农药残留快速检测技术培训教材(PPT 56张)

草天蛾、光叶库蚊、黄粉甲、美洲淤夜蛾、豆荚草盲 蝽、马铃薯叶甲、骚扰角蝇及棉铃虫等。
• 以从敏感家蝇中提取的乙酰胆碱酯酶效果最佳，研究
表明，家蝇羽化后2-3天时其头部的乙酰胆碱酯酶敏 感性最高。
• 不足：保持期短，需冷冻低温保存。

动物酶原：
原理： 乙酰胆碱
乙酰胆碱酯酶
乙酸 + 胆碱
酶不能催化乙酰胆碱水解，导致组织中乙酰胆碱过量蓄积。 乙酰胆碱传导介质代谢紊乱，可导致迟发性神经毒性，引 起运动失调、昏迷、呼吸中枢麻痹、瘫痪甚至死亡。

常用农药的分类及性质
• 氨基甲酸酯类农药(NMCs)是继有机磷之后出现的一类 农药。 • NMCs的结构特性是含有一个N-甲基基团，为白色晶体， 难溶于水，易溶于丙酮、二氯甲烷、氯仿、乙腈等，碱 性和高温条件下很易被水解。
L/O/G/O
农药残留快速检测技术

学习目标
• 掌握速测卡法和分光光度法快速检测食品中有 机磷及氨基甲酸酯类农药的基本原理及基本技 能； • 熟悉有机磷及氨基甲酸酯类农药的免疫分析检 测方法； • 了解熏蒸剂的检测意义及方法。

农药概况：
• 农药是指用于农业、林业中各种药剂的统称。 • 特点：高效、快速和使用简便

动物酶原：
• 胆碱酯酶广泛存在于动物的组织中。目前主要集中
在动物肝脏和血液，如猪肝，鸡血等
• 1953年stedman等首先从马血清中分离出乙酰胆碱酯酶
• 也有利用蚯蚓以及海洋鱼类，甲壳类动物的神经组织、
脑组织分离乙酰胆碱酯酶。

动物酶原：
• 从昆虫提取，如：家蝇、麦二叉蚜、黄猩猩果蝇、烟
• 具有杀虫效力强、作用迅速等特点。它的最大优点是在植物中只
短暂停留，施用后很短的时间内就可被降解成相应的代谢产物， 这些代谢产物通常具有与母体化合物相同或更强的活性。
• 20世纪70年代以来，由于有机氯农药受到禁用或限用，以及抗
有机磷杀虫剂的昆虫品种日益增多，因而NMCs的用量逐年增 加，这就使得NMCs的残留情况倍受关注。
只需以一定比例的水或缓冲液混合离心获得的上清 液即可作为粗酶液，并在-4℃保存即可。测量准确 度和精密度均不逊色 。 原理：
植物酯酶
乙酸萘酯
乙酸 + 萘酚
↓显色剂固蓝B
偶氮化合物（紫红色）

酶片法 肉眼观察法 速测卡法 检测箱法
酶抑制法
目视比色法 pH计测量法 分光光度法
酸碱指示剂法 试剂盒法

常用农药的分类及性质
• 有机磷农药特点：药效高、毒性大、易降解、广
谱，成为目前农药生产中吨位最大，也是世界上 生产和使用最多的农药品种。
• 图3-1 有机磷农药结构通式
• 有机磷农药是典型的酶毒剂，可以通过消化道、皮肤、
粘膜、呼吸道吸收。
• 毒理：对神经突触后膜上的乙酰胆碱酯酶活性的抑制，使

方法溯源：
• 农药免疫分析始于1968年，Centeno E.R等人
制备了抗滴滴涕和马拉硫磷抗体，应用放射免疫 法测定。
• 随后Sernberger. L.等人先后开发出狄氏剂、艾
氏剂、苯菌灵、百草枯等农药的免疫分析法。
• 1981年，Ercegovich.R.等研制出对硫磷及2,4–
• 危害：本身的毒性危害 农药残留所引起的食品安全问题 农药残留所引起的抗药性问题 农药残留所引起的环境污染
• 按化学结构分类：有机氯类
有机磷类 氨基甲酸酯类 拟除虫菊酯类

农药检测现状：
• 随着食品中农药残留最高限量标准不断降低，
检测难度越来越大，对检测技术的要求也越 来越高。这就需要有相应的检测技术与之相 匹配，尤其是快速检测技术。 • 与日本严格的农药残留标准相比，中国的标 准相对较少。农残检查超标前5名农药，中 国都未作农残限量规定； • 与欧、美等都相差甚远，欧盟农残限量指标 28689个，美国农残限量指标7400个。因此， 必须适应国际新形势，制定合理的残留新标 准。
敏度，特别适合农药残留分析，故在80年代得 到了快速发展。
↓5，5-二硫代-双-2-硝基苯甲酸5，5二硫代-双-2-硝基苯甲酸（黄色）
• 在410 nm处有最大吸收，测定其在单位时间内的
生成量，即可测得乙酰胆碱酯酶的活性。通过测 定乙酰胆碱酯酶(AChE)受抑制的程度来检测有机 磷或氨基甲酸酯类农药。

植物酶原：
• 植物酯酶特点：酶源丰富，提取和保存较为方便，

食品安全快速检测
• 要求：快速、灵敏、便捷 • 意义：作为实验室检测的辅助方法，对大量样品
加以定性筛选，以减少送实验室定量检测的压力。
• 1、酶抑制法 • 常用农残快检方法 • 2、免疫分析法 • 3、生物传感器法

农药残留快速检测方法：
• 1、酶抑制法：利用农药对胆碱酯酶的抑制作用， 加入特定的显色剂，通过颜色深浅的变化确定是否 有农药残留或农药残留相对量的快速检测方法。 • 特点：造价不高，试剂生产已成规模，稳定性好， 操作简便、速度快，特别适宜现场检测或对大批量 样品的筛查，目前普遍使用。 • 关键：如何选择酶源 • 酶源： 来自动物的胆碱酯酶 从植物中提取的植物酯酶

农药残留快检方法：
• 2、免疫分析法 ：高等动物都有免疫功能，当细菌、 病毒和有害物等病原入侵时，能产生抵御外来物的 抗体，这就是动物的免疫反应。 • 致病的外来物被称为抗原。免疫是机体识别和排除 进入体内的抗原性异物的保护性反应。
• 免疫反应，即抗原抗体反应，不仅发生在生物体内， 在体外亦能进行，而且反应是高度特异(即对特定结 构的农药具选择性)，高度灵敏(可达pg/kg-mg/kg 水平)。
滴和2,4,5–涕的放射免疫分析法(RIA)分析方法， 检测限可达0.1g/kg。

方法溯源：
• 局限性：大部分农药的残留量都可以使用气相色
谱法等测定，该法并未比气相法更优越
• 人工合成抗原以及制备抗体的困难 • 免疫分析技术未被普遍重视。 • 免疫分析中的酶免疫分析法以其高度特异性和灵