细菌内毒素检查法(凝胶法)
细菌内毒素检查法
细菌内毒素检查法细菌内毒素检查法（2005年一部）附录ⅩⅢD细菌内毒素检查法本法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
细菌内毒素检查包括两种方法，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法。
供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。
当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。
内毒素的量用内毒素单位(EU)表示。
细菌内毒素国家标准品系自大肠埃希菌提取精制而成。
用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。
细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于试验中鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及各种阳性对照。
凝胶法细菌内毒素检查用水系指内毒素含量小于0.015EU/ml的灭菌注射用水。
光度测定法用的细菌内毒素检查用水，其内毒素的含量应小于0.005EU/ml。
试验所用器皿需经处理，以去除可能存在的外源性内毒素，常用的方法是250℃干烤至少60分钟，也可采用其他确证不干扰细菌内毒素的适宜方法。
若使用塑料器械，如微孔板和微量加样器配套的吸头等，应选用标明无内毒素并且对试验无干扰的器械。
试验操作过程应防止微生物的污染。
供试品溶液的制备某些供试品需进行复溶、稀释或在水性溶液中浸提制成供试品溶液。
一般要求供试品溶液的PH值在6.0~8.0的范围内。
对于过酸、过碱或本身有缓冲能力的供试品，需调节被测溶液（或其稀释液）的PH值，可使用酸、碱溶液或鲎试剂生产厂家推荐的适宜的缓冲液调节PH值。
酸或碱溶液须用细菌内毒素检查用水在已去除内毒素的容器中配制。
缓冲液必须经过验证不含内毒素和干扰因子。
内毒素限值的确定药品、生物制品的细菌内毒素限值（L）一般按以下公式确定：L=K/M式中 L为供试品的细菌内毒素限值，以EU/ml、EU/mg 或EU/U（活性单位）表示；K为人每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/(kg.h)表示，注射剂K=5EU/(kg.h)，放射性药品注射剂K=2.5EU/(kg.h)，鞘内用注射剂K=0.2EU/(kg.h)；M为人用每公斤体重每小时的最大供试品剂量，以ml/(kg.h)、mg/(kg.h)或U/(kg.h)表示，人均体重按60kg计算，注射时间若不足1小时，按1小时计算。
内毒素实验凝胶法
4）75％乙醇
鲎试剂灵敏度复核试验
当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任何
可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度
复核试验。
鲎试剂灵敏度复核试验
根据鲎试剂灵敏度的标示值（λ）,将细菌内毒
素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡
混合器上混匀15分钟, 然后制成2λ、1λ、0.5λ和
0.25λ四个浓度的内毒素标准溶液，每稀释一步均 应在旋涡混合器上混匀30秒钟。
实验步骤
样品处理方法： a）管类和容器类器具用细菌内毒素检查用水浸泡器 具内腔，在（37±1）℃恒温箱中孵育不少于1h，取浸提 液进行试验； b）小型配件或实体类样品置无热源玻璃器皿内，加 入细菌内毒素检查用水振荡数次，在（37±1）℃恒温箱 中孵育不少于1h，取浸提液进行试验。 制备的供试液储存不应该超过2h。一般要求供试液的 PH值在6.0~8.0之间，如不在该范围内，可用鲎试剂厂家 提供的PH缓冲液调节浸提液的PH值。
凝胶法的试验步骤
下面我们结合中国药典2010、 GB 14233.2医
用输液、输血、注射器具检验方法 以及GB 15810
一次性无菌注射器 来学习具体试验方法。
实验步骤
浸提介质（细菌内毒素检查用水）体积计算公示：
V－－浸提介质体积，单位为（ml）； L－－产品细菌内毒素限值（该产品允许含有的 细菌内毒素的量），单位为EU/件； λ－－鲎试剂灵敏度的标示值，单位为EU/ml。
鲎试剂灵敏度复核试验
结果观察
将试管从恒温器中轻轻取出，缓缓倒转180°时，若管 内形成凝胶，且不从管壁滑脱者为阳性；若不形成凝胶，或 形成凝胶但倒转180°后从管壁滑脱者为阴性。
细菌内毒素检查法
细菌内毒素检测法----凝胶法一、准备材料：试剂及耗材名称用量细菌标准品（10EU/ml）1支细菌内毒素检查用水(2ml) 3支鲎试剂（0.1ml）4支15ml离心管3个1.5ml EP管2个1000µl枪头6个200µl枪头5个二、相关定义：1.细菌内毒素检查法：本法系利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法，内毒素的量用内毒素单位（EU）表示。
2.细菌内毒素国家标准品：系自大肠杆菌精制得到的内毒素，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。
3.细菌内毒素工作标准品：系以细菌内毒素国家标准品为基准进行标定，确定其重量相当效价，每1ng工作标准品效价应不小于2EU，不大于50EU。
细菌内毒素工作标准品用于试验中鲎试剂灵敏度复核干扰试验及设置的各种对照。
4.细菌内毒素检查用水：系指与灵敏度为0.03EU/ml或更高灵敏度的鲎试剂24小时不产生凝集反应的灭菌注射用水。
三、内毒素标准品稀释：10EU/ml的标准品加1ml细菌检查用水溶解，在涡旋仪上振荡15min。
箭头上方表示内毒素，箭头下方表示检查用水。
10EU/mL→稀释至2EU/mL→稀释至1EU/mL四、样品内毒素检测操作步骤1、样品阳性管：加样品液0.5ml+2EU/ml内毒素0.5ml，涡旋仪上混匀30s。
做内毒素检测用。
（为了核实样品中是否有抑制鲎试剂凝聚的物质，防止样品管出现假阴性导致误判，以证明供试品溶液的结果准确）。
2、阳性对照：1EU/ml内毒素0.1ml。
3、阴性对照：细菌内毒素检查用水0.1ml。
4、样品管：样品液0.5ml+细菌内毒素检查用水0.5ml，涡旋仪上混匀30s，做内毒素检测用。
5、鲎试剂的准备：每支鲎试剂用0.1ml检查用水溶解。
6、以上准备完成后，从1、2、3、4管中分别取0.1ml加到溶解好的鲎试剂中，封口膜封口，37度孵育1h。
中国药典2021年版《细菌内毒素检查法》
中国药典2021年版《细菌内毒素检查法》――凝胶法凝胶法凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量内毒素的方法。
在本检验方法规定的条件下，使鲎试剂凝集的内毒素最低浓度为鲎试剂的标记灵敏度，以EU/ml表示。
当使用新一批鲎试剂或试验条件发生任何可能影响试验结果的变化时，应进行鲎试剂的灵敏度审查试验。
根据鲎试剂灵敏度的标示值（λ），将细菌内毒素国家标准品或细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器上混匀15分钟，然后制成2λ、λ、0.5λ和0.25λ四个浓度的内毒素标准溶液，每稀释一步均应在旋涡混合器上混匀30秒钟。
取分装有0.1ml鲎试剂溶液的10mm×75mm试管或复溶后的0.1ml/支规格的鲎试剂原安瓿18支，其中16管分别加入0.1ml不同浓度的内毒素标准溶液，每一个内毒素浓度平行做4管；另外2管加入0.1ml细菌内毒素检查用水作为阴性对照。
将试管中溶液轻轻混匀后，封闭管口，垂直放入37℃±1℃恒温器中，保温60分钟±2分钟。
将试管轻轻地从恒温器中取出，并缓慢地翻转180度。
如果凝胶是在管中形成的，则凝胶不会变形，也不会从管壁上滑落。
形成或形成的凝胶不牢固，变形，并从壁上滑落。
在保温和取试管的过程中，应避免因振动引起的假阴性结果。
当最大浓度2λ管均为阳性，最低浓度0.25λ管均为阴性，阴性对照管为阴性，试验方为有效。
按下式计算反应终点浓度的几何平均值，即为鲎试剂灵敏度的测定值(λc).λc=1g-1(∑x/4）式中x为反应终点浓度的对数值（1g）。
反应终点浓度是指系列递减的内毒素浓度中最后一个呈阳性结果的浓度。
当λC在0.5λ-2λ（包括0.5λ和2λ）时，可用于细菌内毒素检查，并标记灵敏度λ为该批鲎试剂的灵敏度。
干扰试验按表1制备溶液a、b、c和d，使用的供试品溶液应为未检验出内毒素且不超过最大有效稀释倍数（mvd）的溶液，按鲎试剂灵敏度复核试验项下操作。
细菌内毒素检查法中凝胶法在药品中的应用及经验总结
细菌内毒素检查法中凝胶法在药品中的应用及经验总结1. 引言1.1 细菌内毒素检查法中凝胶法的概述细菌内毒素检查法中的凝胶法是一种常用的检测方法，用于检测药品中的内毒素水平。
内毒素是一种细菌产生的毒素，当进入人体后会引起一系列的炎症反应，严重时甚至会导致休克和死亡。
在药品生产过程中，内毒素检查是至关重要的环节。
凝胶法是内毒素检查中常用的一种方法，它通过将待测物与内毒素结合后形成凝胶来检测内毒素的含量。
凝胶法具有操作简单、检测快速、灵敏度高等优点，因此在药品中被广泛应用。
通过凝胶法检查药品中的内毒素含量，可以有效保障药品质量，避免因内毒素引起的不良反应。
凝胶法也存在一些局限性，如对不同类型内毒素的检测可能存在差异，需要结合其他方法进行验证。
细菌内毒素检查法中的凝胶法在药品生产中有着重要的应用价值，可以帮助生产商及时发现和控制内毒素的含量，从而保障药品安全有效。
在未来的研究中，我们可以进一步探索凝胶法在内毒素检查中的应用前景，提高检测灵敏度和准确性，为药品质量控制提供更好的保障。
2. 正文2.1 凝胶法在药品中的应用凝胶法是细菌内毒素检查法中常用的一种方法，其在药品中的应用具有重要意义。
凝胶法通过将待测药品与内毒素结合后在凝胶中形成沉淀的方式，实现内毒素的检测。
药品中可能存在的内毒素会与凝胶中的配体发生反应，形成可见的凝胶线或沉淀，从而判断药品中是否存在内毒素。
凝胶法在药品中的应用可以帮助制药企业提前发现产品中的内毒素问题，有效保障药品的质量和安全性。
通过凝胶法检测药品中的内毒素含量，可以及时调整生产工艺、选择合适的原料，从而降低内毒素对产品质量的影响，保障患者的安全用药。
凝胶法还可以用于药品质量控制中的内毒素检查，帮助企业建立起完善的内毒素检测体系。
通过不断优化凝胶法的操作流程和技术手段，可以提高内毒素检查的准确性和可靠性，为药品生产提供更加有效的质量保障。
【内容已达200字】凝胶法在药品中的应用不仅可以帮助企业提高产品的质量和安全性，还可以为药品行业的科研和发展提供支持。
中国药典版《细菌内毒素检查法》(2020年整理).pptx
表 3 凝胶半定量试验溶液的制备
编号
内毒素浓度/配制内毒素的 溶液
稀释用液
稀释倍数
所含内毒素的浓 度
A
无/供试品溶液
检查用水
1
—
平行管数 2
2
—
2
4
—
2
8
B
2λ水
检查用水
1
2
4
—
2
2λ
2
2λ
2
1λ
2
0.5λ
2
8
0.25λ
2
D
无/检查用水
—
—
—
2
注：A 为不超过 MVD 并且通过干扰试验的供试品溶液。从通过干扰试验的稀释倍数
λc=1g-1(∑X/4)
1
学海无 涯
式中 X 为反应终点浓度的对数值（1g）。反应终点浓度是指系列递减 的内毒素浓度中最后一个呈阳性结果的浓度。 当λc 在 0.5λ-2λ(包括 0.5λ和 2λ)时，方可用于细菌内毒素检查， 并以标示灵敏度λ为该批鲎试剂的灵敏度。 干扰试验 按表 1 制备溶液 A、B、C 和 D，使用的供试品溶液应为未检 验 出内毒素且不超过最大有效稀释倍数（ MVD）的溶液，按鲎试剂灵敏 度复 核试验项下操作。 只有当溶液 A 和阴性对照溶液 D 的所有平行管都为阴性，并且系列溶液 C 的结果在鲎试剂灵敏度复核范围内时，试验方为有效。按下式计算系列溶 液 C 和 B 的反应终点浓度的几何平均值（Es 和 Et）。
扰 的供试品溶液来制备溶液 A 和 B。按鲎试剂灵敏度复核试验项下操作
。
编号 A
内毒素浓度/配制内毒素的溶液 表 2 凝胶限量试验溶液的制备
无/供试品溶液
平行管数 2
细菌内毒素检查法
细菌内毒素检查法1 简述1.1 本规范适用于细菌内毒素检查法——凝胶法和光度测定法。
后者包括浊度法和显色基质法。
供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行实验。
当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶限度试验结果为准。
1.2 供试品细菌内毒素限值的确定1.2.1 药典中有规定的，按供试品各论中规定限值；1.2.2 尚无标准规定的，按以下公式确定供试品内毒素限值：L=K／M式中L为供试品的细菌内毒素限值，以EU／ml、EU／mg、EU／U表示。
K为按规定的给药途径，人用每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU／(kg?h)表示。
其中注射剂，K=5EU／(kg?h)；放射性药品注射剂，K=2．5EU ／(kg?h)；鞘内用注射剂，K=0.2EU／(kg?h)。
M为人用每公斤体重每小时的最大供试品剂量，以m1／(kg?h)、mg／(kg?h)、U／(kg?h)表示。
药品人用最大剂量可参阅国家批准的药品说明书和《临床用药须知》等权威著作，中国人均体重按60kg计算，注射时间小于l小时的按l小时计。
若供试品按体表面积给药，供试品每平方米体表面积计量乘以0.027即可转换为每千克体重计量［即M=(最大给药剂量/(m2·h)×1.62m2)/60kg］。
1.3 供试品最大有效稀释倍数的确定供试品的最大有效稀释倍数(MVD)按下式计算：MVD＝CL/λL为供试品的细菌内毒素限值；C为供试品溶液的浓度。
当L以EU／ml表示时，C等于1.0ml／m1；当L的单位以EU／mg或EU／U表示时，C为供试品制备成溶液后的浓度，单位为mg／m1或U／m1。
λ在凝胶法中为鲎试剂的标示灵敏度，在光度测定法中为所使用的标准曲线中的最低内毒素浓度。
如供试品为注射用无菌粉末或原料药，则MVD取1，可计算供试品的最小有效稀释浓度C：λ／L。
1.4 在使用新一批号的鲎试剂前，必须进行鲎试剂灵敏度复核实验。
1.5 药典中已有规定的品种或有其他内毒素检验标准的品种，可直接进行内毒素检查，如在检验中出现干扰的情况需再进行干扰实验的验证；其他未建立内毒素检查的品种需先进行干扰实验，确定不干扰浓度后再进行内毒素检查。
细菌内毒素检查法中凝胶法在药品中的应用及经验总结
细菌内毒素检查法中凝胶法在药品中的应用及经验总结一、前言细菌内毒素检查是药品质量控制中非常重要的一环，内毒素是一种由细菌产生的有毒物质，如果存在于药品中，可能对人体造成不良影响甚至危害健康。
药品的细菌内毒素检查十分关键。
而在细菌内毒素检查中，凝胶法是一种常用的检测方法，本文将对凝胶法在药品中的应用以及经验进行总结。
二、凝胶法在药品中的应用1. 凝胶法原理凝胶法是指在一定条件下，内毒素与抗毒素在琼脂糖凝胶中发生反应，通过观察反应的特征来判断样品中是否含有内毒素。
通常情况下，凝胶法使用的琼脂糖是明胶，根据样品的含量在琼脂糖中发生不同程度的凝胶。
2. 凝胶法操作步骤a. 样品制备：将需要检测的药品样品按照操作规程进行稀释，以便后续进行检测。
b. 内毒素与抗毒素反应：将稀释后的样品与内毒素抗体混合，然后在琼脂糖凝胶中孔内滴入混合物。
c. 反应观察：观察孔内的反应情况，根据形成的凝胶程度来判断内毒素的含量。
凝胶法在药品中的应用主要是用于检测含有内毒素的药品，例如注射液、生物制品等。
由于这些药品可能与外界环境接触，导致细菌污染，因此需要进行内毒素检测以确保其质量。
凝胶法能够快速、简便地判断药品中内毒素的含量，因此在药品生产中被广泛应用。
三、经验总结1. 核心操作规程在凝胶法中，核心的操作规程是样品的制备和内毒素与抗毒素的反应。
样品的制备需要按照严格的操作规程进行，以确保样品的稀释度符合检测要求。
在内毒素与抗毒素的反应过程中，需要完全避免外界污染，保持操作环境的洁净。
2. 样品处理技巧凝胶法中，样品处理技巧对于检测结果的准确性至关重要。
样品制备要确保样品的来源和存储条件，避免已被污染或者变质的样品进行检测。
样品的稀释要准确，否则可能会影响检测结果。
样品与抗毒素的混合也需要注意操作细节，增加混合的均匀性和准确性。
3. 结果解读与记录在凝胶法的操作过程中，结果的解读与记录同样十分重要。
在观察反应结果时，需要根据琼脂糖凝胶中的凝胶程度来判断内毒素的含量，避免主管主观因素的干扰。
细菌内毒素检查法凝胶法
• 细菌内毒素的量用内毒素单位 （EU） 表示， 1EU 与 1 个内毒素国际单位 （IU）相当。
• 细菌内毒素国家标准品系自大肠埃希菌提取精制 而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度、标 定细菌内毒素工作标准品的效价，干扰试验及检 查法中编号B 和 C 溶液的制备、 凝胶法中鲎试剂 灵敏度复核试验、 光度测定法中标准曲线可靠性 试验。
试验所用的器皿需经处理，以去除可能存在的 外源性内毒素。
• 耐热器皿常用干热灭菌法（250℃、30 分钟以 上）去除，也可采用其他确证不干扰细菌内毒 素检查的适宜方法。若使用塑料器具，如微孔 板和与微量加样器配套的吸头等，应选用标明 无内毒素并且对试验无干扰的器械。
供试品溶液的制备
• 某些供试品需进行复溶、 稀释或在水性溶 液中浸提制成供试品溶液。必要时，可调 节被测溶液（或其稀释液）的 pH 值，一般 供试品溶液和鲎试剂混合后溶液的 pH 值 在 ～8.0 的范围内为宜，可使用适宜的酸、
• 细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准 品为基准标定其效价， 用于干扰试验及检查法中 编号 B 和 C 溶液的制备、 凝胶法中鲎试剂灵敏 度复核试验、光度测定法中标准曲线可靠性试验。
• 细菌内毒素检查用水应符合灭菌注射用水标准， 其内毒素含量小于（用于凝胶法）或 （用于 光度测定法） ，且对内毒素试验无干扰作用。
• 释倍数小于 MVD 而溶液 A 出现不符合规定时， 需将供试 品稀释至 MVD 重新实验，再对结果进行判断。
结束
• 谢谢大家，共同讨论吧。。。。。。
细菌内毒素检查法--凝胶法
• 利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产 生的细菌内毒素， 以判断供试品中细菌内 毒素的限量是否符合规定的一种方法。
内毒素实验凝胶法
鲎试剂灵敏度复核试验
当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任何
可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度
复核试验。
鲎试剂灵敏度复核试验
根据鲎试剂灵敏度的标示值（λ），将细菌内
毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在旋
涡混合器上混匀15分钟，然后制成2λ、1λ、0.5λ和
0.25λ四个浓度的内毒素标准溶液，每稀释一步均 应在旋涡混合器上混匀30秒钟。
凝胶法的试验步骤
下面我们结合中国药典2010、 GB 14233.2医
用输液、输血、注射器具检验方法 以及GB 15810
一次性无菌注射器 来看下具体试验方法： a）管类和容器类器具用细菌内毒素检查用水 浸泡器具内腔，在（37±1） ℃恒温箱中孵育不少 于1h，取浸提液进行试验； b）小型配件或实体类样品置无热源玻璃器皿 内，加入细菌内毒素检查用水振荡数次，在 （37±1） ℃恒温箱中孵育不少于1h，取浸提液进 行试验。 制备的供试液储存不应该超过2h。一般要求 供试液的PH值在6.0~8.0之间，如不在该范围内， 可用鲎试剂厂家提供的PH缓冲液调节浸提液的PH 值。
休克。 6、 Shwartzman反应。 7、刺激淋
巴细胞有丝分裂，等等 。
细菌内毒素的耐热性
细菌内毒素具很强的耐热性，一般的高压灭菌
不能使其灭活，需250℃30分钟以上的干热灭菌才
能使其灭活 。
实验用器具的处理
内毒素试验中使用的器皿都要经过处理去除可
能存在的外源性内毒素。
耐高温的玻璃器皿等置于电热干烤箱内180℃
鲎试剂灵敏度复核试验
结果观察
将试管从恒温器中轻轻取出，缓缓倒转180°时，若管 内形成凝胶，且不从管壁滑脱者为阳性；若不形成凝胶，或 形成凝胶但倒转180°后从管壁滑脱者为阴性。
细菌内毒素检查法中凝胶法在药品中的应用及经验总结
细菌内毒素检查法中凝胶法在药品中的应用及经验总结细菌内毒素是一种细菌分泌的有毒蛋白质，可以引起严重的感染。
为了确保药品安全，减少细菌内毒素的风险，检测药品中细菌内毒素的含量是必要的。
目前，常用的检测方法包括凝胶法、酶联免疫吸附法、高效液相色谱法等。
本文将着重介绍凝胶法在药品中的应用及经验总结。
一、凝胶法简介凝胶法是一种常用的查出药品中细菌内毒素含量的方法。
该方法原理是将待测样品和不同浓度的细菌内毒素标准品加入凝胶中，然后检测样品和标准品在凝胶中所形成的不同直径的溶解环。
凝胶经过密度梯度离心后，可测定各个环的直径，进而得到标准曲线，并计算出待测样品的细菌内毒素含量。
二、凝胶法在药品中的应用1、检测药品中细菌内毒素含量。
凝胶法能够快速、准确地检测药品中细菌内毒素的含量，并且标准曲线稳定，可重复性好。
目前国内外绝大多数药品厂家和监管机构均采用该方法进行药品质量控制和合规性检测。
检测项包括各类注射剂、疫苗、血液制品、口服药等。
2、药品技术研发。
凝胶法能够检测不同样品对细胞毒性的影响，可用于药品研发中毒性评价，如开发抗肿瘤药物、抗病毒药物、免疫调节药物等。
在药品检测中，提高凝胶法的实验准确性和重复性对于保障药品质量和制定标准具有重要意义。
以下是凝胶法实验中的经验总结：1、样品制备：样品一定要严格按照实验室操作规程制备，尽量避免干扰因素，并根据样品的性质选择合适的处理方法。
2、标准品选择：选择合适的标准品来构建标准曲线，保证曲线的合理性和稳定性。
3、凝胶制备：凝胶制备过程要严格控制温度、时间、浓度等参数，确保制备的凝胶质量良好。
4、操作规范：实验前要仔细查看操作手册，按照要求进行实验，不可随意更改操作步骤及实验条件。
5、设备使用：使用离心机时需注意离心片的匀速度和离心时间，确保离心质量均匀。
6、数据分析：数据分析时要对实验数据进行严谨的统计分析，不应只依靠少数观察结果而得出结论。
细菌内毒素检查法
灵敏度有：0.5EU/ml; 0.25EU/ml; 0.125EU/ml ;0.06EU/ml ,0.03EU/ml 灵敏度是能使鲎试剂产生坚实凝胶的标准内毒素 的最低浓度。
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鲎（hòu）亦称马蹄蟹
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虽又称马蹄蟹，但不是蟹，而与蝎、蜘蛛 以及已绝灭的三叶虫有亲缘关系。
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4.1 试验材料及器具：
内毒素工作标准品: 由大肠埃希菌提取精制而成。 我们一般使用的是60EU/支或80EU/支。
细菌内毒素检查用水: 凝胶法：内毒素含量<0.015EU/ml的灭菌注射用水 光度法：内毒素含量<0.005EU/ml的灭菌注射用水
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4.1 试验材料及器具：
漩涡混匀器
供试品 确定样品的内毒素是否在规定范围内 D 溶液 阳性：供试品内毒素含量≥灵敏度X稀释倍数
阴性：供试品内毒素含量<灵敏度X稀释倍数
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4.7 结果判断
结果判断 符合规定
溶液A 阳性 对照
++
溶液B 阴性 对照
--
溶液C 供试品 阳性对照
++
溶液D 供试品
--
不符合规定 + + - - + + + +
0.1mlBET水+0.1mlE2λ
B
阴性对照
0.1mlBET水+0.1mlBET水
C 供试品阳性对照 0.1mlBET水+0.1mlSMVDE2λ
D 供试品溶液
0.1mlBET水+0.1SMVD
平行管数
2 2 2 2
凝胶法细菌内毒素检查及干扰综述
凝胶法细菌内毒素检查及干扰综述细菌内毒素是革兰氏阴性细菌的细胞壁组分之一，当细菌死亡或自溶后便会释放出内毒素。
凝胶法测定细菌内毒素，作为《中国药典》的“仲裁”方法，具有简单、经济、快速等特点，已成为细菌内毒素检查的常用方法。
但是凝胶法是一种基于鲎试剂中的多个酶蛋白在模拟的生理环境下进行的反应，反应过程中会受到各种干扰因素的影响。
1.凝胶法细菌内毒素的检查1.1细菌内毒素标准溶液的制备取标准品一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后开启，开启过程中注意防止玻璃碎屑落入瓶内。
按照标准品说明书，加入规定量的细菌内毒素检查用水溶解内溶物，用封口膜将瓶口封严，置旋涡混合器上混合15分钟。
然后进行稀释，制备成对应浓度的细菌内毒素标准品溶液。
1.2加入样品取0.1ml/支的鲎试剂8支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，用砂轮在瓶颈轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后开启，防止玻璃碎屑落入瓶内。
八支鲎试剂每两支分为一组，第一组每支加入0.2ml检查用水溶解，作为阴性对照，第二组每支先加入0.1ml检查用水溶解，后加入制备好的标准品溶液0.1ml，作为阳性对照。
第三组每支先加入0.1ml检查用水溶解，后加入0.1ml的样品溶液。
第四组每支先加入0.1ml的样品溶液，后加入制备好的标准品溶液0.1ml。
最后分别轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解，避免产生气泡。
1.3孵育加样结束后，将鲎试剂用封口膜封口，轻轻振动混匀，避免产生气泡，放入37℃±1℃恒温器中，确保安瓿瓶放入底部，保温60±2分钟。
1.4判断结果观察并记录结果。
将安瓿瓶从恒温器中轻轻取出，避免振动，每管缓缓倒转180°观察，2，4组管内形成凝胶，并且凝胶不变形，不从管壁滑脱，为阳性，1，3组未形成凝胶或形成的凝胶不坚实、变形并能从管壁滑脱，为阴性。
表明该样品内毒素合格。
2.凝胶法干扰因素2.1 鲎试剂的干扰因素2.1.1PH值的影响鲎试剂与内毒素的反应是一个复杂的酶促反应，鲎试剂中的酶要求PH值在6-8的范围内才能正常反应，极端的PH环境会影响酶的活性。
细菌内毒素检查法中凝胶法在药品中的应用及经验总结
细菌内毒素检查法中凝胶法在药品中的应用及经验总结细菌内毒素是指一类产生于细菌细胞内的、具有毒性的生物产物，它们在体内繁殖和生长时，会释放出大量的内毒素，如果人体受到过多的内毒素侵袭，会对人体的生理机能产生严重的影响，甚至危及生命。
对药品中的细菌内毒素进行检测是非常重要的，凝胶法是一种常用的细菌内毒素检查方法。
本文将详细介绍凝胶法在药品中的应用及经验总结。
一、凝胶法在药品中的应用凝胶法是一种常用的细菌内毒素检查方法，其基本原理是利用凝胶的特性将内毒素与试剂进行反应，在一定条件下使其凝结形成胶体，通过观察胶体的变化来判断样品中是否含有细菌内毒素。
在药品生产中，凝胶法通常用于检测抗生素、生物制剂等药品中的内毒素含量。
其应用主要有以下几个方面：在药品中应用凝胶法进行内毒素检测，需要掌握一定的操作技巧和经验总结。
下面将从样品处理、试剂选择、结果判定等方面总结一些经验：1. 样品处理：在进行凝胶法检测时，样品的处理对结果具有重要影响。
样品中可能存在的抗生素、蛋白质等成分会对内毒素检测结果产生干扰，因此需要对样品进行适当的处理，如去蛋白、去抗生素等，以保证检测结果的准确性。
2. 试剂选择：在进行凝胶法检测时，选择合适的试剂对结果具有重要影响。
不同的试剂在反应条件、灵敏度等方面有所差异，需要根据具体的样品特性和检测要求选择合适的试剂。
3. 结果判定：在凝胶法检测结束后，需要对试管中的胶体进行观察和判定。
观察胶体的凝胶程度、透明度等特征，结合已知的对照样品，判断样品中是否含有内毒素。
4. 数据分析：在凝胶法检测结束后，需要对检测结果进行合理的数据分析和处理，计算出内毒素的含量，并评估其对药品质量和安全性的影响。
细菌内毒素检查法中凝胶法在药品中的应用及经验总结
细菌内毒素检查法中凝胶法在药品中的应用及经验总结
细菌内毒素检查法中的凝胶法是一种常用的方法，用于检测药品中是否存在细菌内毒素，以保证药品的质量和安全性。
下面将介绍凝胶法在药品中的应用及经验总结。
凝胶法是细菌内毒素检测的常用方法之一，它基于细菌内毒素与特定抗体的免疫结合作用，通过凝胶反应的形成来判断药品中是否存在细菌内毒素。
准备凝胶板。
将琼脂糖搅拌均匀并加热至融化，然后等待降温至50-55℃，倒入培养皿中，待冷却凝固后，放入冰箱中保存。
然后，制备样品。
将需检测的药品样品取一定量，稀释至合适浓度。
接着，进行对照处理。
制备阴性对照和阳性对照，分别加入到凝胶板孔中。
检测样品。
将稀释好的样品加入到凝胶板孔中，孔与孔之间要保持一定距离。
凝胶板孵育在适宜的温度下，一般是37℃。
孵育时间一般为18-24小时，具体时间根据药品样品的不同而定。
经验总结：
1.在进行凝胶法检查时，要注意无菌操作，避免细菌污染，影响结果的准确性。
2.样品的稀释要根据具体情况合理选择，过高或过低的浓度都会影响检测结果。
3.凝胶板的孵育条件要严格控制，温度和时间要根据检测的细菌内毒素的种类和浓度进行优化。
4.在处理对照时，要选择合适的阳性和阴性对照品，以作为对照组，判断样品的检测结果。
5.在进行检测时，要保持注意力集中，避免操作失误，对于结果的判断要准确。
内毒素检查法凝胶法工艺流程
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细菌内毒素检查法中凝胶法在药品中的应用及经验总结
细菌内毒素检查法中凝胶法在药品中的应用及经验总结一、引言细菌内毒素检查在药品生产中起着十分重要的作用，尤其是在生物制剂和生物制品的生产过程中更是不可或缺的环节。
凝胶法是一种常见的细菌内毒素检查方法，具有操作简便、结果准确、灵敏度高等优点，因而在药品生产中得到了广泛的应用。
本文将对凝胶法在药品中的应用及经验进行总结，并希望为药品企业的内毒素检查工作提供一定的参考。
二、凝胶法在药品中的应用1. 药品内毒素检查的必要性内毒素是细菌体内的一种代谢产物，当细菌发生死亡或破裂时，内毒素会释放到外部环境中。
在药品生产中，如果药品中含有内毒素，就会对人体健康造成危害。
药品生产企业必须对药品中的内毒素进行检查，以确保药品的质量和安全。
2. 凝胶法的原理凝胶法是一种通过培养基与内毒素结合而形成凝胶的方法，当内毒素与凝胶发生反应后，可形成一种固定的沉淀，从而进行内毒素的检测。
在操作中，我们常常使用葡聚糖凝胶或琼脂凝胶来进行内毒素检查。
3. 凝胶法在药品中的应用在药品生产中，凝胶法主要应用于生物制剂和生物制品的内毒素检查。
这些产品在其生产过程中往往需要使用大量的培养基和细菌，因此可能存在一定的内毒素污染风险。
通过凝胶法进行内毒素检查，不仅可以确保产品质量，还可以减少因内毒素污染而带来的安全隐患。
三、凝胶法在药品中的经验总结1. 样品的准备在进行凝胶法的内毒素检查前，首先需要对药品样品进行准备。
样品的准备要求严格，必须在无菌条件下进行，并尽量避免对内毒素的污染。
在选取样品时，应根据不同的药品特性选择不同的检查方法，并严格按照规定的方法进行操作。
2. 操作的规范在进行凝胶法的操作过程中，需要严格按照操作规程进行操作，如加样量、培养温度、培养时间等都需严格控制。
在进行操作过程中，需要做好记录工作，保证操作的规范性和可追溯性，以便于在后期对问题进行溯源和处理。
3. 结果的解释在凝胶法的内毒素检查结果出现阳性时，需要及时作出结果的解读和判定，明确是否存在内毒素的污染。
细菌内毒素检查法中凝胶法在药品中的应用及经验总结
细菌内毒素检查法中凝胶法在药品中的应用及经验总结细菌内毒素检查是药品生产过程中非常重要的一环，内毒素的存在会影响药品的质量和安全性。
凝胶法是一种常用的细菌内毒素检查方法，它在药品生产中具有重要的应用价值。
本文将对凝胶法在药品生产中的应用及经验进行总结。
一、凝胶法原理及操作流程凝胶法是一种常用的细菌内毒素检查方法，其原理是利用内毒素与凝胶凝集原理结合，通过观察凝胶中白色深浅程度来判断内毒素的含量。
操作流程一般包括以下几个步骤：1. 样品制备：将待检药品样品按照相关规定进行稀释或提取，以便后续的检测操作。
2. 准备试剂：凝胶试剂包括凝胶试剂、缓冲液、内毒素标准品等，需要按照相关要求进行准备和配置。
3. 凝胶凝集：将样品、标准品和试剂按比例混合，进行一定的反应后，用凝胶杯进行凝集反应。
4. 观察结果：凝胶杯中会形成不同程度的色带，观察色带深浅来判断内毒素的含量。
二、凝胶法在药品中的应用1. 药品原料检验：对药品生产所使用的原料进行内毒素检查，确保原料的质量符合要求。
2. 生产过程控制：在药品生产的各个环节进行内毒素检查，及时发现问题并进行调整，确保产品质量。
3. 产品最终检验：对最终生产的药品进行内毒素检查，确保产品达到国家标准和行业规定。
4. 药品质量控制：内毒素是药品的一项重要指标，对内毒素的严格控制能够有效保障药品质量。
1. 凝胶试剂的选用：在进行凝胶法内毒素检查时，需要选择合适的凝胶试剂，确保试剂的质量和稳定性。
2. 样品制备的规范：样品制备是内毒素检查的关键环节，需要按照相关规定进行严格操作和控制。
3. 实验操作的标准化：在进行凝胶法内毒素检查时，需要严格按照操作规程进行操作，确保结果的准确性和可靠性。
4. 结果的解读和分析：对凝胶法检查结果进行准确的解读和分析，及时发现问题所在并进行处理。
5. 内毒素相关知识的学习和更新：了解内毒素的相关知识和最新研究成果，不断提高内毒素检查的水平和能力。
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细菌内毒素检查法
凝胶法 方法分类 光度法 显色基质法 重现性好 能定量 能控制药物的增强/抑制干扰 操作简便。节省时间 浊度法
方法特性
原理： 原理：
利用鲎血液中的变性细胞，经裂解液和机 械方式促使细胞破裂而提取到的一种细胞溶 解物，能与极微量的细菌内毒素形成特异凝 胶反应，反应的速度和凝胶的坚固程度与内 毒素浓度有关.
鲎试剂 标准品 供试品
6、结果判定
将制备好的试剂用锡箔纸包裹好后放入电热恒温水 浴锅中， 37℃恒温水浴60min后观察结果（保证玻 璃瓶中溶液处于水面以下，并防止水进入瓶中）。 若阴性对照溶液B为阴性，阳性对照溶液C为阳性， 试验有效。 若溶液A的两个平行管均为阴性，判定供试品符合 规定；若溶液A的两个平行管均为阳性，判定供试 品不符合规定。若溶液A的两个平行管中的一管为 阳性，另一管为阴性，需进行复试，复试时，溶液 A需做4支平行管，若所有平行管均为阴性，判定供 试品符合规定；否则判定供试品不符合规定
2、内毒素限值的确定
L=K/M 式中L为供试品的细菌内毒素限值，一般以 EU/ml、EU/mg或EU/U表示；K为人每千克 体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/ （kg·h）表示；M为人用每千克体重每小时的 最大供试品剂量，以ml/（kg·h）、mg/ （kg·h）或U/（kg·h）表示。一般由供试品 提供者直接提供内毒素限值如1000EU。
细菌内毒素检测之凝胶法
实验程序 1、试验准备：试剂、仪器及用具 2 2、内毒素限值的确定 3、确定最大有效稀释倍数 4、凝胶限度试验 5、结果判定
要求
1、以最终产品为检测必要 （浓度超过0.5mg/ml） 2、检测样品PH应在6~8之间，不符应调整
1、试验准备：试剂、仪器及用具
仪器与器具 电热恒温水浴锅、定时钟、去热源枪 头和小玻璃瓶、移液枪、试管架、剪刀、 锡箔纸。 试剂 细菌内毒素工作标准品、细菌内毒素 检查用水、鲎试剂。
5、恒温器的温度变化应<1℃，鲎试剂与样品 混匀后应立即移入水浴槽，严格控制保温 时间在60±2min，保温期间不得移动试管 架，桌面保持平稳，周围不能有振颤因素。 结果判断：恒温结束后，取出试管或反应瓶 缓缓倒转180°，不从管壁脱落为阳性，不 能保持完整即使有部分脱落者也判为阴性。
操作注意事项
试验前准备： 1、玻璃器具应规范化，便于除热原、计量准确、 清洗操作方便。 2、用于内毒素检测的稀释试管最好用玻璃试管； 塑料用具只能为一次性且保证无内毒素。 实验环境：最好在洁净室或洁净工作台内进行， 保证环境温度、湿度及通风稳定。 实验人员：戴干净手套和口罩。
实验过程： 1、内毒素工作标准品应严格按要求低温保存； 工作标准品开封后尽快使用且应一次性用 完，不再保存。 2、每一步稀释液所用的移液器不能反复、交 叉使用。 3、鲎试剂复溶时应将检查用水顺着瓶壁加入， 避免产生气泡。 4、操作时间的长短。环境温度变化都会影响 实验结果，故操作应尽量熟练、快速。
3、确定最大有效稀释倍数
（MVD）： MVD=cL/λ 式中L为供试品的细菌内毒素限值；c为供试 品溶液的浓度；λ为在凝胶法中鲎试剂的标示 灵敏度(EU/ml)。
3、鲎ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ剂灵敏度复核
按下表制备溶液A、B、C，使用稀释倍数为MVD的 供试品溶液来制备溶液A，按鲎试剂灵敏度复核试 验项下操作。 B 200ul C 100ul 100ul A 100ul 100ul A 100ul 100ul