数显脱色摇床 TS-1
茜素红褪色法检测分子印迹膜上血红蛋白
茜素红褪色法检测分子印迹膜上血红蛋白李慕梓;李雨亭;徐青青;谢卫红【摘要】In alkaline solution,hydroxyl free radical produced by H 2 O2 can make alizarin red fade through oxidation,and hemoglobin as mimetic enzyme of horseradish peroxidase can accelerate the fading process of aliz-arin red.Based on this,a determination method of the hemoglobin absorbed by molecular imprinted membrane has been established.The optimized reaction conditions were as follows:the concentration of alizarin red and hy-drogen peroxide were 1.5×10-4 mol·L-1 and 0.01 mol·L-1 ,respectively,the reaction time was 35 min.The hemoglobin imprinted polymer was prepared by acrylamide embedded,and the concentration of hemoglobin on molecular imprinted membrane was measured under the optimized conditions.The results showed the concentra-tion of hemoglobin recombined had a positive correlation with the absorbance difference of alizarin red.%基于血红蛋白作为辣根过氧化物模拟酶能够在碱性介质中催化过氧化氢产生羟基自由基加速茜素红褪色的原理，建立了分子印迹膜上血红蛋白的检测方法。
脱色摇床的原理及使用
脱色摇床的原理及使用
脱色摇床是一种工作方式为摇摆式的摇床，在同类产品中技术较先进，具有质量可靠，运行平稳，噪音小，无级调速等特点，是生化、生物工程、教学、微生物及医学等行业研究和生产中的优选设备。
脱色摇床主要是指跑电泳时染色、脱色，还有细胞培养等需要的，其主要就是较小，而且上面的台面一般是平的，做水平回旋（现在也有一些可以上下摇动，整体做旋转晃动，这样摇晃的均匀度和一致性比较好）；
脱色摇床是指台式小型，用于蛋白电泳的脱色过程，一般只有很低的转速，是开发性的，体积相对较小。
采用永磁直流电机作为动力，通过先进的电子调速电路，能够保持较为平稳的运动速度，同时具有使用寿命长，维护简单，操作方便的优点。
脱色摇床的用途：
1、脱色摇床，是作振荡振动的实验室设备。
脱色方面：可用与电泳凝胶的固定，考马斯兰染色和脱色的振荡摇晃；
2、也可用与硝酸银染色时的固定、染色、显影等；
3、放射自显影中X光显影、定影；
4、电泳转移纤维素膜的进一步处理，抗原—抗体的反应和染色；
5、装上摇瓶架后，可用于细胞、微生物的培养及各种需振荡、混匀、培养的实验和研究。
脱色摇床的使用方法：
将需要振荡容器放置在托盘上，然后接通电源，打开电源开关，根据需要调节定时旋钮，顺时针缓慢调节速度旋钮，根据需要选择振荡速度。
使用完毕，先将调速旋钮调整到小状态，再关闭电源，取下振荡的容器即可。
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脱色摇床。
脱色摇床操作规程
脱色摇床操作规程脱色摇床是一种常见的化工设备，用于对颜料、染料等物料进行脱色处理。
为了保证操作安全和工作效率，以下是脱色摇床的操作规程。
一、安全注意事项1.操作前应先了解脱色摇床的结构、性能和使用方法，熟悉相关操作规程。
2.操作人员必须穿戴符合要求的劳动防护用品，包括安全帽、工作服、防护眼镜、耳塞等。
3.操作前应检查设备是否处于正常状态，如有发生故障需要维修后方可使用。
4.严禁操作人员携带易燃、易爆物品进入操作现场。
5.操作人员必须接受相关安全培训，熟悉应急预案，并能熟练使用灭火器材。
二、操作程序1.接通电源：将摇床与电源连接，确认电源与设备匹配，并确保插头接触正常。
2.启动设备：按下启动按钮，等待摇床启动，确认转动方向正确。
3.准备物料：将待脱色的物料按照规定的比例放置在摇床中，并确保物料均匀分布。
4.设置时间和速度：根据实际需要，设置脱色时间和速度。
通常情况下，脱色时间为30-60分钟，速度为60-120转/分钟。
5.开始脱色：按下开始按钮，摇床开始运转。
在运转过程中，操作人员应时刻观察设备运行状态，确保其正常工作。
6.结束脱色：脱色时间到达后，按下停止按钮，摇床停止运转。
待摇床完全停止后，打开设备门，取出脱色后的物料。
7.清洁设备：脱色后需要对设备进行清洗，清除残余物料。
先关闭设备电源，然后用清水清洗摇床内部和外部，并擦干。
8.记录相关参数：记录脱色时间、速度、物料种类和数量等参数，以备后续参考。
三、故障排除1.摇床无法启动：检查电源是否接通、插头是否松动，确认电源线是否损坏。
若以上问题均不存在，可能是设备内部故障，需要联系维修人员进行维修。
2.设备运转异常或停止：检查设备内部是否发生异常噪声或异味，排除可能的故障源，如轴承损坏、驱动系统故障等。
3.脱色效果不佳：检查物料是否均匀分布，脱色时间和速度是否合适，如有问题需要进行调整。
四、设备维护1.定期检查设备的零部件和连接件是否松动或磨损，如有问题及时更换或修复。
TS-1数显脱色摇床
TS-1数显脱色摇床
一．TS-1数显脱色摇床的产品介绍
TS-1数显脱色摇床是参照国外产品加以改进的全新仪器，改变原脱色摇床三角型旋转造成的工作台面不平、电机噪音大的缺点，采用进口电机，以原三点改为五点，使在旋转时工作台面处以绝对平衡状态，其性能完全达到进口产品水平。
广泛用于电泳凝胶的固定，染色，显影等，放射自显影实验中X 光底片的显影、定影、电泳转移后，纤维素膜的进一步处理，发分子杂交，抗源--抗体的反应和染色，并可用于细胞培养、且可放入低温及恒温箱中使用。
本机采用无级调速，用户可随意设定所需转速，仪器工作转速有表头显示。
机内驱动为全封闭进口电机。
无热量，无噪音，无需保养。
二．TS-1数显脱色摇床的技术参数。
SRAP-RAPD实验操作流程
SRAP-RAPD实验操作流程1酶类及试剂Taq DNA聚合酶为大连宝生物工程公司产品；蛋白酶K为Merk公司产品；T4DNA连接酶为Promega公司产品。
Wizard DNA Clean-up System、Wizard TM PCR Preps DNA Purification System为Promega 公司产品；小量基因组DNA抽提试剂盒、UNIQ-10柱式PCR产物纯化试剂盒为上海生物工程公司产品。
DL-2000 DNA Size marker为大连宝生物工程公司产品，100bp DNA Size marker由广州普博馈赠。
2培养基LB液体培养基：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，加800mL去离子水充分溶解，用1mol/L的氢氧化钠溶液调整pH为7.2~7.4，加去离子水定容至1000mL，分装后15磅高压蒸汽灭菌15~20min，4℃保存备用。
LB固体培养基：于LB液体培养基中加1.6%的琼脂粉，15磅高压蒸汽灭菌15~20min，待其冷却至70℃左右时倒板，凝固后4℃保存备用。
LB选择培养基：在LB液体培养基中加1.6%的琼脂粉，15磅高压蒸汽灭菌15~20min，待其冷却至50℃左右时，加入氨苄青霉素（Amp）（终浓度1000IU/ mL）轻轻摇动使其混合均匀，迅速分装至无菌平皿，室温凝固后4℃保存备用。
3 缓冲液及其它溶液按分子克隆实验指南（第三版）（萨姆布鲁克等，2002）介绍的方法进行。
（1）Tris-Cl（pH8.0）Tris碱121.1g浓盐酸42mL加去离子水定容至1000mL（2）TE缓冲液（pH8.0）10mol/L Tris-Cl（pH8.0）1μL0.5M EDTA（pH8.0）0.2μL加无菌去离子水定容至100ml，混匀，分装后经高压灭菌，4℃保存。
（3）5×TBE缓冲液Tris 54g硼酸27.5gEDTA 3.72g加去离子水定容至1000mL（4）10×TBE缓冲液Tris 54g硼酸27.5gEDTA（0.25mol/L）80μL加去离子水定容至500mL（5）X-gal液（20mg/mL）X-gal 0.08g二甲基甲酰胺4mL充分溶解混匀，分装于1.5mL灭菌消毒的Eppendorf管中，用锡箔纸包裹以避光，-20℃保存。
蛋白免疫印迹法(WB)试验结果与HIV感染关系的分析
蛋白免疫印迹法(WB)试验结果与HIV感染关系的分析【摘要】目的通过对蛋白免疫印迹法(WB)试验结果的观察,确定个体是否感染HIV以及HIV感染的状况。
方法对60份抗-HIV初筛阳性血清使用蛋白免疫印迹法(WB)进行确认实验。
结果在被检测样品中,HIV-1型确认试验阳性54例,占90%;HIV-1型确认试验阳性,且提示HIV-2阳性感染1例,占1.6%;HIV-1型确认试验弱阳性(不确定)3例,占5%;HIV-1型确认试验阳性2例,占3.3%。
结论蛋白免疫印迹法(WB)试验确定个体有无HIV感染以及HIV感染情况提供依据。
【Abstract】Objective Through to western blot assay observation of result of the test, confirm individual infect HIV and HIV infect the state.Methods Safe the positive serum and use western blot assay to confirm to cases of 60 persist-HIV positive for the first time.Results Being measured in the sample, HIV-1 types confirm testing 54 cases of positive,takes 90%.HIV-1 types confirms testing positive,and point outHIV-2 infect one positively,takes 1.6%.HIV-1 types confirm testing weak positive 3,takes 5% HIV-1 type confirm testing negative 2,take 3.3%.Conclusion Western Blot Assay test offers basis on confirm whether individuals have HIV is infected and HIV infect the state.【Key words】HIV infect;Western Blot Assay;Strip艾滋病(AIDS)是一种目前尚无有效治愈方法,病死率极高的传染病,它在全世界的广泛流行已经成为严重的公共卫生问题和社会问题。
TRUST检测作业指导书
1检验目的用于梅毒病人的诊断和疗效的参考。
2检验方法和原理2.1 方法：凝集法法2.2 原理：本试验采用VDRL抗原重悬于含有特制的甲苯胺红溶液中，出现颗粒或片状凝集，以检测血清或血浆中反应素。
可作为梅毒病人的诊断和疗效之参考。
3 患者准备、样本类型3.1患者准备要求空腹8～12h静脉采血，尤以早晨空腹为佳。
采血前避免剧烈动动，禁食高脂、高糖、咖啡、浓茶、大量饮酒。
3.2 样本类型及处理3.2.1 样本类型：人血清或血浆样本。
3.2.2样本容器：盛放样本的容器为洁净的一次性真空采血管。
3.2.3样本的处理3.2.3.1 血清：采血后，室温待血液凝固后，再于3000转/分钟离心15分钟分离血清待用。
3.2.3.2 血浆：采血后，样本和抗凝剂轻轻颠倒混匀6～8次，充分离心，将血浆和血细胞分离后，吸出血浆待用。
3.2.4 样本保存：2～8℃保存，如果样本在7天内不测定，需将血清或血浆和血细胞分离后，置-20℃保存，避免反复冻融。
4设备和试剂4.1设备名称：脱色摇床型号：TS-1厂家：xxx4.2试剂4.2.1试剂名称：梅毒甲苯胺红不加热血清试验诊断试剂（TRUST）规格：120人份/盒组分：TRUST抗原悬液 2.5ml *l瓶，阳性对照血清1ml *l支，阴性对照血清l ml *1支，试验专用卡片120人份，专用滴管及针头1套。
厂家：上海荣盛生物药业有限公司贮存条件：2-8℃保存，有效期为12个月。
4.2.2校准品：不适用4.2.3质控品：质控品1（弱阳性）：北京康彻斯坦公司提供质控品2（阴性自配）4.2.4贮存条件：质控血清2-8℃保存12个月。
5校准程序：不适用6操作步骤6.1定性试验：6.1.1分别吸取50ul梅毒阳性对照和阴性对照，2个质控品均匀铺加在纸卡的四个圆圈内。
6.1.2取待检血清或血浆50ul置于纸卡的另一圆圈中。
6.1.3用专用滴管及针头垂直分别滴加TRUST试剂1滴于上述血清中。
脱色摇床的相关使用介绍
脱色摇床的相关使用介绍简介脱色摇床是一种用于化学实验室的设备，常用于液体的混合和分离。
它的原理是通过摇晃，让制品内的颜料沉淀在底部，达到脱色目的。
使用方法摇床的准备1.将摇床放在平稳的台面上。
2.检查摇床下方的电源插口是否通电。
3.将摇床的电源线插入插座中，打开电源开关。
4.录入正确的摇床运转参数，如转速等。
安装试管或烧杯1.将试管或烧杯放进摇床中，要注意容器的密封性和稳定性。
2.竖直放置试管或烧杯时，最好带有夹子，防止因为摆动导致容器移位或摔落。
3.非竖直放置的容器，应该是舒展于摇床的平面内，确认它们的密封性并满足所需的混合条件。
开始操作1.根据实验需求选择适当的速度和摆幅。
2.开始启动摇床，记得一边观察容器的状态，一边调节速度和摆幅，直到达到理想的混合状态。
3.当需要停止操作时，按下停止按钮，静置摇床至停止摆动后，再取出容器。
清洗与保养1.操作完毕后，应将容器清洗干净，避免在下一次操作时污染实验。
2.定期清理摇床表面，避免尘埃积累。
3.仔细检查所有部件，保持其稳定性和安全性，一旦发现损坏立即修理或更换。
使用注意事项1.摇床的转速和运动范围应该根据所需混合程度和容器的尺寸、重量进行调整，避免容器在摇晃过程中翻倒或破裂等意外情况。
2.不要在摇床上放置过高或过于沉重的容器，以免破坏摇床和危及实验。
3.除非非常必要，尽量避免在运转时打开摇床的盖子，因为这会干扰混合过程。
4.在运行过程中，一旦发现异常情况，如起火、漏电等，应立即停止使用，并请相关专业人员进行修理。
结论脱色摇床是一种方便、实用的实验室设备，在化学分析等研究领域得到广泛应用。
使用脱色摇床要注意安全、方便和操作技巧，以免影响实验效果。
脱色摇床的操作使用及维护保养
脱色摇床的操作使用及维护保养
脱色摇床是一种常见的实验室设备，主要用于对样品进行染色后的去色处理。
在操作使用和维护保养方面，需要注意以下几点：
一、操作使用
1、放置及安装：选择合适的实验台放置摇床，将摇床固定好，调整好摇床水平，确保稳定。
2、电源插头：插头插入插座后，打开开关，有需求可以调整振幅、振动速率。
3、样品放置：将被处理样品放入摇床中，为了保证均匀的去色效果，应适当调整样品的位置和数量。
4、设置时间：设置合适的去色时间，推荐使用2-3小时，特殊情况可以根据需要作适当调整。
5、操作要点：使用时应注意不要超载、超速或振幅过大，避免对设备造成损坏或使用不当的意外事故发生。
二、维护保养
1、设备清洁：使用后及时进行清洗消毒，手动不能清洗的部位可以用刷子清洗，避免残留物污染设备。
2、润滑油：定期检查设备的润滑油情况，发现问题及时添加或更换润滑油。
3、机械部件：摇床内的主要部件经过长时间使用，很容易出现磨损情况，应注意及时更换或修复，以保证设备的稳定性和安全性。
4、电源：摇床使用后应切断电源，定期检查电源线和插头等电器部件的安全情况，以确保设备的正确使用和安全性。
总之，对于脱色摇床的操作使用和维护保养十分重要，只有在正确的使用和维护情况下才能给实验室的工作带来实际的帮助，获得预期的效果。
【豆丁推荐】-硫氧还蛋白_1_Trx1_氧化还原状态的检测
豆 丁 推 荐 ↓精 品 文 档（首都医科大学细胞生物学系，肝脏保护与再生调节北京市重点实验室，北京100069）摘要硫氧还蛋白-1（thioredoxin-1，Trx1）是一种广泛存在于生物体内的氧化还原调节蛋白，其氧化还原状态的变化是细胞内发挥氧化还原调控作用的重要过程.本文建立了Trx1氧化还原状态的检测方法—氧化还原蛋白免疫印迹法（redox Western blot ），即通过碘乙酸（IAA ）标记Trx1，根据蛋白所带负电荷的不同，达到分离蛋白氧化与还原状态的目的，并根据能斯特方程计算出相应的氧化还原电势.本方法是在蛋白免疫印迹（Western blot ）的基础上建立的，具有低成本、易操作的特点.实验中分别采用H 2O 2和DTT 处理样本，利用此方法检测了细胞裂解液中、细胞内及过表达Trx1氧化还原电势的变化；并检测了HEK293细胞不同生长时期Trx1的氧化还原状态.关键词硫氧还蛋白-1；氧化还原；碘乙酸；氧化还原蛋白免疫印迹法中图分类号Q33Assay for Thioredoxin-1（Trx1）Redox StateGAO Wei ，GU Li ，YANG Hui-Min ，ZHANG Hong（Department of Cell Biology ，Municipal Laboratory for Liver Protection and Regulation of Regeneration ，Capital Medical University ，Beijing100069，China ）Abstract Thioredoxin-1（Trx1）is a 12kD redox regulatory protein that is ubiquitously expressed in avariety of organisms.We have established a Western Blot-based method to distinguish the oxidized Trx1from the reduced form that carrying difference charges when labeled with iodoacetic acid （IAA ）.The redox potentials can be calculated according to the Nernst equation.This method is cost-effective and easy-to-use in measuring the redox potentials in cell lysates ，wild type or trx1-overexpresssion cells with /without either H2O2or DTT treatmemt.With the method ，we detected that the Trx1redox state varied at different stages of cell growth.Key words thioredoxin-1；redox ；iodoacetic acid ；redox Western blot 收稿日期：2009-12-25；接受日期：2010-03-12国家自然科学基金项目（No.30973406），北京市自然科学基金（No.5102011）和北京市教育委员会科技发展计划项目（No.KM200910025001）*联系人Tel ：010-********；E-mail ：hzhang@Received ：November 25，2009；Accepted ：March 12，2010细胞的增殖、分化及凋亡受细胞内外多种因素的调节，而氧化还原状态的改变对调控细胞的生存或死亡尤为重要.细胞内氧化还原状态的变化受到细胞内的氧化还原因子的调控.细胞内存在的氧化还原调控系统有多种，其中，谷氧还蛋白氧化还原系统和硫氧还蛋白氧化还原系统［1，2］颇受重视.硫氧还蛋白系统由硫氧还蛋白还原酶（TrxR ）、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH ）和硫氧还蛋白（Trx ）组成［3］.Trx1是一种小分子蛋白（12kD ），由104个氨而实现［5］.Trx1作为一种氧化还原调控蛋白在细胞的各种生理活动中发挥着重要的作用，其调控方式主要第4期高卫等：硫氧还蛋白-1（Trx1）氧化还原状态的检测通过氧化还原状态的变化实现.Trx1不仅可以通过清除ROS来抵抗细胞内的氧化应激，还可以作为一种生长因子促进细胞的生长［4］.除此之外，Trx1还能够与某些含有半胱氨酸残基的蛋白质相互作用从而调控这种蛋白的功能［6］.另外，Trx1还与某些疾病的发病机制密切相关［7］.氧化应激参与体内多种生理活动及疾病的发生［8，9］，因此，寻找能够探测体内氧化还原状态的生物学指标对研究氧化应激参与的细胞生理活动极为重要.目前，已知的检测细胞内氧化还原电势的方法，通常通过检测还原型谷胱甘肽（GSH）和氧化型谷胱甘肽（GSSG）的含量比值，计算其氧化还原电势.对于对细胞氧化应激起重要调控作用的Trx1蛋白，目前还没有一种直接有效的方法来检测其氧化还原状态的变化.因此，我们建立了氧化还原蛋白免疫印迹法（redox Western blot）检测Trx1的氧化还原状态及电势.此方法是在蛋白免疫印迹（Westernblot）基础上，通过碘乙酸（IAA）标记达到分离蛋白的目的.由于还原型Trx1中含有巯基（-SH），可以与带负电荷的碘乙酸结合，而氧化型的Trx1含有二硫键（-S-S-），不能与碘乙酸结合，根据还原型和氧化型Trx1所带负电荷的不同，通过非变性丙烯酰胺凝胶电泳可以将其分离出来.本实验中，我们采用H2O2和DTT处理细胞，建立Trx1氧化还原体系，通过本方法有效地分离氧化状态和还原状态的Trx1，并根据能斯特方程计算出相应的氧化还原电势.1材料与方法1.1材料HeLa细胞与HEK293细胞均为本实验室液氮保存细胞株.将细胞复苏后，用含10%新生牛血清、100U/mL青霉素和链霉素的DMEM全培养基培养在为37ħ、5%CO2培养箱中.pcDNA3.1质粒为本实验室保存，pcDNA3.1-Trx1为美国Emory大学赠送.垂直板电泳装置（0.75mm）购于Bio-Rad公司；恒温水浴箱购于北京市长风仪器仪表公司；转移脱色摇床TS-8型和脱色摇床TS-1型购于江苏海门市其林贝尔仪器制造有限公司；G-25microspin柱购于GE-Healthcare公司；Tween-20、EDTA、二硫苏糖醇（DTT）、Trition X-100、碘乙酸（IAA）、盐酸胍（guanidine HCl）均购于Sigma公司；甘氨酸购于Merck公司；H2O2购于Alfa Aesar公司；丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、过硫酸铵、TEMED均购于北京鼎国生物技术有限公司；脱脂奶粉为国产伊利奶粉；Western blot超敏发光液购于北京普利莱基因技术有限公司；兔抗人Trx1购于Abcam公司；鼠抗人V5购于Invitrogen公司；羊抗兔IgG和羊抗鼠IgG购于Jackson Immuno Research公司.1.2试剂配制非变性丙烯酰胺凝胶无SDS，SDS的量用水补齐，其他部分同丙烯酰胺凝胶的配制；G-lysis缓冲液为细胞裂解液，其成分为：pH值为8.3的50 mmol/L Tris，3mmol/L EDTA，6mol/L盐酸胍，0.5% TritonX-100组成.每次使用之前，加入9.3mg/mL或18.6mg/mL的IAA，用10mmol/L NaOH调pH到8.3，配成含有IAA的G-lysis缓冲液使用液；5ˑ蛋白上样缓冲液主要成分为：310mmol/L pH值为6.8的Tris，50%甘油，加溴酚蓝至饱和浓度；非变性凝胶电泳缓冲液，成分为25mmol/L Tris-HCl，192 mmol/L甘氨酸；其他试剂及缓冲液同丙烯酰胺凝胶电泳.1.3氧化还原蛋白印迹法（redox Western blot）Trx1蛋白质氧化还原状态的检测：用G-lysis缓冲液收集细胞蛋白，加入等体积的含有100mmol/L IAA的G-lysis缓冲液，充分混匀，37ħ避光放置30 min，取出后G-25microspin柱过滤（按说明书操作）.加入蛋白上样缓冲液电泳至溴酚蓝带泳出胶外8min，转至PVDF膜（40V，3h），5%封闭液室温封闭1h.加一抗（兔抗人Trx11ʒ15000）4ħ过夜，加二抗（1ʒ3000）室温1h.最后用超敏发光液化学发光，显影，定影.细胞内Trx1氧化还原状态的检测：用含有50 mmol/L IAA的G-lysis缓冲液收集细胞蛋白质，37ħ避光放置30min，取出后G-25microspin柱过滤.加入蛋白上样缓冲液电泳至溴酚蓝带泳出胶外8min，转至PVDF膜（40V，3h），5%封闭液室温封闭1h.加一抗（兔抗人Trx11ʒ15000）4ħ过夜，加二抗（1ʒ3000）室温1h.最后用超敏发光液化学发光，显影，定影.1.4能斯特方程计算氧化还原电势用Image J计算出氧化态Trx1和还原态Trx1黑度值即为其蛋白含量值，根据能斯特方程计算其氧化还原电势值.Eh=－254+30ˑlog（氧化态/还原态）2结果2.1Trx1蛋白质氧化还原状态的检测573中国生物化学与分子生物学报第26卷为了检测本实验方法的可行性，我们首先检测了细胞裂解液中Trx1蛋白氧化还原状态的变化.2.1.1细胞裂解处理将HeLa 细胞及HEK293细胞裂解，分别加入H 2O 2和DTT ，终浓度为0.5mmol /L 和5mmol /L ，作用30min 后，加入等体积含100mmol /L IAA 的G-lysis 缓冲液，用氧化还原蛋白免疫印迹法检测Trx1蛋白氧化还原状态.2.1.2细胞裂解液中Trx1蛋白氧化还原状态变化在HeLa 细胞中（Fig.1A ），未处理组，由于Trx1在空气中暴露一定时间，显示3种不同状态：部分Trx1未被氧化，为还原状态（第1条带）；部分Trx1上只有1对半胱氨酸对Cys 32、Cys 35被氧化（第2条带）；部分Trx1上Cys 32、Cys 35和Cys 62、Cys 69的2个半胱氨酸对均被氧化（第3条带）.根据能斯特方程计算其氧化还原电势为－228mV.H 2O 2处理组中，Trx1全部被氧化（第3条带），氧化还原电势为－118mV.DTT 处理组中，Trx1全部被还原，呈现还原态（第1条带），氧化还原电势为－387mV.另外，用HEK293细胞做同样实验（Fig.1B ）.结果表明：由于细胞系不同，未处理组的Trx1中2对半胱氨酸并没有完全被氧化，所以只检测到还原型和Cys 32、Cys 35被氧化的2条带，氧化还原电势为－248mV.在H 2O 2处理组和DTT 处理组中，Trx1氧化还原电势值分别为－45mV 和－460mV.Fig.1The detection of Trx1protein redox states in HeLa and HEK293cell lysates （A ）HeLa cells and （B ）HEK293cells were lysated with G-lysis buffer and treated with either 5mmol /L DTT or 0.5mmol /L H 2O 2for 30min.An equal volume of G-lysis buffer with 100mmol /L IAA was added and the samples were incubated in the dark for 30min at 37ħ.The proteins were separated by 15%non-reducing -PAGE.After transferred to the membrane ，the blots were probed with anti-Trx1antibody.Trx1redox potential was calculated by the Nernst equation.The results showed that in no-treated group ，Trx1had three bands which represented oxidized ，partially oxidized and reduced states ，respectively.In H 2O 2-treated group ，Trx1was totally oxidized ，therefore ，only oxidized band was observed.In DTT-treated group ，Trx1was reduced ，therefore ，only reduced band was observed.Values were mean ʃSE2.2细胞内Trx1蛋白氧化还原状态的检测由2.1实验可看出，本方法可以检测到细胞外处理Trx1蛋白其氧化还原状态的变化.由于Trx1的氧化还原反应主要发生于细胞内，为此我们进一步检测了细胞内处理Trx1其氧化还原状态的改变.2.2.1样品处理分别将H 2O 2（0.5mmol /L ）和DTT （5mmol /L ）加入HeLa 及HEK293细胞培养基中，30min 后用含50mmol /L IAA 的G-lysis 缓冲液收集细胞，采用氧化还原蛋白免疫印迹法检测Trx1氧化还原状态.2.2.2细胞内Trx1蛋白氧化还原状态变化在Fig.2A 中，未处理组Trx1几乎全部以还原状态存在，其氧化还原电势与DTT 处理组相近（未处理组电势：－285mV ，DTT 组电势：－282mV ）.当加入H 2O 2后，Trx1抵抗细胞中由H 2O 2造成的氧化应激而被部分氧化，氧化还原电势为－247mV.我们同样检测了HeLa 细胞中的Trx1氧化还原状态的变化（Fig.2B ）.正常生长的HeLa 细胞内，Trx1的氧化还原状态和HEK293细胞内的Trx1氧化还原状态相同，全部为还原状态（结果未显示）.HeLa 细胞经H 2O 2处理，Trx1形成2条蛋白条带，其中还原带型（第1条带）深而宽，氧化带型（第2条带）浅而窄，673第4期高卫等：硫氧还蛋白-1（Trx1）氧化还原状态的检测表明0.5mmol/L H2O2只能氧化HeLa细胞内较少部分Trx1，能斯特方程计算电势为－263mV.在DTT处理组中，由于Trx1全部被还原，只检测到还原态的Trx1（第1条带），能斯特方程计算电势为－327mV.在这2种细胞中，由于不同的细胞承受氧化应激的能力不同，所以Trx1发挥抗氧化作用的能力也不同.在2.1中的体外实验中，H2O2直接处理细胞裂解液，Trx1氧化程度明显高于H2O2处理细胞后Trx1在体内的氧化程度.这可能由于在检测细胞内Trx1氧化还原状态变化时，H2O2被加入到培养基中，只有部分进入细胞内；另外，体内其它抗氧化系统如GSH可能也参与了对H2O2的抵抗作用.Fig.2The detection of Trx1redox state in vivo（A）HEK293cells and（B）HeLa cells were treated with5mmol/LDTT and0.5mmol/L H2O2for30min，respectively，and lysated with G-lysis buffer with50mmol/L IAA.The extracts were incubated in the dark for30min at37ħ.The proteins were separated by15%non-reducing-PAGE.After transferred to the membrane，the blots were probed with anti-Trx1antibody.Trx1redox potential was calculated by the Nernst equation.The results showed that in no-treated group，three distinct bands corresponding to Trx1were visualized，which represented a fully oxidized，a partially oxidized and a reduced band，respectively.Trx1was essentially completely oxidized by0.5mmol/LH2O2and therefore only oxidized band was observed.In the groups treated with5mmol/L DTT for30min，Trx1was reduced and therefore only reduced band was observed.Values were meanʃSE2.3过表达Trx1蛋白体外氧化还原状态的检测为了验证本方法是否同样可以检测过表达Trx1氧化还原状态的变化，我们分别将带有V5标签的空载体pcDNA3.1和pcDNA3.1-Trx1质粒瞬时转染入HEK293细胞中，48h后，用G-lysis缓冲液将细胞裂解，然后分别加入0.5mmol/L H2O2和5mmol/L DTT处理30min，再加入等体积含有100mmol/L IAA的G-lysis缓冲液标记还原型的Trx1，采用氧化还原蛋白免疫印迹法，利用V5抗体检测过表达的Trx1蛋白氧化还原状态的变化.如Fig.3所示，转染空载体组未检测到带有V5标签的Trx1的表达.H2O2和DTT直接处理细胞裂解液中提取出来的过表达Trx1，由于未处理组中的Trx1有少部分被空气氧化，出现1条浅而窄的氧化状态Trx1（第2条带），氧化还原电势为－248mV；H2O2处理后Trx1全部被氧化（第3条带），氧化还原电势为－38mV；DTT处理组Trx1全部为还原状态（第1条带）氧化还原电势为－478mV.体外处理带V5标签Trx1的氧化还原状态变化结果和Fig.1B中Trx1蛋白氧化还原状态的变化一致，这说明本方法对过表达的Trx1（带有V5标签）同样具有适用性.2.4细胞在不同生长时期Trx1氧化还原电势不同据文献［10］报道，活性氧（ROS）对细胞周期具有影响作用，由于Trx1可作为一种ROS清除剂，为此我们检测了不同细胞生长时期Trx1氧化还原状态的变化.将HeLa细胞饥饿24h后，使细胞停滞在G1期，然后加入含有10%血清的DMEM培养基，分别在不同的培养时间（6h、7.5h、9h、12h）收集细胞，用redox Western blot方法检测细胞内Trx1蛋白氧化还原状态，并计算其对应的氧化还原电势.从Fig.4A中可以看出，在细胞的不同生长期，氧化状态的Trx1含量有所不同，从培养时间0至9h逐渐增多，能斯特方程计算其氧化还原电势（Fig.4B）由－289mV升高至－266mV.在12h，Trx1大部分又恢复到还原状态，电势又下降到－286mV左右.773中国生物化学与分子生物学报第26卷Trx1在不同时间内氧化还原状态的变化也可以间接说明，ROS 可以影响细胞的生长，并且Trx1在不同的细胞生长时期起到了一定的调控作用.Fig.3The detection of over-expressed Trx1redox state HEK293cells were transfected with either vectorpcDNA3.1or pcDNA3.1-v5-Trx1.After 48hours posttransfection ，cells were lysated with G-lysis buffer and treated with 5mmol /L DTT and 0.5mmol /L H 2O 2for 30min ，respectively.An equal volume of G-lysis buffer with 100mmol /L IAA and the samples were incubated in the dark for 30min at 37ħ.The proteins lysates were separated by 15%non-reducing-PAGE.After transferred to the membrane ，the blots were probed with anti-V5tag antibody.Trx1redox potential was calculated by the Nernst equation.The results showed that in no-treated group ，three distinct bands corresponding to V5-Trx1were visualized ，which represented a fully oxidized ，a partially oxidized and a reduced band ，respectively.V5-Trx1was essentially completely oxidized by 0.5mmol /L H 2O 2and therefore only oxidized band was observed.In the groups treated with 5mmol /L DTT for 30min ，V5-Trx1was reduced and therefore only reduced band was observed.Values were mean ʃSEFig.4The detection of Trx1redox potential at different periods of cell growth HeLa cells were starved in serum-freeDMEM for 24hours ，and incubated with DMEM containing 10%serum for the indicated time.Then the cells were harvested with G-lysis buffer with 50mmol /L IAA and incubated in dark for 30min at 37ħ.The proteins lysates were separated by 15%non -reducing -PAGE.After transferred to the membrane ，the blots were probed with anti-Trx1antibody.The Trx1redox potential was calculate by the Nernst equation.The results showed that Trx1redox potential increased from －289mV to －266mV in a time dependent manner within 9hours and then decreased to －286mV at 12hours.Values were mean ʃSE3讨论硫氧还蛋白自上世纪60年代被发现以后［11］，越来越受到人们的重视.研究表明，这种蛋白质广泛存在于各种生物体内.Trx 家族如TrxR 等在细胞内外发挥着非常重要的作用.Trx 蛋白在不同种属的生物体中结构有所不同，在同一细胞系中也存在着发挥不同作用的不同结构形式，但是其发挥作用的方式基本相同，因为它们共同拥有一个保守序列-Cys 32-Gly -Pro -Cys35-，并通过这段序列上的2个半胱氨酸残基上的-SH /-S-S-之间的转换发挥作用［12］.由于还原状态和氧化状态的Trx1是通过巯基形成二硫键区分的，还原态的Trx1只脱掉氢离子形成氧化状态Trx1，因此2种状态的Trx1分子量并无明显差异，所以传统的利用蛋白质分子量的差异区分不同蛋白的方法无法将其分开.碘乙酸（IAA ）很早被用于蛋白变性后封闭蛋白上的巯基，抑制蛋白复性.而我们的实验中，不仅利用了碘乙酸可以和巯基-SH 结合而不能和二硫键-S-S-结合的特性，而且引入了碘乙酸使蛋白带有较多负电荷的特点，通过蛋白所带负电荷的差异有效地将氧化还原状态不同的Trx1分离开.本方法不仅可以直接检测Trx1氧化还原状873第4期高卫等：硫氧还蛋白-1（Trx1）氧化还原状态的检测态的变化，而且提供了一种利用Trx1为抗氧化应激生物标志物研究细胞氧化还原调控的新方法.Trx1在细胞内具有非常重要的调控作用.据报道，这种蛋白质和癌症及心血管疾病的发生密切相关［7，10 12］，特别在对癌症或和氧化应激有关的疾病的发病机制的研究中，Trx1更是一种热点蛋白质.在对这些疾病的研究中，Trx1被视为治疗或者预防癌症的新的药物靶位点.为此，氧化还原蛋白免疫印迹法（redox Western blot）不仅可以用来探测培养细胞的氧化还原状态的变化，还可以应用到动物实验以及肿瘤组织内氧化还原状态的研究中.本实验室利用此方法发现，烷化剂甲磺酸甲酯（MMS）可以有效改变细胞内Trx1氧化还原状态，但是烷化剂Cisplatin和引起DNA双链断裂的试剂4NQO却不能使细胞内Trx1氧化还原状态改变.而且，我们还发现，某种G蛋白偶联受体的激活也可以改变细胞内的Trx1氧化还原状态（待发表）.所以，这种方法可以有效地应用在某些和氧化应激有关的实验研究中，直接反映细胞内氧化还原状态.另外，除了Trx1，参与调控细胞氧化还原状态的其它小分子蛋白，如TrxR、Prx3和Grx1，均有可能利用本方法检测其氧化还原状态的变化.我们的实验还显示，此方法对检测分子量较大的蛋白，效果不很理想.原因可能是，这些蛋白较大的分子量和复杂的分子结构，对其氧化还原状态的分离造成影响.总之，氧化应激作为影响细胞生理活动的重要因素之一，越来越多地引起研究者的关注.氧化应激和多种疾病密切关系的发现，使得细胞内参与氧化应激的蛋白成为人们研究的热点.本方法的建立可以有效地为寻找相关疾病中氧化还原调控的药物靶位点提供一种可行的研究方法.参考文献（References）［1］周彦，袁建刚，范凤朝，等.硫氧化还原蛋白与细胞内的氧化还原调控［J］.生物工程进展（Zhou Yan，Yuan Jiang-Gang，Fan Feng-Chao，et al.Thioredoxin and redox regulation of theCell［J］.Prog Biotechnol），2000，20（6）：22-25［2］Go YM，Ziegler TR，Johnson JM，et al.Selective protection of nuclear thioredoxin-1and glutathione redox systems againstoxidation during glucose and glutamine deficiency in humancolonic epithelial cells［J］.Free Rad Biol Med，2007，42：363-370［3］Spyrou G，Enmark E，Miranda-Vizuete A，et al.Cloning and expression of a novel mammalian thioredoxin［J］.J Boil Chem，1997，272（5）：2936-2941［4］董文甫，李艳红，岳文斌.硫氧还蛋白研究进展［J］.草食家畜（Dong Wen-Fu，Li Yan-Hong，Yue Wen-Bin.Progress in thestudy of Thioredoxin［J］.Grass-feeding livestock），2006，133（4）：4-6［5］Walter H W，Jan P，William R M，et al.Redox potential of human thioredoxin1and identification of a second dithiol/disulfide motif［J］.J Biol Chem，2003，278（35）：33408-33415［6］Hirota K，Nakamura H，Masutani H，et al.Thioredoxin superfamily and thioredoxin-inducing agents［J］.Ann N Y AcadSci，2002，957：189-199［7］梁鹏，张一娜，滕宗艳.硫氧还蛋白生物活性及其与人类疾病的关系［J］.老年学杂志（Liang Peng，Zhang Yi-Na，TengZong-Yan.Thioredoxin biological activity and its relationshipwith human diseases［J］.J Gerontol），2001，24（5）：478-481［8］李梅，侯敢，黄迪南.肌肉萎缩与氧化应激［J］.中国生物化学与分子生物学报（Li Mei，Hou Gan，Huang Di-Nan.Muscleatrophy and oxidative stress［J］.Chin J Biochem Mol Biol），2009，25（5）：415-420［9］海春旭，冯安吉，梁欣，等.自由基医学［M］.西安：第四军医大学出版社（Hai Chun-Xu，Feng An-Ji，Liang Xin，et al.FreeRadical Medicine［M］.Xi’an：Fourth Military MedicalUniversity Press），2006［10］Boonstra J，Post J A.Molecular events associated with reactive oxygen species and cell cycle progression in mammalian cells［J］.Gene，2004，337（4）：1-13［11］Powis G，Mustacich D，Coon A..The role of the redox protein thioredoxin in cell growth and cancer［J］.Free Radic Biol Med，2000，29（3-4）：312-322［12］Arnér ES，Holmgren A.The thioredoxin system in cancer［J］.Semin Cancer Biol，2006，16（6）：420-426973。
脱色摇床的相关使用介绍
脱色摇床的相关使用介绍
脱色摇床是一种实验室用的设备，主要用于生物化学实验中样本的染色和脱色。
摇床的震动能够帮助溶液中的试剂均匀地分散到样本中，从而实现均匀染色和脱色的效果。
设备结构和用途
脱色摇床主要由摇床主体、摇床架、电机以及操控面板等部分组成。
其主要用
途为：
1.溶液的均匀分散和混合
2.样本的染色和脱色
摇床的摇动频率和振幅可以通过操控面板进行设定。
摇床的摇动方式分为水平
摇床和垂直摇床两种。
水平摇床可用于样本的均匀混合，而垂直摇床主要用于样本的染色和脱色。
使用步骤
使用脱色摇床的步骤如下：
1.将需要处理的样本置于摇床架上，将架子放到摇床主体上。
2.根据实验需要选择摇动频率和振幅。
3.打开摇床，将其设置为所需的工作时间。
4.操作完成后关闭摇床。
注意事项
在使用脱色摇床时需要注意以下几点：
1.操作时需穿戴手套和护目镜等防护设备。
2.在操作过程中应注意不要让操作液滴到地面或其他地方。
3.严格遵守实验操作规程，不得私自改变实验方案。
4.操作结束后应将摇床及时清洗并关闭电源。
总结
脱色摇床是一种重要的实验室设备，其主要用途为样本的染色和脱色。
通过摇
动震动将溶液中的试剂混合均匀分散到样本中，以实现样本的均匀染色和脱色的效果。
在操作时应注意安全、科学严谨。
辛伐他汀经由雾化吸入途径给药抑制过敏性小鼠气道高反应性和气道重塑
辛伐他汀经由雾化吸入途径给药抑制过敏性小鼠气道高反应性和气道重塑*徐蓝1，朱磊1，孙云2△（1苏州大学附属苏州九院，苏州市第九人民医院药剂科，江苏苏州 215200；2扬州大学医学院，江苏扬州 225001）［摘要］目的：探讨雾化吸入途径给予辛伐他汀（simvastatin， Sim）对哮喘模型小鼠气道高反应性和气道重塑的影响。
方法：选取BALB/c小鼠，采用卵白蛋白（ovalbumin， OVA）诱导建立哮喘小鼠模型。
随机分为对照（control）组、模型（vehicle-OVA）组、Sim（5、20 g/L， i.h）-OVA组、Rho激酶抑制剂Y-27632（10 mg/kg， i.n）-OVA组和地塞米松（dexamethasone， DXM； 1 mg/kg， i.p）-OVA组，每组10只。
OVA末次攻击24 h后以不同浓度乙酰甲胆碱（methacholine， MCh）诱导小鼠产生气道高反应性。
应用生物信号记录系统测定气道阻力（airway resistance， R L）和动态肺顺应性（dynamic lung compliance， C dyn ）以评价Sim的作用强度；对各组小鼠支气管肺泡灌洗液（bronchoalveo‐lar lavage fluid， BALF）炎症细胞分类并计数；肺组织行HE和Masson染色评估炎症细胞浸润程度和黏膜下胶原沉积；Western blot法测定各组小鼠肺组织中RhoA蛋白含量。
结果：与vehicle-OVA组比较，预先雾化吸入Sim 5 g/L-OVA组和Sim 20 g/L-OVA组均下调MCh诱导的哮喘模型小鼠R L值（P<0.05，P<0.01），升高C dyn值（P<0.05，P<0.01），降低过敏性小鼠气道高反应性；降低BALF中炎症细胞总数、嗜酸性粒细胞数、巨噬细胞数和中性粒细胞数（P<0.01）；Sim 20 g/L-OVA组小鼠肺组织炎症浸润和气管周围胶原沉积面积减少，胶原容积分数减小（P<0.01），肺组织中RhoA蛋白水平降低（P<0.05）。
TS-2000A多用脱色摇床使用说明
TS-2000A多用脱色摇床使用说明
一、简介：
脱色摇床用于电泳凝胶分离谱带的固定，考马斯蓝染色和脱色时的振荡晃动，硝酸银染色的固定、染色、显影等，放射自显影实验中X光底片的显影、定影，电泳转移后纤维素膜的进一步处理，抗原抗体的反应和染色，分子杂交细胞培养。
二、详细说明：
1、用途：
TS-2000A多用脱色摇床广泛应用于电泳凝胶的固定，考马斯蓝染色和脱色时的震荡摇晃，硝酸银染色时的固定、染色、显彰等。
放射自显影实验中X光底片的显影、定影。
电泳转移后，纤维素膜的进一步处理。
如分子杂交、抗原抗体的反应和染色，并可用于细胞培养及细胞膜转移，且可放入低温及恒温箱中使用。
2、技术参数：
频率：40-240转/分旋幅：回转半径15mm 托盘：250
×230mm 外观尺寸：350×250×150mm
三、使用方法：
将仪器放在平稳的工作界面上，接通电源（220V 50Hz），打开电源开关，指示灯亮。
调节"速度调节"旋扭，选定合适的晃动频率即可工作。
实验结束后拔下插头，以保证安全。
四、注意事项：
1、仪器应存放于干燥、通风、无腐蚀气体的地方。
工作台面上面不要堆放重物。
实验溶液溢出后立即擦干。
2、仪器自购买之日起一年内，您按使用说明书正确使用，如发现故障，我们将提供免费修理。
对技术参数有特殊要求的可专门设计！
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数显型圆周式震荡摇床
数显型圆周式震荡摇床数显型圆周式震荡摇床是一种常用于生物、化学等实验室的设备，可用于混合溶液、培养细胞，以及其他需要持续震荡的实验。
此设备的最大特点是通过运用数显技术来帮助我们更加精确地控制震荡幅度及频率，使得实验结果更加准确可靠。
设备原理圆周式震荡摇床是一种基于平衡恢复原理的设备，它通过电机将研究对象放置在底板上，并通过电机的动力来进行震荡。
电机和底板之间通过齿轮或皮带来连接，让电机产生旋转力来推动底板上的研究对象。
通过调节电压、电流、转动角度等参数来控制震荡幅度和频率，以达到较为精确的盘旋运动。
设备特点1.数显技术：数显型圆周式震荡摇床内置数显模块，可以直接显示震荡频率、震荡幅度等实验数据，方便实验人员进行实验数据的记录和观测。
2.高效、便携：该设备采用低噪音电机及免维护滚珠轴承，震动幅度大，噪音小，安全可靠，且体积较小，移动方便，适合于实验室内各种场合使用。
3.功能灵活：数显型圆周式震荡摇床可适用于培养细胞、混合溶液、旋转更换、搅拌、涂层、抗体制备、洗涤、脱电等多种操作，并可根据实验需要选择不同的配件来满足不同的实验要求。
注意事项1.震荡摇床必须放置在水平地面上，并且要保持整机水平。
2.当实验结束后，应将十字螺丝旋紧，以免震荡摇床移位，导致设备使用不当或者故障。
3.不要超过设备载重限制，过载会导致设备受损或者故障。
4.使用前务必了解设备的控制方式和参数设置方法，以及孔板的选取和更换。
维护保养1.定期检查震荡摇床的各个部件，包括电机、滚珠轴承、齿轮、皮带、连接板等，发现失效或有裂纹时及时更换，以免影响设备使用寿命2.震荡摇床应放置在干燥通风良好的环境中、避免阳光长时间直射，不要淋湿或者暴露在雨雪天气。
3.省电模式：设备每天使用固定时间自动开启一段时间，而不会一直保持开启状态，以节约能源及延长设备使用寿命。
结论数显型圆周式震荡摇床是一款性价比较高的实验室设备，适用于生物、化学实验以及其他需要混合、溶解、杀菌等操作的实验。
BIORAD电泳仪及SDS-PAGE凝胶电泳操作规范
使用BIO-RAD电泳仪进行SDS-PAGE凝胶电泳的操作规范实验原理根据蛋白分子量亚基的不同而分离蛋白，在样品介质和丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂后，蛋白质亚基的电泳迁移速率主要取决于亚基分子量的大小。
实验所用仪器FR-200A全自动紫外与可见分析装置上海复日科技有限公司电泳仪 BIO-RAD公司TS-1型脱色摇床江苏海门市其林贝尔仪器制造有限公司实验用试剂低分子量蛋白Maker TAKARA4*上样缓冲 TAKARAPagn Blue protein staining solution Fermentas试剂的配制1.贮液的配制（1）凝胶储液取30g丙烯酰胺+0.8g甲叉双丙烯酰胺0.8g ,先用35ml双蒸水溶解，搅拌，直到溶液变成透明，再用双蒸水稀释至100ml，过滤。
棕色瓶4℃保存一个月。
（2）1 mol/l Tris-HCL (PH 8.8)12.1g Tris(三羟甲基氨基甲烷)溶解在80ml双蒸水中，用4mol/l盐酸调PH至8.8。
再用双蒸水稀释至100ml，保存在4℃冰箱。
（3）1.0 mol/l Tris-HCL (PH 6.8)6.06g Tris溶解在40ml双蒸水中，用用4mol/l盐酸调PH至6.8。
再用双蒸水稀释至50ml，保存在4℃冰箱。
（4）10%过硫酸铵（APS）0.1g过硫酸铵+1ml双蒸水。
使用前新鲜配制（5）Tris–甘氨酸电泳缓冲液的配制（25mmol/L Tris；250mmol/L甘氨酸(pH8.3)）30.3gTris+ 144.2g甘氨酸+ 10gSDS，双蒸水定容至1L。
每次使用时10倍稀释。
（6）样品缓冲液使用4*SDS-PAGE loading buffer(Takara公司)，上样缓冲与样品比例1:3混匀，之后煮沸5min。
2.凝胶的配制注：上表所标体积为配制两块胶的用量。
若配制一块或多块，可按比例减半或加倍。
具体步骤如下：1、样品制备：40 µL蛋白+5*上样缓冲液10 µL，煮沸5 min，冷却后放冰箱下层保存，备用2、制胶1）用专用的医用棉口罩将胶板擦拭干净，电泳槽清洗干净，组装模具。
脱色摇床的操作使用及维护保养
脱色摇床的操作使用及维护保养
脱色摇床是一种常用的实验设备，用于将染料从织物中去除或减淡。
以下是脱色摇床的操作使用及维护保养的详细介绍。
操作使用：
1.准备工作：将待脱色的织物切割成适当大小，并准备好脱色试剂和所需的试剂溶剂。
2.调整摇床参数：打开脱色摇床的电源，根据实验的需要，调整摇床的摇动速度和往复摇动角度。
通常情况下，较低的摇动速度和较小的角度有助于脱色效果的提高。
3.加载样品：将待脱色的织物样品均匀地分布在摇床的槽中，避免重叠。
4.加入试剂：根据实验需要，将脱色试剂加入摇床槽中，保持试剂与样品充分接触。
5.启动摇床：确认样品和试剂位于摇床槽内后，启动摇床。
在脱色过程中，可以通过透明盖板观察样品的颜色变化情况。
6.实验结束：根据实验需要，设定脱色摇床运行的时间，实验结束后关闭摇床电源，将脱色的织物样品从摇床槽中取出。
维护保养：
1.清洁槽体：使用干净的湿布擦拭摇床槽体表面，去除污垢和试剂残留物。
避免使用带有腐蚀性的清洁剂。
2.保持电源干燥：摇床电源部分应保持干燥，避免进水或与液体接触，以防止短路和电气故障。
3.定期检查：定期检查脱色摇床的各个部件和连接件是否松动，如有
松动及时紧固，以保证摇床的正常运行。
4.维护滑轮：定期检查摇床滑轮的状况，如有油脂干涩或损坏，应添
加或更换润滑油。
6.定期校准：定期校准脱色摇床的摇动速度和角度，确保实验结果的
准确性。
总结：。
腰痛宁胶囊组方不同有效部位细胞药理活性评价＊
腰痛宁胶囊组方不同有效部位细胞药理活性评价＊倪力军;朱婷婷;王南南;张立国【摘要】This study was aimed to evaluate the effects ofYao-Tong-Ning Capsule (YTNC) whole formula, dissembled YTNC formulas, and their active fractions on cell proliferation, immunity, anti-inflammation and osteocytes repair. According to the formulating principle of YTNC and combinatorial chemistry concepts, six samples were prepared by combining different active fractions. Half-maximal effective concentrations (EC50) or half-maximal inhibitory concentrations (IC50) were applied to evaluate the effects of samples on promoting the secretion of IL-1β, IL-6 and TNF-α in macrophage (Ana-1) cells, on inhibiting the production of lipopolysaccharide (LPS)-induced PGE2 in Ana-1 cells, on promoting the cell proliferation induced by IL-1β and glycosaminoglycan (GAG) synthesis, on influencing synoviocytes proliferation induced by IL-1β, and on promoting the secretion of IL-6, respectively. The interactions among the active fractions in these samples were investigated by comparing the additive EC50 (or IC50) values with their experimental EC50 (or IC50). The results showed that pharmacological activities of the six samples were different in the same cell model. Some pharmacological activities of a few dissembled YTNC formulas were superior or significantly superior to the YTNC whole formula. However, the YTNC whole formula was good at promoting cell immunity, anti-inflammation and osteocytes repair. The YTNC’s vehicle Chinese rice wine played an important role onstrengthening the activity of YTNC. It was concluded that the synergistic effects between active fractions in YTNC were the material foundation that YTNC had comprehensive efficacy of strengthening immunity, anti-inflammation and promoting osteocytes repair.%目的：评价腰痛宁胶囊组方、拆方及其有效部位对细胞增殖以及免疫、抗炎和骨细胞修复功能的影响。
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TS-1数显脱色摇床
TS-1数显脱色摇床
一、产品简介
该产品是参照国外产品加以改进的全新仪器，改变原脱色摇床三角型旋转造成的工作台面不平、电机噪音大的缺点，采用进口电机，以原三点改为五点，使在旋转时工作台面处以绝对平衡状态，其性能完全达到进口产品水平。
广泛用于电泳凝胶的固定，染色，显影等，放射自显影实验中X光底片的显影、定影、电泳转移后，纤维素膜的进一步处理，发分子杂
交，抗源－－抗体的反应和染色，并可用于细胞培养、且可放入低温及恒温箱中使用。
本机采用无级调速，用户可随意设定所需转速，仪器工作转速有表头显示。
机内驱动为全封闭进口电机。
无热量，无噪音，无需保养。
二、技术指标
★功率：30W
★频率：40~240转/分
★旋幅：水平360℃
★环境温度：-10℃~40℃
★整机重量：6Kg
★外型尺寸：350×250×180
★电源：220V、50Hz。