人淋巴细胞功能相关抗原2(LFA-2CD2)ELISA分析检测试剂盒使用说明

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(完整版)免疫试题及答案

(完整版)免疫试题及答案

(完整版)免疫试题及答案医学免疫学试题一医学免疫学试题一一、单选题(20分。

每题1分,共20题)1.免疫对机体是A.有害的 B.有利的 C.有利也有害D.有利无害 E.正常条件下有利,异常条件下有害2.免疫防御功能低下的机体易发生A.肿瘤 B.超敏反应 C.移植排斥反应D.反复感染 E.自身免疫病3.B细胞主要定居于淋巴结的哪个区域A.皮质区 B.副皮质区 C.深皮质区D.浅皮质区 E.髓窦4.胸腺细胞是指A.胸腺中未成熟的前T细胞 B.胸腺上皮细胞C.巨噬细胞 D.胸腺树突状细胞 E.成纤维细胞5.小肠上皮间淋巴细胞(IEL)的功能不包括A.能抑制肠粘膜的超敏反应B.具有对肠道病原体的防御功能C.能分泌多种CKsD.在急性排斥反应中IEL可被激活,导致肠上皮坏死E.具有过滤功能6.下列哪种物质不是TD-AgA.血清蛋白 B.细菌外毒素 C.类毒素D.细菌脂多糖 E.IgM7.用牛血清白蛋白-二硝基苯—卵清蛋白(BSA-DNP-OA)免疫过的动物, 注射下列哪种物质,产生抗DNP抗体的量最少?A.牛血清白蛋白—二硝基苯B.二硝基苯—卵清蛋白医学免疫学试题一C.牛血清白蛋白—二硝基苯—卵清蛋白D.鸡丙种球蛋白—二硝基苯E.鸡丙种球蛋白-苯胺8.动物来源的破伤风抗毒素对人而言是A.半抗原 B.抗体 C.抗原D.既是抗体又是抗原 E.超抗原9.决定Ig类别的抗原决定簇存在于Ig分子的:A.轻链恒定区 B.重链恒定区C.轻链可变区D.重链可变区 E.交链区10.分泌型IgA的抗原结合价为A.一价 B.二价 C.四价 D.八价 E.十价11.下述哪一种物质既有非特异性免疫作用又参与特异性免疫效应A.Ig B.MHC分子 C.补体 D.CD分子 E.SPA12.在Ig类别转化中,能促进IgM转化为IgE的细胞因子是:A。

IL-4 B。

TNF C.IL-2 D。

IL—1 E.IL-613。

下列免疫分子中有粘附作用的分子是:A.CD3B.Ig C。

biosharp 人IL-2 ELISA 试剂盒使用说明书

biosharp 人IL-2 ELISA 试剂盒使用说明书

一、产品简介 ������������������� ���������二、检测原理 ������������������� ���������三、试剂盒组分 ������������������� ���������四、储存条件 ������������������ ����������五、注意事项 ������������������ ����������六、其它实验材料 ������������������� ��������七、使用说明 �������������������� �������7.1、样品收集、处理及保存方法 �������������������� � 7.2、试剂准备 �������������������� ������� 7.3、操作步骤 �������������������� ������� 7.4、操作流程图 �������������������� ������� 7.5、操作要点提示 �������������������� ���7.6、结果判断 �������������������� �������八、常见问题分析及解决 ���������� ������������� 2 2 3 3 3 4 4 4 4 5 6 6 6 8目 录全国统一热线:400-600-4213 Elisa试剂盒使用说明书本试剂盒用于定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液等样本中天然和重组IL-2浓度。

使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分,如有任何疑问请与北京兰杰柯科技有限公司或经销商联系,公司将为您提供强有力的技术支持。

仅供研究,不用于临床诊断。

二、检测原理本实验采用双抗体夹心ELISA,用抗人IL-2单克隆抗体预包被酶标板,加入适度稀释的样本和标准品,其中IL-2会与其单抗结合,洗去游离成分;加入生物素化的抗人IL-2抗体,抗人IL-2抗体与结合在单抗上的人IL-2结合而形成免疫复合物,洗去游离的成分;加入辣根过氧化物酶标记的亲合素,生物素与亲合素特异性结合,洗去未结合的酶结合物;加入显色剂,若反应孔中有IL-2,辣根过氧化物酶会使无色的显色剂现蓝色;加终止液变黄。

人结蛋白ELISA试剂盒说明书

人结蛋白ELISA试剂盒说明书

人结蛋白ELISA试剂盒说明书人结蛋白ELISA试剂盒说明书供应商:上海乔羽生物有限公司ELISA试剂盒规格:(1) 规格:96T 可以测90个样,5个标准孔,1个空白孔(2) 规格:48T 可以测42个样,5个标准孔,1个空白孔人结蛋白ELISA试剂盒说明书Kit composition:Sealing film: 2 (48) / 2 (96)Specifications: 1 copiesSealing bag: 1Standard: 2700ng / L 0.5 * 0.5ml * 1 bottles, 1 bottles are stored in 2-8ELISA package is board: 1 X 48 x 961 2-8 stored inSample dilution: 3ml * 1 ml * 1 bottles of 6 bottles are stored in 2-8Color agent: Liquid 3ml * 1 ml * 6 bottles of 1 bottles in 2-8Color reagent B Liquid 3ml * 1 ml * 1 bottle 6 bottles stored in 2-8 Termination solution: 3ml * 6ml * 1 bottles and 1 bottles are stored in 2-8Concentrated laundry liquid: (2 * 20) * 1 bottles (20ml * 30) * 1 bottles stored in 2-8elisa试剂盒价格,elisa试剂盒说明书,elisa检测试剂盒人结蛋白ELISA试剂盒说明书试剂准备试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

1. 标准品复溶:试剂盒提供6管标准品,每管已标定浓度,并且冻干。

实验前在每个标准品管中加入0.5mL样本稀释液,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动助其溶解,使其恢复为每个标准品管身标注的浓度。

达科为IL-2 ELISA试剂盒说明书

达科为IL-2 ELISA试剂盒说明书

1、 产品简介:
达优®小鼠 IL-2 ELISA 试剂盒是通过酶联免疫吸附技术,定量 检测细胞培养上清液和小鼠血清、血浆和其他体液中天然和重组 IL-2 的浓度。本试剂盒为预包被板,“夹心一步”完成,整个过程 孵育时间不超过 2.5 小时,洗涤 8 次,操作时间大大减少。本试剂 盒专用于科研,而非用于诊断。
1513预包被elisa试剂盒系列产品小鼠elisa试剂盒dkw12200004848tdkw122000096mouseifnelisakit预包被减步法96tdkw12201104848tdkw122011096mouseil1elisakit预包被减步法96tdkw12201204848tdkw122012096mouseil1elisakit预包被减步法96tdkw12202004848tdkw122020096mouseil2elisakit预包被减步法96tdkw12204004848tdkw122040096mouseil4elisakit预包被减步法96tdkw12205004848tdkw122050096mouseil5elisakit预包被减步法96tdkw12206004848tdkw122060096mouseil6elisakit预包被减步法96tdkw12210004848tdkw122100096mouseil10elisakit预包被减步法96tdkw12212004848tdkw122120096mouseil12p70elisakit预包被减步法96tdkw12212304848tdkw122123096mouseil12il23p40elisakit预包被减步法96tdkw12217004848tdkw122170096mouseil17aelisakit预包被减步法96tdkw12222004848tdkw122220096mouseil22elisakit预包被96tdkw12271004848tdkw122710096mousetgf1elisakit预包被96tdkw12272004848tdkw122720096mousetnfelisakit预包被减步法96tdkw12273404848tdkw122734096mousevegfaelisakit预包被96tdkw12282004848tdkw122820096mouseigeelisakit预包被96tdkw12273904848tdkw122739096mousemcp1elisakit预包被96t16人elisa试剂盒dkw12100004848tdkw121000096humanifnelisakit预包被减步法96tdkw12101204848tdkw121012096humanil1elisakit

四正柏生物 人类TNF-α ELISA试剂盒说明书

四正柏生物 人类TNF-α ELISA试剂盒说明书

REV20190712仅供研究,不用于临床诊断。

客服热线: 400-7060-959﹡技术支持邮箱: **************公司官网: 目录简介 ......................................................................................................................................................................... - 3 -检测原理 ................................................................................................................................................................. - 3 -试剂盒组分 ............................................................................................................................................................. - 4 -储存条件 ................................................................................................................................................................. - 5 -其他实验材料 ......................................................................................................................................................... - 5 -注意事项 ................................................................................................................................................................. - 5 -样本收集处理及保存方法 ..................................................................................................................................... - 6 -试剂准备 ................................................................................................................................................................. - 6 -操作步骤 ................................................................................................................................................................. - 7 -操作流程图 ............................................................................................................................................................. - 8 -操作要点提示 ......................................................................................................................................................... - 8 -结果判断 ................................................................................................................................................................. - 9 -结果重复性 ........................................................................................................................................................... - 10 -灵敏度 ................................................................................................................................................................... - 10 -特异性 ................................................................................................................................................................... - 10 -参考文献 ............................................................................................................................................................... - 10 -该产品由北京四正柏生物科技有限公司研制。

人淋巴细胞功能相关抗原3elisa检测试剂盒

人淋巴细胞功能相关抗原3elisa检测试剂盒

人淋巴细胞功能相关抗原3elisa检测试剂盒人淋巴细胞功能相关抗原3elisa检测试剂盒产品规格:96T/48T。

保存条件:2-8℃低温保存保质期:6个月,所有试剂盒均提供最新批次。

试剂盒成分:酶标板,试剂,标准品等。

供应商:上海乔羽生物有限公司上海乔羽有限公司,有elisa试剂盒,抗体,培养基人淋巴细胞功能相关抗原3elisa检测试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

1.标准品复溶:试剂盒提供6管标准品,每管已标定浓度,并且冻干。

实验前在每个标准品管中加入0.5mL 样本稀释液,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动助其溶解,使其恢复为每个标准品管身标注的浓度。

2.20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

人淋巴细胞功能相关抗原3elisa检测试剂盒ELISA技术原理:以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来.1. 抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。

2. 结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性。

3. 酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。

4. 受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。

再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。

5. 此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。

6. 加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。

测定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml 水平),并且重复性好。

人淋巴细胞功能相关抗原3elisa检测试剂盒,猪促生长激素释放激素(GHRH)ELISA试剂盒,促生长激素释放激素elisakit,猪elisa试剂盒,GHRHelisakit上海乔羽生物供应!人淋巴细胞功能相关抗原3elisa检测试剂盒Operation steps1 before use, all reagents fully mixed. Do not allow liquid to produce a large number of bubbles, so as to avoid adding a large number of bubbles, resulting in the addition of the error.2 according to the number of samples to be measured and the number of standard products to determine the number of required. Each standard and blank hole is recommended to do the hole. Each sample can be made according to its own quantity, and can be used as a hole in the hole.3 to join the dilution of the standard 50ul in the reaction hole, to add the sample to be measured in the reaction hole 50ul. The biotin labeled antibody was immediately added to the 50ul. Cover the membrane plate, gently oscillating mixing, 37 degrees Celsius incubation 1 hours.4 left hole liquid, each hole filled with washing liquid, oscillating 30 seconds off the washing liquid, pat dry with absorbent paper. Repeat this operation 3 times. If the washing machine with washing, washing times increased once.5 each hole to join 80ul affinity chain enzyme -HRP, gently oscillating mixing, 37 degrees Celsius incubation 30 minutes.6 left hole liquid, each hole filled with washing liquid, oscillating 30 seconds off the washing liquid, pat dry with absorbent paper. Repeat this operation 3 times. If the washing machine with washing, washing times increased once.7 each hole to join the substrate A, B each 50ul, gently oscillating mixing, 37 degrees Celsius incubation 10 minutes. Avoid light.8 remove the enzyme labeled plate, quickly join the 50ul terminator, add the end of the liquid should be measured immediately after the results.9 OD value at the wavelength of 450nm was measured by hole.limitThe result of the above 6 standard is nonlinear, and the result can not be obtained accurately according to the standard curve.人淋巴细胞功能相关抗原3elisa检测试剂盒Kit composition130 times concentrated washing liquid 20ml * 1 bottles; 2 enzyme labeled reagent 6ml * 1 bottle3 enzyme labeled plate 8 hole * * 12;4 sample dilution 6ml * 1 bottle5 color reagent A liquid 6ml * 1 bottle;6 color agent B liquid 6ml * 1/ bottle7 termination solution 6ml * 1 bottle;8 standard product (48ng/ml) 0.5ml * 1 bottle9 standard 1.5ml * 1 bottle;10 Manual 1 copies11 plate film 2; 12 sealing bag 1友情提醒:公司经营的产品均为科研实验用,不可用于临床应用。

《医学免疫学》学习提纲

《医学免疫学》学习提纲

《医学免疫学》学习提纲《医学免疫学》学习提纲医学免疫学学习提纲1、现代免疫:机体识别和排除抗原性异物的一种功能。

其目的是维持机体的生理平衡(免疫的本质:识别自我,排斥异己)2、免疫系统的三大功能:(见表)免疫功能正常表现异常表现免疫防御抵抗病原体的入侵及毒素作用超敏反应、免疫缺陷病免疫稳定清楚损伤、衰老、变性或死亡的细胞免疫失调、自身免疫病免疫监视防止细胞癌变持续性感染恶性肿瘤或持续性感染3、免疫系统的组成:器官、细胞、分子三个层次4、中枢免疫器官:主要指哺乳类动物的骨髓和胸腺;骨髓是 B 细胞分化、发育和成熟的主要器官;胸腺是T 细胞分化、发育和成熟的主要器官。

外周免疫器官:主要包括淋巴结、脾脏(系体内最大的免疫器官,其中B淋巴细胞占55%,T 淋巴细胞占45%)、粘膜相关淋巴组织、扁桃体。

5、T 细胞分化发育成熟以及B 细胞分化发育成熟T 细胞分化发育成熟:阳性选择(胸腺):单阳性,MHC 限制性:表达TCR-CD3阴性选择(胸腺):对自身抗原的免疫耐受B 细胞分化发育成熟:阳性选择(外周):同时表达mlgM 和mlgD,对外来抗原高亲和性克隆,表达BCR-CD79a/b(BCR-Igα/Igβ)复合体。

阴性选择:(骨髓)对自身抗原的免疫耐受MHCⅠ类分子特异性识别CD8+T 细胞,MHCⅡ类分子特异性识别CD4+T 细胞。

6、树突状细胞(DC)是目前所知功能最强的抗原提呈细胞(APC)。

7、抗原:通过与T、B 细胞抗原受体特异性结合并因此激活T、B 细胞的免疫活性物质。

通常以单克隆方式激活T、B 细胞。

分为完全抗原(细菌),半抗原(免疫适应性)如小分子药物,载体(使半抗原成为完全抗原的物质)如大分子蛋白质半抗原+蛋白质载体→完全抗原(同时具有免疫原性与免疫应答性)8、抗原的两个基本功能:免疫原性:指抗原分子能够刺激机体产生免疫应答(产生特异性抗体及免疫效应细胞)的性质,是启动免疫应答的原动力。

微生物与免疫

微生物与免疫
抗原:一类能被T、B细胞识别并能启动特异性免疫应答可与相应的特异性免疫应答产物(抗体或致敏细胞)在体内、外发生特异性结合的物质。
抗原特异性:抗原诱导机体产生特异性免疫应答并与免疫应答产物发生专一结合的特性。
抗原表位:抗原分子中决定抗原特异性的基本结构或化学基团,它是TCR、BCR及抗体特异性结合的基本单位,亦称为抗原决定基。根据结构特点,可分为线性表位和构象性表位。
45、在gp120的肽链上,有些区段(V1—V5)的氨基酸序列呈高度易变性,是病毒逃避机体免疫监视的重要原因之一。HIV病毒的传播途径是性传播、血液传播、母婴传播。
46、微生物学检查法检测衣壳核蛋白p24抗体和糖蛋白gp120的抗体,可确诊HIV感染。
47狂犬病病毒外形呈子弹状,对神经组织又较强亲嗜姓,特有疾病为恐水病。
个体发育最早合成的抗体(胚胎晚期)
为五聚体,用于感染的早期诊断
IgA:分为血清型和分泌型(sIgA)sIgA为二聚体,J链连接
存在于乳汁、唾液、泪液、呼吸道、消化道和生殖道粘膜,参与局部的粘膜免疫
IgD:BCR重要组成部分,为B细胞分化发育成熟的标志
IgE:血清中含量最少,亲细胞性很强
单克隆抗体:由脾细胞恶性浆细胞瘤形成杂交瘤融合分化的单一B细胞克隆杂交瘤产生的,只识别抗原分子某一特定抗原表位的具有高度均一性特点的特异性抗体。其遗传背景一致,特异性大大增强。
细胞因子:有多种细胞分泌的有多种功能高活性的在免疫细胞分化发育、免疫应答、免疫调节、炎症反应、造血功能中发挥重要作用的小分子蛋白质。
13、细胞因子根据结构和功能可分为白细胞介素(IL)、干扰素(IFN)、肿瘤坏死因子(TNF)、集落刺激因子(CSF)、生长因子(GF)、趋化因子。

人淋巴细胞功能相关抗原2(LFA-

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酚试剂38894-11-0 MBTHHydrochloride 产品编号:YSJ-01718 含量: AR,98% 产品规格: 5克
交链聚乙烯吡咯烷酮25249-54-1 PVPP 产品编号:YSJ-01719 含量: USP级 产品规格: 100克
聚乙烯吡咯烷酮9003-39-8 PVP 产品编号:YSJ-01720 含量: BR,K-30,分子量3.8万 产品规格: 100克
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人淋巴细胞功能相关抗原2(LFA-2/CD2)ELISA试剂盒相关产品信息:
乙酰丁香酮2478-38-8 Acetosyringone 产品编号:YSJ-01714 含量: BR,97% 产品规格: 1克
【试剂盒成分】:酶标板,试剂,标准品等。
ELISA试剂盒检测范围:人、绵羊、小鼠、大鼠、猪、兔、山羊、牛、马、猪、其它动物细胞因子、植物细胞因子、骨代谢、细胞凋亡、激素内分泌、活性多肽、肝纤维化、自身抗体、血栓与止血、肿瘤、自身抗体科研Elisa检测试剂盒。

人类Alpha 2-M ELISA试验试剂盒说明说明书

人类Alpha 2-M ELISA试验试剂盒说明说明书

Human Alpha 2-M ELISA KitCatalog Number EH20RB (96 tests), EH20RBX10 (10 x 96 tests)Rev. 7Product descriptionThe Human Alpha 2-M ELISA Kit is a solid-phase sandwich Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) designed to detect and quantify the level of human Alpha 2-M in cell culture supernatants, plasma, and serum.Contents and storageUpon receipt, store at 2-8°C for 6 months or -20°C for 1 year.Components Cat. No. EH20RB(96 tests)Cat. No. EH20RBX10(10 x 96 tests)Human Alpha 2-M Antibody Coated wells, 96-well plate 1 plate10 plates Human Alpha 2-M Biotin Conjugate 2 vials20 vials Human Alpha 2-M Standard, recombinant human Alpha 2-M 2 vials20 vialsWash Buffer Concentrate (20X)25 mL12 x 25 mL Assay Diluent (5X)15 mL10 x 15 mL Streptavidin-HRP (700X)0.2 mL10 x 0.2 mLTMB Substrate12 mL10 x 12 mLStop Solution8 mL10 x 8 mL Adhesive Plate Covers220Materials required but not suppliedDistilled or deionized waterMicrotiter plater reader with software capable of measuring at 450 nmPlate washer-automated or manual (manifold dispenser)Calibrated adjustable precision pipettes and glass or plastic tubes for diluting solutionsProcedural guidelinesReview the Procedural guidelines and Plate washing directions in the ELISA Technical Guide at for details prior to starting the procedure.Reagents are lot-specific. Do not mix or interchange different reagent lots from various kit lots.Prepare 1X Wash Buffer1.Allow Wash Buffer Concentrate (20X) to reach room temperature and mix to redissolve any precipitated salts.2.Dilute 20 mL of the Wash Buffer Concentrate into 380 mL of deionized or distilled water. Label as 1X Wash Buffer.3.Store the concentrate and 1X Wash Buffer in the refrigerator. Use the diluted buffer within one month.Prepare diluentAssay Diluent should be diluted 5-fold with deionized or distilled water before use.Prepare biotin conjugate1.Briefly spin down the biotin conjugate before use.2.Add 100 µL of 1X Assay Diluent into the vial to prepare a biotin conjugate concentrate.3.Pipette up and down to mix gently (the concentrate can be stored at 4°C for 5 days).4.The biotin conjugate concentrate should be diluted 80-fold with 1X Assay Diluent and used in step 2 of ELISA procedure.Sample preparation guidelinesCollect samples in pyrogen/endotoxin-free tubes.Freeze samples after collection if samples will not be tested immediately. Avoid multiple freeze-thaw cycles of frozen samples.Thaw completely and mix well (do not vortex) prior to analysis.Avoid the use of hemolyzed or lipemic sera. If large amounts of particulate matter are present in the sample, centrifuge or filter sample prior to analysis.Pre-dilute samples1X Assay Diluent should be used for dilution of serum, plasma, and cell culture supernatant samples.Dilute serum and plasma 2,000-fold.Because conditions may vary, it is recommended that each investigator determine the optimal dilution to be used for each application.Dilute standardsNote: Use glass or plastic tubes for diluting standards.1.Briefly spin down a vial of lyophilized standard.2.Add 400 µL of 1X Assay Diluent (Assay Diluent should be diluted 5-fold with deionized or distilled water before use) into vial toprepare a 3,000 ng/mL standard. Dissolve the powder thoroughly by a gentle mix. Pipette 300 µL of 1X Assay Diluent into each tube. Use the stock standard solution to produce a dilution series (shown below). Mix each tube thoroughly before the next transfer.1X Assay Diluent serves as the zero standard (0 ng/mL).200200 200 200 200 200Diluentvolume300 µL300 µL300 µL300 µL300 µL300 µL300 µLStd1 3000 ng/mLStd21200 ng/mLStd3480 ng/mLStd4192 ng/mLStd576.8 ng/mLStd630.72 ng/mLStd712.29 ng/mLBlank0 ng/mLPrepare 1X Streptavidin-HRP solutionNote: Prepapre the Streptavidin-HRP within 15 minutes of usage.1.Briefly spin the Streptavidin-HRP and pipette up and down to mix gently before use, as precipitates may form during storage.2.Dilute Streptavidin-HRP 700-fold with 1X Assay Diluent.3.Do not store diluted solution for future use.Perform ELISA (Total assay time: 4 hours and 45 minutes)Allow all reagents to reach room temperature before use. Mix all liquid reagents prior to use.IMPORTANT! Perform a standard curve with each assay.Determine the number of 8-well strips required for the assay. Insert the strips in the frames for use. Re-bag any unused strips and frames, and store at 2 to 8°C for future use.1Bind antigen a.For the standard curve, add 100 µL of standards to the appropriate wells (see Dilute standards). Forsamples, add 100 µL of diluted samples (see Dilute samples) to the wells.b.Cover wells and incubate for 2.5 hours at room temperature or over night at 4°C with gentle shaking.c.Discard the solution and wash 4 times with 1X Wash Buffer. Wash by filling each well with WashBuffer (300 µL) using a multi-channel Pipette or autowasher. Complete removal of liquid at each stepis essential for good performance. After the last wash, remove any remaining Wash Buffer byaspirating or decanting. Invert the plate and blot it against clean paper towels.2Add biotin conjugate a.Add 100 µL of prepared biotin conjugate (see Prepare biotin conjugate) to each well.b.Incubate for 1 hour at room temperature with gentle shaking.c.Discard the solution. Repeat the wash as in step 3.3Add Streptavidin-HRP a.Add 100 µL of prepared Streptavidin-HRP solution (see Prepare Streptavidin-HRP solution) to eachwell.b.Incubate for 45 minutes at room temperature with gentle shaking.c.Discard the solution. Repeat the wash as in step 3.4Add TMB substrate a.Add 100 µL of TMB Substrate to each well. The substrate will begin to turn blue.b.Incubate for 30 minutes at room temperature in the dark with gentle shaking.5Add stop solution Add 50 µL of Stop Solution to each well. Tap the side of the plate gently to mix. The solution in thewell changes from blue to yellow.Read the plate and generate the standard curve1.Read the absorbance at 450 nm. Read the plate within 30minutes after adding the Stop Solution.e curve-fitting software to generate the standard curve. Afour parameter algorithm provides the best standard curve fit.Optimally, the background absorbance may be subtracted from all data points, including standards, unknowns and controls,prior to plotting.3.Read the concentrations for unknown samples and controlfrom the standard curve. Multiple value(s) obtained forsample(s) by the appropriate factor to correct for the sampledilution.Note: Dilute samples producing signals greater than that of thehigest standard in Standard Diluent Buffer and reanalyze.Multiply the concentration by the appropriate dilution factor.Performance characteristicsStandard curve (example)These standard curves are for demonstration only. A standardcurve must be run with each assay.Intra-assay precisionTo determine intra-assay precision, two standard curves and 3 samples for each standard curve are run. The standard curve concentration points as well as the samples are tested in duplicates on a single plate. Two different concentration values are obtained for each sample, using the two separate standard curves. The two concentration values for each sample is compared to each otherusing the CV% calculation. Intra-Assay CV%: <10%Inter-assay precision To evaluate inter-assay precision, the second standard curve is tested on a separate plate along with the second set of samples. Inter-Assay CV%: <12%RecoverySample TypeAverage % Recovery Range (%)Cell Culture Supernatants 12198-144Plasma 12199-148Serum10888-127SpecificityThis ELISA antibody pair detects human Alpha 2-M. Other species not determined.Linearity of dilutionThe cell culture supernatants, plasma, and serum samples were spiked with recombinant human Alpha 2-M, serially diluted in sample diluent and evaluated. Observed values were compared to expected values to calculate percent recovery and demonstrate the dilution linearity of the assay.Sample TypeAverage % Expected Range (%)1:2 Dilution1:4 Dilution1:2 Dilution1:4 DilutionCell CultureSupernatants121135114-128125-145 Plasma119126115-123115-133Serum126141118-134132-150SensitivityThe minimum detecable dose of human Alpha 2-M is 4 ng/mL.This was determined by assaying replicates of zero and thestandard curve. The mean signal of zero + 2 standard deviationsread in dose from the standard curve is the LLD. This value is thesmallest dose that is not zero with 95% confidence.Limited product warrantyLife Technologies Corporation and/or its affiliate(s) warrant theirproducts as set forth in the Life Technologies' General Terms andConditions of Sale found on Life Technologies' website at/us/en/home/global/terms-andconditions.html.If you have any questions, please contactLife Technologies at /support.Product label explanation of symbols and warningsCatalogNumberBatchCodeTemperaturelimitationUsebyManufacturerConsultinstructions for useCaution, consultaccompanying documentsDISCLAIMERTO THE EXTENT ALLOWED BY LAW, LIFE TECHNOLOGIES AND/OR ITS AFFILIATE(S) WILL NOT BE LIABLE FOR SPECIAL, INCIDENTAL, INDIRECT, PUNITIVE, MULTIPLE, OR CONSEQUENTIAL DAMAGES IN CONNECTION WITH OR ARISING FROM THIS DOCUMENT, INCLUDING YOUR USE OF IT. Important Licensing Information: These products may be covered by one or more Limited Use Label Licenses. By use of these products, you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses.Corporate entity: Life Technologies Corporation | Carlsbad, CA 92008 USA | Toll Free in USA 1 800 955 6288©2021 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. All trademarks are the property of Thermo Fisher Scientific and its subsidiaries unless otherwise specified.For support visit /support or contact ************************.22-Nov-21。

免疫学第07章

免疫学第07章

一、名词解释1.白细胞分化抗原2.分化群(CD)3.黏附分子4.整合素家族5.淋巴细胞归巢受体(LHR)6.钙黏蛋白家族7.免疫球蛋白超家族(IgSF)8.IgE结合因子(IgE-BF)1.白细胞分化抗原(LDA):是指白细胞在分化成熟为不同谱系,以及处于不同分化阶段和分化过程中出现或消失的细胞表面标记。

事实上,白细胞分化抗原除表达于白细胞外,还表达在红系、巨核细胞/血小板谱系,以及血管内皮细胞、上皮细胞、成纤维细胞和神经内分泌等细胞表面。

2.分化群(CD):应用聚类分析法,将来自不同实验室的单克隆抗体所识别的同一分化抗原归为一个分化群,简称CD。

人类CD编号已从CDl命名至CDl66,这些CD分子参与免疫细胞的识别、活化和信号传导等多种功能。

3.黏附分子:是众多介导细胞间或细胞与细胞外基质间相互接触和结合的分子的统称。

黏附分子以配体—受体相对应的形式发挥作用,参与细胞的识别、活化。

信号传导,以及细胞的增殖分化和细胞的伸展与移动。

黏附分子是免疫应答、炎症发生、凝血、肿瘤转移以及创伤愈合等一系列重要生理和病理过程的分子基础。

4.整合素家族:是一组细胞表面的黏附分子,最初因其主要介导细胞与细胞外基质的黏附,使细胞得以附着形成整体而得名。

事实上整合素家族成员还介导白细胞与血管内皮细胞等细胞间的黏附。

5.淋巴细胞归巢受体(LHR):是存在于淋巴细胞表面的黏附分子,因其具有介导淋巴干细胞归向中枢免疫器官、介导成熟淋巴细胞归向外周免疫器官,以及介导淋巴细胞再循环和淋巴细胞向炎症部位的迁移而得名。

该种受体主要包括表达于淋巴细胞表面的L-选择素、LFA-1、α4β7、CD44和CLA等,其配体是表达于相应血管内皮细胞表面的地址素,主要包括PNAd、MadCAM-1、ICAM-1、2和VCAM-1等。

6.钙黏蛋白家族:是—类钙离子依赖的黏附分子家族,其配体是与自身相同的钙黏附素,上要介导问型细胞间的黏附作用,在调节胚胎形态发育和维持组织结构的完整性中也有重要作用,此外还参与肿瘤细胞的浸润与转移。

人淋巴细胞功能相关抗原(LFA-3)ELISA 试剂盒说明书

人淋巴细胞功能相关抗原(LFA-3)ELISA 试剂盒说明书

人淋巴细胞功能相关抗原(LFA-3)ELISA试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用预期应用ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养物上清或其它相关液体中LFA-3含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中LFA-3水平。

用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入LFA-3抗原、生物素化的抗人LFA-3抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。

TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的LFA-3呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制1.酶联板:一块(96孔)2.标准品(冻干品):2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为10000pg/mL,做系列倍比稀释后,分别稀释成10000 pg/mL,5000pg/mL,2500pg/mL,1250pg/mL,625pg/mL,312.5pg/mL,156pg/mL,其原液直接作为最高标准浓度,样品稀释液直接作为标准浓度0pg/mL,临用前15分钟内配制。

如配制5000pg/mL标准品:取0.5ml10000pg/mL的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。

3.样品稀释液:1×20ml/瓶。

4.检测稀释液A:1×10ml/瓶。

5.检测稀释液B:1×10ml/瓶。

6.检测溶液A:1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液A1:100稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100ul),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。

如1ul 检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。

7.检测溶液B:1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B1:100稀释。

人淋巴细胞因子ELISA试剂盒说明书

人淋巴细胞因子ELISA试剂盒说明书

人淋巴细胞因子ELISA试剂盒说明书
人淋巴细胞因子ELISA定量检测试剂盒等ELISA试剂盒检测类型:双抗体夹心法测抗原、双抗原夹心法测抗体、间接法测抗体、竞争法测抗体、竞争法测抗原、捕获包被法测抗体、ABS-ELISA法。

我司人淋巴细胞因子ELISA定量检测试剂盒等ELISA试剂盒,灵敏性高,高效性,原装进口抗体,吸附均匀、吸附性好,回收利用率高、可靠性强,无效包退包换,公司提供免费代测服务,各种种属ELISA 试剂盒产品齐全,质量可靠。

详情可来电咨询销售人员或咨询我司在线客服。

人淋巴细胞因子ELISA定量检测试剂盒操作步骤:
1、加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。

在酶标包被板上标准品准确加样50µl,待测样品孔中先加样品稀释液40µl,然后再加待测样品10µl (样品最终稀释度为5倍)。

加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

2、温育:用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。

3、配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
4、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此
重复5次,拍干。

5、加酶:每孔加入酶标试剂50µl,空白孔除外。

6、显色:每孔先加入显色剂A50µl,再加入显色剂B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
10 分钟.
7、终止:每孔加终止液50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

8、测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。

测定应在加终止液后15分钟以内进行。

医学免疫学问答题部分2

医学免疫学问答题部分2

1.简述补体的生物学活性。

答:(1)溶菌、溶病毒和溶细胞:补体激活的MAC,形成穿膜的亲水性通道,破坏局部磷脂双层,最终导致细胞崩解(2)调理和免疫粘附;补体裂解产物C3b/C4b/iC3b的一端与细菌或其它颗粒表面结合,另一端端与表面具有相应补体受体(CRl、3、4)的吞噬细胞结合,促进吞噬细胞的吞噬作用,即调理作用,抵御全身性细菌和真菌感染的机制;若与表面具有CRI的红细胞、血小板结合,形成较大聚合物,IC转运至肝脾,被吞噬细胞吞噬,此即免疫粘附作用帮助机体清楚循环免疫复合物。

(3)炎症介质作用①过敏毒素作用 :C3a、C5a 使肥大细胞和嗜碱性粒细胞脱颗粒,释放组胺等生物活性介质,引起毛细血管扩张、血管通透性增加、平滑肌痉挛等。

②趋化作用:C5a又称为趋化因子。

它们能吸引中性粒细胞和单核/巨噬细胞等向炎症部位聚集,发挥吞噬作用,增强炎症反应。

2.简述免疫球蛋白的生物学功能(1)特异性结合抗原,发挥中和毒素和病毒的作用,介导体液免疫效应。

(2)激活补体:IgM、IgG1、IgG2、IgG3 可激活补体经典途径;IgA、IgE和lgG4可激活补体旁路途径(3)与细胞表面Fc受体结合,介导吞噬调理作用、ADCC作用和Ⅰ型超敏反应(4)lgG可通过胎盘,在新生儿抗感染免疫中起重要作用;slgA可穿过呼吸道、消化道黏膜介导局部黏膜免疫(5)对免疫应答有正负调节作用3.试述决定抗原免疫原性的因素(一) 异物性:异物性是抗原的核心,亲缘关系或种属关系越远,免疫原性越强.(二)抗原的理化性质分子大小:抗原的分子量一般为≥10kDa ,且分子量越大,免疫原性越强。

复杂的化学组成与特殊的化学基团分子易接近性物理性质:颗粒状抗原>可溶性抗原;多聚体抗原>单体抗原;㈢进入途径:由强及弱的规律为:皮内>皮下>肌肉>腹腔(仅限于动物)>静脉㈣机体因素:遗传因素、年龄、性别、健康状态等㈤免疫佐剂的使用4.试述内源性和外源性抗原递呈过程(1)外源性抗原:来源于APC外的抗原;常由MHC-II类分子递呈给CD4+T细胞(溶酶体途径)外源性抗原↓吞噬小体新合成的MHC-II类分子(内质网中)与li链结合为复合物,l链占据抗原结合槽,↓溶酶体再经高尔基体进入MHC II类分子腔室(M II C)吞噬溶酶体,与M II C融合↙↓外源性抗原降解成13 18AA小肽 + 当MHCII小泡与内体融合, 酸性环境下,蛋白酶将li降解, 仅留CLIP↓HLA-DM可促进CLIP从抗原槽内解离, 并促进抗原肽结合进去↓抗原肽/MHC II类分子复合物,转运至APC表面,供CD4+T细胞识别(2)内源性抗原:APC内合成的抗原;常由MHC-I类分子递呈给CD8+T细胞(胞质溶胶途径)内源性抗原(如病毒抗原、肿瘤抗原)胞质↓被蛋白酶体酶解抗原肽(含8-13个AA)↓经TAP转运至内质网形成抗原肽/MHC-I类分子复合物↓转运至APC表面递呈给CD8+T细胞识别5. 试举一例说明I型超敏反应的发生机制。

CD25)ELISA试剂盒简介说明

CD25)ELISA试剂盒简介说明

人白介素2可溶性受体α链(IL—2sRα/CD25)ELISA试剂盒简介说明中文简称:人白介素2可溶性受体α链(IL2sRα/CD25)ELISA试剂盒英文简称:IL2sRα/CD25)ELISAKIT特异性:HuIL2sRa;检测范围:62.5pg/ml~4000pg/ml;灵敏度:30pg/ml;标本用量:100ul/well;本试剂盒采纳双抗体夹心ELISA法的原理制备,适用于体外定量检测人血清、血浆、组织、体液或细胞培育上清液中的天然和重组的IL2sRa浓度。

白介素2(IL2)是通过结合多分子细胞受体复合物发挥生物活力的。

多年来,这个受体复合物被认为是由IL2Rα与IL2β两个糖蛋白链构成的,两个亚基相互结合在一起形成一个高亲和力受体来传递IL2信号的。

IL2Rα(也称为Tac抗原或CD25),是一个分子量为55kD跨膜糖蛋白,有351个氨基酸构成。

IL2β在1989年被克隆出来,它是个由575个氨基酸构成的跨膜糖蛋白,分子量为75kD,其中有286个氨基酸位于胞浆内,更显著地参加了细胞信号传导作用。

常认为它是IL2一种弱抑制剂。

在任何情况下,体液中增高的可溶性IL2Rα常跟随这T细胞与B细胞的加添与免疫系统的激活。

ELISA试验原理人白介素2可溶性受体α链(IL2sRα/CD25)ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白介素2可溶性受体α链(以下简称“A物质”)水平。

用纯化的A物质抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入A物质再与HRP标记的A物质抗体结合,形成抗体抗原酶标抗体复合物,经过彻di洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最后的黄色。

颜色的深浅和样品中的A物质呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中A 物质含量。

ELISA试剂盒构成人白介素2可溶性受体α链(IL2sRα/CD25)ELISA试剂盒包含:(1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);(2)酶标记的抗原或抗体(结合物);(3)酶的底物;(4)阴性对比品和阳性对比品(定性测定中),参考标准品和掌控血清(定量测定中);(5)结合物及标本的稀释液;(6)洗涤液,在板式ELISA中,常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水;(7)酶反应停止液,常用的HRP反应停止液为硫酸,其浓度按加量及比色液的最后体积而异,在板式ELISA中一般采纳2mol/L。

人白细胞介素2受体α(IL-2Rα(CD25))-ELISA试剂盒说明书

人白细胞介素2受体α(IL-2Rα(CD25))-ELISA试剂盒说明书

人白细胞介素2受体α (IL-2Rα/CD25)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书产品编号:E-EL-H1030(本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!)声明:尊敬的客户,感谢您选用本公司的产品。

本产品选用世界著名生产厂家的原料,采用专业ELISA kit生产技术制造。

适用于体外定量检测人血清、血浆、组织匀浆或细胞培养上清液中天然和重组IL-2Rα/CD25浓度。

使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分!如有疑问,请及时联系伊莱瑞特生物科技有限公司。

*: [96T/48T](打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整)检测原理:本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。

用抗人IL-2Rα/CD25抗体包被于酶标板上,实验时标本或标准品中的IL-2Rα/CD25会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。

依次加入生物素化的抗人IL-2Rα/CD25抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。

抗人IL-2Rα/CD25抗体与结合在包被抗体上的人IL-2Rα/CD25结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。

加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色,加终止液后变黄。

用酶标仪在450nm 波长处测OD值,IL-2Rα/CD25浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线求出标本中IL-2Rα/CD25的浓度。

标本收集:1.血清:全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟,取上清即可检测,收集血液的试管应为一次性的无热原,无内毒素试管。

2.血浆:抗凝剂推荐使用EDTA.Na2,标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟,取上清即可检测。

避免使用溶血,高血脂标本。

3.组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,以去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。

将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样本对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。

人皮肤淋巴细胞相关抗原(CLA)ELISA试剂盒对体内各种重

人皮肤淋巴细胞相关抗原(CLA)ELISA试剂盒对体内各种重

人皮肤淋巴细胞相关抗原(CLA)ELISA试剂盒对体内各种重要生理功能的实现以及疾病的发生进程不可或缺,如造血作用、淋巴组织发育、炎症反应、白细胞迁移、过敏、伤口修复、新血管生成、癌症发生和肿瘤迁移等。

顾名思义,人皮肤淋巴细胞相关抗原(CLA)ELISA试剂盒的功能主要是趋化各种细胞。

典型的例子,如人皮肤淋巴细胞相关抗原(CLA)ELISA试剂盒通过趋化作用向炎症部位招募各种白细胞。

其中包括两个步骤:首先是白细胞在血管内皮细胞表面的初始性滚动转换成稳定性结合,并穿越血管内皮细胞层;然后,引导这些细胞向感染部位迁移,迁移的方向一般是顺人皮肤淋巴细胞相关抗原(CLA)ELISA试剂盒浓度梯度。

而这一浓度梯度,又是由胞外基质表面和内皮细胞表面能结合人皮肤淋巴细胞相关抗原(CLA)ELISA试剂盒的黏蛋白含量所决定的。

这就是说,白细胞一旦穿越内皮细胞和基底膜进入组织,它们就沿着基质所结合的递增性人皮肤淋巴细胞相关抗原(CLA)ELISA试剂盒浓度向炎症部位游走。

在正常免疫应答过程中,人皮肤淋巴细胞相关抗原(CLA)ELISA试剂盒可以驱使白细胞定向迁移到受伤或感染部位以保护机体防御外来致病物,但是在特定的环境中,免疫细胞也会因过度活化而攻击正常组织,导致自身免疫性疾病。

人皮肤淋巴细胞相关抗原(CLA)ELISA试剂盒因此也和许多自身免疫性和过敏性等疾病相关联,包括多发性硬化症、类风湿关节炎、动脉硬化、哮喘和移植排斥等。

我公司各种种属elisa试剂盒有:人elisa试剂盒、大鼠elisa试剂盒、小鼠elisa试剂盒、豚鼠elisa试剂盒、兔子elisa试剂盒、猪elisa试剂盒、犬elisa 试剂盒、猴elisa试剂盒、马elisa试剂盒、牛elisa试剂盒、羊elisa试剂盒。

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人淋巴细胞功能相关抗原2(LFA-2/CD2)ELISA分析检测试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用
目的:本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中转化生长因子(LFA-2/CD2)的含量。

实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人淋巴细胞功能相关抗原2(LFA-2/CD2)水平。

用纯化的转化生长因子(LFA-2/CD2)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入转化生长因子(LFA-2/CD2),再与HRP标记的羊抗鼠抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的转化生长因子(LFA-2/CD2)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人淋巴细胞功能相关抗原2(LFA-2/CD2)浓度。

试剂盒内容及其配制:
试剂盒成份96孔配置48孔配置
96/48人份酶标板1块板
(96T)
半块板
(48T)
塑料膜板盖1块半块
标准品:100ng/ml 1瓶
(1.0ml)
1瓶
(0.5ml)
空白对照1瓶
(1.0ml)
1瓶
(0.5ml)
标准品稀释缓冲液1瓶
(8.0ml)
1瓶
(4.0ml)
生物素标记的抗OT抗体1瓶
(8.0ml)
1瓶
(4.0ml)
亲和链酶素-HRP 1瓶
(12ml)
1瓶(5ml)
洗涤缓冲液1瓶
(20ml)
1瓶(10ml)
底物A 1瓶
(6.0ml)
1瓶
(3.0ml)
底物B 1瓶
(6.0ml)
1瓶
(3.0ml)
终止液1瓶
(6.0ml)
1瓶
(3.0ml)
试剂盒组成:
试剂盒组成48孔配置96孔配置保存
说明书1份1份
封板膜2片(48)2片(96)
密封袋1个1个
酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存标准品:45μ
mol/L
0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存
浓缩洗涤液(20ml×20倍)×1

(20ml×30倍)
×1瓶
2-8℃保存
自备材料:
1. 蒸馏水。

2. 加样器:5ul、10ul 、50ul 、100ul 、200ul 、500ul、1000ul。

3. 振荡器及磁力搅拌器等。

样品收集、处理及保存方法:
1、血清……操作过程中避免任何细胞刺激。

使用不含热原和内毒素的试管。

收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2、血浆……EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。

1000 ×g离心30分钟去除颗粒。

3、细胞上清液……1000 ×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4、组织匀浆……将组织加入适量生理盐水捣碎。

1000 ×g离心10分钟,取上清液。

5、保存……如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。

尽可能的不要使用溶血或高血脂血。

如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。

不要在37℃或更高的温度加热解冻。

应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

人淋巴细胞功能相关抗原2ELISA试剂盒操作注意事项:
●试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。

稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。

●实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。

●不用的其它试剂应包装好或盖好。

不同批号的试剂不要混用。

保质前使用。

●使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。

●使用干净的塑料容器配置洗涤液。

使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

●底物A应挥发,避免长时间打开盖子。

底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。

避免用手接触,有毒。

实验完成后应立即读取OD值。

●加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。

●按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

安全性:
1. 避免直接接触终止液和底物A、B,一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。

2. 实难中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

试剂的准备:
1. 标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。

稀释前将标准品振荡混匀。

稀释比例按下表中进行:
100 ng/ml (6号标
准品)
原倍浓度不用稀释直
接加入50ul
50
ng/ml (5号标
准品)
100ul的原倍标准品
加入100ul的标准品
稀释液
25
ng/ml (4号标
准品)
100ul的5号标准品加
入100ul的标准品稀
释液
12.5 ng/ml (3号标
准品)
100ul的4号标准品加
入100ul的标准品稀
释液
6.25 ng/ml (2号标
准品)
100ul的3号标准品加
入100ul的标准品稀
释液
3.12 ng/ml (1号标
准品)
100ul的2号标准品加
入100ul的标准品稀
释液
ng/ml (空白对
照)
原倍浓度不用稀释直
接加入50ul
2. 洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。

试剂盒性能:
1. 灵敏度:最小的检测浓度小于1号标准品。

稀释度的线性。

样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。

2. 特异性:不与其它细胞因子反应。

3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%。

人淋巴细胞功能相关抗原2ELISA检测试剂盒操作步骤:
1. 使用前,将所有试剂充分混匀。

不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。

2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。

每个标准品和空白孔建议做复孔。

每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。

3. 加入稀释好后的标准品50ul 于反应孔、加入待测样品50 ul 于反应孔内。

立即加入50 ul的生物素标记的抗体。

盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育45分钟。

4. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。

重复此操作4次。

如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。

5. 每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。

6. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。

重复此操作4次。

如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。

7. 每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育5分钟。

避免光照。

8. 取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。

9. 在450nm波长处测定各孔的OD值。

结果判断与分析:
1、仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标(Y ),相应的OT 标准品浓度为横坐标(X ),做得相应的曲线,样品的OT 含量可根据其OD 值由标准曲线换算出相应的浓度,再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

3、检测值范围: 0-100ng/ml
4、敏感度:0.39ng/ml。

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