90猪口蹄疫病毒非结构蛋白抗体酶联免疫吸附试剂诊断试剂盒
猪口蹄疫ELISA诊断试剂盒质量检测
疫苗免疫动物和口蹄疫病毒感染动物 ， 同时还可 以
检测疫苗免疫动物的抗体水平。在生产实际中， 使
用这两种试剂盒对 田问猪进行监测 ， 对掌握猪群 口
蹄疫的防疫状况有重要作用。
清进行检测 ， 其结果应符合标准规定 。４ Ｏ份 Ｎ ｓ非
作 者简介 ： 郎洪武 （９７年 一 ， ， １６ ）男 蒙古族 ， 副研究员 。 事兽 用生物制品的科研 与监察工作。 从
维普资讯
２０ ， （ ）３ ３ ，７ｆ洪武 。 ０６４ ５ Байду номын сангаас Ｏ ６－ ８４／１ ｌ ￣ 等
中国兽药杂志
・７・ ３
结构蛋白抗体 阴性参考血清及 ４份猪免疫用 口蹄 ２ 结 果 疫灭活疫苗接种参考血清 ， 用于猪 Ｆ Ｄ Ｓ非结 ２ １ 猪 Ｆ Ｄ Ｐ Ｍ ＶＮ ． Ｍ Ｖ Ｖ １结构蛋白抗体 Ｅ Ｉ ＬＳ Ａ诊断试剂 构蛋 白抗体 Ｅ ＩＡ诊断试剂盒特异性检测 ， ＬＳ 由上海 盒敏感性检验 见表 １ 。敏感 性检 测结果 表 明， 优耐特生物医药有限公司提供 ， 按试剂盒标 明的使 Ｓ Ｏ １０ ＳＩ １１ Ｓ ０ １２批诊断试剂盒 的敏感 Ｈ Ｏ ５ 、Ｉ ０５ 、Ｈ ０５ － Ｏ 用方法对血清进行检测 ， 每份血清 的 Ｏ ４ ／ Ｄ 临界 性均符合规定。
１ 材 料与方 法
１１ 试剂盒 猪 Ｆ Ｄ Ｐ 结构蛋 白抗体 Ｅ Ｉ ． Ｍ ＶＶ １ ＬＳ Ａ
诊断试剂盒 ３ ， 批 批号分别为 Ｓ ０ １０ Ｓ ０ １１ Ｈ ０ ５ 、Ｈ ０５ 、
Ｈ ０５ ； Ｍ Ｖ Ｎ ＬＳ Ａ诊 考实验室（ Ｌ 以及丹麦牲 畜病毒研究所也 曾开 Ｓ ０ １２ 猪 Ｆ Ｄ Ｓ非结构 蛋 白抗体 Ｅ Ｉ ＷＲ ） 批 Ｈ ０４ 、 Ｈ ０４ 、 发出以重组蛋 白为抗原的口蹄疫免疫诊断试剂盒。 断试 剂 盒 ３批 ， 号分 别 为 Ｓ ０ １４ Ｓ ０ １５ Ｐ ｂｉ ｔ ｉ ｒｈ 的试剂盒主要是利用在大肠杆菌所表达出 ｒ ｇ 的ＦＤ Ｍ Ｖ非结构蛋 白 ３ Ｂ Ａ Ｃ多体蛋 白（ ｏ ｐ ｔｎ ｐｌ ｒ ｅ ） ｙ ｏｉ 作为包被抗原－ ］而丹麦牲畜病毒研究所的试剂 ｌ ，
口蹄疫O型抗体检测试剂盒(酶联免疫法) 使用说明书
口蹄疫O型抗体检测试剂盒（酶联免疫法）使用说明书【产品名称】通用名：口蹄疫O型抗体检测试剂盒（酶联免疫法）英文名：Test Kit for Antibodies to Foot and Mouth Disease Virus Asia O（ELISA）【包装规格】96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒【预期用途】口蹄疫是由口蹄疫病毒（Foot and Mouth Disease Virus，FMDV）引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病，其特征为口腔黏膜、蹄部、乳房皮肤发生水泡和烂斑。
本试剂用于检测牛、羊、猪血清中口蹄疫O型抗体，可用于口蹄疫O型疫苗免疫效果评价。
【原理】本试剂盒由预包被口蹄疫O型抗体的酶标板、抗体工作液、抗原液、酶标记物及其他配套试剂组成，应用阻断酶联免疫法（ELISA）原理检测牛、羊、猪血清样本中口蹄疫O型抗体。
实验时将稀释的样本与抗原液同时加入酶标板中孵育，样本中的抗体与酶标板上的抗体竞争抗原，阻断抗原与板的结合；经洗涤后，再加抗体工作液孵育；经洗涤后加入酶标记物孵育；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加底物液，与酶标结合物反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成负相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有口蹄疫O型抗体。
【试剂盒组成】【储存及有效期】2～8℃保存，有效期12个月。
包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。
使用期限为2个月。
【适用仪器】含450nm、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。
【样品准备】1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。
样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。
2.用工作洗涤液将待检牛、羊血清先按32倍稀释（如5μl 血清加入155μl 工作洗涤液中，混匀），待检猪血清按16倍稀释（如5μl 血清加入75μl 洗涤液中，混匀），阴、阳性对照不用稀释。
口蹄疫监测诊断作业指导书
口蹄疫监测诊断作业指导书一、口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体检测酶联免疫吸附试验1. 适用范围用于检测猪、牛、羊血清中的口蹄疫病毒VPI 结构蛋白抗体，与猪、牛、羊口蹄疫病毒非结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒联合使用，可区分口蹄疫病毒感染动物及疫苗免疫动物。
检测猪血清应用猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒；检测牛、羊血清应用牛、羊口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒。
2. 检测试剂口蹄疫病毒VP1 抗原包被板、样品稀释液、酶结合物、阴性对照、VP1阳性对照、酶结合物稀释液、TMB底物A液、TMB底物B液、终止液（I.OMHZSQ）、浓缩洗涤液、稀释板、一次性封板膜、微孔定位标签。
3. 检测步骤3.1使用前将试剂盒恢复到室温，避免阳光直射或放置在30C 以上的环境中。
3.2取出试剂盒中的样品稀释液。
A1、B1 两孔作为阴性对照，CI 、D1 两孔作为阳性对照孔，其余孔作检测孔，每孔一个样品。
3.3在稀释板的各孔中加200样品稀释液。
在相应各孔中分别加入10 此对照血清或被检血清样品。
用加样器重复吹吸数次。
稀释每个样品时必须使用不同的吸头。
3.4取出抗原包被板。
3.5分别从稀释板上取稀释后的对照血清和被检血清各100 此，加至抗原包被板的相应孔中，加益或封膜后，置37 士2C下孵育60 士5 分钟。
3.6洗涤工作液配制：按需要量，用去产离子水或双蒸水将洗涤液作25 倍稀释。
3.7用洗涤工作液洗涤抗原包被板，每孔300 吨，洗涤6 次，拍干。
3.8酶结合物工作液配制：用酶结合物稀释液将酶结合物作100 倍稀释，现配现用。
3.9每孔加入100此酶结合物工作液，加盖或封膜后，置37 士2C 下孵育30± 2 分钟。
3.10 重复3.7。
3.1仃MB底物工作液配制：将TMB底物B液和TMB底物A液等量混合，现配现用。
3.12每孔加入100此底物工作液，加盖或封膜后，置37 士2C下孵育15士1 分钟。
不同试剂盒检测猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫抗体的对比试验
不同试剂盒检测猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫抗体的对比试验廖美娜;袁敏【摘要】使用口蹄疫O型正向间接血凝抗体试剂盒(IHA)和2个厂家生产的猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒(VP1-ELISA)分别检测接种猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫后不同时间的抗体合格率,以探讨3种抗体检测试剂盒的相关性.结果显示,IHA试剂盒与两种VP1-ELISA的符合率较差,分别为11.7％、12.5％,IHA试剂盒不能用于检测合成肽疫苗免疫抗体;VP1-ELISA试剂盒可以科学评价合成肽疫苗免疫抗体,两种VP1-ELISA试剂盒的平均符合率为93.6％,但是VP1-ELISA (UBI)试剂盒的稳定性高于VP1-ELISA(Z)试剂盒.【期刊名称】《广东畜牧兽医科技》【年(卷),期】2016(041)001【总页数】4页(P24-26,29)【关键词】猪口蹄疫;O型抗体;试剂盒;对比【作者】廖美娜;袁敏【作者单位】河源市龙川县动物卫生监督所赤光分所,广东河源517349;河源市龙川县畜牧兽医渔业局,广东河源517300【正文语种】中文【中图分类】S851.3口蹄疫（Foot-an-mouth isease，FM）是一种急性、热性、高度接触性传染病[1]，严重危害我国畜牧业的发展[2-3]。
目前，我国对口蹄疫实行预防为主、扑杀为辅的防控政策，对口蹄疫实行强制免疫。
免疫抗体检测是科学评价免疫质量的有效手段，也是制定免疫程序的可靠依据。
在实际工作中，因受到检测方法、检测试剂的不同而导致检测结果常有差异。
近几年，猪口蹄疫O型合成肽疫苗作为一种新型疫苗在市场上得到广泛的应用[4]。
为了选择科学评估此种疫苗免疫质量的检测方法，本试验通过使用猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫猪群后，采集不同时间的血清，分别使用正向间接血凝试验试剂盒（IHA）和2个厂家生产的猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒（VP1-ELISA），进行了猪口蹄疫O型抗体检测的对比试验。
不同品牌ELISA试剂盒对口蹄疫抗体检测的试验
不同品牌 ELISA试剂盒对口蹄疫抗体检测的试验摘要：用不同品牌的口蹄疫O型ELISA试剂盒,对免疫口蹄疫疫苗后的猪群进行口蹄疫抗体检测，发现检测结果阳性率各不相同。
结果表明不同品牌试剂盒因制备方法、包被抗原不同对猪群的抗体检测结果不同，所以，建议在实践中用口蹄疫ELISA试剂盒检测抗体效价应根据情况有选择使用。
关键词：试剂盒；抗体效价检测；阳性率；有选择使用；口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease，FMD)是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus）引起的偶蹄动物烈性传染病，是世界卫生组织（OIE）规定必报的烈性传染病，我国将其排在一类传染病之首。
口蹄疫病毒共有七个血清型，分别为O、A、C、Asia1、SAT1、SAT2、SAT3型。
每个血清型又有许多不同的亚型，各血清型之间没有交叉保护，同一血清型的各亚型之间仅有部分交叉保护，这使得对口蹄疫的防控更加困难。
目前我国主要流行O型和A型口蹄疫。
目前，我国防控口蹄疫主要采取疫苗免疫与扑杀相结合的综合防治措施，对所有易感动物猪、牛、羊进行口蹄疫灭活疫苗免疫接种。
但是在给动物注射疫苗后能否预防口蹄疫的发生一直的广大养殖户迫切需要知道的问题。
所以免疫后的效果评价就显得特别重要。
目前主要有以下几种检测方法：1.免疫动物攻毒实验；这一方法是判断疫苗免疫效果的金标准，但因需要在生物安全三级实验室内进行，一般养殖企业和研究单位都没法实施。
2.免疫动物血清中和实验；这一方法相对准确些，但同样也受一定条件限制，一般的研究检测单位也不完全具备检测条件。
3.免疫动物血清ELISA抗体检测；这一方法的准确性比前两种方法相对较差，但也是一般检测单位都容易实施的检测方法，因此也被广泛用于疫苗免疫效果的评价。
但由于这一方法的存在的一定的缺陷，评价结果也一直存在争议。
本文所研究的就是使用第三种方法对疫苗免疫效果进行检测，根据检测结果进一步分析这一方法的准确性，对使用单位给予一些指导建议。
猪病诊断试剂一览表
猪瘟 ELISA 抗原检测试剂盒（IDEXX）检测 病毒，特异性 100%全血、扁桃体、脾、肾 96ELISA
抗体检测试剂盒（IDEXX）检测抗体，与中和法 相关性 89.6%，特异性 100%血清 4802 猪伪狂犬 病 ELISA 检测试剂盒（基因缺失型，IDEXX）可 检测病毒感染，北美与欧盟指定扑灭计划使用，
但是始终没有说过关于爱情的任何字眼,她也习惯性的依赖,习惯性的丢三落四
毒通用 RT-PCR 检测试剂检测口蹄疫病毒，用于 猪口蹄疫的诊断与检测血清、水泡皮 10
cc0af1ca 易博
但是始终没有说过关于爱情的任何字眼,她也习惯性的依赖,习惯性的丢三落四
用于猪繁殖与呼吸综合征的诊断与检测肺、淋巴 结、血清 10 免疫组织化学诊断试剂检测病毒， 用于猪繁殖与呼吸综合征的诊断与检测肺、扁桃 体 304 猪细小病毒 PCR 检测试剂检测病毒，用于
猪细小病毒病的诊断与检测肠系膜淋巴结、肝脏 105 猪圆环病毒 PCR 诊断试剂检测病毒，用于圆 环病毒的诊断及 PCV-1、PCV-2 的鉴别诊断肺脏、 淋巴结、心脏、血清 480ELISA 试剂盒检眼,她也习惯性的依赖,习惯性的丢三落四
用于血清中的 PCV-2 的鉴别诊断血清 966 猪弓形 体 ELISA 试剂盒检测抗体，用于猪弓形体病的诊 断与检测血清 967 猪喘气病 ELISA 试剂盒 （IDEXX）检测抗体，用于感染或免疫效果检测
血清 480ELISA 试剂盒（IDEXX）检测抗体，用于 猪流感的诊断与检测血清 4808 口蹄疫非结构蛋 白抗体检测口蹄疫病毒非结构蛋白抗体，用于猪 口蹄疫病毒感染的诊断与检测血清 96 口蹄疫病
但是始终没有说过关于爱情的任何字眼,她也习惯性的依赖,习惯性的丢三落四
口蹄疫RT-PCR检测试剂盒使用说明
口蹄疫病毒 RT-PCR检测试剂盒使用说明书用途口蹄疫病毒( FMDV)反转录聚合酶链反应( RT-PCR)，用于检测疑似感染动物的水疱皮或水疱液中所有血清型的 FMDV，适用于 FMDV的检测、诊断和流行病学调查。
原理利用离心柱内硅基质膜提取 RNA，在反转录酶的作用下，以 RNA为模板，以引物为起点合成与 RNA模板互补的 cDNA链。
在 TaqDNA聚合酶的作用下，经高温变性、低温退火、中温延伸的循环，使特异 DNA片段的拷贝数放大一倍。
经过 35次循环，最终使扩增 DNA 片段放大了数百万倍。
将扩增 DNA片段进行电泳，经染色后，在紫外灯照射下，肉眼可见到 DNA片段的扩增带。
试剂1．试剂盒组成2．试剂盒保存期：6个月。
Store:4℃需要自备的器材1．仪器：分析天平、离心机、 PCR扩增仪、电泳仪、电泳槽、紫外凝胶成像仪(或紫外分析仪)、微波炉、组织研磨器、-20℃冰箱、可调移液器(2µL、20µL、200 µL、1000 µL)。
2．耗材：眼科剪、眼科镊、称量纸、 20mL一次性注射器、生理盐水、琼脂糖、 500mL量筒、500 mL锥形瓶、经焦碳酸二乙酯( DEPC)水处理的灭菌 1.5mL离心管和吸头( 10 µL、200µL、1000 µL)、灭菌双蒸水。
使用注意事项1．所有接触病料的物品均应合理处理，以免污染实验室。
2．PCR整个试验分配液区、模模板提取区扩增区电泳区。
严禁器材和试剂倒流。
1所有试剂应在规定的温度储存， -20℃保存的各试剂使用前应放于室温完全融化，使用后立即放回 -20℃。
2染色液低毒，应于室温条件避光保存，操作时应戴上手套。
3注意防止试剂盒组分受污染。
使用前将红盖管8000 rpm离心15 s，使液体全部沉于管底，放于冰盒中，吸取液体时移液器吸头尽量在液体表面层吸取。
1不要使用超过有效期限的试剂，试剂盒之间的成分不要混用。
口蹄疫病毒非结构蛋白(NSP)抗体检测试验
口蹄疫病毒非结构蛋白（NSP）抗体检测试验一、介绍：口蹄疫（FMD）是由口蹄疫病毒（FMDV）引起的急性、热性高度接触性传染病，主要侵害偶蹄兽，一旦发病，将会引起严重的经济损失。
口蹄疫病毒属于微核糖核酸病毒科口蹄疫病毒属，目前已知共有7种血清型，即O型、A型、C型、SAT1、SAT2、SAT3和亚洲1型。
口蹄疫病毒（FMDV）非结构蛋白（NSP）特异性抗体的存在，通常用来证明宿主体内口蹄疫病毒已经感染或正在感染，非结构蛋白与结构蛋白不一样，没有血清型区分。
国际兽医局（OIE）规定的非结构蛋白血清学检测方法为EITB和ELISA。
韩国金诺VDPro FMDV 非结构蛋白（NSP）抗体检测试剂盒，是用阻断ELISA，重组FMDV NSP蛋白包被，过氧化物酶标记的单克隆抗体，来检测血清中非结构蛋白抗体是否存在。
适用对象包括猪、牛、山羊以及绵羊等。
二、试剂盒组成：三、注意事项：1、使用之前请仔细阅读操作说明；2、试剂盒储存条件：2-8℃；四、实验前准备：1、洗液10倍稀释：如20ml洗液，加入180ml去离子水混匀，备用。
2、TMB底物：使用前恢复到室温，因为低温可能导致不显色。
五、操作步骤：1、使用前将试剂盒所有组件恢复到室温（25±3℃），取出抗原包被板；2、标记好样品、阳性对照和阴性对照（对照各做两孔），每孔加入样品稀释液80μl，然后加入样品血清、阳性对照、阴性对照各20μl后进行震荡混匀；3、室温孵育60分钟；4、洗板：每孔加入洗涤液300μl，洗涤3次，最后在吸水纸上拍干；5、每孔加入100μl酶标抗体，室温孵育60分钟；6、重复步骤4，洗涤3次；7、每孔加入TMB底物反应液100μl，室温暗处放置15分钟。
六、读数：每孔加入50μl终止液，在酶标仪450nm波长处读数。
七、结果判定：1、实验有效性判定阴性对照OD值≥0.6阳性对照OD值≤0.32、计算方法3、判定标准SN值＞0.60 判为阴性；SN值≤0.60 判为阳性。
猪瘟ELISA抗体检测试剂盒说明书
猪瘟ELISA抗体检测试剂盒猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒使用说明书【简介】试剂盒由抗原包被的微孔板，酶标羊抗猪IgG及其它试剂制成，应用间接ELISA原理检测猪血清中抗猪瘟病毒抗体。
【用途】猪瘟ELISA诊断试剂盒用于检测猪血清中猪瘟病毒抗体。
评估猪场猪瘟疫苗免疫状况，感染猪的血清学诊断。
【原理】本试剂盒是采用猪瘟抗原包被微孔板，在试验中，加入稀释的对照血清和待检血清，经温育后，若样品中含有抗猪瘟病毒的特异性抗体，则将与检测板上抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标二抗，与检测板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶结合物，在孔中加TM B底物液，与酶反应形成蓝色产物，加入HF溶液终止反应后，用酶标仪630nm波长测定各反应孔中的OD 值。
【试剂盒主要成分】1 包被抗原的微孔板 2块（96孔/块）2 阴、阳性对照血清各1管（0.5ml/管）3 羊抗猪酶标二抗 1瓶（20ml/瓶）4 20倍浓缩洗涤液 1瓶（30ml/瓶）5 底物A液、B液各1瓶（10ml/瓶）6 终止液 1瓶（10ml/瓶）7 样品稀释液 1瓶（50ml/瓶）8 血清稀释板 2块（96孔/块）9 说明书 1张【样品制备】取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。
【洗涤液配制】使用前，浓缩的洗涤液应恢复至室温（25℃左右），并摇动使沉淀的盐溶解（最好在37℃水中加热5-10m in），然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释（例如：每板用20 ml浓缩液加上380ml水），稀释好的洗涤液在4℃可以存放7天。
【样品稀释】在血清稀释板中按1：40的体积稀释待检血清（195μl样品稀释液中加5μl待检血清）。
注意：阳性对照和阴性对照1：40稀释，（234μl样品稀释液中加6μl对照血清）。
【注意事项】1 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，使用后放回2-8℃。
2 不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。
郑州中道生物猪口蹄疫O型试剂盒(酶联免疫法)说明书
猪口蹄疫病毒O型抗体检测试剂盒（酶联免疫法）使用说明书【产品名称】通用名：猪口蹄疫病毒O型抗体检测试剂盒（酶联免疫法）英文名：Diagnostic Kit for Antibodies to Porcine foot and mouth disease virus (ELISA) 【预期用途】本品采用酶联免疫间接法检测猪血清或血浆中的猪口蹄疫病毒（O型）抗体，适用于评估猪场猪口蹄疫疫苗免疫状况，可用于动物疫病的调查。
【检验方法】1. 配洗液：将50ml洗液（20×）加纯化水稀释至1000ml，充分摇匀后备用。
2. 编号：每次试验应在包被板上设空白对照孔1孔，阴性对照孔2孔，阳性对照孔2孔，其余为待检样品孔。
3. 加样品稀释液：用加样器在包被板的待检样品孔中加入样品稀释液，每孔100μl；空白对照孔、阴性对照孔及阳性对照孔不加样品稀释液。
4. 加样：分别于各待检样品孔加入待检样品10μl，阴性对照孔加入阴性对照血清100μl，阳性对照孔加入阳性对照血清100μl；空白对照孔不加样。
5. 温育（一）：充分混匀，贴上封板膜，37±2℃温育30分钟。
6. 洗板（一）：洗板机洗或手洗，方法如下：①手洗：倾去内容物，用洗液注满反应孔，静置15秒至30秒后吸去或弃去，在毛巾或吸水纸上拍干。
如此洗板重复5次。
②洗板机洗：洗板次数为5次，每次洗液在孔中滞留时间为15-30秒，洗液应注满反应孔，确保每次吸净无残留，全部洗完后在毛巾或吸水纸上拍干。
7. 加酶标结合物：除空白对照孔以外，各孔中加入酶标结合物100μl。
8. 温育（二）：贴上封板膜，37±2℃温育30分钟。
9. 洗板（二）：方法同洗板（一）。
10. 加显色剂：每孔加入显色剂A 50μl，全部加完后再在每孔中加入显色剂B 50μl，混匀。
11. 温育（三）：37±2℃显色10分钟。
12. 终止：显色完毕后立即于每孔加50μl终止液，混匀。
国家口蹄疫参考实验室诊断检疫技术简介
国家口蹄疫参考实验室诊断检疫技术简介（一）现有诊断检疫技术（试剂盒）本实验室经过多年的研究和实践，建立了病毒分离、补体结合试验（CFT）病毒中和试验（VNT）、血清中和试验等诊断方法，并形成了一套完善的诊断程序，符合国际通用的操作标准。
同时发展了O型口蹄疫正向间接血凝诊断法，口蹄疫和猪水泡病反向间接血凝诊断法，琼脂扩散试验，以及口蹄疫VIA诊断和RT-PCR诊断试剂盒，满足口蹄疫样品的诊断和定型。
近年来，本实验室根据科学技术发展，结合国际组织推荐的口蹄疫诊断检疫技术，研制出了多种试剂盒和检测方法。
1、O型口蹄疫液相阻断ELISA诊断试剂盒液相阻断ELISA是国际兽疫局（OIE）推荐的检测口蹄疫病毒抗体的标准方法。
用分离于我国的口蹄疫O型毒株研制出液相阻断ELISA试剂盒，用于测定牛、猪、羊血清中针对O型口蹄疫病毒结构蛋白的抗体。
本试剂盒主要用途，一是对进出口动物口蹄疫病毒抗体监测；二是监测口蹄疫疫苗免疫抗体，以评价动物群体抗感染能力。
2、口蹄疫病毒非结构蛋白抗体检测试剂盒（3ABC-I-ELISA）区分口蹄疫感染和免疫动物是国际活畜进出口贸易的必检项目，也是OIE 判定疫情国家和非疫情国家的依据。
本试剂盒适用于活畜进出口调运、疫区净化检疫和群体无症状感染评价，检测活畜血清中口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体，以区分感染和免疫动物。
本试剂盒可测出牛感染后长达480天（16个月）的感染抗体，其多项技术指标已超过国外同类产品。
3、口蹄疫多重RT-PCR诊断试剂盒（FMD Multi RT-PCR）本试剂盒适用于病料诊断、反刍活畜和肉品等畜产品染毒检测，特异性扩增病料、O/P液和肉品中的口蹄疫病毒基因片段，确认样品供体是否染毒。
本试剂盒含有三对引物，可扩增多个口蹄疫病毒基因片段，至少适用于口蹄疫O型、A 型和AsiaⅠ型的三个血清型的检测，可查出0.07LD50的病毒量。
4、口蹄疫原位杂交检测法原位杂交是借助核酸分子杂交的方法，在显微镜水平检测和定位特异的核酸片段。
三种口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC_抗体ELISA_检测方法的比较
China Swine IndustryDOI：10.16174/j.issn.1673-4645.2023.06.018收稿日期：2023-08-30基金项目：2022年河北省农业科技成果转化项目作者简介：王幸（1994-），女，硕士，主要从事兽用疫苗和兽医诊断制品技术研究三种口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC 抗体ELISA 检测方法的比较王幸1,2邱贞娜1,2李建丽2,3郁宏伟1,2赵玉龙1,2李卫东1,2刘涛1,2裴小琴1,2(1瑞普(保定)生物药业有限公司,河北保定071000;2河北省兽用生物制品技术创新中心,河北保定071000;3河南农业大学动物医学院,河南郑州450046)摘要:本试验选择3种国内外口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC 阻断ELISA 抗体检测试剂盒,对牛、羊、猪等易感动物血清进行检测,比较3款检测试剂盒质量,以期获得可应用于口蹄疫血清学筛选的有效试剂盒。
应用瑞普生物、某国内厂家、某进口试剂盒3种ELISA 试剂盒同时对79份血清样品进行ELISA 检测,结果显示,3种试剂盒的阳性检出率分别为56.96%、56.96%、55.7%,阳性血清的符合率为95.6%;同时对比瑞普公司2批次试剂盒,发现2次结果完全一致。
对感染口蹄疫后不同时间的牛血清进行检测,结果显示3种试剂盒均可用于感染10d 后牛血清样品的检测。
试验证实3种非结构蛋白3ABC 抗体检测试剂盒检测结果差异不大,均可应用于牛、羊、猪的口蹄疫感染血清学筛选性试验。
关键词:猪;口蹄疫病毒;非结构蛋白;ELISA ;检测方法中图分类号:S828;S852.65文献标识码:A文章编号:1673-4645(2023)06-0087-03开放科学(资源服务)标识码(OSID ),扫一扫,了解文章更多内容口蹄疫（foot-and-mouth disease,FMD ）是由口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus,FMDV ）感染引起的偶蹄动物共患的烈性传染病，主要通过空气进行传播[1]，临床症状主要表现为黏膜部位、四肢趾间等产生水泡、溃烂，成年动物一般死亡率较低，而幼龄动物的死亡率高达100%，感染过该病毒的动物可持续带毒，在体内存在数月或数年[2,3]，已经给世界上很多国家的畜牧业带来了严重的经济损失，我国将其列为一类动物传染病之首。
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酶联免疫吸附法在畜产品快速检测中的应用
摘要：酶联免疫吸附法是畜产品质量安全检测常用的快检方法之一，能快速、准确、高效地对相关产品进行检测。
伴随着行业的高速发展，人们对畜产品的需求数量及质量要求也在逐步上升，畜产品的食品安全问题越来越受到重视。
但近年来，畜产品中存在着动物疫病、兽药残留及产品非法添加物等相关问题。
因此，使用快速、准确的检测方法筛查畜产品的质量安全至关重要。
本文以酶联免疫吸附法为主要技术导向，深入剖析其原理，同时对该技术在畜产品快检中的应用情况分层介绍，以期为行业相关研究人员提供依据。
关键词：酶联免疫吸附法；畜产品；检测技术；应用酶联免疫吸附法在畜产品快速检测中的应用程俊嘉，陈源，刘冬梅（昌吉州畜产品质量检测中心新疆昌吉831100）收稿日期：2023-06-29作者简介：程俊嘉（1990.06—），男，陕西人，畜牧师，硕士研究生，从事畜产品质量检测工作。
doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2024.05.056科研动态中国是畜产品的生产及消费大国，随着世界经济的全球化发展，标有“中国造”的畜产品对外出口比例逐年上升。
但近年来，随着禽流感病毒、非洲猪瘟病毒等疾病的不断肆虐，动物感染疫病的概率也不断增加，畜产品源头安全无法得到保障。
无独有偶，随着生活环境中外源性化学物质的日益增长，包括畜产品在内的日常消费食品也经常被查出含有违禁的化学药物，如瘦肉精、抗生素、雌雄激素类、抗病毒类药物等[1]，这些化学药物在食品中的滥用会导致兽药残留并引发严重的食品安全问题，对消费者的身心健康也具有较大的影响。
国家食品药品监督管理总局也多次发文要求严厉打击畜产品中滥用药物的问题，因此，对畜产品建立快检方法具有重要意义。
1快速检测技术概述畜产品安全快速检测技术是保障畜产品安全的重要技术，主要特点便是操作简易、速度快、成本低廉，能提高检测效率及工作效率，使得监管机构及相关人员能迅速处理突发事件。
同时，使安全的畜产品及时投入市场，使有害的畜产品中断市场流通并快速召回，以防止给人体和环境带来潜在危害。
ELISA法鉴定猪口蹄疫野毒与疫苗
ELISA法鉴定猪口蹄疫野毒与疫苗猪口蹄疫是由口蹄疫病毒引起偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病，世界动物卫生组织（OIE）将该病列为A类家畜传染病之首，大多数亚洲、非洲、南美洲国家一直都通过注射灭活疫苗的办法来控制该病的流行。
从2001年英国暴发口蹄疫后，欧盟允许在暴发口蹄疫时进行疫苗的紧急接种。
因此，建立准确、快捷的鉴别口蹄疫野毒与疫苗的方法，对该病的控制、食品安全和进出口贸易十分重要。
以下就国内外ELISA法鉴别口蹄疫野毒与疫苗的技术介绍如下：中国农业科学院兰州兽医研究所朱彩珠等利用大肠杆菌表达的口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白(NSP)3ABC多肽作为抗原，建立了一种可区分FMDV感染与接种灭活疫苗免疫牛的间接酶联免疫吸附试验(I-ELISA)。
通过对336份正常牛血清、508份注射疫苗牛血清、6O 份人工感染牛血清和58份豚鼠免疫血清的检测，确定了血清抗体阴性与阳性效价的临界值。
336份正常牛血清检测结果，特异性为98.21%；508份接种灭活疫苗1～2次后1～6个月的牛血清检测结果，特异性为98.62%;60份实验性感染牛血清的检测结果显示，I-ELISA 检出率为95.00%(按D值0.400为阳性统计)。
华中农业大学动物医学院阮力等利用大肠杆菌BL21(DE3)表达3B蛋白，建立了间接酶联免疫吸附试验(I-EIISA)区分口蹄疫病毒感染猪与注苗猪的方法。
上海市农业科学院畜牧兽医研究所潘洁等以大肠杆菌表达重组口蹄疫病毒非结构蛋白3AB为检测抗原，研制了口蹄疫病毒非结构蛋白ELISA检测试剂盒，该试剂盒可用于判定被检动物是否感染口蹄疫病毒。
在1746份免疫猪血清中，3AB-ELISA对免疫猪血清的特异性为98.68%；在1077份健康非免疫猪血清中，3AB-ELISA对健康非免疫猪血清的特异性为98.68%；在36份人工感染猪血清中，3AB-ELISA 对阳性检出率为100%。
口蹄疫防治技术之实验室诊断
口蹄疫防治技术之实验室诊断口蹄疫(Foot and Mouth Disease ，FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的偶蹄动物的急性、热性、高度接触性、烈性传染病，其临床表现以口腔粘膜、舌面、鼻镜、蹄部、乳房皮肤发生水泡和溃烂为特征。
从这些表面特征就可以基本上判断出这种病，但是要确诊还必须通过实验室诊断。
口蹄疫病毒具有多型性，故口蹄疫实验室诊断不仅要确定病性，而且要鉴定病毒型。
应无菌操作采取病毒的水疱皮、水疱液或发热时的血液或者恢复期血清，专人送往有关检验部门检验。
一. 血清学诊断方法血清学诊断方法在FMD的监测方面十分有效，包括补体结合试验、中和试验、凝集试验、免疫扩散试验、沉淀试验、免疫电泳、免疫荧光和放射免疫等技术。
目前被广泛应用的有琼脂扩散试验、补体结合试验、中和试验、间接血凝试验、酶联免疫吸附试验。
(1) 琼脂扩散试验该方法既可以检测病毒抗原，也可以检测抗体。
在琼脂中FMDV抗原和标准阳性血清或未知的被检血清之间形成免疫沉淀线，并能在48h之内提供结果。
长期以来，该试验主要用于血清样品中FMDV的检测。
(2) 补体结合试验(CFT) CFT既可鉴定抗原，又可鉴定抗体，并可定量。
但CFT方法相对不够敏感，且有易解释样品的亲补体活性和抗补体活性。
(3) 病毒中和试验(VNT) 病毒中和试验是利用血清中和抗体与病毒特异性的结合作用，使病毒失去吸附细胞的能力或抑制其侵入和脱衣壳，丧失对易感动物和敏感细胞的感染力。
(4)口蹄疫反转录聚合酶链反应(RT-PCR) 用于检测疑似感染动物水疱皮或水疱液中所有血清型口蹄疫病毒，适用于口蹄疫病毒的检测、诊断和流行病学调查。
二. 口蹄疫液相阻断ELISA诊断试剂盒1. O型口蹄疫液相阻断ELISA诊断试剂盒液相阻断ELISA是国际兽疫局(OIE)推荐的检测口蹄疫病毒抗体的标准方法。
用分离于我国的口蹄疫O型毒株研制出液相阻断ELISA试剂盒，用于测定牛、猪、羊血清中针对O型口蹄疫病毒结构蛋白的抗体。
酶联免疫吸附试验操作中的注意事项
4562023酶联免疫吸附试验操作中的注意事项邹子云光泽县动物疫病预防控制中心福建光泽354100摘要结合兽医实验室的日常操作,对酶联免疫吸附(ELI SA)试验中存在的细节问题和注意事项进行阐述,包括试验前样品、试剂盒准备及试验中的各个操作步骤等。
为兽医实验室人员提供参考和帮助,避免人为因素对试验结果的准确性造成影响。
关键词ELI SA试验步骤细节因素注意事项文献标识码:B文章编号:1003-4331(2023)06-0055-02ELI SA是兽医实验室中最普遍使用的试验种类之一,具有良好的准确性和灵敏性,操作步骤简单,不易产生试验环境污染。
因此,被广泛用于猪瘟、口蹄疫、小反刍兽疫和猪繁殖与呼吸综合征抗体实验室检测项目中。
根据日常操作和试验步骤中细节问题的处理,总结分析ELI SA试验中常见的细节问题,以减少试验过程中由主观因素造成的误差,从而提高试验的准确性。
1试验前准备注意事项1.1样品样品在采集、制备、保存过程中,要注意以下几点。
首先,采集的每份样品应保证之后试验、复检、留样的使用数量;其次,采集完的样品竖直向上摆放,避免剧烈震荡,如果出现严重溶血现象,后期难以清洗干净,容易出现假阳性;最后,样品保存时不能反复冻融,2~8℃保存3d,-20℃可长期保存。
此外,使用前须将样品轻柔地上下颠倒混匀,保证离心管中各个位置抗体浓度一致,不可剧烈晃动混匀。
1.2试剂盒试剂盒在使用前需平衡至室温(20~ 25℃),若放置于实验室中自然回温,耗时较长且各组件回温程度不均匀。
建议将试剂盒各组件放在恒温箱中回温,包括配制洗涤液使用的纯净水。
恒温箱温度设定在25℃,内部放置温度计,确保箱内温度能准确达到25℃,每一步使用时将所要用到的试剂组件取出。
不同批次的试剂不可混合使用。
试剂盒严格按照要求保存,放在冰箱中应避免靠在冰箱内壁上,以免造成结冰。
未使用完的反应板要保存在放有干燥剂的密封袋内。
2试验操作过程注意事项2.1加样在加入第一个样品与最后一个样品之间存在时间差,因此,每个样品与孔板接触和反应的时间就存在细微差异。
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2010年版兽药典三部增、修订品种
品名中国兽药典(2010年版三部)
猪口蹄疫病毒非结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试
剂盒[修订] 新增。
猪口蹄疫病毒非结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验
诊断试剂盒
Zhu Kou Ti Yi Bing Du Fei Jie Gou Dan Bai Kang Ti Mei Lian Mian Yi Xi Fu Shi Yan Zhen Duan Shi Ji He
Swine Foot And Mouth Disease Virus NS protein-based ELISA Kit 本品系用人工合成的口蹄疫病毒非结构蛋白多肽2372作为抗原包被的抗原包被板与稀释板、阴性对照血清、阳性对照血清、样品稀释液、酶结合物及稀释液、TMB底物A液、TMB底物B液、终止液和洗涤液等组装而成。
用于检测猪口蹄疫病毒非结构蛋白抗体。
与猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒配套使用，用于区分口蹄疫野毒感染动物和疫苗免疫动物。
【性状】应密封完好、组分齐全、无破损、无渗漏。
其中：（1）抗原包被板（96孔板）表面光洁、无裂纹、无异物，数量为1块或2块。
（2）稀释板（96孔板）表面光洁、无裂纹、无异物，数量为1块或2块。
（3）阴性对照血清应为淡黄色澄清溶液，无臭、无味、无沉淀物，装量为0.5 ml。
（4）阳性对照血清应为淡黄色澄清溶液，无臭、无味、无沉淀物，装量为0.5 ml。
（5）酶结合物应为淡黄色澄清溶液，无臭、无味、无沉淀物, 装量为0.3 ml。
（6）TMB底物A液应为淡黄色澄清溶液，无沉淀物，装量为7 ml或15 ml。
（7）TMB底物B液应为淡黄色澄清溶液，无沉淀物，装量为7 ml或15 ml。
（8）样本稀释液应为澄清的淡黄色溶液，无臭、无味、无沉淀物，装量为30 ml或45 ml。
（9）酶结合物稀释液应为无色澄清溶液，无臭、无味、无沉淀物，装量为20 ml或30 ml。
（10）洗涤液应为无色澄清溶液，无臭、无味、无沉淀物，装量为50 ml或50 ml×2瓶。
（11）终止液应为无色澄清溶液，无沉淀物，装量为15 ml 或25 ml。
【无菌检验】按附录页对阴性对照血清、阳性对照血清、酶结合物、底物溶液和稀释液进行检验，均应无菌生长。
【敏感性检验】用1:50、1:125、1:175、1:300、1:700、1:950
6份不同稀释度的NS抗体阳性参考血清、1份混合阴性参考血清和1份阴性参考血清一起按“用法与判定”进行检测。
其敏感性应符合下表标准：
参考血清 OD450nm/临界值的标准1:50阳性参考血清高于7.0
1:125阳性参考血清高于4.5
1:175阳性参考血清高于4.0
1:300阳性参考血清 2.5～4.5
1:700阳性参考血清 1.0～2.5
1:950阳性参考血清 1.0～2.3
混合阴性参考血清低于0.8
阴性参考血清低于0.8
【特异性检验】用40份NS抗体阴性猪参考血清及4份猪免疫（用口蹄疫疫苗接种）参考血清一起按“用法与判定”进行检测，每份血清的OD450nm/临界值均应低于1.0。
【规格】（1）1个96孔板/盒（2）2个96孔板/盒
【贮藏与有效期】2～8℃保存，有效期为24个月。