干细胞条件培养液促进小鼠卵母细胞体外成熟

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ＣＨＩＳＯＵＲＮＡＬＯＦＡＮＡＴＮＥＥＪ０ＭＹｌ３．０２Ｖｏ＿５Ｎｏ３２１
解剖学杂志
２１第３第３期ｏ２年５卷
干细胞条件培养液促进小鼠卵母细胞体外成熟
宣恒华冯定庆刘然赵卫东△
国家自然基金（００６６；徽省科技攻关计划（８１３２０）安徽３９１０）安００００１１；
省自然科学基金（１４６６７）１０００Ｍ１６
想的体外成熟培养体系应该具有获取便利、富含多种
细胞因子、接近卵母细胞体内发育的微环境等特性。并骨髓问充质干细胞（ｓｎｈｍａｓｅｃｉ，ＭＳｓｍｅｅｃｙｌｔｍｅｌｓＣ）可以合成、泌多种细胞因子，造血细胞发挥支持、分对营养作用，中很多细胞因子是卵母细胞发育成熟所其必需的。本课题组前期的研究表明，Ｃ条件培养液ＭＳｓ能够促进小鼠卵巢组织中卵母细胞发育、熟及胚胎成的发育＿。在此基础上，实验通过观察３类小鼠生发３］本泡（ｅｍｉａｖｓｃ，ＧＶ）母细胞在条件培养液ｇｒｎｌｅｉｅｌ卵
ａｉｔ．ｅｂｈｖｏｓｏｏｔａｇａｕｅＣＧ）ａｄｓｉｄｅｃｍｐｅｅｒｘｍｉｅｎｅｌｏｅｃｎｅｍｉｒｓｏｅｂｌｙＴｈｅａｉｒｆｃｒｉｌｒｎｌｓ（ｉｃｎｐｎｌｏｌｘｓｗｅｅｅａｎｄｕｄｒａｆｕｒｓｅｃｃｏｃｐ．Ｒｅ — ｓｌｓｕｔ：ＴｈｅａｅｏｉｓｏｒｅｃｔｇｒｅｆＧＶｏｙｅｕｔｒｄｉｏｃｔｓｃｌｅｎＣＭｒｌａｈｅｅｉｈｒａｕａｉｎｒｔｈｎｔｏｅｃｌｕｅｎｂｓｌｕｗｅｅａｌｃｉｖｄａｈｇｅｔｒｔａｅｔａｈｓｕｔｒｄｉａａｍｏｍｅｉｍ．Ｔｈｐｉｌａｕａｉｎｔｅｗｒｈｆｒｏｃｔｓｏｌｒｓｒｏｎｅｙｌｏｅｇａｕｏａｄｕｅｏｔｍａｔｒｔｉｅ１ｏｏｙｅｎｙｏｕｒｕｄｄｂｏｓｒｎｌｓ，ｗｈｌ４ｈｆｒｏｃｔｓｍｏｍ６ｉ２ｏｏｙｅｅｓｒｏｎｅｙｉｔｃｒｎｌｓｅｌｌｙｒ．ＯｏｙｅｅｔａｇｏｉｂｌｙｉｕｔｒｏｄｔｎｄｒｎＶＭ．ＴｈｉｔｉｕｕｒｕｄｄｂｎａｔａｕｏａｃｌａｅｓｇｓｃｔｓｋｐｏｄｖａｉｔＣＭｃｌｕｅｃｎｉｏｕｉｇＩｉｎｉｅｄｓｒｂ — ｔｎｏｉｆＣＧｎｖｍｅｔｏｐｎｌｓｃｍｐｅｎＩｏａｄｍｏｅｎｆｓｉｄｅｗａｏｌｘｉＶＭｏｙｅ，ｗｈｃｒｌｃｎｉｔｎｔｎｖｖｔｒｄｏｃｔｓｏｃｔｓｉｈｗｅｅｗｅｌｏｓｓｅｔｗｉｉｉｏｍａｕｅｏｙｅｈａｄｓｏｄｇｏｒｅｓｏｙｏｌｓｃｍａｕａｉｎｎｈｗｅｏｄｍａｋｒｆｔｐａｍｉｃｔｒｔ．Ｃｎｌｓｏｏｏｃｕｉｎ：ＣｏｄｔｎｄｍｅｉｍｆＳｓａｆｉｉｎＶＭｙｔｍ，ｎｉｏｅｄｕｏＣｓｉｎｅｆｅｔＩｉＭｃｓｓｅｗｈｃｅｅｉｕｌａｎｙｏｌｓｍａｕａｉｎｏｕｅＩｉｈｂｎｆｔｎｃｅｒａｄｃｔｐａｍｔｒｔｆｍｏｓＶＭｏｙｅｙｃｒｎｕｌ．ｓｏｏｃｔｓｓｎｈｏｏｓｙＫｅｒｓｏｃｔｓｙｗｏｄｏｙｅ；ｍｅｅｃｙｌｓｅｃｌ；ｉｉｒａｕａｉｎｏｔｃｌｇａｕｅｐｎｌｓｎｈｍａｔｍｅｌｓｎｖｔｏｍｔｒｔ；ｃｒｉａｒｎｌ；ｓｉｄｅｏ
２００）３０１（安徽医科大学，１附属省立医院妇产科，２分子医学实验室，合肥
摘要目的：研究骨髓问充质干细胞（Ｃ）ＭＳｓ条件培养液对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟的作用。方法：离、养小鼠分培ＭＳｓ获得ＭＳｓＣ，Ｃ条件培养液。收集３类生发泡期卵母细胞，分别在对照培养基和条件培养液中培养，观察卵母细胞成熟率，判断最佳时间点；ＤＦＡ、Ｈｏｃｓ３５ｅｈｔ２８和Ｐ联合染色评价细胞活力；光标记检测皮质颗粒分布、移及纺锤体复合３Ｉ荧迁物的形成情况。结果：条件培养液组３类生发泡期卵母细胞的成熟率高于对照培养基组；中，全／其完大部分裸露的生发泡卵母细胞和周围有疏松的颗粒细胞包裹的生发泡卵母细胞的最佳体外成熟时间为１，６ｈ有完整的数层颗粒细胞紧密包裹的生发泡卵母细胞的最佳体外成熟时间为２。体外成熟卵母细胞活力良好，４ｈ皮质颗粒分布及纺锤体复合物形成与体内成熟卵母细胞一致。结论：Ｃ条件培养液有利于小鼠体外成熟卵母细胞核、ＭＳｓ细胞质同步成熟，提高卵母细胞质量，是一种较好的体外成熟培养体系。关键词卵母细胞；间充质干细胞；体外成熟；皮质颗粒；纺锤体
ｖｔｏｍａｕａｉｎｏｕｅｉｍａｕｅｏｃｔｓｉｒｔｒｔｏｆｍｏｓｒｎｔｒｏｙｅ．Ｍｅｈｄ：ＴｈｕｅＭＳｒｓｌｔｄａｄｃｌｒｄｔａｖｓｔｏｓｅｍｏｓＣｓｗｅｅｉｏａｅｎｕｔｅＯｈｒｅｔＣＭ．Ｔｈｅｕｒｅ
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２２一７
第１作者Ｅｍａｌｘａｈｎｈａ．ｏ — ｉｕｎｅｇｕ＠１３ｃｒ：６ｎ
△通讯作者，－ｉｖｃｏｚａ＠１３ｃｍＥｍａｌｉｒｈｏ６．ｏ：ｔ收稿日期：２１－０２；回日期：２１ —２１０１１—６修０２０—４
Ｃｏｄｔｏｅｄｉｍｆｍｅｅｈｙａｔｍｅｌｅｅｉｓｉｉｒｔｒｔｏｆｍｏｓｏｙｅｎｉｉｎｄｍｅｕｏｓｎｃｍｌｓｅｃｌｓｂｎｆｔｎｖｔｏｍａｕａｉｎｏｕｅｏｃｔｓ
和激素等［，２一定程度上提高了体外成熟效率，仍然］但
存在卵母细胞成熟率低和核浆成熟不同步等不足。理
卵子体外培养成熟技术获得成功以来，外成熟技术体日臻成熟，仍然存在受精率低、胎移植后妊娠率低但胚等现象，究其原因还是由于尚未建立理想的培养体系致使卵母细胞核质成熟不同步ｌ。以往的体外成熟体１］
ｖｙｄｅｅ、Ｏｏｙｅｒｔｉｅｔｌｏｅｃｉｉｃｔｔ（ＤＡ）ｃｔｓｗｅｅｓａｎｄｗｉｆｒｓｅｎｄａｅａｅＦｈｕ，Ｈｏｃｓ３２８ａｄｐｏｉｍｏｉｅＰ）ｔｖｌａｅｔｅｃｌｖｅｈｔ３５ｎｒｄｕｉｄｄ（Ｉｏｅａｕｔｈｅ１ｉ
ｄｆｅｅｔｏｃｔｓｆｏｉｉｒｎｏｙｅｒｍｍｍａｕｅｇｒｎｌｖｓｃｅ（ｆｔｒｅｍｉａｅｉｌＧＶ）ｓａｅｗｅｅｃｌｃｅｎｕｔｒｄｉｈａａｅｉｍ（ｔｇｒｏｌｔｄａｄｃｌｅｎｔｅｂｓｌｍｄｕｅｕＤＭＥＭ，Ｓｅｒ）ａｄＣｔｍｐｏｎＭ（Ｍ，ＣＭ）ｒｓｅｔｅｙＩＳｅｐｃｉｌ．Ｔｈｐｉｌｉｎｔｒｔｏａｅｏｎｖｔｏｍａｕａｉｎ（ＶＭ）ｗｅｅｓｒｖｅｏｔｍａｍｅａｄｍａｕａｉｎｒｔｆｉｒｔｒｔｏＩｔｉｒｕ
体外成熟技术获取成熟的卵母细胞，为多囊卵巢、卵巢功能早衰，以及因病需要切除卵巢的年轻患者提供了生殖的机会。自１９９１年Ｃａ等首次报道未成熟ｈ
系是向基础培养基中添加血清、白蛋白、种细胞因子各