大鼠UQCRFS1基因的克隆及其表达模式分析

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SD-大白鼠催乳素受体基因的克隆与表达

ＮＡ含４１ｂｕＲ、３７ｂ２ｐ５一Ｔ１５ｐ编码区和２８ｂ，。比对奶牛催乳素受体基因并将前２７ｂ１ｐ３一ＵＩ ’ Ｒ１ｐ看作第１外显子，ｇｍ则ｅ
基因可划分为１３个外显子。推导的蛋白序列含７３个氨基酸，６与奶牛、鸽及猪ＰＬＲＲ的同源性较高，Ｎ末端含２其３个氨基酸
Ａｓｒｃ：ｈａｇｒａｔｅｅｔｒｅｅ（ＰＬｂｔａｔＴｅｒｏｃｎｒｃｐｏｎｇＲＲ）ｃＮｉｎｔｏ４ｐｇＤＡｗｔａｅｇｆ７３ｂａｌｅｙＲＥ— Ｃ，ｈｓｌｉｈｌｈ２ｏＡｒｔｎ
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催乳索（Ｒ）ＰＬ在脊椎动物中有着广泛的生理作用，这些作用都是通过位于靶细胞膜上的催乳素受体（ＲＲ介导的。ＰＬＰＬ）ＲＲ属于细胞因子受体超家族Ｉ型受体Ｊ目，、、、、、鼠、。前兔猪牛鸡鸽小大鼠等动物及人
江西农业学报
２０，０１）３— ０８２（２：５

SD大鼠Atoh1基因CDS区的克隆及序列分析

SD大鼠Atoh1基因CDS区的克隆及序列分析郑国玺;祝康;朱珠;侯瑾;韦俊荣;许珉【摘要】目的利用基因工程方法克隆SD大鼠Atoh1 cDNA编码序列并测定分析其克隆序列.方法采用非对称互补引物/模板法,制备Atoh1 cDNA的编码序列,将其克隆人PMD-19T载体中并测序.结果经酶切鉴定、测序分析表明,扩增得到的大鼠Atoh1基因CDS区全长为1 056 bp,编码351个氨基酸;测定序列与GenBank中公布的参考序列对比,有2处碱基发生突变,但克隆序列编码的氨基酸序列与参考序列完全一致.这两处碱基应为单核苷酸多态性(SNP)位点,突变为无义突变,不影响蛋白的表达.结论成功克隆了Atoh1 cDNA编码序列,为进一步对感音神经性耳聋的基因治疗奠定了基础.【期刊名称】《西安交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2011(032)004【总页数】4页(P466-469)【关键词】感音神经性耳聋;Atoh1;基因克隆;耳蜗毛细胞【作者】郑国玺;祝康;朱珠;侯瑾;韦俊荣;许珉【作者单位】西安交通大学医学院第二附属医院耳鼻喉病院,陕西西安710004;西安交通大学医学院第二附属医院耳鼻喉病院,陕西西安710004;西安交通大学医学院第二附属医院耳鼻喉病院,陕西西安710004;西安交通大学医学院第二附属医院耳鼻喉病院,陕西西安710004;西安交通大学医学院第二附属医院耳鼻喉病院,陕西西安710004;西安交通大学医学院第二附属医院耳鼻喉病院,陕西西安710004【正文语种】中文【中图分类】R764.4毛细胞的变性、缺失是感音神经性耳聋的主要原因,研究其发育、损伤、修复及再生的规律是治疗感音神经性耳聋的重要课题。

研究表明,哺乳动物毛细胞的产生和内耳形态的生成是由局部细胞间相互影响以及特异的基因所调控,尤其是碱性螺旋-环-螺旋(basie Helix-Loop-Helix,bHLH)转录因子家族作为一类重要的神经发育调节因子,对毛细胞的增殖分化至关重要[1]。

鼠疫耶尔森氏菌LcrV基因的克隆及序列分析

鼠疫耶尔森氏菌LcrV基因的克隆及序列分析王忠泽;荫俊;王威;白洁;侯晓军;宋伟;张松乐【期刊名称】《生物技术通讯》【年(卷),期】2001(012)001【摘要】为了研究鼠疫耶尔森氏菌(Y. pestis) 保护性抗原V蛋白，从基因库中查得Y. pestis LcrV基因DNA序列，针对序列设计合成了一对PCR扩增引物，以本所保存的Y. pestis菌种为模板进行基因扩增，结果获得长约980 bp的DNA 片段。

将扩增产物回收纯化，克隆至pGEMT载体，构建重组载体pGEMT/ypV, 经过PCR，酶切鉴定，并对pGEMT/ypV中的V基因片段进行测序，分析测序结果与已知序列相同，表明获得了LcrV基因。

%To study the protective antigen V protein of Yersinia pestis, a pair of primers for PCR were designed according to published DNA sequence of Y. pestis LcrV gene and synthesized. A DNA fragment about 980 bp length was gotten through PCR amplification. After re cycled and purified, the DNA fragment was ligated with pGEMT Vector and recomb ined vector pGEMT/ypV was constructed. The pGEMT/ypV plasmid was then identi fied by PCR, enzyme digestion and sequencing, and the sequence was the same as t he published sequence.【总页数】2页(P18-19)【作者】王忠泽;荫俊;王威;白洁;侯晓军;宋伟;张松乐【作者单位】北京微生物流行病研究所;北京微生物流行病研究所;北京微生物流行病研究所;白求恩医科大学;北京微生物流行病研究所;北京微生物流行病研究所;北京微生物流行病研究所【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.鼠疫耶尔森氏菌染色体上重要致病相关基因的克隆与表达 [J], 江凌晓;郭兆彪;周冬生;杨瑞馥;俞守义2.鼠疫耶尔森氏菌LcrV基因的克隆与表达研究 [J], 王忠泽;王威;白洁;宋伟;张松乐;侯晓军;荫俊3.鼠疫耶尔森氏菌 YopD 抗原基因在大肠杆菌中的克隆表达 [J], 郭荣;申小娜;李博;陈艳;张渝疆4.鼠疫耶尔森氏菌质粒上重要毒力相关基因的克隆与表达 [J], 江凌晓;郭兆彪;周冬生;杨瑞馥;俞守义5.鼠疫耶尔森氏菌LcrV基因在大肠杆菌中的高效表达 [J], 王忠泽;荫俊;侯晓军;宋伟;张松乐;王威;白洁因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

大鼠Nrn1基因3'UTR克隆及序列分析

大鼠Nrn1基因3'UTR克隆及序列分析菅辉玲;程江;黄瑾;高蕊【期刊名称】《中风与神经疾病杂志》【年(卷),期】2012(29)12【摘要】目的 neuritin(Nrn1/Cpg15)是一种神经突起生长因子,在神经修复过程中发挥着重要作用.本文旨在探讨miRNAs调控Nrn1基因表达的潜在性.方法采用PCR技术克隆大鼠Nrn1基因的3'UTR片段,同时利用MiRanda、DNAMAN 软件对Nrn1基因序列及miRNA结合位点进行生物信息学分析.结果成功克隆了649bp的Nrn13'UTR核心区段；Nrn1基因在不同物种间的序列同源性呈高度保守.MiRanda靶标预测结果表明miR204在3'UTR结合位点处高度保守,分值和能值较高,具有很强的潜在性.结论 Nrn1基因3'UTR在不同物种间序列保守性较高,miRanda软件预测miR-204结合位点处序列高度保守,进一步暗示Nrn1基因表达可能受到miR-204的调控.【总页数】4页(P1066-1069)【作者】菅辉玲;程江;黄瑾;高蕊【作者单位】石河子大学医学院生物化学教研室,新疆石河子832000;新疆石河子大学第一附属医院检验科,新疆石河子832000;石河子大学医学院生物化学教研室,新疆石河子832000;石河子大学医学院生物化学教研室,新疆石河子832000;华中科技大学同济医学院,湖北武汉430030【正文语种】中文【中图分类】R741.02【相关文献】1.家兔BMP7基因3'UTR的克隆及序列分析 [J], 赵巧辉;陈其新;李明;石晓卫;刘孟洲2.棉花GhFAD2-1基因5'UTR内含子的克隆与序列分析 [J], 孙亮;文凤;刘峰;张新宇;孙杰3.梭梭HaACT基因片段的克隆和3'UTR序列分析 [J], 高全;杜辉辉;姚正培;麻浩;张桦4.沙棘耐盐基因HrNHX1的克隆及3'UTR序列分析 [J], 郭长奎;罗淑萍;沙依拉;于静5.牦牛病毒性腹泻病毒5′-UTR和E0基因的克隆与序列分析 [J], 于吉锋;刘亚刚;杨小艳;常文棣;冯英阳;胡炳峰;王文伯因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

大鼠UQCRFS1基因的克隆及其表达模式分析

大鼠UQCRFS1基因的克隆及其表达模式分析摘要：通过克隆获得泛醌-细胞色素c还原酶铁硫蛋白亚基1（ubiquinol-cytochrome c reductase iron-sulfur subunit 1，uqcrfs1）基因，对基因序列及其编码的蛋白质进行分析，研究了其在大鼠（rattus norvegicus）心、脑、肾、肺组织中的表达模式。

测序结果显示uqcrfs1基因全长826 bp，rt-pcr结果显示其在大鼠心脏中表达量较高，脑和肺中表达量稍低，肾脏组织中表达量最低，推测uqcrfs1的功能可能与大鼠的心脏发育有关。

关键词：大鼠（rattus norvegicus）；uqcrfs1基因；克隆；表达模式中图分类号：q786 文献标识码：a 文章编号：0439-8114（2013）09-2174-03铁硫蛋白作为电子载体在生命活动中起着重要的作用，其特征是存在着铁硫簇，常见的铁硫簇中含2、3或4个铁原子，这些铁原子与多肽链相连，并由无机硫进行联结，由简单的铁硫簇通过金属联结组装成更复杂的结构[1-4]，铁硫蛋白正是基于铁硫簇而具有优异的电子传递功能。

主要的铁硫蛋白包括细菌和线粒体呼吸链中的复合体ⅰ、ⅱ、ⅲ，光合作用中的光系统ⅰ和铁氧还原蛋白，氮养菌中的固氮酶，krebs循环中的顺乌头酸酶，以及哺乳动物中对铁的吸收起调控作用的铁调控蛋白ⅰ等[5，6]。

参与铁硫簇合成的关键蛋白已经被确定，但对其分子水平上的机制及如何进行相互作用在机体内外合成铁硫蛋白尚待进一步研究[7-9]。

泛醌-细胞色素c还原酶铁硫蛋白亚基1（ubiquinol-cytochrome c reductase iron-sulfur subunit 1，uqcrfs1）是线粒体呼吸链复合体ⅲ中的一个亚单位，广泛分布在生物体中。

目前对uqcrfs1基因的研究主要集中于阿尔茨海默病、心肌收缩疾病、亨廷顿舞蹈病、帕金森等相关疾病上。

鼠疫菌V抗原基因在大肠杆菌中的克隆及表达

鼠疫杆菌（ !"#$%&%’ ("$)%$ ）是腺鼠疫、肺鼠疫的自然疫源性病原，曾经以 “瘟疫” 的形式给人类的健康造成了极大的影响，近年个别地区仍有发生。对自然疫源性鼠疫的预防一般采用疫苗、药物、灭鼠等综合措施。由于生物恐怖袭击事件的发生，已引起世界各国对鼠疫的高度警惕。恐怖袭击常采用气溶胶感染，可直接引起原发性肺鼠疫流行，因而更需要研究安全有效的鼠疫疫苗。目前世界上使用的人用鼠疫疫苗主要有减毒活疫苗和灭活全菌体疫苗，这两种疫苗免疫效果的确定性和接种反应方面存在一些弱点，为此研制一种保护力更强的新疫苗取代现行疫苗势在必行。已研究发现的鼠疫杆菌中主要抗原成分或毒力因子有 65 （荚膜抗原）、（低钙反应 OAS 蛋白，包括 OASM，OAS&，OAST 等）、（耶尔森氏菌外膜蛋白）、（色素沉着）和 H-. （ U’@H,: 5 鼠疫菌素 5）等。这些毒力因子的编码基因主要位于细菌质粒上，并且主要集中在分子量
［］其分子量为 "2YG。实验证 2VG， !WVG 和 2WVG " 种质粒上 5 X " 。& 抗原是主要毒力成分，实在鼠疫杆菌的众多抗原蛋白中，（ OAS&）具有较高免疫原性，且与 65 抗原有很强 & 抗原
的协同保护作用。用鼠疫 & 抗原和 65 抗原的双价抗原免疫后的小鼠，在抗鼠疫免疫保［!， W］护力上高于仅用 65 单价抗原免疫的小鼠。由于 & 抗原的存在使鼠疫菌具有较强的致病性，故在活疫苗中经传代已被去除，从而使其失去了一个较重要的免疫原。利用基因工程手段有选择地表达此保护抗原中的有效成分是研制新型鼠疫疫苗的关键步骤。本研究以鼠疫野毒株中的全 G/* 为模板，利用 HIJ 扩增出鼠疫 & 抗原的全结构蛋白编码基因，将其克隆到大肠杆菌表达质粒 @903!#> （K）中，并获得了有效表达，为研制开发新一代基因工程鼠疫疫苗奠定了基础。

奇妙的克隆ppt课件课件

克隆技术的伦理问题
人类尊严与权利
克隆技术涉及到人类个体的基因复制，可能侵犯人类的尊严和权利。
动物权益
遗传信息隐私
动物克隆技术可能导致动物受到不人道的对待和实验，侵犯动物权益。
克隆技术可能涉及个体遗传信息的获取和利用，引发遗传信息隐私保护
的问题。
社会公正与责任
克隆技术的使用和应用需要考虑到社会公正和责任，避免技术滥用和
率。
保护濒危物种
通过克隆技术，可以繁殖濒危物种，保护生物多样性。
医学研究与治疗
克隆技术可用于医学研究、药物筛选和疾病治疗，例如制备干细胞用于治疗某些疾病。
繁殖遗传性疾病
对于某些遗传性疾病，可以通过克隆技术繁殖没有携带缺陷基因的个体，避免遗传性疾病
的传播。
克隆技术的缺点
01
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伦理道德问题
克隆技术涉及到人类和动物的基因复制，引发了关于伦理道
德的争议。
生物多样性损失
过度依赖克隆技术可能导致生物多样性减少，破坏生态平衡
。
技术难题与成本
克隆技术目前还存在许多技术难题，如胚胎发育不全、成功
率低等，同时成本较高。
心理和社会影响
克隆技术可能对被克隆个体的心理和社会地位产生负面影响，引发身份认同和心理问题。
胚胎发育调控机制的深入研究

克隆技术的成功依赖于对胚胎发育过程的精确调控，未来研究有望进一
步揭示胚胎发育的奥秘，为克隆技术的发展提供理论支持。
克隆技术在医学领域的前景
克隆人类器官
利用克隆技术可以培育出与患者基因相匹配的器官，有效解决器官移植的供体短缺问题，提高移
植成功率。

3株猪流行性腹泻病毒s1基因的克隆及序列分析

王　婧，孙志雯，陈海峰，等．３株猪流行性腹泻病毒Ｓ１基因的克隆及序列分析［Ｊ］．江苏农业科学，２０１９，４７（２０）：９９－１０３．ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１９．２０．０２１３株猪流行性腹泻病毒Ｓ１基因的克隆及序列分析王　婧，孙志雯，陈海峰，陈晓兰（江苏农牧科技职业学院，江苏泰州２２５３００）摘要：猪流行性腹泻病毒（ｐｏｒｃｉｎｅｅｐｉｄｅｍｉｃｄｉａｒｒｈｅａｖｉｒｕｓ，ＰＥＤＶ）可感染各阶段的猪，使患病动物出现水样腹泻、呕吐，并伴随厌食和精神沉郁等临床症状，对哺乳仔猪危害尤为严重。

为了解河南某猪场ＰＥＤＶ流行毒株Ｓ１基因的变异情况，以江苏农牧科技职业学院动物药学院实验室保存的感染ＰＥＤＶ临床病料为样本，对其进行Ｓ１基因扩增、克隆以及序列分析。

对Ｓ１基因的进化分析结果显示，该猪场ＰＥＤＶ分离株Ｓ１基因推导的氨基酸序列之间的同源性高达９９％，ＢＬＡＳＴ搜索结果显示与ＡＨＣＺ－２株的相似性最高，将获得序列与经典毒株ＣＶ７７７相比在第５７位插入了４个氨基酸ＮＱＧＶ，在第１３４位插入１个氨基酸Ｄ，而在第１５７、１５８位缺失２个氨基酸，在中和表位区域共有１１处氨基酸突变，与国内其他毒株均位于Ｇ２－ｂ进化分支，研究结果为进一步掌握该地ＰＥＤＶ的流行毒株和毒力变异情况提供了理论依据。

关键词：猪流行性腹泻病毒；Ｓ１基因；遗传进化中图分类号：Ｓ８５５．３文献标志码：Ａ文章编号：１００２－１３０２（２０１９）２０－００９９－０４收稿日期：２０１８－０６－１９基金项目：江苏省农业三新工程项目（编号：ＳＸＧＣ［２０１７］２４９）；江苏省泰州市科技支撑计划（农业）项目（编号：ＴＮ２０１７１１）；江苏农牧科技职业学院院级项目（编号：ＮＳＦ２０１５０４－２、ＮＳＦ２０１６０６）。

作者简介：王　婧（１９８５—），女，四川绵阳人，博士，讲师，主要从事兽药药理研究。

Ｅ－ｍａｉｌ：ｋｅｎｈｔｓｊｊ＠１６３．ｃｏｍ。

猪基因编辑和体细胞克隆技术的创新与应用

猪基因编辑和体细胞克隆技术的创新与应用1.现代生物技术已经实现了猪基因编辑，为猪的遗传改良提供了新的途径。

Modern biotechnology has allowed for the editing of pig genes, providing a new approach for genetic improvement in pigs.2.猪基因编辑技术的应用可以提高猪的生产性能和抗病能力。

The application of pig gene editing technology can improve the production performance and disease resistance of pigs.3.体细胞克隆技术可以复制具有优良性状的猪。

Somatic cell cloning technology can replicate pigs with superior traits.4.猪体细胞克隆技术的成功应用可以帮助遗传优质品种。

The successful application of pig somatic cell cloning technology can help in the inheritance of superior breeds.5.猪基因编辑和体细胞克隆技术的进步可以提高农业生产效率。

Advancements in pig gene editing and somatic cell cloning technology can improve agricultural production efficiency.6.猪基因编辑技术的发展有望带来更多耐旱和抗病的猪品种。

The development of pig gene editing technology is expected to bring more drought-tolerant and disease-resistant pig breeds.7.体细胞克隆技术可以帮助保存濒危品种的猪。

黄鳝csf1r_基因的克隆及时空表达特征分析

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码区长度为 2937bp,编码 978 个氨基酸,存在免疫球蛋白结构域和蛋白激酶催化结构域 2 个保守结构域。荧光定量
PCR 结果表明,
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心脏中表达量较高,其次是肾脏、皮肤和肌肉,卵巢中表达量最低;
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大鼠单克隆抗体的制备

大鼠单克隆抗体的制备
摘要：
1.大鼠单克隆抗体的制备方法
2.大鼠单克隆抗体的优势和应用
3.大鼠单克隆抗体制备的挑战和解决方案
4.制备大鼠单克隆抗体的实验步骤
5.大鼠单克隆抗体制备的未来发展
正文：
大鼠单克隆抗体的制备是一种用于研究大鼠免疫系统和疾病机制的重要技术。

与小鼠单克隆抗体相比，大鼠单克隆抗体具有更高的特异性和稳定性，且在小鼠来源的抗原检测中不易产生背景交叉反应。

然而，由于大鼠实验体系中缺乏成熟的肿瘤细胞系用于融合，使得制备大鼠单克隆抗体的难度和成本增加。

为了解决这个问题，研究人员采用了一些新的技术和方法。

其中，一种方法是利用激活转录因子3（ATF3）制备大鼠单克隆抗体。

通过合成偶联有匙孔绒血蓝蛋白（keyhole limpet hemocyanin, KLH）的大鼠ATF3 第168-181 位氨基酸多肽，然后免疫Balb/c 小鼠，从而制备特异性识别大鼠ATF3 的单克隆抗体。

制备大鼠单克隆抗体的实验步骤主要包括以下几个方面：首先，选择合适的免疫原，如蛋白质、多肽、细胞表面分子等，并进行纯化和结构分析。

然后，将免疫原注射到大鼠、小鼠等实验动物体内进行免疫。

接着，从免疫动物
的脾脏或淋巴结中获取B 细胞，并将其与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞。

之后，通过筛选和克隆化，获得能产生特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞。

最后，从杂交瘤细胞培养液或小鼠腹水中提取单克隆抗体。

尽管大鼠单克隆抗体制备难度较大，但随着技术的不断发展和创新，这一领域将取得更多突破。

小反刍兽疫病毒甘肃分离株F基因的克隆、原核表达及单克隆抗体的制备

小反刍兽疫病毒甘肃分离株F基因的克隆、原核表达及单克隆抗体的制备小反刍兽（PUUV）是一种由腊肉螨（Ixodes ricinus）传播的病毒引起的主要呼吸道疾病。

甘肃分离株（GIL）是一种野生毒株，与其他株系相比，其特性和致病性尚不清楚。

因此，本研究旨在克隆、原核表达以及制备PUUV- GIL株的单克隆抗体，以进一步了解其基因特征和功能。

为了克隆PUUV-GIL株的F基因，我们首先利用聚合酶链反应（PCR）从PUUV-GIL株的全基因组中扩增出F基因。

通过使用特定的引物和反向转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术，我们成功地扩增出了想要的F基因片段。

然后，将扩增的F基因片段纯化并用于构建原核表达载体。

在原核表达方面，我们选择了大肠杆菌作为宿主细胞，并使用pET-28a(+)原核表达载体进行克隆。

将纯化的F基因片段与载体进行连接，构建了重组质粒。

接着，将重组质粒转化至大肠杆菌菌株中，通过选用带有抗生素的培养基筛选获得阳性克隆。

经过酶切鉴定和测序分析，确定了正确的重组质粒。

然后，选取阳性克隆并进行大规模培养和表达，最终得到了目标蛋白F。

为制备PUUV-GIL株的单克隆抗体，我们首先通过免疫接种的方法制备抗原，将表达蛋白F注射至小鼠体内。

在注射周期与免疫增强流程的设计下，成功获得高效的免疫应答。

随后，获取小鼠脾细胞并制备融合瘤细胞，即将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合。

通过细胞融合实验，筛选和培养，最终得到了高效分泌F特异性抗体的单克隆细胞株。

通过ELISA等分析技术，对单克隆抗体的特性进行了初步鉴定。

结果表明，该单克隆抗体具有较高的特异性和亲和力，能够有效地识别PUUV-GIL株。

总结来说，我们成功地克隆、原核表达了PUUV-GIL株的F基因，并制备了该株的单克隆抗体。

这为进一步研究PUUV-GIL株的基因特征、功能及其与宿主相互作用的机制提供了有力工具。

此外，对PUUV-GIL株的克隆与表达以及单克隆抗体制备的方法也为相关病毒的研究提供了一定的参考。

SD大鼠层粘蛋白受体的基因克隆、表达与组织学定位研究的开题报告

SD大鼠层粘蛋白受体的基因克隆、表达与组织学定位研究
的开题报告
任务简介：
本研究旨在克隆SD大鼠层粘蛋白受体基因，进一步进行表达、纯化与鉴定，并研究其在不同组织中的定位情况。

通过基因克隆和表达，可以深入研究SD大鼠层粘蛋白受体在神经系统中的功能和作用机制。

研究目的：
1. 克隆SD大鼠层粘蛋白受体基因。

2. 对克隆的基因进行表达，进一步进行纯化和鉴定。

3. 研究SD大鼠层粘蛋白受体在不同组织中的定位情况。

研究方法：
1. 克隆SD大鼠层粘蛋白受体基因。

将SD大鼠的RNA提取出来，用逆转录酶把RNA转化为cDNA，再用PCR扩增出目标基因。

2. 对克隆的基因进行表达。

通过将目标基因插入到表达载体中，使其在大肠杆菌中表达。

在表达过程中使用亲和柱纯化蛋白。

3. 研究SD大鼠层粘蛋白受体在不同组织中的定位情况。

通过免疫组化和蛋白印迹等方法，研究SD大鼠层粘蛋白受体在神经系统、肝脏、肾脏等不同组织中的定位情况。

预期结果：
1. 成功克隆SD大鼠层粘蛋白受体基因，得到目标基因片段。

2. 成功表达SD大鼠层粘蛋白受体，得到纯化的蛋白。

3. 研究SD大鼠层粘蛋白受体在不同组织中的定位情况，揭示其在神经系统中的作用密度。

意义和价值：
1. 对于SD大鼠神经系统的研究有重要的指导作用。

2. 对于大脑相关疾病的治疗和预防具有重要的参考价值。

3. 可以提高人们对神经系统功能和神经细胞通信机制的认识。

鼠疫菌素的克隆表达与活性分析

鼠疫菌素的克隆表达与活性分析王婷;刘文华;邹玲;张灿;任慧英【摘要】为了研究鼠疫菌素的抑菌作用,PCR扩增并克隆鼠疫菌素(pst)基因,构建鼠疫菌素原核重组表达质粒pET28a-pst,在大肠杆菌BL21中表达.经His标签蛋白纯化柱纯化获得重组鼠疫菌素蛋白,并检测表达蛋白的抑菌活性.结果表明,鼠疫菌素基因长1 074 bp,重组鼠疫菌素为44 kD,以包涵体形式表达.纯化的鼠疫菌素对金黄色葡萄球菌ATCC25923和大肠杆菌078具有一定的抑菌作用.研究结果将为进一步研究鼠疫菌素的应用奠定基础.【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2016(052)001【总页数】4页(P6-9)【关键词】鼠疫菌素;克隆;原核表达;抑菌活性【作者】王婷;刘文华;邹玲;张灿;任慧英【作者单位】青岛农业大学动物科技学院,山东青岛266109;青岛农业大学动物科技学院,山东青岛266109;青岛农业大学动物科技学院,山东青岛266109;青岛农业大学动物科技学院,山东青岛266109;青岛农业大学动物科技学院,山东青岛266109【正文语种】中文【中图分类】R516.8细菌耐药性以及耐药菌感染是人医和兽医临床共同面临的一大难题。

以大肠杆菌为例，全球每年因产肠毒素大肠杆菌（ETEC）引起的感染超过6.5亿例，并导致约80万例病人死亡[1]。

据王占华报道[2]，分离自医院的854株大肠杆菌对氨苄西林的耐药率高达87%，对庆大霉素和美络西林的耐药率超过70%，对头孢哌酮和头孢噻吩的耐药率均超过50%。

大肠杆菌引起的初生仔猪腹泻、鸡大肠杆菌性败血症是动物养殖中的常见病，其发病率在细菌病中居首位。

从华北地区分离的鸡源大肠杆菌中84.76%对四环素耐药，70.12%对多西环素耐药[3]；猪肉中大肠杆菌可耐受的药物种类达8～11种，鸡肉中大肠杆菌对7～8种药物耐药[4]。

尽管阿米卡星未被批准为兽药，但鸡肉源大肠杆菌对阿米卡星的耐药率达16.5%。

大鼠NRF-1基因的克隆、鉴定及功能分析

大鼠NRF-1基因的克隆、鉴定及功能分析王程铖;宋熔;李君良;王玉姣;王强;赵巍【期刊名称】《宁夏医科大学学报》【年(卷),期】2014(036)007【摘要】目的克隆大鼠NRF-1基因并重组于载体pMD18-T,了解NRF-1基本结构和蛋白分子特征,预测可能的相关作用蛋白分子,为下一步研究NRF-1对心衰细胞能量代谢途径的作用机制提供实验材料和依据.方法通过重叠延伸PCR(SOE PCR)的方法合成目的基因序列,连接于载体pMD18-T,然后转化至感受态大肠杆菌DH5α.PCR及测序鉴定重组质粒NRF-1/pMD18-T序列正确性.并通过生物信息学软件分析NRF-1的氨基酸序列,蛋白质二级结构,修饰位点及蛋白质之间作用关系等,进行预测.结果大肠杆菌DH5α中保存的重组质粒NRF-1/pMD18-T经测序鉴定,其中的NRF-1基因序列与原始序列一致.生物信息学分析表明NRF-1的蛋白质分子量为57.28kD,分子式为C2498 H3976N7040808S15,等电点为5.28,是稳定的亲水蛋白,α-螺旋和β-折叠结构较多,NRF-1与mtTFA,Akt1和Spastin等多个蛋白关系密切.结论本研究成功地克隆了NRF-1基因并重组于载体pMD18-T,为后续研究NRF-1对心衰心肌细胞能量代谢的调控机制提供了实验材料和研究思路.【总页数】6页(P731-735,封3)【作者】王程铖;宋熔;李君良;王玉姣;王强;赵巍【作者单位】宁夏医科大学检验学院,银川750004;中国人民解放军第五医院重症医学科,银川750004;宁夏回族自治区医学科学研究所,银川750004;宁夏回族自治区医学科学研究所,银川750004;宁夏回族自治区医学科学研究所,银川750004;宁夏回族自治区医学科学研究所,银川750004【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.人IFN-γ基因启动子的克隆鉴定及功能分析 [J], 汤必奎;程禹;翟素莲;刘小粉;胡明洁;吴守伟2.白纹伊蚊嗅觉受体OR7的基因克隆、鉴定和功能分析 [J], 周宁;王晓明;邓裕华;刘宏美;刘通;陈晓光3.人iNOS基因启动子克隆鉴定及功能分析 [J], 汤必奎;翟素莲;程禹;胡明洁;吴守伟4.苦荞细胞色素CYP81家族同源基因FtP450-R4的克隆、分子鉴定及其功能分析[J], 李成磊;赵海霞;温国琴;周婧;孙家宜;姚攀峰;陈惠;王安虎;吴琦5.大鼠短间隔连续部分肝切除中上调表达基因的克隆与功能分析 [J], 李玉昌;林俊堂;等因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

uqcrfs1 基因

UQCRFS1基因是编码线粒体复合物III的一个亚单位的基因。

这个基因与多种疾病有关，包括糖尿病肾病和线粒体复合物III缺乏症N10型（OMIM对应编号为618775，遗传方式为常染色体隐性遗传）。

糖尿病肾病是糖尿病常见的微血管病变，是造成终末期肾病的重要诱因。

近年来，氧化应激在糖尿病及其并发症的研究中逐渐受到重视，而UQCRFS1作为呼吸链复合体III的一个亚单位，可能在糖尿病及其并发症的发病机制中发挥重要作用。

因此，构建并鉴定大鼠UQCRFS1的真核表达系统，可以为进一步研究其生物学意义提供实验基础。

另一方面，UQCRFS1基因也与线粒体复合物III缺乏症N10型有关。

这是一种罕见的遗传性疾病，主要表现为线粒体复合物III的功能障碍，可能导致一系列的临床症状，如发育迟缓、神经系统异常等。

总的来说，UQCRFS1基因是一个重要的基因，其表达的蛋白质在细胞能量代谢和多种疾病的发生发展中发挥重要作用。

小鼠TREM-1分子CDR1保守区的克隆、原核表达及纯化的开题报告

小鼠TREM-1分子CDR1保守区的克隆、原核表达
及纯化的开题报告
一、研究背景
小鼠TREM-1 （Triggering receptor expressed on myeloid cells-1）是一种跨膜受体分子，在免疫响应和炎症过程中发挥重要作用。

其CDR （Complementarity-determining region）序列是重要的抗体识别位点，是制备抗体及开发药物的重要依据。

因此，对小鼠TREM-1分子的CDR1保守区进行研究具有重要科学意义和应用价值。

二、研究内容
1. CDR1保守区的克隆
本研究采用基因克隆技术，利用PCR扩增小鼠TREM-1分子的CDR1保守区片段，并进行酶切、连接、转化等步骤，将其插入到原核表达载体中，构建重组表达质粒。

2. 原核表达
构建好的表达质粒在大肠杆菌系统中进行表达。

在进行表达之前，先行优化合适的诱导条件，包括诱导剂种类、浓度、诱导时间等因素。

利用SDS-PAGE进行蛋白质表达情况检测。

3. 纯化
对表达并经过诱导后的细菌进行离心，收集细胞上清液。

利用亲和纯化技术，将目标蛋白从杂质中纯化出来，并进行蛋白质浓度的定量。

三、研究意义
本研究成功克隆并表达了小鼠TREM-1分子CDR1保守区，为进一步研究该分子的生理和病理作用奠定了基础。

此外，纯化后的CDR1保守区蛋白可以作为制备抗体、开发药物等研究的重要基础。

大鼠胰岛素样生长因子Ⅰ基因的克隆及表达

大鼠胰岛素样生长因子Ⅰ基因的克隆及表达梁东春;郭刚;左爱军;张镜宇【期刊名称】《遗传学报：英文版》【年(卷),期】2002(29)12【摘要】以大鼠染色体DNA为模板 ,PCR分别扩增胰岛素样生长因子Ⅰ (IGF Ⅰ )基因外显子 2编码区和外显子 3编码区 ,并使外显子 2编码区的3′端与外显子 3编码区的5′端有相同的 4 0个碱基。

采用外显子拼接法 ,以两种扩增产物为模板再次进行PCR ,得到 2 10bp的大鼠IGF Ⅰ基因全编码序列。

将此序列克隆入pUC18质粒进一步构建表达型重组质粒pGEX IGF Ⅰ ,并在大肠杆菌DH5α中进行诱导表达。

表达产物经SDS PAGE分析及Westernblot检测 ,并经体外实验证明其具有刺激细胞增殖的生物活性。

【总页数】5页(P1063-1067)【关键词】大鼠;胰岛素样生长因子Ⅰ;外显子拼接;基因克隆;表达【作者】梁东春;郭刚;左爱军;张镜宇【作者单位】天津医科大学内分泌研究所【正文语种】中文【中图分类】Q784;R394.8【相关文献】1.黄颡鱼胰岛素样生长因子结合蛋白1基因的克隆及表达分析 [J], 梁宏伟;李忠;罗相忠;邹桂伟2.人胰岛素样生长因子Ⅰ基因修饰成肌细胞移植对心肌梗死大鼠心肌细胞胰岛素样生长因子Ⅰ及p16INK4a和细胞核增殖抗原表达的干预 [J], 高焱章;卢永昕;刘晓明;米少华;苏冠华;荣书玲3.人胰岛素样生长因子Ⅰ基因修饰成肌细胞移植心肌梗死大鼠心肌细胞胰岛素样生长因子Ⅰ及端粒酶反转录酶mRNA的表达 [J], 高焱章;卢永昕;米少华;荣书玲;刘晓明;粱振涛4.翘嘴鲌胰岛素样生长因子igf3基因的克隆及表达分析 [J], 郑建波;贾永义;蔡李娜;顾志敏;刘士力;迟美丽;程顺5.人胰岛素样生长因子Ⅰ基因修饰成肌细胞移植对心肌梗死大鼠心肌细胞胰岛素样生长因子Ⅰ及p16^INK4a和细胞核增殖抗原表达的干预 [J], 高焱章;卢永昕;刘晓明;米少华;苏冠华;荣书玲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

用Touch-Up PCR克隆中国仓鼠存活蛋白基因及其序列分析

用Touch-Up PCR克隆中国仓鼠存活蛋白基因及其序列分析郭俊伟;赵兴卉;于颖群;孔毅荣;易绍琼;张晓鹏;陈薇【期刊名称】《生物技术通讯》【年(卷),期】2007(18)2【摘要】目的:通过Tuch-Up PCR(上升PCR)的方法从中国仓鼠卵巢细胞中克隆存活蛋白基因,并对其进行序列分析.方法:分别从293、H22、CHO-S细胞中提取总RNA并反转录得cDNA,然后用Touch-Up PCR克隆存活蛋白基因.结果:获得了存活蛋白基因,全长423 bp,序列测定及同源性分析表明其与GenBank中报道的人以及小鼠的存活蛋白基因高度同源,同源性分别为84.8%和88.2%;氨基酸序列分析表明它们的蛋白产物具有功能相同的BIR结构域.结论:从中国仓鼠卵巢细胞中首次克隆到存活蛋白基因.【总页数】4页(P209-212)【作者】郭俊伟;赵兴卉;于颖群;孔毅荣;易绍琼;张晓鹏;陈薇【作者单位】军事医学科学院,微生物流行病研究所,病原微生物生物安全国家重点实验室(2004DAV00214),北京,100071;军事医学科学院,微生物流行病研究所,病原微生物生物安全国家重点实验室(2004DAV00214),北京,100071;军事医学科学院,微生物流行病研究所,病原微生物生物安全国家重点实验室(2004DAV00214),北京,100071;军事医学科学院,微生物流行病研究所,病原微生物生物安全国家重点实验室(2004DAV00214),北京,100071;军事医学科学院,微生物流行病研究所,病原微生物生物安全国家重点实验室(2004DAV00214),北京,100071;军事医学科学院,微生物流行病研究所,病原微生物生物安全国家重点实验室(2004DAV00214),北京,100071;军事医学科学院,微生物流行病研究所,病原微生物生物安全国家重点实验室(2004DAV00214),北京,100071【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.中国水仙叶绿素a/b结合蛋白基因Ntcab1的克隆与序列分析 [J], 林江波;王伟英;邹晖;戴艺民2.水牛α-清蛋白基因3′端调控区的PCR克隆及序列分析 [J], 姜一;刘建忠3.兔疥螨副肌球蛋白基因的RT-PCR扩增克隆与序列分析 [J], 陶玉顺;梁海英;曾智勇;杨光友4.中国大菱鲆虹彩病毒主要衣壳蛋白基因的PCR扩增及序列分析 [J], 史成银;王印庚;黄倢;王清印5.青稞B组醇溶蛋白基因5′上游调控区的TAIL-PCR克隆及序列分析 [J], 韩兆雪;吴芳;赵桃;杨凡;钱刚;余懋群因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

猪丁型冠状病毒S1基因的克隆、原核表达及多克隆抗体制备

猪丁型冠状病毒S1基因的克隆、原核表达及多克隆抗体制备李成;赵勤;伍锐;张雨迪;黄小波;刘浩宇;刘志鹏;赵玉佳;曹三杰;文心田;文翼平【期刊名称】《畜牧兽医学报》【年(卷),期】2018(049)006【摘要】本研究旨在克隆猪丁型冠状病毒(PDCoV)S1基因(1—1 566 bp),体外表达 S1基因抗原表位预测区Sa(106—1 290 bp)蛋白并制备抗该蛋白质的多克隆抗体.运用生物信息学软件分析 S1核苷酸和编码氨基酸序列特征,将 S1基因抗原表位预测区Sa克隆至原核表达载体pET22b(+),构建重组表达载体pET22b-Sa,转化Rosetta(DE3)菌株,IPTG诱导表达、超滤柱浓缩纯化重组蛋白、Ni柱亲和层析,Western blot检测Sa蛋白的活性,将Sa蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体.结果表明,CHN-2015毒株 S1基因开放型阅读框大小为1 566 bp(GenBank No.KY398009),编码522个氨基酸,是具有亲水性的非跨膜蛋白,存在15个潜在的B细胞抗原表位;原核表达Sa重组蛋白,该蛋白质在37 ℃下用终浓度为0.8 mmol·L －1IPTG诱导5 h后,蛋白质主要以可溶性形式存在,免疫印迹显示表达的Sa蛋白在上清与包涵体中都有良好的反应性;用纯化的Sa蛋白四次免疫家兔,获得的兔抗Sa蛋白抗体效价可达1:10 240.本研究克隆了 S1基因,原核表达了Sa蛋白和制备了高效价的兔抗Sa蛋白抗体,具有良好的免疫原性,为后续深入开展S蛋白的功能研究奠定了基础.%In order to obtain polyclonal antibody against porcine deltacoronavirus(PDCoV)spike-1(S1)protein,we cloned the gene(1-1 566 bp),and then expressed the Sa protein(106-1 290 bp)of S1 gene epitope prediction region successfully.The S1 gene epitope prediction region Sa(106-1 290 bp)was cloned into the prokaryotic expression vectorpET 22b(+)to construct recombi-nant plasmid pET22b-Sa by using the bioinformatics software to analyze the S1 nucleotide and the amino acid sequence.The recombinant expression vector was transformed into Rosetta(DE3)competent strain,and the recombinant protein was acquired by induction of IPTG.The recombi-nant protein was purified by ultrafiltration column concentration and immobilized Ni ion affinity chromatography.The activity of the protein Sa obtained was examined by Western blot.New Zealand rabbits were immunized with the Sa protein 4 times to prepare polyclonal antibody.The results showed that the open reading frame of S1 gene of CHN-2015 strain was 1 566 bp(Gen-Bank No.:KY398009),encoding 522 amino acids.It is a non-transmembrane protein with hydro-philicity and 15 potential B cell epitopes Bit ;The recombinant protein was expressed in prokaryot-ic expression.The protein was mainly expressed in soluble form at 37 ℃ for 5 h at the final con-centration of 0.8 mmol·L －1IPTG.Immunoblotting results showed that the expressed Sa protein had good immunogenicity in the supernatant and inclusion bodies.T he rabbit anti-Sa antibody titer was up to 1 :10 240.The results showed that the expressed Sa protein contained antigen epitope recognition region of porcine Deltacoronavirus,and had a good immunogenicity.【总页数】9页(P1256-1264)【作者】李成;赵勤;伍锐;张雨迪;黄小波;刘浩宇;刘志鹏;赵玉佳;曹三杰;文心田;文翼平【作者单位】四川农业大学动物医学院猪病研究中心,成都611130;四川农业大学动物医学院猪病研究中心,成都611130;四川农业大学动物医学院猪病研究中心,成都611130;四川农业大学动物医学院猪病研究中心,成都611130;四川农业大学动物医学院猪病研究中心,成都611130;四川农业大学动物医学院猪病研究中心,成都611130;四川农业大学动物医学院猪病研究中心,成都611130;四川农业大学动物医学院猪病研究中心,成都611130;四川农业大学动物医学院猪病研究中心,成都611130;四川农业大学动物医学院猪病研究中心,成都611130;四川农业大学动物医学院猪病研究中心,成都611130【正文语种】中文【中图分类】S852.659.6【相关文献】1.猪圆环病毒2型 ORF4基因的原核表达及多克隆抗体的制备 [J], 王净修;高章照;姜永厚;吴海港;饶品彬;全滟平;徐辉2.犬冠状病毒N蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备 [J], 周亚花; 殷娟斌; 刘乐; 殷相平; 李彦敏; 张志东3.猪δ 冠状病毒(PDCoV)N蛋白的原核表达及多克隆抗体制备 [J], 陈汭;文翼平;赵勤;伍锐;黄小波;付嘉钰;刘浩宇;李成;赵玉佳;胡靖飞;瞿欢;曹三杰;文心田4.猪源IKKγ在原核和真核表达系统中的表达及其多克隆抗体制备 [J], 赵祥秀;黄茂发;高跃美;唐榕泽;胡仁俊;梁晶晶;李晓宁;罗廷荣5.猪源IKKγ在原核和真核表达系统中的表达及其多克隆抗体制备 [J], 赵祥秀;黄茂发;高跃美;唐榕泽;胡仁俊;梁晶晶;李晓宁;罗廷荣因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。