Zeiss LSM 780 激光扫描共聚焦显微镜光路设置和不同扫描模式的使用
Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜 操作手册
Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜操作手册目录:1 系统得组成系统组成及光路示意图实物照片说明2 系统得使用2、1 开机顺序2、2 软件得快速使用说明2、3 显微镜得触摸屏控制2、4 关机顺序3 系统得维护1 系统得组成激光扫描共聚焦显微镜系统主要由:电动荧光显微镜、扫描检测单元、激光器、电脑工作站及各相关附件组成。
系统组成及光路示意图:电脑工作站激光器电动荧光显微镜扫描检测单元实物照片说明:电动荧光显微镜扫描检测单元CO2 培养系统控制器激光器电脑工作站2 系统得使用2、1 开机顺序(1)打开稳压电源(绿色按钮)等待2 分钟(电压稳定)后,再开其它开关(2)主开关[ MAIN SWITCH ]“ON”电脑系统[ SYSTEMS/PC ]“ON”扫描硬件系统[ PONENTS ]“ON”(3)打开[ 电动显微镜开关]打开[ 荧光灯开关](注:具有5 档光强调节旋钮)(4)Ar 离子激光器主开关“ON”顺时针旋转钥匙至“—”预热等待约15分钟,将激光器[ 扳钮] 由“Standby”扳至“Laser run”状态,即可正常使用(5)打开[ 电脑开关],进入操作系统注:键盘上也具有[ 电脑开关]2、2 软件得快速使用说明(1)电脑开机进入操作系统界面后,双击桌面共聚焦软件ZEN 图标(2)进入ZEN 界面,弹出对话框:“Start System”——初始化整个系统,用于激光扫描取图、分析等。
“Image Processing”——不启动共聚焦扫描硬件,用于已存图像数据得处理、分析。
(3)软件界面:1 功能界面切换:扫描取图(Acquisition)、图像处理(Processing)、维护(Maintain) (注:Maintain仅供Zeiss专业工程师使用)2 动作按钮;3 工具组(多维扫描控制);4 工具详细界面;5 状态栏;6 视窗切换按钮;7 图像切换按钮;8 图像浏览/预扫描窗口;9 文档浏览/处理区域;10 视窗中图像处理模块动作按钮:Single ——扫描单张图片、并在图像预览窗口显示。
Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜 操作手册
Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜操作手册目录：1 系统的组成系统组成及光路示意图实物照片说明2 系统的使用2.1 开机顺序2.2 软件的快速使用说明2.3 显微镜的触摸屏控制2.4 关机顺序3 系统的维护1 系统的组成激光扫描共聚焦显微镜系统主要由：电动荧光显微镜、扫描检测单元、激光器、电脑工作站及各相关附件组成。
系统组成及光路示意图：电脑工作站激光器电动荧光显微镜扫描检测单元实物照片说明：电动荧光显微镜扫描检测单元CO2 培养系统控制器激光器电脑工作站2 系统的使用2.1 开机顺序（1）打开稳压电源（绿色按钮）等待2 分钟（电压稳定）后，再开其它开关（2）主开关[ MAIN SWITCH ]“ON”电脑系统[ SYSTEMS/PC ]“ON”扫描硬件系统[ COMPONENTS ]“ON”（3）打开[ 电动显微镜开关]打开[ 荧光灯开关]（注：具有5 档光强调节旋钮）（4）Ar 离子激光器主开关“ON”顺时针旋转钥匙至“—”预热等待约15分钟，将激光器[ 扳钮] 由“Standby”扳至“Laser run”状态，即可正常使用（5）打开[ 电脑开关]，进入操作系统注：键盘上也具有[ 电脑开关]2.2 软件的快速使用说明（1）电脑开机进入操作系统界面后，双击桌面共聚焦软件ZEN 图标（2）进入ZEN 界面，弹出对话框：“Start System”——初始化整个系统，用于激光扫描取图、分析等。
“Image Processing”——不启动共聚焦扫描硬件，用于已存图像数据的处理、分析。
（3）软件界面：1 功能界面切换：扫描取图（Acquisition）、图像处理（Processing）、维护（Maintain）（注：Maintain仅供Zeiss专业工程师使用）2 动作按钮；3 工具组（多维扫描控制）；4 工具详细界面；5 状态栏；6 视窗切换按钮；7 图像切换按钮；8 图像浏览/预扫描窗口；9 文档浏览/处理区域；10 视窗中图像处理模块动作按钮：Single ——扫描单张图片、并在图像预览窗口显示。
激光共聚焦显微镜操作指南说明书
激光共聚焦显微镜操作指南说明书激光共聚焦显微镜（Laser Scanning Confocal Microscope）是一种高分辨率、高对比度的显微镜，广泛应用于生物医学研究、材料科学等领域。
本操作指南将详细介绍激光共聚焦显微镜的操作流程和基本操作技巧，帮助用户正确、高效地使用该设备。
一、设备准备在开始使用激光共聚焦显微镜前，需要进行以下设备准备：1. 检查电源线和数据线是否连接正常，确保设备供电和数据传输正常；2. 检查激光源是否正常工作，激光功率是否稳定；3. 检查镜头和滤光片是否清洁，清除灰尘和污渍，确保成像质量；4. 准备适当的标本样品，并将其固定在载玻片上。
二、系统启动1. 确保设备处于待机状态，按下电源按钮，等待系统启动；2. 检查系统软件是否正常运行，若出现异常情况，及时联系维修人员进行处理；3. 检查镜头和滤光片的安装是否正确，确保成像时的光路通畅；4. 开启激光源，根据需要选择合适的激光波长和功率；5. 调节扫描镜和物镜的位置，使光线准确聚焦在样品上。
三、图像获取1. 打开激光共聚焦显微镜软件，并根据需要选择合适的成像模式；2. 调节激光功率和增益，确保图像的亮度和对比度适宜；3. 调节扫描镜的扫描速度，根据样品的要求选择合适的扫描速度；4. 调节焦距和聚焦位置，通过手动或自动对焦功能获取清晰的图像；5. 点击图像捕捉按钮，记录当前图像或录制图像序列。
四、图像处理和分析1. 通过激光共聚焦显微镜软件提供的图像处理功能，对图像进行调整和增强，以获得更好的观察效果；2. 根据需要，利用软件提供的计算和分析功能对图像进行进一步处理，如三维重建、光学切片等；3. 对图像进行定量分析时，选择合适的工具和算法，并按照要求设定参数；4. 记录和保存处理后的图像数据，以备后续分析和报告撰写使用。
五、设备关闭1. 停止图像采集和处理工作；2. 降低激光功率，关闭激光源；3. 将扫描镜和物镜返回初始位置，关闭设备；4. 断开电源和数据线，保持设备清洁干燥。
激光共聚焦扫描显微镜操作规程
激光共聚焦扫描显微镜操作规程一．开机程序1．开启总电源，确认所有仪器电源状态正常工作2．开启电脑，双击桌面上的LSM510图标，开启显微镜。
3．在初始平面上点击Start Expert Mode 键开启专家拍摄模式。
4．在主菜单中点击File New键，建立新的数据库。
二．软件拍摄1．在主菜单上点击Acquire Laser键，开启需要使用的激光2．在主菜单上点击VIS键，开启显微镜观察模式3．把需要观察的玻片放到载物台上选择需要观察的平面4．在主菜单上点击LSM键，开启进入显微镜激光扫描模式5．在主菜单上点击Config键，选择所需要扫描的模式及参数6．在主菜单上点击Scan Find键，进行图像参数自动校正7．在Scan子菜单下点击Fast X键，进行层面选择8．在连续扫描中调节放大器增益、补偿；激光强度等图像参数来优化图像9．点击图像子菜单上的Save键存储优化好的图像三．关机程序1．完成所有操作后，关掉激光开关，冷却5分钟后，点击主菜单上Exit键，退出所有程序2．关闭电脑3．关闭电源ZEISS 510 MET A二维扫描程序1.在Acquire → config →确定扫描所需的波长，（如果已作过相同方法的扫描，可直接调出一张相同条件的图像，用图像窗中的Reuse确定有关的扫描条件）2.在Acquire → micro →在低倍镜(透射光或荧光)下找到要观察的图像3.在Scan control → mode → find →在显示器上找到图像，选定扫描需用的分辨率4.调节物镜到适当的放大倍数5.Scan control → mode →New，打开一新图像窗6.在Scan control → mode → cont →用zoom将图像大小调至最佳，用Pinhole（一般选1）、Detector Gain（650左右，不宜时间超过800，也不宜低于500）、Amplifier offset（不宜过低），以及选择作算术平均值次数、调节激光强度（488nm不超过25%）等调节图像质量至最佳。
激光扫描共聚焦显微镜操作流程详解
激光扫描共聚焦显微镜操作流程详解激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope)激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope)，英⽂简写LSCM，俗称confocal。
LSCM是⼀种⾼科技显微镜，属于最先进的细胞⽣物学分析仪器。
我们学院使⽤的是瑞⼠徕卡公司(Leica)的TCS SP5型号的LSCM。
使⽤流程1、登陆ftp://10.31.60.139 或5号楼606室公⽤电脑下载《激光共聚焦预约使⽤审核表》，打印并填写。
2、联系卢剑清（⼿机：135********）审核并签名。
3、持已签名的《激光共聚焦预约使⽤审核表》⾄5号楼610室预约使⽤时间，及领取钥匙，联系⼈：窦凯飞（⼿机：152********）。
4、在熟练使⽤者的指导下，进⾏实验。
5、实验结束，及时归还钥匙。
仪器构造和原理LSCM的基本结构主要包括荧光显微镜系统及样品台、激光发射器、扫描器、检测器、图像存储处理和输出设备、计算机控制系统。
激光光源：激光扫描束经照明针孔形成点光源, 普通显微镜采⽤的⾃然光或灯光是⼀种场光源, 标本上每⼀点的图像都会受到邻近点的衍射光或散射光的⼲扰。
⽽LSCM 以激光为光源, 激光具有单⾊性强﹑⽅向性好﹑⾼亮度﹑相⼲性好等优点, 可以避免普通显微镜的缺点。
⼀般常⽤的⽓体激光器如氩(Ar) ﹑氪(Kr) ﹑氦(He)﹑氖(Ne)。
illuminating pinhole（照明针孔）：使激光经过照明针孔后形成点光源，点光源具有光源⽅向性强、发散⼩、亮度⾼、⾼度的空间和时间相⼲性以及平⾯偏振激发等独特的优点。
且与detector pinhole(探测器针孔)及焦平⾯形成共聚焦装置。
分光镜(BeamSplitter)：点光源发出的光经分光镜反射后, 通过物镜在样品聚焦。
对标本内焦平⾯上的每⼀点进⾏扫描,Focal plane（焦平⾯）：激光点光源照射物体在焦平⾯处聚焦，激发荧光标记的样本发射荧光，形成焦点光斑。
2.高灵敏度激光共聚焦显微镜.Zeiss 780.开机步骤
目视光路荧光的shutter
可以临时且快速开关荧光
开关目视光路： Online：打开目视光路 Offline：关闭目视光路
目视光路白光和荧光的选择： BF：白光 DICII：白光微分干涉照明 DICIII：白光微分干涉照明 DAPI：观察DAPI C-Y-F：观察绿光 DsRED：观察红光 AF660：观察远红外光
高灵敏度激光共聚焦显微开机步骤
总电源开关 第一步：打开总电源开关 一个大的，两个小的 依次打开
开机步骤
载物台电源 完美聚焦电源
显微镜电源
第二步：打开各组件开关 从上往下 依次打开 （中间的完美聚焦电源开关摁击一下即可）
可选步骤
Ar离子 激光器 的控制器
如果需要用目镜镜筒观察样品，请调至Online
如果需要用激光扫描样品 ，请调至Offline
780有两套独立的光路：
注意：两套光路无法同时使用！本页面介绍的是Acquisition模块
Show manual tools 和 show all 全部要打上勾
激光波长： 458、488、514nm
电源开关
激发开关
开机步骤
软件主机 第三步：打开软件主机，进入LSM USER
开机步骤
打开Zen 2010软件
开机步骤
启动拍摄系统
如果无需拍摄 仅需启动图像处理模块
780有两套独立的光路： 注意：两套光路无法同时使用！本页面介绍的是Ocluar模块 目视光路（汞灯作为光源） 由Ocular 模块控制 扫描光路（激光作为光源） 由Acquisition模块控制
如果实验需要 458nm、 488nm、 （如GFP、FITC和ALEXA488） 稳压开关 514nm的激光 则需要打开Ar离子激光器 否则无需打开！
LSM780双光子激光共聚焦显微镜技术参数
LSM780双光子激光共聚焦显微镜技术参数LSM780双光子激光共聚焦显微镜是一种基于双光子荧光共聚焦显微镜技术的高性能显微镜，具有高分辨率、深入组织的成像能力，能够提供关于三维结构和功能的细胞和组织的详细信息。
下面将详细介绍LSM780双光子激光共聚焦显微镜的技术参数。
1. 激光系统：LSM780双光子激光共聚焦显微镜通常配备两个紫外激光器，能够提供两个不同波长的激光，通常为800nm和1040nm。
这些激光器可以分别或同时使用，以适应不同的样品和实验需求。
2.激光功率：LSM780双光子激光共聚焦显微镜的激光功率通常在几十至上百毫瓦之间。
激光功率的选择取决于样品的特性和实验需求，功率越高，进一步成像的深度越大，但也会增加样品的破坏风险。
3.探测系统：LSM780双光子激光共聚焦显微镜的探测系统包括一个探测单元、一个光学滤光片轮和一个光电倍增管（PMT）。
探测单元通常包含两个探测器，可用于收集荧光信号和二次非线性光学信号，以获得不同的成像信息。
4.透射探测：LSM780双光子激光共聚焦显微镜还可配备透射探测系统，用于监测透过样品的激光强度，以实现更精确的深度控制和真实的三维成像。
5.XY扫描系统：LSM780双光子激光共聚焦显微镜的扫描系统通过使用高速扫描镜和电子扫描控制器来实现XY扫描，以获取二维图像。
扫描速度和分辨率可以通过调整激光功率和扫描模式进行优化。
6.Z轴扫描系统：LSM780双光子激光共聚焦显微镜的Z轴扫描系统通常由一个压电陶瓷驱动器和一个扫描镜组成，可以实现在样品的Z轴方向上进行成像，从而获得三维图像。
7. 图像处理软件：LSM780双光子激光共聚焦显微镜通常使用配套的图像处理软件，如Zeiss ZEN软件，用于图像采集、分析和处理。
该软件提供了多种功能，包括多通道成像、3D成像和图像重建等。
总之，LSM780双光子激光共聚焦显微镜具有先进的激光系统、灵活的样品探测系统、高速和高精度的扫描系统以及强大的图像处理软件等技术参数，为研究者提供了一种高分辨率、高亮度和无损伤成像的显微技术工具。
激光共聚焦显微镜用法
激光共聚焦显微镜用法
激光共聚焦显微镜（Laser Scanning Confocal Microscope，LSCM）是一种高分辨率的显微镜，其能够通过激光束在样品表面扫描，获得高分辨率的三维图像。
以下是激光共聚焦显微镜的使用方法：
1. 样品制备：将样品制备好，并固定在载玻片或载片上，以便于放入显微镜中观察。
2. 调整显微镜：将载玻片或载片放入显微镜中，调整激光聚焦点的位置和大小，以便于观察样品的细节。
3. 设置参数：根据样品的性质和需要观察的结构，设置激光功率、扫描速度、探测器增益等参数，以获得最佳的成像效果。
4. 开始扫描：启动激光扫描仪，将激光束在样品表面扫描，获得高分辨率的三维图像。
5. 分析数据：通过软件对获得的图像进行处理和分析，以获得更详细的信息和结构。
6. 结果展示：将处理后的图像进行展示和分析，以便于研究人员对样品进行更深入的了解和研究。
总之，激光共聚焦显微镜是一种高分辨率的显微镜，其能够帮助研究人员观察和研究样品的细节和结构，为生物医学研究和材料科学研究提供了强有力的工具。
激光扫描共聚焦显微镜操作指南说明书
激光扫描共聚焦显微镜操作指南说明书[激光扫描共聚焦显微镜操作指南说明书]引言：本操作指南为用户提供激光扫描共聚焦显微镜的详细操作流程及相关注意事项。
在使用本设备之前，请仔细阅读本指南，以确保能够正确、安全地操作设备，并获得最佳的成像效果。
一、设备介绍激光扫描共聚焦显微镜是一种先进的显微镜技术，结合了共聚焦成像和激光扫描技术，可以实现高分辨率、三维成像及活细胞观察等功能。
本设备由以下主要部分组成：1. 共聚焦显微镜主体：包括光源系统、光学系统、扫描系统、探测器等核心部件。
请勿对主体进行任何未经授权的拆卸或修改。
2. 控制系统：用于控制设备的开关、成像参数设置、图像采集及处理等功能。
在操作设备之前，请确保控制系统处于正常工作状态。
二、准备工作在操作激光扫描共聚焦显微镜之前，请进行以下准备工作：1. 检查设备：确保设备的电源线、信号线、光纤等连接线路良好，无损坏或松动情况。
2. 准备标本：根据需要观察的样本类型，准备适当的标本片，并在标本片上施加适当的荧光染料。
3. 调整镜片：根据需要选择适当的镜头，并按照设备说明进行安装和调整。
三、操作步骤以下为基本的操作流程，具体步骤可能会因设备型号和厂家而有所不同，请根据实际情况进行操作：1. 打开设备电源：将电源开关置于“开启”位置，待设备启动完全后，检查设备各部分是否正常。
2. 设置成像参数：通过控制系统，设置激光波长、放大倍数、成像模式等参数。
根据标本类型及观察需求，合理选择参数设置。
3. 校准镜片：根据设备说明书，进行扫描头和标本之间的焦距调整，保证成像过程中的清晰度和准确度。
4. 开启激光：根据标本需要，选择相应的激光波长，并逐一打开相应激光。
5. 定位标本：通过显微镜目镜进行初步观察，调整位置和焦距，使标本位于成像区域。
6. 开始扫描成像：在控制系统中选择扫描图像模式，点击“开始扫描”按钮，启动扫描成像过程。
7. 图像采集和处理：根据需要，可设置图像采集的帧数、分辨率等参数，并在采集图像后进行必要的图像处理和分析。
激光扫描共聚焦显微镜操作说明书
激光扫描共聚焦显微镜操作说明书操作说明书激光扫描共聚焦显微镜是一种高端的显微镜设备，具有高分辨率、高灵敏度的特点，广泛用于生物学、医学、材料科学等领域。
为了正确且有效地操作激光扫描共聚焦显微镜，本操作说明书将为您提供详细的指导。
一、设备介绍激光扫描共聚焦显微镜由以下主要部分组成：1. 显微镜主体：负责接收样本的光信号，并进行扫描成像。
2. 激光系统：提供高能量、高稳定性的激光光源，用于激发样本的荧光信号。
3. 探测系统：用于接收样本的荧光信号，并将其转化为图像信号。
4. 控制系统：提供对显微镜参数进行调节和设置的功能。
二、注意事项在操作激光扫描共聚焦显微镜之前，请确保您已熟悉以下注意事项：1. 安全操作：激光光源具有较强的激光辐射，请佩戴适当的激光防护眼镜并避免直接暴露于激光光束下。
2. 样本准备：样本应事先处理好并放置在适当的载玻片上，确保样本表面平整，避免气泡或杂质的干扰。
3. 导入样本：轻轻将载玻片插入显微镜主体的样本台中，并用调节旋钮精确定位样本。
4. 参数设置：根据实验需要，设置合适的激光功率、放大倍数和扫描速度等参数，确保获得清晰的图像。
5. 镜头清洁：定期清洁显微镜镜片，避免灰尘或污渍影响成像质量。
注意使用专用的镜头清洁纸和清洁液。
三、操作步骤基于激光扫描共聚焦显微镜的特点，以下为一般操作步骤的指导：1. 打开设备电源，等待设备启动并进行自检。
2. 调节放大倍数：通过显微镜主体上的放大调节旋钮，调节适当的放大倍数，以便观察到合适大小的图像。
3. 确定激光功率：在控制系统中，设置合适的激光功率以激发样本的荧光信号，避免过高的功率导致样本损伤。
4. 调整扫描速度：通过控制系统中的扫描速度调节器，设置合适的扫描速度，以获得清晰且稳定的图像。
5. 对焦样本：使用显微镜主体上的对焦调节旋钮，将样本调焦至最清晰状态。
6. 开始扫描：通过控制系统中的扫描启动按钮，启动扫描功能，并观察图像显示区域是否居中和清晰。
LSM780双光子激光共聚焦显微镜技术参数
524 有可调大小的针孔，调节范围为连续调节，免维护。
设备名称双光子荧光寿命成像激光共聚焦扫描显微镜电源 220V+10%, 50HZ室温：20'25“C貝他：防尘，除湿，抗鳶动工作台：牢固•稳定，防夜Ax 激光：458nui 、488nm. 514nm» 25mW2. 数量3. 设备用途说明4. 工作条件5. 规格、技术要求及参数5.1 双光子飞秒激光器部分5JJ 5」・2 HeNe 激光：543nm, ImW5」・3 HeNe 激光：633nm, 5mW5」4405 激光：405nm, 30mW 5.L5 •红外飞秒脉冲激光器，波长范围：680・1080nm,包含负色散补偿功能5」・6 根据标本的情况利用飞秒激光器的双光子可观看800微米深度样品数据。
5丄7 去稳定的可见光AOTF,同时控制激光各波长的激光强度，8通道，切换时间＜5微秒。
AOTF 对激光强度的控制连续可调（0-100%）,步进0・1%）°5」・8 毎支激光器通过独立的光纤连接到扫描器部分，光纤即插即用，无需校准。
5」・9 光纤末端具有可对激光进行聚焦的集光镜，电动调节。
5」」0 具有8个激光光路接口和红外飞秒激光器直接耦合端口。
5・2扫描器521 扫描器（含检测器〉与显微镜直接连接于显微镜端口（非光纤连接人一体化设ih 一体化像差及色差校正。
5・2・2 壳整个光路的光学设计适用波长范围为360nm-1000nm 全光谱范围。
523 每个荧光检测器具有独立的10级可调数码增益。
同时满足下列速度指标:8幅/秒（512x512像素，16位〉，250幅/秒（512x16像素，16位） 多重扫描功能，可以在扫描过程中以线和幅方式切换光路配程。
53显微镜525去光栅分光方式，并且具有减少信号损失的循环光路设计。
526 各荧光检测通道均不采用发射光滤光片，荧光信号经光栅分光后可直接到达检527 •共聚焦成像通道：具备34个荧光检测通道，可以同时采集10个荧光通道和1个透射光通道图像，10种荧光染料可同时分离成像，1个透射光通道（明场DIC 效果〉5・2・8 协扫描器（含检测器）必须内置高灵敏度GaAsPspectial 检测器,而且该仪器能够整合FCS 技术，使影像品B （S/N ratio ）信噪比有2X 提升，具有检测微弱的单分子荧光的功能•529一个可用于明场和DIC 观察的透射光检测通道。
Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜 操作手册
Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜操作手册目录：1 系统的组成系统组成及光路示意图实物照片说明2 系统的使用2.1 开机顺序2.2 软件的快速使用说明2.3 显微镜的触摸屏控制2.4 关机顺序3 系统的维护1 系统的组成激光扫描共聚焦显微镜系统主要由：电动荧光显微镜、扫描检测单元、激光器、电脑工作站及各相关附件组成。
系统组成及光路示意图：电脑工作站激光器电动荧光显微镜扫描检测单元实物照片说明：电动荧光显微镜扫描检测单元CO2 培养系统控制器激光器电脑工作站2 系统的使用2.1 开机顺序（1）打开稳压电源（绿色按钮）等待2 分钟（电压稳定）后，再开其它开关（2）主开关[ MAIN SWITCH ]“ON”电脑系统[ SYSTEMS/PC ]“ON”扫描硬件系统[ COMPONENTS ]“ON”（3）打开[ 电动显微镜开关]打开[ 荧光灯开关]（注：具有5 档光强调节旋钮）（4）Ar 离子激光器主开关“ON”顺时针旋转钥匙至“—”预热等待约15分钟，将激光器[ 扳钮] 由“Standby”扳至“Laser run”状态，即可正常使用（5）打开[ 电脑开关]，进入操作系统注：键盘上也具有[ 电脑开关]2.2 软件的快速使用说明（1）电脑开机进入操作系统界面后，双击桌面共聚焦软件ZEN 图标（2）进入ZEN 界面，弹出对话框：“Start System”——初始化整个系统，用于激光扫描取图、分析等。
“Image Processing”——不启动共聚焦扫描硬件，用于已存图像数据的处理、分析。
（3）软件界面：1 功能界面切换：扫描取图（Acquisition）、图像处理（Processing）、维护（Maintain）（注：Maintain仅供Zeiss专业工程师使用）2 动作按钮；3 工具组（多维扫描控制）；4 工具详细界面；5 状态栏；6 视窗切换按钮；7 图像切换按钮；8 图像浏览/预扫描窗口；9 文档浏览/处理区域；10 视窗中图像处理模块动作按钮：Single ——扫描单张图片、并在图像预览窗口显示。
Zeiss LSM 780激光扫描共聚焦显微镜光路设置和不同扫描模式的使用
Zeiss LSM 780激光扫描共聚焦显微镜光路设置和不同扫描
模式的使用
李华丽
【期刊名称】《科技创新与应用》
【年(卷),期】2015(000)027
【摘要】对于使用激光扫描共聚焦显微镜的研究者来说，实验设计、样品准备、仪器操作和后期图片处理是一个实验至关重要的四步，前两步是任何一个研究者都必须具备的能力，否则无从谈起上机实验，后期图片处理无非就是修饰润色使图片从视觉上更美观，而对大多数从事生物学医学领域的研究者来说，仪器的操作可能是最关键的一步，而仪器操作中光路的设置和不同扫描模式的选择可能是最难掌握和最难学习的模块，因为这部分可能涉及一些物理光谱学的知识。
文章就以自己实验室Zeiss LSM 780激光扫描共聚焦显微镜为例，简要介绍其三种光路设置和五种不同扫描模式如何选择使用，希望对使用者有所帮助。
【总页数】1页(P54-54)
【作者】李华丽
【作者单位】华南农业大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室，广东广州 510642
【正文语种】中文
【相关文献】
1.蔡司 LSM 7DUO 激光扫描共聚焦显微镜的配置 [J], 李华丽
2.Leica SP8 STED 3X激光扫描共聚焦显微镜的使用研究 [J], 狄伶
3.ZEISS LSM 780激光扫描共聚焦显微镜的三维成像及分析 [J], 许佳玲;罗剑文;龙钊;陈云凤;王晓红;张以顺
4.Zeiss LSM710激光扫描共聚焦显微镜的管理和维护 [J], 刘振国;华子义
5.LSM 880 with Airyscan激光扫描共聚焦显微镜高级功能和管理 [J], 林曼娜;向承林;李建军;徐江平;程玉芳
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激光扫描共聚焦显微镜ZEISS780操作规程
激光扫描共聚焦显微镜ZEISS 780操作规程本设备属于精密设备，操作人员必须提前熟悉其适用范围、结构、性能及其具体操作方法，未经操作培训者不能进行上机操作。
通过操作培训的人员必须严格按照仪器管理老师的培训要求及设备使用说明书指定的操作进行工作。
1.开机提前进行镜检，确保样本无误；查看空调温度、抽湿机湿度和不间断电源工作情况。
1.1开三相稳压电源。
注意：先开稳压电源后面的黑色扳手开关①，再按下稳压电源前面的绿色按钮②，如果出现报警声，请马上关闭稳压电源，并报告管理人员。
1.2两分钟以后依次打开电源控制板上的三个开关。
先打开主开关MAIN SWITCH③，再依次打开SYSTEMS/PC④和COMPONENTS⑤开关。
注意：各个开关不要同时按下，开机时仪器会进行自检，每按下一个开关，请等待相应的部件自检完毕后再开下一个开关。
1.3打开电脑开关⑨，点击“LSM User”图标，进入桌面；当看到桌面右下角显示“注意安全”图标时，方可点击桌面中央的ZE N软件图标；然后点击“Start System”按钮开启软件。
注意：当桌面右下角始终不显示“注意安全”图标时，不可启动软件。
这时把电脑主机左边那台仪器的盖子掀开，按一下“Reset”按钮，等待电脑桌面右下角出现“注意安全”图标。
1.4打开氩离子激光器（若不使用458nm或488nm或514nm激光线则不需要打开）。
先打开氩离子激光器正面的开关ON⑥，再顺时针旋转钥匙⑦至“—”的方向，等待绿色指示灯亮起方可开启光路(大约5-10min)。
注意：Ar+激光器在启动后，需要1h左右的预热时间才能进入稳定状态。
若闲置时间1h以上，可将激光器扳钮由“laser run”位置扳至“idle power”处⑧，保护激光器，延长使用寿命。
2.找目标2.1在明场下用Transmitted light找目标，点击①、②、③、④注意：如果实验只使用空气镜，放置样品后，建议先选择低倍物镜找细胞，再换用高倍物镜微调即可。
LSM780双光子激光共聚焦显微镜技术参数
11 •设备名称双光子荧光寿命成像激光共聚焦扫描显微镜2. 数量1套3. 设备用途说明4. 工作条件电源 220V±10% , 50HZ室温：20〜25°C其他：防尘，除湿，抗震动工作台：牢固，稳走，防震5・规格.技术要求及参数 5.1双光子飞秒激光器部分5.1.1Ar 激光：458nm 、488nm 、514nm , 25mW 5.1.2HeNe 激光:543nm , lmW 5.1.3HeNe 激光:633nm , 5mW 5.1.4 405 激光：405nm , 30mW5.L5 ★红外飞秒脉冲激光器，波长范围:680-1080nm f 包含负色散补偿功能 根据标本的情况利用飞秒激光器的双光子可观看800微米深度样品数据5. L7洪稳定的可见光AOTF ，同时控制激光各波长的激光强度，8通道，切换时间v 5微秒。
AOTF 对激光强度的控制连续可调(0^100%),步进0.1% X5.1.8每支激光器通过独立的光纤连接到扫描器部分，光纟千即插即用，无需校准。
5.1.9 光纤末端具有可对激光进行聚焦的集光镜r 电动调节。
5.1.10具有8个激光光路接口和红外飞秒激光器直接耦合端口。
5.2扫描器1B 读万卷书行万里路5.1.65.2.1扫描器（含检测器）与显微镜直接连接于显微镜端口（非光纤连接）,T本化设计,—体化像差及色差校正。
5.2.2★整个光踣的光学设计适用波长范围为360nm -lOOOnm全光诸范围。
5.2.3每个荧光检测器具有独立的10级可调数码增益。
5.2.4有可调大小的针孔，调节范围为连续调节,免维护。
5.2.5★光柵分光方式，并且具有减少信号损失的循环光路设计。
5.2.6各荧光检测通道均不采用发射光滤光片,荧光信号经光栅分光后可直接到达检测器。
5.2.7*共聚焦成像通道：具备34个荧光检测通道，可以同时采集10个荧光通道和1个透射光通道图像，10种荧光染料可同时分离成像，1个透射光通道（明场DIC效果）5.2.8咱描器（含检测器）必须内置高灵敏度GaAsP spectral检测器，而且该仪器能够整合FCS技术，使影像品質（S/N rati。
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Zeiss LSM 780 激光扫描共聚焦显微镜光路设置和不同扫描模式的使用
作者：李华丽
来源：《科技创新与应用》2015年第27期
摘要：对于使用激光扫描共聚焦显微镜的研究者来说，实验设计、样品准备、仪器操作和后期图片处理是一个实验至关重要的四步，前两步是任何一个研究者都必须具备的能力，否则无从谈起上机实验，后期图片处理无非就是修饰润色使图片从视觉上更美观，而对大多数从事生物学医学领域的研究者来说，仪器的操作可能是最关键的一步，而仪器操作中光路的设置和不同扫描模式的选择可能是最难掌握和最难学习的模块，因为这部分可能涉及一些物理光谱学的知识。
文章就以自己实验室Zeiss LSM 780激光扫描共聚焦显微镜为例，简要介绍其三种光路设置和五种不同扫描模式如何选择使用，希望对使用者有所帮助。
关键词：激光扫描共聚焦显微镜；光路设置；扫描模式
引言
随着现代科学技术的飞速发展，各种荧光蛋白、荧光染料和精密光学元件不断出现[1-5]，激光扫描共聚焦显微镜技术得到了极大的发展，各种公司，各种型号的共聚焦系统不间断问世或完善，广泛应用在细胞生物学医学领域[6-8]。
广泛的应用使得这一设计精密又操作复杂的仪器必须让有需要的研究者方便学习和掌握。
就以蔡司公司为例，科学技术的发展和适应市场的需要，不同型号的共聚焦系统逐步上市和使用，LSM 510、510 Meta、700、710、780等在硬件技术提高的同时，操作软件也在一步步简化。
文章以华南农业大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室的一台超高灵敏度检测Zeiss LSM 780系统为例，介绍其光路设置和不同扫描模式的选择，因为它是目前蔡司公司推出的上述普通激光扫描共聚焦显微镜中型号最高的一款，它的光路设置和扫描模式的配置将集上述所有型号系统的内置设置于一身，希望能给实验者提供较全面的指导。
1 Zeiss LSM 780 激光扫描共聚焦显微镜三种光路设置
（1）最“傻瓜式”一键操作：Zeiss LSM 780使用Zen 2011软件，软件操作界面有一个Resue按钮。
如果使用者在此之前在这台仪器上做过同样的实验或本次实验与之前某次实验使用的荧光标签一样或光谱数据类似，并且在此仪器上还保留有实验数据，那只需在操作软件中打开之前的一张图片，然后点击Reuse按钮，软件将自动完成光路配置，并且光路中所有参数都是你打开的那张图片的参数。
（2）“傻瓜式”操作：如果使用者第一次使用该仪器，或本次实验与前面实验不使用同样或光谱数据类似的荧光标签，又或者使用同样的标签但在此仪器上没有存留实验数据，那么需要在操作界面中找到一个Smart Setup按钮，点击打开Smart Setup 对话框，在Configure your experiment表格中，在Dye列表下直接选择荧光物质名称或在
Search中输入仪器自身存储的荧光物质的英文名称，然后选择它；在color列表下选择伪彩色，然后点击Apply，软件将自动完成光路配置，包括选择相应的激发光，主分光片，检测PMT和收集荧光信号的发射带宽，并将激光强度调至2.0。
（3）手动设置：对大多数实验者来说，这是最难的一种情况。
如果你在“傻瓜式”操作步骤中Search不到你所使用的荧光物质名称（仪器自身存储的荧光物质名称毕竟有限，并且新的荧光物质和染料的开发也在不断进行中），并且也不知道它和哪种常见的荧光物质的光谱数据相似，那么怎么办你需要手动设置光路，首先你需要查询到你所使用的荧光物质的光谱数据，包括激发光谱和发射光谱。
激发光谱助你选择合适的激发光来激发你的荧光物质发出荧光，发射光谱指导你选择合适的接收波长来接收发射的荧光，一般来说选择激发峰附近的激发波长的激光来作为激发光，发射峰附件的波段作为接收荧光的波段最合适。
2 Zeiss LSM 780 激光扫描共聚焦显微镜四种面扫描模式
使用两种或两种以上的荧光物质时需要注意荧光物质的光谱串色问题。
在点击Apply按钮前，四种备选的面扫描模式供使用者选择。
（1）Fastest：在各荧光物质的发射光谱不完全重叠的情况下，同时扫描多种荧光物质，即在一个Track里多条激光线同时扫描，扫描成像速度是最快的，但可能出现信号串扰。
（2）Best Signal：针对不同荧光物质逐一进行扫描成像，即一种荧光物质使用一个Track，每条激光线顺序扫描。
尽可能减少各种荧光物质发射光谱间的串扰，但扫描成像速度会明显降低。
（3）Best Compromise：综合考虑成像速度和信号质量，同时扫描发射光谱重叠较少的荧光物质，即发射光谱重叠较少的荧光物质使用一个Track，另一种物质单独使用一个Track。
在减少信号串扰的前提下，在一定范围内提高成像速度。
（4）Linear Unmixing：进行多通道荧光扫描的光路设定，用于简单的光谱拆分。
3 Zeiss LSM 780 激光扫描共聚焦显微镜一种“隐藏”的线扫描模式
软件默认的扫描模式一般为面扫描模式，即在一个track完成整幅图像的扫描后，切换至下一个track完成扫描，直至完成全部扫描。
但对于活动样品来讲，例如刚游离或浓度小的植物原生质体样品，在面扫描模式下，可能出现由于各Track扫描时间上的延迟而使各通道荧光信号无法完全重叠的现象。
此时我们需要发现一种“隐藏”的线扫描模式，即一个track沿X轴方向完成一行扫描后，切换至下一个track完成扫描，直至所有track均完成此行扫描，扫描系统再移动至下一行。
如此重复，直至完成全部扫描。
这种扫描方式尽可能地降低了各Track扫描时间上的延迟，为活动样品的扫描提供了解决方式。
参考文献
[1]袁兰.激光扫描共聚焦显微镜技术教程[M].北京.北京大学医学出版社，2004.
[2]王春梅，黄晓峰，杨家骥，等.激光扫描共聚焦显微镜技术[M].西安：第四军医大学出版社，2004.
[3]李楠，王凤翔，周春喜.荧光探针应用技术[M].北京.军事医学科学出版社，1998.
[4]Tsien RY. The green fluorescent protein [J]. Annu. Rev. Biochem.， 1998， 67：509-544
[5]Heim R， Cubitt AB， Tsien RY. Improved green fluorescence[J]. Nature，1995，373（6516）：663-664.
[6]任小则，送峰. 激光扫描共聚焦显微镜的使用及其在医学研究领域中的应用[J].中国科技信息， 2009，11： 237-238.
[7]逢树龙，蔡振宇. 激光扫描共聚焦显微镜在医学研究中的应用[J].现在生物学进展，2009.9（13）：2579-2580.
[8]候燕鸣，胡剑江，王毅.激光扫描共聚焦显微镜技术及其在生物医学领域中的应用[J].国际中医中药杂志.2010.32（6）：567-569.
作者简介：李华丽（1986-），女，汉族，河南人，硕士，实验员，主要从事科研仪器设备使用与实验室管理。