用彗星试验研究低剂量辐射对荷瘤鼠放疗后DNA损伤的影响_高刚

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检测细胞DNA断裂损伤效应的彗星实验法的改良

ＤａｍａｇｅｏｆＤＮＡｉｎＣｅｌｌｓ
ＬａｉＪｉｎｌｏｎｇ，ＦｕＱｉａｎ，ＲｅｎＳｈａ，ＷｕＧｕｏ，ＴａｏＺｏｎｇｙａ ’，ＺｈａｎｇＨｏｎｇ，ＬｕｏＸｕｅｇａｎｇ
２０１５年
第１Ｏ卷
生态毒理学报
ＡｓｉａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｃｏｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ
Ｖｏ１．１０，２０１５
Ｎｏ．４，１９５ — ２０２
第４期，１９５ — ２０２
ｃｏｌｏｇｙ，２０１５，１０（４）：１９５ — ２０２（ｉｎＣｈｉｎｅｓｅ）
检测细胞ＤＮＡ断裂损伤效应的彗星实验法的改良
赖金龙，付倩，任莎，吴国，陶宗娅 ’，张红，罗学刚
ＬａｉＪＬ，ＦｕＱ，ＲｅｎＳ，ｅｔａ１．Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｓｏｆｔｈｅｃｏｍｅｔａｓｓａｙｆ０ｒｒａｐｉｄｄｅｔｅｃｔｉｎｇｔｈｅａｐｒｔｕｒｅａｎｄｄａｍａｇｅｏｆＤＮＡｉｎｃｅｌｌｓ［Ｊ］＿ＡｓｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｃｏｔｏｘｉ —
１．ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅＣｏｌｌｅｇｅ，ＳｉｃｈｕａｎＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅ￣ｉｔｙ，Ｃｈｅｎｇｄｕ６１０１０１，Ｃｈｉｎａ

彗星实验方法学的改进用于DNA损伤检测

【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】Ｓｉｎｇｌｅｃｅｌｌｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ；Ｃｌａｓｓｉｃａｌｃｏｍｅｔａｓｓａｙ；ＤＮＡｄａｍａｇｅ；Ａａｌｋａｌｉｎｅｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ
彗星实验如Ｏｓｔｌｉｎｇ和Ｊｏｈａｎｓｏｎ（１９８４）所描述的，并且代表性地应用于双链ＤＮＡ断裂的检测［２，３］；而碱性
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｃｌａｓｓｉｃａｌａｎｄｗｉｄｅｌｙ－ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄｃｏｍｅｔａｓｓａｙ（ＴｈｅＳｉｎｇｌｅｃｅｌｌｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓａｓｓａｙ）ａｎｄｍａｋｅｉｔｍｏｒｅｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｃｌｉｎｉｃａｌａｎｄｒｅｓｅａｒｃｈｐｕｒｐｏｓｅｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＢｌｏｏｄｓａｍｐｌｅｓｆｒｏｍｆｉｖｅＦａｎｃｏｎｉａｎｅｍｉａｐａｔｉｅｎｔｓｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄａｓｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｓａｎｄｃｏｒｄｂｌｏｏｄｓａｍｐｌｅｓｆｒｏｍ３０ｎｅｗｂｏｒｎｂａｂｉｅｓａｓｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｓｔｏｃｏｎｄｕｃｔｃｏｍｅｔａｓｓａｙｓｉｎｏｒｄｅｒｔｏｃｏｍｐａｒｅｔｈｅａｃｃｕｒａｃｙａｎｄｃｏｎｃｏｒｄａｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｃｌａｓｓｉｃａｌａｎｄｉｍｐｒｏｖｅｄｃｏｍｅｔａｓｓａｙｓ．Ｉｎａｄｄｉｔｉｏｎ，１５ｃｌｉｎｉｃａｌｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄｔｏｃｏｍｐａｒｅｔｈｅａｃｃｕｒａｃｙａｎｄｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓｏｆｔｈｅｃｏｍｅｔｔｅｓｔｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｂｙｉｍｐｒｏｖｅｄａｓｓａｙｗｉｔｈｔｈａｔｃｏｎｄｕｃｔｅｄａｔｔｈｅＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＲａｄｉａｔｉｏｎＭｅｄｉｃｉｎｅｉｎｔｈｅＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ．ＲｅｓｕｌｔｓＩｍｐｒｏｖｅｄａｓｓａｙｓｈｏｗｅｄｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆ１００％ｏｆａｃｃｕｒａｃｙａｎｄｃｏｎｃｏｒｄａｎｃｅｗｉｔｈｔｈａｔｏｂｔａｉｎｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｌａｓｓｉｃｃｏｍｅｔａｓｓａｙ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＩｎｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｗｉｔｈｔｈｅｃｌａｓｓｉｃａｌｃｏｍｅｔａｓｓａｙ，ｉｍｐｒｏｖｅｄｃｏｍｅｔａｓｓａｙｉｓｅａｓｉｅｒｔｏｐｅｒｆｏｒｍｗｉｔｈｓｈｏｒｔｅｒｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇｔｉｍｅ，ａｎｄｃａｎｇｅｎｅｒａｔｅｏｂｊｅｃｔｉｖｅ，ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ，ａｎｄｒｅｌｉａｂｌｅｔｅｓｔｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓｗｉｔｈｃｌｅａｒｅｒａｎｄｍｏｒｅｉｎｆｏｒｍａｔｉｖｅｉｍａｇｅｓ；ｉｎａｄｄｉｔｉｏｎ，ｉｍｐｒｏｖｅｄａｓｓａｙｉｓｌｏｗｅｒｃｏｓｔ，ｓａｆｅｒｔｏｐｅｒｆｏｒｍ，ａｎｄｍｏｒｅｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌｌｙｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ．ＩｍｐｒｏｖｅｄｃｏｍｅｔａｓｓａｙｃａｎｂｅｒｅｃｏｍｍｅｎｄｅｄａｓａｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌｍｅｔｈｏｄｔｏｄｅｔｅｃｔＤＮＡｄａｍａｇｅｆｏｒｃｌｉｎｉｃａｌａｎｄｒｅｓｅａｒｃｈｐｕｒｐｏｓｅｓ．

彗星实验

彗星实验(Comet assay),又称单细胞凝胶电泳(Single cell gel electrophoresis，SCGE),各种理化因子作用细胞后引起的DNA链的断裂可用该方法检测[1～3]，并在统计学基础上对损伤程度做出评估[4]。

本实验对Singh 等[5]建立的碱性彗星实验的一些步骤作了改良。

用超净工作台上的紫外消毒灯[可发射波长为254 nm的紫外线(Ultraviolet，UV)，属于UVC波段范围]作为DNA损伤的诱导因子[7～9]，诱导K562细胞DNA损伤，用改良彗星实验检测损伤程度，验证改良的实验系统是否可靠，同时筛选并评价DNA损伤的分析指标。

1 材料与方法1.1 细胞K562细胞，来源于第四军医大学免疫学教研室，37 ℃、5％ CO2培养箱中培养，取对数期细胞进行实验。

1.2 紫外线照射装置紫外消毒灯(ZSZ-20型，20 W，天津市紫晶特种光源有限公司)。

1.3 主要试剂和仪器培养基：10％新生牛血清(杭州四季青公司)，90％RPMI-1640培养液(Hyclone公司)；双抗(青、链霉素，100 UI/ml)；TritonX-100(Genview分装)；二甲基亚砜、肌苷酸钠(Sigma分装)；低熔点琼脂糖(FMC 分装)；常熔点琼脂糖(Spanish分装)。

其余生化试剂均为分析纯。

电泳仪：由西北大学物理系提供；电泳槽：DYC33A型(北京市六一仪器厂)；显微镜：Leica DM LB 2 (Leica 公司)；彗星图象分析软件：CASP软件(casp-1.2.21.4 实验分组及UV处理收集对数生长的K562细胞，台盼蓝染色计数，细胞活力大于95％，用Hank's(pH7.4)调整细胞密度至1×105/ml，接种于塑料培养皿中(ф=35 mm，2 ml/plate)，然后进行紫外线照射(0.3 mW/cm2)。

实验分为对照组和8个照射组，各照射组分别照射3、5、10、40，60、120、180、240 s，对照组不进行紫外线照射，之后进行彗星实验。

用彗星试验研究低剂量辐射对荷瘤鼠放疗后DNA损伤的影响_高刚

基金项目:天津市自然科学基金资助项目(023611111)作者单位:中国医学科学院放射医学研究所,天津300192作者简介:高刚(1976-),男,硕士研究生,主要从事低剂量辐射诱导适应性反应的研究文章编号:1000-6486(2005)01-0023-03=调查与研究>用彗星试验研究低剂量辐射对荷瘤鼠放疗后DNA 损伤的影响高刚, 李进, 唐卫生, 王芹, 王知权, 刘晓秋摘要:目的研究低剂量辐射对荷瘤鼠放疗后外周血淋巴细胞DNA 损伤的影响。

方法采用中性单细胞凝胶电泳检测低剂量辐射对荷瘤鼠放疗后外周血淋巴细胞DNA 双链断裂的情况。

观察了尾长、彗星长、头DNA%、尾DNA%、尾矩、Olive 尾矩等指标的变化。

结果 2.0Gy 局部放疗前6h 接受5cGy 低剂量全身照射并连续5d 组,其尾长、尾DNA%、尾矩、Olive 尾矩均较单纯局部放疗组明显减小,各项指标差异均有显著性(P <0.01)。

结论局部放疗前荷瘤鼠预先接受低剂量全身照射能减轻荷瘤鼠放疗后外周血淋巴细胞DNA 损伤。

关键词:低剂量辐射;外周血淋巴细胞;DNA 损伤;慧星试验中图分类号:X591 文献标识码:AEffects of low dose radiation on DNA dam age of tum or -bearing mice after radiotherapy by using comet assayGAO Gang,LI Jin,TANG We-i sheng,et al(Insti tute of Radiation Medicine,Chinese Academy of M edical Science Peking Union Medical College,Tianjin 300192,China) Abstract:Objective To search the effects of low dose radiation on DNA damage of peripheral blood lymphocytes in tumor -bear -ing mice after radiotherapy.Methods Neutral single -cell gel electrophoresis was used to detect the effects of low dose radiation on DNA double strand breaks of peripheral blood lymphocytes in tumor -bearing mice after radiotherapy.The changes of tail length,comet length,percent head DNA,percent tail DNA,tail moment and Olive tail moment were observed.Results The amount of tail length,percentage of tail DNA,tail moment and Olive tail moment in tumor -bearing mice irradiated wi th 5cGy 6h before 2.0Gy radiation were all lower than those in tumor -bearing mice irradiated with 2.0Gy radiation only.Conclusion A preliminary low dose radiation expo -sure before radiotherapy can reduce DNA damage of peripheral blood lymphocytes in tu mor -bearing mice. Key words:Low dose radiation;Peripheral blood lymphocytes;DNA damage;Comet assay如何提高肿瘤组织对放射治疗的敏感性,同时减轻周围正常组织的损伤程度,是人们一直渴望解决的问题。

低剂量辐射对环磷酰胺所致小鼠DNA及遗传物质损伤的影响(英文)

低剂量辐射对环磷酰胺所致小鼠DNA及遗传物质损伤的影响(英文)刘静;于洪升;朱静娟【期刊名称】《青岛大学医学院学报》【年(卷),期】2008(44)1【摘要】目的研究低剂量γ射线预照射对大剂量环磷酰胺化疗所致外周血淋巴细胞DNA及遗传物质损伤的影响。

方法昆明种雄性小鼠55只,随机分为空白对照组、荷瘤对照组（假照组）、荷瘤低剂量照射组（LDR组）、荷瘤环磷酰胺化疗组（CTX组）和荷瘤低剂量照射联合化疗组（LDR＋CTX组）。

小鼠常规饲养7 d后于左腹股沟皮下各接种S180肉瘤细胞（空白对照组除外）,接种后第8、11天LDR组和LDR＋CTX组小鼠给予75 mGyγ射线全身照射,照射30 h后分别给予CTX组和LDR＋CTX组小鼠腹腔注射环磷酰胺3.0 mg,第13天处死所有小鼠,分别取血,采用单细胞凝胶电泳法检测外周血淋巴细胞DNA损伤情况;采用骨髓嗜多染红细胞微核率（MNF）检测遗传物质损伤情况。

结果环磷酰胺化疗后DNA损伤程度较空白对照及假照组均显著增加;环磷酰胺化疗前给予75 mGyγ射线照射则可显著降低大剂量环磷酰胺化疗所致的DNA损伤。

大剂量环磷酰胺化疗后小鼠骨髓MNF较空白对照组及单纯荷瘤组有显著增加（t=3.63-5.46,P〈0.05）;环磷酰胺化疗前给予75 mGyγ射线照射则可降低环磷酰胺所致微核率的增加,但差别无统计学意义（P〉0.05）。

结论大剂量环磷酰胺化疗可引起外周血淋巴细胞DNA损伤;化疗前给予75 mGyγ射线照射对DNA损伤可能产生一定的保护作用。

环磷酰胺有强大的致突变作用,可导致骨髓MNF显著增加,75 mGyγ射线预照射对大剂量环磷酰胺化疗的遗传学毒性未表现出明显的保护作用。

【总页数】4页(P44-47)【关键词】辐射剂量;环磷酰胺;DNA损伤;微核【作者】刘静;于洪升;朱静娟【作者单位】青岛大学医学院附属医院肿瘤科【正文语种】中文【中图分类】R73-33【相关文献】1.补肾填精方对电磁辐射所致小鼠精子及DNA损伤影响的研究 [J], 江少波;蒋远春;孙洁;杨伟强2.低剂量辐射对环磷酰胺所致DNA损伤的影响 [J], 于洪升;朱静娟;尚庆军;王卓敏;崔复宪3.中草药远志对环磷酰胺所致小鼠遗传物质损伤的保护作用和淋巴细胞功能的增强作用 [J], 温得中;张赫炎;朱玉琢;张丽娇4.鹿茸醇提物对环磷酰胺所致小鼠遗传物质损伤的影响 [J], 陈书明;聂向庭;刘广金5.低剂量辐射联合环磷酰胺对荷瘤鼠DNA损伤的影响 [J], 张红丹;王新卓;李进;唐卫生;王知权;常力方因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

用彗星实验技术分析MTX对小鼠细胞DNA的损伤作用

生物技术通报・研究报告・ B IO TEC HNOL O G Y　BULL ETIN 2004年第6期用彗星实验技术分析MTX对小鼠细胞DNA的损伤作用杨建一　彭芸　李莉　杜圣家　单联吉吉　张新旺　王文娟(山西医科大学基础医学院,太原　030001)摘　要:　M TX是一种抗叶酸药物,作用于增殖细胞,为了解其作用机制和探测其遗传毒性靶器官,以小鼠为研究对象,用彗星实验技术检测了M TX腹腔注射染毒后对脾、骨髓、胸腺、和外周血淋巴细胞的DNA损伤作用及其与M TX剂量间的相关。

1.25～5mg/kgM TX可诱发小鼠体内4种细胞的DNA单链断裂,核DNA损伤程度与用药剂量呈正相关。

不同种类细胞对M TX的易感性不同,脾、骨髓、胸腺、外周血淋巴细胞可能是M TX的遗传毒性靶细胞。

外周血淋巴细胞在SCGE分析中的拖尾现象可作为用药后组织器官对药物敏感性反映的生物标志。

关键词:　彗星实验　甲氨蝶呤　DNA损伤　靶器官Detection of D NA Dam age Induced by MTX in Mouse Cells(spleen,bone m arrow,thymus and peripherallymphocytes)Using the Comet AssayYang Jianyi　Peng Yun　Li Li　Du Shengjia　Shan Lianzhe　Zhang Xinwang　Wang wenjuan(S hanxi Medical U niversity,Taiyuan　030001)Abstract:　To understand the mechanism of M TX further and to investigate the genotoxic target organs.DNA damage and the correlation with dose of M TX were studied by using the alkaline single cell gel electrophoresis(comet as2 say.).The results showed that:Significant increase in DNA migration and comet frequency in the spleen,thymus,bone marrow and peripheral lymphocytes of the mice were induced after intraperitoneal treatment of M TX at a dose of1.25～5mg/kg.The migration of nuclear DNA and comet frequency of spleen,thymus,bone marrow and peripheral lympho2 cytes in the dose2response study showed a dose2dependent increase.There are difference in sensitivity of various organs in the mice and cells of spleen,thymus,bone marrow and peripheral lymphocytes may be the important target cells of M TX.The comet tail of peripheral lymphocytes in suitable as a biomarker for reflecting the sensitivity of organs after treatment of M TX.K ey words:　Comet assay　M TX　DNA damage　Target organ彗星实验(Comet assay)又称单细胞凝胶电泳技术(Single cell gel electrophoresis assay,SCGE),作为一种快速、简便、灵敏、廉价、重复性好的检测单细胞DNA损伤的方法,不用控制有丝分裂的时期即可观察物质的遗传毒性作用[1,2]。

毒鼠强遗传毒理——彗星实验

彗星试验一、实验原理正常细胞核是由DNA和蛋白质构成，DNA的双螺旋以核小体的组蛋白为核心形成超螺旋结构，再进一步形成高级结构，形成染色质，染色质的缠绕形成细胞核。

彗星实验又称单细胞凝胶电泳实验，它能有效地检测并定量分析细胞中DNA单，双链缺口损伤的程度。

当各种内源性和外源性DNA损伤因子诱发细胞DNA链断裂时，其超螺旋结构受到破坏，在细胞裂解液作用下，细胞膜、核膜等膜结构受到破坏，细胞内的蛋白质、RNA 以及其他成分均扩散到细胞裂解液中，而核DNA由于分子量太大只能留在原位。

在中性条件下，DNA片段可进入凝胶发生迁移，而在碱性电解质的作用下，DNA发生解螺旋，损伤的DNA断链及片段被释放出来。

由于这些DNA的分子量小且碱变性为单链，所以在电泳过程中带负电荷的DNA会离开核DNA 向正极迁移形成“彗星”状图像，而未受损伤的DNA部分保持球形。

DNA受损越严重，产生的断链和断片越多，长度也越小，在相同的电泳条件下迁移的DNA量就愈多，迁移的距离就愈长。

通过测定DNA迁移部分的光密度或迁移长度就可以测定单个细胞DNA损伤程度，从而确定受试物的作用剂量与DNA损伤效应的关系。

毒鼠强的中毒机制尚不清楚，但有文献显示，毒鼠强的致惊厥作用可能是拮抗γ-氨基丁酸（γ-GABA）的作用，造成脑细胞凋亡。

因此，本实验通过检测不同剂量的毒鼠强对大鼠脑组织细胞DNA的损伤情况，探讨细胞DNA损伤与毒鼠强的毒作用间的关系。

二、试验目的：检测毒鼠强与细胞DNA损伤的关系。

三、试剂与器材（一）试验细胞来源：大鼠脑细胞（大鼠采用SD大鼠）（二）试剂1、毒鼠强纯品（98.5%，公安部物证鉴定中心提供）2、无钙、镁磷酸盐缓冲液（PBS缓冲液）将Nacl4.0g，KH2PO40.1g，KCL0.2g，Na2HPO40.58g,Na2HPO4·12H2O.45g，溶于500ml蒸馏水中。

3、琼脂糖用无钙、镁磷酸盐缓冲液配置4、细胞裂解液Nacl73.05g，Na2EDTA·2H2O18.6g，Tris（三羟甲基氨基甲烷）0.61g，肌氨酸钠5g，双蒸水400ml，先加入一些NaOH在磁力搅拌器上加热溶解。

检测细胞DNA断裂损伤效应的彗星实验法的改良

检测细胞DNA断裂损伤效应的彗星实验法的改良赖金龙;付倩;任莎;吴国;陶宗娅;张红;罗学刚【摘要】为了解决彗星实验过程中常出现的脱胶、细胞核分离操作繁琐、重复性低等问题,对彗星实验方法进行了改良,初步建立了彗星实验的快速操作流程.结果显示,通过对载玻片进行预处理,可确保凝胶悬挂均匀;采用改良机械法分离的细胞核浓度适中;以0.5％ (w/v)涂层琼脂糖作为基层、以1.5％ (w/v)低熔点包埋琼脂糖作为叠加层的“双层凝胶法”,辅以“推片法”铺胶,操作便捷且不发生脱胶现象;细胞核膜经裂解处理后再进行电泳和荧光观察,彗星图像清晰,杂质少.应用改良后的彗星实验方法,操作简便,耗时更短,实验效果良好,可快速检测出细胞DNA损伤效应.【期刊名称】《生态毒理学报》【年(卷),期】2015(010)004【总页数】8页(P195-202)【关键词】铯;蚕豆根尖细胞;遗传毒性;DNA损伤;彗星实验;改良【作者】赖金龙;付倩;任莎;吴国;陶宗娅;张红;罗学刚【作者单位】四川师范大学生命科学学院,成都610101;四川师范大学生命科学学院,成都610101;四川师范大学生命科学学院,成都610101;四川师范大学生命科学学院,成都610101;四川师范大学生命科学学院,成都610101;四川师范大学生命科学学院,成都610101;西南科技大学教育部生物质材料教育部工程研究中心,绵阳621010【正文语种】中文【中图分类】Q331彗星实验(comet assay)也称单细胞凝胶电泳实验(single cell gel electrophoresis,SCGE)，是一种操作简单、有效评估细胞DNA损伤的方法[1]。

其原理是器官或组织细胞受外源因素(如辐射、重金属等)影响，细胞中的DNA发生单链或双链断裂，经裂解后，DNA解旋，在电场作用下，DNA断片迁移出细胞核，形成彗星状的电泳图谱；而正常细胞的大分子量DNA在电场作用下迁移距离较短，DNA仍保留在细胞核的范围，形成圆形或轻微拖尾的图谱[2]。

彗星实验

本实验对Singh等[5]建立的碱性彗星实验的一些步骤作了改良。

用超净工作台上的紫外消毒灯[可发射波长为254 nm的紫外线(Ultraviolet，UV)，属于UVC 波段范围]作为DNA损伤的诱导因子[7～9]，诱导K562细胞DNA损伤，用改良彗星实验检测损伤程度，验证改良的实验系统是否可靠，同时筛选并评价D N A损伤的分析指标。

1 材料与方法1.1 细胞K562细胞，来源于第四军医大学免疫学教研室，37 ℃、5％CO2培养箱中培养，取对数期细胞进行实验。

1.2 紫外线照射装置紫外消毒灯(ZSZ-20型，20 W，天津市紫晶特种光源有限公司)。

1.3 主要试剂和仪器培养基：10％新生牛血清(杭州四季青公司)，90％ RPMI-1640培养液(Hyclone公司)；双抗(青、链霉素，100 UI/ml)；Triton X-100(Genview分装)；二甲基亚砜、肌苷酸钠(Sigma分装)；低熔点琼脂糖(FMC分装)；常熔点琼脂糖(Spanish分装)。

其余生化试剂均为分析纯。

电泳仪：由西北大学物理系提供；电泳槽：DYC33A型(北京市六一仪器厂)；显微镜：Leica DM LB 2 (Leica 公司)；彗星图象分析软件：CASP 软件(casp-1.2.21.4 实验分组及UV处理收集对数生长的K562细胞，台盼蓝染色计数，细胞活力大于95％，用Hank's(pH7.4)调整细胞密度至1×105/ml，接种于塑料培养皿中(ф=35 mm，2 ml/plate)，然后进行紫外线照射(0.3 mW/cm2)。

实验分为对照组和8个照射组，各照射组分别照射3、5、10、40，60、120、180、240 s，对照组不进行紫外线照射，之后进行彗星实验。

采用彗星实验检测32P敷贴对幼鼠骨髓细胞DNA的损伤

采用彗星实验检测32P敷贴对幼鼠骨髓细胞DNA的损伤目的通过检测32P敷贴对幼鼠骨髓细胞DNA损伤，从而探讨32P体表局部敷贴对幼鼠的全身毒性效应。

方法采用彗星实验检测SD大鼠幼鼠骨髓细胞DNA水平的损伤。

结论32P体表局部敷贴照射治疗能引起SD幼鼠骨髓细胞DNA损伤，因此，婴幼儿临床中应慎用32P体表局部敷贴照射治疗，尤其应避免大剂量、长时间使用。

标签：婴幼儿；32P敷贴；DNA损伤32P敷贴治疗时一种广义的短距离放射性治疗方式[1]。

目前被广泛地应用于婴幼儿等幼龄群体，关于其安全性的报道只是基于临床经验性的总结，研究指标不合理，设计不科学，因而其安全性一直存在争议。

本研究采用彗星实验检测SD大鼠幼鼠骨髓细胞DNA水平的损伤，从而探讨32P体表局部敷贴照射治疗对幼年动物全身毒性作用，进而评价32P敷贴应用于婴幼儿患者的安全性。

1 资料与方法1.1实验动物清洁级SD （Sprague-Dawley）大鼠，从江西中医学院动物科学实验部购买[许可证编号：SCXK（赣）2005-0001]。

选取幼鼠日龄为4～6d，同一批实验选用同一日动物。

1.2主要试剂正常熔点琼脂糖；低熔点琼脂糖；N-十二烷基肌氨酸钠；聚乙二醇辛基苯基醚；乙二胺四乙酸二钠；Hanks’ 平衡盐溶液（无Ca2+，Mg2+）；三（羟甲基）胺基甲烷；碘化丙啶染料；氯化钠；氯化钾；磷酸氢二钠；磷酸二氢钾；氢氧化钠；二甲基亚砜和盐酸等；32P敷贴器；吸水滤纸片；32P同位素溶液。

1.3主要器材美国丹佛精密分析天平；细胞过滤筛（200目）；日本Olympus 像差倒置显微镜；细胞计数板；上海博迅高精度恒温水浴箱；琼脂糖水平电泳槽；像差倒置荧光显微镜；像差倒置荧光显微镜摄像系统。

1.4操作方法1.4.1 32P体表局部敷贴贴敷SD大鼠幼鼠的动物模型的建立选用48只6d 体重相近的SD大鼠幼鼠，随机分为4组，分别命名为对照组、低剂量组、中剂量组以及高剂量组，每组12只，模拟临床敷贴方法，将32P滤纸片敷贴，贴于SD大鼠幼鼠背部皮肤，并用胶带固定。

DNA损伤遗传毒性SCGE彗星试验检测服务-

DNA损伤/遗传毒性/SCGE/彗星试验检测效劳()1．严格的标准操作标准和完善配套的仪器设备，为更好地完成彗星试验提供了软硬件保障。

2.批量电泳：一次最多可对数十个样品同时进行电泳，保证了样品电泳条件的一致性。

排除了电泳条件对不同样品的影响，有利于阴性对照和/或阳性对照与研究的试验对象进行比拟。

可以对个体的遗传物质损伤情况提供充分信息。

3.本公司拥有彗星试验的两项专利：单细胞凝胶试验专用电泳槽和彗星图象全自动分析软件。

4.经验丰富的研究员为您提供免费技术咨询。

结果：提供彗星试验电泳载玻片，所有已经分析的图像，数据分析结果及统计结果。

结果参数包括：彗星长；彗星光密度；彗星重心；尾长；尾光密度；尾重心；Olive 尾矩；尾%DNA；头长；头%DNA；头光密度；头重心；头惯量；头分布矩；尾/头(长)收费标准：全程效劳〔为保证结果客观、科学、经得起验证，不提供单项效劳〕铺片-裂解-解旋-电泳-干片-染色-荧光显微镜荧光激发-ccd成像-专用分析软件分析-数据统计分析结果十个样品以内：2000元；十个样品以上的局部，按每增加一个样品，加收100元。

2. 图像分析：溴化乙啶染色-荧光显微镜荧光激发-ccd成像-专用分析软件分析-数据统计分析结果十个样品以下：500元；10个样品以上，每增加一个样品，加收20元彗星试验的应用1遗传毒性试验彗星试验是一系列评定新药和其它化学物平安性的标准试验。

被广泛用于体外实验；组织和白细胞可以被分解为单细胞悬液，提供了实验材料。

通常我们用形式简单的彗星试验来检测DNA断裂，增高的敏感性以及作用机制的附加信息由于用内切酶来测定特定类型的损害而增加。

同样也可在细胞培养系统评价遗传毒性，可单纯用这一系统或者与可为化学物代谢为活性形式提供酶类的肝微粒体‘S9’片段的结合来检测。

另一方面是其化学保护作用的研究：例如彗星试验特别适合于植物化学物保护细胞免受遗传毒性刺激的研究。

2生态学监测适宜的生物可以和彗星试验联合，作为有遗传毒物污染环境的生物传感器。

彗星实验

彗星实验彗星实验(Comet assay),又称单细胞凝胶电泳(Single cell gel electrophoresis，SCGE),各种理化因子作用细胞后引起的DNA链的断裂可用该方法检测[1～3]，并在统计学基础上对损伤程度做出评估[4]。

本实验对Singh 等[5]建立的碱性彗星实验的一些步骤作了改良。

1 材料与方法1.1 细胞K562细胞，来源于第四军医大学免疫学教研室，37 ℃、5％ CO2培养箱中培养，取对数期细胞进行实验。

1.2 紫外线照射装置紫外消毒灯(ZSZ-20型，20 W，天津市紫晶特种光源有限公司)。

其余生化试剂均为分析纯。

电泳仪：由西北大学物理系提供；电泳槽：DYC33A型(北京市六一仪器厂)；显微镜：Leica DM LB 2 (Leica 公司)；彗星图象分析软件：CASP软件(casp-1.2.2，/index.php下载)；CO2培养箱：BB16HF型(上海力申科学仪器有限公司)；环地牌紫外辐照计(北京师范大学光电仪器厂)。

1.4 实验分组及UV处理收集对数生长的K562细胞，台盼蓝染色计数，细胞活力大于95％，用Hank's(pH7.4)调整细胞密度至1×105/ml，接种于塑料培养皿中(ф=35 mm，2 ml/plate)，然后进行紫外线照射(0.3 mW/cm2)。

低剂量辐射对荷瘤小鼠红细胞系统代谢的影响

低剂量辐射对荷瘤小鼠红细胞系统代谢的影响卢彦达;殷亮;于洪升;赵环宇;张昌义【期刊名称】《肿瘤防治杂志》【年(卷),期】2002(9)1【摘要】目的 :研究低剂量辐射对荷瘤小鼠红细胞系统代谢的影响 ,探讨低剂量辐射在红细胞内是否存在兴奋效应。

方法 :采用昆明种雄性小白鼠 10 0只 ,种植S180 肉瘤细胞制做荷瘤动物模型 ,随机分成 0、5 .0、7.5、10 .0cGy组 ,全身X 线照射 ,每周 1次 ,共 4次。

检测红细胞 2 ,3 DPG、ATP、SOD水平。

结果 :与0cGy组相比 ,5 .0、7.5、10 .0cGy各组红细胞 2 ,3 DPG、ATP、SOD水平均增高 (P <0 .0 5 )。

低剂量照射各组间 ,7.5cGy组增高最为明显 (P <0 .0 5 )。

结论 :低剂量辐射可提高荷瘤小鼠红细胞 2 ,3 DPG、ATP、SOD水平 ,在红细胞系统代谢中仍存在兴奋效应。

【总页数】3页(P25-27)【关键词】低剂量辐射;兴奋效应;红细胞;2,3二磷酸甘油酸;三磷酸腺苷;超氧化物歧化酶【作者】卢彦达;殷亮;于洪升;赵环宇;张昌义【作者单位】九江市第三人民医院肿瘤科;青岛大学医学院附属医院肿瘤中心【正文语种】中文【中图分类】R818.03【相关文献】1.低剂量辐射对荷瘤小鼠抑瘤作用及其免疫功能的影响 [J], 范正平;朱炳钗2.低剂量辐射对小鼠种植肿瘤的生长及红细胞免疫SOD活性的影响 [J], 于洪升;卢彦达3.低剂量电离辐射对荷瘤小鼠某些免疫功能的影响 [J], 张英;刘树铮4.低剂量辐射对荷瘤小鼠抑瘤效应及红细胞系统兴奋效应(英文) [J], 刘自民;于洪升5.低剂量辐射对荷瘤小鼠肝脏抗氧化酶的影响及肿瘤组织的病理改变 [J], 冯乐平;赵丽纯;刘柏林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

紫外辐射诱导植物细胞DNA损伤的彗星检测

紫外辐射诱导植物细胞DNA损伤的彗星检测蒋磊;王静;王艳;李韶山;江月玲【期刊名称】《华南师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2006(000)004【摘要】单细胞凝胶电泳(彗星检测)已广泛应用于动物细胞DNA损伤检测.该文报道了单细胞凝胶电泳应用于UV-B诱导植物细胞DNA损伤的检测.通过对动物细胞的单细胞凝胶电泳实验方法的改进,获得了在植物细胞中应用的最佳条件.以植物细胞原生质体为材料,并结合T4 Endonulease V的运用,显著提高了UV-B诱导植物细胞DNA损伤提高彗星检测的敏感性和特异性.植物细胞DNA损伤的彗星图像经CASP软件处理并量化,结果表明:UV-A和UV-B均能诱导发生DNA单链断裂;UV-A在一定的剂量下诱导少量嘧啶二聚体的形成,而UV-B则强烈诱导嘧啶二聚体的产生.【总页数】6页(P100-105)【作者】蒋磊;王静;王艳;李韶山;江月玲【作者单位】华南师范大学生命科学学院,广东广州,510631;华南师范大学生命科学学院,广东广州,510631;华南师范大学生命科学学院,广东广州,510631;暨南大学理工学院环境工程系,广东广州,510632;华南师范大学生命科学学院,广东广州,510631;广州大学生物与化学工程学院,广东广州,510405【正文语种】中文【中图分类】Q946【相关文献】1.彗星实验检测紫外线诱导的K562细胞DNA损伤 [J], 罗明志;齐浩;陈文芳;刘淼;郭伟2.紫外辐射诱导牡蛎细胞DNA损伤的单细胞凝胶电泳检测 [J], 熊何健;马英;汪琳;唐森铭3.紫外辐射诱导植物叶片DNA损伤敏感性差异 [J], 王静;蒋磊;王艳;李韶山4.彗星电泳检测草胺磷对蚯蚓体腔细胞DNA的损伤 [J], 张来军; 陈永敢; 王凤琴5.改良彗星试验检测紫外线照射致淋巴细胞DNA损伤 [J], 张黎;鲁海鸥;张宁;丁小平;董秀艳;王梦醒因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

用彗星实验技术分析MTX对小鼠细胞DNA的损伤作用

用彗星实验技术分析MTX对小鼠细胞DNA的损伤作用杨建一;彭芸;李莉;杜圣家;单联喆;张新旺;王文娟【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2004(000)006【摘要】MTX是一种抗叶酸药物,作用于增殖细胞,为了解其作用机制和探测其遗传毒性靶器官,以小鼠为研究对象,用彗星实验技术检测了MTX腹腔注射染毒后对脾、骨髓、胸腺、和外周血淋巴细胞的DNA损伤作用及其与MTX剂量间的相关.1.25～5mg/kgMTX可诱发小鼠体内4种细胞的DNA单链断裂,核DNA损伤程度与用药剂量呈正相关.不同种类细胞对MTX的易感性不同,脾、骨髓、胸腺、外周血淋巴细胞可能是MTX的遗传毒性靶细胞.外周血淋巴细胞在SCGE分析中的拖尾现象可作为用药后组织器官对药物敏感性反映的生物标志.【总页数】4页(P35-37,40)【作者】杨建一;彭芸;李莉;杜圣家;单联喆;张新旺;王文娟【作者单位】山西医科大学基础医学院,太原,030001;山西医科大学基础医学院,太原,030001;山西医科大学基础医学院,太原,030001;山西医科大学基础医学院,太原,030001;山西医科大学基础医学院,太原,030001;山西医科大学基础医学院,太原,030001;山西医科大学基础医学院,太原,030001【正文语种】中文【中图分类】Q3【相关文献】1.基于彗星实验的洛克沙胂对秀丽隐杆线虫胚胎细胞DNA损伤的研究 [J], 高上吉;钟晓霞;刘婉莹;王勉之;孙静;李弘程;孙永学2.彗星实验检测新农药呋喃虫酰肼对小鼠细胞DNA的损伤 [J], 郑智新;胡继业3.利用彗星实验检测丙烯酰胺对小鼠两种细胞的DNA损伤和修复 [J], 郭红刚;杨建一;高宝珍;韩宁;边思成;萨晓婴4.碳纳米管对小鼠肝和肺细胞DNA损伤的彗星实验研究 [J], 景连东;向婵;廖美芳;饶凯敏;信丽丽5.彗星实验评价牛大力对^(60)Coγ射线致小鼠DNA损伤的防护 [J], 陈晓白;王晓平;赵仕花因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

彗星实验评价牛大力对^(60)Coγ射线致小鼠DNA损伤的防护

彗星实验评价牛大力对^(60)Coγ射线致小鼠DNA损伤的防护陈晓白;王晓平;赵仕花【期刊名称】《时珍国医国药》【年(卷),期】2013(0)1【摘要】目的探讨牛大力对小鼠辐射损伤的防护作用。

方法 40只小鼠随机分为阴性对照组、辐射模型组、牛大力低(5g.kg-1.d-1)、中(10g.kg-1.d-1)、高(20g.kg-1.d-1)剂量组。

用5Gy60Coγ射线对除阴性对照组外的各组小鼠进行一次性全身均匀照射,制成放射损伤动物模型。

牛大力剂量组小鼠在照射前4 d及照射后10 d,以相应剂量的牛大力煎煮液连续灌胃14 d,最后一次灌胃24 h后处死小鼠,取肝、肾、肺、睾丸、脾组织进行彗星实验。

结果小鼠在接受60Coγ射线照射后,牛大力剂量组各组织细胞尾部DNA百分率(Tail DNA%)和尾矩(Tail Moment)与辐射模型组相比,明显降低(P<0.01),并随着牛大力的浓度增加,Tail DNA%和Tail Moment逐步减少,呈明显的量效关系。

结论在一定剂量下,中药牛大力对60Coγ射线诱导的小鼠DNA损伤有不同程度的保护和修复作用。

【总页数】3页(P76-78)【关键词】牛大力;彗星实验;60Coγ射线;DNA损伤【作者】陈晓白;王晓平;赵仕花【作者单位】玉林师范学院生命科学与技术学院【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.牛大力对60Coγ射线致小鼠造血系统损伤的保护作用 [J], 陈晓白;王晓平;赵仕花;韦舒婷2.黄花倒水莲（Polygala fallax Hemsl.）对60Coγ射线辐射损伤小鼠组织DNA的防护作用 [J], 黄翔;王晓平3.氮氧自由基化合物对60COγ射线致BALB/c小鼠辐射损伤的防护作用 [J], 林艳云;王峰;王海波;蒋大鹏;高鹏;任正华;吴涛;郎海洋;曾丽华4.益气解毒方对2.0 Gy 60Coγ射线致小鼠睾丸急性损伤的防护效应 [J], 卢曦;李盼飞;王安;王磊;王艳;石中玉;高誉珊;胡素敏5.益气解毒中药复方对2 Gy^60Coγ射线致小鼠急性辐射损伤的防护效应研究 [J], 王安;王艳;石中玉;王磊;高誉珊;于雪;徐文慧;傅骞;李伟;胡素敏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

低剂量辐射对小鼠白血病的治疗作用

低剂量辐射对小鼠白血病的治疗作用
谭业辉;王冠军
【期刊名称】《中华国际医学杂志》
【年(卷),期】2001(001)005
【摘要】目的观察低剂量辐射对小鼠白血病的治疗作用.方法使用615小鼠和
L615K淋巴细胞白血病细胞株建立T淋巴细胞白血病小鼠模型,给予75mGy的低剂量辐射,检测外周血白细胞变化、小鼠的生存时间及脾脏白血病细胞浸润情况.结果接受75mGy的低剂量辐射后,荷瘤小鼠白血病细胞生长受抑制,生存期延长.结论低剂量辐射具有抗淋巴细胞白血病的作用.
【总页数】3页(P427-429)
【作者】谭业辉;王冠军
【作者单位】吉林大学第一医院血液科,中国长春,130021;吉林大学第一医院血液科,中国长春,130021
【正文语种】中文
【中图分类】R733.7
【相关文献】
1.低剂量辐射对白血病模型小鼠治疗作用研究 [J], 谭业辉;王畅;王冠军
2.低剂量辐射后小鼠骨髓白血病细胞凋亡的观察 [J], 李广宙;于明明;李现军;刘志翔
3.不同低剂量辐射对粒单白血病小鼠骨髓的影响 [J], 于明明;李广宙;李现军;刘志翔;刘江月
4.低剂量辐射对白血病小鼠肿瘤细胞凋亡的影响 [J], 李现军;李广宙;于明明;杨兆禄;孙建梅
5.低剂量辐射对白血病小鼠血清IL-2、TNFα及SOD的影响 [J], 李广宙;李现军;于明明
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彗星试验检测哺乳动物细胞 DNA 损伤样品制备方法

彗星试验检测哺乳动物细胞 DNA 损伤样品制备方法王楠;薛永来;杜道林【摘要】彗星试验（ comet assay ）是近年来逐步发展起来的1种检测单细胞水平DNA损伤的新技术，该技术已被广泛应用于遗传毒理学、，辐射生物学、环境生态学等领域。

在碱性SCGE基础上，对哺乳动物细胞SCGE检测样品制备的方法进行了改进与优化，使改进后的方法更加快速简便、易于推广。

【期刊名称】《江苏农业科学》【年(卷),期】2014(000)006【总页数】3页(P41-42,43)【关键词】彗星实验(单细胞凝胶电泳);DNA损伤;HepG2细胞;电泳图像质量【作者】王楠;薛永来;杜道林【作者单位】江苏大学环境与安全工程学院，江苏镇江212013;江苏大学环境与安全工程学院，江苏镇江212013; 江苏大学农业工程研究院，江苏镇江212013;江苏大学环境与安全工程学院，江苏镇江212013; 江苏大学农业工程研究院，江苏镇江212013【正文语种】中文【中图分类】Q291;X503.22DNA存储着生物体赖以生存繁衍的遗传信息，细胞DNA损伤是细胞生物学领域的研究热点之一。

当细胞受到损伤时，其DNA双链会发生断裂，断裂过程中会发生特异性级联生化反应，依赖Ca2+、Mg2+的核酸内切酶被激活，优先作用于连接DNA的核小体间区域，将DNA链切割成180～200 bp或其倍数的片段，在彗星电泳中发生断裂的DNA迁移速度与迁移距离均数倍于正常细胞的核DNA，呈现脱离细胞核的“彗星”状，据此可将DNA受损细胞与正常细胞区分开[1]。

彗星试验(comet assay)也被称作单细胞凝胶电泳(SCGE)，是1种在单细胞水平上检测真核细胞DNA损伤的方法。

通过测定细胞电泳时彗星出现率、彗尾DNA含量百分比、彗尾长度等指标，即可对细胞药物引起细胞DNA损伤进行全面评价[2]。

1993年，Olive等首次将彗星试验应用于细胞凋亡检测[3]。

中性彗星分析法检测肿瘤细胞的放射敏感性

中性彗星分析法检测肿瘤细胞的放射敏感性张玉晶;闫洁;高远红;李艳春;杨伟志【期刊名称】《中国肿瘤》【年(卷),期】2004(13)11【摘要】[目的]研究中性彗星分析法检测肿瘤细胞内在放射敏感性的可靠性和影响因素。

[方法]人鼻咽高分化鳞癌细胞株CNE鄄1和人纤维肉瘤细胞株HT1080细胞,用6MVX线以0、100、200、300、400、600、800、1000cGy等不同剂量点照射,克隆形成法制定存活曲线,比较其放射敏感性的差异。

然后进行两种细胞于600cGy照射后1、2、4、8h的中性彗星分析,以尾力矩为指标,动态检测不同时间点残留的DNA双链断裂,并与克隆形成分析结果相比较。

[结果]克隆形成分析法显示CNE鄄1细胞的放射敏感性低于HT1080细胞,其2Gy照射后存活分数(SF2)和平均致死剂量D0值分别为0.397、0.331和1.898、1.287。

两种细胞在照射后1、2、4h的中性彗星尾力矩分别为0.148±0.106、0.100±0.083、0.058±0.043和0.297±0.179、0.157±0.092、0.092±0.060,各时间点之间有显著性差异(P<0.05),但差别逐渐减小;照射后2h和4h的尾力矩比值分别为0.637和0.630,与SF2比值和D0比值的倒数(0.834和0.678)较接近;两种细胞照射后8h的尾力矩比较差异无显著性。

[结论]中性彗星分析法与克隆形成分析法的检测结果有确切的相关性,照射后一定时间内的残留DNA双链断裂有可能成为检测肿瘤细胞放射敏感性的指标。

【总页数】4页(P731-734)【关键词】彗星分析法;双链断裂;放射敏感性;放射疗法;肿瘤【作者】张玉晶;闫洁;高远红;李艳春;杨伟志【作者单位】中山大学肿瘤防治中心;中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤医院【正文语种】中文【中图分类】R730.2【相关文献】1.彗星电泳检测肿瘤细胞对快中子放射治疗敏感性的研究 [J], 薛文成;孟冬娅;苑宾;王宝勤;唐锦华2.改良"彗星"分析法检测实体肿瘤放射敏感性的方法学研究 [J], 雷明芳;杨伟志;高黎;王冕荣;蒋恒;宋丽京3."彗星"分析法检测人癌裸鼠移植瘤的放射敏感性 [J], 高远红;杨伟志;闫洁;袁智勇;刘新帆;徐国镇4.改良"彗星"分析法检测鼻咽癌放射敏感性的初步研究 [J], 高黎;杨伟志;袁智勇;徐国镇;高远红;王冕荣5.中性单细胞电泳检测肿瘤细胞放射敏感性 [J], 张军宁;朱寿彭;洪承皎因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。