微生物培养基的制备及接种

微生物培养基的制备及接种

宿舍：628

成员：黄朋朋、李厅、王冲、马浩、王萌、

王锦楼

一、实验原理：

牛肉膏蛋白培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养

基，这种培养基含一般细菌生长繁殖所需要的最基本营养物质，培养基含有碳源、氮源、磷酸盐、维生素、生长因子等。

在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。多用于培

养细菌因此要用烯酸和稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于

细菌的生长繁殖。

二、实验器材：

1、试剂：牛肉膏1.8g、蛋白胨6g、食盐11g、琼脂12g、水

600ml、1mol/L NaOH、1mol/L HCl

2、仪器或其他用具：试管56/个、1000ml大烧杯/个、三角

瓶、量筒、玻璃棒、培养基分装器、分析天平、牛角匙、

pH试纸、牛皮纸、记号纸、麻绳、纱布、培养皿、高压

式蒸汽灭菌锅等。

3、菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌菌种。

三、实验步骤：

1、称量

按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl

放入烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。2、溶解：

在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻璃棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后，补

充水分到所需的总体积。配制固体培养基，将称好的琼脂

放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，

需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的

水分。

3、调pH：

在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，

如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，

边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7．6。

反之，则用1mol/L HCl进行调节。注意pH值不要调过头，

以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。4、分装：

按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内,每试管

10ml。如图：

注：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引

起污染。装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面。

5、加棉塞

培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。如图：

6、包扎：

加塞后，将全部试管用麻绳捆扎好，再在棉塞外包一层

牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻

绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、日期。

7、灭菌：

将培养基放入高压蒸汽灭菌锅后，加盖，并将盖上的排气

软管插入内层锅的排气槽内，采用对角式均匀拧紧锅盖上

的螺旋，使蒸气锅密闭，勿使漏气。加热，0.103Mpa,121℃

并维持压力至所需时间20min，取出。

7、倒置斜面：

将灭菌的试管培养基冷至50℃左右，将试管棉塞端搁在

玻棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。

如图：

8、无菌检查：

将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以

检查灭菌是否彻底。

9、无菌接种：

如图：

注意：①以上操作必须在无菌的环境下进行即酒精灯的火焰辐射范围内

②用接种环应充分灼烧

③挑取少量菌种在试管斜面上轻轻由管底到管口划波浪线

④塞好棉塞

10、培养：

将已经接种的培养基试管上贴上标签，注明接种的菌名，日期，将培养基于28~30℃下培养2~3d后观察待用。