厚是否适当，纤维的松紧度是否适中等对Rf值的影响，展层的方式(上行、下行)对Rf值的影响。

16.样品能溶于甲醇和乙腈，遇到水马上析出，现采用甲醇：乙腈（2：7）作流动相，流速0.5ml/min，2min左右出峰，拖尾严重。

拖尾原因

一、拖尾现象拖尾现象在薄层色谱中较为常见，结果使斑点间界限模糊，结果难以判断。

1、产生原因及克服方法（1）点样过量在薄层色谱过程中化合物在薄层板上进行吸附———解吸附的移动过程中，任何一类吸附剂，它们的负载化合物的能力是有一定限度的，因点样过量而超载后，过剩的化合物被抛在后面，形成拖尾现象。

（2）重复点样样点虽在同一垂直线而样点圆心未重合，致使样点呈近椭圆形，也是形成拖尾现象的又一原因，为避免以上异常现象，应选择合适的点样量和复点样过程中，样点圆心应重合。

2、边缘效应边缘铲应是样品在层析时，薄层板两边的斑点比中间斑点移动快，并向两边偏斜。

其原因是用混合溶剂展开过程中，其中极性较弱和沸点较低的溶剂在薄层板两边沿处较易挥发，使薄层板上展开剂的比例不一致，极性发生变化，而出现边缘效应。

为避免上述现象的出现：增加层板缸中溶剂蒸气浓度，在层析缸内壁贴上浸湿展开剂的滤纸或选择内径和长度适宜的层析缸进行层析。

选择适宜的单一溶剂代替混合溶剂。

采用共沸溶剂代替一般混合溶剂。

3、S形及波形斑点S形斑点是指含多种成分的样品层析时，斑点不是顺次分布于原点至展开前沿的垂直线上，而是呈s形分布于垂直线两侧。

波形斑点是指某些含多种成分的样品液，顺次点于同一起始线上，展开后，这些成分相同的斑点不呈直线状平行于起始线，而是呈波浪形。

产生原因为薄层板厚薄不匀。

为避免上述现象的出现应选用厚薄均匀的薄层板。

4、念珠状斑点念珠状斑点是指化合物斑点之间距离小，相互连接呈念珠状。

产生原因及克服方法：样品中成分过多，在一定长度的薄层板上，排布不开，彼此重叠。

可适当增加层析板长度，使斑点距离加大或采用双向层析，使所含成分向两个方向展开可以避免念珠状斑点的出现。

多次点样时，点样中心不重合，形成复斑。

应以适当浓度供试液一次点样，若多次点样，点样中心必须重合。

5、展开后斑点RF值不稳定斑点RF值与文献规定不符或重复操作RF值时大时小。

主要原因为：层析温度不稳定，在采用混合溶剂展开时，由于温度不稳定使展开剂的比例发生变化。

分子筛色谱峰拖尾现象产生的原因

分子筛色谱峰拖尾现象产生的原因分子筛色谱峰拖尾现象的产生可能有多种原因，以下是可能的一些因素：1.柱子污染：长时间的色谱分析过程中，分子筛柱可能会被一些污染物堵塞，如有机物、硅胶、金属离子等。

这些污染物会影响分子筛柱的性能，导致峰形拖尾。

为了解决这个问题，可以定期对分子筛柱进行清洗和再生。

2.柱子过载：当进样量过大或样品浓度过高时，分子筛柱可能过载，导致色谱峰拖尾。

为了解决这个问题，可以减少进样量或稀释样品，以确保分子筛柱的负荷在可承受范围内。

3.样品复杂性：如果样品中含有多种化合物，其中一些可能会与分子筛柱产生相互作用，导致色谱峰拖尾。

为了解决这个问题，可以优化样品预处理步骤，去除可能与分子筛柱产生相互作用的化合物。

4.温度波动：温度波动可能会影响分子筛柱的性能，导致色谱峰拖尾。

为了解决这个问题，可以确保色谱仪器的温度控制稳定，并遵循制造商的建议进行操作。

5.流速波动：流速波动可能会影响分子筛柱的性能，导致色谱峰拖尾。

为了解决这个问题，可以确保色谱仪器的流速控制稳定，并遵循制造商的建议进行操作。

6.固定相流失：分子筛柱的固定相可能会在分析过程中流失，导致色谱峰拖尾。

为了解决这个问题，可以确保分子筛柱的固定相得到适当的维护和补充。

7.死体积过大：死体积是指色谱系统中液体流动的部分，如果这部分体积过大，会导致色谱峰拖尾。

为了解决这个问题，可以尽量减小死体积，例如使用低容量的接头和管路。

8.样品溶剂强度：如果样品溶剂强度过高，可能会导致色谱峰拖尾。

为了解决这个问题，可以尝试调整样品溶剂的强度，使其更适合分析。

9.缓冲液不匹配：在离子交换色谱中，如果缓冲液不匹配，可能会导致色谱峰拖尾。

为了解决这个问题，可以尝试调整缓冲液的组成或浓度，以改善峰形。

10.盐浓度：高盐浓度可能会导致色谱峰拖尾。

为了解决这个问题，可以尝试降低盐浓度或使用低盐浓度的样品处理方法。

综上所述，分子筛色谱峰拖尾现象的产生可能是由于多种因素的综合作用。

消除拖尾的方法

由于被分析物与色谱柱间的相互作用导致峰拖尾。

这种相互作用是在做反相分析中所发生的分配行为以外的作用。

峰拖尾一般发生在碱性化合物上，通常是由于残留的硅羟基和带正电荷的碱性化合物之间的相互作用引起的。

这种相互作用一般是发生在带正电荷的碱性化合物与带负电荷的色谱柱表面硅羟基之间的离子交换。

当流动相的pH 值大于4.5-5.0 时，色谱柱表面的硅羟基会带负电荷。

因此，消除峰拖尾的最有效方式是使用pH 值小于4 的缓冲流动相。

由于硅羟基的活性和离子化会降低，因此选择更换新的高纯羟基化硅胶色谱柱也会减少峰拖尾。

ZORBAX 色谱柱中使用这类硅胶的有：StableBond 色谱柱、Eclipse XDB 色谱柱、Bonus-RP 和Extend-C18 色谱柱。

这些色谱柱均可以减少峰拖尾，但是它们又有所不同。

StableBond (SB) 色谱柱在低pH 值时比较理想，因此在使用较低pH 值的流动相时通常是首选色谱柱。

在pH 值为5-9 时，Eclipse XDB 色谱柱是减少峰拖尾的首选色谱柱。

这类色谱柱有双重封端，因此它可以通过覆盖色谱柱表面上尽可能多的残留硅羟基以消除可能的硅羟基副作用，从而减少峰拖尾。

对于这个中间pH 值区，Bonus-RP 色谱柱也是一个减少峰拖尾的不错选择。

Bonus-RP 色谱柱有一个植入极性物质的键合相。

这些极性物质可减少碱性化合物和残留硅羟基之间的相互作用，因此改善碱性化合物的峰形。

这类色谱柱可以在pH 值为2-8 的条件下使用。

Extend-C18 用于高pH 值，最高可用于pH 值为11.5 的条件下。

在较高pH 值下，很多碱性化合物已经不带电荷，因此和硅羟基的相互作用减小，峰拖尾也减少。

认真选择流动相也可以减少峰拖尾。

缓冲流动相(25–50 mM) 可减少峰拖尾，同时首选低pH 值(pH 2–3) 流动相。

这还会产生更多的可再生色谱。

如果需要的话，可以添加一些流动相添加剂如三乙胺(TEA) 以减少碱性化合物的峰拖尾。

高效液相色谱的拖尾因子太长的原因

高效液相色谱的拖尾因子太长的原因1.拖尾因子可能是由于色谱柱中填充物的不均匀性引起的。

The tailing factor may be caused by the unevenness of the packing material in the chromatographic column.2.可能是样品分子与填料之间存在相互作用导致拖尾现象。

The tailing phenomenon may be caused by interactions between sample molecules and the packing material.3.拖尾因子过长可能会导致色谱峰分辨率下降。

Excessive tailing factor may lead to reduced chromatographic peak resolution.4.使用不合适的流动相也可能导致拖尾现象。

The use of inappropriate mobile phase may also lead to tailing phenomenon.5.如果柱温过高，也可能会导致拖尾现象。

Excessive column temperature may also result in tailing phenomenon.6.色谱柱老化或污染也可能是拖尾因子过长的原因。

Column aging or contamination may also be the cause of excessive tailing factor.7.样品制备不完全可能导致拖尾现象。

Incomplete sample preparation may lead to tailing phenomenon.8.可以尝试调整样品溶液的pH值来减少拖尾现象。

Adjusting the pH of the sample solution may help reduce tailing phenomenon.9.合理调节色谱柱温度可以改善拖尾因子。

液相常见6种问题色谱峰解决方法（有图），你都见过几个？

液相常见6种问题色谱峰解决方法（有图），你都见过几个？食品实验室服务对于每一个身经百柱的分离纯化研究员来说，液相色谱图是他们打开未知物质世界的大门，科研中的很多问题都能从色谱图中得到很好的反映，有些问题可以通过改变设备参数得到解决，而有些问题则必须通过修改操作程序来解决，毕竟，正确选择色谱柱和流动相才是得到好的色谱图的关键。

小编在此根据大家实践中可能会经常遇到的一些图谱问题进行了整理汇总，大家一起来看一下吧。

1.拖尾峰1. 筛板阻塞：柱子两头的过滤筛板如果堵塞，样品就会在筛板部分受阻而形成时间延迟，使得样品在柱后流出时峰型形成拖尾。

需要通过反冲色谱柱，或者更换筛板。

2. 色谱柱塌陷：是指色谱柱由于其它原因引起了柱效率丧失，不能对物质形成保留，使得物质不在固定相上保留而随流动相流出，但是又还有一点柱效，因此形成拖尾。

需要重新填充色谱柱或者更换色谱柱。

3. 有污染：即样品不在同一起跑线起跑，从后面开始跑得到达终点稍晚，表现出拖尾。

更换色谱柱或者采用有机溶剂梯度洗脱1h以上，以冲洗柱子。

4. 流动相PH值选择错误：如某PH下有的样品存在分子型和离子型的动态平衡，离子型的陆续向分子型转化就会表现出拖尾。

调节pH 值可抑制分子解离，改善拖尾，对于碱性化合物，相对较低的PH值更有利于得到对称峰。

2.前沿峰1. 样品过载：被保留的样品在正常出峰时间前陆续出来，形成前沿峰。

降低样品含量。

2. 样品溶剂选择不恰当：当样品溶剂的洗脱能力大大强于流动相时会出现前沿峰，例如，在反相色谱中用已腈做样品溶剂，而流动相的洗脱力较弱时会出现前沿峰。

选择流动相或者接近流动相的比例作为样品溶剂。

3. 色谱柱损坏：色谱柱柱效损失，不能对物质形成保留。

更换色谱柱。

4. 在大峰前有小峰出现，假象前沿峰，即大峰前包埋了没有分开的小峰。

调整流动相洗脱梯度。

3.基线漂移1. 柱温波动：即使是很小的温度变化都会引起基线的波动，通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。

原因分析和解决方法在这里！

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Western Blot虽是实验室最常用的蛋白分析技术，但是由于它步骤繁琐、操作流程长、影响因素多，所以，导致我们在做实验时会遇到各式各样的问题。

今天我们总结了一些WB实验中经常遇到的各种“奇葩”条带问题，并为你推荐了常用的解决方法，希望对大家有所帮助。

一、目标条带没有信号
二. 图片背景过高，难以分辨条带
三、膜上出现黑点和黑斑
四、出现非特异性条带
五、条带中出现整条白色空斑
六、条带中出现白圈
七、条带拖尾
八、条带变形
九、条带呈哑铃装
十、最边缘条带弯曲
十一、背景非均一性
十二、条带呈“微笑”或“倒微笑”状
十三、其他问题
以上是我们对WB条带出现各种状况及解决方法的一个总结，希望可以对大家有所帮助。

离子对试剂峰拖尾的原因

离子对试剂峰拖尾的原因
离子对试剂峰拖尾是在质谱分析中常见的现象，它可能由以下几个原因导致：
1.样品的制备问题：在待测样品的制备过程中，如果存在杂质的存在或者存在
共存物质的干扰，都有可能导致离子对试剂峰拖尾的出现。

这是因为这些杂质或共存物质可能与待测样品中的离子发生相互作用，从而在质谱分析中产生峰的拖尾。

2.柱效应：使用的柱子可能会对离子对试剂峰拖尾产生影响。

柱子的选择不当、老化或者柱子表面存在积物，都有可能导致试剂峰的形状变宽，从而产生拖尾现象。

3.流动相问题：流动相的选择和质量也对试剂峰的形状起着重要作用。

如果流
动相中存在杂质、pH值不适宜或浓度不对等问题，都有可能导致试剂峰的拖尾。

4.仪器问题：质谱仪器的性能和工作状态也可能会影响试剂峰的拖尾现象。

仪
器的离子源和检测器的响应不稳定、污染或老化等都有可能导致离子对试剂峰拖尾的出现。

针对离子对试剂峰拖尾现象，我们可以采取以下措施进行改善：
1.优化样品制备过程，尽量减少杂质的存在，使用纯净试剂和溶剂，确保样品
的质量。

2.选择合适的柱子，注意柱子的保养和更换周期，以确保分析的准确性和重复性。

3.优化流动相的配方，保证流动相的纯净和稳定性。

定期检查流动相的成分，
避免积累杂质。

4.注意仪器的维护和保养，定期进行仪器性能的检查和校准，及时处理仪器的
故障。

综上所述，离子对试剂峰拖尾可能由样品制备问题、柱效应、流动相问题和仪器问题等多种原因引起。

我们可以通过优化样品制备过程、选择合适的柱子、优化流动相配方和定期维护仪器等措施来解决这个问题，以提高质谱分析的准确性和可靠性。

HPLC分析中的拖尾原因

一、什么原因导致反相 HPLC 的峰拖尾，应采取什么措施？由于被分析物与色谱柱间的相互作用导致峰拖尾。

这种相互作用是在做反相分析中所发生的分配行为以外的作用。

峰拖尾一般发生在碱性化合物上，通常是由于残留的硅羟基和带正电荷的碱性化合物之间的相互作用引起的。

这种相互作用一般是发生在带正电荷的碱性化合物与带负电荷的色谱柱表面硅羟基之间的离子交换。

当流动相的 pH 值大于 4.5-5.0 时，色谱柱表面的硅羟基会带负电荷。

因此，(1)消除峰拖尾的最有效方式是使用 pH 值小于 4 的缓冲流动相。

由于硅羟基的活性和离子化会降低，因此(2)选择更换新的高纯羟基化硅胶色谱柱也会减少峰拖尾。

ZORBAX 色谱柱中使用这类硅胶的有：StableBond 色谱柱、Eclipse XDB 色谱柱、Bonus-RP 和 Extend-C18 色谱柱。

这些色谱柱均可以减少峰拖尾，但是它们又有所不同。

StableBond (SB)色谱柱在低 pH 值时比较理想，因此在使用较低 pH 值的流动相时通常是首选色谱柱。

在 pH 值为 5-9 时Eclipse XDB 色谱柱是减少峰拖尾的首选色谱柱。

这类色谱柱有双重封端，因此它可以通过覆盖色谱柱表面上尽可能多的残留硅羟基以消除可能的硅羟基副作用，从而减少峰拖尾。

对于这个中间 pH 值区，Bonus-RP 色谱柱也是一个减少峰拖尾的不错选择。

Bonus-RP 色谱柱有一个植入极性物质的键合相。

这些极性物质可减少碱性化合物和残留硅羟基之间的相互作用，因此改善碱性化合物的峰形。

这类色谱柱可以在 pH 值为 2-8 的条件下使用。

Extend-C18 用于高 pH 值，最高可用于 pH 值为 11.5 的条件下。

在较高 pH 值下，很多碱性化合物已经不带电荷，因此和硅羟基的相互作用减小，峰拖尾也减少。

(3)认真选择流动相也可以减少峰拖尾。

缓冲流动相 (25–50 mM) 可减少峰拖尾，同时首选低 pH 值 (pH 2–3) 流动相。

蛋白质凝胶层析柱的洗脱顺序

蛋白质凝胶层析柱的洗脱顺序蛋白质凝胶层析是一种常用的蛋白质分离纯化技术，其原理是利用凝胶层析柱中的凝胶颗粒与蛋白质之间的物理化学互作用实现蛋白质的分离和纯化。

在蛋白质凝胶层析中，洗脱顺序是非常重要的，不同的洗脱顺序会对分离和纯化的效果产生明显的影响。

下面将详细介绍几种常用的蛋白质凝胶层析柱的洗脱顺序。

一、离子交换层析离子交换层析是一种利用离子交换树脂分离和纯化蛋白质的方法。

在离子交换层析中，蛋白质与树脂之间的相互作用是通过蛋白质和树脂之间的电荷相互吸引而实现的。

树脂表面带有固定电荷，蛋白质通常具有正电荷或负电荷，因此它们可以相互吸附在树脂上。

洗脱时，通常采用逐渐增加或减少盐浓度的方法，通过改变离子强度来控制蛋白质的吸附与解吸，实现蛋白质的分离和纯化。

离子交换层析的洗脱顺序通常分为以下几步：1. 预洗：用高盐缓冲液清洗层析柱，去除附着在树脂上的亲和物质和非特异性吸附物。

2. 去除杂质：使用低盐缓冲液洗脱非特异性吸附物，如组织碎片、细胞碎片和核酸等。

3. 分级洗脱：从低盐到高盐逐渐增加缓冲液中的离子浓度，根据蛋白质的亲和性和亲和强度，逐渐洗脱目标蛋白质。

4. 再生：在蛋白质完全洗脱之后，使用高盐缓冲液再次洗脱树脂上的杂质和非特异性吸附物。

5. 平衡：用平衡缓冲液平衡层析柱，使其恢复初始的交换能力。

二、尺寸排阻层析尺寸排阻层析是一种根据蛋白质的大小差异来分离和纯化蛋白质的方法。

在尺寸排阻层析中，凝胶层析柱中的凝胶颗粒具有固定的孔径，大分子蛋白质无法进入凝胶颗粒内部，而小分子蛋白质则可以进入凝胶颗粒内部。

因此，大分子蛋白质会流经凝胶颗粒，而小分子蛋白质会进入凝胶颗粒内部，实现二者的分离。

尺寸排阻层析的洗脱顺序通常分为以下几步：1. 预洗：用高盐缓冲液清洗层析柱，去除附着在凝胶颗粒表面的亲和物质和非特异性吸附物。

2. 去除杂质：使用低盐缓冲液洗脱非特异性吸附物，如细胞碎片、核酸等。

3. 分级洗脱：从大孔径到小孔径逐渐减少缓冲液中的孔径，根据蛋白质的大小差异，逐渐洗脱目标蛋白质。

蛋白亲和层析柱

蛋白亲和层析柱
蛋白亲和层析柱是一种用于分离和纯化蛋白质的工具，它基于亲和层析技术，利用生物分子间的专一亲和力进行分离。

亲和层析是一种层析技术，它利用生物分子间存在很多特异性的相互作用（如抗原和抗体、酶和底物或抑制剂、激素和受体等），通过将具有亲和力的两个分子中的一个固定在不溶性基质上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另一个分子进行分离纯化。

以蛋白A亲和层析柱为例，它的层析介质为蛋白A，可与抗体的Fc片段结合，因此常用于抗体的纯化。

在使用蛋白A亲和层析柱时，需要先用平衡缓冲液平衡柱子，使其达到适当的离子强度和pH值，然后将待纯化的抗体溶液加载到柱子上，让抗体与蛋白A结合。

接着，用洗脱缓冲液洗脱结合在柱子上的抗体，收集洗脱下来的抗体溶液，进行后续的处理和分析。

需要注意的是，不同的蛋白亲和层析柱可能需要不同的操作步骤和条件，因此在使用前需要仔细阅读说明书，并根据实际情况进行操作。

赛默飞离子色谱柱钠峰拖尾

赛默飞离子色谱柱钠峰拖尾
赛默飞离子色谱柱钠峰拖尾是指在离子色谱分析过程中，钠离子在柱上分离出的峰形状不完全尖峰，而是出现一定程度的拖尾现象。

钠峰拖尾可能是由以下原因引起的：
1. 柱床固定相不适合：柱床固定相的选择和质量对钠峰拖尾有很大影响。

如果选择的固定相与钠离子的相互作用较弱或反应较慢，钠离子在柱上的分离过程中会出现拖尾现象。

2. 柱温高：较高的柱温可能导致钠离子分子在柱上的扩散速率增加，这会导致峰形变宽，出现拖尾现象。

3. 溶液pH过低或过高：溶液pH过低或过高可能影响柱床固
定相的离子交换性能，导致钠离子在柱上的分离过程中出现拖尾。

4. 样品中存在干扰物：样品中存在某些物质，如有机溶剂残留、杂质或其他离子，这些物质可能与钠离子相互作用，导致钠峰拖尾。

为了解决钠峰拖尾问题，可以采取以下措施：
1. 选择合适的柱：根据分析要求，选择合适的柱床固定相进行离子色谱分析，确保固定相与分析物具有较强的相互作用能力。

2. 控制柱温：在合适的范围内控制柱温，避免温度过高导致钠峰拖尾。

3. 控制溶液pH：调整样品中的溶液pH，确保适当的离子交换性能。

4. 清洗柱：定期对色谱柱进行清洗，以去除可能导致钠峰拖尾的污染物。

5. 适当稀释样品：对过浓的样品进行适当稀释，以减少干扰物对分析的影响。

总之，钠峰拖尾是离子色谱分析中常见的现象，其产生的原因较为复杂，需要针对具体情况采取相应的措施来解决。

色谱峰拖尾的原因

色谱峰拖尾的原因色谱峰的拖尾是指峰形状在峰顶处附近延伸出长尾部分的现象。

拖尾可以给色谱分析带来许多问题，如降低分离的效率和峰的峰面积准确性。

色谱峰拖尾的主要原因可以分为两类：理化因素和仪器因素。

1.理化因素（1）色谱柱特性：拖尾是由于样品在柱填料中的强烈吸附和解吸现象引起的。

如果填料的吸附特性较强，样品会吸附在柱填料上，使得峰形变宽，并且在离开柱时解吸较慢，导致峰的拖尾；此外，填料表面的不均匀性也可能造成拖尾。

（2）样品性质：拖尾现象还与样品的物理化学性质相关。

样品溶液中可能会存在极性或非极性物质，它们在柱填料上的吸附速度不同，导致部分物质在柱中停留时间较长，从而引起拖尾现象。

（3）样品浓度：高浓度样品溶液中，溶质的吸附和解吸过程会更加明显，因此容易出现拖尾。

溶质浓度高，样品在柱中停留的时间比较长，导致拖尾现象增加。

2.仪器因素（1）柱温：柱温度的升高可以促进吸附和解吸过程，加快了溶质在柱填料上的扩散速度，减少了拖尾现象。

相反，如果温度过低，扩散速度较慢，使得拖尾现象增加。

（2）流速：柱的流速对于拖尾现象也有重要影响。

过高或过低的流速都容易引起拖尾。

流速过高，组分在柱填料上的停留时间较短，未能充分扩散和平衡，导致拖尾；流速过低，则会增加样品在柱中的停留时间，也会导致拖尾。

（3）进样量：进样量的过大会导致柱填料中的分子与进样量之间的相互作用增强，从而增加拖尾现象的发生。

因此，精确控制进样量可以减少拖尾现象。

总之，色谱峰拖尾的原因是复杂的，既受理化因素的影响，也受到仪器设备的影响。

了解并控制这些因素对于减少拖尾现象、提高色谱分析的成果至关重要。