独活寄生汤含药血清对成骨细胞OPG_RANKL蛋白表达的影响

培养 液制 成 细胞 悬 液 , 接 种 于 培养 瓶 , 并放 于 一 换液 次直至
养
、
、
, 分别每 孔 加
拼 浓度为
的
, 继续 培 养 , 轻度 振荡 约 波长处 测定 吸光 值
后 ,弃上 清液 ,各孔 加 巧 拌 的 而 使其 溶解 , 酶标 仪 于 值 , 计 算在 不 同时 间时 , 低剂
南京 中医药 大学 基 础 医学 院 , 江 苏 南京
蛋 白表达 的影 响 , 从 分 子 生物 学 层 面探 究
独 活寄 生汤 治疗 骨质疏 松症 的机 理 , 为独 活寄生 汤治疗 骨质疏松 症提 供理论 及 实验依据 。 方 法 体 外培 养原代
新生
大 鼠成 骨 细胞 , 分别 用 生理 盐水血 清对 照组 、 独 活寄 生汤含 药血 清低 浓度 , 中浓度 , 高 浓度 作用 于
成 骨细胞 , 采 用 清 对成 骨细 胞 细胞 生长 成 骨细胞
且 影响 成 骨细胞 的分 化 。 关键 词 独 活寄 生汤 成骨 细胞 骨保 护蛋 白 核 因子一 沼 受体 活化子 配体
文 献标 志码 文章编 号 一 为 一 中 图分类 号
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独活寄生 汤
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罗, 一 阳 , 邵 罗 罗,
汤含 药血清 组平 均
值 一空 白血 清组平 均
值
·
·
年
月第
卷第
期
『让
咨捧中医荡
空 白血 清组 平 均
骨细胞 用
值
检测
。
蛋 白表达 将成 护 瓶 的细
日一
的胰 酶 消 化 后 , 按 照 刀
胞 密 度 接种 于
别 加人
培 养 瓶 中 , 培 养 细胞 贴 壁 后 , 分
培 养 液 ,后 加 人 独 活 寄 生 汤 低 剂
家族 中的几 个成 员 ' 〕 ,相 咒 、 、
目前 在骨 质疏 松 症 的研 究 领 域 已进 人 到分 子 生
物学 的水 平 , 尤其 在基 因复制 、 蛋 白定量 、 信 号通 道等 方 面进行 了深人 广泛 地实 验研 究 。 骨保 护蛋 白
达调控破 骨 细胞 , 从 而 调 控 骨 吸 收 , 成 为 骨 吸 收 和骨 都 由成 骨 细胞 、
竹 法检 测 独活寄 生汤含 药血 清对 成 骨细 胞 生长 的影 响 , 、 结 果 显示不 同浓度 的独 活寄 生汤含 药血 清 能促 进 成 骨细 胞 蛋 白的表达 。 结论 独活寄 生汤含 药血 清可 以通过 、 检 测 独 活 寄 生 汤含 药血 蛋 白的表 达 , 并 且 抑 制 系统促 进 成 骨细 胞 的增 殖 并 孔 蛋 白表达 的影响 。 结果 独活 寄 生汤 含 药血 清 以 浓度 及 时 间的依 赖 方 式促 进 成 骨
的肾虚 、 脾 虚 、血疲
个病 机 要 素 完 全 相 对 应 〔 ' 〕, 在
此 理论 下进 行 实验研 究 , 证 明独 活寄生 汤对 由骨 质疏 松 症 引起 的慢性 腰 、 背疼 痛有 一定 的治 疗效 果 。 由此
在 临床 研 究 的 基 础 上 探 讨 独 活 寄 生 汤 对 成 骨 细 胞
细 胞融 合 , 常规 消化 细胞 进行 传代 。 选 择第 含药 血 清制 备
岁
代细 胞
取 独 活 寄生 汤 水 煎 液 浓 缩 , 药
、 、 , 体 质量 , 次
量组 、中剂 量组 、 高剂 量组 对成 骨 细胞 的促 进率 , 重复 次 。 按公 式计 算细 胞生 长促 进 率 独 活 寄生
物浓 度 分 别相 当于 生药 含 量 为 , 大 鼠给药量 为
此 基 因表 达 的影 响 , 从 分 子 生 物学 层 面 探
液 ,细 胞单 层铺 满培 养 瓶 后 , 用 液体 中 , 加 液 , 分瓶 培养 。 嚷哇 蓝 还 原 法
而 后 ,镜 下观 察细 胞 圆缩 时 , 吸管 吹 打使 细 胞 悬 于 培养 液 终 止 消化 , 加人 适 量 培 养
索 独活 寄生 汤治疗 骨 质疏 松症 的原理 , 为 独活 寄生 汤 治疗 骨质 疏 松症 提供 可靠 的理论 依据 。
实 验材 料
法 测定细胞生 长促进率
成 骨细 胞体 外培 养 内
通过 酶消 化法 从 新生 只 液 液洗 净 胰
在 无 菌 条 件 下 ,取 对数 生 长 期 的 成 骨 细 胞 , 用 的胰 酶 消 化 , 制 成 单 细 胞 悬 液 。 调 整 浓 度 , 将 细胞 浓度 调 整 为 板 , 每孔 加 孔 ,各 孔 加 人 拜 护 密度 接种 于 ℃、 孔 培养 仇 培养 箱 个复 培养 液 ,
实验 结果 独 活寄 生汤 含药 血 清促 进成 骨细 胞 的增 殖 表 。 如表 见 所示 , 成 骨 细胞 经 独 活 寄生 汤 含 药血 清
一 公 叱 乏 过 衬 、 ` 。 。
作用 后 , 细胞 的生 长呈 现 不 同程 度 的增 殖 , 并 且 呈 时
间、 浓度 依 赖性 的特 点 。
表
组别
0 13 年 2
月第
卷第
期
,
。,
咨 捧中 医 仿
· 实 验 石 汗究
·
独 活 寄 生 汤含 药 血 清对 成 骨 细胞 蛋 白表 达 的影 响
万春飞 ' , 詹 秀琴 , 孙 玉明 ' `
南京 中医药大 学 第一 临床 医学 院 , 江 苏 南京
摘要 目的 检测 独 活寄生 汤含 药血清 对成 骨细胞
一 等指标 都有所下 降 ,肠 指 标有 滩 对 照 有 显 著性 差 异 。 独 活
及 高剂量 组
主 要试剂 血清 , ,
,一
℃冰箱保 存 备用 。`
培养基 场 公 司 ,胎 牛 的胰 蛋 白 酶 以
, 消化 剂 为 , 嘎哇 蓝
寄生汤源于 中医经典名著 《 备急千金要方 》, 主要治疗
痹 证 日久 、 肝 肾两虚 、 气血 不足 等证 , 现 临床 多见 于治 疗 类 风湿 性 关 节 炎 、 强 直 性 脊柱 炎 川 、 腰椎管狭窄 症〔 “〕、 腰 椎 间盘 突 出症 叫 、 膝骨 性关 节 炎 仁 '” 及 产 后 身 痛仁 ”〕 等证 , 尚未 见独 活寄 生 汤 治 疗骨 质 疏 松 症 方 面
、 户 土 士 士
独活寄生汤含药血清对成骨 细胞生 长的促进作用
士
士 士 以 △ △ 研
士
士住 以 士
△
` △
士
士 士
`
△ △
注 与生理盐水组相 比 , △
。
独 活 寄 生 汤 含 药 血 清 对成 骨 细胞 相 关 蛋 白表 达 的影 响 成 骨 细 胞 经过 独 活 寄 生 汤含
图
各
值
药血 清 低剂 量 、中剂 量 、 高剂量作 用
、 二 甲基 亚矾
及 其他抗 体 主 要 仪器
邵 咫 仇 培养箱
卿 公司 。 ,
刊 ,化
, 全 自动 ,
倒置相差 显
酶标 光度 计 , 蛋 白电泳槽 , 电转 移装 置
,三 洋 超 低 温 冰 箱 微镜
文章 , 更未见其对骨质疏松 的作用 机理研究的文章 。
独 活寄 生汤方 有 补益 肝 肾 、 补脾 健脾 、活血养 血 、 祛风
量 、 中剂量 、 高剂量溶液 对照组加人
培养 液 , 继续 于 培养 箱 中培养 总蛋 白 , 并 用 一
的
图 独活 寄生 汤含 药血 清 对成骨细胞 相关蛋 白表达的影响
后 , 提 取各 组 细胞
法测 定 蛋 白浓 度 ,加 热 变 性后 ,
℃保存 。取 各组 细 胞 的总 蛋 白 滩 进行 凝 胶 电泳 , 将 分 离后 的蛋 白质 电转 移 到 ,按 大 约
苗
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骨 质疏松 症 是 一 种 以骨 量 减 少 , 骨 组 织 显 微 结 构退 化为 特征 , 以致 骨 的脆性 增高 而骨折 危险性 增加
的一种 全身 性骨 骼 疾病 川 , 该 病 发病 率 高 , 且 容 易 合 并严重 并发 症 “ 一〕。近
除湿 、 镯痹 止 痛 的功 效 , 其 所 主治 之 证 与 骨质 疏 松 症
公 司 , 三 用 电热 恒 温箱 国营江苏 淮 阴医
疗 器械 厂 , 隔热 恒温 培养 箱 上海跃 进 医疗器 一 厂 , 电热鼓 风干燥 箱 南京 实验 仪 器厂 。 实验 方法 细胞 培养 培养液 , 成 骨 细胞 于含 ℃、 胎 牛血 清 的 胰酶消化 , 姚 培 养 箱 中培 养 , 隔 天 换
示骨 质 疏 松 症 患 者在
经人 一 大 鼠体表 面积 比值 折 算 , 相 当 于成 人 日用 临 床
剂量 的 、 、 倍 。取 月 龄雌 性 大鼠 士 , 只 , 随机 分 为 江 丫 组 , 分 别 灌 服 生 理 盐 水 和低 剂量 、 , 连续 ,末 次 给 药 后 , ,
中 剂 量 、高 剂 量 独 活 寄 生 汤 浓 缩 制 剂 , 给 药 量 为 体 质量 , 次 乙醚麻 醉 ,无 菌 条件下 , 腹 主动 脉取 血 ,低 温放 置 清
羊抗 兔 , 二抗 用 封 闭液稀 释
照
江 了 扩 显影 液计 算用 量 , 将显 影液 加于
膜
上 , 室温 放置 将膜 蛋 白贴 在
而 。用 保鲜 膜将 膜 包好 , 暗室 中迅速 线 胶 片 上 曝 光 , 洗 片 机 中显 影 、洗