实验三 蛋白质的性
生物信息学实验报告3（三）蛋白质序列分析
⽣物信息学实验报告3（三）蛋⽩质序列分析（三）蛋⽩质序列分析实验⽬的：掌握蛋⽩质序列检索的操作⽅法，熟悉蛋⽩质基本性质分析，了解蛋⽩质结构分析和预测。
实验内容：1、检索SOX-21蛋⽩质序列，利⽤ProParam⼯具进⾏蛋⽩质的氨基酸组成、分⼦质量、等电点、氨基酸组成、原⼦总数及疏⽔性（ProtScale⼯具）等理化性质的分析。
2、利⽤PredictProtein、PROF、HNN等软件预测分析蛋⽩质的⼆级结构；利⽤Scan Prosite软件对蛋⽩质进⾏结构域分析。
3、利⽤TMHMM、TMPRED、SOSUI等⼯具对蛋⽩质进⾏跨膜分析；采⽤PredictNLS进⾏核定位信号分析；利⽤PSORT进⾏蛋⽩质的亚细胞定位预测；利⽤CBS（http://www.cbs.dtu.dk/services/ProtFun/）⽹站⼯具预测蛋⽩的功能，将序列⽤Blocks、SMART、InterProScan、PFSCAN等搜索其保守序列的特征，进⾏motif 的结构分析。
4、利⽤Swiss-Model数据库软件预测该蛋⽩的三级结构，结果⽤蛋⽩质三维图象软件Jmol查看。
CPHmodels 也是利⽤神经⽹络进⾏同源模建预测蛋⽩质结构的⽅法和⽹络服务器I-TASSER预测所选蛋⽩质的空间结构。
5、分析蛋⽩质的翻译后修饰：分析信号肽及其剪切位点: SignalIP http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/；分析糖链连接点:分析O－连接糖蛋⽩,NetOGlyc，http://www.cbs.dtu.dk/services/NetOGlyc/；分析N－连接糖蛋⽩，NetNGlyc，http://www.cbs.dtu.dk/services/NetNGlyc/。
6、利⽤检索的序列，进⾏同源⽐对，获得并分析⽐对结果。
实验步骤（⼀）1、在NCBI 蛋⽩质数据库中查找SOX-21蛋⽩质序列分别选择⽖蟾（Xenopus laevis）、⼩家⿏[Mus musculus]、猕猴[Macaca mulatt a]的SOX-21蛋⽩质序列，并保存其FASTA格式。
蛋白质的性质实验报告
蛋白质的性质实验报告蛋白质的性质实验(一)蛋白质的性质实验（一）蛋白质及氨基酸的呈色反应一、目的1．了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式。
2．了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。
3．学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。
二、呈色反应（一）双缩脲反应1．原理尿素加热至180℃左右，生成双缩脲并放出一分子氨。
双缩脲在碱性环境中能与Cu2+结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩脲反应。
蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反应。
可用于蛋白质的定性或定量测定。
双缩脲反应不仅为含有两个以上肽键的物质所有。
含有一个肽键和一个—CS—NH2，—CH2—NH2，—CRH—NH2，—CH2—NH2—CHNH2—CH2OH或—CHOHCH2NH2等基团的物质以及一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。
2．试剂3．操作取少量尿素结晶，放在干燥试管中。
用微火加热使尿素熔化。
熔化的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。
冷后，加10％氢氧化钠溶液约1mL，振荡混匀，再加1％硫酸铜溶液1滴，再振荡。
观察出现的粉红颜色。
要避免添加过量硫酸铜，否则，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。
向另一试管加卵清蛋白溶液约1mL和10％氢氧化钠溶液约2 mL，摇匀，再加1％硫酸铜溶液2滴，随加随摇。
观察紫玫瑰色的出现。
（二）茚三酮反应1．原理除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有α-氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。
β-丙氨酸、氨和许多一级胺都呈正反应。
尿素、马尿酸、二酮吡嗪和肽键上的亚氨基不呈现此反应。
因此，虽然蛋白质和氨基酸均有茚三酮反应，但能与茚三酮呈阳性反应的不一定就是蛋白质或氨基酸。
在定性、定量测定中，应严防干扰物存在。
该反应十分灵敏，1∶1500000浓度的氨基酸水溶液即能给出反应，是一种常用的氨基酸定量测定方法。
茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。
生物化学实验--蛋白质性质试验
（三）黄色反应 原理：蛋白质分子中含有苯环结构的氨基酸（如
酪氨酸、色氨酸等），于浓硝酸可反应并生成黄色物 质，此物质在碱性环境下变为桔黄色的硝基苯衍生物 硝醌酸等。
操作：取一支试管，加入1ml蛋白液及浓硝酸5滴。加 热，冷却后注意颜色变化。然后再加入10%NaOH溶液 1ml，颜色有什么变化？
（四）茚三酮反应 原理：蛋白质与茚三酮共热，产生兰紫色的还原茚三
操作：
1、尿素实验
取少量尿素晶体放在干燥的试管中，微火加热使其
熔化成液体，此时有氨气放出，可用湿润的试纸检验，
至液体重新结晶出现白色固体时，停止加热，冷却。然
后加10%NaOH溶液1ml，摇匀，再加2-4滴1% 混匀，观察有无紫色出现。
CuSO4溶液，
2、蛋白液实验
取蛋白液1ml，加10%NaOH溶液1ml，摇匀，再加2-4 滴1% CuSO4溶液，混匀，观察有无紫色出现。
荧光法gml不同种类蛋白最大吸收波长nm标准方法准确操作麻烦费时灵敏度低适用于标准的测定紫外分光光度280205灵敏快速不消耗样品核酸类物质有影响100010000540重复性线性关系好灵敏度低测定范围窄样品需要量大folin酚试剂750灵敏费时较长干扰物质多25050500595灵敏度高稳定误差较大颜色会转移bca50500562灵敏度高稳定干扰因素少费时较长蛋白质不同方法比较一实验原理一实验原理蛋白质或多肽分子中有带酚基酪氨酸或色氨酸在碱性条件下可使酚试剂中的磷钼酸化合物还原成蓝色生成钼蓝和钨蓝化合物
察结果。 （四）生物碱试剂沉淀蛋白质 取一支试管，加入蛋白液2ml及醋 酸4-5滴，再加饱和苦味酸数滴，
观察现象。
http://222.195.234.199/openclass 登录名：自己的学号 密码：自己的学号 大家先把电子版的实验报告作好，然后在
实验三、蛋白质的盐析透析
实验三、蛋白质的盐析透析一、蛋白质盐析（一）目的要求了解蛋白质的沉淀作用，加深对影响蛋白质胶体分子稳定性因素的认识。
（二）实验原理水溶液中蛋白质分子由于表面生成水化层及蛋白质分子上某些基团离子化而使蛋白质分子表面带有电荷，增加了水化层的厚度而成为稳定的亲水胶体颗粒，水膜和电荷一旦被除去，蛋白质颗粒将由于失去电荷和脱水而发生沉淀。
向蛋白质溶液中加入无机盐（如硫酸铵、硫酸镁、氯化钠等）后，蛋白质便从溶液中沉淀析出，这种沉淀作用称为蛋白质盐析。
其过程是一个可逆过程，当除去引起蛋白质沉淀因素后，被盐析的蛋白质仍可重新溶于水中，其天然性质不发生变化。
用不同浓度的盐可将不同种类蛋白质从混合溶液中分别沉淀的过程，称为蛋白质的分级盐析。
例如蛋清溶液中的球蛋白可被半饱和的硫酸铵溶液沉淀提取，饱和的硫酸铵溶液可使清蛋白沉淀析出。
因此，盐析法常被用于分离和提取各种蛋白质及酶制剂。
（三）试剂及材料1、10%蛋清溶液选新鲜鸡蛋，轻轻在蛋壳上击破一小孔，取出蛋清，按新鲜鸡蛋清1份，九份0.9%NaCl 溶液的比例稀释配制蛋清液，混匀，用四层纱布过滤后备用。
2、饱和硫酸铵溶液称取76.6g硫酸铵溶于100mL 25℃蒸馏水中。
3、固体硫酸铵。
（四）操作方法1、取两支试管，分别加入10%蛋清溶液5 mL，饱和硫酸铵5 mL，静置5min，观察有否沉淀物产生，沉淀物为何物？2、取其一试管，用点滴管弃去上清夜，加水至沉淀物，观察沉淀是否会再溶解，说明沉淀反应是否可逆。
3、用滤纸把另一试管的沉淀混合物过滤，向滤液中添加固体硫酸铵至溶液饱和，注意观察溶液有否蛋白质沉淀产生，此沉淀又为何物？注意：把溶液中硫酸铵固体沉淀与蛋白质沉淀区别开来。
二、蛋白质的透析（一）目的要求学习透析的基本原理和方法（二）实验原理透析是利用小分子能通过，而大分子不能透过半透膜的原理，把不同性质的物质彼此分开的一种手段。
透析过程中因蛋白质分子体积很大，不能透过半透膜，而溶液中的无机盐小分子则能透过半透膜进入水中，不断更换透析用水即可将蛋白质与小分子物质完全分开。
蛋白质的性质实验(二)——蛋白质的等电点测定和沉淀反应
六、实验思考
何谓蛋白质的等电点和沉淀反应？有何实用意义？ 详细记录各实验的结果和现象，并解释这些现象。
（2）不可逆的沉淀反应：蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质 常变性而沉淀，不再溶于原来溶剂中。如加热引起的蛋白质沉淀与凝 固，蛋白质与重金属离子或某些有机酸的反应 注意：蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如电 荷），并不析出，因此变性的蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀 的蛋白质也未必都已变性 沉淀蛋白质的方法 盐析法：向蛋白质溶液中加入大量的中性盐（如硫酸铵，硫酸钠或氯 化钠），使蛋白质脱去水化层而聚集沉淀。盐的浓度不同，析出的蛋 白质也不同。如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白则在 饱和硫酸铵溶液中析出。盐析沉淀一般不引起蛋白质变性，当除去盐 后，即可溶解 重金属盐沉淀法：当溶液pH大于蛋白质等电点时，蛋白质颗粒带负电 荷，容易与重金属离子（Hg2+、Pb2+、Cu2+或Ag+）结合成不溶性盐而 沉淀。误服重金属盐的病人可口服大量牛乳或豆浆等蛋白质进行解救 就是因为它能和重金属离子形成不溶性盐，然后再用催吐剂排出体外
某些有机酸沉淀法：某些有机酸指的是三氯乙酸、磺基水杨酸和硝酸 等。当溶液pH小于等电点时，蛋白质颗粒带正电荷，容易与酸类的酸 根负离子发生反应生成不溶性盐而沉淀 有机溶剂沉淀法：向蛋白质溶液中加入一定量的极性有机溶剂（甲醇、 乙醇或丙酮），因引起蛋白质脱去水化层以及降低介电常数，致使蛋 白质颗粒容易凝集而沉淀。此法如果控制在低温下操作并且缩短处理 时间，则可使变性速度减慢 加热变性沉淀法：几乎所有的蛋白质都因加热变性而凝固。少量盐类 促进蛋白质加热凝固，当蛋白质处于等电点时，加热变性凝固最完全 和最迅速。加热变性引起蛋白质凝固沉淀的原因可能是由于热变性使 蛋白质天然结构解体，疏水基外露，因而破坏了水化层，同时由于蛋 白质处于等电点，也破坏了带电状态。古代人将大豆蛋白质的浓溶液 加热并点入大量盐卤（含MgCl2）制豆腐，便是此方法的成功应用
实验三蛋白质的等电点测定和沉淀反应
❖ 3 蛋白质的沉淀与变性的关系？
放映结束 感谢各位的批评指导！
谢 谢！
让我们共同进步
❖ 操作步骤
❖ 〔一酪蛋白等电点的测定 ❖ 1 取同样规格的试管4支,按下表顺序分别精确地加
入各试剂,然后混匀; ❖ 2 向以上试管中各加酪蛋白的醋酸钠溶液1mL,加一
管,摇匀一管.此时1、2、3、4管的pH依次为5.9、5.5、 4.7、3.5.观察其混浊度.静置10分钟后,再观察其混浊度. 最混浊的一管pH即为酪蛋白的等电点.
❖ 〔二蛋白质的沉淀
❖
在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒,在一定的理化因素影响下,蛋白质
颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀.
❖
蛋白质的沉淀反应可分为两类.
❖ 〔1可逆的沉淀反应 此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化,除去引起沉淀的因素后,蛋白质的沉淀仍能溶解于原来溶 剂中,并保持其天然性质而不变性.
实验三 蛋白质的等电点测定和沉淀反应
实验目的
1、了解蛋白质的两性解离性质. 2、学习测定蛋白质等电点的一
种方法. 3、加深对蛋白质胶体溶液稳定
因素的认识. 4、了解沉淀蛋白质的几种方法
实验原理
〔一蛋白质是两性电解质.在蛋白 质溶液中
存在下列平衡：
电场中移向阴极
不移动
移向阳极
❖ 蛋白质的等电点: 蛋白质分子的解离状态和解离程度 受溶液的酸碱度影响.当溶液的pH达到一定数值时,蛋 白质颗粒上正负电荷的数目相等,在电场中,蛋白质既 不向阴极移动,也不向阳极移动,此时溶液的pH值称为 此种蛋白质的等电点.
❖ 不同蛋白质各有特异的等电点.在等电点时,蛋白 质的理化性质都有变化,可利用此种性质的变化测定各 种蛋白质的等电点.最常用的方法是测其溶解度最低时 的溶液pH值.
【实验】蛋白质的定性实验报告
【关键字】实验蛋白质的定性实验报告篇一：蛋白质功能性质的检测实验报告华南农业大学实验报告专业班次13 食工 1 班题目蛋白质功能性质的检测姓名黄俊怡组别XX 日期通过本实验定性地了解蛋白质的主要功能性质。
二、实验原理蛋白质的功能性质一般是指能使蛋白质成为人们所需要的食品特征而具有的物理化学性质，即对食品的加工、贮藏、销售过程中发生作用的那些性质，这些性质对食品的质量和风味起着重要的作用。
蛋白质的功能性质与蛋白质在食品体系中的用途有着十分密切的关系，是开发和有效利用蛋白质资源的重要依据。
蛋白质的功能性质可分为水化性质、表面性质、蛋白质-蛋白质相互作用的有关性质三个主要类型，主要包括有吸水性、溶解性、保水性、分散性、粘度和粘着性、乳化性、起泡性、凝胶作用等。
三、实验材料、试剂和仪器1. 实验材料（1）2%蛋清蛋白溶液：取2g 蛋清加98ml 蒸馏水稀释，过滤取清夜。
（2）卵黄蛋白：鸡蛋除蛋清后剩下的蛋黄捣碎。
2. 试剂(1) (2) (3) (4) 3. 仪器(1) (2) (3) 刻度试管100ml 烧杯冰箱硫酸铵、饱和硫酸铵溶液氯化钠、饱和氯化钠溶液花生油酒石酸1四、实验步骤1. 蛋白质水溶性的测定在10ml 刻度试管中加入0.5ml 蛋清蛋白，加入5ml 水，摇匀，观察其水溶性，有无沉淀产生。
在溶液中逐滴加入饱和氯化钠溶液，摇匀，得到澄清的蛋白质的氯化钠溶液。
取上述蛋白质的氯化钠溶液3ml，加入3ml 饱和硫酸铵溶液，观察球蛋白的沉淀析出，再加入粉末硫酸铵至饱和，摇匀，观察清蛋白从溶液中析出，解释蛋清蛋白质在水中及氯化钠溶液中的溶解度以及蛋白质沉淀的原因。
2. 蛋白质乳化性的测定取0.5ml 卵黄蛋白于10ml 刻度试管中，加入 4.5ml 水和 5 滴花生油；另取5ml 水于10ml 刻度试管中，加入 5 滴花生油；再将两支试管用力振摇2~3min，然后将两支试管放在试管架上，每隔15min 观察一次，共观察4 次，观察油水是否分离。
蛋白质的性质实验报告
一、实验目的1. 了解蛋白质的基本性质和结构特点；2. 掌握蛋白质的鉴定方法，如双缩脲反应、茚三酮反应等；3. 探究蛋白质的等电点，了解蛋白质在溶液中的溶解度与pH值的关系；4. 分析蛋白质的变性、凝固等性质。
二、实验原理蛋白质是由氨基酸通过肽键连接而成的大分子化合物，具有复杂的空间结构和多种生物学功能。
蛋白质的性质与其结构密切相关，主要包括以下几方面：1. 鉴定性质：蛋白质与特定试剂发生颜色反应，如双缩脲反应、茚三酮反应等，可用于蛋白质的鉴定；2. 等电点：蛋白质分子所带正负电荷相等时的pH值称为等电点，此时蛋白质的溶解度最小；3. 变性：蛋白质在某些物理或化学因素作用下，其空间结构发生改变，导致生物活性丧失；4. 凝固：蛋白质在加热、酸碱、重金属盐等作用下，溶解度降低，形成不溶性的沉淀。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：鸡蛋清、鸡蛋黄、牛血清白蛋白、硫酸铵、氯化钠、硝酸、氢氧化钠、氢氧化铵、酒精、酚酞指示剂等；2. 试剂：硫酸铵饱和溶液、氯化钠饱和溶液、氢氧化钠溶液、氢氧化铵溶液、硝酸溶液、酒精溶液等。
四、实验步骤1. 蛋白质的鉴定（1）取少量鸡蛋清，加入双缩脲试剂，观察颜色变化；（2）取少量鸡蛋清，加入茚三酮试剂，加热，观察颜色变化。
2. 蛋白质的等电点（1）配制不同pH值的缓冲溶液；（2）将牛血清白蛋白溶解于缓冲溶液中；（3）测定不同pH值下牛血清白蛋白的溶解度，找出等电点。
3. 蛋白质的变性（1）取少量牛血清白蛋白，加入不同浓度的硫酸铵溶液，观察蛋白质的溶解度变化；（2）取少量牛血清白蛋白，加入不同浓度的氯化钠溶液，观察蛋白质的溶解度变化；（3）取少量牛血清白蛋白，加入硝酸溶液，观察蛋白质的变性现象。
4. 蛋白质的凝固（1）取少量牛血清白蛋白，加入不同浓度的氢氧化钠溶液，观察蛋白质的凝固现象；（2）取少量牛血清白蛋白，加入不同浓度的氢氧化铵溶液，观察蛋白质的凝固现象。
五、实验结果与分析1. 蛋白质的鉴定（1）双缩脲试剂与鸡蛋清反应，呈现紫色；（2）茚三酮试剂与鸡蛋清反应，加热后呈现蓝紫色。
生化实验实验三-蛋白质颜色反应及沉淀反应
实验三蛋白质颜色反应及沉淀反应一、目的1、掌握鉴定蛋白质的原理及方法。
2、熟悉蛋白质的沉淀反应。
3、进一步掌握蛋白质的有关性质。
二、原理蛋白质分子中的某种或某些基团与显色剂作用，可产生特定的颜色反应，不同蛋白质所含氨基酸种类不同，颜色反应亦不同。
颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物质亦可产生相同的颜色反应，因此不能仅根据颜色反应的结果决定被测物质是否是蛋白质。
颜色反应是一些常用的蛋白质定量测定的依据。
多数蛋白质是亲水胶体，当其稳定性被破坏或与某些试剂结合成不溶解的盐后，即产生沉淀。
三、实验器材1、鸡蛋白2、试管3、吸管4、滴管5、水浴锅等四、实验试剂1、卵清蛋白液：将鸡蛋白用蒸馏水稀释20-40倍，2-3层纱布过滤，滤液冷藏备用。
2、0.1%茚三酮溶液：0.1g茚三酮溶于95%乙醇并稀释至100ml。
3、10%氢氧化钠溶液：10g氢氧化钠溶于蒸馏水并稀释至100ml。
4、浓硝酸：比重1.42。
5、1%硫酸铜溶液：硫酸铜1g溶于蒸馏水，稀释至100ml。
6、饱和硫酸铵溶液：蒸馏水100ml加硫酸铵至饱和。
7、95%乙醇。
8、结晶氯化钠。
9、1%醋酸铅：1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml。
10、饱和苦味酸溶液。
11、1%醋酸溶液：冰醋酸1ml用蒸馏水稀释至100ml。
五、操作1、颜色反应：A、双缩脲反应：蛋白质分子中含有肽键，与两分子尿素经过加热形成的双缩脲的结构相似，能与硫酸铜结合成红紫色的络合物。
取一支试管，加蛋白质溶液10滴，再加10%NaOH溶液10滴及1%CuSO4溶液2滴，混匀，观察是否出现紫玫瑰色。
B、黄色反应：蛋白质分子中含有苯环结构的氨基酸。
遇硝酸可硝化成黄色物质，此物质在碱性环境中变为橘黄色的硝苯衍生物。
于一试管中加蛋白质溶液10滴及浓硝酸3-4滴，加热，冷却后再加10%NaOH溶液5滴，观察颜色变化。
C、茚三酮反应：蛋白质与茚三酮共热，则产生蓝紫色的还原茚三酮、茚三酮和氨的缩合物。
蛋白质的定性实验报告
一、实验目的1. 了解蛋白质的基本性质和鉴定方法。
2. 掌握使用化学试剂对蛋白质进行定性的基本操作步骤。
3. 熟悉蛋白质与某些特定试剂反应的颜色变化，提高对蛋白质的识别能力。
二、实验原理蛋白质是生物体内重要的有机化合物，由氨基酸组成。
蛋白质具有多种功能，如构成细胞结构、催化化学反应、传递信息等。
蛋白质的定性实验主要利用其与特定试剂反应产生的颜色变化来识别和鉴定。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：鸡蛋清、鸡蛋黄、牛奶、大豆蛋白等。
2. 试剂：双缩脲试剂、浓硝酸、氢氧化钠溶液、三氯乙酸、苯酚等。
3. 仪器：试管、烧杯、滴管、酒精灯、显微镜等。
四、实验步骤1. 蛋白质鉴定实验（1）取鸡蛋清、鸡蛋黄、牛奶、大豆蛋白等样品，分别加入试管中。
（2）向每个试管中加入适量的双缩脲试剂，观察颜色变化。
（3）向每个试管中加入浓硝酸，观察颜色变化。
（4）向每个试管中加入氢氧化钠溶液，观察颜色变化。
2. 蛋白质溶解性实验（1）取鸡蛋清、鸡蛋黄、牛奶、大豆蛋白等样品，分别加入试管中。
（2）向每个试管中加入适量的三氯乙酸，观察蛋白质的溶解性。
（3）向每个试管中加入适量的苯酚，观察蛋白质的溶解性。
3. 蛋白质分子量测定实验（1）取鸡蛋清、鸡蛋黄、牛奶、大豆蛋白等样品，分别加入试管中。
（2）向每个试管中加入适量的双缩脲试剂，观察颜色变化。
（3）将每个试管中的溶液用显微镜观察，计算蛋白质分子量。
五、实验结果与分析1. 蛋白质鉴定实验（1）双缩脲试剂与蛋白质反应，产生紫色复合物，表明样品中含有蛋白质。
（2）浓硝酸与蛋白质反应，产生黄色复合物，表明样品中含有蛋白质。
（3）氢氧化钠溶液与蛋白质反应，产生红色复合物，表明样品中含有蛋白质。
2. 蛋白质溶解性实验（1）三氯乙酸与蛋白质反应，蛋白质溶解性降低，表明样品中含有蛋白质。
（2）苯酚与蛋白质反应，蛋白质溶解性降低，表明样品中含有蛋白质。
3. 蛋白质分子量测定实验通过显微镜观察，根据蛋白质颜色深浅和大小，计算出蛋白质分子量。
蛋白质的变性实验报告
一、实验目的1. 了解蛋白质变性实验的原理和方法。
2. 掌握蛋白质变性的影响因素，如温度、pH值、有机溶剂等。
3. 分析蛋白质变性实验的结果，验证实验原理。
二、实验原理蛋白质是由氨基酸通过肽键连接而成的生物大分子，具有复杂的三维结构。
在一定条件下，蛋白质的空间结构发生改变，导致其生物活性丧失，这种现象称为蛋白质变性。
蛋白质变性实验是研究蛋白质结构和功能的重要方法之一。
蛋白质变性实验主要利用以下原理：1. 温度：高温可以破坏蛋白质分子中的氢键、离子键和疏水作用力，使蛋白质分子结构松散，从而导致蛋白质变性。
2. pH值：蛋白质分子在不同pH值条件下具有不同的电荷状态，改变pH值可以破坏蛋白质分子中的离子键和氢键，使蛋白质变性。
3. 有机溶剂：有机溶剂可以破坏蛋白质分子中的疏水作用力，使蛋白质变性。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：鸡蛋清、蒸馏水、稀盐酸、氢氧化钠、氯化钠、硫酸铜、碘酒、淀粉、硝酸、酒精、苯、蒸馏水等。
2. 实验仪器：试管、烧杯、酒精灯、试管架、试管夹、滴管、玻璃棒、温度计、pH计等。
四、实验步骤1. 蛋白质变性实验（温度）（1）取鸡蛋清2mL，加入5mL蒸馏水，搅拌均匀，形成蛋白质溶液。
（2）将蛋白质溶液分为两份，分别放入两个试管中。
（3）一份试管在室温下放置，另一份试管放入50℃水浴中加热5分钟。
（4）观察两份试管的蛋白质溶液变化。
2. 蛋白质变性实验（pH值）（1）取鸡蛋清2mL，加入5mL蒸馏水，搅拌均匀，形成蛋白质溶液。
（2）将蛋白质溶液分为三份，分别放入三个试管中。
（3）第一份试管加入1mL稀盐酸，第二份试管加入1mL氢氧化钠，第三份试管不加任何试剂。
（4）观察三份试管的蛋白质溶液变化。
3. 蛋白质变性实验（有机溶剂）（1）取鸡蛋清2mL，加入5mL蒸馏水，搅拌均匀，形成蛋白质溶液。
（2）将蛋白质溶液分为两份，分别放入两个试管中。
（3）一份试管加入1mL苯，另一份试管加入1mL酒精。
高中化学蛋白质性质教案
高中化学蛋白质性质教案
一、教学目标：
1. 了解蛋白质的结构特点和分类；
2. 掌握蛋白质的性质，包括酶活性、溶解性和变性特点；
3. 能够通过实验方法检测蛋白质的性质。
二、教学重点与难点：
重点：蛋白质的结构、性质和实验方法；
难点：如何通过实验方法检测蛋白质的性质。
三、教学准备：
1. PowerPoint课件；
2. 实验器材：蛋白质溶解实验所需的试管、试管夹、试管架、蛋白质样品等；
3. 实验步骤和结果记录表。
四、教学过程：
1. 导入：通过展示蛋白质的结构式和分类，引出本节课的内容。
2. 学习与讨论：介绍蛋白质的性质，包括酶活性、溶解性和变性特点，并讨论相关实验方法。
3. 实验操作：进行蛋白质的溶解实验，记录实验步骤和结果。
4. 总结与检测：总结本节课的知识点，让学生通过实验方法检测蛋白质的性质。
五、课堂作业：
1. 制作一份实验报告，包括实验步骤、结果和结论；
2. 思考蛋白质的性质如何与其结构和功能相联系。
六、教学反思：
通过本节课的教学，学生能够更加深入地了解蛋白质的性质，培养学生的实验操作能力和思考能力，激发学生对化学的兴趣和探索精神。
蛋白质_实验报告
实验名称：蛋白质的性质与功能实验实验目的：1. 了解蛋白质的基本结构和组成。
2. 掌握蛋白质的性质和功能。
3. 学习蛋白质的提取和鉴定方法。
实验原理：蛋白质是生命活动的基础物质，由氨基酸通过肽键连接而成。
蛋白质具有多种性质和功能，如结构支持、催化反应、运输物质、信号传递等。
本实验通过观察蛋白质的沉淀、变性、凝胶化等性质，以及蛋白质的鉴定方法，来了解蛋白质的性质和功能。
实验材料：1. 鸡蛋清2. 硫酸铵3. 氯化钠4. 硫酸铜5. 茚三酮6. 硝酸7. 脱脂牛奶8. 试剂瓶9. 烧杯10. 试管11. 离心机12. 恒温水浴锅实验步骤：一、蛋白质的沉淀实验1. 取一定量的鸡蛋清溶液，加入硫酸铵，观察蛋白质的沉淀现象。
2. 将沉淀离心，观察沉淀物的变化。
3. 用氯化钠溶液处理沉淀物，观察蛋白质的溶解现象。
二、蛋白质的变性实验1. 取一定量的鸡蛋清溶液，加热至沸腾，观察蛋白质的变性现象。
2. 将变性后的蛋白质溶液冷却，观察蛋白质的重新沉淀现象。
三、蛋白质的凝胶化实验1. 取一定量的鸡蛋清溶液，加入硫酸铜，观察蛋白质的凝胶化现象。
2. 将凝胶化后的蛋白质取出，观察其形状和质地。
四、蛋白质的鉴定实验1. 取一定量的鸡蛋清溶液，加入茚三酮，观察蛋白质的显色反应。
2. 取一定量的鸡蛋清溶液，加入硝酸，观察蛋白质的显色反应。
3. 取一定量的脱脂牛奶，加入硫酸铜，观察酪蛋白的显色反应。
实验结果：一、蛋白质的沉淀实验1. 加入硫酸铵后，鸡蛋清溶液中出现白色沉淀。
2. 离心后，沉淀物变为白色絮状。
3. 加入氯化钠溶液后，沉淀物溶解。
二、蛋白质的变性实验1. 加热至沸腾后，鸡蛋清溶液中出现白色沉淀。
2. 冷却后，沉淀物重新溶解。
三、蛋白质的凝胶化实验1. 加入硫酸铜后，鸡蛋清溶液中出现凝胶状物质。
2. 凝胶质地柔软，可塑性好。
四、蛋白质的鉴定实验1. 加入茚三酮后，鸡蛋清溶液出现蓝色。
2. 加入硝酸后，鸡蛋清溶液出现橙黄色。
实验三 蛋白质的性质实验(二)-沉淀反应
2．重金属离子沉淀蛋白质 重金属离子与蛋白质 结合成不溶于水的复合物。 取1支试管，加入蛋白质溶液2 ml，再加3%硝酸 银溶液1~2滴，振荡试管，有沉淀产生。放置片 刻，倾去上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀 是否溶解？为什么？ 3．某些有机酸沉淀蛋白质 取1支试管，加入蛋 白质溶液2 ml，再加1 ml 5%三氯乙酸溶液，振荡 试管，观察沉淀的生成。放置片刻，倾出上清液， 向沉淀中加入少量水，观察沉淀是否溶解。 4．有机溶剂沉淀蛋白质 取1支试管，加入2 ml蛋 白质溶液，再加入2 ml 95%乙醇。混匀，观察沉 淀的生成。
五.操作方法
取4支同样规格的试管，按下表顺序加入各试 剂，然后混匀，静置10分钟，观察现象。
试 管 号 蒸馏 水 (ml) 0.01mo 0.1mol/ 1.0mol 酪蛋白 产生 l/L醋酸 L醋酸 /L醋酸 醋酸钠 混浊 (ml) (ml) (ml) 溶液(ml) 否?
1 2 3 4
8.4 8.7 8.0 7.4
三、器材
1.水浴锅 2.温度计 3.200毫升锥型瓶 4.100毫升容量瓶 5.吸管 6.试管 7.试管架 8.乳钵
四.试剂: 1. 2. 3. 4. 0.4%酪蛋白醋酸钠溶液 1.00mol/L醋酸溶液 0.10mol/L醋酸溶液 0.01mol/L醋酸溶液 200毫升 100毫升 100毫升 50毫升
蛋白质等电点：当蛋白质颗粒上,正负电荷 数目相等时溶液的pH值。 处于等电点时的蛋白质在电场中不发生移 动；处于等电点时的蛋白质溶解度最低。 本实验测定蛋白质最低溶解度时的pH确定 蛋白质的等电点。
二、原理
用醋酸与醋酸钠（醋酸钠混合在酪
蛋白溶液中）配制成各种不同pH值的缓 冲液。向缓冲液溶液中加入酪蛋白后， 沉淀出现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋 白的等电点。
实验三蛋白质的沉淀与变性反应一、实验目的1、加深对蛋白质胶体溶液
实验三蛋白质的沉淀与变性反应一、实验目的1、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。
2、了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。
3、了解蛋白质变性与沉淀的关系。
二、实验原理多数蛋白质是亲水胶体，在水溶液中，蛋白质分子的表面，由于形成水化层和双电层而称为稳定的胶体颗粒，所以蛋白质溶液和其他亲水胶体溶液相类似。
但是，蛋白质胶体颗粒的稳定性是有条件的、相对的。
在一定的物理化学因素影响下，蛋白质颗粒失去电荷，脱水，甚至变性以固态形式从溶液中析出，这个过程称为蛋白质的沉淀反应。
这种反应可以分为以下两种类型。
1、可逆沉淀反应：在发生沉淀反应时，蛋白质虽已沉淀析出，但它的分子内部结构并未发生显著变化，基本上保持原有的性质，沉淀因素出去后，能在溶于原来的溶剂中。
这种作用称为可逆沉淀反应，又叫做不变性沉淀反应。
属于这一类的反应有盐析作用、利用等电点的沉淀以及在低温下，乙醇、丙酮对蛋白质的短时间作用等。
2、不可逆沉淀反应：在发生沉淀反应时，蛋白质分子内部结构、空间构象遭到破坏，失去原来的天然性质，这时蛋白质已发生变性。
这种变性蛋白质的沉淀不能再溶于原来溶剂中的作用叫做不可逆沉淀反应。
重金属盐、生物碱试剂、过酸、过碱、加热、震荡、超声波，有机溶剂等都能使蛋白质发生不可逆沉淀反应。
三、仪器、试剂和材料1、仪器试管及试管架，移液管，玻璃漏斗，滤纸，玻璃棒，烧杯，量筒。
2、试剂（1）蛋白质溶液：取5ml鸡蛋蛋清，用蒸馏水稀释至100ml，搅拌均匀后用4~8层纱布过滤，新鲜配制；（2）饱和硫酸铵溶液：称取固体（NH4）2SO4加于1000ml蒸馏水中，在70~80°C下搅拌促溶，室温中放置过夜，瓶底析出白色结晶，上清液即为饱和硫酸铵溶液。
（3）饱和苦味酸溶液：称取2g苦味酸放入三角烧瓶，加蒸馏水100ml，80℃水浴约10min 使之完全溶解，于室温下冷却后瓶底析出黄色结晶，上清液即为饱和苦味酸，此溶液可存放数年；（4）其他试剂硫酸铵粉末，3%硝酸银，1%醋酸铅，1%硫酸铜，10%三氯乙酸，0.5%磺基水杨酸，95%乙醇，1%醋酸，5%鞣酸。
实验三蛋白质的性质实验(二)-沉淀反应
硫酸铵、氯化钠、硫酸钠等。
有机溶剂沉淀蛋白质
有机溶剂沉淀法
在蛋白质溶液中加入一定量的有机溶剂，使蛋白 质沉淀析出的方法。
有机溶剂的作用
降低水的介电常数，消除或减少电荷间的相互作 用，使蛋白质失去水化层而聚集沉淀。
常用有机溶剂
乙醇、丙酮、甲醇等。
重金属盐沉淀蛋白质
01
02
03
重金属盐沉淀法
淀。
操作步骤
在蛋白质溶液中加入适量的盐溶 液（如硫酸铵、氯化钠等），搅 拌均匀后静置，待蛋白质沉淀后
将上清液与沉淀分开。
结果分析
通过离心或过滤的方法收集沉淀， 测定沉淀的质量和蛋白质含量，
计算沉淀收率。
有机溶剂沉淀蛋白质
原理
有机溶剂能够降低水的介电常数， 使蛋白质分子间的静电荷作用减 弱，导致蛋白质凝聚成沉淀。
实验结果
在实验中，我们观察到加入有机溶剂后，蛋白质溶液逐渐浑浊，最 终形成白色沉淀。
结果分析
有机溶剂沉淀实验结果表明，有机溶剂能够有效降低蛋白质的溶解 度，促使其从溶液中沉淀出来。
重金属盐沉淀蛋白质结果分析
1 2
实验原理
重金属盐能够与蛋白质结合形成不溶于水的复合 物，从而降低蛋白质的溶解度，使其沉淀。
实验的应用与拓展
应用
本实验方法可用于初步分离和纯 化蛋白质，为后续蛋白质的结构 和功能研究提供基础。
拓展
本实验方法还可以应用于生物制 品、食品、药品等领域中的蛋白 质分离纯化，为相关产品的研发 和质量控制提供技术支持。
感谢您的观看
THANKS
操作步骤
在蛋白质溶液中加入适量的有机溶 剂（如甲醇、乙醇等），搅拌均匀 后静置，待蛋白质沉淀后将上清液 与沉淀分开。
实验三 蛋白质的功能性质
食品化学实验三蛋白质的功能性质1.实验原理各种蛋白质具有不同的功能性质，如牛奶中的酪蛋白具有凝乳性，在酸、热、酶（凝乳酶）的作用下会沉淀，用来制造奶酪。
酪蛋白还能加强冷冻食品的稳定性，使冷冻食品在低温下不会变得酥脆。
面粉中的谷蛋白（面筋）具有粘弹性，在面包、蛋糕发酵过程中，蛋白质形成立体的网状结构，能保住气体，使体积膨胀，在烘烤过程中蛋白质凝固是面包成型的因素之一。
肌肉蛋白的持水性与味道、嫩度及颜色有密切的关系。
鲜肉糜的重要功能特性是保水性，脂肪粘合性和乳化性。
在食品的配制中。
选择哪一种蛋白质，原则上是根据它们的功能性质。
通过本实验可以定性地了解上述几种蛋白质的功能性质。
2.试剂和仪器⑴实验样品：面粉、牛奶、瘦肉。
⑵乳酸溶液。
⑶焦磷酸钠。
⑷铰肉机。
⑸100mL小烧杯。
⑹滴管。
⑺大号塑料碗。
⑻10mL移液管。
⑼5mL移液管。
⑽玻璃棒。
⑾蒸锅。
3.实验步骤⑴酪蛋白的凝乳性在小烧杯中加入15ml牛奶，遂滴滴加50%的乳酸溶液，观察酪蛋白沉淀的形成，当牛奶溶液达到pH=4.6时（酪蛋白的等电点），观察酪蛋白沉淀的量是否增多。
⑵面粉中谷蛋白的粘弹性分别将20g高筋面粉和低筋面粉加9ml水揉成面团，将面团不断在水中洗揉，直至没有淀粉洗出为止，观察面筋的粘弹性，并分别称重，比较高筋粉和低筋粉中湿面筋的含量。
⑶肌肉蛋白质的持水性将新鲜瘦猪肉在搅肉机中搅成肉糜，取10g肉糜三份，分别加入2ml水，4ml水以及4ml含有20mg焦磷酸钠（或三聚磷酸钠）的水溶液，顺一个方向搅拌2分钟，放置半小时以上，观察三份肉糜的持水性、粘着性。
蒸熟后再观察其胶凝性。
4.思考题⑴牛奶败坏为何出现沉淀？沉淀是什么？⑵在面制品的加工中如何选择使用高筋粉和低筋粉？⑶为什么加入焦磷酸钠会增加肉的持水性？。
实验三_醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白
实验三_醋酸纤维素薄膜电泳法分离⾎清蛋⽩⼭东⼤学实验报告2011年3⽉27⽇姓名张⾏润系年级2009级⽣科4班学号200900140177 同组者于潜科⽬⽣物化学实验题⽬醋酸纤维素薄膜电泳法分离⾎清蛋⽩仪器编号105⼀、实验⽬的掌握醋酸纤维素薄膜电泳法分离⾎清蛋⽩的原理和⽅法。
⼆、实验原理蛋⽩质是两性电解质。
在pH值⼩于其等电点的溶液中，蛋⽩质为正离⼦，在电场中向阴极移动；在pH值⼤于其等电点的溶液中，蛋⽩质为负离⼦，在电场中向阳极移动。
⾎清中含有数种蛋⽩质，它们所具有的可解离基团不同，在同⼀pH的溶液中，所带净电荷不同，故可利⽤电泳法将它们分离。
⾎清中含有清蛋⽩、α-球蛋⽩、β-球蛋⽩、γ-球蛋⽩等，各种蛋⽩质由于氨基酸祖坟、⽴体构象、相对分⼦质量、等电点及形状不同，在电场中迁移速度不同。
由表可知，⾎清中5种蛋⽩质的等电点⼤部分低于pH值7.0，所以在pH8.6的缓冲液中，它们都电离成负离⼦，在电场中向阳极移动。
在⼀定范围内，蛋⽩质的含量与结合的燃染料量成正⽐，故可将蛋⽩质区带剪下，分别⽤0.4mol/L NaOH溶液浸洗下来，进⾏⽐⾊，测定其相对含量。
也可以将染⾊后的薄膜直接⽤光密度计扫描，测定其相对含量。
肾病、弥漫性肝损害、肝硬化、原发性肝癌、多发性⾻髓瘤、慢性炎症、妊娠等都可以使⽩蛋⽩下降。
肾病时α1、α2、β球蛋⽩升⾼，γ-球蛋⽩降低。
肝硬化时α2、β-球蛋⽩降低，⽽α1、γ-球蛋⽩升⾼。
三、实验器材1、醋酸纤维薄膜（2cm*8cm，厚度120µm）2、⼈⾎清；3、烧杯及培养⽫数只；4、点样器；5、⽵镊⼦；6、玻璃棒；7、电吹风；8、试管六只；9、恒温⽔浴锅；10、电泳槽；11、直流稳压电泳仪；12、剪⼑实验试剂1.电极缓冲液2.染⾊液（可重复使⽤，使⽤后回收）3.漂洗液（100ml每组）：95%⼄醇45ml，冰醋酸5ml，⽔50ml。
4.透明液（20ml每组）：⽆⽔⼄醇：冰醋酸=7：3。
实验三氨基酸蛋白质的性质鉴定ppt优选PPT文档
5%氯化汞（剧毒）3—5黄滴，蛋有什白么现象反？说应明什：么问黄题？色沉淀，这一反应为苯丙氨
5ml，加热煮沸1—2min，观察呈什么现象？溶液冷却后，加入过量浓氨水，又呈什么颜色？
酸、酪氨酸、色氨酸等苯环aa特有。 氢氧化钠（5%）、硫酸铜（1%）、谷氨酸（1%）
甘氨酸（1%）、鸡蛋白、茚三酮（0. 缩二脲反应呈紫色
解释：不同Pr硫酸另铵沉取淀饱1和%度谷不同氨酸2ml按上法加入同样试剂作对照实
2.
验，比较反应结果。 5ml，加热煮沸1—2min，观察呈什么现象？溶液冷却后，加入过量浓氨水，又呈什么颜色？
2%茚三酮溶液3—4滴，然后将两支试管放在沸水浴中加热8—10分钟，观察两支试管有什么现象发生？ 取2ml鸡蛋白溶液于试管中，慢慢加入等量硫酸铵饱和溶液，混合均匀，即成不饱和硫酸铵溶液，静置数分钟，则析出球蛋白，滤出沉 淀，向滤液中加入结晶硫酸铵，使其饱和（硫酸铵不再溶解为止），此时析出清蛋白。 2、茚三酮试剂制备：0.
解释：茚三酮反应：aa和Pr都显蓝色
2、缩二脲反应
蒸馏水中，两天内用完于，否一则失支效。试管中加入鸡蛋白溶液2ml，再滴加5% 氢氧化钠溶液至呈碱性，再加3—5滴1%硫酸铜溶 2%茚三酮溶液3—4滴，然后将两支试管放在沸水浴中加热8—10分钟，观察两支试管有什么现象发生？
1g茚三酮溶50ml
液，观察有何颜色？ 两支试管中，各加入蛋白质溶液1ml，然后一支试管中慢慢加入1%硫酸铜溶液几滴，另一支试管中加入0.
了解氨基酸及蛋白质的主要化学性质及检验方法 取2ml鸡蛋白溶液于试管中，慢慢加入等量硫酸铵饱和溶液，混合均匀，即成不饱和硫酸铵溶液，静置数分钟，则析出球蛋白，滤出沉 淀，向滤液中加入结晶硫酸铵，使其饱和（硫酸铵不再溶解为止），此时析出清蛋白。 5ml，加热煮沸1—2min，观察呈什么现象？溶液冷却后，加入过量浓氨水，又呈什么颜色？
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Ⅴ、蛋白质的沉淀及变性
在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化 层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒，在 一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失 去电荷和脱水而沉淀。 蛋白质的沉淀反应可分为两类： 1、可逆的沉淀反应 2、不可逆沉淀反应
1、可逆的沉淀反应
此时蛋白质分子的结构和理化性质
—
-
振摇混匀后，观察各管有何变化。
放置片刻。向各管内加水8ml，然 后在第2、3号管中各加一滴甲基红， 再分别用0.1mol/L醋酸溶液及 0.1mol/L碳酸钠溶液中和之。观察 各管颜色的变化和沉淀的生成。每 管再加0.1mol/L盐酸溶液数滴，观 察沉淀的再溶解。解释各管发生的 全部现象。
试管号
1
2
3 4 5
1.0
— — —
—
1.0 — —
—
— 1.0 —
—
— — 1.0
Ⅴ、蛋白质的沉淀及变性
1、盐析：加5%
卵清蛋白溶液5ml 于试管中，再加等量的饱和硫酸铵 溶液，混匀后静置数分钟则析出球 蛋白的沉淀。倒出少量混浊沉淀， 加少量水，观察沉淀是否溶解，为 什么？
2、重金属离子沉淀蛋白质
Ⅲ、黄色反应操作步骤
管 号 1 2 3 4 5 6
材
料
鸡蛋清 溶 指甲 头发 液 4 2 少许 1mL 少许 1mL
0.5% 苯酚
4 4
0.3% 0.3% 色氨酸 酪氨酸
4 4 4 4
（滴） 浓硝酸 （滴） 现象
待各管出现黄色后，于室温下逐滴加入10%氢氧化钠 溶液至碱性，观察颜色变化。
黄色反应为什么要引进苯酚，它的
4、乙醇引起的变性与沉淀。
取3支试管，编号。依下表顺序加入试剂：
0.1mol/ L 5%卵清蛋 0.1mol/L NaOH 白溶液 HCl溶液 溶液 95% 乙醇 pH4.7 0.05mol 醋酸 /L碳酸 盐溶 钠溶液 液
试剂 (ml) 管号
1
2 3
1
1 1
—
1 —
—
— 1
1
1 1
—
— -
三、操作方法
Ⅰ、双缩脲呈色反应 取少量尿素结晶，放在干燥试管中。 用微火加热使尿素熔化。熔化的尿素 开始硬化时，停止加热，尿素放出氨， 形成双缩脲。冷后，加10% 氢氧化钠 溶液约1ml，振荡混匀，再加1% 硫酸 铜溶液1滴，再振荡。 观察并记录颜色变化。 注意事项
一切蛋白质或二肽以上的多肽都有
取一支试管，加入蛋白质溶液2ml，
再加3% 硝酸银溶液1-2滴，振荡试 管，有沉淀产生。放置片刻，倾出 上清液，向沉淀中加入少量的水， 沉淀是否溶解？为什么？
3、某些有机酸沉淀蛋白质：
取两支试管，各加入蛋白质溶
液2ml，在一支中加入1ml 5% 三氯乙酸溶液，振荡试管，观 察沉淀的生成。放置片刻，倾 出上清液，向沉淀中加入少量 水，观察沉淀是否溶解。
反应证明什么？ 注意彼此颜色和 反应速度的差异（p21）
Ⅳ、蛋白质等电点的测定
取同样规格的试管5支均加入0.1mL酪蛋白溶液，按下表顺 序分别精确地加入各试剂，然后混匀。
0.2mol/L 0.2mol/L 0.2mol/L 0.2mol/L pH5.8 pH3.8 pH4.7 pH6.8 醋酸 醋酸钠 醋酸钠 磷酸 钠盐 盐（ml） 盐（ml） 钠盐 （ml） — — — —
Ⅱ、茚三酮反应
O C C C O OH OH H + H 2N C C O O H R
还原型茚三酮
O C C C O OH H + N H3 + C O 2 + R C H O
O C C C O OH H + N H3 + HO HO C
O C
O C C H N C
O C + 3H 2 O C O
实验三 蛋白质的性质实验
（一）蛋白质及氨基酸的呈色反应 （二）蛋白质的等电点测定和沉淀反应
一、目的
1、了解构成蛋白质的基本结构单位及主要联接 方式。 2、了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。 3、学习几种常用鉴定蛋白质和氨基酸的方法。 4、了解蛋白质的两性解离性质。 5、学习测定蛋白质等电点的一种方法。
四、结果与分析
1、列表显示出数据或现象； 2、对数据或现象进行细致的分析。
五、思考题
1、请说明蛋白质的沉淀、变性、凝固 三者之间的关系。 2、影响蛋白质胶体溶液稳定性的因素 有哪些？ 3、蛋白质发生盐析和有机溶剂引起蛋 白质沉淀的原因有哪些？ 4、在测定酪蛋白pI时，那些因子将会 影响测定结果的正确性？
蓝紫色
C O
C O
甘氨酸、蛋白质与茚三酮反应后的颜色和溶液的透 明度是否有差异，为什么？
Ⅲ、黄色反应
含有苯环结构的氨基酸，如酪氨酸
和色氨酸，遇硝酸后，可被硝化成 黄色物质，该化合物在碱性溶液中 进一步形成深橙色的硝醌酸钠。
苯丙氨酸不易硝化，需加入少量浓硫酸 才有黄色反应。
Ⅳ、蛋白质等电点的测定
尚未发生显著变化，除去引起沉淀 的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解 于原来的溶剂中，并保持其天然性
质而不变性。
2、不可逆沉淀反应：
此时蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋 白质常变性而沉淀，不再溶于原来溶剂中。 如加热引起的蛋白质沉淀与凝固，蛋白质与 重金属离子或某些有机酸的反应等都属于此 类。 蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条 件仍然存在（如电荷），并不析出。因此变 性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的 蛋白质也未必都已变性。
双缩脲反应，还有那些物质有此反 应？但有双缩脲反应的物质不一定 都是蛋白质或多肽。
在此设计双缩脲反应有何意义？需
要注意他们反应后的颜色及反应速 度有何差异；为什么？硫酸铜加入 量要控制，否则将会产生蓝色氢氧 化铜
Ⅱ、茚三酮反应操பைடு நூலகம்方法
1、取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘 氨酸溶液各1ml，再各加0.1%茚三酮水 溶液0.5ml，混匀，在沸水浴中加热1— 2min，观察颜色变化。 2、在一小块滤纸上滴上一滴0.5%的甘 氨酸溶液，风干后，再在原处滴上一滴 0.1%的茚三酮乙醇溶液，在微火旁烘干 显色，观察紫红色斑点的出现。
二、实验原理
Ⅰ、双缩脲呈色反应 尿素加热至180℃左右，生成双缩脲并放出 一个NH3。双缩脲在碱性环境中能与Cu 2+ 结合生成粉红色（或淡紫红色）化合物， 此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中有 肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此 反应。可用于蛋白质的定性或定量测定。
N H2 C O N H2 N H2 C O N H2 C
180℃
N H2 C O NH +N H 3 O N H2
双缩脲
N H2 C O NH N H2 C O N H2
Cu
2+ -
O C
OH
-
H N Cu H N O C NH N H C O
-
2-
+
HN C O N H
紫红色化合物
一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲 反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。