实验3-微生物接种技术
(完整版)微生物的接种技术
微生物的接种技术1 目的1.1学习掌握微生物的几种接种技术1.2 建立无菌操作的概念，掌握无菌操作的基本环节2 实验说明将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。
接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。
无论微生物的分离、培养、纯化或鉴定以及有关微生物的形态观察及生理研究都必须进行接种。
接种的关键是要严格的进行无菌操作，如操作不慎引起污染，则实验结果就不可靠，影响下一步工作的进行。
3 实验器材3.1 器械和用品酒精灯，玻璃铅笔，火柴，试管架、接种环、接种针、接种钩、滴管、移液管、三角型接种棒等接种工具。
3.2 菌种和培养基菌种：大肠杆菌（Escherichia coli），金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）。
培养基：普通琼脂斜面和平板,营养肉汤,普通琼脂高层(直立柱)。
4 实验流程斜面接种法→液体接种法→固体接种法→穿刺接种法。
5 操作步骤5.1 斜面接种法斜面接种法主要用于接种纯菌，使其增殖后用以鉴定或保存菌种。
通常先从平板培养基上挑取分离的单个菌落，或挑取斜面，肉汤中的纯培养物接种到斜面培养基上。
操作应在无菌室、接种柜或超净工作台上进行，先点燃酒精灯。
将菌种斜面培养基(简称菌种管)与待接种的新鲜斜面培养基(简称接种管)持在左手拇指、食指、中指及无名指之间，菌种管在前，接种管在后，斜面向上管口对齐，应斜持试管呈45～0度角，并能清楚地看到两个试管的斜面，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。
以右手在火焰旁转动两管棉塞，使其松动，以便接种时易于取出。
右手持接种环柄，将接种环垂直放在火焰上灼烧。
镍铬丝部分（环和丝）必须烧红，以达到灭菌目的，然后将除手柄部分的金属杆全用火焰灼烧一遍，尤其是接镍铬丝的螺口部分，要彻底灼烧以免灭菌不彻底。
用右手的小指和手掌之间及无名指和小指之间拨出试管棉塞，将试管口在火焰上通过，以杀灭可能沾污的微生物。
微生物的分离、接种和培养技术
微生物的分离、接种和培养技术一、实验的目的和内容目的：掌握微生物接种和分离纯化技术，掌握无菌操作技术。
内容：用平板划线法分离微生物；学习斜面接种及穿刺接种等无菌操作技术。
二、基本原理在自然界中，各种微生物是在互为依赖的关系下共同生活的。
因此，为了取出特定的微生物进行纯培养，必须从中把他们分离出来。
微生物接种技术是进行微生物实验和相关研究的基本操作技能。
无菌操作是微生物接种技术的关键。
接种是将微生物或微生物悬液引入新鲜培养基的过程。
由于实验目的、培养基种类及实验器皿等不同，所用接种方法不尽相同。
斜面接种、液体接种、固体接种和穿刺接种操作均以获得生长良好的纯种微生物为目的。
分离培养微生物时，要考虑微生物对外界的物理、化学等因素的影响。
即选择该类微生物最适合的培养基和培养条件。
在分离、接种、培养过程中，均需严格的无菌操作，防止杂菌侵入，所用的器具必须经过灭菌，接种工具无论使用前后都要经过灭菌，且在无菌室或无菌箱中进行。
三、材料及器材（一）菌种：大肠杆菌、枯草杆菌，金黄色葡萄球菌，酵母菌。
（二）培养基：肉汤培养基试管斜面，肉汤半固体培养基，肉汤固体培养基试管斜面，肉汤固体培养基平板，查氏培养基试管斜面，查氏培养基平板。
易（三）仪器及其他工具：接种环，接种针，接种钩，镊子，酒精灯，火柴，酒精棉，试管架，标签纸，恒温培养箱等。
四、方法与步骤（一）接种。
1、试管菌种转接：试管细菌菌种转接主要用于菌种的活化、分离、纯化。
（1）将菌种试管与待接种的试管培养基依次排列，挟于左手的拇指与其他四指之间，用右手的无名指与小指和手掌边拔出棉塞并挟住。
（2）置试管口于酒精火焰附近。
（3）将接种工具垂直插入酒精火焰中烧红，再横过火焰3次，然后再放入有菌试管中，在管壁上停留片刻待其冷却。
（4）取少许菌种置于另一支试管中，按一定的接种方式把菌种接种到新的培养基上。
（5）取出接种工具，试管口和棉塞进行火焰灭菌。
（6）重新塞上棉塞。
（7）烧死接种工具上的残余菌，把试管和接种工具放回原处。
实验微生物接种技术讲解
实验微生物接种技术讲解实验微生物接种技术讲解微生物接种篇一：实验微生物接种技术一、目的：学习微生物工作的基本接种方法，建立纯培养技术中的“无菌”概念，掌握无菌操作技术。
二、原理：所谓接种就是将一定量的纯种微生物在无菌操作条件下转移到另一已灭菌，并适宜于该菌生长繁殖所需的培养基上的过程。
本实验要求严格进行无菌操作，一般是在无菌操作台或在实验室内火焰旁进行。
根据不同的实验目的和培养方式，可以采用不同的接种工具和接种方法。
三、实验材料：斜面培养基、液体培养基、平板培养基、记号笔、酒精灯、接种针、消毒酒精、涂布棒等。
四、操作步骤（一）无菌操作菌种分离或移接工作应在无菌环境中进行，接种室、接种箱或超净工作台是常用的接种环境。
用前先清洁好卫生，再进行消毒处理。
可用紫外线灯和甲醛熏蒸的双重作用，或用3%来苏尔及其他表面消毒进行喷雾。
操作者的手应先用肥皂洗净，再用酒精棉球消毒；整个操作过程都要靠近酒精灯火焰；接种工具在用前和用后必须在灯焰上灭菌；棉塞不得乱放，操作中只能夹在手上；不能有跑、跳等力度大的动作，以免引起空气大振动而增加染菌机会。
（二）接种方法（1）斜面接种：从已长好微生物的菌种管移接到另一斜面管的方法。
此法用于好气性微生物的接种。
左手持菌种管和斜面管，使斜面向上，并尽量放平。
用右手先将棉塞拧转松动，再拿接种环，用右手的小指、无名指和手掌拨下棉塞并夹紧，同时将管口在火焰上燃烧一圈，接种环灼烧灭菌后插入管内，冷却、挑菌，立即转入斜面管底部，沿斜面划曲线或直线。
图1.斜面接种示意图（2）液体接种：由斜面菌接种到液体培养基（如试管或三角瓶等）中的方法。
操作与上法基本一致，只是在将接种环送入液体培养基中时使环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，然后塞上棉塞，再轻轻摇动均匀，即可培养。
如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管接种。
（3）穿刺接种：用接种针挑取菌种后，插入深层固体培养基内，（不要刺到底部），再沿原路拔出，此法用于厌气性细菌接种、检查细菌的运动能力。
微生物的接种分离和纯培养
穿刺接种技术：用接种针从菌种斜面上挑取 少量菌体并竖直穿刺到半固 体培养基中；
接种无菌操作步骤
1. 将菌种斜面和待接种新鲜斜面夹在左手 的食指、中指和无名指之间，大拇指按在两 只试管中间。右手旋松棉塞，便于拔出； 2. 右手拿接种环，竖直伸入火焰中，环端 及伸入试管中部分均充分灭菌；
I
冷却至 45℃左右
每皿约倒入15ml
肉汤培养基
II
III
0.2ml 0.2ml
0.2ml
微生物的计数
血球计数法 平板活菌计数法
计繁殖数法只适宜于单细胞状态的微生物 或丝状微生物产生的孢子
血球计数法
一、实验原理
血球计数器是一特制的厚载玻片，上面 刻有一定面积的方格，将盖玻片盖上后，由 于两者之间存在着距离使之形成一定容积的 小室。滴入待测样品后，使样品均匀充满小 室，在显微镜下计算小室内的菌数，换算成 单位体积的样品中所含的菌数。
度。
思考题
1. 微生物的纯种分离通常采用那些方法，并说明个 方法的特点。
2. 什么叫微生物的污染？如何防止？ 3. 从两种方法计数得出的菌液浓度是否一致？分析
误差产生的原因，由此比较一下两者的优缺点及 各自的适用范围。 4. 平板活菌计数中，为何选择生长有25～250个菌 落的平板？
碰到火焰，以免烧死菌体 6. 血球计数器要洁净干燥，滴入菌液时在盖玻片与
载玻片间不能有气泡 7. 血球计数时显微镜光线不宜太亮
实验安排（三人一组）
斜面接种：每组三支 液体接种：每组三支（大肠、四联、枯草各一支） 穿刺接种：每组二支（四联一支、变形一支） 平板划线分离：每人划一块平板（混合菌液) 稀释分离：I、II、III各一块平板（混合菌液) 血球计数：写出小格数目，并算出酵母菌液
微生物的接种技术
（二）穿刺接种
用接种针挑取菌种（针必须挺直），自培养基的 中心垂直地刺入半固体培养基中，直至接近管底， 但不要穿透，然后沿原穿刺线将针拔出，塞上试管 塞，烧灼接种针。
五、实验结果 1、待接种菌种培养长出后，看划线是否标准 2、观察穿刺接种生长状态 六、思考题 1、什么是无菌操作 2、接种时应注意的问题有哪些
实验七 微生物的接种技术
Hale Waihona Puke 一、实验目的熟悉微生物的无菌接种技术和方法
二、实验原理
微生物接种是将一种微生物移接到另一灭过菌 的新鲜培养基中，使其繁殖生长的过程。
方法有：斜面接种、液体接种、平板接种、穿 刺接种等。
无菌操作：培养基灭菌后，用灭过菌的无菌工 具将含菌材料接种于灭菌培养基上的过程。
三、实验材料 1、菌种：大肠杆菌（Ec） 2、培养基：营养琼脂斜面培养基、
4、右手拿接种环通过火焰烧灼灭菌，在火焰边用 右手的手掌边缘和小指/小指和无名指分别夹持 试管帽，将其取出，并迅速烧灼管口。
5、将灭菌的接种环伸入菌种试管内，先将环接触试 管 内壁或未长菌的培养基，达到冷却的目的，然后再 挑取少许菌苔。将接种环退出菌种试管，迅速伸入 待接种的斜面试管，用环在斜面上自试管底部向上 端轻轻地划直线，勿将培养基划破，也不要使环接 触管壁或管口。
牛肉膏蛋白胨半固体培养基 3、器材：接种环、接种针、酒精灯
四、操作步骤
（一）斜面接种
1、在斜面试管上，用记号笔写上 将接种的菌名、日期和接种者；
2、点燃煤气灯；
3、将菌种试管和待接种的斜面试 管，用大拇指和食指、中指、无 名指握在左手中，并将中指夹在 两试管之间，使斜面向上，成水 平状态，在火焰边用右手松动试 管塞，以利于接种时拔出。
微生物的接种技术
引言：微生物的接种技术是一种利用活体微生物来改变或影响其宿主环境以达到某种特定目的的方法。
它在农业、医疗、环境保护等领域中有着广泛的应用。
本文将详细介绍微生物的接种技术的原理、分类以及在不同领域中的应用。
概述：微生物的接种技术是通过将特定的微生物引入特定的环境中，从而影响宿主环境中的生物群落，并达到改变环境的目的。
接种技术的成功与否取决于合适的微生物选择、适当的接种方法和适宜的环境条件。
正文：一、微生物接种技术的原理1.1接种微生物的目的和原因1.2微生物的选择原则1.3接种微生物的策略二、微生物接种技术的分类2.1入侵性接种技术2.2非入侵性接种技术2.3增强型接种技术2.4保护性接种技术2.5组合接种技术三、农业领域中的微生物接种技术应用3.1有益微生物的接种3.2有害微生物的控制3.3好氧微生物的应用3.4厌氧微生物的应用3.5接种微生物的途径与技术四、医疗领域中的微生物接种技术应用4.1微生物解毒剂的应用4.2高效微生物生产技术的应用4.3微生物酶的应用4.4微生物制剂的应用4.5微生物植入技术的应用五、环境保护领域中的微生物接种技术应用5.1污水处理中的微生物接种技术5.2土壤修复中的微生物接种技术5.3水质净化中的微生物接种技术5.4生态系统修复中的微生物接种技术5.5环境监测与评估中的微生物接种技术总结：微生物的接种技术是一种重要的生物技术手段，可以在农业、医疗、环境保护等领域中发挥重要作用。
它有助于改善宿主环境、增强微生物活性和促进生态平衡。
在应用微生物接种技术时，需注意选择适宜的微生物菌种、合适的接种方法以及适当的环境条件，以达到最佳的效果。
实验三：细菌分离接种技术和培养
实验三 细菌分离、接种技术和培养法
目的要求：
1、掌握细菌分离培养的基本要领和方法。
2、掌握平板划线、斜面培养基等接种方法。
3、熟悉细菌分离培养的环境和条件。
实验内容：
1、 细菌划线分离培养：连续划线分离培养法 分区划线分离培养法
2、 纯培养获得与移植：试管间的斜面移植； 可疑菌落纯培养移植
Staphylococcus epidermidis on blood agar With on hemolysis
细菌纯培养
细菌斜面 纯培养法
细菌纯培养
液体培养基
半固体培养基穿刺培养
实验报告：
1、细菌分离培养和纯培养的实验过程。 2、本次细菌分离培养的结果。
细菌划线分离培养
Streptococcus pyogenes on blood agar, illustration b-hemolysis.
Streptococcus pneumoniae on blood agar, illustration a-hemolysis.
Staphylococcus aureus on blood agar, illustration b-hemolysis.
3、 液体培养基增菌和培养（示教）
4、 半固体培养基穿刺培养（示教）
说明：
病原菌的人工培养一般采用35～37℃，培养时间多数为18～24 h，但有 时需根据菌种及培养目的作最佳选择，如细菌的药物敏感试验则应选用对数 期的培养物。将标本或培养物划线接种在固体培养基的表面，因划线的分散 作用，使许多原混杂的细菌在固体培养基表面上散开，称为分离培养。一般 经过18～24 h培养后，单个细菌分裂繁殖成一堆肉眼可见的细菌集团，称为 菌落（colony）。挑取一个菌落，移种到另一培养基中，生长出来的细菌均 为纯种，称为纯培养（pure culture）。从混杂的微生物群体中获得只含有 某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。微生物在固体培养 基生长形成的单个菌落一般是一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通过挑取 单菌落而获得一种纯培养。
实验报告细节接种
一、实验目的1. 学习微生物接种的基本原理和方法。
2. 掌握无菌操作技术，确保实验结果的准确性。
3. 熟悉微生物培养过程中的注意事项，提高实验技能。
二、实验原理微生物接种是将一定量的纯种微生物在无菌操作条件下转移到另一已灭菌的培养基上的过程。
无菌操作是保证实验结果准确性的关键，接种方法的选择应根据实验目的和微生物特性进行。
三、实验材料1. 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等。
2. 培养基：LB培养基、PDA培养基等。
3. 仪器：无菌操作台、酒精灯、接种环、接种针、试管、培养皿等。
四、实验步骤1. 无菌操作台准备：提前清洁无菌操作台，用紫外线灯消毒20分钟。
2. 菌种复苏：将保存的菌种从冰箱取出，用接种环在菌种管中轻轻挑取少量菌落，置于无菌试管中，加入适量的无菌水，充分振荡混匀。
3. 培养基制备：按照实验要求，配制相应的培养基，分装于试管或培养皿中，高温高压灭菌。
4. 接种操作：（1）斜面接种：将无菌接种环在酒精灯火焰上灼烧灭菌，待冷却后挑取适量菌液，沿斜面管壁涂抹，使菌液均匀分布在斜面上。
（2）平板接种：将无菌接种环在酒精灯火焰上灼烧灭菌，待冷却后挑取适量菌液，滴加于平板中央，用无菌涂布棒均匀涂布。
（3）液体接种：将无菌接种环在酒精灯火焰上灼烧灭菌，待冷却后挑取适量菌液，加入无菌试管中的培养基中，充分振荡混匀。
5. 培养观察：将接种后的试管和培养皿置于适宜的培养箱中，观察菌落生长情况，记录实验数据。
五、实验结果与分析1. 斜面接种：菌落生长良好，菌落形态、大小、颜色等特征符合实验要求。
2. 平板接种：菌落生长良好，菌落形态、大小、颜色等特征符合实验要求。
3. 液体接种：菌液澄清，无沉淀物，菌落生长良好。
六、实验结论1. 通过本次实验，掌握了微生物接种的基本原理和方法。
2. 无菌操作技术在实验中至关重要，可以有效避免污染，保证实验结果的准确性。
3. 掌握了不同接种方法的特点和适用范围，为后续实验提供了基础。
微生物标本接种(两篇)2024
引言概述微生物标本接种是一项重要的实验室技术，它在微生物学研究、医学诊断和食品工业等领域中起着关键作用。
本文将继续介绍微生物标本接种的相关内容，包括无菌技术、常用标本接种方法、优化接种条件、接种后的菌落观察与鉴定，以及相关的规范要求。
通过本文的阐述，读者将进一步了解微生物标本接种的重要性以及操作技巧。
正文内容一、无菌技术1.理解无菌技术的意义和目的a.防止外源性微生物污染b.保证实验结果的准确性2.熟悉无菌技术的基本要求a.选择适当的工作环境与设备b.采取适当的个人防护措施c.消毒操作的重要性与方法二、常用标本接种方法1.心形接种法a.标本接种器的选择与使用b.接种斜面固体培养基的操作步骤c.控制接种量的技巧2.点菌接种法a.接种环的选择与使用b.点菌接种的操作流程c.避免混合样品的方法3.涂片接种法a.特定细菌的涂片接种方法b.真菌与酵母菌的涂片接种注意事项c.涂片的热固化与染色技巧三、优化接种条件1.温度控制的重要性a.理解不同微生物的生长温度要求b.设定合适的培养温度2.湿度和氧气的影响a.理解湿度对微生物生长的影响b.确保适当的氧气供应3.营养物质的选择与配比a.确定微生物所需的营养物质b.确保培养基的合理配比四、接种后的菌落观察与鉴定1.菌落形态的观察与描述a.形态特征的分类与测量b.菌落颜色的描述与分析2.镜检观察技巧a.镜检与染色的操作流程b.不同染色方法的选择与应用3.菌种鉴定的基本步骤a.生理生化特性的鉴定b.分子生物学方法的应用五、规范要求与注意事项1.实验室安全与操作规范a.安全规章制度的遵守b.废物处理与消毒措施的要求2.实验记录与数据分析a.正确记录实验数据与结果b.数据的统计与分析方法3.质量管理与质控措施a.核心实验室的质量管理要求b.质控措施的实施与监督总结微生物标本接种是微生物学研究和医学诊断中至关重要的步骤。
通过本文的介绍，我们了解了无菌技术的重要性以及常用的标本接种方法。
实验三 细菌纯种分离、培养和接种技术
实验三细菌纯种分离、培养和接种技术一、实验目的(1)了解和学习水中细菌总数和大肠菌群的测定原理和测定意义。
(2)学习和掌握用稀释平板计数法测定水中细菌总数的方法。
(3)学习和掌握水中大肠菌群的检测方法。
二、实验原理水的微生物学的检验，特别是肠道细菌的检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。
国家饮用水标准规定，饮用水中大肠菌群数每升中不超过3个，细菌总数每mL不超过100个。
它反映的是检样中活菌的数量。
所谓大肠菌群，是指在37°C24h内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌的总称。
水的大肠菌群数是指lOOmL水检样内含有的大肠菌群实际数值，以大肠菌群最近似数(MPN)表示。
水源中大肠菌群的数量，是直接反映水源被人畜排泄物污染的一项重要指标。
目前，国际上已公认大肠菌群的存在是粪便污染的指标。
因而对饮用水必须进行大肠菌群的检查。
水中大肠菌群的检验方法，常用多管发酵法和滤膜法。
多管发酵法可运用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要时间长。
滤膜法仅适用于自来水和深井水，操作简单、快速，但不适用于杂质较多、易于阻塞滤孔的水样。
三、实验材料1、菌落总数的测定：1)培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，无菌生理盐水。
2)器材：灭菌三角瓶，灭菌的具塞三角瓶，灭菌平皿，灭菌吸管，灭菌试管等。
2、大肠菌群的测定：1)培养基：①乳糖胆盐蛋白胨培养基：蛋白胨20g，胆盐(或牛、羊胆盐)5g,乳糖10g，0.04%溴甲酚紫水溶液25mL,水1000mL,pH7.4。
制法：将蛋白胨、胆盐、乳糖溶于水中，校正pH,加入指示剂，分装，每瓶50mL或每管5mL,,并倒置放入一个杜氏小管，121C灭菌15min。
②伊红美蓝琼脂培养基：制法：将伊红美蓝琼脂粉溶于水中，校正pH后分装.121C灭菌15min备用。
平板划线法：接种是采用平板划线的方法将初发酵的大肠杆菌进行接种。
四、实验方法1、水样的采集：1）自来水：先将自来水龙头用酒精灯火焰灼烧灭菌，再开放水龙头使水流5min,以灭菌三角瓶接取水样以备分析。
微生物常用的接种方法
微生物常用的接种方法首先，最常见的接种方法之一是平板接种。
平板接种是将微生物接种在富有营养物质的平板培养基表面上，通过均匀涂抹的方式使微生物均匀分布在培养基表面。
这种方法适用于对微生物营养需求较高的情况，可以有效地促进微生物的生长和繁殖。
在进行平板接种时，需要注意使用无菌技术，避免外界的污染对实验结果的影响。
其次，液体接种是另一种常用的接种方法。
液体接种适用于对微生物生长环境有一定要求的情况，可以提供更加精确的实验条件。
在液体接种时，需要将微生物接种在含有适当营养物质的培养基中，通过摇床或培养箱等设备进行培养。
这种方法可以更好地模拟微生物在自然环境中的生长状态，对于一些特殊微生物的研究具有重要意义。
另外，还有一种常用的接种方法是斜面接种。
斜面接种是将微生物接种在培养基斜面上，通过均匀涂抹的方式使微生物均匀分布在斜面上。
这种方法适用于对微生物的形态和生长特性有一定要求的情况，可以更好地观察微生物的生长情况和形态特征。
在进行斜面接种时，需要注意斜面的倾斜角度和培养基的均匀涂抹，以保证实验的准确性和可靠性。
除了上述常见的接种方法外，还有一些其他特殊的接种方法，如深层接种、滴定接种等，它们适用于特定的研究需要，可以根据实验的具体要求进行选择和应用。
总的来说，微生物常用的接种方法包括平板接种、液体接种、斜面接种等多种形式，科研工作者可以根据实验的具体要求选择合适的接种方法。
在进行接种时，需要注意使用无菌技术，避免外界的污染对实验结果的影响。
通过合理选择和应用接种方法，可以更好地促进微生物的研究和实验，为微生物学领域的发展做出更大的贡献。
3-3动物微生物--病毒的鸡胚接种技术(实验四)
室端 3）用钢锥在气室中央锥 一 小孔
4） 用注射器吸取病毒悬液，沿气室端所穿小
孔垂直刺入3cm，注入0.1-0.5ml病毒液。
5）用熔化的石蜡封孔，置孵卵箱内继续孵育，
每天翻卵1-2次，24h内死亡者废弃。
方法二：
1）2）同一 3）将卵横放在卵座上， 胚胎位置向下。在卵长 径的1/2处用碘酊和酒 精消毒。 4）用钢锥打一小孔，将针头刺入约1.5cm， 注入病毒液0.1-0.5ml 5）用熔化的石蜡封孔，置孵卵箱内继续孵
羊膜与羊膜腔 其中盛有羊水，胎体浸泡于其中
卵黄 在胚胎发育早期供给鸡胚营养。
卵白 在胚胎发育晚期供给鸡胚营养。
四、材料
1、鸡胚 10日龄
2、病毒 鸡新城疫病毒（NDV） 3、照蛋灯 4、打孔器 5、石蜡 6、注射器 7、蛋座 8、酒精棉球自SPF鸡群，以降低母源抗体的影响 受精卵的壳最好是白色的
受精卵必须新鲜，保存在5-20℃不要超过10天，
保存一个月的受精卵，孵化率将近于零。
六、孵育
孵卵箱内的温度应保持在37.5-38.5℃ 相对湿度：50%-60%
必须保证有充分的新鲜空气流通，特别是在孵
化5-6天以后
从孵育后第3天开始，每天翻卵一次。
七、检卵
自孵育后的第4天开始检卵，每天一次。
育，24h内死亡者废弃
（二）绒毛尿囊膜接种 主要用于痘病毒和疱疹病毒的分离和增殖。 方法一： 1）取10-12日龄鸡胚，画出气室部，消毒 2）在气室端的卵壳上开一1.5×1.5cm的口 3）用灭菌眼科镊子撕去一小片内壳膜 4）滴入接种物 5）用胶布或透明胶纸封闭切口
方法二：（要做人工气室） 1、在胚胎附近近气室处，选择血管较少的部位，用 电烙器在卵壳上烙一个直径约3-4mm的烤焦圈。
微生物纯种分离,培养及接种技术实验原理
微生物纯种分离,培养及接种技术实验原理微生物纯种分离、培养及接种技术是微生物学中最基本的实验技术之一。
其目的是从混合的微生物菌群中分离出单一的微生物菌落，并在适宜的培养条件下进行纯化和生长，以获得纯种微生物。
一、实验器材和试剂1.灭菌针2.毛细胞计数板3.显微镜4.平板接种器、针头5.无菌匀浆棒、吸管6.细菌培养基7.消毒液二、实验步骤1. 样品处理及制备首先需要选择一份待测试的样品，包括土样、水样、空气、食品等，然后将样品采集到无菌容器中，再将其送到实验室。
在进行样品处理之前，需要先进行简单的初步处理，将样品进行稀释或者过滤，将其中的杂质和大颗粒物去除，以利于后续实验的操作。
接下来需要进行制备培养基，根据不同的微生物种类，需要选择适当的培养基进行培养。
通常情况下，我们可以使用凝胶培养基、液体培养基、甜菜汁培养基等，以满足微生物在不同环境下生长所需的营养物和成分。
2.分离纯化分离纯化是该实验的关键步骤。
将经过预处理的样品移到无菌试管中，打开试管口，加入适量的制备好的培养基，然后利用匀浆棒或吸管将混合物均匀混合。
然后利用平板接种器将混合物接种到培养基平板上，使其密切接触。
然后将接种好的平板置于恒温箱中，以利于微生物的生长和营养物质的自我繁殖。
在接种后2-7天内，不同类型的微生物将在培养基平板上生长出不同的菌落，每一种菌落都代表一种单一的微生物。
将这些菌落分离提取，并再次进行培养，就能得到单纯的微生物菌种。
3.纯种微生物菌种接种在获得单纯的微生物菌种之后，需要将其再次接种到培养基中进行培育。
将相应体积的纯种菌种接种到培养基平板上，使其能够生长繁殖。
在接种后约24小时内，微生物将在培养基中生长出许多菌落。
根据菌落的特征和形态，可以对不同的微生物进行鉴定和分类。
如果需要进行更加深入的分析，可以对微生物菌种进行进一步培养、萃取定量和测序等工作，以获取更多的相关信息。
三、实验注意事项1. 实验前需要保证实验室内部环境和仪器均为无菌状态。
微生物学实验中接种技术
微生物学实验中接种技术接种技术是微生物学试验中最常用的基本操作技术，接种就是利用接种工具在无菌条件下将培养物往新的培养基上移植。
(一)接种工具常用的接种工具有接种针、接种环、接种铲、涂布棒等。
接种细菌或酵母菌用接种环或接种针，接种环(或接种针)有一次性的塑料材质的，已灭菌可挺直用法，也有铂金或镍铬合金的。
假如用法金属材质的，用法前后均应在火焰上彻底灼烧灭菌，灭菌时右手持接种环(或接种针)的木柄或塑料柄，将金属部分竖立于火焰中，慢慢下移使金属环(或接种针)烧红，并将接种环(或接种针)和柄之间的金属棒也通过火焰数次。
取菌时，必需待接种环(或接种针)冷却后方可用法。
接种某些不易和培养基分别的放线菌和真菌时，有时用接种钩或接种铲。
用涂布法在琼脂平板上分别单个菌落时需用涂布棒。
常用的接种工具见图4-1。
图4-1 常用的接种工具a.接种针b.接种环c.接种钩d.接种护e.移液管f.滴管g.涂布棒h.微量取液器 (二)常用的接种办法按照目的不同，可分离采纳接种环、接种针、移液管等举行斜面培养基接种、液体培养基接种和半固体培养基穿刺接种等。
1.斜面培养基接种将微生物从一个斜面培养基接种至另一个斜面培养基上的办法，称为斜面培养基接种。
斜面培养基接种主要用于接种纯菌，使其增殖后用以鉴定或保存菌种，操作办法如下： (1)左手持菌种管与培养基管，斜面皆向上，菌种管在外侧，右手用拿毛笔的姿态持接种环，将铂丝与欲进入试管的柄部通过火焰灭菌。
(2)右手的小指与掌心夹下培养基管的棉塞，第四指与小指夹下菌种管棉塞，管口通过火焰。
(3)接种环伸入菌种管，蘸取少许菌种。
(4)接种环伸入培养基管，在斜面上蜿蜓划线，或者划直线。
注重沾有菌种的接种环不行碰管口与其他地方。
(5)管口再通过火焰，并将棉塞塞于本来的试管。
(6)接种环灭菌。
2.液体培养基接种液体培养基接种基本上与斜面培养基接种法相同，不同之处是，将挑取的菌种移种至液体培养基管中时，斜持试管，将菌涂于液面处管壁上，试管竖立以后菌种即在液体内。
微生物常用的接种方法
微生物常用的接种方法
微生物的接种是微生物学实验中非常重要的一环，它直接关系到实验结果的准确性和可重复性。
在微生物学实验中，常用的接种方法有涂布法、点接法和扩散法。
首先，涂布法是微生物学实验中最常用的接种方法之一。
使用涂布法进行接种时，首先需要将待接种的微生物悬液均匀涂布在富营养培养基的表面上，然后利用消毒的玻璃棒或铲子将微生物均匀地涂布在培养基表面上。
这种接种方法适用于对微生物数量进行定量分析的实验，如菌落计数等。
其次，点接法是另一种常用的微生物接种方法。
使用点接法进行接种时，需要利用消毒的吸管或者铲子，将微生物悬液均匀地滴在富营养培养基的表面上，形成一个个小圆点。
这种接种方法适用于对微生物的单菌种分离和纯化，以及进行微生物的生长曲线实验等。
最后，扩散法是微生物学实验中常用的接种方法之一。
使用扩散法进行接种时，需要将待接种的微生物悬液均匀地涂布在富营养培养基的表面上，然后利用消毒的玻璃棒或者铲子在培养基表面上
进行扩散，使得微生物悬液均匀地分布在培养基表面上。
这种接种方法适用于对微生物的抗生素敏感性实验和微生物的产酶产毒实验等。
总之，微生物学实验中常用的接种方法有涂布法、点接法和扩散法。
不同的接种方法适用于不同类型的微生物学实验，选择合适的接种方法能够提高实验的准确性和可重复性，从而得到更加可靠的实验结果。
希望本文所述的接种方法能够对微生物学实验的进行有所帮助。
细菌接种实验报告范文
一、实验目的1. 掌握细菌接种的基本操作技术。
2. 学习细菌在不同培养基上的生长情况。
3. 观察细菌的菌落特征，了解细菌的分类。
二、实验原理细菌接种是将细菌从一环境转移到另一环境的过程，通过接种，可以使细菌在适宜的培养基上生长繁殖，便于观察和研究。
接种方法主要有划线法、涂布法、点接种法等。
本实验采用划线法进行细菌接种。
三、实验材料1. 培养基：牛肉膏蛋白胨固体培养基、营养琼脂固体培养基。
2. 菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌。
3. 仪器：接种环、酒精灯、无菌试管、无菌培养皿、无菌水、无菌操作台等。
四、实验方法1. 划线法接种：（1）将接种环在酒精灯火焰上灼烧至红热，待冷却后，挑取少量金黄色葡萄球菌，在牛肉膏蛋白胨固体培养基平板上划线。
（2）将接种环灼烧，待冷却后，挑取少量大肠杆菌，在营养琼脂固体培养基平板上划线。
（3）将接种环灼烧，待冷却后，挑取少量枯草芽孢杆菌，在牛肉膏蛋白胨固体培养基平板上划线。
2. 观察菌落特征：（1）将接种好的平板倒置，放入恒温培养箱中培养24小时。
（2）观察菌落特征，包括菌落大小、形状、颜色、边缘等。
五、实验结果1. 金黄色葡萄球菌在牛肉膏蛋白胨固体培养基上生长出圆形、金黄色、表面光滑、边缘整齐的菌落。
2. 大肠杆菌在营养琼脂固体培养基上生长出圆形、白色、表面光滑、边缘整齐的菌落。
3. 枯草芽孢杆菌在牛肉膏蛋白胨固体培养基上生长出圆形、淡黄色、表面粗糙、边缘不整齐的菌落。
六、实验讨论1. 细菌接种是微生物实验的基本操作，掌握正确的接种方法对于后续实验至关重要。
2. 划线法接种适用于观察细菌的菌落特征，便于分离纯化细菌。
3. 不同细菌在相同培养基上的生长情况不同，这与其生理特性有关。
4. 通过观察菌落特征，可以初步判断细菌的种类。
七、实验结论通过本次实验，我们掌握了细菌接种的基本操作技术，学会了观察细菌的菌落特征，了解了细菌的分类。
八、注意事项1. 实验过程中，严格遵循无菌操作原则，防止细菌污染。
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实验三微生物接种技术
一、实验目的
1、掌握无菌操作在微生物接种过程中的重要性。
2、掌握几种常用的微生物接种方法。
3、掌握微生物微生物扩大繁殖的基本方法。
4、认识微生物接种工具
二、实验原理
微生物接种技术是生物科学研究中最基本的操作技术。
由于实验目的、培养基种类及容器等不同，所用接种方法不同，如斜面接种、液体接种、固体接种和穿刺接种等，以获得生长良好的纯种微生物。
为此，接种必须在一个无杂菌污染的环境中进行严格的无菌操作；同时，因接种方法的不同，常采用不同的接种工具，如接种针、接种环、移液管和玻璃刮铲等。
三、实验器材
主要仪器及设备无菌室、超净工作台、培养箱、振荡器、接种针、接种环、接种钩、接种铲，试管固体斜面培养基、培养基平板、三角瓶液体培养基，PDA平板及斜面，牛肉膏-蛋白胨-琼脂平板、斜面培养基、牛肉膏-蛋白胨液体培养基、试管半固体培养基。
菌种大肠杆菌（Escherichia coli)、青霉(Penicillium sp．)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae Hansen)、细黄链霉菌(Streptomyces microflavus)放线菌等。
四、操作步骤
(一)斜面接种技术具体操作如下：
1、贴标签接种前在试管上贴上标签，注明菌名、接种日期、接种人姓名等。
贴在距试管口径2-3厘米的位置。
2、点燃酒精灯。
3、接种用接种环将菌种移接到贴好标签的试管斜面上。
无菌操作程序简述如下：
⑴手持试管将菌种和用于接种的斜面两支试管用大拇指和其他四指握在左手中、使中指位于两试管之间。
斜面向上，并使它们位于水平位置(图a)。
⑵旋松棉塞先用右手将棉塞旋松，以便接种时易于拔出。
⑶取接种环右手拿接种环在火焰将环端烧红灭菌，然后将有可能伸入试管的其余部分，均用火烧过灭菌。
⑷拔棉塞用右手的无名指、小指和手掌边先后拔出试管的棉塞，然后让试管口缓缓过火灭菌(切勿烧得过烫)，如图b、c所示。
⑸环冷却将灼烧过的接种环伸入菌种管，先使环接触没有长菌的培养基部分，使其冷却。
⑹取菌种待环冷却后轻轻沾取少量菌或孢子，然后将接种环移出接种管，如图d所示，注意不要使环的部分碰到管壁，取出后不可使环通过火焰。
⑺接种在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。
从斜面培养基的
底部向上部作“之”字形来回划线，方向是从下部开始，一直划至上部，勿划破培养基(图e)。
有时也可用接种针仅在斜面培养基的中央划一条线作斜面接种，以便观察菌种的生长特点。
⑻塞棉塞取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将棉塞塞上。
塞棉塞时，不要用试管迎棉塞，以免试管在移动时带入不洁空气，如图f、g所示。
⑼环灭菌将接种环烧红灭菌。
放下接种环，再将棉花塞旋紧，如图所示。
斜面接种时的无菌操作
（二）穿刺接种
（1）取两支新鲜半固体牛肉膏蛋白胨柱状培养基，做好标记（写上菌名）、接种日期，接种人等）。
（2）接种的方法是，用接种针沾取少量待接菌种，然后从柱状培养基的中心穿入其底部（但不要穿透），然后沿原刺入路线抽出接种针，注意接种针不要移动。
（3）接种后30℃恒温培养， 24h后观察，比较两种菌的生长结果。
穿刺接种示意
（三）液体接种
1、用斜面菌种接种液体培养基，分为两种情况：
（1）如接种量小，可用接种环（铲、针等）取不量菌体移入培养基容器中，将环在液体表面处的器壁上轻轻摩擦，使菌苔碾散；抽出接种环再摇动液体培养基使菌体均匀分布在液体中。
（2）如接种量大，可先在斜面菌种管中倒入一定量的无菌水，用接种环将菌苔刮下，再将菌悬液倒入液体培养基中，倒前需将管口在火焰上灼烧灭菌。
（四）平板接种
以中指、无名指及小指托住培养皿下盖底部，用虎口及食指扶住上盖，再将斜面菌种管放于培养皿上之上，以拇指压住。
然后以移菌环挑菌苔的菌体移入平板的中央，也可在平板上划线3-5条。
五、接种后的培养
将接种后的试管、平板放适宜的条件下培养，分别于48h、72h后进行观察。
六、报告
1、观察记述所有接种培养的微生物的形态特征、生长情况等，结果填入表内：
2
1）接种前后为什么要灼烧接种环？
2）为什么要待接种环冷却后才能与菌种接触？是否可以将接种环放在台子上冷却？如何如何知道接种环是否已经冷却？
3）微生物接种为什么要在无菌条件下进行？
4）接种应注意哪些环节才能避免杂菌污染？。