微生物学实验
微生物学实验
溶血链球菌（Streptomyces microflavus）：形态
链球菌呈球形或椭圆形，直径0.6-1.0μm，呈链状排列，长短 不一，从4-8个至20-30个菌细胞组成不等，链的长短与细菌的 种类及生长环境有关。该菌不形成芽胞，无鞭毛，易被普通的 碱性染料着色，革兰氏阳性，老龄培养或被中性粒细胞吞噬 后，转为革兰氏阴性。向一个方向分裂，若没有完全分开
自主设计实验：40%，包括设计实验方案、实验操作，总结， 汇报交流 实验考试10%：理论、实验操作
2. 细菌形态观察（装片） 基本概念： 细菌（Bacteria, Bacterium） 芽孢（spore） 鞭毛（flagella）：所有弧菌、螺菌类普遍着
生鞭毛和假单胞菌都长有端生鞭毛，约半数杆菌 和少数球菌有鞭毛。
1.6. 安全 常规：水、电、门、窗等 微生物与化学试剂 仪器使用：高压灭菌器、离心机 废弃物
1.7、微生物实验安排与考核
5个综合模块，共14次实验：50%
一、综合模块1-细胞水平：个体形态观察（9学时） 二、综合模块2-群体水平：目的微生物的分离筛选及纯化技术（9学时） 三、综合模块3-生理生化水平：生理生化测定、理化因素对微生物生长 的影响（9学时） 四、综合模块4-遗传水平、免疫水平：细菌转导、菌种保藏方法、血清 学反应（6学时） 五、综合模块5-分子水平：微生物系统发育学分析（9学时）
苏云金芽孢杆菌（Bacillus thruingiensis）：芽孢、伴胞晶体
芽孢在一端、易观察。形态与生理特征和蜡状芽孢杆菌相似，所不同的是在适合条件下 能产生伴孢晶体，晶体为菱形，因此被认为是蜡状芽孢杆菌的致病变种，最早由国外引 进，后在国内各地也陆续分离到很多相似的亚种，例如青虫菌、杀螟杆菌等。 存在于土壤及生病的鳞翅目昆虫上。 能使鳞翅目昆虫染病致死，广泛应用于生物防治，做生物杀虫剂。
微生物学实验
微生物学实验什么是微生物学实验？《国家初中理科课程标准》中对实验作了如下描述：“实验能力”、“能在老师指导下设计并进行一些简单的实验，如用显微镜观察某些细菌的形态，测定细菌的大小等；学会运用化学药品和器材配制一些简单的实验，学会使用玻璃器皿，知道其用途；学会从不同角度观察事物的方法。
”微生物学实验基本上可以划分为两大类，即分离纯化实验和培养鉴定实验。
1．探索细菌形态结构的主要方法是观察细菌。
有些细菌是单细胞的，有些则由许多个体组成。
当我们需要确定细菌的种类时，我们就需要将它们分离开来，这就涉及到微生物学实验中的分离纯化实验。
在初中阶段，我们已经学习了基本的分离纯化方法，比如稀释涂布平板法、稀释平板法、称量法、溶解法、穿刺法等。
由于实验室里培养条件的限制，不能直接观察细菌的形态，还必须经过一系列的处理，最后才能在显微镜下研究。
2．用于检验空气中细菌总数的方法是检验细菌的生存环境，可以采用以下方法：用稀释涂布平板法检验空气中细菌总数。
取一洁净试管，倒入少量的水或红墨水，然后滴加2～3滴洗净的黑色水笔墨汁，搅匀后在培养皿内或玻璃板上涂布。
待凝固后，观察黑色水笔墨汁的扩散情况，再把涂布的平面置于载玻片上。
将试管放入盛有少量水的烧杯中，盖紧杯口，在酒精灯上灼烧片刻，然后移至培养皿中或玻璃板上，仔细观察，将看到的现象做好记录。
对不同类型细菌采取分组培养，可以研究不同类型细菌的相互关系，也便于研究新型菌种。
3．能从培养液中分离出一株细菌来。
需要准备的材料：营养物质培养基、无菌操作技术、消毒方法、无菌棉棒、接种针、培养皿、接种环、镊子、显微镜、载玻片、盖玻片、吸水纸、镊子、灭菌锅等。
能根据观察到的现象及得出的结论，从培养液中挑选一株细菌作为实验材料。
在选择材料时应注意以下问题：挑选正确的材料是保证实验成功的关键。
如果材料选错了，很难获得满意的实验效果。
一般而言，应选择有代表性的材料进行培养。
有些微生物与其他微生物之间有着密切的关系，一个材料能否作为研究的对象，必须全面考虑各方面因素。
微生物学实验
微生物学实验实验一常用培养基的制备、灭菌与消毒一、实验目的了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法。
二、实验原理培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。
培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。
根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。
牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供微生物生长繁殖之用。
干热天菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。
三、试剂与器材1.器材试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基、分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH度纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培养皿、电烘箱、注射器、微孔滤膜过滤器、镊子等。
2.试剂牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂四、实验内容1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查2.干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物3.高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查4.过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌五、关键步骤及注意事项1.要严格按配方配制。
2.调pH不要过头。
3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，70ºC以下放物、取物。
4.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。
5.过滤除菌要注意各部件灭菌，压滤时，压力要适当，不可太猛太快，滤膜要注意清洗保存。
六、思考题1.培养基配好后，为什么必须立即灭菌?如何检查灭菌后的培养基是无菌的?2.在配制培养基的操作过程中应注意些什么问题?为什么?3.培养微生物的培养基应具备哪些条件?为什么?4.培养基的配制原则是什么?实验二土壤中微生物分离纯化培养一、实验目的掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术；了解不同的微生物菌落在斜面上、半固体培养基和液体培养基中的生长特征；进一步熟练和掌握微生物无菌操作技术；掌握微生物培养方法。
微生物学实验教程
微生物学实验内容实验一 . 显微镜的使用及细菌的简单染色实验二 . 细菌的革兰氏染色实验三 . 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别实验四 . 酵母菌的数量测定实验五 . 酵母菌的大小测定实验六 . 微生物菌落的观察实验实验七 . 霉菌的形态观察实验八 . 培养基的制备与灭菌实验九 . 放线菌的形态及菌落特征的观察实验十 . 微生物的纯种分离培养实验一 . 普通光学显微镜的使用一、目的要求1. 学习并掌握油镜的原理和使用方法。
2. 复习普通台式显微镜的结构、各部分的功能和使用方法。
二 . 显微镜的基本结构及油镜的工作原理现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜。
它们由机械装置和光学系统两大部分组成。
在显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，它直接影响着显微镜的分辨率。
而在普通光学显微镜通常配置的几种物镜中，油镜的放大倍数最大，对微生物学研究最为重要。
与其他物镜相比，油镜的使用比较特殊，需在载玻片与镜头之间加滴镜油，这主要有如下二方面的原因：1. 增加照明亮度油镜的放大倍数可达 100Χ，放大倍数这样大的镜头，焦距很短，直径很小，但所需要的光照强度却最大。
从承载标本的玻片透过来的光线，因介质密度不同（从玻片进入空气，再进入镜头），有些光线会因折射或全反射，不能进入镜头，致使在使用油镜时会因射入的光线较少，物像显现不清。
所以为了不使通过的光线有所损失，在使用油镜时须在油镜与玻片之间加入与玻璃的折射率（n=1.55）相仿的油镜（通常用香柏游，其折射率 n=1.52）。
2. 增加显微镜的分辨率显微镜的分辨率或分辨力 (resolution or resolving power) 是指显微镜能辨别两点之间的最小距离的能力。
从物理学角度看，光学显微镜的分辨率受光的干涉现象及所用物镜性能的限制，可表示为：（公式 P16 ）式中λ= 光波波长；NA=物镜的数值孔径值。
光学显微镜的光源不可能超出可见光的波长范围（ 0.4--0.7μm），而数值孔径值则取决于物镜的镜口角和玻片与镜头间介质的折射率，可表示为： NA=n × sin α式中α为光线最大入射角的半数。
微生物学实验
实验一实验室和人体表面微生物的检查一实验目的1 证明实验室环境与体表存在微生物2 比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型3 体会无菌操作的重要性二实验原理平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在适宜温度下培养，1-2d内每一菌体能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。
每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小、表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑等。
因此可通过平板培养基来检查环境中微生物的数量和类型。
三、器材1、培养基牛肉膏蛋白胨琼脂平板2、仪器或其他用具无菌水、灭菌棉签（装在试管内），接种环，试管架，酒精灯，记号笔，废物缸。
四、操作步骤1、写标签任何一个实验，在动手操作前均需首先将器皿用记号笔做上记号（包括班级、姓名、日期、样品来源等），字尽量小些，写在皿底的一边，不要写在当中，以免影响观察结果。
注：培养皿的记号一般写在皿底上，如果写在皿盖上，同时观察两个以上培养皿的结果，打开皿盖时容易混淆。
2、实验室细菌检查（1）空气将一个肉膏蛋白胨琼脂平板放在实验台上，移去皿盖，使琼脂培养基表面暴露在空气中，将另一块肉膏蛋白胨琼脂平板放在洁净工作台内或无人走动的实验室中，移去皿盖，1h后盖上两个皿盖。
（2）实验台①用记号笔在皿底外面中央画一直线，再在此线中间处画一垂直线。
②取棉签左手拿含有棉签的试管，在火焰旁用右手的手掌边缘和小指、无名指夹持棉塞，将其取出，将管口很快地通过酒精灯的火焰，烧灼管口；轻轻地倾斜试管，用右手的拇指和食指将棉签小心地取出。
放回棉塞，并将空试管放在试管架上。
③弄湿棉签左手取灭菌水试管，如上法拔出棉塞并烧灼管口，将棉签插入水中，再提出水面，在管壁上挤压一下以除去过多的水分，小心将棉签取出，烧灼管口，放回棉塞，并将灭菌水试管放在试管架上。
④取样将湿棉签在实验台面或门旋钮上擦拭约2cm2的范围。
⑤接种在火焰旁用左手拇指和食指或中指使平皿开启成一缝。
《微生物学实验》PPT课件
实验五 培养基的制备、 器具包扎和灭菌
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1
目的要求
了解培养基的配制原理和方法，掌握其 配制过程。
了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和 加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。
熟悉分离、培养微生物前的有关准备工 作及操作方法。
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2
实验原理
培养基
据组成成分可分为:
1.合成培养基ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ由各种纯化学物质按一定比例配制而成。 2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物质 配制而成。 3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。
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紫外线灭菌法： 一般30W灯管，9m3空间，距地面2m每次打开 紫外线照射0.5h，就使室内空气灭菌。若照射 紫外线时先喷洒石炭酸等化学消毒剂，可增强 灭菌效果。紫外线虽有较强的杀菌力，但穿透 力弱，即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫 外线滤除，因此只适用于空气及表面杀菌。
化学药剂消毒灭菌： 微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲 醛、高锰酸钾、酒精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、 漂白粉、新洁尔灭、煤酚皂溶液，它们有的是 杀菌剂，有的是抑菌剂。
实验材料
药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；可 溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4•7H2O、FeSO4•7H2O
等。
高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀 菌灯。
其它：天平、牛角匙、电炉、1N HCl、1N NaOH、pH试纸、 刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠的三角 瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养皿、吸管、 各种包装纸、防水纸、绳索、棉花、标签等。
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16
高氏一号培养基
微生物学实验
称量---溶解----调节pH值----过滤---分装及包扎----灭菌----灭菌后试管 摆放斜面、倒平板
(2) 高压蒸汽灭菌
一般培养基用0.1Mpa，121.5℃,15～30min 实验步骤：
加水
装待灭 菌物品
加盖
加热
灭菌时间到后 断电源
压力降为零 开箱取物
摆斜面
倒平板
将菌液分离样品摇匀，用无菌移液管取1 ml的菌液移至无菌培养 皿中，然后将融化，凉至50℃左右的培养基，在每个培养皿内各倒入 约15 ml，摇匀，凝固，制成平板。
微生物学实验
基础综合实验一
2. 器皿的清洗包装及干热灭菌 3. 实验室环境和人体表面微生物的检查 4. 无菌接种技术
培养基配方： 蛋白胨 1g
琼脂 水
2g 100ml
牛肉膏蛋白胨固体培养基：加1.5-2％琼脂 400ml 牛肉膏蛋白胨培养基：液体培养基 200ml
(1)培养基的配制：
先将试管贴好标签。注明培养基名称，组别，日期。标签粘贴位置 在离管口1/3管身处。 注意：标签用铅笔书写，以防高温灭菌时蒸汽模糊字迹。
气、硬币等 (3)培养：37 ℃培养24h-48h
4. 微生物接种技术
常用的几种方法如下：
斜面接种 液体接种 平板接种
1)斜面接种示意图
2)平板划线法：
将菌液分离样品摇匀，以无菌操作用接种环直接取试管中待分离纯化的菌 液，将接种环通过稍打开皿盖的缝隙（约30℃）伸入平板，将菌液点种在平板边 缘一处，取出接种环，烧去多余的菌种，在平板边缘空白处接触一下使接种环冷 却,然后从接种有菌的部位在平板上自左向右轻轻划线，划线时平板面与接种环面 成30-40℃，以手腕力量在平板表面轻巧滑动划线,接种环不要嵌入培养基内划破培 养基,线条要平行密集，充分利用平板表面积，注意勿使前后两条线重叠，划线完 毕，关上皿盖.灼烧接种环，待冷却后放置接种架上。
微生物学实验介绍
实验安排
实验一： 实验器材的准备与干热灭菌 实验二：培养基的配制与高压蒸汽灭菌 实验三：空气洁度、手指等微生物学检查与微生物接种技术训练 实验四：土壤微生物的分离 实验五：土壤中芽孢杆菌的分离和环境微生物检测 实验六：微生物菌落观察，放线菌与酵母插片培养法 实验七：放线菌与酵母菌形态观察 实验八：细菌形态观察；各种染色法；油镜的使用 实验九：微生物计数与大小的测量 实验十：生长曲线测定 实验十一：生理生化测定：（一）配制培养基，接种 实验十二：生理生化测定：（二）糖醇类发酵实验及结果观察 实验十三：噬菌体的转导实验 实验十四：微生物拮抗实验；药物敏感试验
步骤： 1. 将包装好的玻璃器皿放入干热灭菌器内，即烘箱。 2. 关门加热。 3. 当温度上升至160～170℃时，保持此温度1-2小时。
>180C,纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。 4. 停止加热，待温度下降至40℃以下时，将门打开，取出
灭菌器皿备用。
下周实验内容
培养基的配制与高压蒸汽灭菌
9. 实验结束，凡带菌用具均需经灭菌后才能清洗。
10. 实验完毕，应将仪器放回原处，擦净桌面，收拾整齐， 得到老师同意后方可离开。离开实验室前，请用肥皂洗 手。值日生负责清洁桌面、地面等，关闭门、窗、灯、 火、煤气等。
11. 每次实验结果，应以实事求是的态度填写实验报告，及 时交给指导教师批阅。
12. 学期末的时候请务必把各自的玻璃器皿清洗干净。
微生物学实验注意事项
1. 为保证实验室的整洁和实验顺利进行，非必要的物品请勿 带入室内。室内严禁吸烟或饮食。
2. 实验前请预习实验教材，明确实验的目的要求、原理和操 作步骤。
3. 实验进行时，应尽量避免在室内走动，以免染菌。同时请 勿高声说话，保持室内安静。
微生物实验
①标 本
③ 孔径 光栏
⑤ 光轴中心调节 螺钉
③ 视场 光栏
N.A聚=(0.6-0.8)N.A物
操作步骤如下: (1）可变光栏的中心对准聚光镜的中心。如果可变光栏的水
平是固定的，则装配时已保证它与聚光镜合轴，不必调整;如果可 变光栏的水平位置可以移动，则应把可变光栏关到最小，使它的 中心孔对准聚光镜下方的透镜中心。
实验一培养基的配置、灭菌与无菌操 作技术
1、明确培养基的配制原则，掌握配制培养基的一般方法 和步骤； 2、掌握玻璃器皿的洗涤和包扎方法，了解玻璃器皿的灭 菌方法和原理； 3、了解几种常用灭菌方法的基本原理及应用范围； 4、掌握高压蒸汽灭菌技术，。
微生物学实验所用的器皿，大多要进行消毒、灭 菌和用来培养微生物，因此对其质量、洗涤和包 装方法均有一定的要求。清洁的玻璃器皿是实验 得到正确结果的先决条件，包扎方法要能保证防 止污染杂菌。空的玻璃器皿一般用干热灭菌，若 用湿热灭菌，则要多用几层报纸包扎。
为什么要将培养基倒置培养？
显微镜概述 微生物的个体微小，必须借助显微镜才能观察到。因
此，显微镜就成为微生物学研究工作者不可缺少的基本工 具。所以，了解显微镜的种类、结构、功能和正确地掌握 不同显微镜的使用方法是很有必要的。
显微镜可分为光学显微镜和电子显微镜两大类。光学 显微镜有普通光学显微镜、相差显微镜、微分干涉差显微 镜、暗视野显微镜、紫外光显微镜、偏光显微镜和荧光显 微镜。下面主要介绍普通光学显微镜。
一、目的要求 1.学习显微镜的结构、功能和使用方法。 2.学习并掌握油镜的原理和使用方法。 3.学习微生物涂片、染色的操作技术；
4.掌握细菌单染色和革兰氏染色的方法；
5.掌握革兰氏染色反应原理、操作步骤和意义。
微生物常用实验3篇
微生物常用实验第一篇：细菌涂片染色实验细菌涂片染色实验是微生物学中最基本的实验之一。
通过染色方法，使细菌变得可见，便于观察形态、结构、数量等特征，有利于研究其生长、代谢、致病性等方面。
下面，我们来介绍细菌涂片染色实验的具体步骤：一、制备细菌涂片1.取出培养基上生长良好的细菌菌落，用不锈钢嵌片环沿中心点轻压一下。
2.将嵌片环中的菌落涂匀于无菌载玻片上，制备成直径约1厘米的薄片。
3.待载玻片上的细菌涂片晾干，并用火焰消毒。
二、涂片染色1.用火焰将铺有细菌涂片的玻片烤干。
2.将烤干的玻片浸入甲醇中，固定一分钟，再用水漱洗。
3.将玻片浸入碘酒中，固定一分钟，再用水漱洗。
4.将玻片浸入乙醇中，使背景颜色褪去，再用水漱洗。
5.将玻片浸入洋红染色液中，染色时间不超过1分钟。
6.用水冲洗干净，晾干后可以在显微镜下观察。
通过细菌涂片染色实验，我们可以直观地观察到细菌的形态、大小、聚集情况、颜色等，有助于鉴定细菌种类，并进一步深入研究其生物学特性。
第二篇：厌氧培养实验厌氧菌是一类生长需要在完全无氧条件下进行的微生物。
在许多疾病的发病机制中，厌氧菌都发挥着重要作用，因此，研究厌氧菌对于认识疾病的发病机制具有极其重要的意义。
下面，我们来介绍厌氧培养实验的具体步骤：一、制备厌氧培养基制备厌氧培养基是进行厌氧菌培养的关键。
具体操作步骤如下：1.准备培养基，并在其中加入培养菌株所需的配方和其他适宜的添加剂。
2.将培养基分装到无菌针筒或暗口瓶中。
3.在体积的一半至三分之二处加入去氧剂（一般为Thioglycolate或Dithiothreitol）。
二、厌氧细菌接种与培养1.准备厌氧细菌培养物的接种种子。
一般情况下，把生长适应在厌氧条件下的细菌进行分生处理来获得设计数量的细胞，并将其重新悬浮在与培养基相同的缓冲液中。
2.在无氧条件下接种厌氧菌，避免暴露于空气中。
可以通过使用瓶盖和橡胶塞的局部替代或全封闭气密容器的方法来实现无氧条件。
微生物学实验 PPT课件
实验一：光学显微镜的构造和使用方法 实验二: 细菌的革兰氏染色 实验三：酵母水浸片的制备－细胞数及死亡率的测定 实验四：显微镜测微技术 实验五：霉菌形态观察 实验六：培养基的制备与灭菌 实验七：微生物的分离与筛选 实验八：淀粉酶产生菌的检出 实验九：大肠杆菌的主要生化特性 实验十：理化因素对微生物的影响 ---紫外线的杀菌作用 实验十一：食品中杂菌总数及大肠菌群的检验
血球计数板刻有两方格网，每网分九大方格，中间 为计数室。计数室为25×16（16×25）小方格。 计数时常数五个中格的总数，换算出1ml中的总菌 数。
死亡率测定的原理为： 美兰溶液是对细胞无毒性的、弱氧化性 的染液，其氧化态无色，还原态兰紫色。 活细胞具有还原能力，能将美兰溶液还 原为无色，而死细胞不具还原能力。
物镜(接物镜)
如何计算显微镜的放大倍数？
照明系统部分
光 源 ： 内光源与外光源 反光镜 ： 凹面镜与平面镜
聚光镜 ：
升高与降低聚光镜
光 圈 ： 放开与关闭光圈
如何调节观察视野的明暗度？
2.光学显微镜的使用
取镜
放镜
对光 放片
调焦(粗调焦和细调焦)
低倍镜的使用 高倍镜的使用
问题思考：对颜色深的标本与颜色浅的标本在观察过程中有何不同？
二、实验用品
菌种：大肠杆菌斜面菌种； 八叠球菌斜面菌种 试剂：结晶紫染液；蕃红染液； 碘液；95％乙醇 其它：显微镜；载玻片；接种环； 香柏油；酒精灯；擦镜纸
三、 基本原理：
革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家 Christain Gran 创立的。 细菌对革兰氏染色的不同反应是由于它们 细胞壁的成分和结构不同而造成的。 革兰氏阳性菌的细胞壁主要由肽聚糖形成 的网状结构组成，壁厚、类脂质含量低。 革兰氏阴性菌其细胞壁肽聚糖层较薄、类 脂质含量高。
(完整版)微生物学实验指导书
03微生物在自然界和人类生活中的作用阐述微生物在生态系统、工业生产、医疗卫生等领域的重要性。
01微生物的定义与分类包括细菌、真菌、病毒等微生物的基本概念和分类方法。
02微生物的生物学特性介绍微生物的形态、结构、生理生化特性等。
微生物学概述01实验室安全制度包括实验室安全守则、危险标识识别、紧急情况下的应对措施等。
02实验操作规范介绍实验前准备、实验过程中的操作规范、实验后清理等注意事项。
03生物安全阐述生物安全的概念、生物安全级别的划分及相应防护措施。
实验室安全与规范介绍显微镜的种类、使用方法和维护保养。
显微镜介绍离心机的类型、使用方法和维护保养。
离心机阐述培养箱和摇床的工作原理、使用方法和注意事项。
培养箱与摇床包括分光光度计、电泳仪、PCR 仪等设备的简要介绍和使用方法。
其他常用设备常用仪器与设备实验报告格式包括标题、作者、摘要、正文、结论、参考文献等部分的撰写要求。
数据处理与图表制作介绍数据处理的方法、图表的制作规范及注意事项。
实验结果分析与讨论阐述实验结果的分析方法、讨论实验结果的合理性及可能存在的问题。
实验报告提交与评审说明实验报告的提交方式、评审标准及相关注意事项。
实验报告撰写要求03根据实验需求，选择适当的培养基类型，如营养琼脂、马丁氏琼脂等。
选择合适的培养基按照培养基配方准确称量各成分，加入蒸馏水或去离子水，加热溶解后调整pH 值。
配制培养基将配制好的培养基分装到试管、培养皿等容器中，采用高压蒸汽灭菌法或干热灭菌法进行灭菌处理。
培养基分装与灭菌培养基制备与灭菌微生物接种与培养接种前准备准备好无菌操作台、无菌接种环、酒精灯等接种工具，确保无菌操作环境。
微生物接种采用划线法、倾注法等方法将待测微生物接种到培养基上。
培养条件设置根据微生物的生长需求，设置好培养温度、湿度和光照等条件。
观察前准备准备好显微镜、载玻片、盖玻片等观察工具，确保无菌操作环境。
微生物形态观察通过显微镜观察微生物的形态、大小、排列方式等特征，记录并描述观察结果。
微生物实验
实验一光学显微镜的操作及细菌、放线菌和蓝细菌个体形态的观察一、实验目的(1)掌握光学显微镜的结构、原理，学习显微镜的操作方法和保养。
(2)观察细菌、放线菌和蓝细菌的个体形态，学会生物图的绘制。
二、显微镜的结构、光学原理及其操作方法(一)显微镜的结构和光学原理显微镜是观察微观世界的重要工具。
随着现代科学技术的发展，显微镜的种类越来越多，用途也越来越广泛。
微生物学实验中最常用的是普通光学显微镜，其结构分为机械装置和光学系统两部分。
显微镜的结构如图－1所示。
A B图－1 显微镜的结构1．机械装置(1)镜筒：镜简上端装目镜，下端接转换器。
镜筒分单筒和双筒两种。
单筒有直立式(长度为160mm)和后倾斜式(倾斜45°)。
双筒全是倾斜式的，其中一个筒有屈光度调节装置，以备两眼视力不同者调节使用。
两筒之间可调距离，以适应两眼宽度不同者调节使用!(2)转换器：转换器装在镜筒的下方，其上有3个孔，有的有4个或5个孔。
不向规格的物镜分别安装在各孔上。
(3)载物台：载物台为方形(多数)和圆形的平台，中央有一光孔，孔的两侧各装1个夹片．载物台上还有移动器(其上有刻度标尺)，可纵向和横向移动。
移动器的作用是夹住和移动标本用。
(4)镜臂：镜臂支撑镜筒、载物台、聚光器和调节器。
镜臂有固定式和活动式(可改变倾斜度)两种。
(5)镜座：镜座为马蹄形，支撑整台显微镜，其上有反光镜。
(6)调节器：调节器包括大、小螺旋调节器(调焦距)各一个。
可调节物镜和所需观察的物体之间的距离。
调节器有装在镜臂上方或下方的两种。
装在镜臂上方的是通过升降镜臂来调焦距，装在镜镜下方的是通过升降载物台来调焦距，新式显微镜多半装在镜臂的下方。
2．光学系统及其光学原理(1)目镜：一般的光学显微镜均备有2～3个(对)不同规格的目镜，例如，5倍(5×)、10倍(10×)和15倍(15×)，高级显微镜除了上述3种外，还有20倍(20×) 。
微生物学实验
微生物学实验微生物学实验是研究微生物的生长、活动和相互作用的一种科学实验。
通过实验可以了解微生物的生理特性和遗传特性，探究微生物与环境的关系，以及微生物对人类健康和环境的影响。
本文将介绍微生物学实验的常见内容和方法，并举例说明其应用。
1. 常见（1）微生物的培养与分离：将微生物样品接种于培养基上，提供适宜的环境因素使其生长繁殖。
利用孵育箱或培养皿进行培养，观察微生物的孢子、菌丝和菌落等形态特征，通过分离与鉴定，确定微生物的种类和数量。
（2）微生物的生长曲线：利用培养皿或发酵罐等装置，监测微生物在不同时间内的生长情况，绘制生长曲线。
通过分析曲线上的不同阶段，了解微生物的生长特性，包括潜时期、对数期、平稳期和死亡期等。
（3）微生物的代谢分析：通过测定微生物培养过程中的代谢产物，如酸、气体、酶等，分析微生物的代谢途径和代谢产物对生物工艺和环境的影响。
常用的方法包括气相色谱、质谱和高效液相色谱等技术。
（4）微生物的遗传分析：通过构建基因工程菌株或利用遗传标记技术，研究微生物的基因表达、突变和遗传传递等现象。
例如，利用PCR技术检测微生物的特定基因序列，分析其在不同环境条件下的表达水平。
2. 微生物学实验方法（1）杀菌与消毒：在进行微生物实验前，需要对实验器材、培养基和试剂等进行杀菌和消毒处理，以防止外源菌的污染。
常用的方法有高温高压灭菌、酒精喷雾消毒和过滤器材消毒等。
（2）无菌技术：在进行微生物的培养和分离实验时，需要避免外界细菌的污染。
常用的无菌技术包括细菌装液的操作在无菌台上进行，采用无菌培养皿、培养基和工具，以及穿戴无菌手套等措施。
（3）微量液体处理：有些微生物实验需要处理微量的液体，如微生物菌液的接种、稀释和移液等。
在这种情况下，需要使用微量吸管、微量移液器和微量离心机等微量操作工具，保证实验的准确性和可重复性。
（4）统计分析：微生物学实验的数据分析通常需要进行统计处理，以确定实验数据的可靠性和显著性差异。
微生物学实验
微生物学实验
实验一 细菌的形态和结构观察
观察细菌的菌落特征 掌握简单染色法和细菌涂片方法 在油镜下观察细菌个体的形态特征
【一】实验目的
【二】实验的差不多 原理 形态观察要紧包括群体的形态和个体的形态观察。
细菌的差不多形态要紧分为球菌、杆菌、螺旋菌三大类，近年 还发现星状和四方形细菌等。细菌形态受培养时间、培养基成 分、浓度、培养温度、培养时间等发生变化。
【四】实验步骤
思
对各种来源的样品进行对比，如平板菌落数和菌落类型等？ 饭前为何要洗手？ 如何防止培养物的污染与防止细菌的扩散方面？
考
题
实验四 培养基的配制与灭菌
1.熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。 2.掌握培养基和无菌水的制备方法。
3.掌握高压蒸气灭菌技术。
【一】实验目的
【二】实验的差不多
3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。
当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节
器，以免压碎玻片或损伤镜面。
4.观察
时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的适应，以免眼睛
疲劳，同时能够在左眼观察时，右眼注视绘图。
微生物学实验
显微镜计数：每个计数室选5个中格4个角各1个和 中央1个计数;
计算
总菌数 （个/ml）
=
X1 + X2 + X3 + X4 + X5 5
× 25（16） ×104×稀释倍 数
清洗血细胞计数板：用水冲净;后用吹风机吹干;放 入计数板盒中; 切勿用硬物洗刷
38
注意事项
1 取样前;必须将菌悬液摇匀; 2 计数室内不可有气泡; 3 凡压在中格线上的菌体;切莫四边全计; 常只计上方和右边两条线上的; 4 计数时;遇出芽的酵母菌;芽体大小达到母 细 胞直径的一半时计为2个;
实验一 显微镜油镜的使用和细菌 的三种基本形态观察
一 实验目的
1 学习并掌握油镜的基本原理和使用方法;
2 观察和识别细菌的三种基本形态;
1
二 基本原理
1 增加照明强度
在油镜与载玻片之间加入与玻片的折射率相仿的 镜油;使进入物镜的光线不会由折射或反射造成损失; 基本上全进入镜头;结果提高了照明强度;使图像更加 清晰;
29
放线菌和真菌形态
放线菌
酵母菌
青霉菌
黑曲霉菌
30
根霉菌形态
根霉菌无性孢子和有性孢子
31
32
实验报告 绘细黄链霉菌 红酵母菌 产黄青霉菌和黑
曲霉菌的形态图;
33
实验四 微生物显微镜直接 计数法
一 实验目的
1 明确血细胞计数板计数的原理 2 掌握血细胞计数板进行微生物计数的方法;
34
二 基本原理
1 标本：细菌三型玻片; 2 试剂：香柏油 镜头清洗液V乙醚:V酒精＝7:3; 3 器具：显微镜有油镜 擦镜纸 玻璃棒等;
4
四 实验步骤
微生物学实验
消毒与灭菌的主要方法
加热法 过滤法
照射法
化学药品
加热法
干热灭菌
火焰灼烧灭菌：接种环、接种针、 金属用具、无菌操作时在火焰上短 暂灼烧瓶口等 热空气灭菌：玻璃器皿
加热法－－湿热灭菌
高压蒸汽灭菌
高压蒸汽灭菌锅 15-30min 培养基、工作服、橡皮物品、玻璃 器皿等
2.增加显微镜的分辨率
油镜的使用方法
1.准备工作（复习）
显微镜的放置 光源的调节 目镜的调节 聚光器的调节
油镜的使用方法
2.显微观察
低倍镜观察 高倍镜观察 油镜观察
寻找观察目标
在观察目标区域滴加香柏油，仔细微 调，认真观察
油镜的使用方法
3.显微镜使用完毕的处理
升温
恒温
降温 开箱取物：温度未降至70℃前勿开箱，防爆
高压蒸汽灭菌
一、目的要求：
１.了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用 范围。
２.学习高压蒸汽灭菌的基本方法。
高压使水的沸点增高，产生超过100℃的 高温蒸汽，导致菌体蛋白质凝固变性 水蒸气的穿透性强 湿热的蒸汽有潜热
二、基本原理
高压蒸汽灭菌
常压蒸汽灭菌
某些不适宜高压蒸汽灭菌的培养基 不具备高压蒸汽灭菌条件的 仅能杀死大多数微生物、可用常压 间歇灭菌法
加热法－－湿热灭菌
煮沸消毒法
注射器、解剖器械等 10-15 min可杀死细菌所有营养体、 部分芽孢
超高温杀菌
微生物学实验
微生物学实验实验一实验室环境和人体表面微生物的检查实验二油镜的使用和细菌的简单染色实验三细菌的革兰氏染色和芽孢染色实验四微生物大小的测定和酵母菌死活细胞的鉴定实验五培养基的配制与消毒灭菌实验六土壤微生物的分离纯化与鉴定实验七食品微生物检验 (一)细菌总数测定实验八食品微生物检验（二）大肠菌群数测定实验九大肠杆菌生长曲线的测定实验十IMViC与硫化氢试验实验一、实验室环境和人体表微生物的检查1.一、目的：1.比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量与类型；2.观察不同类型微生物的菌落形态特征；3.体会无菌操作的重要性。
2.二、原理：1.微生物无孔不入，无处不在。
2.微生物→营养琼脂平板→菌落或菌苔。
（37 ℃倒置培养24 h）3.描述：菌落的大小、表面光滑或粗糙、干燥或湿润、隆起或扁平、边缘整齐或锯齿状、菌落透明或不透明、颜色以及质地均匀与否、疏松或紧密等，以便检查环境中细菌的类?秃褪 俊?4.细胞、放线菌、酵母菌和霉菌四大类型都可能存在，本实验重点观察细菌。
3.三、器材：1.培养基：营养琼脂平板（牛肉膏蛋白胨培养基）2.器具：无菌水、灭菌棉签、接种环（针）、酒精灯等。
4.四、步骤：1.标记。
组号/姓名、日期、样品来源。
2.接种。
3.倒置培养，37℃ 24 h4.观察结果。
5.五、结果6.样品来源菌落数菌落类型特征描写本实验室（流动空气30 min）1 大小形态干湿扁/隆透明度颜色边缘23接种室（不流动空气30min）洗手前洗手后头发屑指甲垢实验台门把1.六、思考题：1.人多的实验室与少人走动的实验室比较，平板上的菌落数和菌落类型有区别吗？试解释。
2.通过本实验，在防止培养物的污染和防止细菌的扩散方面，你有何体会？3.4.实验二油镜的使用和细菌的简单染色一、实验目的1、学习和掌握油镜的原理和使用技术。
2、学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色法。
二、实验原理1．油镜使用原理：光镜的几种物镜中以油镜的放大倍数最大，尤其适用于微生物学研究。
微生物学实验
微生物学实验引言微生物学实验是研究微生物的种类、特性和功能的重要手段。
通过实验可以深入了解微生物的生长、代谢、分化和遗传等方面的现象，为研究微生物的应用和控制提供理论和实践依据。
本文将介绍微生物学实验的基本步骤和常用实验方法，并结合具体案例展示实验的设计和分析方法。
实验步骤样品采集与处理首先，需要选择合适的样品。
可以从环境中采集，如土壤、水源等，或者从生物体中获取，比如人体、动物或植物组织。
采集样品时要注意卫生和无菌操作，以避免污染。
采集到样品后，需要进行处理。
常见的处理方法包括稀释、均质和过滤。
稀释可以使样品中的微生物浓度适合进行后续操作，均质可以使样品中的微生物均匀分布，过滤可以去除较大的颗粒和杂质。
培养微生物接下来，需要将样品中的微生物进行培养。
培养微生物的方法有多种，常见的包括固体培养和液体培养。
固体培养常用琼脂（Agar）作为培养基，液体培养则需要选取合适的培养液，并提供适当的温度、湿度和氧气条件。
在培养微生物的过程中，需要注意消毒操作，以防止其他微生物的污染。
此外，还需要定期观察和记录微生物的生长情况，包括菌落形态、颜色和大小等。
鉴定与分离当微生物培养达到一定程度后，可以进行鉴定和分离。
鉴定微生物的方法有多种，包括形态学观察、生理生化检测和分子生物学技术。
通过这些方法可以确定微生物的种类和相关特性。
分离微生物时，可以使用稀释涂布法、均匀涂布法或罩盖涂布法。
将培养物均匀地涂布在琼脂平板上，然后进行孔明法或拭子转接法进行分离。
分离出来的单个菌落可以进行单菌种的培养和纯化。
实验分析最后，可以对微生物进行实验分析。
根据研究目的，可以选择适当的实验方法进行。
常见的实验分析包括微生物生长曲线分析、代谢产物检测、抗生素敏感性测试等。
微生物生长曲线分析是研究微生物生长规律的重要方法。
可以通过测量菌落数量、菌落直径或光密度等参数，绘制生长曲线，并分析生长速率、生长周期等指标。
代谢产物检测可以了解微生物在不同条件下产生的代谢产物。
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掌握：细菌革兰氏染色方法；放线菌三种菌丝的结构特点及观察方法。 重点、难点：
细菌革兰氏染色方法；放线菌三种菌丝的观察方法；放线菌营养菌丝和气生菌丝的区别。 其它教学环节：
演示：细菌革兰氏染色；放线菌三种菌丝的观察方法。 实验三、酵母菌形态观察、霉菌形态观察、菌体大小测量 3 学时层次基础性 主要内容：
教学要求：
了解：常见的用于微生物分类和鉴定的生理生化反应。
掌握：酵母菌和霉菌的观察方法；酵母菌和霉菌的形态和结构特征，包括酿酒酵母的出芽生殖和子囊孢子，青霉、曲霉所产生的 分生孢子，黑根霉产生孢囊孢子，黑曲霉产生的足细胞等。 重点、难点：
重点：酵母菌形态、出芽生殖、死亡率的测定、子囊孢子观察；霉菌形态观察，包括分生孢子、黑根霉的假根及孢囊孢子、黑曲 霉的足细胞及分生孢子、青霉的分生孢子等。
2. 目的微生物的筛选分离。 3. 根据平板上菌落数对样品中微生物进行计数。 教学要求： 了解：微生物计数方法；微生物纯化方法。 理解：微生物菌落特征在微生物分类鉴定中的作用。 掌握：微生物分离纯化基本实验方法；细菌、放线菌、霉菌等菌落特征。 重点、难点： 重点：细菌、放线菌、霉菌等菌落特征；微生物分离纯化方法；目的菌株的筛选及获得。 难点：放线菌菌落特征及辨认。 其它教学环节： 讲解：对照各类微生物菌落，讲解各类微生物菌落特征要点。 实验七、各种生理生化用培养基的设计和配制 3 学时层次基础性 主要内容： 1. 配制微生物生理生化实验培养基。 2. 培养基的灭菌。 教学要求： 了解：常用的微生物生理生化培养基的种类和应用。 理解：微生物生理生化反应在微生物分类鉴定中的应用。 掌握：糖发酵培养基、V.P.反应、吲哚实验等生理生化培养基的配制方法。 重点、难点： 不同培养基具有不同的 pH 范围，配制各种培养基时要精确 pH 值，注意各试剂添加的先后顺序。 其它教学环节： 演示：糖发酵培养基中杜氏发酵罐的加入方法。 实验八、几种细菌生理生化测定 3 学时层次基础性 主要内容： 1. 无菌操作接种：在已经灭菌的各种培养基中分别接入相应的微生物菌种。 2. 培养：将接种后的培养基在一定温度下进行培养。
难点：酵母菌子囊孢子观察，黑曲霉足细胞的观察；青霉分生孢子产生结构。 其它教学环节：
演示：酵母菌、霉菌临时装片的制作。 实验四、培养基的设计及配制、培养基的消毒与灭菌 3 学时层次基础性、设计性 主要内容：
1. 培养基设计的原则及培养基的设计方法。 2. 几种培养基的配制方法及灭菌方法。 教学要求： 了解：培养基的种类及应用。 理解：培养基设计的基本原理；消毒和灭菌的基本原理、主要方法和应用范围。 掌握：培养基的配制方法；培养基的高压蒸汽灭菌。 重点、难点： 重点：培养基的设计方法；培养基的配制方法；培养基的灭菌方法。 难点：培养基的设计。 其它教学环节： 演示：高压蒸汽灭菌器的使用。 实验五、无菌操作技术、微生物分离筛选 3 学时层次基础性 主要内容： 1. 无菌操作练习：倒平板、划线接种。 2. 稀释涂平板法、划线法分离纯化微生物。 教学要求： 了解：无菌操作的意义及在各领域的应用。 理解：稀释涂平板法、划线法分离纯化微生物的基本原理。 掌握：微生物无菌操作技术的实验方法，包括倒平板、划线接种、涂布法接种等。 重点、难点： 重点：无菌操作技术；稀释涂平板法、划线法分离纯化微生物。 难点：划线法分离纯化微生物。 其它教学环节： 演示：无菌操作演示，包括倒平板、划线接种、涂布法接种等。 实验六、目的菌的获得及证实、菌落特征观察、数量统计分析 3 学时层次综合性 主要内容： 1. 细菌、放线菌、霉菌等菌落特征观察与辨认。
1. 酿酒酵母、假丝酵母的形态观察.
2. 酿酒酵母出芽生殖（无性生殖），子囊孢子观察（有性生殖）。
3. 青霉分生孢子的观察、黑曲霉分生孢子和足细胞的观察、黑根霉假根和孢囊孢子的观察，总状毛霉孢囊孢子的观察。 教学要求：
了解：酵母菌和霉菌的生殖方式；霉菌的主要种类。
理解：酵母菌、霉菌产生的各种无性孢子和有性孢子及在微生物分类鉴定中的作用。
掌握：细菌的基本形态；细菌细胞的基本结构如细胞壁、细胞膜等；细菌细胞的特殊结构如鞭毛、芽孢、荚膜等特殊结构。 重点、难点：
重点：微生物实验所能解决的理论和实际问题；显微镜的正确使用方法；光学显微镜下识别细菌细胞的基本结构和特殊结构。
难点：细菌各部分结构的辨认和识别；显微镜的正确使用方法。 其它教学环节：
讲授：讲述主要内容的第一部分；演示：显微镜的正确使用。 实验二、细菌革兰氏染色、放线菌形态观察 3 学时层次基础性 主要内容：
1.对 4 种细菌（两种革兰氏阳性菌和两种革兰氏阴性菌）进行革兰氏染色观察。
2.对 2 种放线菌进行形态结构观察。 教学要求：
了解：细菌革兰氏染色的应用及意义；放线菌与抗生素；放线菌在实际中的意义。
of Microbiology
微生物学实验
Experiment
【课程编号】（必备项）
【课程类别】学科基础课
【学分数】1.5
【适用专业】生物学、生物技术
【学时数】48
【编写日期】2009.06.19
一、教学目标
主要介绍微生物学实验的基本原理和实验方法，内容涉及微生物形态结构观察、生理生化实验、遗传与免疫实验、基于 16S rDNA 序列分析的系统发育学分析等。使学生了解微生物学的研究进展和发展方向，获得和掌握微生物学的基本研究方法和实验技术。 培养科学兴趣，培养分析问题、解决实际问题及自主创新的能力，使学生达到综合性大学全日制本科毕业水平，为将来成为国家 需要的创新型人才奠定基础。二、教学内容和学时分配
实验一、细菌形态观察（装片）3 学时层次基础性
主要内容：
1.微生物学实验意义、研究进展、研究内容，实验要求。
2.11 种细菌永久装片的观察。 教学要求：
了解：微生物学实验的意义和研究进展；微生物学实验的主要实验技术和研究方法。
理解：微生物学实验在解决生命科学重大理论问题和人类面临的许多严峻的实际问题中所发挥的重要作用；各类微生物细胞的细 胞结构和功能的相互适应。