抑制素A及促性腺激素对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟的影响
卵母细胞体外成熟的影响因素
卵母细胞体外成熟的影响因素乔利敏1,2 黄成定2 李向臣1 姚雅馨2 关伟军13 马月辉1(1中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100094 2甘肃农业大学动物科技学院兰州730070) 【摘要】随着哺乳动物体外受精、细胞核移植技术的不断深入,人们对成熟卵母细胞以及哺乳动物胚胎需求量日益增加,卵巢内丰富的卵泡资源是胚胎工程迅速发展的基础。
本文从卵巢因素、供体、体外培养条件和成熟培养液中添加成分等对卵母细胞IVM的影响进行了分析,为胚胎的体外生产提供理论基础和科研依据。
关键词:卵母细胞;体外成熟;影响因素 胚胎移植技术成熟与否是胚胎工程技术成败的基础,而卵母细胞体外成熟质量又是决定胚胎移植技术成功的关键。
IVM可以为体细胞核移植提供大量的受体细胞,也为体外受精提供大量的MⅡ期卵母细胞,因此IVM已经成为胚胎体外生产和体外受精的重要环节之一。
虽然近几年来在卵母细胞的体外成熟方面已经取得了飞速发展,但是卵母细胞的体外成熟还存在很多问题。
现就卵母细胞体外成熟的影响因素进行概述。
1 卵巢因素和供体对卵母细胞体外成熟的影响1.1 卵巢所处性周期的影响有学者研究表明,卵巢所处性周期阶段影响卵母细胞的成熟培养,在无黄体期卵巢上的卵母细胞比黄体期和黄体前期卵巢上卵母细胞成熟效果要好。
崔亚利等〔1〕根据卵巢上是否有明显突出卵巢表面的黄体,将卵巢分为黄体期和卵泡期,分别在两期卵巢上卵泡中抽取卵母细胞进行体外成熟培养发现,二者无统计学差异,但是卵泡期卵母细胞成熟培养效果(63.9%)较好,说明卵巢性周期阶段对卵母细胞体外成熟存在一定影响,但影响不大。
2000年郭继彤〔2〕对繁殖季节和非繁殖季节山羊卵母细胞进行研究发现,非繁殖季节可采集到比繁殖季节更多的可用卵母细胞,并且非繁殖季节的屠宰山羊卵巢卵母细胞成熟培养效果(74.1%)优于繁殖季节的屠宰山羊卵巢卵母细胞(67.7%)。
在非繁殖季节屠宰的山羊,几乎没有大卵泡的发生。
年龄、成熟方式及培养液对小鼠卵母细胞体外成熟和人工活化的影响
生长在 Ml 6培养液 的 比率 (29 ) P< . 1. 果表 明 昆明 白小 鼠卵母 细胞 的体 外成 2 .% ( 00 ) 结
熟不 受年龄 影 响 , 体外 成熟的 卵母 细胞人 工活化后 支持 发 育的能 力比体 内成熟 的差 , T HF
培养 液更适合 小鼠 卵母 细胞人 工活化后 的进一 步发育.
明 白 小 鼠 卵母 细胞 体 外 成 熟 和 人 工 活 化 的 影 响 . . 1 5月 龄 、 月龄 、 细胞其体 外成熟 率无差异 ( 0 0 ) 经人 工 活化后 , 体 内成熟 的 P> . 5 . 与
卵母 细胞 相 比, 外成 熟的卵母 细胞 发 育到 原核期 胚 和 2 细胞 期 胚 的 比率都 明显 降低 ; 体 一 体 外成 熟的 生长在 H F培 养液 的卵母细胞 发育到 2 细胞 期胚 的 比率 (4 4 ) T 一 4 . % 显著 高于
胞在 促卵泡激 素和促黄 体激素 的作用下 向成熟 卵 子转 化的过程 ‘ 长足 的 卵 母细胞 在 体外 培 养条 。 .
件下 可不依赖激 素 而 自发 成熟 , 卵母 细 胞 体外 成熟 为研究 卵母细胞 的体 内成熟 机制提供 了理想
的结构 和生 化模 型 , 且 可以 为核 移植 及基 因操 而
对 7 .% ~ 24 ( 表 1 . 74 8 .% 见 )
胞直 接用 于体 外 成 熟 . V 期 卵母 细 胞 分 别 取 自 G 注射 P S M C和未注射 P S M G的小 鼠.
MI期 卵母 细 胞 的 收集 : 只 雌 鼠腹 腔 注 射 I 每
7 5I . U的 P G,8h后注 射 5 I 的人绒 毛膜 促 MS 4 U 性腺激 素 ( C 宁波激 素制 品厂 ) 行超 数排 卵 , h G, 进 l 5~1 6h后 断颈处 死 小 鼠 , 从输 卵管 壶 腹膨 大部
促性腺激素对小鼠卵巢透明质酸和间α胰蛋白酶抑制剂表达的影响
CHI NE S E J oURNAL OF ANAT OMY Vo 1 . 3 0 N o . 4 2 0 0 7
解剖学杂志
2 0 0 7年第 3 O卷第 4期
促 性 腺激 素对 小 鼠 卵巢 透 明质 酸 和 间 I 口 【 胰 蛋 白酶 抑 制 剂 表 达 的 影 响
吴 吉文 卓 丽圣 木全 弘 治 王 玮
( 1福建 医科大学人体解 剖学与组织胚胎学系 ,福州 3 5 0 0 0 4 ; 2日本爱知医科大学分子 医科学研究所 , 名古屋 4 8 0 — 1 1 9 5 )
摘要 目的: 观察促 性腺激素对野生型和 b i k u n i n基 因敲除小 鼠卵巢 透明质酸( HA) 和间a 胰蛋 白酶抑制剂( I TI ) 表达 的影响 。方法 : 应用 免疫组织 化学 法检测激素诱导后 HA和 I TI 在野 生型和 b i k u n i n基 因敲除小 鼠中的表达 。结果 : HA阳性 表达分布于野生型和 b i k u n i n 基 因敲除小 鼠卵巢 , 给 予促性 腺激泉后 , 其 表达增 强 ; 在 野生 型小 鼠卵泡 周 围 I TI 呈阳性Байду номын сангаас达 , 在 b i k u n i n基因敲除小 鼠 I TI 表达不受影 响。结论 : HA和 I TI 在卵泡发育 中起重要作用 。 关键词 促性腺激素 ; 卵巢 ; 透明质酸 ;间 a 胰蛋 白酶抑 制剂
Ef f e c t s o f g o n a d o t r o p hi n o n e x p r e s s i o n o f hy a l u r o n a n a n d i n t e r t r y p s i n i n hi b i t o r i n t h e o v a r y o f mi c e
不同添加成分对绵羊卵母细胞体外成熟的影响
( 南 科 技 学 院 , 南 新 乡 43 0 ) 河 河 5 0 3
摘 要 : 卵母 细胞体 外成 熟是胚 胎 工程 中的一项基 础性 研 究 。试验 比较 了不 同添加 成 分对 绵 羊 卵母 细
胞 的体外成 熟及其后 续发 育 的影响 。分析 了 E GF不 同添加量 、 S : H 的 不 同配 比和 不 同大小 卵泡的 卵 F H L
16 9 5年首 次进行 了牛 的 未排 卵 子 的体 外 培养 , 开 方案 进行体 外 成 熟 培 养 。培 养 条 件 为 3 拉 Omm 培养 了体 外胚胎 生产 研 究 的序 幕 , 着 卵 母 细 胞 体外 成  ̄ ( 0 L 、8 5℃ 、 积 分 数 为 5 的 C 、 和 接 50 )3 . 体 O2饱
熟先 后在小 鼠 、 鼠 、 鼠 、 、 、 大 仓 兔 猪 山羊 、 羊 、 、 绵 牛 恒 湿度 。
河猴 等动物 和人上取 得成 功 。卵母 细胞 体外 成熟 是 指通 过活体取 卵或从 屠 宰家畜 或其 他 屠宰 动物 获得 卵母 细胞 , 一定 的实验 条件 下 , 拟 动物 体 内生理 在 模 生化环境 , 卵母 细 胞恢 复 减 数 分 裂 的 技 术 。虽然 使 果 , 它毕竟是模 拟动 物体 内的 生理 生化 环 境 , 有 但 总
1 2 绵 羊 卵 巢 的采 集 、 . 运输 及 绵 羊 卵母 细胞 的采 在 3 . 8 5℃、 积分数 为 5 的 Co 、 和湿度 下进 行 体 2饱
将在 新乡市 屠宰 场 采 集 的绵 羊 卵 巢 置 于 2 5℃
卵母 细 胞 经 过 培 养 能 够 自发 地 成 熟 。E w r s于 d ad
实验 室 。 用 抽 吸 法 采 集 卵 丘 卵 母 细 胞 复 合 体
激素对小鼠胚胎体外发育的影响
早 期胚胎 体外 培养 技术 在发 育生 物学 、 胎 移植 、 胚 转基
《 现代 农业科 技 ̄ O O年第 3期 2l
动物科 学
激素对小鼠胚胎体外发育的影响
姚 瀛 徐 营 陈毅斐
( 兴 学 院 医学 院 , 江 嘉 兴 3 4 0 ) 嘉 浙 10 1
摘要 探 讨 小 鼠胚胎 体外 发 育过程 中. 2种激 素 ( 孕马 血清 促性 腺激 素 P S 人 绒毛 膜促 性腺 激 素 H G 对早 期胚 胎发 育 的影 响 。 M G、 C ) 取 原核 期胚 胎培养 于不 同的培 养体 系中, 确定适 合胚 胎发 育的 最佳体 外培 养体 系; 在胚 胎培 养 液 中加 入 不 同浓度 的激素 , 察激 素对体 外发 观 育的影 响 试 验发 现含 1%胎 牛血 清的人 输 卵 管液培 养液 ( ) 该试 验条 件 下 小鼠早 期胚 胎 发 育的 最佳 培养 液 ; 0 H F是 r 在该 培 养液 中添 加 不
因动物 等领 域 的研究 工作 中都 有很 重要 的作 用l 早期胚 胎 l l 。 发 育 是一个 复杂 的过程 , 在此 过程 中 , 受到 各种 激素 的影 可 响 , 素通 过 不 同途 径来 调 控 早期胚 胎 发 育【 】目前 , 不 激 2。 . 3 在 孕治 疗 中经 常使 用 到各 种 促排 卵 激 素 , 孕 妇妊 娠 期 间 也 在 经 常使 用一 些激 素类药 物 , 报道 , 有 使用 不 同剂 量和 不 同种
促性腺激素对山羊卵母细胞体外成熟的影响
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文 献标 识 码 : A
文章 编 号 : 5 9 6 0 ( 0 0 0 —0 60 0 2 — 0 5 2 1 ) 70 0 — 2
促 性 腺 激 素 对 卵 母 细 胞 成 熟 的 启 动 发 挥 重 要 作
一 一 t 一 一 一 一 ’ ~ … 一 … … … … ,… ,…
2. 5
山羊 羔股骨骨膜 内成 骨 细胞 , 而本试 验 应 用 的是体 外培养 的绵羊 颅盖 骨 成骨 细 胞 。同时 , 本试 验 的结 果也提示 , 高浓度 Na F可能增 加成 骨细胞 线粒 体膜 的通透性 , 启动 了线 粒 体凋 亡 信号 转 导途 径 。其 具 体机制 尚待进一 步研究 。
(. 1 仲恺 农 业 工 程 学 院生 命 科 学 学 院 , 东 广 州 5 0 2 ; 广 12 5
2 上 海 交通 大学 医 学 院 实 验动 物 科 学部 ,上 海 长 宁 2 0 2 ) . 0 0 5
摘 要 : 了建 立 针 对 山羊 卵 母 细胞 的理 想 体 外 成 熟 培 养 体 系 , 试 验 研 究 了在 成 熟 培 养 液 中 添 加 不 同浓 度 的 促 卵 泡 素 为 本 ( lc t l ighr o e F H)促 黄体 素 (ue in om n , H)不 同来 源 的 F H + L 对 山 羊 卵 母 细 胞 体 外 培 养 f ll smua n om n , S 、 oie i t 1 i z gh r o e I , tni s H
参考文献 :
[ ] 徐 辉 , 桂 珍. 性 氟 中 毒 非 骨 相 损 害 与 细 胞 凋 亡 口] 地 方 病 1 张 慢 .
影响哺乳动物卵母细胞体外成熟的主要因素
6 3 气 相 条 件 . 体外培养 一般采 用含 5 c 的宅气 , 5 +5 %Ca 或 %( %
O +9 %N 2 0 2的气体 。培养 系统 内 C 2很关键 , O 它是培养基
缓冲体系维持正常 p H所 必 需 的 , 以平 衡 培 养 基 , 可 且有 助 于 细 胞 代 调 中 的 丙 酮 酸 转 换 成 草 酰 乙 酸 , 于细 胞 成 熟 } 利
猪 4 ~4 。 2 8h
的 体 外 受精 结 果 优 于 小 卵 泡 ( <2mm) 。 卵
3 采卵季 节及卵细胞 供体 的具体 情 况
3 1 采 卵 季 节 .
卵巢 卵 母 细胞 的成 熟潜 力与 采 卵 的 季 节密 切相 关 , 般 一 认 为 在动 物 繁 殖 季 节 或 气 候 适 宜 的 季 节 获 取 的 卵 泡 卵母 细
甚 为 耍 | n 等研究牛体外成熟表 明,5 一9  ̄z e 3 一3 V之间的温 度 对 牛 卵母 细胞 体 外 成 熟 无 甚 影 响 , 随 后 的体 外 受精 则 是 但
依 赖 温 度 的 。对 于 湿 度 的 调 : 一般 需在 C 2 养 箱 内 放 置 , O 培 调湿盘 , 以维 持 9 % - 0 % 的 相 对 湿 度 , 而 维 持 培 养 基 9 - 0 1 进
维普资讯
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5 8・
《 上海 畜牧 兽 医通讯 》 2 0 0 6年 第 6期
影 响 哺 乳 动 物 卵母 细 胞 体 外 成 熟 的 主要 因素
师如 意 张拴林 (山西农 业大学 动物科 技学 院 …西 太 谷
卵母 细胞 体 外 成 熟 圮 养 技 术 是 哺 乳 动 物 体 外 受 精 披 术 的重 要 环 节 之 一, 应 用促 性腺 激 素 和 类 同醇 激 素 在 体 外 模 是 拟 卵泡 的 环 境 , 而诱 发 卵母 细 胞 成 熟 的 一 项 生 物 技 术 土 进
哺乳动物卵母细胞体外成熟培养中影响因素分析
外 培养 成 熟 、 和胚 胎 发育 的研 究 . . 受精 上海 实 验动 物 [ 3 李 子 义 , 景 和 , 兴 参 , . 同激 素 剂量 对 幼 鼠超 排 及 6 J 谭 孙 等 不
科学 ,0 34 2 0 ,.
超排卵质量的影响. J I. J 黑龙江畜牧兽医,9 9 ( )24 19 , :2 . 3
小 试管小 [ 1 尹海林 ,陈秀兰. 鼠卵母细胞体外培养成熟及 “ 6] 鼠” 的研究. J [. J 遗传 ,9 93 18 ,. 郑凤娇. 小鼠超数排卵的试验方法. l 【 生物学通报 , J [2 杨慧 , 6 J
20 02, 2: . 1 49
高敏芝 , 汪玉宝 , 吴晓云 , 小 鼠生殖泡期卵母 细胞体 等.
层 卵丘 细 胞合 成 物 逐 级 传 送 给 卵母 细 胞 起 重 要 作 认 为 ,卯母 细 胞 的 成熟 率 与采 集 C C 时 的 卵泡直 Os 用 。弓超 通过试 验对 牛卵母 细胞 不 同形式 的处 理 , 讨 径关 系密切 , 卵母 细胞 体外 培养 过程 中 , 在 宜选 择 卵 论 细胞 问隙连 接对 于其 体外 成熟 的影 响作用 。在最 巢 发育 正 常 的卵泡采 集 ,不 宜选 择发 育过 大或 过 小 适 于 卵母 细胞 体 外 成 熟 的 浓度 (. I/L 条 件下 , 的边 际 卵泡l。在 挑选 卵 母 细胞 时 要尽 可能 挑 选 卵 1 m ) 2U 1 2 1
分挖 掘优 良母 畜 的繁 殖潜 力 ,加 速 良种 家畜 的繁殖 纤维 中心最多 ,但 尚未发生致密化 ;到直径 3 ~ l . 5Im 5 T 和育 种进 程 ,而且 为胚 胎 工程 的其它 研究 以及拯 救 卵泡 , 颗粒 细 胞突 起 开始 退化 , 卵母 细胞 微 绒 毛 自透
影响人卵母细胞体外成熟因素的研究进展
影响人卵母细胞体外成熟因素的研究进展高佩安;王飞;王庆果【摘要】@@ 卵母细胞体外成熟培养(In Vitro Maturation,IVM)是指将GV期或GV前期的卵母细胞在体外培养,达到次级卵母细胞(MII),能够正常发育、受精和着床,包括完整的卵泡培养[1]和单纯的卵丘复合体培养.在现代生殖领域中,IVM为降低患者促排卵并发症、降低治疗费用提供了解决途径,利用该技术可为一些高龄、卵巢早衰、卵巢切除和遗传病患者提供生殖机会,同时也有助于深入了解卵巢内不同发育阶段卵泡的发育机制和特点,但目前IVM的成功率还很低.【期刊名称】《泰山医学院学报》【年(卷),期】2009(030)007【总页数】4页(P552-555)【关键词】卵母细胞;体外成熟;影响因素【作者】高佩安;王飞;王庆果【作者单位】泰山医学院;泰山医学院;泰山医学院【正文语种】中文【中图分类】R321.1卵母细胞体外成熟培养(In Vitro Maturation,IVM)是指将GV期或GV前期的卵母细胞在体外培养,达到次级卵母细胞(MII),能够正常发育、受精和着床,包括完整的卵泡培养[1]和单纯的卵丘复合体培养。
在现代生殖领域中,IVM为降低患者促排卵并发症、降低治疗费用提供了解决途径,利用该技术可为一些高龄、卵巢早衰、卵巢切除和遗传病患者提供生殖机会,同时也有助于深入了解卵巢内不同发育阶段卵泡的发育机制和特点,但目前IVM的成功率还很低,要从根本上提高其成功率,必须对卵母细胞发育的相关影响因素进行研究和探讨。
1 体外因素1.1 促性腺激素促性腺激素(Gn)是参与卵泡发育调节的主要蛋白质激素。
研究显示Gn能通过诱导c-fos、c-myc、c-myb、c-erbB-2等癌基因的表达而调控颗粒细胞的分化和甾体激素分泌[2]。
Gn能通过cAMP途径促进颗粒细胞增生,卵丘细胞膨散。
卵泡刺激素(FSH)对卵母细胞的作用可能是通过刺激卵丘细胞分泌促卵母细胞成熟因子,该因子的产生就有赖于cAMP水平的变化[3] 。
不同剂量激素处理对小鼠超数排卵及产仔性能的影响
不同剂量激素处理对小鼠超数排卵及产仔性能的影响周晓旭;李雁冰;宁博林;孙蕊;郭丽;李庆达;韩静;李井春【期刊名称】《黑龙江八一农垦大学学报》【年(卷),期】2015(000)003【摘要】研究不同激素组合处理对小鼠超数排卵及产仔性能的影响,以便获得适宜的超数排卵的激素使用剂量。
分别用不同剂量孕马血清促性腺激素(PMSG)和人绒毛膜促性腺激素(HCG)注入小鼠体内进行超数排卵处理,比较激素处理后小鼠卵母细胞成熟率、产仔数、胎儿出生重及性别比。
结果显示,5 IU PMSG+5 IU HCG剂量组和10 IU PMSG+10 IU HCG剂量组合相比较,卵母细胞成熟率差异不显著(P>0.05),5 IU PMSG+5 IU HCG剂量组平均产仔数最高;10 IU PMSG+10 IU HCG剂量组的胎儿平均初生重最高,但产仔数少。
综合以上,在实验中,5 IU PMSG+5 IU HCG剂量组合进行超排处理效果最好。
【总页数】4页(P32-35)【作者】周晓旭;李雁冰;宁博林;孙蕊;郭丽;李庆达;韩静;李井春【作者单位】黑龙江八一农垦大学动物科技学院,大庆 163319;黑龙江八一农垦大学动物科技学院,大庆 163319;黑龙江八一农垦大学动物科技学院,大庆163319;黑龙江八一农垦大学动物科技学院,大庆 163319;黑龙江八一农垦大学动物科技学院,大庆 163319;黑龙江八一农垦大学工程学院;黑龙江八一农垦大学信息技术学院;黑龙江八一农垦大学动物科技学院,大庆 163319【正文语种】中文【中图分类】S814.8【相关文献】1.激素的不同剂量对小鼠超数排卵的影响 [J], 郭庆勇;况玲;蒋国英;刘小兰;袁龙;张毅;侯宇;白亚峰2.不同剂量促卵泡素对成年和牛超数排卵效果的影响分析 [J], 孙凤俊;焦子康;薛建华;宣柏华;张佳谊3.不同剂量PMSG/HCG对小鼠超数排卵的效果 [J], 冯雨峰;闫雷4.子宫内不同激素处理对母猪产仔数的影响 [J], 李小军5.不同胎次和产仔季节对母猪产仔性能的影响及窝产仔数分布研究 [J], 郭亮;姜威;刘则学因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
卵母细胞体外成熟技术的临床应用进展
卵母细胞体外成熟技术的临床应用进展李涵;杨志勇【摘要】In vitro maturation (IVM) refers to the maturation of immature oocytes at different stages.Immature oocytes obtained in different origins have different subsequent embryonic development capacity and pregnancy rates as well health live births rates.IVM as an efficient treatment has been used in those patients with polycystic ovary syndrome,ovary high response or low response,and fertility preservation.Several thousands of healthy IVM babies have been born in the world.The improvement of clinical IVM technology focuses on IVM medium,the optimization of the culture environment and operation process.With the improvement of IVF efficiency and IVM culture system,the new treatment option was proposed that the combination of natural cycle/ mild stimulation IVF treatment with immature oocyte retrieval and the followed IVM.This IVF combined with IVM may represent a viable alternative to the present standard treatment,or as a potential first-line treatment in future.%卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)是将处于不同时期的未成熟卵母细胞体外培养成熟的技术,临床不同来源的未成熟卵母细胞在胚胎发育潜能、妊娠率和活产率等方面存在差异.IVM作为一种有效治疗手段可应用于治疗多囊卵巢综合征、卵巢高反应及低反应患者、癌症患者生育力保存等,该技术已在全世界应用并有数千名健康婴儿出生.临床IVM技术的改进主要包括IVM培养基的改良、培养环境及操作流程的优化.目前,随着体外受精(IVF)效率的提高和培养体系的改进,自然周期或温和刺激可能更适合于进行IVF治疗的女性.新的治疗方案提出将自然周期/温和刺激IVF与IVM结合,温和刺激IVF联合IVM治疗方案不仅有望成为目前标准治疗的可行替代方案,而且可能是潜在的一线治疗选择.【期刊名称】《国际生殖健康/计划生育杂志》【年(卷),期】2017(036)005【总页数】5页(P412-416)【关键词】卵母细胞;细胞培养技术;生殖技术,辅助;受精,体外【作者】李涵;杨志勇【作者单位】200032上海,同济大学附属第十人民医院生殖医学中心;200032上海,同济大学附属第十人民医院生殖医学中心【正文语种】中文20世纪60年代人类卵母细胞体外成熟技术(in vitro maturation,IVM)取得里程碑式进展,人卵母细胞体外受精(in vitro fertilization,IVF)也由IVM卵母细胞建立。
哺乳动物卵母细胞体外培养研究进展(发育生物学论文)
哺乳动物卵母细胞体外成熟研究进展生科1202班张文娅201224140212摘要:卵母细胞体外成熟培养已经成为现代胚胎生物技术的重要内容之一,是性别控制、体外受精、核移植和转基因等技术成功前提和关键[1]。
关键字:哺乳动物;卵母细胞哺乳动物卵巢内含有大量的原始卵泡,其数量因物种和发育阶段而不同,如出生小鼠大约为一万个,人和家畜约为几百万个。
到初情期后,小鼠约四千个,牛羊约十万个,猪约四十多万个,但大部分卵泡中途闭锁退化,在一个生殖周期中发生排卵的卵泡只有一个或几个[2]。
所以说,哺乳动物卵巢的开发潜力很大。
1 卵母细胞的获取卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)是指从卵巢中获取未成熟卵,经过适宜的体外培养条件,卵母细胞发育成熟并具有受精和胚胎发育能力。
哺乳动物卵母细胞体外成熟质量对卵母细胞的激活、受精及其后继的胚胎发育均有重要影响[3]。
获取大量的优质卵母细胞是实现卵母细胞体外成熟培养的先决条件,也是胚胎生物技术研究的基础。
1.1 活体采集活体卵母细胞的采集主要有盲采法、内窥镜法和超声波法。
20世纪80年代初,Sirard首次将内窥镜用于牛卵泡卵母细胞的采集,同年Copata也以同样的方法获得成功;荷兰Pieterse等首次利用超声波技术通过子宫壁从活牛卵巢采集到卵母细胞。
盲采法由熟悉操作的人一只手通过操控采卵器进行阴道弯隆穿刺,另一只手直肠内配合引导采卵器并把握卵巢吸取含有卵子的卵泡液进行取卵[4]。
盲采法回收率达65%以上。
内窥镜法是在腹腔镜探头的观察下,通过操作杆和采卵针收集卵母细胞的方法。
内窥镜法对卵母细胞的回收率达40%-80%,超声波法回收率达60%。
盲采法是使用最多的一种方法。
活体采集对操作人员的技术要求比较高。
1.2 离体采集离体采集卵母细胞最大的优势在于取材方便,相比活体采卵技术,显著降低了卵母细胞的获取成本和对操作人员的技术要求,能够满足实验对大批量卵母细胞的需求。
激素对小鼠胚胎体外发育的影响
激素对小鼠胚胎体外发育的影响摘要探讨小鼠胚胎体外发育过程中,2种激素(孕马血清促性腺激素PMSG、人绒毛膜促性腺激素HCG)对早期胚胎发育的影响。
取原核期胚胎培养于不同的培养体系中,确定适合胚胎发育的最佳体外培养体系;在胚胎培养液中加入不同浓度的激素,观察激素对体外发育的影响。
试验发现含10%胎牛血清的人输卵管液培养液(HTF)是该试验条件下小鼠早期胚胎发育的最佳培养液;在该培养液中添加不同浓度和不同种类的激素后,各发育阶段胚胎的发育率与未添加激素的对照组相比均有所下降,但未发现浓度依赖性。
由此可认为,高浓度的PMSG和HCG对体外培养的胚胎发育有抑制作用,可降低胚胎发育到各阶段的比例,尤其是显著降低了囊胚的发生率。
关键词激素;小鼠胚胎;体外发育;影响AbstractThe system for mouse embryo culture,and the effects of two different hormone on mouse preimplantation embryos in vitro were explored.One-cell mouse embryos were cultured in different culture media to determine the optima system,and thendifferentconcentrationhormone were added to the medium to observe the effect ofhormone on mouse embryo development in vitro. HTF +10% FBS medium was the best culture system of mouse preimplantation embryod in viting. After hormone of different concentrations and kinds were added to HTF +10% FBS medium,the development rate of different stages embryos declines compared with control group. High concentration hormone could depress development of mouse preimplantation embryos in vitro,and lessens the developmental proportion of different stage embryos,then significant decreased the occurrence of blastocyst.Key wordshormone;mouse preimplantationembryos;development in vitro;effects早期胚胎体外培养技术在发育生物学、胚胎移植、转基因动物等领域的研究工作中都有很重要的作用[1]。
促性腺激素诱导大、小鼠卵母细胞体外成熟的差异
分类号:单位代码:10019 密级:学号:s01342硕士学位论文促性腺激素诱导大、小鼠卵母细胞体外成熟的差异Different Effects of Gonadotropins on Rat and MouseOocyte Maturation in vitro研究生:陈秀芬指导教师:夏国良教授申请学位门类级别:理学硕士专业名称:生理学研究方向:生殖内分泌所在学院:生物学院二零零四年六月独 创 性 声 明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。
尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。
与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。
研究生签名:时间:年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。
同意中国农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。
(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名:时间:年月日导师签名:时间:年月日目录缩略词表 (I)摘要 (II)Abstract (III)第一章文献综述 (1)引言 (1)第一节哺乳动物卵母细胞的发育和成熟 (2)1.1 卵母细胞的生长发育 (2)1.2 卵母细胞成熟 (2)1.3 卵泡的生长发育 (2)第二节卵母细胞第一次减数分裂阻滞和恢复 (4)2.1卵母细胞第一次减数分裂阻滞 (4)2.2 第一次减数分裂恢复 (7)第三节卵母细胞发育和成熟的体外研究模型 (15)3.1 卵泡培养模型 (15)3.2 卵母细胞培养模型 (15)第二篇实验部分 (16)第一部分大鼠、小鼠卵母细胞体外自发成熟和促性腺激素诱导成熟的比较研究 (16)1.1 材料与方法 (17)1.2实验处理及结果 (20)1.3 讨论 (28)第二部分 CYP51蛋白在大鼠卵巢中的表达以及RS-21607对大鼠卵母细胞自发成熟的影响 (31)2.1 材料与方法 (31)2.2 实验结果 (35)2.3 讨论 (36)结论 (38)参考文献 (39)致谢 (46)作者简历 (47)缩略词表(Abbreviations)Monophosphate 环一磷酸腺苷AdenosinecAMP CyclicCEO Cumulus Enclosed Oocyte 卵丘包被的卵母细胞DAB 3,3’-diaminobenzidine 对氨基联苯Oocyte 去卵丘卵母细胞DO DenudedHormone 促卵泡激素FSH Follicle-StimulatingOocyte 卵泡包被的卵母细胞FEO Follicle-enclosedBreakdown 生发泡破裂VesicleGVBD GerminalGnRH Gonadotrophin Releasing Hormone 促性腺激素释放激素hCG Human Chorionic Gonadotropin 人绒毛膜促性腺激素HX Hypoxanthine 次黄嘌呤IBMX 3-Isobutyl-methylxanthine异丁基甲基黄嘌呤Hormone 黄体生成素LH LuteinizingMAPK Mitogen-Activating Protein Kinase 丝裂原蛋白激酶Sterols 促减数分裂甾醇ActivatingMAS MeiosisFactor 成熟促进因子MPF MaturationPromotingPB1 Polar Body 1 第一极体A 蛋白激酶AKinasePKA ProteinPKC Protein Kinase C 蛋白激酶CPMSG Pregnant Mare’s Serum Gonadotropin 孕马血清促性腺激素摘要卵母细胞体外成熟调控机理的研究对于开发卵巢中大量卵母细胞的资源,促进辅助生殖技术的提高具有重要的理论意义和应用价值。
卵泡刺激素及戊酸雌二醇对小鼠卵母细胞体外成熟的影响
卵泡刺激素及戊酸雌二醇对小鼠卵母细胞体外成熟的影响李莹;谭丽【期刊名称】《国际生殖健康/计划生育杂志》【年(卷),期】2012(031)006【摘要】目的:探讨卵泡刺激素(FSH)、戊酸雌二醇(E2)对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟、受精及卵裂能力的影响.方法:对雌性小鼠进行超促排卵后处死小鼠,取出卵巢,刺破卵泡,收集形态较好的未成熟卵母细胞,随机分为6组,在不添加激素的基础培养液中以及分别添加10,50 IU/mL的FSH及1,10,100 mg/L的戊酸E2的培养液中培养24h后,观察各组卵母细胞的成熟情况.对已成熟的卵母细胞进行体外受精,观察卵母细胞受精情况.受精后继续培养48~72 h,观察其卵裂情况.比较各组的成熟率、受精率和卵裂率.结果:①各浓度FSH组及各浓度戊酸E2组与对照组相比,成熟率[生发卵泡破裂率(GVBD率)、MⅡ率]及卵裂率的差别均无统计学意义(P>0.05).②10,50 IU/mL FSH组以及10 mg/L戊酸E2组的受精率分别为41.18%,40%和42.86%,均高于对照组(19.44%),差异有统计学意义(P<0.05);1,100 mg/L戊酸E2组与对照组相比受精率差异均无统计学意义(P>0.05).③各浓度FSH组之间以及各浓度戊酸E2组之间成熟率(GVBD率、MⅡ率)、受精率及卵裂率的差别均无统计学意义(P>0.05).结论:在小鼠体外成熟培养液中添加10,50 IU/mLFSH及10 mg/L戊酸E2能促进小鼠卵母细胞胞质的成熟,从而提高受精率.【总页数】4页(P445-448)【作者】李莹;谭丽【作者单位】南阳市中心医院妇产科;450014 郑州大学第二附属医院生殖中心【正文语种】中文【相关文献】1.小鼠年龄及卵丘—卵母细胞间联接的解离对卵母细胞体外成熟的影响 [J], 夏国良2.藏红花素对小鼠卵母细胞体外成熟能力的影响 [J], 艾日夏提·地里夏提;周正娜;张也;刘志强;章亚峰;赵茜;阿布力孜·吾斯曼3.褪黑素对高龄小鼠卵母细胞体外成熟的影响 [J], 胡慧茹;王健;张柳明;王彦虎;牛浩原;李拥军4.小鼠巨细胞病毒对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟的影响 [J], 王昕荣;陈素华;乔福元;艾继辉;刘海智;张心红5.卵泡刺激素和卵丘细胞对小鼠卵母细胞体外成熟的影响 [J], 石少权;苏兆娟;丘彦因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
促性腺激素在促排卵周期未成熟卵母细胞体外培养中的应用
第53卷 第7期 Vol.53 No.7 山 东 大 学 学 报 (医 学 版)JOURNALOFSHANDONGUNIVERSITY(HEALTHSCIENCES) 2015年7月 Jul.2015 收稿日期:2014 12 31;网络出版时间:2015 03 2615∶27网络出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/37.1390.R.20150326.1527.001.html基金项目:国家重点基础研究发展计划(973计划,2011CB944502);国家自然科学基金(81401266);山东省自然科学基金(ZR2013HQ053)通讯作者:李梅。
E mail:lee_mei@163.com 文章编号:1671-7554(2015)07-0061-04 DOI:10.6040/j.issn.1671 7554.0.2014.1017促性腺激素在促排卵周期未成熟卵母细胞体外培养中的应用宋兴瑰,陈子江,马水英,吴克良,李梅(山东大学附属省立医院生殖医学中心国家辅助生殖与优生工程技术研究中心生殖内分泌教育部重点实验室山东省生殖医学重点实验室,山东济南250021)摘要:目的 评价卵泡刺激素和人绒毛膜促性腺激素在促排卵周期未成熟卵母细胞体外培养过程中的应用价值。
方法 收集控制性超促排卵周期行单精子显微注射(ICSI)过程中得到的未成熟卵母细胞(MⅠ期和GV期),随机分为加促性腺激素培养组和不加促性腺激素培养组,培养24~28h后成熟卵母细胞进行ICSI授精,并观察胚胎发育情况,记录成熟率、受精率、卵裂率和优胚率。
结果 对于MⅠ期卵母细胞,是否使用促性腺激素不影响其24h成熟率、受精率、分裂率和优胚率(P>0.05)。
对于GV期卵母细胞,培养液中加入促性腺激素能提高优质胚胎率(31.3%vs4.2%,P<0.05),但两组的成熟率、受精率和卵裂率差异无统计学意义(P>0.05)。
Dynein抑制剂对卵母细胞体外成熟及cyclinB1 mRNA水平的影响
Dynein抑制剂对卵母细胞体外成熟及cyclinB1 mRNA水平的影响王晓梅;黄天华;谢庆东;张清健;阮烨【摘要】背景与目的:胞浆 Dynein(动力蛋白)做为微管负极方向的马达蛋白在细胞增殖进程中发挥重要作用.本实验采用原钒酸钠特异抑制 Dynein生物活性后,观察卵母细胞体外培养成熟率和cyclinB1基因转录水平变化,探讨 Dynein功能异常对卵母细胞成熟分裂进程的影响及相关机制.材料与方法:应用卵母细胞体外培养成熟技术、半定量RT_PCR和单细胞RT_PCR方法,分别检测加入 Dynein抑制剂前后卵母细胞成熟率和cyclinB1基因转录水平的变化.结果:12 h量效实验结果证实,不同浓度原钒酸钠作用后,5 μmol/L原钒酸钠即可明显降低小鼠卵母细胞成熟率,0~400 μ mol/L卵母细胞成熟率随着剂量的增加而显著减少;同时检测发现,50~500 μ mol/L原钒酸钠组卵母细胞cyclinB1 mRNA表达呈剂量依赖性增加.时程结果表明,卵母细胞与400 μmol/L原钒酸钠作用 1 h 以上,卵母细胞成熟率明显减少;体外分别培养4 h或 8 h后再放入含有原钒酸钠培养基中培养至 12 h,仍可明显抑制卵母细胞第一极体排放. 400 μ mol/L原钒酸钠作用后,卵母细胞内 cyclinB1 mRNA 时程表达水平与对照组相比,呈明显反向变化.结论: Dynein抑制剂诱导体外培养的卵母细胞减数分裂阻滞,成熟促进因子 (MPF)活性改变可能是 Dynein功能丧失后引起减数分裂停滞的一个机制.【期刊名称】《癌变·畸变·突变》【年(卷),期】2004(016)005【总页数】5页(P267-271)【关键词】动力蛋白;卵母细胞;细胞周期素 B1;原钒酸钠【作者】王晓梅;黄天华;谢庆东;张清健;阮烨【作者单位】汕头大学医学院生殖医学研究中心,广东,汕头,515041;汕头大学医学院生殖医学研究中心,广东,汕头,515041;汕头大学医学院生殖医学研究中心,广东,汕头,515041;汕头大学医学院生殖医学研究中心,广东,汕头,515041;汕头大学医学院生殖医学研究中心,广东,汕头,515041【正文语种】中文【中图分类】Q27卵母细胞非整倍性是引起妊娠失败和多种遗传疾病酌主要原因,体细胞非整倍性与肿瘤酌发生和形成密切相关,但其发生酌分子机制消不十分清楚。
促性腺激素诱导小鼠卵母细胞体外成熟机制的研究的开题报告
促性腺激素诱导小鼠卵母细胞体外成熟机制的研究的开题报告标题:促性腺激素诱导小鼠卵母细胞体外成熟机制的研究摘要:卵母细胞的成熟是实现生殖的关键步骤之一,其异常会导致不孕症等疾病的发生。
因此,研究卵母细胞成熟机制对于生殖医学的发展具有重要意义。
促性腺激素(gonadotropin,GtH)作为调节卵母细胞发育过程的重要激素之一,因其具有高效、安全、便捷等特点,被广泛应用于卵母细胞体外培养的研究中。
然而,目前关于GtH诱导卵母细胞体外成熟机制的研究还不够深入。
本研究将通过体外培养小鼠卵母细胞并使用GtH进行诱导,探究GtH对卵母细胞成熟过程的影响及其可能的机制。
具体研究内容和方法:1. 小鼠卵巢组织的收获与处理:选取健康成年雌性小鼠,取出其卵巢组织,将其浸泡在PBS中,割去脂肪和结缔组织,用组织破碎机打碎,制备单细胞悬液用于后续培养。
2. 小鼠卵母细胞的体外培养:将小鼠卵母细胞悬液加入培养基中进行培养,分为实验组和对照组,实验组加入不同浓度的GtH。
观察卵母细胞的形态变化和发育情况。
3. 细胞活力和凋亡率的检测:通过荧光素酶法和流式细胞计数法检测卵母细胞的活力和凋亡情况,以评价GtH对卵母细胞成熟的影响。
4. 卵母细胞染色体分离和孢子形成的检测:在卵母细胞体外培养后,对卵母细胞进行染色体分离,进一步观察卵母细胞成熟的情况。
并通过荧光显微镜观察孢子的形成情况。
预期结果:通过对小鼠卵母细胞体外培养的实验和数据分析,研究将得出GtH对卵母细胞成熟的影响,以及其可能的机制。
这些成果将有助于增进人们对卵母细胞成熟机制的理解,为相关的临床研究提供理论和实验依据。
小鼠卵母细胞体外成熟过程中热应激对胞质成熟的影响的开题报告
小鼠卵母细胞体外成熟过程中热应激对胞质成熟的
影响的开题报告
热应激是指生物体经历高温环境后所产生的生理反应,这种反应可
以影响细胞的生长、分化和发育。
在小鼠卵母细胞的体外成熟过程中,
热应激是否会影响胞质成熟与卵母细胞的受精能力仍然没有被充分明确。
本研究计划通过观察小鼠卵母细胞在不同高温条件下的体外成熟过程,探究热应激对胞质成熟以及卵母细胞受精能力的影响。
具体的研究
方案如下:
1. 分离并培养小鼠卵母细胞:采用小鼠卵巢切片法分离卵母细胞,
并建立卵母细胞的体外培养。
2. 热应激实验组的建立:设立不同高温(39℃、41℃、43℃)的实验组以模拟热应激。
3. 观测胞质成熟情况:采用荧光探针观测小鼠卵母细胞胞质内钙离
子浓度变化、荧光信号表达情况以及其他胞质成熟指标。
4. 检测卵母细胞受精能力:实验组卵母细胞与精子体外受精并观测
受精率,同时检测卵母细胞粒体功能情况。
通过上述实验设计,可以探究小鼠卵母细胞体外成熟过程中热应激
对胞质成熟以及卵母细胞受精能力的影响。
该研究结果对深入了解热应
激对卵子质量影响并为不育症治疗提供科学依据具有重要意义。
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重庆 医科大学学报 2 1 0 0年第 3 5卷第 4期 (o ra f o g igMe i l nv ri 0 0 Vo. o4) J un l n qn d a iesy2 1. 15N . o Ch c U t 3
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P 1排 出和皮质颗粒( o i lrn l ,G) B) C nc g ue C 染色情况。结果 :MS a a s P G组获卵数为(7 ± .) 只, P S 1. 2 个/ 无 M G组获卵数为(5 1 ) 2 6 1.4 . 9- 8 个/ 00 )P G组与无 P G组 的 P 1 只( . ;MS 5 MS B 率分别为 5 .%、07 尸 00 ) P G组 中 I HA2 0 30n/ 77 5 . %( > .5 。 MS N 0 、5 g  ̄组 的 P 1 r B 率较 对照组高( < . )无 P G组 中各 I HA组 P 1 P O0 ; MS 5 N B 率与对照组比较无显著差异 (> . )结论 : H A和 P S J 00 ; D 5 I N M G对体外培养 G V 期卵母 细胞核成熟有促进作用。
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【 关键词 】 抑制素 A 孕马血清促性腺激素 ; ; 卵母细胞; 体外成熟 ; 皮质颗粒 【 中国图书分类法分类号 】7 1 R 1. 6 【 文献标识码 】 A 【 收稿 日 】091—9 期 20—20
Th f c f n ii a d g n d to hc h r n nt e i io ma u a i nO ee f t h bnA n o a o r p i o mo e O vt t r t f e o i h n r o
【 btc Ojc v : vsg eh gi ac oi in ( HA it t a ri . e os Aloy s xa e wr A sat b t eT i ei tt s f ne f h iA I )nh ivrm tao M t d : l ct t cd e r ] e i on ta e i i n c n b N en i o u tn h eert e o
dv e t P S r p mi ’ proel ai a i et i MS (rgat aesrm gn dt p i) eo ei oy s i ddi o M Gg u ( c s e t a cvy s n c dwt P G penn m r eu oao ohn bfr gtn oct ) i n o e i n tw j e h r e tg e
抑制 素 A及促性腺激素对小 鼠未成 熟卵母细胞体外成 熟 的影响
孙 玉菡 , 丘 彦, 幸贵 邦 , 江萍 , 孟 胡 敏, 秦 芬
( 重庆 医科大学 附属第一医院辅助生殖 中心 , 重庆 40 1) 0 0 6
【 要】 摘 目的: 探讨抑制素 A Ih iA IHA 对小鼠未成熟卵母 细胞体外 成熟 ( t a ri , M 的影 响。 ( in , ) nb N I vrm t ao I ) ni o u tn V 方法 : 从孕马
血清促性腺激素 (rgat r rmgndt p i,MS 组 ( Penn ma s u a o oh P G) 使用 P G组 ,6例 ) ee o r n MS 1 及无 P G组 ( MS 未使用 P G组 ,0例 ) MS 2 获 得 的生殖泡期 ( e ia vsl, V) G r nlee G 卵母细胞在不同浓度 I HA的培养液 中进行体外培养 , m e N 观察第一极体 ( h r o r o y T e spl d , i f t ab