2.2.1动物细胞培养和核移植技术(理科)

1）容器A中放置的是动物器官或组 织。它一般取自 ______________________ 。 动物胚胎或幼龄动物 （2）容器A中的动物器官或组织首 先要进行的处理是 剪碎 ，然 后用 酶处理，这是 胰蛋白 为了使细胞分散开来，这样做的 目的是 防止细胞间接触抑制现象，
使细胞与培养液充分接触， 。 便于培养
细胞增殖
液体培养基 葡萄糖、动物血清 细胞株、细胞系 获得细胞 或细胞分泌产物
大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、 干扰素、单克隆抗体） 培养作为基因工程中的受体细胞 培养的动物细胞可以用于检测有毒物 质，判断某种物质的毒性 为治疗和预防癌症及其他疾病提供理 论依据
例：下图是动物细胞培养的基本过程 示意图。请据此回答：
3、体细胞核移植技术存在的问题
P50
1、成功率低 2、克隆动物存在健康问题 3、克隆动物食品的安全性问题
动物细胞培养的原理：细胞增殖
简述动物细胞培养 的操作过程
分离组织（低幼动物）
分散细胞（胰蛋白酶） 原代培养（细胞增殖）
分装
Biblioteka Baidu
传代培养（细胞增殖）
过程1
胚胎或幼龄动物器官组织 ①原代培养
定义：人们通常 将动物组织消化 后的初次培养称 为原代培养。
取出组织
图示
剪碎
胰蛋白酶处理
CO2培 养箱
单个细胞
细胞悬液
（3）培养首先在B瓶中进行，瓶中 的培养基特有成分有 动物血清 __________。 在此瓶中培养一段时间后，有许多 细胞衰老死亡，这是培养到 第 10 代，到这时的培养称为 __原代培养 。 （4）为了把B瓶中的细胞分装到C瓶 中，用 胰蛋白酶 处理，然后配置 成 细胞悬液 ，再分装。
二.动物细胞核移植技术和克隆动物 1.动物细胞核移植概念： 将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细 胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新 的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体（克 隆动物）。 细胞分化程度低， 胚胎细胞核移植： 分 恢复全能性容易； 类 细胞分化程度高， 体细胞核移植： （难度高） 恢复全能性不容易 2.体细胞核移植的过程：
代孕受体内 有人说它三个母 亲，对吗？
电刺激
妊娠、分娩
Ａ母绵羊 卵细胞
Ｂ母绵羊 乳腺细胞
多 莉 羊 的 培 育 过 程
细胞质
细胞核 重组细胞
细胞核移植
卵裂 早期胚胎 胚胎移植
C母绵羊子宫（代孕母体） 妊娠 分娩 多莉羊
1、卵母细胞为减数第二次分裂中期的次级 卵母细胞原因？
细胞比较大，易操作 细胞质中含有使体细胞核全能性表达出来的物质
6、能够用胃蛋白酶代替胰 蛋白酶吗？为什么？
不能，因为两者的最适PH不 同，而正常组织细胞的生存环 境与胰蛋白酶的最适PH较接近
比较项目 原理 培养基性质 培养基特有成分 培养结果 培养目的
植物组织培养 细胞的全能性
固体培养基 蔗糖、植物激素 植物体或组织 快速繁殖、培育 无病毒植株等
动物细胞培养
那么什么是接触抑制？
细胞贴壁过程
动物细胞生长特性
接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分 裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细 胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再 部分细胞突变，获 增加。
得不死性，向癌细 胞方向发展，糖蛋 白减少。
接触抑制 50代以后 失去接触抑制
过程2
②传代培养 定义：贴满瓶 壁的细胞需要 重新用胰蛋白 酶等处理，然 后分瓶培养， 让细胞继续增 殖。称为传代 培养。
动物细胞工程
动物细胞工程的技术手段
动 物 细 胞 工 程 常 用 技 术 手 段 动物细胞培养 动物细胞融合 生产单克隆抗体
动物细胞核移植
动物细胞工程技术的基础
动物细胞培养
一、动物细胞培养
1 、动物细胞培养的概念
从动物机体中取出相关组织，将它们分散成 单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细 胞生长和增殖。
3、克隆过程运用的技术手段？
动物体细胞核移植、动物细胞培养和胚胎移植
4、结论:体现细胞核的什么功能？
高度分化的体细胞核具有全能性
3.体细胞核移植技术的应用前景： 1.加速家畜遗传改良的 进程 2.保护濒危物种 3. 生产医用蛋白质及 组织器官的移植 4.了解胚胎发育和衰老 过程；追踪研究疾病的 发展过程和治疗疾病
浆等。）
补充合成培养基 3、温度和PH 36.5 +0.5度 ；PH为7.2-7.4。 中缺乏的物质 4、气体环境： O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）
？
1、较植物组培培养基有何独特之处？
独特 之处
:
1、液体培养基 2、成分中有动物血清等
2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织 做动物细胞培养材料？
讨论
多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境 中，根据你所学的内环境的知识，思考并讨论 以下问题： 1.体外培养细胞时需要提供哪些物质 充足的营养供给、适宜的温度、适宜的 pH和气体环境 2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？ 无菌、无毒的环境。
1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 2、营养 （葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、动物血清、血
这些组织或器官上的 细胞分裂能力强
3、为什么培养前要将组织细胞 分散成单个细胞？
防止细胞间接触抑制现象， 使细胞与培养液更充分接触
4、动物细胞培养能否像绿色植物组织 培养那样最终培养成新个体？
不能，动物细胞培养只能使细 胞数目增多，而不能发育成个体 5、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？
能，胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外， 长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，因此必须 控制好胰蛋白酶的处理时间。
去 核
注 核
重组细胞
供体：优质高产奶牛
◆取供体细胞
受体：普通奶牛（卵 母细胞的采集与培养）
◆用的是去
传代培养10代 以内的细胞. 为什么？
◆激活方法：
1.体积大，易操 作。2.含有促使 细胞核表达全能 性的物质和营养 条件。
核的减数 第二次分 裂中期细 胞（MⅡ中 期）为什 么？
◆激活目的：
◆胚胎移植至 ◆促融方法：
传代 培养
原代培养与传代培养的区别
原代培养：
分装之前，10代以前
传代培养： 分装后继续培养，10代以后
动物胚胎或幼龄动 物的组织、器官 胰蛋白酶 剪碎 单个细胞
加培养液
细胞悬浮液 原代培养
遗传物质 未改变
10代细胞 细胞株
50代细胞
遗传物质 已改变
传代培养
细胞系 无限传代
细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞 生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存 活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。 细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞 生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的 改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这 种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传 物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制， 容易传代培养。
原代 培养
细胞悬液 转入培养瓶内培养 （贴壁生长长成单层细胞。 有接触抑制现象）。
动物细胞生长特点： 细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上， 称为细胞贴壁。 要求： 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、 易于贴附。 细胞的接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时， 细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细 胞的接触抑制。