效价检测方法

抗菌肽检测方法

1、LB培养基配制

NaCl：1%

胰蛋白胨：1%

酵母浸粉：0.5%

葡萄糖：0.5%

技术琼脂粉：2 %

将上述培养基配比，以水为溶剂，调pH值7.0，121度30分钟，灭菌备用。

2、大肠杆菌菌液制备

2.1 菌液制备：将大肠杆菌（K12D31）从斜面上刮一环转接于装液量50ml的250ml摇瓶中，置于180rpm、37℃的摇床上培养16-24h。

2.2 分光光度计测定其消光值（OD600nm）：将上述大肠杆菌菌悬液用无菌生理盐水稀释，用无菌生理盐水做空白对照，调整菌液吸光值为1.0。于4度冰箱中储存备用（菌液储存时间不得超过4天）。

3、试验菌培养基制备

将无菌LB培养基置室温待其冷却至48-50度时，按100ml无菌LB培养基中加入100μl菌液（OD600nm =1.0），摇匀。吸取含菌LB培养基10ml，使在90mm培养皿底内均匀摊布，放置在水平台面上使其凝固备用。

4、样品制备

4.1 精密称定待测的试样1.0000g，倒入精准9ml水中震荡溶解，放入100度水浴中温浴10分钟，拿出移入离心管中10000rpm离心15分钟，倒出上清液，用针筒吸取上清液，备用。

4.2 将上述3中制备好的检测培养基上用灭菌的打孔器（2.7mm）打孔，每孔中分别加入5ul 的抗菌肽测试样品溶液，取3个平板每板1空重复3板，置于37度培养箱中培养16-20小时后，测定抑菌圈直径，取平均值。

5、抗菌肽效价测定

计算公式：U（单位/克）=2X×1000×稀释倍数；X=（y -2.7）/2.1，其中：

Y：抗菌肽抑菌圈直径（mm）取平均值；

2.7：孔穴直径（mm）；

2.1：抗菌肽浓度与抑菌圈直径的比值常数。

使用时间: 2013年9月26日起