微生物学实验指导(8个)
微生物学类实验指导书(下)蛋白酶产生菌活力测定及果酒酵母分离纯化
实验一产酶微生物的分离、纯化与选育酶是生物体内进行生物化学反应的催化剂，在生物体中已发现的酶有2500多种。
由于酶促反应的特异性强，反应条件温和，安全无毒,环境污染少，在洗涤剂、皮革、纺织、造纸、诊断、制药等领域具有广泛的应用价值。
目前,能由工业生产的50多种酶制剂包括蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、果胶酶、纤维素酶、葡萄糖氧化酶,葡萄糖异构酶等，这些酶大部分是由霉菌、细菌、链霉菌和酵母菌产生的.通过本实验项目，使学生学会从自然界中分离产酶微生物的方法，菌种的纯化技术及其高产菌的选育技术。
2。
蛋白酶产生菌的分离与纯化2。
1 实验目的学习从自然界中分离蛋白酶产生菌并纯化.2。
2 实验原理许多细菌和霉菌产生蛋白酶,细菌中的芽孢杆菌是常见的蛋白酶产生菌.本实验将土壤样品（或其他样品)悬液加热处理，杀死非芽孢细菌及其他微生物后进行划线分离得到芽孢杆菌，将其接种到酪蛋白平板进行培养，根据酪蛋白平板的水解圈作初筛.也可直接将细菌或霉菌接种到酪蛋白平板进行培养,分离筛选其他蛋白酶产生菌。
2.3 实验仪器与材料土壤样品或其他富含蛋白质的样品、牛肉膏蛋白胨培养基平板、酪蛋白平板、无菌水（带玻璃珠）、芽孢染色液;显微镜、恒温水浴锅、酒精灯、接种针、游标卡尺、无菌移液管、无菌试管、量筒等。
2。
4 实验方法与步骤2。
4.1 分离1)采集土壤样品，用无菌水制备1:10土壤悬液；2）取1:10土壤悬液5ml,注入已灭过菌的试管中，将此试管放入75—80 ℃水浴中热处理10 min，以杀死非芽孢细菌；3）取加热处理过的土壤悬液100-200 μL，涂布接种到牛肉膏蛋白胨培养基平板，将平板倒置,于30-32 ℃培养24-48 h；4)对长出的单菌落进行编号，选择表面干燥、粗糙、不透明的菌落，挑取少许菌苔涂片,做芽孢染色，判断是否为芽孢杆菌。
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2 筛选1）从判定为芽孢杆菌的菌落处，分别挑取少许菌苔，先接种含酪蛋白的斜面培养基,再点接于含酪蛋白的平板，30-32 ℃培养24—48 h，测定平板上菌苔直径和水解圈直径.2）水解圈直径与菌落直径比值大的那个菌株对应的斜面培养物，可作为进行诱变选育或酶发酵、酶活力测定菌株。
微生物学实验指导大全
微生物学实验指导黄文芳张松编著华南师范大学生命科学学院第一部分基础实验实验1 培养基的配制一、实验目的和内容目的：学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤。
内容：1．牛肉膏蛋白陈培养基的配制。
2．高氏1号培养基的配制。
3．马丁氏培养基的配制。
二、实验材料和用具牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉红、链霉素、1mol/L NaOH、lmol/L HCl、KNO3、NaCl、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O。
试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、pH试纸、棉花、牛皮纸、记号笔、线绳、纱布、漏斗、漏斗架、胶管、止水夹等。
三、操作步骤（一）牛肉膏蛋白胨培养基的配制牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。
其配方如下：牛肉膏3g，蛋白胨10g，Nacl5g，琼脂15～20g，水1000mL，PH7.4～7.61．称药品按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。
牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯；也可放在称量纸上称量，随后放入热水中，牛肉膏使与称量纸分离，立即取出纸片。
蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。
2．加热溶解在烧杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。
若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入己溶解的药品中，再加热融化，此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补足所失的水分。
3．调pH 检测培养基的pH，若pH偏酸，可滴加lmol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸检测，直至达到所需pH范围。
若偏碱，则用lmol/L HCl进行调节。
pH的调节通常放在加琼脂之前。
应注意pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。
4．过滤液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4层纱布趁热过滤，以利培养的观察。
但是供一般使用的培养基，这步可省略。
卫生微生物实习指导
卫生微生物学实验指导（仅供预防医学本科教学使用）姓名年级班级指导老师实验一自来水中指示微生物的检测 — 菌落总数的测定目的及意义掌握菌落总数实验的基本原理和意义；熟悉水样采集要求，熟悉菌落总数实验的全部过程和具体操作方法；了解无菌操作和避免污染的概念。
根据不同目的，选择有代表性的一种或一类微生物，对检测、研究对象中的该微生物状态进行定性或定量的描述，并赋予其特定的标志意义，这类微生物即所谓的指示微生物。
指示微生物在污水与饮用水处理、环境监测、产品质量控制、消毒灭菌、卫生监督等领域广泛应用。
最常用的为菌落总数和大肠菌群，菌落总数用于评价被检测样品的一般卫生微生物学质量，即微生物污染程度和安全性。
菌落总数是指被检测样品在单位重量（g）、溶剂（ml）、表面积（cm2）或体积（m3）内，所含有的能在某种培养基上经过一定条件培养后生长的微生物菌落总数。
仪器设备和试剂1. 仪器设备电子天平、pH计、高压蒸汽灭菌锅、超净工作台。
2. 器材和试剂100-1000μl移液器、1000μl吸头、广口旋塞试剂瓶、培养平皿；1.5%硫代硫酸钠溶液、营养琼脂。
实验方法1、样品来源内蒙古医科大学金山校区C座自来水2、实验准备1. 配置1.5%硫代硫酸钠溶液2. 取400μl 1.5%硫代硫酸钠溶液加入容积为250 ml的蓝盖试剂瓶中，该瓶作为为取样瓶（硫代硫酸钠的作用是中和自来水中的消毒剂）。
3. 准备3个洗干净的培养平皿，用报纸包严。
4. 配置80ml固体营养琼脂。
5. 将上述取样瓶、营养琼脂和培养平皿101.3kPa高压蒸汽灭菌20分钟。
6. 灭菌过程中将超净工作台或无菌室打开紫外灯照射30min。
3、样品采集1.先对欲采集样品的水龙头进行消毒，然后将水龙头完全打开，放水5分钟后收集样品，采水量为瓶容量的80%左右。
2.采样后及时做好标记，开始检测。
四、检测步骤1.将水样用力摇20～25次，使微生物充分的分散开来。
2.分别稀释水样10倍、100倍、1000倍与水样原液一起待检。
安师大微生物学实验考核题库(刘爱民微生物实验指导)
1、观察什么微生物需要用油镜，为什么?答：要看到经染色的细菌的形态和真核生物细胞的形态构造,最好使用油镜头。
油镜的焦距和工作距离最短。
油镜与其他物镜不同的是载玻片与物镜之的介质不是一层空气，而是一层油脂,称为“油浸系”。
利用油镜的目的是增加显微镜的分辨力。
2、用油镜观察要注意什么？滴的是什么油？起什么作用？答:使用油镜前要先擦拭镜头，注意镜头与载破片的距离。
使用油镜时,需在玻片上滴加香柏油。
这是因为油镜的放大倍数较高,而透镜很小,光线通过不同密度的介质物体（玻片→空气→透镜)时，部分光线会发生折射而散失，进入镜筒的光线少,视野较暗,物体观察不清。
如在透镜与玻片之间滴加和玻璃折射率（n=１.5２)相仿的香柏油（ｎ＝１.51５),则使进入油镜的光线增多，视野亮度增强，物象清晰3、培养基配好后为什么必须立即灭菌如何检查灭菌后的培养菌是无菌的答:配好的培养基如果不立即灭菌,微生物会利用培养基中的营养物质滋生,最后导致微生物大量繁殖，培养基营养物质流失，培养基变浑浊。
将灭菌后的培养基放入37摄氏度温箱中培养2４~４8小时,无菌生长即可。
４、高压蒸汽灭菌开始之前为什么要将锅内的冷空气排尽?答:在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大,其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加,所需凝固温度降低,二是湿热的穿透力比干热大；三是湿热的蒸汽有潜热存在,这种潜热,能迅速提高被灭菌物体的温度,从而增加灭菌效力。
在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸汽的膨胀压,所以,当水蒸汽中含有空气时，在同一压力下,含空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度。
如果压力未降到0时，打开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染。
5、高压蒸汽灭菌方法温度，压力,时间答：0.１ＭＰａ,121．3度,1５---30ＭIN6、为什么芽孢染色需要加热,机理答:细菌的芽孢具有厚而致密的壁不易着色,若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色(芽孢呈无色透明状)．芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色而一旦染上后又难以脱色这一特点而设计的．所有的芽孢染色法都基于同一个原则：除了用着色力强的染料外,还需要加热,以促进芽孢着色，再使菌体脱色,而芽孢上的染料则难以渗出,故仍保留原有的颜色,然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色,因而能更明显地衬托出芽孢，便于观察。
《微生物学实验》操作步骤
实验一培养基的制备与灭菌实验步骤：（一）伊红美蓝培养基（EMB，用成品，分离大肠杆菌用）每组1瓶，250 ml三角瓶×200 ml培养基。
按成品说明称量、放入搪瓷杯，加水，加热完全溶化，倒入三角瓶，塞棉花塞，牛皮纸封口，包扎，作标记（培养基名称、批次组别、日期，下同），灭菌。
（二）营养琼脂培养基（即牛肉膏蛋白胨培养基，用成品，分离芽孢杆菌用）每组1瓶，250 ml三角瓶×200 ml培养基，方法同上，灭菌。
（三）PDA培养基（即马铃薯蔗糖培养基，分离酵母菌、根霉用）每组1瓶，250 ml三角瓶×200 ml培养基。
培养基配方：马铃薯20%、蔗糖（白砂糖）2%、琼脂 2%，加水至所需体积，pH自然。
配制方法：马铃薯去皮，称量，切成小方块，放入搪瓷杯，加水适量，煮沸20 min，取汁液，补水至所需体积，加入蔗糖（白砂糖），加热溶化，最后加入琼脂（琼脂要预先单独用水浸泡，然后挤干再加入），加热至琼脂完全溶化，分装三角瓶，塞棉花塞，牛皮纸封口，包扎，灭菌。
培养基统一高压蒸汽灭菌（121℃25 min）。
（四）无菌平皿准备（下次实验倒平板用）每组10套，报纸包扎，高压蒸汽灭菌（121℃25 min）后，置干燥箱80℃烘干1 h。
（五）枯草样预处理及预培养（下次实验分离芽孢杆菌用）枯草样预处理：每组1瓶。
100 ml三角瓶＋自来水约50 ml，加5%可溶性淀粉，溶解。
枯草若干，剪短，浸入三角瓶水中，牛皮纸封口，包扎，置水浴中煮沸10 min，然后置培养箱30℃预培养3～7 d。
（六）葡萄样（或其它水果）酵母菌预培养（下次实验分离酵母菌用）每组1瓶。
葡萄（或其它水果）适量，捏碎，皮渣与汁液一起放入250 ml 三角瓶（装量1/2～2/3），封口，置培养箱25℃预培养3～7 d，观察自然发酵过程。
实验二微生物的分离与纯化实验步骤：（一）污水中大肠杆菌的分离（稀释倒平板法）1）用三角瓶取污水样适量。
微生物学实验报告
微生物学实验报告(格式标准)(生命科学专业)教师:黎勇目录索引实验一油镜的使用与细菌的简单染色法 3实验二细菌的革氏染色与芽孢染色 5实验三常用培养基的配制7实验四酵母菌霉菌的形态结构观察及酵母死活细胞的鉴别8实验五、微生物大小的测定与显微计数10实验六环境中微生物的检测与分离纯化11实验七细菌鉴定中常用的生理生化反应12实验八(综合实验)化能异养微生物的分离与纯化13课程名称: 微生物学实验班级:化生系生命科学本科实验日期: 指导教师:黎勇实验一油镜的使用与细菌的简单染色法〔目的要求〕学习并熟练掌握油镜的使用技术;观察细菌的基本形态;学习观察细菌的运动性的基本方法。
〔基本原理〕1、 N·A=n·sinα2、 D=λ/2N、A3、目镜可提高放大倍数,但有效放大率取决于镜口率。
已经分辨的物体不放大瞧不清,未分辨物放得再大也瞧不清。
4、用悬滴法或凹玻片法观察细菌的运动性时,可以通过真运动能定向地由一处快速运动来区别于颗粒的布朗运动。
〔器材用具〕显微镜、载玻片、凹玻片、盖玻片、接种环、香柏油、二甲苯、凡士林、吸水纸、擦镜纸;细菌、放线菌等固定装片;培养18小时左右的B、subtilis、 S、arueus 菌斜面培养物;无菌水、生理盐水。
〔方法步骤〕:(一) 油镜的使用镜检装片在中倍(或高倍镜)下找到目的物,并使位于视野正中聚光镜上升到最高位置,虹彩光圈开到最大,镜头转开成八字形在玻片的镜检部位(光斑处)滴一滴香柏油油镜转入正下方侧视小心上升载物台(缩短镜头与装片距离,镜头浸入油中,至油圈不扩大为止镜头几与装片接触) 粗调器徐徐下降载物台(密切注视视野,当捕捉到物像时,立即用细调器校正) 仔细观察并绘图取出装片,清洗油镜:擦镜纸拭去镜头上的香柏油擦镜纸沾少许二甲苯擦去残留(用手指辅助,迅速拭擦一、二次) 用清洁擦镜纸仔细擦干二甲苯(2-3次)。
(二) 细菌的简单染色法:涂片干燥火焰固定染色水洗干燥油镜观察(三) 细菌运动性的观察取洁净盖玻片,四周涂上凡士林滴加一小滴菌悬液凹玻片的凹窝向下盖于盖玻片上翻转观察〔结果分析〕1、画一圆圈表示视野,选取所观察的微生物绘图,注意特殊结构、形状与排列。
(完整版)微生物学实验指导书
03微生物在自然界和人类生活中的作用阐述微生物在生态系统、工业生产、医疗卫生等领域的重要性。
01微生物的定义与分类包括细菌、真菌、病毒等微生物的基本概念和分类方法。
02微生物的生物学特性介绍微生物的形态、结构、生理生化特性等。
微生物学概述01实验室安全制度包括实验室安全守则、危险标识识别、紧急情况下的应对措施等。
02实验操作规范介绍实验前准备、实验过程中的操作规范、实验后清理等注意事项。
03生物安全阐述生物安全的概念、生物安全级别的划分及相应防护措施。
实验室安全与规范介绍显微镜的种类、使用方法和维护保养。
显微镜介绍离心机的类型、使用方法和维护保养。
离心机阐述培养箱和摇床的工作原理、使用方法和注意事项。
培养箱与摇床包括分光光度计、电泳仪、PCR 仪等设备的简要介绍和使用方法。
其他常用设备常用仪器与设备实验报告格式包括标题、作者、摘要、正文、结论、参考文献等部分的撰写要求。
数据处理与图表制作介绍数据处理的方法、图表的制作规范及注意事项。
实验结果分析与讨论阐述实验结果的分析方法、讨论实验结果的合理性及可能存在的问题。
实验报告提交与评审说明实验报告的提交方式、评审标准及相关注意事项。
实验报告撰写要求03根据实验需求，选择适当的培养基类型，如营养琼脂、马丁氏琼脂等。
选择合适的培养基按照培养基配方准确称量各成分，加入蒸馏水或去离子水，加热溶解后调整pH 值。
配制培养基将配制好的培养基分装到试管、培养皿等容器中，采用高压蒸汽灭菌法或干热灭菌法进行灭菌处理。
培养基分装与灭菌培养基制备与灭菌微生物接种与培养接种前准备准备好无菌操作台、无菌接种环、酒精灯等接种工具，确保无菌操作环境。
微生物接种采用划线法、倾注法等方法将待测微生物接种到培养基上。
培养条件设置根据微生物的生长需求，设置好培养温度、湿度和光照等条件。
观察前准备准备好显微镜、载玻片、盖玻片等观察工具，确保无菌操作环境。
微生物形态观察通过显微镜观察微生物的形态、大小、排列方式等特征，记录并描述观察结果。
环境微生物学实验指导.pdf
2．认真及时做好实验记录,对于当时不能得到结果而需要连续观察的 实验,则需记下每次观察的现象和结果,以便分析。
3．实验室内应保持整洁,勿高声谈话和随便走动,保持室内安静。
4．实验时小心仔细,全部操作应严格按操作规程进行,万一遇有盛菌试 管或瓶不慎打破、皮肤破伤或菌液吸入口中等意外情况发生时,应立即 报告指导教师,及时处理,切勿隐瞒。
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3． 放大率和有效放大率 由于经过物镜和目镜的两次放大，所以显微镜总的放大率应该是物镜放大率和目
镜放大率的乘积。显然，和放大镜相比，显微镜可以具有高得多的放大率，并且通过 调换不同放大率的物镜和目镜，能够方便地改变显微镜的放大率。放大率也是显微镜 的重要参数，但也不能盲目相信放大率越高越好。显微镜放大倍率的极限即有效放大 倍率。
5．实验过程中,切勿使酒精、乙醚、丙酮等易燃药品接近火焰。如遇 火险,应先关掉火源,再用湿布或沙土掩盖灭火。必要时用灭火机。
6．使用显微镜或其他贵重仪器时,要求细心操作,特别爱护。对消耗材 料和药品等要力求节约,用毕后仍放回原处。
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7．每次实验完毕后,必须把所用仪器抹净放妥,将实验室收拾整齐,擦 净桌面,如有菌液污染桌面或其他地方时,可用 3%来苏尔液或 5%石炭 酸液覆盖其上半小时后擦去,如系芽孢杆菌,应适当延长消毒时间。凡 带菌之工具(如吸管、玻璃刮棒等)在洗涤前须浸泡在 3%来苏尔液中进 行消毒。 8．每次实验需进行培养的材料,应标明自己的组别及处理方法,放于教 师指定的地点进行培养。实验室中的菌种和物品等,未经教师许可,不 得携出室外。 9．每次实验的结果,应以实事求是的科学态度填入报告表格中,力求简 明准确,并连同思考题及时汇交教师批阅。 10．离实验室前应将手洗净,注意关闭门窗、灯、火、煤气等。
微生物学实验八 硫酸二乙酯对枯草芽孢杆菌产生α-淀粉酶的诱变效应
实验八硫酸二乙酯对枯草芽孢杆菌产生α-淀粉酶的诱变效应（一）目的要求通过实验观察硫酸二乙酯对枯草芽孢杆菌的诱变效应。
初步掌握化学诱变育种的方法。
（二）基本原理许多化学因素如硫酸二乙酯、亚硝酸等，对微生物都有诱变作用。
硫酸二乙酯是一种烷化剂，能与DNA中碱基发生化学变化，从而引起DNA复制时碱基配对的转换或颠换。
一般化学诱变剂都有毒性，很多还具有致癌作用，故操作时切忌用口吸取，并防止与皮肤直接接触。
中止反应时，可以用大量稀释法或加入硫代硫酸钠。
本实验以产生蛋白酶的枯草芽孢杆菌为实验菌种，以硫酸二乙酯为诱变剂，根据枯草芽孢杆菌诱变后在培养基上出现的透明圈直径大小，来指示诱变效应。
（三）实验材料1. 菌种酶泥（菌悬液）2. 培养基肉膏蛋白胨培养基＋0.5％可溶性淀粉（牛肉膏0.5%，蛋白胨1％，NaCl 0.5%，可溶性淀粉0.5%，琼脂2%，pH7.0－7.2）。
3. 主要药品硫酸二乙酯(简写DES，(C2H5)2SO4)、25％硫代硫酸钠。
4. 器皿试管、移液管、锥形瓶、培养皿、离心管、玻璃涂棒、量筒、烧杯等。
（四）实验步骤1. 诱变前的准备工作1）菌种斜面的活化从冰箱取一支纯化后的枯草芽孢杆菌1.398斜面接种到新鲜肉膏蛋白胨斜面培养基上，置于30℃温箱培养24h进行活化。
2）枯草芽孢杆菌对数期培养液的制备取一环已活化的枯草芽孢杆菌接种到装有30 ml肉膏蛋白胨液体培养基的锥形瓶内(每组同学2瓶)，在30℃振荡培养16h，此时为该菌的对数期。
3）准备平板将装在锥形瓶内已灭菌的肉膏蛋白胨固体培养基融化，待冷至45℃左右倾注10个平板待用。
4）菌悬液的制备取上述对数期的枯草芽孢杆菌培养液10 m1，3000 r/min 离心15 min ，沉淀下的菌体用10 ml 0.1mo/LpH 7.0的磷酸缓冲液洗涤两次，最后用原体积的磷酸缓冲液制成菌悬液。
2. 硫酸二乙酯诱变处理 1）诱变吸取1 ml 菌悬液至盛有8ml 无菌水的试管内，再加硫酸二乙酯0.5 ml ，振荡处理5 min 。
微生物学检验实验指导
微生物学检验实验指导2009．7一、《微生物学检验》实验目的要求1．通过实验验证理论知识，并掌握比较全面的微生物学基本操作技术。
2．在微生物学实验过程中建立无菌观念，掌握无菌操作技术。
3．通过实验进一步掌握临床常见病原微生物的生物学性状、分离培养和鉴定的方法、各种临床标本的微生物学检验程序和方法。
4．在实验过程中逐渐培养独立思考问题、分析问题和解决问题的能力。
二、微生物学实验室规则及实验室意外处理方法1．微生物学实验室规则由于微生物学实验是以病原微生物为研究对象，在实验过程中任何疏忽大意都有可能引起实验人员的自身感染或实验室和周围环境的污染。
因此，实验中应严格遵守实验规则，建立无菌观念，严格无菌操作，防止实验过程中出现意外情况，并确保实验结果的准确。
（1）试验前须预习实验内容，了解实验目的、方法和注意事项，做到心中有数，避免发生错误，提高实验效率。
（2）进入实验室必须穿工作服，必要时还须戴口罩、帽子和手套，并做好实验前的各项准备工作。
（3）非必需物品禁止带入实验室，带入实验室的物品应远离操作区，放在指定的区域。
（4）实验室内不准大声喧哗、嬉戏，应保持实验室的安静、整洁和有序。
不准在实验室内吸烟、饮水和进食，尽量避免用手触摸头、面部，防止感染，尽量减少室内活动，以免引起风动。
（5）实验中注意节约试剂，爱护仪器，避免有菌材料的污染，如有传染性材料污染桌面、地面、手、衣服或发生其他意外情况，应立即报告老师及时作适当处理。
（6）用过的污染物品应放到指定的地点，经专人消毒灭菌之后再进行清洗，切勿乱丢或冲入水池中。
禁止将本实验室的物品带出实验室外。
需送温箱培养的物品，应标记清楚后送到指定地点。
（7）实验完毕后应将桌面整理清洁，试剂、仪器放回原处，并用浸有消毒液的抹布将操作台擦拭干净，打扫卫生，关好水、电、门窗。
（8）离室前脱下工作服，反折放在指定的地方；双手在2％来苏液中浸泡5min左右，再用肥皂、清水洗净，方可离开实验室。
微生物学实验
微生物学实验进度表06微生物实验室实验须知及实验室常用器皿1 实验须知：1）实验前的预习；2）做好实验记录；3）实验过程中保持实验室的干净和安静；4）实验步骤严格按操作规程进行；5）注意实验过程中的安全；6）实验完成后要把所用到的仪器放妥，收拾干净自己的实验桌；7）认真完成实验报告。
2 验室常用器皿1）试管2）吸管3）培养皿4）烧瓶5）接种工具6）超净工作台7）灭菌锅微生物学实验技能训练1 试管及锥形瓶棉塞的制作2 吸管及培养皿的包扎3 玻璃器皿的清洗4 无菌操作技术训练实验一实验室和人体表面微生物的检查一实验目的1 证明实验室环境与体表存在微生物2 比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型3 体会无菌操作的重要性二实验原理平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在适宜温度下培养，1-2d内每一菌体能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。
每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小、表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑等。
因此可通过平板培养基来检查环境中微生物的数量和类型。
三、器材1、培养基牛肉膏蛋白胨琼脂平板2、仪器或其他用具无菌水、灭菌棉签（装在试管内），接种环，试管架，酒精灯，记号笔，废物缸。
四、操作步骤1、写标签任何一个实验，在动手操作前均需首先将器皿用记号笔做上记号（包括班级、姓名、日期、样品来源等），字尽量小些，写在皿底的一边，不要写在当中，以免影响观察结果。
注：培养皿的记号一般写在皿底上，如果写在皿盖上，同时观察两个以上培养皿的结果，打开皿盖时容易混淆。
2、实验室细菌检查（1）空气将一个肉膏蛋白胨琼脂平板放在实验台上，移去皿盖，使琼脂培养基表面暴露在空气中，将另一块肉膏蛋白胨琼脂平板放在洁净工作台内或无人走动的实验室中，移去皿盖，1h后盖上两个皿盖。
（2）实验台①用记号笔在皿底外面中央画一直线，再在此线中间处画一垂直线。
微生物学实验
微生物学实验实验一实验室环境和人体表面微生物的检查实验二油镜的使用和细菌的简单染色实验三细菌的革兰氏染色和芽孢染色实验四微生物大小的测定和酵母菌死活细胞的鉴定实验五培养基的配制与消毒灭菌实验六土壤微生物的分离纯化与鉴定实验七食品微生物检验 (一)细菌总数测定实验八食品微生物检验（二）大肠菌群数测定实验九大肠杆菌生长曲线的测定实验十IMViC与硫化氢试验实验一、实验室环境和人体表微生物的检查1.一、目的：1.比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量与类型；2.观察不同类型微生物的菌落形态特征；3.体会无菌操作的重要性。
2.二、原理：1.微生物无孔不入，无处不在。
2.微生物→营养琼脂平板→菌落或菌苔。
（37 ℃倒置培养24 h）3.描述：菌落的大小、表面光滑或粗糙、干燥或湿润、隆起或扁平、边缘整齐或锯齿状、菌落透明或不透明、颜色以及质地均匀与否、疏松或紧密等，以便检查环境中细菌的类?秃褪 俊?4.细胞、放线菌、酵母菌和霉菌四大类型都可能存在，本实验重点观察细菌。
3.三、器材：1.培养基：营养琼脂平板（牛肉膏蛋白胨培养基）2.器具：无菌水、灭菌棉签、接种环（针）、酒精灯等。
4.四、步骤：1.标记。
组号/姓名、日期、样品来源。
2.接种。
3.倒置培养，37℃ 24 h4.观察结果。
5.五、结果6.样品来源菌落数菌落类型特征描写本实验室（流动空气30 min）1 大小形态干湿扁/隆透明度颜色边缘23接种室（不流动空气30min）洗手前洗手后头发屑指甲垢实验台门把1.六、思考题：1.人多的实验室与少人走动的实验室比较，平板上的菌落数和菌落类型有区别吗？试解释。
2.通过本实验，在防止培养物的污染和防止细菌的扩散方面，你有何体会？3.4.实验二油镜的使用和细菌的简单染色一、实验目的1、学习和掌握油镜的原理和使用技术。
2、学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色法。
二、实验原理1．油镜使用原理：光镜的几种物镜中以油镜的放大倍数最大，尤其适用于微生物学研究。
微生物学实验指导
微生物学实验指导微生物学实验指导编写组淮阴师范学院生物学实验教学中心淮安 2004目录微生物学实验课程简介 (1)第一部分基础实验实验 1 培养基的配制 (3)实验 2 消毒和灭菌 (7)实验 3 土壤的稀释分离、纯化及无菌操作技术 (10)实验 4 微生物菌落的观察 (14)实验 5 显微镜油浸系物镜的使用 (17)实验 6 细菌形态的观察 (21)实验7 细菌单染色法及口腔微生物的观察 (24)实验8 细菌的革兰氏染色 (27)实验9 细菌鞭毛染色及其运动的观察 (29)实验10 细菌芽孢、荚膜的染色及观察 (32)实验11支原体、衣原体的形态观察 (34)实验12放线菌的形态观察 (36)实验13 酵母菌的形态观察 (39)实验14 霉菌的形态观察 (42)实验15 细菌大小的测定 (45)实验16 细菌数目的测定 (48)实验17 细菌的生理生化反应(V．P．反应甲基红试验、吲哚试验、糖发酵试验) (52)第二部分应用性实验部分实验18 酒精发酵及糯米甜酒的酿制 (56)实验19 抗生素抗菌谱及抗生菌的抗药性测定 (58)实验20 微生物菌种保藏 (61)第三部分综合性实验和研究性实验实验21 食用菌的抑菌实验 (66)实验22 酸乳的制作和酸乳生产菌的分离实验 (68)实验23 泡菜的制作以及乳酸菌的分离 (69)实验24 表面活性剂的降解菌的筛选 (72)实验25 蛋白酶生产菌的筛选与鉴定 (74)实验26 活性污泥中微生物的纯系分离 (76)实验27 PDA培养基的微波灭菌研究 (78)实验28 蛋白酶生产菌的产酶条件研究 (80)实验29 松菇母种培养基的研究 (82)第四部分微生物实验技能的测评基本实验技能的检测 (84)实验设计及实施能力的测评 (86)后记 (88)《微生物学实验》课程简介适用专业生物技术、生物科学学时46学分 2.5课程性质必修预修课程生物化学、化学、植物学、动物学一、课程性质、地位和作用微生物学实验是生物科学和生物技术专业的一门专业基础课程，是一门独立的实验课程，同时也是为了配合微生物学的教学而开设的。
环境微生物学实验
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下：D=λ/2N.A，式中 λ=入射光的波长，N.A=物镜的数值口径，D=显微镜的分辨力。 从式中可见，减少入射光的波长，可以提高分辨能力，但由于可见光波长范围比
较窄，而紫外线只使用于显微摄影而不能用于直接观察。因此，提高分辨力的最好方 法还是增加数值口径。
物镜的数值口径(Numberical aperture)，简写为 N.A：表示从聚光镜发出的锥形光 柱照射在观察的标本上，能被物镜所聚集的量。它由下式决定：N.A =nsinθ。式中：n— 标本和物镜之间介质的折射率，θ 为入射角。
倍、400 倍、1000 倍。观察不同的微生物，要选择适宜的物镜，如细菌是单细胞原核
微生物，形体很小，大多直径或宽度小于 1µm，必须用油镜才能观察清楚；而酵母菌、
霉菌分别要选用高倍镜、低倍镜。
一般说，增大显微镜放大倍数最好尽量选用放大倍数高的物镜，但物镜的放大倍
数越大，焦距就越短，物镜和标本片之间的工作距离就越短，因此在使用高倍镜、油
参考文献 [1] 周德庆. 微生物学实验教程. 第二版. 北京：高等教育出版社，2006，21-33 [2] 周群英，高廷耀. 环境工程微生物学. 北京：高等教育出版社，2000，287-292 [3] 赵斌，何绍江. 微生物学实验. 北京：科学出版社，2002，1-28
微生物学实验指导书
微生物学实验指导书生物技术教学部初立业编重庆邮电学院生物信息学院2003年12月30日前言一、本课程的性质和任务微生物学实验是生物学重要的基础课之一，特别是随着分子生物学的发展与拓宽，微生物学方法与技术显得尤为重要。
此外，医学、农学、林学等学科，甚至地质学、太空学等也需微生物的方法与技术。
因此，熟悉掌握微生物学方法与技术，对其它很多学科的发展有直接的影响。
无菌操作技能和无菌概念的建立是微生物学实验中最重要的内容，微生物学实验课主要任务是使学生掌握研究与应用微生物的主要方法与技术，包括经典的、常规的、以及现代的方法与技术，使学生具有适应于从事相关学科的基础理论研究与实际生产应用的微生物学实验技能。
与微生物学基础理论课紧密结合，使学生将理性知识与感性认识有机地结合，将书本知识用于实验，在实验中更深地理解基础理论，提高学生的综合能力与创新意识。
提高学生分析问题和解决问题的能力。
根据本学科的特点，逐步使学生认识微生物的基本特性，比较它们与其它生物的相似和不同之处，知道如何研究微生物以及对研究中所出现的问题点样分析，并加以解决。
二、教学要求与教学方法1.教学要求1)注重微生物学基础实验技能的掌握与提高，克服盲目追求新颖而忽视基础的倾向；2)实验课前要预习，明确每次实验的目的与基本步骤；3)在实验中要有严紧的科学态度，尊重事实与实验结果，要善于发现新现象；4)树立密切合作的风气，包括学生与老师、班与班、组与组、组长与组员之间的密配合。
2.教学方法1)以学生自己动手为主，老师在适当时间予以提示；2)对实验中所出现的一些现象多向学生提出问题，使它们学会分析结果，并与理论知识有机结合；3）根据实验的进行程度，引导学生更深入思考，逐步树立他们的创新意思；4）严格要求使操作技能规范化，老师作示范，强调其要点学生自己练。
三. 教学学时分配与安排本课程按每周3学时安排，共6个实验，总学时18。
目录实验一细菌的革兰氏染色 (3)实验二根霉、酵母菌形态结构的观察 (4)实验三培养基制备 (6)实验四灭菌与消毒 (9)实验五微生物的分离和纯化 (12)实验六微生物的生理生化反应 (14)实验七水中细菌总数的测定 (19)实验八放线菌形态的观察 (21)实验九细菌的芽胞染色 (22)实验十微生物菌种保藏 (24)实验一细菌的革兰氏染色法实验目的：1．学习并初步掌握革兰氏染色法。
2024年微生物学实验教案(多场合)
2024年微生物学实验教案一、教案背景与目标微生物学作为生命科学领域的重要组成部分，在研究微生物的结构、功能、遗传和生态等方面具有重要作用。
本教案旨在通过实验操作，让学生深入了解微生物的基本特性，掌握微生物学实验的基本技能，培养其实验操作能力和科学思维能力。
二、教学内容与实验项目1.微生物的形态观察（1）光学显微镜的使用与维护（2）细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的形态观察2.微生物的染色技术（1）革兰氏染色法（2）芽孢染色法（3）抗酸染色法3.微生物的纯培养技术（1）无菌操作技术（2）接种与分离技术（3）纯培养的鉴定与保存4.微生物计数与生长曲线测定（1）显微镜直接计数法（2）平板计数法（3）生长曲线的测定5.微生物的生理生化实验（1）碳源利用实验（2）氮源利用实验（3）维生素需求实验（4）酶活性实验6.微生物的分子生物学实验（1）DNA提取与纯化（2）PCR扩增技术（3）基因克隆与表达三、教学安排与课时分配1.微生物的形态观察（2课时）2.微生物的染色技术（4课时）3.微生物的纯培养技术（6课时）4.微生物计数与生长曲线测定（4课时）5.微生物的生理生化实验（6课时）6.微生物的分子生物学实验（6课时）四、教学方法与手段1.讲授与演示：教师通过讲解、演示实验操作，使学生了解实验原理、方法和操作步骤。
2.实践操作：学生在教师指导下进行实验操作，培养实验技能。
3.小组讨论：学生分组进行实验数据的分析与讨论，培养团队协作和科学思维能力。
4.考核评价：通过实验报告、操作考试和理论知识考试，全面评价学生的学习效果。
五、教学资源与设施1.教材：选用权威、实用的微生物学实验教材。
2.实验室：配备光学显微镜、PCR仪、电泳仪、恒温培养箱等实验设备。
3.试剂与耗材：提供细菌、放线菌、酵母菌和霉菌等微生物菌株，以及实验所需试剂和耗材。
4.网络资源：利用网络平台，提供实验课件、教学视频等辅助教学资源。
六、教学效果与反馈1.学生能熟练掌握微生物学实验的基本技能，具备独立进行实验操作的能力。
微生物通用技术指南
微生物通用技术指南1. 无菌操作技术
- 正确使用无菌操作台
- 培养基和器皿的无菌处理
- 无菌接种和转种技术
2. 显微镜观察技术
- 光学显微镜的使用和操作
- 制备固定染色和活体染色样品
- 显微镜下观察和拍照技术
3. 培养基制备技术
- 固体培养基的配制和灭菌
- 液体培养基的配制和灭菌
- 选择性和差异性培养基的制备
4. 菌种纯化和保存技术
- 平板划线分离法
- 连续稀释法
- 菌种冷冻保存和活化技术
5. 生化鉴定技术
- 革兰氏染色
- 生化反应试验
- 自动化生化鉴定系统的使用
6. 抗生素敏感性测试
- 纸片扩散法
- 肉汤稀释法
- 自动化药敏分析系统的使用
7. 分子生物学技术
- 基因组DNA提取
- 聚合酶链式反应(PCR)技术
- 基因测序和序列分析
8. 生物安全和废弃物处理
- 生物安全操作规程
- 实验室废弃物的适当处理
- 个人防护设备的正确使用
以上是微生物实验常用的一些通用技术指南。
根据具体实验目的和要求,还需要掌握相关的专门技术和方法。
同时,严格遵守实验室安全规范也是非常重要的。
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课程教学日历课程名称：微生物学(实验部分) 授课学期：2010～2011学年度第一学期实验一培养基的制备与灭菌一、实验目的1.学习和掌握培养基配制的一般方法与步骤2.掌握高压蒸汽灭菌的原理及操作方法3.学会制作棉塞二、实验原理1.培养基配制的一般原则2.高压蒸汽灭菌原理强调温度而非压力三、实验材料及用具药品：牛肉膏，蛋白胨，琼脂，氯化钠，可溶性淀粉，葡萄糖，马铃薯，硝酸钾，磷酸氢二钾，硫酸镁，硫酸铁用具：试管，三角瓶，铁架台，烧杯，量杯，玻璃棒，锅，天平，药匙，PH试纸，棉花，牛皮纸，记号笔，纱布，线绳，高压灭菌锅四、实验方法与步骤称量→溶解→定容→调PH→分装→加塞→包扎→灭菌→摆斜面→无菌检查注意强调1.琼脂等药品添加注意事项（牛肉膏，高氏一号，PDA）2.分装时的注意事项并示范3.灭菌加水→装料→加盖→排气→升压→保压→降压→无菌检查五、实验演示1.培养基分装方法2.棉塞的制作3.试管斜面的搁置六、作业与思考实验报告分组：牛肉膏蛋白胨培养基 1500ml 40斜面余三角瓶高氏一号培养基 1500ml 30斜面余三角瓶PDA培养基 2000ml 60斜面余三角瓶淀粉水解培养基 1000ml 8斜面余三角瓶同时灭无菌水待用“多多益善”实验二油镜的使用及常见细菌形态观察一、实验目的1．掌握细菌基本形态和特殊结构的观察方法。
2．掌握光学显微镜油镜的使用和维护方法，了解荧光显微镜和暗视野显微镜的构造和使用方法。
二、实验原理1．油镜的使用原理图1-2 显微镜油镜的使用原理油镜的放大倍数高而透镜很小，自标本片透过的光线，因玻片和空气的折光率不同（玻璃n=1.52，空气n=1.0），部分光线经载玻片进入空气后发生折射，不能进入接物镜，致使射入光线较少，物象不清晰。
在油镜和载玻片之间滴加和玻璃折光率相近的香柏油（n=1.515），则使进入油镜的光线增多，视野光亮度增强，物象清晰（见图1-2）。
三、实验材料及用具1．示教片：各种球菌、杆菌、弧菌、荚膜、鞭毛、芽胞的示教片。
2．器材及其他：光学显微镜、载玻片、擦镜纸、香柏油、脱油剂等。
四、实验方法与步骤（一）、细菌基本形态和特殊构造的观察1．细菌的基本形态（各种球菌、杆菌、弧菌等）观察要点：注意细菌的染色性、相对大小、形状及排列方式。
2．特殊结构的观察（荚膜、芽胞、鞭毛）观察要点：注意这些特殊结构的大小、形状及其在菌体中的位置，均有助于细菌的鉴定。
（二）、光学显微镜油镜的使用1．光学显微镜的构造光学显微镜是观察细菌形态最常用的一种仪器，其构造分为机械部分和光学部分，机械部分包括：镜座、镜臂、载物台、镜筒、镜头转换器、调焦装置等；光学部分包括：接物镜、接目镜、反光镜、聚光器、光圈等（见图1-1）。
图1-1 光学显微镜的构造显微镜的接物镜有低倍镜、高倍镜、油镜三种，放大倍数依次增高，其识别方法为：（1）低倍镜：镜头标志为10×或10/0.25，镜头最短，其上常刻有黄色环圈。
（2）高倍镜：镜头标志为40×或40/0.65，镜头较长，其上常刻有蓝色环圈。
（3）油镜：镜头标志为100×或 100/1.30，镜头最长，其上常刻有白色环圈，或“oil”字样。
2．使用方法（1）采光：使用显微镜时必须端坐，将显微镜放在胸前适当位置。
将低倍镜转到中央并对准下面的聚光器，打开光圈，转动反光镜，使光线集中于聚光器（以灯光为光源时，使用凹面反光镜，以自然光为光源时用平面反光镜）。
根据所观察的标本，通过升降聚光器和缩放光圈以获得最佳光度。
当用低倍镜或高倍镜观察时，应适当缩小光圈，下降聚光器；当用油镜观察时，光线宜强，应把光圈完全打开，并将聚光器上升到最高位置。
（2）低倍镜调焦：将欲观察的标本置载物台上，用弹簧夹和推进器固定，将待检部位移至视野正中央，上升载物台至不能升高为止。
用左眼观察接目镜，缓慢调节粗调节器，使载物台下降，待看到模糊的图像时，再调节细调节器，直至看到清晰的图像为止。
（3）油镜的使用：低倍镜找到物象并调至清晰之后，转开物镜头，在玻片的标本上滴加1滴香柏油，将油镜头转换至中央，缓慢调节粗调节器，使镜头浸入油中，当油镜头几乎接触玻片时停止转动（从侧面观察），边观察接目镜边轻轻转动粗调节器（此时只能上升镜头，不能下降，防止压坏玻片及损坏物镜），待看到模糊物象时改调细调节器，直至找到清晰物象。
镜检时应将标本按一定方向呈“弓”形移动，直至整个标本观察完毕，以防漏检。
观察时应将两只眼睛同时睁开，左眼观察，右眼用于绘图或记录。
标本观察完毕后，先将物镜头移开，再转动粗调节器使载物台下降，取下载玻片，立即用擦镜纸将镜头上的香柏油擦净。
4．注意事项（1）显微镜是精密光学仪器，在搬放时应右手紧握镜臂，左手稳托镜座，平端在胸前，轻拿轻放。
（2）显微镜放到实验台上时，先放镜座的一端，再将镜座全部放稳，切不可使镜座全面同时与台面接触，这样震动过大，透镜和微调节器的装置易损坏。
（3）避免强酸、强碱、氯仿、乙醚、酒精等化学药品与显微镜接触，避免日光直射，显微镜须经常保持清洁，勿使油污和灰尘附着。
（4）接目镜和接物镜不要随便卸下，必须抽取接目镜时，须将镜筒上口用布遮盖，避免灰尘落入镜筒内。
更换接物镜时，卸下后应倒置在清洁的台面上，并随即装入木箱的置放接物镜的管内。
（5）细调节器是显微镜最精细而脆弱的部分，不要向一个方向连续转动数周，应轻微地来回旋转。
（6）镜头必须保持清洁，油镜使用完后应立即用擦镜纸拭去香柏油。
若油镜镜头上的油迹未擦干净，应先将1:1醇醚混合液或二甲苯滴在擦镜纸上擦拭镜头，再用干净擦镜纸将镜头上残留的醇醚混合液或二甲苯擦净。
（7）显微镜擦净后，取下标本片，下降聚光器，再将物镜转成“品”字形，送至显微镜室放入镜箱内。
五、作业与思考1.实验报告实验三细菌运动性观察及革兰氏染色一、实验目的1.学会制作水浸片观察细菌运动性（压滴法）2.掌握革兰氏染色步骤3.初步掌握无菌操作技术二、实验原理1.革兰氏染色的原理三、实验材料及用具E.coli，金黄色葡萄球菌（培养8-24小时）各6支，载玻片，盖玻片，显微镜，香柏油，二甲苯，擦镜纸，无菌水，接种环，酒精灯，火柴，吸水纸，革兰氏染色液四、实验方法与步骤1.细菌运动性观察制水浸片→低倍镜→高倍镜→油镜→清理→还原强调各步注意事项清理步骤2.革兰氏染色a.制片涤菌（混合）→干燥→固定（过火）b.染色结晶紫初染1分钟→水洗→碘液媒染1分钟→水洗→ 95%酒精脱色30 秒-1分钟→水洗→沙红复染1分钟→水洗→干燥→镜检强调各步注意事项制片水滴要小，过火不等于烧，染色是混合片，菌量适当，时间合适。
关键步骤是脱色五、实验演示无菌操作技术六、作业与思考1.实验报告2.绘E.coli，金黄色葡萄球菌革兰氏染色结果图实验四酵母菌、霉菌个体及菌落特征观察一、实验目的1.学习酵母菌，霉菌形态观察方法2.了解并掌握酵母菌，根霉，曲霉，青霉的形态特征二、实验原理（略）三、实验材料及用具酵母菌（培养48小时），根霉，曲霉，青霉（培养3-5天）各6皿，载玻片，盖玻片，显微镜，无菌水，接种环，酒精灯，火柴，透明胶带四、实验方法与步骤1.菌落特征观察2.个体形态观察酵母菌挑取法水浸片霉菌透明胶带粘贴法酵母菌：形态，假菌丝，厚垣孢子，出芽情况根霉：菌丝无隔，葡萄菌丝，假根，包囊梗，孢子囊，包囊孢子曲霉：菌丝有隔，足细胞，顶囊，分生孢子梗掌状分支，串生分生孢子青霉：菌丝有隔，无足细胞，无顶囊，分生孢子梗扫帚状分生孢子串生单轮生，双轮生，多轮生对称，不对称五、作业与思考1.实验报告2.绘酵母菌，根霉，曲霉，青霉个体形态图实验五土壤微生物的分离与纯化一、实验目的1.学习和掌握从土壤中分离纯化微生物的方法涂布平板法，倒平板法，划线法2.巩固无菌操作技术3.学会制平板，包培养皿二、实验原理不同微生物要求营养条件不同，选用不同培养基对土壤中细菌，放线菌，霉菌进行分离，并通过加入一些物质制成选择培养基而达到分离的目的三、实验材料及用具土壤，灭菌的三角瓶，移液管，试管，培养皿，酒精灯，火柴，无菌水，涂布器，培养箱，接种环，培养基，链霉素，10%酚，斜面，电热炉四、实验方法与步骤1.土壤的制备称土样10g→90ml无菌水中→于三角瓶中振荡20分钟，分别稀释10-2 10-3，10-4，10-5几个浓度于试管中，加9ml无菌水2.制平板溶培养基→冷却45℃左右→倒平板 PDA+链霉素高氏一号+10%酚3.涂布平板分离取0.2ml土悬液→平板→涂布→培养细菌30℃1-2天，放线菌，霉菌25℃5-7天4.纯化平板划线法纯化细菌，放线菌制平板→划线→培养点接法纯化霉菌制平板→点接→培养5.转管五、实验演示1.无菌操作制平板2.培养皿的包法六、作业与思考实验报告实验六霉菌孢子数量的测定一、实验目的1．明确血细胞计数板计数的原理。
2．掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。
二．实验原理血球计数板的构造原理：血球计数板是一块特制的厚的载玻片，其上由四条竖槽构成三个平台，中间较宽的平台又被一短的横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为9个大方格，中间的大方格为计数室。
计数室的刻度有两种规格即16×25或25×16的。
现在常用25×16的，即计数室（一个大方格）分成25个中方格，每个中方格由分为16个小方格。
计数时，通常数五个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均值，再乘上25或16，就得出一个大方格中的总菌数，然后再换算成lml菌液中的总菌数。
设五个中方格中的总菌数为A，菌液稀释倍数为B，如果是25个中方格的计数板，则1mL菌液中的总菌数=A/5×25×104×B=50000A·B（个）同理，如果是16个中方格的计数板，1mL菌液中的总菌数=A/5×16×104×B=32000A·B（个）三、实验材料及用具1．菌种霉菌2．仪器或其他用具血细胞计数板，显微镜，盖玻片，无菌毛细滴管。
四、实验步骤l．菌悬液制备以无菌生理盐水将霉菌孢子制成浓度适当的菌悬液。
2．镜检计数室在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。
若有污物，则需清洗，吹干后才能进行计数。
3．加样品将清洁干燥的血细胞计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细滴管将摇匀的酿酒酵母菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，一般计数室均能充满菌液。
取样时先要摇匀菌液；加样时计数室不可有气泡产生。
4．显微镜计数加样后静止5min，然后将血细胞计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。
调节显微镜光线的强弱适当，对于用反光镜采光的显微镜还要注意光线不要偏向一边，否则视野中不易舌清楚计数室方格线，或只见竖线或只见横线。