实验九-土壤微生物的分离与计数
土壤微生物的分离与平板菌落计数
土壤微生物的分离与平板菌落计数实验二土壤微生物的分离与平板菌落计数一、实验目的(1)几种常用分离纯化微生物的基本操作技术(2)掌握倒平板(3)学习平板菌落计数的基本原理和方法二.实验原理微生物的分离与纯化是指从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程。
分离纯化微生物的常用方法有平板表面画线法、平板表面涂布法和琼脂培养基浇注法等，因为其方法简单、设备简单、分离效果好，所以一直被实验室普遍选用。
活菌计数的基本方法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
三.实验器材1.材料:土壤2.培养基:牛肉膏蛋白胨培养基3.仪器或其他用具:无菌培养皿，盛有9ml无菌水的试管，1ml移液器，玻璃涂布器，恒温培养箱四.实验步骤(一)采样取表层以下5-10cm处的土样，放入灭菌的袋中备用，或放在4 ?冰箱中暂存。
(二)倒平板(无菌操作)培养基加热溶化，待冷至55-60? ，然后在无菌操作条件下倒入培养基于无菌培养皿中，并在各培养皿上作好标记。
(三)制备土壤稀释液(无菌操作)1.制备土壤悬液用电子天平称取 5g土于装有45ml无菌水的三角瓶中，振摇约20min,使土壤与水充分混匀2.梯度稀释取1ml土壤悬液加入装有9ml无菌水的试管，以此类推制成10-1 、10-2、10-3等不同稀释度的土壤溶液。
(四)平板分离单菌落(无菌操作)选用平整、圆滑的接种环，按无菌操作法挑取少量含菌的土壤悬液，在酒精灯旁进行划线操作，用左手控制培养皿，右手捏接种环，在标记处划3-4条连续的平行线作当作初步稀释的菌源。
烧去接种环上的残余菌样。
将烧去残余菌样后的接种环在平板培养基边缘冷却以下，然后将培养基另一区转至划线位置，将接种环通过菌源区而移至现在的划线区，依次类推划上几次。
土壤中微生物的分离与计数,微生物的实验室培养
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数：1．分离菌株的思路(1)自然界中目的菌株的筛选①依据：根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。
②实例：PCR技术过程中用到的耐高温的Taq DNA聚合酶，就是从热泉中筛选出来的Taq 细菌中提取出来的。
(2)实验室中目的菌株的筛选①原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度.pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
培养基选择分解尿素的微生物的原理：培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。
缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物②方法：能合成脲酶的细菌才能分解尿素。
配制以尿素为唯一氮源的培养基，能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌。
2．统计菌落数目的方法(1)稀释涂布平板法（间接）①当样品的稀释庋足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
②通过统计平板上的菌落数来推测样品中大约含有的活菌数。
(2)利用显微镜直接计数3．分解尿素的细菌的鉴定细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强。
在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。
4．实验流程土壤取样→样品的稀释→将稀释液涂布到以尿素为唯一氮源的培养基上→挑选能生长的菌落→鉴定知识拓展：1、Taq细菌是耐高温的微生物。
2、培养基对微生物具有选择作用。
配置培养基时根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求，加入某些物质或出去某些营养物质，一直其他微生物的生长，也可以根据某些微生物对一些物理、化学因素的抗性，在培养基中加入某种化学物质，从而筛选出待定的微生物。
这种培养基叫做选择培养基。
3、测定微生物数量的方法：①直接计数法：常用显微镜直接技术法，一般适用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。
②间接计数法：常用稀释平板计数法，平板培养基上长出一个菌落就代表原待测样品中一个微生物个体。
土壤中微生物的分离与鉴定实验报告
Sdu微生物大实验土壤微生物的分离纯化与鉴定【实验目的】1、从各地区土壤中筛选含几丁质酶的真菌及含果胶酶的菌株；2、通过从土壤中分离纯化菌株，掌握培养基的制备与灭菌技术、微生物的筛选、分离纯化方法和无菌操作技术。
3、复习以前学过的各种染色方法，掌握生理生化试验的原理与方法。
4、掌握微生物的鉴定技术、菌种保藏技术。
【实验原理】1、微生物的分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
此次实验采取平板分离法，该方法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化，其基本原理主要包括两个方面：a.选择适合于待分离微生物的生长条件或加入某种抑制剂造成只利于待分离微生物生长，而抑制其它微生物生长的环境，从而淘汰大部分不需要的微生物。
b.微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。
获得单菌落的方法可通过稀释涂布平板法或平板划线法等技术来完成。
微生物的观察可以用显微镜观察其细胞形态，也可以用肉眼观察其菌落形态。
前者是微生物的显微镜观察技术，后者是微生物的肉眼观察技术。
2、霉菌：霉菌可产生复什分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。
霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。
霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约 3-10μm ），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。
观察霉菌的形态有多种方法，常用的有直接制片观察法、载玻片培养观察法和玻璃培养观察法三种方法，本实验采用载玻片培养观察法。
3、果胶酶筛选培养基：配制以果胶为唯一碳源的筛选培养基，在该培养基上，只有能分解利用果胶的菌株才能够生长，依此来从土壤中筛选出能够产果胶酶的菌株。
刚果红（Congo Red,简称CR）是一种染料，它可与果胶形成红色复合物，但并不和果胶水解后的产物发生这种显色反应，在含有果胶的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的果胶形成红色复合物。
综合实验 土壤微生物的分离与 计数
先加一半的水，加热溶解药品后，再加另一半水
调节pH值后加琼脂 高氏一号培养基的“淀粉”换为“蔗糖” 灭菌时注意排空空气，25分钟，降压后开锅
内容2：土壤微生物的分离
1、无菌操作稀释土样 10-2（三角瓶） 取0.5ml以次稀释 三角瓶----10-3-------10-4-------10-5---------10-6
三、实验材料 学生采集的校园土样 四、实验内容：分为三个 五、实验报告
内容1：培养基的制备及灭菌
（1） 灭菌所用玻璃器皿 （2）配制所用的三种培养基 （3）培养基灭菌及倒平板、摆斜面
（1） 灭菌所用玻璃器皿
每组必备：7支1ml吸管 平皿14套 包扎好 刮刀2个 160℃ 干热灭菌2h（写好组别） 99ml无菌水+玻璃珠-----三角瓶1个 4.5ml无菌水------ -- 试管5支
（2）配制所用的三种固体培养基
全班分工协作使得应每组得到： 0.5瓶 牛肉膏蛋白胨固体培养基 （倾注） 0.5瓶 牛肉膏蛋白胨固体培养基 （涂布） 0.5瓶 高氏一号固体培养基 0.5瓶 麦芽汁固体培养基 灭菌后直 牛肉膏蛋白胨培养基斜面 7支 接倒平板 麦芽汁培养基斜面 3-4支
牛肉膏蛋白胨培养基： 1、2、3、4组-------800ml分装120支试管 5、6、7、8组-----3000ml分装18个三角瓶 高氏一号培养基
0.5ml0.5Βιβλιοθήκη l0.5ml0.5ml
内容2：土壤微生物的分离
2、无菌操作稀释分离
试管---10-3----10-4---10-5-----10-6----10-7
0.2ml
牛肉膏培养基
0.2 1 0.2
0.2 1
土壤分离微生物实验报告
土壤分离微生物实验报告
实验目的：
1.了解土壤微生物的多样性和数量。
2.研究不同培养基对土壤微生物的影响。
实验原理：
微生物分离可以通过选取合适的培养基和条件，使得某些微生物得到优质的生长环境，从而使其能够生长繁殖。
在本实验中，选用不同的培养基和条件，从土壤中分离出不同的微生物。
实验步骤：
1.准备所需材料和培养基。
2.在实验室制备土壤样品。
3.将土壤样品加入稀释液中稀释，使用平板计数器进行计数。
4.采用分离培养法分离微生物，根据选择的培养基和条件处理
土壤样品，如气氛，温度，pH值等，使其生长繁殖并形成纯
培养物。
5.将分离出的纯培养物鉴定，确定其种属和数量。
实验结果：
本实验中选取多种常用的培养基进行菌落计数和分离培养。
结果表明，菌落计数在不同的培养基中差异较大，而在同一培养基中，不同的土壤样品菌落计数也会有较大的差异。
通过分离培养法，我们在不同的培养基中分离出了多种不同的微生物，并通过特定的鉴定方法确定其种属和数量。
结论：
通过土壤微生物分离实验，我们能够了解土壤微生物的多样性和数量，并且能够研究不同培养基对土壤微生物的影响。
微生物的分离培养为分析细菌的生物学特性、应用微生物工程提供了有力的手段。
土壤微生物的分离和纯化实验报告
土壤微生物的分离和纯化实验报告
土壤微生物的分离和纯化实验报告
实验目的
本次实验的目的是利用物理、化学和生物性等技术，从原始土壤样品中分离、筛选和纯化微生物株，并对分离出的微生物株进行形态学特征观察和分类鉴定。
实验材料
1. 原始土壤样品
2. 饱和淡盐水
3. 10% (v/v) 的平衡磷酸盐溶液
4. 0.85% (w/v) 的千顷盐溶液
5. 2% (w/v) 的体糖酸钠溶液
6. 氯仿
7. 板藻素
8. 无菌玻璃管
实验步骤
1. 将原始土壤样哮放入摇瓶内，加入淡盐水攪拌均匀，进行粗筛提取。
2. 将1ml混合液放入无菌玻璃管，8次补充磷酸盐溶液悬浮液进行细筛提取。
3. 将细筛提取的悬浮液转移到新的无菌容器中，加入盐溶液攪拌均匀。
4. 加入盐溶液之后，用氯仿消毒，然后加入体糖酸钠溶液留取微生物株悬浮液。
5. 使用板藻素进行单菌株筛选，筛选出单菌株。
6. 将筛选出的单菌株进行形态学特征观察和分类鉴定。
结果
本次实验中，经过物理、化学和生物性等技术操作，成功分离出一株微生物株，并对其进行形态学特征观察和分类鉴定，得出结果：该株微生物属于假单胞菌科，耐盐性，呈菌封形态。
结论
本次实验成功分离纯化出一株微生物株，该株微生物属于假单胞菌科，耐盐性，呈菌封形态。
微生物大实验 土壤中微生物的分离鉴定
土壤中微生物的分离与研究一、实验目的1.学习微生物纯系分离、培养方法。
2.掌握划线分离纯化微生物的方法。
3.掌握微生物生理生化反应的研究方法。
4.了解该菌种的生物学特征。
二、实验原理土壤是微生物的良好生境，土壤中有多种类群的微生物，它们对自然界物质的转化和循环起着极为重要的作用，对农业生产和环境保护有着不可忽视的影响。
根际微生物与植物的关系特别密切，不同的土壤和植物对根际微生物产生显著影响，而不同的根际微生物由于其生理活性和代谢产物的不同，也将对土壤肥力和植物营养产生积极或消极的作用。
土壤中微生物的数量因土壤类型、季节、土层深度与层次等不同而异。
一般地说，在土壤表面，由于日光照射及干燥等因素的影响，微生物不易生存，离地表10 cm～30 cm的土层中菌数最多，随土层加深，菌数减少。
土壤中微生物以细菌数量最多，为几百万个/克土至几亿个/克土，有各种生理类群，营养类型多属异养型，鉴别染色多为革兰氏阳性。
放线菌含量为几万个/克土至几百万个/克土，但其生物量不比细菌低，因为菌丝体积较大。
土壤中真菌含量为几千个/克土至几十万个/克土，而其生物量常比细菌的大。
通过土壤微生物的分离与计数及划线纯化，涂布分离长出的单菌落，须经划线纯化，再转斜面培养后保藏备用。
涂布分离细菌的平板，温箱培养1d～2d后，然后挑取各单菌落的部分培养物，在预先制备好的平板上划线纯化。
根据所得纯种菌，依次进行简单染色，革兰氏染色，芽孢染色，确定菌种的形态特征。
然后根据伯杰手册确定菌种的大体范围，有针对性的进行生理生化实验，从而最终确定菌种所在的属。
三、实验材料1.培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、PDA培养基、固体油脂培养基、固体淀粉培养基、葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基、蛋白胨水培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基。
2.染液和试剂：5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液、1%结晶紫水溶液、20%硫酸铜水溶液、95%乙醇、卢戈氏碘液、甲基红指示剂、乙醚、吲哚试剂等等。
土壤微生物的分离和纯化实验报告
土壤微生物的分离和纯化实验报告摘要本实验以镍离子作为纯化培养基，利用离子交换介质对细菌进行纯化，以筛选出较为纯化的细菌株。
本实验在4种离子强度（0.05M，0.1M，0.2M，0.3M）条件下，比较发酵性状态（游离镍离子浓度）下，测试样本的细菌含量。
结果表明，在游离镍离子浓度高的条件下，细菌含量会减少，细菌的质量也会更高。
1、引言土壤细菌是土壤中的重要微生物，可以改善土壤的生态环境，增强土壤的抗逆性，从而促进土壤的健康发展。
为了更好地研究土壤微生物的功能，有必要分离和纯化土壤中的细菌，以便进一步的研究。
本实验以镍离子作为纯化培养基，结合离子交换介质，以高纯度细菌取得细菌的纯化株系。
2、实验步骤（1）细菌样本准备：采集土壤样本，进行消毒，在琼脂糖培养基中接种；（2）离子交换介质制备：采用镍离子作为离子交换介质，分别在0.05M，0.1M，0.2M，0.3M离子强度条件下制备离子交换介质；（3）离子交换：将离子介质加入土壤液液分离细菌，离子介质被细菌吸收，细菌的活性被浓缩，可以获得较纯的细菌株，（4）纯化细菌：将细菌纯化物放入培养瓶进行培养，经过重复接种，最终获得纯化细菌株；（5）细菌测定：采用镍离子浓度测定细菌含量，测试样本的细菌含量。
3、实验结果实验结果如表1所示：表 1 细菌含量测定结果游离镍离子浓度（M）t细菌含量0.05t 62.5%0.1t 40.0%0.2t 12.5%0.3t 6.3%4、实验讨论从实验结果可以看出，随着游离镍离子浓度的增加，细菌含量会减少，从而达到较高的纯度。
其原因是离子交换介质中的镍离子与细菌表面的酶活性位点结合，以抑制细菌的活性，使菌体停止生长和繁殖，最终达到纯化株的目的。
5、结论本实验使用镍离子作为纯化培养基，结合离子交换介质，以高纯度细菌取得细菌的纯化株系。
实验结果表明，在游离镍离子浓度高的条件下，细菌含量会减少，细菌的质量也会更高。
从土壤中分离纯化微生物实验报告
从土壤中分离纯化微生物实验报告
实验名称：从土壤中分离纯化微生物
实验目的：从土壤中分离纯化微生物，了解微生物的生长与繁殖规律，提高分离技术的实践能力。
实验步骤：
1. 采集土壤样品，从不同深度、不同地点取样，放入消毒过的容器中，避免污染。
2. 准备好细菌培养基，如Luria-Bertani（LB）培养基、营养琼脂培养基等。
3. 取少量土样，加入LB培养基中，振荡混合，放入42℃的恒温培养箱中培养。
4. 24小时后，观察培养基上是否有生长菌落，若有，则取一部分菌落接种到新的LB培养基上再次培养。
5. 重复以上步骤，直至获得单个菌种菌落。
用无菌线圈挑取单一菌落，接种到新的培养基上，进行进一步鉴定。
实验结果：从土壤样品中获得多种不同形态和颜色的微生物。
通过分离和纯化，最终得到单一微生物菌落。
实验结论：从土壤样品中分离纯化微生物能够获得纯净的菌落，为进一步鉴定和研究微生物提供了基础。
同时，这也证明了分离技术在微生物研究中的重要性和必要性。
土壤分离微生物实验报告
土壤分离微生物实验报告土壤分离微生物实验报告一、引言土壤是地球上最为丰富的自然资源之一，其中存在着丰富的微生物群落。
这些微生物在土壤生态系统中发挥着重要的作用，包括有机质分解、养分循环、植物生长促进等。
本实验旨在通过分离土壤中的微生物，了解土壤微生物的多样性和功能。
二、实验方法1. 样品采集在实验开始前，我们选择了三个不同的土壤样品，分别来自农田、森林和草地。
使用无菌勺子将土壤样品采集到无菌离心管中，并尽量避免与外界环境接触。
2. 稀释与涂布将采集到的土壤样品分别加入无菌的盐水中进行稀释，制备出一系列不同浓度的土壤悬浮液。
然后，将这些悬浮液均匀涂布在含有富营养培养基的琼脂平板上。
3. 培养与分离将涂布好的琼脂平板置于恒温培养箱中，在适宜的温度下培养一段时间。
待菌落形成后，使用无菌勺子将单个菌落分离到含有富营养培养基的琼脂管中，形成单菌株。
4. 鉴定与保存对于分离得到的单菌株，我们进行了形态学观察、生理生化特性测试以及16S rRNA基因测序等鉴定工作。
同时，我们将这些单菌株保存在低温条件下，以备后续的实验研究。
三、实验结果通过上述实验方法，我们成功分离出了大量的土壤微生物。
经过鉴定和分类，我们发现这些微生物主要包括细菌、放线菌和真菌等不同类群。
其中，细菌是数量最多的一类，占据了总菌落数的70%以上。
进一步的研究表明，这些细菌在形态、生理和生化特性上存在较大的差异。
有些细菌形成了光滑的菌落，而另一些则呈现出粗糙的表面。
此外，它们对不同的碳源和氮源的利用能力也有所差异，表明这些微生物在土壤中具有不同的功能和代谢特性。
四、讨论与分析土壤微生物的多样性和功能对土壤生态系统的稳定性和健康发展起着至关重要的作用。
通过本实验的分离与鉴定工作，我们初步了解了土壤微生物的多样性，并发现了它们的形态、生理和生化特性的差异。
这为进一步研究土壤微生物的生态功能提供了基础。
然而，本实验仅仅是初步的分离与鉴定工作，还需要进一步的研究来揭示土壤微生物的生态功能。
土壤细菌计数实验报告
一、实验目的1. 掌握土壤细菌分离和计数的方法；2. 了解土壤细菌的种类及分布情况；3. 分析土壤细菌数量与土壤环境因素的关系。
二、实验原理土壤细菌是土壤微生物的重要组成部分，其数量和种类对土壤肥力、生态平衡等具有重要意义。
本实验采用稀释涂布平板法对土壤细菌进行分离和计数，通过观察菌落生长情况，了解土壤细菌的种类及数量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）土壤样品：采集不同地点、不同土壤类型的土壤样品；（2）培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基；（3）试剂：无菌水、酚红指示剂、NaOH、盐酸等。
2. 实验仪器：（1）天平；（2）无菌操作台；（3）显微镜；（4）高压蒸汽灭菌器；（5）恒温培养箱；（6）移液器；（7）涂布器。
四、实验步骤1. 土壤样品的采集与处理：（1）采集不同地点、不同土壤类型的土壤样品；（2）将土壤样品放入无菌袋中，编号；（3）将土壤样品在无菌操作台中过筛，去除大颗粒杂质。
2. 培养基的制备：（1）按照配方称取牛肉膏、蛋白胨、琼脂等试剂；（2）将试剂加入适量无菌水中，加热溶解；（3）调整pH至7.2-7.4；（4）分装至无菌试管中，高压蒸汽灭菌。
3. 土壤样品的稀释：（1）取一定量土壤样品，加入无菌水，充分搅拌；（2）依次进行10倍稀释，得到不同稀释度的土壤滤液；（3）取适量稀释液，涂布于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上。
4. 培养与观察：（1）将涂布好的平板放入恒温培养箱中，37℃培养24小时；（2）观察菌落生长情况，记录菌落数量。
5. 统计与分析：（1）根据菌落数量，计算不同稀释度平板上的细菌数量；（2）分析土壤细菌数量与土壤环境因素的关系。
五、实验结果与分析1. 实验结果：（1）不同土壤样品的细菌数量差异较大；（2）菌落生长情况良好，菌落形态各异。
2. 分析：（1）土壤细菌数量与土壤类型、有机质含量、水分等因素有关；（2）土壤细菌在土壤生态系统中发挥着重要作用，如参与物质循环、降解有机物等。
土壤微生物的分离和纯化实验报告
土壤微生物的分离和纯化实验报告
土壤微生物是土壤中最为丰富的生物群体之一，它们在土壤中扮演着重要的角色，如分解有机物质、固氮、矿物质转化等。
因此，对土壤微生物的研究具有重要的意义。
本文将介绍土壤微生物的分离和纯化实验。
一、实验目的
1.了解土壤微生物的分离和纯化方法；
2.掌握土壤微生物的培养技术；
3.观察土壤微生物的形态特征。
二、实验步骤
1.取一定量的土壤样品，加入适量的生理盐水中，摇匀后过滤；
2.将过滤液分别接种在不同的培养基上，如营养琼脂、马铃薯葡萄糖琼脂等；
3.将培养皿放置在恒温培养箱中，控制温度、湿度等条件；
4.观察培养皿中的微生物生长情况，挑选单一菌落进行分离和纯化；
5.将单一菌落接种在新的培养基上，重复以上步骤，直至获得纯种菌株。
三、实验结果
经过培养和观察，我们成功地分离出了多种土壤微生物，如放线菌、链霉菌、芽孢杆菌等。
其中，放线菌的形态特征为菌落呈灰白色，表面有细小的颗粒状物质，形似细长的线条；链霉菌的形态特征为菌落呈灰白色，表面有细小的颗粒状物质，形似细长的链条；芽孢杆菌的形态特征为菌落呈白色，表面有光滑的质地，形似细长的杆状物质。
四、实验结论
通过本次实验，我们了解了土壤微生物的分离和纯化方法，掌握了土壤微生物的培养技术，观察了土壤微生物的形态特征。
这些都为我们深入研究土壤微生物的生态学、生理学、遗传学等方面提供了基础。
同时，我们也认识到了土壤微生物在土壤生态系统中的重要作用，应该加强对其研究和保护。
土壤微生物实验报告
土壤微生物实验报告一、实验背景土壤是地球上生命存在的重要基础之一，其中栖息着丰富多样的微生物群落。
这些微生物在土壤的生态系统中发挥着至关重要的作用，如养分循环、有机物分解、土壤结构形成等。
了解土壤微生物的种类、数量和活性对于评估土壤质量、生态平衡以及农业可持续发展具有重要意义。
二、实验目的本实验旨在探究不同土壤类型中微生物的数量和种类差异，以及环境因素对土壤微生物群落的影响。
三、实验材料与方法（一）实验材料1、采集自不同地点的土壤样本，包括农田、森林、草地等。
2、培养基：牛肉膏蛋白胨培养基（用于细菌培养）、马丁氏培养基（用于真菌培养）、高氏一号培养基（用于放线菌培养）。
3、实验仪器：无菌操作台、恒温培养箱、显微镜、移液器、灭菌锅等。
（二）实验方法1、土壤样本采集选择具有代表性的采样地点，使用无菌采样工具采集表层（0 20 厘米）土壤，每个地点采集多个重复样本。
将采集的土壤样本放入无菌袋中，标记好采样地点和时间，迅速带回实验室进行处理。
2、微生物的分离与培养称取一定量的土壤样本，加入无菌水制成土壤悬液。
通过系列稀释法将土壤悬液稀释至合适的浓度。
分别取不同稀释度的悬液涂布于相应的培养基上，每个稀释度设置多个重复。
将涂布好的培养基倒置放入恒温培养箱中培养，细菌培养温度为 37℃，培养时间为 1 2 天；真菌培养温度为 28℃，培养时间为 3 5 天；放线菌培养温度为 28℃，培养时间为 5 7 天。
3、微生物的计数与鉴定培养结束后，对培养基上的菌落进行计数，并根据菌落的形态、颜色、大小等特征初步判断微生物的种类。
选取典型的菌落进行进一步的显微镜观察和生理生化实验，以确定微生物的种类。
四、实验结果（一）不同土壤类型中微生物的数量在农田土壤中，细菌数量最多，其次是放线菌，真菌数量相对较少。
在森林土壤中，真菌的数量相对较多，细菌和放线菌的数量相对较少。
草地土壤中的微生物数量介于农田和森林土壤之间。
（二）微生物的种类通过显微镜观察和生理生化实验，鉴定出了多种细菌、真菌和放线菌。
土壤微生物数量测定方法
土壤微生物的分离鉴定及数量测定（一）培养基的制备Ⅰ测定微生物总量培养基：1. 细菌培养基（牛肉膏蛋白胨琼脂培养基）牛肉膏Beefextract5.0g蛋白胨Peptone10.0gNaCI5.0g蒸馏水H201000m1琼脂15～20gPH7.2~7.4制备步骤：⑴在100 mL小烧杯中称取牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，加50 mL蒸馏水，置电炉搅拌加热至牛肉膏，蛋白胨完全溶解.⑵向小铝锅中加入500 mL蒸馏水，将溶解的牛肉膏，蛋白胨倒入铝锅中并用自来水洗2～3次.加入5.0gNaC1，在电炉上边加热边搅拌.⑶加入洗净的琼脂条，继续搅拌，加热至琼脂完全熔化，补足水量至1000 mL.⑷用NaOH或HC1调至pH7.0. 用酸度计或用玻棒沾少许液体用精密pH试纸测定其pH值，并用10％NaOH 调至所需pH值，必要时用滤纸或脱脂棉过滤。
一般比要求的pH高出0.2，因为高压蒸汽灭菌后，pH常降低。
⑸根据不同需要，可将配好的培养基分装入配有棉塞的试管或三角瓶内。
注意分装时避免培养基挂在瓶口或管口上引起杂菌污染。
如液体培养基，应装试管高度的1/4左右；固体培养基装试管高度的1/5左右；装入三角瓶的量以三角瓶容量的一半为限。
，塞好棉塞，装入小铁丝筐，然后用旧报纸将棉塞部分包好. 标签表明培养基的名称、配制日期等。
⑹高压蒸汽灭菌，用0.1Mpa（15lb/in2）121℃灭菌（15-20）30min.2.放线菌培养基（改良高氏1号琼脂培养基）可溶性淀粉20gKNO3 1gK2HPO40.5gMgSO4• 7H2O 0.5gNaCl 0.5g原0.05gFeSO4• 7H2O 0.01gpH 7.2-7.4制备步骤：（1）计算根据配方计算各种药品所需要的量，然后再分别称量。
（2）称量准确称量各种成分。
（3）溶化配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入少许沸水中，在火上加热，边搅拌边依次逐一溶化其他成分，溶化后，补足水分到1000ml，调PH（可不调）。
土壤微生物分离纯化及测数.
土壤微生物别离纯化及测数土壤微生物|别离纯化及测数来源：生物秀时间：2021-5-28一、实验目的要求了解土壤微生物的别离纯化及测数的根本原理。
学习并掌握微生物别离纯化技术方法。
学习并掌握微生物平板菌落计数的技术方法。
二、根本原理土壤是微生物生活的大本营，其中含有大量不同类型的微生物，可按照一定的方法将各类微生物通过别离进行纯培养，并能对特定类群进行数量测定。
根本原理是通过稀释使菌体细胞充分分散，单细胞得以生长发育形成菌落，可使用稀释法或平板划线法进一步纯化，还可通过平板菌落计数，推算单位重量土壤样品含有微生物的数量。
三、实验步骤〔一〕土壤样品采集在待测田块上，假设田块面积小于50平方米那么按对角线三点采样，假设田块面积大于50平方米按对角线五点采样。
采样一般定点于耕作层0--20cm，先除去表土 1--2cm，以无菌铲采土足量充分混匀后用无菌塑料袋分装。
〔二〕好气性细菌的别离纯化及测数1.制备土样稀释液吹吸三次混匀无菌操作另留一管不稀释留作对照〔C K〕2.培养基的准备融化牛肉膏蛋白胨培养基，融化后保温在48℃。
并取6个无菌培养皿，分别在皿底贴好标签，注明10-5、10-6、CK〔每个稀释度要两个平行皿，对照要两个平行皿〕。
3.倾注法接种先按10-6，10-5的顺序将不同稀释度菌悬液接入对应平皿中〔每个平皿接入1ml〕，再向每个平皿倾注约15ml的牛肉膏蛋白胨培养基〔48℃〕待冷凝，混合均匀。
4.保温培养将已经接种的平皿静置10min后，放入温箱倒置培养3--5日〔30℃〕，观察结果。
5.分区划线法纯化平板划线别离，其划线方法有以下两种：6.计数要求30~300之间计数。
CK除外。
每克湿土样细菌数量＝平均菌落数×稀释倍数土壤样品水分系数1∕〔1—样品水分百分数〕土壤样品细菌数量〔个∕克干土〕＝每克湿土样细菌数量×样品水分系数四实验报告及思考题记录计数结果并计算土壤样品含菌数。
实验九土壤微生物的分离与计数
土壤微生物的分离与计数
——涂布平板法
一、实验目的
1、学习利用平板分离法从土壤分离微生物的基 本操作。
2、掌握微生物平板计数的方法。
二、实验原理
土壤是微生物生活的大本营
根据某微生物的生长条件（营养，酸碱度，温度，氧 气等）而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂造成 只利于该菌生长，而抑制其他菌生长；用稀释涂布平板法 获得单菌落（并不能绝对保证是纯培养，需要结合观察其 菌落特征、个体特征，进一步分离纯化）。
四、实验方法
1、倒平板 2、土壤菌悬液的制备 10g土样 + 90ml无菌水 振荡20min 3、梯度稀释 取1ml土壤菌悬液移入含9ml无菌水的试管中，吹吸均匀， 为稀释10倍的样品，依次进行梯度稀释10-1~10-6
4、涂布：取0.1ml适当浓度的稀释液涂布于相应平板，每个
稀释度做3个平行，每种菌需要做9块平板，及时 标记，涂布后静置10分钟。 分离对象 稀释度 分离方法
稀释到适量浓度
倾注或涂布平板
培养
菌落计数
将待测样品适当稀释，使其中的微生物充分分散成单个细 胞，取一定量的稀释液接种到培养基上，经过繁殖每个单细菌 长成肉眼可见的菌落，即一个菌落代表样品中的一个单细胞。
根据菌落数，稀释倍数，接种量可推算出原样品中的含菌数。
样品充分混匀；
同一稀释度三个以上重复， 取平均值； 每个平板上的菌落数目合适， 便于准确计数。
一般用菌落形成单位（ny forming units， CFU）来表示 原样品中的细胞数。
三、实验材料
1、土样：选择某一生境土壤，去表层土，挖5~20cm深度 的土壤数10g，装入已灭菌的牛皮纸袋。 2、培养基: 牛肉膏蛋白胨培养基：细菌 淀粉琼脂培养基（高氏1号）：放线菌——每300ml培 养基加入1ml3%的重铬酸钾抑制细菌和霉菌生长 马丁氏培养基：真菌——孟加拉红抑制细菌和放线菌
土壤微生物的分离和计数
一,实 验 设 计 请你根据实验流程图和提供的三个资料以及" 请你根据实验流程图和提供的三个资料以及"操作 提示" 在思考有关问题的基础上, 提示",在思考有关问题的基础上,设计出一个详细的 实验方案. 实验方案. 土壤取样 选择培养 梯度稀释
将样品涂布在鉴别纤 维素分解菌的培养基上
筛选产生透 明圈的菌落
�
2.样品的稀释操作是否成功 2.样品的稀释操作是否成功 如果得到了2个或2个以上菌落数目在30～ 如果得到了2个或2个以上菌落数目在30～300 30 的平板,则说明稀释操作比较成功, 的平板,则说明稀释操作比较成功,并能够进行 菌落的计数. 菌落的计数. 3.重复组的结果是否一致 3.重复组的结果是否一致 如果各位同学选取的是同一种土样, 如果各位同学选取的是同一种土样,统计的 结果应该接近.如果结果相差太远, 结果应该接近.如果结果相差太远,则需要从各 项操作过程中去分析,寻找可能的原因. 项操作过程中去分析,寻找可能的原因.
二,结果分析与评价 1.培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是 1.培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是 否筛选出菌落 对照的培养皿在培养过程中没有菌落生 长,说明培养基没有被杂菌污染.牛肉膏培养基 说明培养基没有被杂菌污染. 的菌落数目明显大于选择培养基的数目, 的菌落数目明显大于选择培养基的数目,说明选 择培养基已筛选出一些菌落. 择培养基已筛选出一些菌落.
挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含酚红培养 基的斜面中,观察能否产生如课本中图2 10的颜色反应. 基的斜面中,观察能否产生如课本中图2-10的颜色反应. 的颜色反应
(5)细菌的计数
选取菌落数在30～300的平板进行计数.在同一稀释度 的平板进行计数. 选取菌落数在30～300的平板进行计数 30 下,至少对3个平板进行重复计数,然后求出平均值,并 至少对3个平板进行重复计数,然后求出平均值, 根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目. 根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目.
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稀释到适量浓度
倾注或涂布平板
培养
菌落计数
样品充分混匀；
同一稀释度三个以上重复， 取平均值； 每个平板上的菌落数目合适， 便于准确计数。
一般用菌落形成单位（colony forming units， CFU）来表示 原样品中的细胞数。
三、实验材料
1、土样：选择某一生境土壤，去表层土，挖5~20cm深度 的土壤数10g，装入已灭菌的牛皮纸袋。 2、培养基: 牛肉膏蛋白胨培养基：细菌 淀粉琼脂培养基（高氏1号）：放线菌——每300ml培 养基加入1ml3%的重铬酸钾抑制细菌和霉菌生长 马丁氏培养基：真菌——孟加拉红抑制细菌和放线菌
实验九
土壤微生物的分离与计数
——涂布平板法
一、实验目的
1、学习利用平板分离法从土壤分离微生物的基 本操作。
2、掌握微生物平板计数的方法。
二、实验原理
土壤是微生物生活的大本营
根据某微生物的生长条件（营养，酸碱度，温度，氧 气等）而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂造成 只利于该菌生长，而抑制其他菌生长；用稀释涂布平板法 获得单菌落（并不能绝对保证是纯培养，需要结合观察其 菌落特征、个体特征，进一步分离纯化）。
细菌
放线菌 霉菌
10-6 、10-7、 10-8
10-4 、10-5、 10-6 10-2、 10-3、 10-4
0.1ml菌悬液，涂布法分离
0.1ml菌悬液，涂布法分离 0.1ml菌悬液，涂布法分离
5、培养
将细菌、真菌、放线菌培养基倒置于30℃培养箱中 培养3-5d。 6、计数 7、挑菌（纯化） 将培养后长出的单菌落数量、形态、培养特征进行 观察，分别挑取单菌落于相应平板上划线、分离， 培养， 检查菌落是否一致、单纯（也可以用显微镜涂片染色镜 检是否是单一的微生物），如有杂菌需进一步纯化、分 离。
四、实验方#43; 90ml无菌水 振荡20min 3、梯度稀释 取1ml土壤菌悬液移入含9ml无菌水的试管中，吹吸均匀， 为稀释10倍的样品，依次进行梯度稀释10-1~10-6
4、涂布：取0.1ml适当浓度的稀释液涂布于相应平板，每个
稀释度做3个平行，每种菌需要做9块平板，及时 标记，涂布后静置10分钟。 分离对象 稀释度 分离方法
每毫升菌落形成单位＝同一稀释度的三次重复平均数×稀释倍数 ×5
五、思考题
1、记录利用稀释涂布法对土壤样品进行活菌计数的结果。
重复 1 2 3 平 均 1 2 3 平 均 1 2 3 平 均
平板 中的 CFU 数
平板计数
稀释度 放线菌 稀释度 真菌 10-2 10-3 10-4 10-2 10-3 10-4
稀释度 细菌
10-4
10-5
10-6
每克含菌样品中细菌/放线菌/真菌 活细胞数＝ （同一稀释度平板上菌落平均数× 10×稀释倍数） 含菌样品克数