细胞生物学试验课件-海南大学

思
考
题
• 要得到正确的革兰氏染色结果必须注ห้องสมุดไป่ตู้ 哪些操作？关键在哪几步？为什么？
实验三 实验室环境及人体表面的 微生物检查
一、实验目的
• 认识细菌分布的广泛性； • 掌握对菌落识别；
• 懂得无菌操作的重要性。
二、实验的基本原理
• 每一菌体在适宜条件下，经过多次细胞分裂可形成一个肉 眼可见的子细胞集合体，称为菌落。 • 由于不同细菌其个体的形态、结构、生理和生化等特征不 同，当一个菌体经分裂繁殖形成菌落后，就使得菌落呈现 其固有的特点。 • 通过合适的方法，将自然环境中的微生物接种到平板培养 基上，经过培养后观察平板上的菌落，就可以检查环境中 及人体细菌的数量和类型。
四、实验步骤
• 油镜的使用
1.用前检查：零件是否齐全，镜头是否清洁。 2.调节光亮度 3.低倍镜观察：粗调、细调 4.依次再进行中倍、高倍观察 5.油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光镜， 在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细 调至看清物象为止。 6.换片：另换新片，必须从第三条开始操作。 7.用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头 上的油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残留的油， 最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部复原。
四、实验步骤
• 革兰氏（Gram）染色法 1. 涂片 2. 初染：在做好的涂面上滴加 草酸铵结晶紫染液，染1分钟， 倾去染液，流水冲洗至无紫色。 3. 媒染：先用新配的路哥氏碘 液冲去残水，而后用其覆盖涂 面1分钟，后水洗。 4. 脱色：除去残水后，滴加 95%酒精进行脱色约30秒，后 立即用流水冲洗。 5. 复染：滴加番红染色液，染1 分钟，水洗后用吸水纸吸干。 6. 镜检：观察染色结果并绘图。
实验二 细菌的革兰氏染色
一、实验目的
• 掌握细菌的革兰氏染色 • 进一步熟练掌握显微镜油镜的使用技术 • 观察和识别细菌细胞的特殊构造
二、实验的基本原理
• 细菌细胞壁的结构和组成存在差异，因此不同细菌对革兰氏染色 有不同的反应（阳性和阴性）： • 革兰氏阴性菌的细胞壁中含有较多脂类，肽聚糖层较薄、交联度 低，当以95%酒精脱色时，脂类被溶解除去，使得细胞壁空隙变 大，肽聚糖因95%酒精处理，其孔径会缩小，但由于肽聚糖含量 较少，细胞壁孔径缩小有限，使得结晶紫与碘形成的紫色染料复 合物被95%酒精洗脱出细胞壁之外，并被随后的红色复染剂染成 红色；
四、实验步骤
• 显微镜保养和使用中的注意事项： 1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。 2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁 度 3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。 当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调 节器，以免压碎玻片或损伤镜面。 4.观察时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯，以 免眼睛疲劳，并且能够在左眼观察时，右眼注视绘图。 5.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单 手拿，更不可倾斜拿。 6.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀 镜片。
四、实验步骤
• 细菌三种基本形态的观察：
菌落形态观察和个体形态观察，这里主要指 个体形态的观察。 1. 结合油镜的使用，观察三张细菌染色片（球 状菌、杆状菌、和螺旋状菌），边观察边绘图。 2. 看示范镜：观察双球菌、四联球菌，并绘图。
思考题
• 油镜与普通物镜在使用方法上有何不同？ 应特别注意些什么？ • 使用油镜时，为什么必须用镜头油？ • 镜检标本时，为什么先用低倍镜观察， 而不是直接用高倍镜或油镜观察？
四、实验步骤
• 简单染色法（一般染色法） １.菌种：牙垢细菌 ２.涂片 ３.干燥：自然气干或酒精灯 高处微微加热。 ４ 固定 ５.染色：在整个涂面上滴加 齐氏石炭酸复红，染色１分 钟。 ６.水洗：倾去染液，用自来 水细流冲洗至流下的水中无 染料颜色为止。 ７干燥：空气中自然干燥。 ８ 镜检：在油镜下观察牙垢 中的各种细菌形态并绘图。
二、实验的基本原理
• 简单染色法原理：细菌在中性的环境中带负电 荷，用碱性染料（解离时带正电荷）如美兰、 结晶紫等进行染色。
• 采用加热或化学固定两种方法，使菌体粘附于 玻片上，并且增加菌体对染料的亲和力
三、
实验材料
• 显微镜（显微镜灯）、香柏油、二甲苯、擦镜 纸、吸水纸等。 • 0.05% 和0.1%吕氏碱性美蓝染色液，0.5%番 红染液，中性红染液，二甲苯，生理盐水 • 细菌三种形态的染色标本。 • 大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，哈氏弧菌和无乳 链球菌24h液体培养基培养物 • 盖玻片、凹玻片、接种环、酒精灯。
• 革兰氏阳性菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，脂类含量少，经 95%酒精脱色处理后，肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，使得 结晶紫与碘形成的紫色染料复合物很难被95%酒精洗脱出细胞壁 之外，因此细菌仍保留初染时的颜色，呈现紫色。
三、实验材料
• 显微镜，酒精灯，载玻片，接种环，香柏油，二甲苯， 双层瓶，擦镜纸，生理盐水，吸水纸，染色缸等。 • 染色剂：草酸铵结晶紫染色液，卢（路）哥氏(Lugol) 碘液，95%乙醇，0.5%番红染色液。 • 菌种：哈氏弧菌和鳗弧菌24h普通海水琼脂斜面28℃培 养物，金黄色葡萄球菌和芽孢杆菌24h牛肉膏琼脂斜面 28℃培养物。
微生物学实验
海南大学海洋学院
实验一 细菌的形态和结构观察
一、实验目的
• 观察细菌的菌落特征 • 掌握简单染色法和细菌涂片方法 • 在油镜下观察细菌个体的形态特征
二、实验的基本原理
• 形态观察主要包括群体的形态和个体的形态观察。 • 细菌的基本形态主要分为球菌、杆菌、螺旋菌三大类，近年 还发现星状和四方形细菌等。细菌形态受培养时间、培养基 成分、浓度、培养温度、培养时间等发生变化。 • 细菌菌落大多表面光滑湿润，有光泽，一般菌落较小，质地 颜色均匀，同培养基结合不紧密。菌落特征与组成菌落的细 胞结构、生长状况、排列方式、好气性和运动性直接相关。 • 细菌个体微小，较透明，必须染色方可呈现。根据细菌个体 形态观察的不同要求，可将染色分为3种类型：简单染色、 鉴别染色、特殊染色。