陕西延安地区肾综合征出血热自然疫源地调查研究初报

讨 论 通过此次调查, 可初步得出如下结论: 确定延 安地区为肾综合征出血热自然疫源地及新疫区。 依据有: 个案调查结果表明, 延安市 2001 年发生 的 7 例患者病前 2 月均无 H FR S 疫区旅居史, 属
表 2 延安市洛川县交口河镇鼠密度及鼠种调查结果
调查地点
布夹个数 捕鼠只数 鼠密度 (% ) 褐家鼠
4 鼠密度及鼠种调查 4. 1 选择调查点: 疫情发生后至本次调查 前, 安塞等疫区已大面积捕鼠及接种疫苗, 甘泉、 洛川、黄陵的 4 例患者无法回访。延安洛川县交口 河镇位于洛川、黄陵两县交界区, 延安炼油厂为当 地大型企业。 发病患者为当地长期居民, 村中居 住, 厂里工作, 故确定洛川县交口河镇为主要调查 地区, 选择交口河镇 2 个自然村和延炼厂居民区、 镇中心河滩蔬菜地及镇周糜家河畔农田为重点调 查点。 4. 2 鼠密度及种类调查: 野外放置捕鼠夹。 鼠夹选放在黄豆地与杂草丛生的田埂、居民区及 室内鼠经常出没和活动的地方。 在野外田埂等布 放鼠夹, 夹距 5m , 行距 20m 左右; 居民区内每间 房 (15m 2) 放鼠夹 1 个, 晚放早收, 诱饵用新鲜油 炸面团。将捕获鼠装在塑料袋内, 编号、分类, 逐只 记录捕获日期、地点、生境、种类、性别和成幼。 根 据放夹数和捕获数计算鼠密度判断优势鼠种。 4. 3 采集鼠肺及鼠血标本: 将捕获鼠分类编 号, 按顺序摆在解剖台上, 腹面朝上, 用 2% 碘伏 将胸部消毒, 剪开胸壁, 取肺放入塑料离心管内, 封口编号; 同时用编号的滤纸条沾血, 风干后放入 塑料离心管内。 鼠肺和血标本均放进液氮罐中冷 冻保存。 5 鼠感染汉坦病毒 (HV ) 情况调查[4、5 ] 5. 1 鼠肺汉坦病毒抗原的检测 (冰冻切片免 疫荧光法) : 取冻存的鼠肺标本块直接在冰冻切片 机上制成 4～ 10Λm 厚的冰冻切片, 电风扇吹干, 冷丙酮固定 10 m in, 用 0. 01M PB S (pH 7. 2～ 7. 4) 漂洗 1 次, 再用蒸馏水漂洗 1 次, 吹干。 加人阳 性 IgG 血清 (陕西省疾控中心病毒室提供) , 37℃ 结合 45m in, PB S 振洗 3 次, 蒸馏水漂洗 3 次, 吹 干; 肺片上滴加用伊文思蓝2PB S 稀释的羊抗鼠 IgG 荧光抗体 (上海生物制品研究所) , 37℃结合 45m in, PB S 振洗 3 次, 蒸馏水漂洗 3 次, 吹干, 用
△陕西省教育厅自然科学专项科研基金资助课题
(01J K213) 3 延安市疾病预防控制中心 3 3 第四军医大学唐都医院感染病防治中心 3 3 3 陕西省疾病预防控制中心
25. 21% , 林产、矿产资源丰富。 近年来延安市一 直有输入性 H FR S 病例发生, 2001 年 1 月发现并 确诊首例本地发生 H FR S 病例[6], 其后 1 年内共 发现 7 例。H FR S 疫区是否迁移扩大到延安市, 引 起了卫生部专家及陕西省防疫部门和医务工作者 的高度重视。 为了进一步确定延安是否为 H FR S 自然疫源地及新疫区, 2002 年 8 月, 我们选择病 例发生地之一的洛川县交口河镇开展疫源地调 查, 现将初步调查结果报告如下。
1124
陕西医学杂志 2003 年 12 月第 32 卷第 12 期
果均为强阳性。 进一步行血清学分型检测尚在进 延炼厂居民区、镇中心河滩蔬菜地、镇周糜家河畔
行中。
农田共布放鼠夹 1610 个次, 捕鼠 22 只, 居民区捕
表 1 延安市洛川县交口河镇人群
获 16 只、延炼厂居民区花园捕获 4 只、农田捕获
6
1
3
表 3 延安市洛川县交口河镇鼠感染汉坦病毒 (HV ) 检测结果
鼠种
检测只数 HV 抗原阳性只数 ( IFA 法)
抗 HV 抗体 IgG 阳性只数
间接 IFA 法
EL ISA 法
感染率 (% )褐家鼠Βιβλιοθήκη 120小家鼠
6
黄胸鼠
1
大仓鼠
3
合 计
22
0
0
0
0
当地感染; 野外鼠密度低, 未发现黑线姬鼠, 室内 以褐家鼠、小家鼠为主; 虽然鼠肺抗原检测均为阴 性, 但 5 例鼠血抗体阳性, 说明当地鼠感染了汉坦 病毒; 245 例健康人特异性 IgG 抗体检测, 50 例阳 性, 提示延安市洛川县交口河镇存在较高人群隐 性感染。 疫区类型分析: 患者均为春季发病, 家鼠 为当地主要鼠种, 且抗体阳性鼠均为家鼠, 推测可 能为家鼠型疫区, 目前人血清标本的分型检测及 鼠肺组织 HV 的核酸检测正在进行, 其结果将为
性数 (% )
13 46. 43
7
25. 00
12 11. 65
2
40. 00
2
33. 33
12 17. 65
1
50. 00
0
0
1
100. 0
50 20. 41
4 鼠密度及鼠种调查情况 在交口河镇和
2 只, 其 中 家 鼠 19 只、野 鼠 3 只, 鼠 密 度 为 1. 37% , 见表 2。此前 1 年半内该地区曾组织 3 次大 规模捕鼠, 共捕鼠 1000 余只, 捕获率约 10% , 主 要鼠种有褐家鼠、小家鼠、黄胸鼠等。 5 鼠感染汉坦病毒 (HV ) 的检测结果 22 份鼠肺及鼠血标本 HV 抗原为阴性; HV 抗体间 接 IFA 法阳性 1 例, EL ISA 法阳性 5 例, 见表 3。
主题词 出血热, 流行性 流行病学 @ 汉坦病毒 鼠科
肾 综 合 征 出 血 热 (H em o rrhag ic fever w ith rena l synd rom e, H FR S ) 是 由 汉 坦 病 毒 (H an taviru ses, HV ) 引起的自然疫源性疾病。 啮 齿类动物为主要传染源, 其携带病毒的排泄物经 接触、呼吸道、消化道和虫媒等多种途径传播给 人, 引起发病。 临床上以发热、充血、出血、低血压 休克和急性肾功衰竭为主要表现。该病流行于亚、 欧、美洲等至少 78 个国家, 我国为主要疫区。该病 发病率高, 表现复杂, 病情变化极快, 若不能得到 及时、正确的诊治, 病死率很高。 近年来该病疫区 不断迁移扩大, 新疫区不断出现[1～ 3 ]。
缓冲甘油封片, 荧光显微镜检查。 5. 2 鼠血清抗汉坦病毒 IgG 抗体的检测
( IFA 法) : 用 0. 01M PB S (pH 7. 2) 稀释待测血清, 取 10Λl 加在抗原片上 (第四军医大学唐都医院感 染病科实验室馈赠) , 置湿盒内, 后同上步骤洗涤、 加荧光抗体、吹干、封片及镜检。
陕西医学杂志 2003 年 12 月第 32 卷第 12 期
1123
检测汉坦病毒 (HV ) 特异性 IgG 抗体。 被检者均 为当地长期居民, 无发热、充血、出血、低血压休克 和肾病肾炎及肾功衰竭病史, 未接种出血热疫苗。
3 3 例患者回顾性调查 回访安塞 2 例、洛 川 1 例患者, 抽静脉血 5m l, 分离血清, - 20℃保 存, 检测抗 HV 特异性 IgG 抗体, 并进行血清学 分型。
6 间接酶联免疫法 (EL ISA 法) 检测汉坦 病毒 IgG 抗体[5 ]
6. 1 人血清抗汉坦病毒 IgG 抗体的检测: 采用夹心法检测特异性 IgG 抗体, 具体操作简述 如下: 首先应用纯化 HV 病毒抗原包被聚苯乙烯 微板, 4℃过夜孵育后常规洗板, 加入 1∶20 稀释 的待检人血清 37℃温育 30m in 后常规洗板, 与抗 人 IgG 单克隆抗体过氧化酶结合物 (兰州生物制 品研究所试剂批号为: 20020703) , 最后常规显色 并以酶联读数仪测定波长 450nm 时每孔的吸光 值 A。 结果判断: 阳性对照血清 OD 值≥临界值 (Cu toff 值) , 阴性对照血清 OD 值≤0. 110, 试验 结果成立。 计算 2 孔阴性对照血清 A 值的平均 值, 若均值小于 0. 090 按 0. 090 计算。临界值= 0. 100 + 阴 性 对 照 A 均 值。 待 检 样 品 的 A 值 ≥ Cu toff 值判为阳性, 小于 Cu toff 值判为阴性。
HV 隐性感染率调查结果
人群类别 居住 工作地点
农民
交口河镇 1 组 交口河镇 2 组
环卫工人 延炼厂区及周围
电话班工人 延炼厂区及周围
冶炼工人
厂区内
食堂职工 厂区内食堂
学生
交口河镇 2 组
司机
延炼厂
医务人员 交口河镇 2 组
合计
检测 人数
28 28 103 5 6 68 2 4 1 245
抗体阳隐性感染率
材料与方法 1 人间疫情调查 查阅延安市疾控中心疫 情资料, 采访病例发生地卫生、防疫有关人员了解 疫情及其后疫情发生地处理情况; 查看延安大学 医学院附属医院、延安炼油厂职工医院收治 5 例 本地发生 H FR S 患者病历, 回访患者及有关医务 人员, 了解患者生活、工作环境、发病情况及诊治 经过。 2 人群隐性感染率调查 选择延安市洛川 县发病患者居住地洛川县交口河镇的 2 个自然村 及其工作单位延安炼油厂为调查点。随机抽取 16 ～ 60 岁工人、农民、学生、医务人员及居民等共 245 例, 抽静脉血 3m l, 分离血清, - 20℃保存备
6. 2 鼠血清抗汉坦病毒 IgG 抗体的检测: 操作方法及结果判断同上, 其中待检标本为鼠血 滤纸条缓冲液浸泡液, 羊抗人辣根过氧化物酶购 于华美生物工程公司。
结 果 1 人间疫情调查 2001 年发现的 7 例病人 分布在延安市南、北 4 个县区 (安塞 2 例、甘泉 1 例、洛川 2 例、黄陵 2 例)。患者发病前 2 月均无外 地旅居史, 属当地感染, 临床表现典型, 无疫苗接 种史, 急性期经出血热诊治权威机构 (陕西省疾控 中心和第四军医大学唐都医院感染病科) 进行血 清学检测确诊; 病后 1 年余检测 3 例患者血清抗 HV 特异性 IgG 抗体, 仍为阳性。 2 人群隐性感染率调查结果 检测 245 例 人血清标本汉坦病毒特异性 IgG 抗体, 阳性 50 例, 其中农民 20 例、工人 16 例、食堂工作人员 12 例、学生和村医各 1 例, 人群隐性感染率为 20. 41% , 见表 1。 3 3 例患者回顾性调查 回访安塞 2 例、洛 川 1 例患者, 检测血清抗 HV 特异性 IgG 抗体, 结