微泡造影剂联合超声辐照介导的绿色荧光蛋白质粒转染小鼠肝癌的实验研究
超声介导微泡造影剂促进HSV-TK基因转染抑制小鼠肝癌移植瘤的实验研究
摘 要
目的
方法
探讨 超声 辐 照 微 泡 造 影 剂 介 导 的 单 纯 疱 疹 病 毒 一 苷 激 酶 ( V— 胸 HS TK) 自杀 基 因 系 统 转 染 小 鼠肝 癌 组 织 的有 效 性 。
小 鼠肝 癌 皮 下 移 植 瘤 ,尾 静 脉 注 入 HS T V— K, 加 或 不 添加 S n Vu ,脉 冲多 普 勒 超 声 ( 添 oo e 1MHz 2W /m n 、 c 、5mi)辐
00) . 5 ,肿 瘤 内 T K mRN 的 表 达增 多 ( O 0 ) 肿 瘤 细 胞 凋 亡 指 数增 高 ( O 0 ) A P< . 5 , P< . 5 。 结论 超 声 辐 照 S n V e可 有 效 介 导 HS T 基 因 发挥 抗 瘤 效 应 。 oo u V— K
关 键 词
微 泡 造 影 剂 超 声 基 因治 疗 肝 肿 瘤
M u i e Tr n p a e pa o a c no a Tr atd wih S TK a m i r n a s l nt d He t c r i m e e t H V- Pl s d De i e e y M ir bu l lr s nd Ex os r lv r d b c o bb e U t a ou p u e: Ex r m e a t dy pe i nt lS u
TK sijce no t iv i t rwi o tS n Vu . u s p lrutao n sa p ida Hzfe u n y wa ne td it al en wih o t u o o e P leDo pe lr s u d wa p l ta1M h e rq e c wi 0 d t y l n / m up titn i o i t a 5 u yc cea d 2W c o t u n e st fr5m n,a d t ete t n sr p ae h e td y I h h y n h r ame twa e e tdt en x a . nt e
超声靶向微泡介导PEDF质粒转染小鼠肝癌的实验研究
超声靶向微泡介导PEDF质粒转染小鼠肝癌的实验研究胡向东;刘婧;王志会;张宏;邱兰燕;钱林学【期刊名称】《临床和实验医学杂志》【年(卷),期】2012(011)022【摘要】Objective To explore whether gene transfection of pigment epithelium - derived factor ( PEDF ) plasmid to HepG2 hepatocellular carcinomatous models by ultrasound mediated microbubble destruction could inhibit hepatocellular carcinoma in mice. Methods HepG2 hepatocellular carcinomatous models were established in thirty five rats. These rats were randomly divided into five groups: rats in group I ( control group ) were treated with normal saline; rats in group II were injected with naked plasmid DNA of PEDF; rats in group III received an injection of a mixture of naked plasmid DNA of PEDF and microbubbles; rats in groupIV were injected with microbubbles followed by immediate ultrasound irradiation; and rats in group V received an injection of a mixture of naked plasmid DNA of PEDF and microbubbles, with exposure to ultrasound immediately. After the treatment, features of contrast enhanced ultrasound image of lesions in each group were observed, the inhibition rates of tumor were calculated, and expression of PEDF protein in lesions was detected. The difference among groups had been analyzed with statistical software. Results After treatment, the enhancement of lesions in group V was weaker than that of group I; the inhibition rates of tumor ingroup V and group IV were higher than those of group II and group III; the expression of PEDF protein in lesions of group V was significantly higher than those of other four groups ( P < 0.01 ). Conclusion The therapy of PEDF gene combined ultrasound mediated microbubble destruction is helpful for increasing the expression of PEDF protein and inhibition of angiogenesis and development of tumor. This method provides an useful gene therapy for treatment of hepatocellular carcinoma.%目的探讨超声靶向微泡介导色素上皮源性因子(PEDF)质粒转染HepG2荷瘤裸鼠的治疗价值.方法建立裸鼠HepG2肝细胞肝癌模型,随机分为5组.Ⅰ组:对照组;Ⅱ:PEDF质粒组;Ⅲ组:PEDF质粒+微泡组;Ⅳ组:微泡+超声辐照组;Ⅴ组:PEDF质粒-微泡+超声辐照组.疗程结束后观察瘤结节的超声造影特征,计算抑瘤率,并检测瘤组织PEDF蛋白表达.应用SPSS软件分析各组间各参数的差异.结果疗程结束后,Ⅴ组瘤结节超声造影增强明显弱于Ⅰ组;Ⅳ组及Ⅴ组抑瘤率明显高于Ⅱ、Ⅲ组;Ⅴ组瘤组织PEDF蛋白表达高于其他各组.结论超声靶向微泡介导PEDF质粒有助于提高质粒转染率,抑制肿瘤血管生成及肿瘤生长,为肝细胞肝癌的治疗提供了一个新的途径.【总页数】4页(P1757-1759,1762)【作者】胡向东;刘婧;王志会;张宏;邱兰燕;钱林学【作者单位】首都医科大学附属北京友谊医院超声科,北京,100050;首都医科大学附属北京友谊医院超声科,北京,100050;首都医科大学附属北京友谊医院超声科,北京,100050;首都医科大学附属北京友谊医院超声科,北京,100050;首都医科大学附属北京友谊医院超声科,北京,100050;首都医科大学附属北京友谊医院超声科,北京,100050【正文语种】中文【相关文献】1.超声微泡造影剂介导PEDF基因转染大鼠视网膜与传统转染比较的实验研究 [J], 廖沁;周希瑗;王志刚2.微泡造影剂联合超声辐照介导的绿色荧光蛋白质粒转染小鼠肝癌的实验研究 [J], 聂芳;徐辉雄;吕明德;汤庆3.超声微泡造影剂介导PEDF质粒转染大鼠视网膜的实验研究 [J], 廖沁;周希瑗;王志刚;李佳4.超声靶向微泡破裂介导EGFP质粒转染肝癌细胞的研究 [J], 刘同刚;沙凯辉;李云华;张立国;刘贤贤5.超声靶向微泡破碎介导EGFP质粒转染肝癌细胞的研究 [J], 张园;朱惠明;李银鹏;张海;王娜;吕锋因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
微泡造影剂结合超声介导绿色荧光蛋白质粒转染大鼠移植静脉的实验研究
c mmo ao i re yvat eisltr l x en 1 u ua en Beo ea at mo i,h en sg n sp tit h ouin o nc r t atr i h p i ea tra g lrv i. f r n so ss t ev i e me twa u n ot es lt s d a e j o
ge e t a s e ton i t a e ou p s g a tng n r n f c i n o r tv n s by as r fi .M eho s Sp a uc ) wl y r t nde we nt r oston by s r fi ft e t d r g -Ia e a s u r nti e p ii pa s g a tng o h
AD . r 2 1 0 0
微 泡 造影 剂结 合 超 声 介 导 绿 色 荧 光 蛋 白质 粒 转 染 大 鼠移 植 静 脉 的 实 验 研 究
张 凯 伦 华 中科 技 大 学 同 济 医 学 院 附 属 协 和 医 院 心脏外科 项 飞 翔 。 声影像科 , 汉 超 武 4 0 3 300 4 0 2 302
第 3 9卷 第 2期 第 2 9页 3 21 0 0年 4月
华 中科 技 大学 学 报 ( 医学 版 )
A c a M e n v S iT e h o u z o g t d U i c c n lH a h n
V (I3 N O 2 P. 2 9 ). 9 . 3
w ih m ir t c obu l sw hih we e a he e ih l s i e ha e e n fu e c ntpr en ( EG FP), le bb e c r d r d w t p a m d n nc d gr e l or s e ot i p pu s d Dop e t a ou plr ulr s nd
超声靶向微泡破碎介导EGFP质粒转染肝癌细胞的研究
结论 U M T D是一种有效的基 因转染方法 , 同的超声转 染参数 对细胞 活力和基 因传输效率有较 大影响 , 不 对其进
行 优 化 后 可减 少 细胞 损 伤 , 强 基 因转 染 。 增
【 关键词 】 超声靶向微泡破 碎 ; 肝癌 细胞 ; 因转染 基
Ulr s u d t r e e c o u b e d sr c in e h n e e e t a se t n i t p c l n vto ta o n a g t d mi r b b l e t u t n a c s g n r n f c i n o He G2 el i i . o o s r Z NG HA
声强、 占空比和辐 照时间作 用下, 察 p G P—N 观 EF 3质粒在 H p 2细胞 中的表 达。荧光显微镜 下观 察绿 色荧光蛋 eG 白在 H p 2细胞 中的表达 , eG 流式细胞仪 检 测 细胞的 转 染率 , T法检 测 细胞 活性 。结 果 MT 在超 声 声强 为 2w/ c 占空比为 2 % 、 m、 0 照射 时间为 6 0S时. p 2细胞的转染率最高 , HeG 达到 ( 15 1.3±2 1 ) , 细胞存 活率 >8 %。 .5 % 且 5
t e ta s ce el ib e Co cu i n UT h rn f t d c l va l . e s n l so MD i n ef cie meh d o e e d l ey,w t p i l c n i o te — s a f t t o fg n e i r e v v i ot h ma o dt n i n i h n e rn fe in e ce c i o t in f a t eld ah a c s t s t f in y w t u g i c n l e t . a e o i h s i c
超声联合白蛋白微泡造影剂介导的基因靶向转染的开题报告
超声联合白蛋白微泡造影剂介导的基因靶向转染的开题报告【摘要】近年来,基因治疗作为一种重要的治疗手段受到了越来越多的关注。
然而,基因转染的低效率和不可控性限制了其在临床上的应用。
因此,寻求更为有效和可控的基因转染技术成为当前研究的热点。
超声联合白蛋白微泡造影剂介导的基因靶向转染是近年来发展起来的一种新型基因转染技术,其利用了超声造影剂和白蛋白微泡的优点,同时结合了基因的靶向转染,从而实现了基因转染的高效和可控。
本文对超声联合白蛋白微泡造影剂介导的基因靶向转染技术的原理、应用特点、研究进展和问题进行了归纳总结,并对其未来的发展趋势和研究方向进行了展望,以期为基因治疗的临床应用提供有益的参考。
【关键词】超声联合白蛋白微泡造影剂;基因转染;靶向转染;效率;可控性【目录】一、研究背景二、研究内容三、研究方法四、研究结果五、实验分析六、结论与展望【正文】一、研究背景基因治疗是指通过向患者体内导入某种基因,以达到治疗特定疾病的目的,其具有针对性强、治疗效果明显、副作用小等优点。
然而,目前基因治疗仍然受到基因转染效率和可控性等问题的限制,因此需要研究更为有效和可控的基因转染技术。
超声联合白蛋白微泡造影剂介导的基因靶向转染技术是一种近年来发展起来的新型基因转染技术。
该技术利用了超声造影剂和白蛋白微泡的优点,同时结合了基因的靶向转染,从而实现了基因转染的高效和可控。
因此,该技术在基因治疗领域具有广阔的应用前景。
二、研究内容本文研究内容主要包括:超声联合白蛋白微泡造影剂介导的基因靶向转染技术的原理、应用特点、研究进展和问题等方面进行归纳总结,并对其未来的发展趋势和研究方向进行展望。
三、研究方法本文采用文献综述法进行研究。
通过检索相关文献,对超声联合白蛋白微泡造影剂介导的基因靶向转染技术的原理、应用特点、研究进展和问题进行梳理,在分析的基础上对该技术的未来发展趋势和研究方向进行展望。
四、研究结果1.超声联合白蛋白微泡造影剂介导的基因靶向转染技术可有效提高基因转染的效率和可控性。
超声联合微泡造影剂辅助肿瘤治疗的研究进展
用 。当一个足够高振 幅 的超声 信号在 液体 中传 播 时 , 声诱 导 超
的空化 现象便 出现 了。受 到声 波 的影 响 , 液体 中 的小气 泡会 经 历生 长、 振荡和破裂 的过 程。空化作用 分为 以下两 种形式 : 低 在 声压 下 , 微泡产生对称性 压缩和膨胀 , 其直径 保持相对 恒定而 不
试图寻找既能准确 杀死肿 瘤 细胞 , 又不 损伤 机体 本身 免疫力 的
一
目前 , 声孔效应在加强 细胞 内药 物、 白以及基 因等其 他不 蛋
易通透 的治疗试剂作 用方 面已经显示 出巨大 的潜能 。因为超 声 在计量 、 定位 以及暴露时间方面可 以进行非侵人性 的控制 , 声 故
种 更先进的治疗方法——靶 向治疗 。近来 研究表 明超声联 合
带的外源性基 因( 目的基 因 ) 定持 久地表达 , 即 稳 但其 携带量有 限、 费用 昂贵且 制备复杂 , 最为重要 的是其安全性 目前 尚无法 控 制, 故其 临床应用 受 到极 大的 限制 。非 病毒 载体 如裸 质粒 、 脂质体等 的优点是免疫原性较低 , 因其 转染效率较低 , 但 在体 内 不 能高水平表达且缺乏靶 向性 , 也不 能广 泛地 推广应用 ¨ 。微 泡造影剂作为一种新型 的基 因载体 , 主要 特点是有效 性、 向 其 靶 性 、 全性 , 安 既可 实现基 因的有效 转染 和定位释放 , 能提高基 又
声暴露导致胞 内钙离子浓度 的改变可能 与超 声介导 的物 质运输 有关系 , 比如心脏 内基 因转染 以及抗 癌药物转 运。然而 , 之前 的 研究显示 了钙离 子的反应 是微 泡存 在下超声作用的结果 , K — 而 u m B等 发现 了细胞 内钙离子 流出细胞 后可 以直 接与微泡相 互 O 作用 。Z o hu等 的研究则表 明 , 细胞 外 的钙 离子 与细胞膜上 声 孔 的闭合有着 密切 的关 系。研 究越来 越深 入 , 希望找 到细胞 膜 的声孔是否 与直 接激 活钙 离子有关 。Fn等” a 使用 了联合 成像
超声靶向微泡破裂介导EGFP质粒转染肝癌细胞的研究
【 摘要】 目的
探讨超声靶 向微泡破裂 ( la ud a e dMe bbl D sutn U M ) Uts n r t i oub erco, T D 介导 E F ro T ge r e t i G P质粒转染肝癌细
体外培养 HeG p 2细胞 , 不同治疗超声 的声强 、 在 占空 比和辐 照时
胞株 HeG p 2的有效性 、 安全性并优化超声辐照参数 。方法
间作用下 , 观察 p G PN E F — 3质粒 在 H p 2细胞中的转 染。荧光显微镜下 观察绿色荧光蛋 白在 H p 2细胞 中的表 达 , eG eG 流式 细胞 仪检测 细胞 的转染率 , T 法 检测 细胞 活性 。结果 在超声声强为 2w e 占空 比为 2 % 、 M Y /m 、 0 照射时 间为 6 时 , eG 0s H p 2细胞的 7转染率最高 , 到 1.3 ±2 1% , 达 15 % . 5 且细胞生存 率大于 8 %。结论 5 UM T D是一种有效 的基 因转染方 法 , 同的超声 转染 不
参数对细胞活力和基 因传输效率有较大影响 , 对其进行优化后可减少细胞损伤 , 增强基 因转染 。
【 关键词】 超声靶向微泡破裂 ; 肝癌细胞 ; 因转染 基 【 中图分类号】 R757 3. 【 文献标识码】 A 【 文章编号 】 1 6 7121 )3 25 3 0 - 6 (02 0- 1- 04 0 0
2 0 2 ( ) 6 5— 5 . 0 8,6 6 :5 6 6
1 Ha Ru s Ko wi ,ta. ATB1rp ga 1 n H Y, soJ, h e 1 S Y e r rmme e ee pe — o sgn x rs
超声微泡造影剂携基因无创性开放血脑屏障的研究进展
综述超声微泡造影剂携基因无创性开放血脑屏障的研究进展刘芳朱家安陈剑由于血脑屏障(blo od bra i n barrier)以及复杂的解剖因素,中枢神经系统疾病的治疗效果往往不甚理想,基因治疗为中枢神经系统疾病提供了一种新的治疗途径。
超声联合微泡介导基因转染是近年来兴起的一种基因转染技术,与传统的基因载体相比,超声微泡造影剂不仅克服了细胞损伤大、免疫原性、细胞毒性和转染率低下的问题,而且能够使血脑屏障可逆性短暂开放,成为中枢神经系统领域研究的一大热点。
一、超声微泡造影剂在中枢神经系统基因转染中的应用具有治疗作用的微泡为内含大分子量气体的球形体,表面包被着一层起稳定作用的物质,如油类、脂质体、蛋白质、多聚体和表面活性剂等[12]。
微泡在液体中的稳定性主要取决于微泡的体积、培养基的温度、气体密度及表面包被物的性质等[2]。
微泡在超声介导下可引起空化作用[3]。
在这一过程中,微泡压缩、膨胀并发生内爆,产生的能量可引起声孔效应,即细胞膜可逆性地对大分子物质开放,大分子可以进入细胞并被细胞捕获[45]。
载有基因的微泡在超声照射下破裂,释放的基因可通过细胞表面的孔道进入靶细胞内,从而发挥治疗作用。
增大声压、延长超声照射时间、降低超声频率以及提高造影剂的浓度均可增强空化作用[67]。
作为一种新型的非病毒基因载体,超声微泡造影剂具有以下优点:(1)可视性:利用声像图和超声组织定位的方法可监控其释放过程和对组织的作用情况,确保定位更加准确[8]。
(2)安全性:超声介导下微泡破裂可使细胞膜通透性发生短暂的、可逆性的改变,对细胞活性影响较小,无细胞毒性和免疫原性,是一种安全、无创的基因载体[910]。
(3)易于制备:与病毒载体相比,微泡制备简便,可以实现大规模的生产。
(4)可逆性开放血脑屏障:研究发现超声介导微泡破裂能够使血脑屏障可逆性地短暂开放,在无创情况下使基因发挥治疗作用成为可能[11]。
为了证实超声微泡造影剂在中枢神经系统基因转染中的应用价值,Tan i ya m a 等[12]将携带绿色荧光素酶的裸质粒DNA 同Optiso n(表面由白蛋白包被的第二代造影剂)共同注射到小鼠脑内,在注射部位进行超声照射。
超声微泡造影剂携基因或药物治疗眼科疾病的研究进展
超声微泡造影剂携基因或药物治疗眼科疾病的研究进展马大卉;黄丽娜;申晓丽【摘要】超声微泡造影剂携带药物和基因的靶向治疗系统是新兴的热门研究领域,目前已经在心血管疾病、肝肿瘤等疾病的靶向治疗方面得到了满意的研究成果,但在眼科的基础研究和临床疾病治疗方面尚处于初始阶段.我们就超声微泡造影剂携药物和基因靶向治疗在眼科基础研究和临床治疗方面的研究现状作一综述.【期刊名称】《国际眼科杂志》【年(卷),期】2012(012)010【总页数】3页(P1904-1906)【关键词】超声微泡造影剂;携基因/药物;靶向治疗;眼科【作者】马大卉;黄丽娜;申晓丽【作者单位】518020,中国广东省深圳市,暨南大学附属深圳眼科医院;518020,中国广东省深圳市,暨南大学附属深圳眼科医院;518020,中国广东省深圳市,暨南大学附属深圳眼科医院【正文语种】中文0 引言近年来,生物和生化技术的发展促进了新剂型和新技术的发展,而超声微泡剂介导的靶向携带基因或药物的系统也随之成为目前研究较为热门的领域之一。
超声与生物体组织的相互作用机制主要有三种:(1)机械效应;(2)热效应;(3)空化效应(cavitation)。
其中的空化效应在超声微泡造影技术中利用最多,它可以明显提高超声微泡所携带基因在体内局部组织细胞的转染和表达[1,2];同时,超声微泡剂也可以携带药物,而且可在超声波的作用下实现药物在靶位的突然释放,迅速达到治疗浓度[3]。
由于微泡在血循环的稳定性好,减少了基因或药物到达靶器官前在体内的破坏。
它已经被广泛运用于临床研究,如肝肿瘤治疗[4,5]、血栓治疗[6]。
近来,可携带基因和药物的超声微泡造影剂在眼科的基础研究和眼科临床疾病的治疗方面也展示了广阔的前景,我们就这一领域的研究进展做综述。
1 角膜方面的研究角膜是眼球的重要组成部分,是眼光学系统中重要的一环。
角膜疾病是致盲的主要原因之一,保持角膜的透明则是角膜疾病治疗首要解决的问题。
一种新型基因载体—纳米级超声微泡的制备及其介导PNPFludarabine自杀基因系统治疗肝癌的实验研究
一种新型基因载体—纳米级超声微泡的制备及其介导PNP/Fludarabine自杀基因系统治疗肝癌的实验研究基因载体是基因治疗的关键之一。
基因载体主要分为病毒载体和非病毒载体。
病毒载体的基因转染率相对较高,但其安全性及机体对病毒的免疫反应是一个大难题;以脂质体为代表的非病毒载体较低的转染效率一定程度上影响了基因治疗的效果。
超声微泡造影剂介导基因转运系统因其安全、高效和直接靶向性成为近年发展起来的新研究热点,其独特优点和发展潜力已被越来越多的研究者所证实。
目前的超声造影剂微泡平均直径为数微米,但研究表明疾病状态中的血管内皮间隙至多允许直径小于700nm的颗粒穿过,因此微米级微泡不能穿透血管内皮间隙,大大减弱了其基因转运的能力。
纳米技术的飞速发展为纳米级超声微泡介导基因治疗提供了理论基础。
近年来肝癌的基因治疗成为生物科学和临床医学的研究热点之一,其中作用直接、合理、有效的自杀基因疗法备受关注。
PNP/Fludarabine是一种新型的自杀基因系统,它的杀伤效应是目前为止各系统中最强的,其杀伤肿瘤的机制主要是能从多个环节杀伤肿瘤细胞,不论是对分裂期还是静止期的肿瘤细胞都具有强大的杀伤效应。
而其前药经系统作用后的毒性产物可以穿过脂质膜,杀伤临近细胞,旁观者效应强大。
[目的]本研究旨在研制一种直径<700nm的纳米级超声微泡;以GFP 为目的基因、以超声介导纳米级超声微泡检测体外基因转染效率及相对表达量来验证其作为新型基因载体的可行性;自行构建自杀基因表达质粒pcDNA3.1(+)/PNP,以纳米级超声微泡作为基因载体介导PNP/Fludarabine自杀基因系统,探讨其对肝癌的治疗效果以及该系统的作用机理,为超声介导纳米级超声微泡系统未来能作为临床基因治疗手段提供实验基础。
[方法]1、选择DPPC、DPPA混合磷脂以及全氟丙烷气体等材料采用高剪切分散法进行纳米级超声微泡的研制,并通过均匀设计法选择最优制备方法。
超声微泡造影剂介导pegfp-n1质粒转染hgfs的实验研究
超声微泡造影剂介导pEGFP-N1质粒转染HGFs的实验研究骆书美,张云燕,钟晓波﹡,仲琳【摘要】目的探讨超声破坏微泡介导pEGFP-N1质粒转染人牙龈成纤维细胞的可行性、优化转染的条件及转染效率。
方法体外原代培养HGFs。
以pEGFP-N1质粒为报告基因,微泡造影剂为载体,用超声辐照介导质粒pEGFP-N1转染HGFs。
实验组分为质粒组、微泡+质粒组、超声+质粒组、超声+微泡+质粒组,超声+微泡+质粒组按不同的转染条件分成亚组对照组为空白对照。
转染48 h后倒置荧光显微镜下观察GFP的表达,MTT法检测HGFs活性。
结果超声微泡介导pEGFP-N1质粒对HGFs的转染效率明显高于其他实验组。
优化转染条件后,频率300KHZ,声强1.5w/cm2,连续波,辐照时间60s,微泡浓度10%,质粒浓度6.67ug/ml时,转染率较高。
结论在一定条件下,超声/微泡造影剂能够促进外源基因对HGFs 的转染。
【关键词】超声;微泡造影剂;人牙龈成纤维细胞;基因转染[中图分类号] [文献标识码]Ultrasound-mediated microbubble destruction enhances GFP gene expression in human gingival fibroblasts cell in vitroLuo Shu-Mei1,Zhang Yun-Yan1, Zhong Xiao-Bo1 ﹡(1.Department of conservative dentistry and endodonties, Chongqing University of Medical Sciences affiliated stomatology hospital 400015;Institute of life sciences,Chongqing Medical University,Chongqing 400016,China)【Abstract】Objective:To investigate whether ultrasound-mediated microbubble destruction could effectively deliver pEGFP-N1 plasmid to human gingival fibroblasts.Methods:The primary cultured human gingival fibroblasts were divided into five groups. pEGFP-N1 plasmid was transfected to HGFs as a gene marker with ultrasound-mediated microbubble destruction. Experiment groups include naked plasmid, microbubble+plasmid, ultrasound+plasmid, and ultrasound+ microbubble+plasmid.Based on different conditions of transfection, the last experiment group was divided further into sub groups.Control group was blank. After 48 hours, phase-contrast fluorescent microscopy was employed to evaluate the expression of green fluorescent protein(GFP).The cell vitality was measured by the MTT assay. Results: The transfection efficiency of the fourth group was higher than other experiment groups. Optimal gene expression occurred with ultrasound parameter at 1.5 w/cm2 for 60s, microbubble at the concentration of 10% and plasmid at the concentration of 6.67 ug/ml, the transfection efficiency is higher.Conclusions:Under specific conditions, ultrasound mediated microbubble destruction method can enhance the reporter gene transfection and expression.【Keywords】Ultrasound;Microbubbles; Human gingivalt fibroblasts; Gene transfection重庆医科大学附属口腔医院牙体牙髓科,重庆400015;通讯作者:钟晓波. 单位:重庆医科大学口腔医院牙体牙髓科。
微泡造影剂及超声促进绿色荧光蛋白质粒在人肝癌细胞HepG2内表达的实验研究
【 bta t A s c】Obet e t i et a hte u rsu da dmi ou becnrsaet oo u o l i poegu as ci t r jc v o n sgt w e r haon n c bb l ot t gn n V ecud m r e et nf t ni o i v i e h r a S v r e o n
f u t r u . n l t n U r s u d a d mir b b l o ta t g n a mp o e ta se t n ef in y wi i o o n o h p t a cn ma o rh go p Co cu i h a o n n c o u b e e n r s a e tc n i r v rn f ci f ce c t l s me it e a i c r i o o o i h p c
【 关键词 】 微泡造Ulr s u d a d mi r b b l o t a ta e t i r v d p t a o n n c o u b e c n r s g n mp o e EGF P- r n f c i n i t el He G2 i i o e p rme t s u y N1 t a se t n o c l o p : n vt x e i n t d r Z HE n , ANG W e — i g Z NG Yi g W n p n , HAO P n , ig ZHAO Yi w n e a t n fUl a o n , h n s a p i l fF d n Unv r i S a g a — e D p r me t t s u d Z o g h n Ho s a u a ie st h n h i o r t o y
评价超声联合白蛋白微泡造影剂实现基因转染靶向性的研究
La , Xi in h n o Yi uJa c e g, Hu n h o, e l a gS a ta
De r m e pa t ntofCar o o dil gy, N a an nf g Hos t l Dep r m e tofPa hop pia , a t n t hysol i ogy, Sc olofBa i ho sc M e c lSce e dia inc s, Sou h r e ia nie st t e n M dc lU v r iy, G u ngz a hou 5 5 Chi 05 1 1 na
ot r or an z to he g ia i ns ( < 0. P 05) . A s a l m o m l a unt gr e fu e e e of e n l or sc nc was i a ie i lv r nd vsu lz d n ie a ki e The dn y. fu e c n nt n iy i ie s f r tm e ha n ki l or s e t i e s t n lv r wa ou i s oft ti nne ( < O. ) . p cfc g e n fu e c n e wa e n i y P 05 No s e ii r e l or s e c s s e n m y c r a is o a dilts ueCon l sons I r v n c u i nt a e ous a he in ofpa m i ir d so ls d m c obub e c ntas ge nd sm u t ne bl o r ta nta i la ousy w ih l t
劳翼 修 建 成 黄劭 陈 向辉 宾 建 平 查道 刚 刘伊 丽
超声介导脂膜微泡靶向传输绿色荧光蛋白基因的体内实验研究
摘 要
目的 探 讨 超 声 ( )对 裸 鼠人 宫 颈 癌 ( l) 皮 下 移 植 瘤 绿 色 荧 光 蛋 白 ( GF uS Hea E P)基 因 传 输 和 定 位 的 作 用 以 及 脂 膜 微 泡 (s L MB)对 转 染 的增 强 作 用 。 方法 将 L MB和 质 粒 经 裸 鼠尾 静 脉 注 入 ,并 予 以超 声 辐 照 ( s S L MB+Us ,辐 照 条 件 为 : . /m 0 占空 比 ,2mi, ) 2 0W c ,2 n
Che n Zhi i y ,Xi i gxi eM n n,W a g Xi f n n n a g, e l ta De at n fUlr s n g a h p rme to tao o rp y,Uno s ia ,To gi e ia l g in Ho pt l n j M dc lCol e,Hu z o g Unv riyo ce c n e ah n iest fS in ea d
结论
超 声 辐 照 联 合 L MB 和 质 粒 注 射 的方 法 能 显 著 增 加 裸 鼠 移植 瘤 的 基 因 转 染 ,而无 明 显 的 副 作 用 , 一 种 高效 的非 病 毒 S 是
基 因传 输 方 法 ,为 目前 的基 因 治 疗 提 供 新 思 路 。
关 键 词
超声 基 因传 输 微泡 转染 非 病 毒 载 体
Te h o o y, Hu e o i c y La o a o y o o e u a m a i g, W u a 4 0 2 Ch n c n lg bi Pr v n e Ke b r t r fM lc l rI g n hn 302 ia
超声联合造影剂介导EGFP质粒转染肝细胞的初步探讨
超声联合造影剂介导EGFP质粒转染肝细胞的初步探讨发表时间:2013-07-24T15:26:26.890Z 来源:《医药前沿》2013年第15期供稿作者:李鸯1 徐晓红2 [导读] 超声辐照能使微泡聚集于某一特定的组织,使治疗物质靶向浓聚,有效地提高转染效率李鸯1 徐晓红2(1广州市中医医院超声科广东广州 510130)(2广东医学院附属医院超声科广东湛江 524001)【摘要】目的评价低频超声辐照造影剂SonoVue对增强型绿色荧光蛋白(EGFP) 质粒在大鼠肝卵圆细胞增殖模型肝脏中表达的作用。
方法造模成功雄性SD大鼠45只,随机分为5组,每组又分为3个亚组,每组3只,分别在1、3、7天麻醉处死取材,制作肝组织冰冻切片后立即在荧光显微镜下观察,采用Image Pro Plus软件计算转染效率。
结果 A组、B组、C组切片中均可见少量散在的绿色荧光表达,D组、E 组均可见较多绿色荧光蛋白表达,荧光强度增强,各组均在第3天表达最强;在第1、3、7天,A组、B组、C组之间差异统计均无统计学意义(P>0.05);D组、E组在3个时间点上与其他组之间差异统计均有统计学意义(P<0.05)。
结论超声造影剂在低频超声照射下可以促进EGFP质粒在大鼠肝卵圆细胞增殖模型肝脏的转染,通过门静脉注射组(E组)转染效率高于其它组。
【关键词】超声造影剂基因转染【中图分类号】R730.4 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752(2013)15-0071-02 超声造影剂可增强超声空化效应,导致细胞膜通透性增加。
超声辐照能使微泡聚集于某一特定的组织,使治疗物质靶向浓聚,有效地提高转染效率[1][2]。
增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP)作为一种新型的报告基因,已广泛用于转染细胞的确定、体内基因表达的测定和蛋白质分子的定位。
本文选择EGFP基因为标记基因,应用UTMD技术转染肝细胞,并比较经尾静脉和经门静脉不同注射途径的转染效率,以激光扫描共聚焦显微镜观察肝细胞的转染效率。
超声微泡造影剂携绿色荧光蛋白质粒转染大鼠股骨头的研究
The Study of Ultrasound-Targeted Microbubble Applied for Transfection of Green Fluorescent Protein Plasmid into the Femoral Head of Rats 作者: 陈磊[1];张莉[1]
作者机构: [1]齐鲁医药学院临床医学院,山东淄博255300
出版物刊名: 韶关学院学报
页码: 57-60页
年卷期: 2019年 第3期
主题词: 超声微泡造影剂;绿色荧光蛋白质粒;转染;股骨头
摘要:以SD大鼠为实验对象,研究超声微泡造影剂携绿色荧光蛋白质粒转染股骨头的可行性和安全性.分组实验后发现各组大鼠大体形态状况以及HE染色观察未发现骨组织损伤;应用超声微泡造影剂为载体的大鼠股骨头,绿色荧光蛋白质粒表达高于其他各组.故认为超声微泡造影剂携绿色荧光蛋白质粒转染大鼠股骨头组织是安全和可行的.。
微泡造影剂结合超声介导绿色荧光蛋白质粒转染大鼠移植静脉的实验研究
微泡造影剂结合超声介导绿色荧光蛋白质粒转染大鼠移植静脉的实验研究胡敏;张凯伦;项飞翔【摘要】目的探讨微泡造影剂及超声辐照介导基因转染移植静脉桥的可行性.方法建立SD大鼠颈外静脉颈总动脉旁路移植模型,选择增强型绿色荧光蛋白质粒(pEGFP)为报告基因.将大鼠颈外静脉段浸泡入粘附质粒的微泡中,予超声照射,再将静脉段间置植入颈总动脉,7 d后,取出静脉段行快速冰冻切片,荧光显微镜下观察血管平滑肌内荧光表达,同时进行苏木精-伊红染色行病理观察.结果微泡造影剂结合超声辐照组的荧光强度显著高于质粒浸泡+超声辐照组、质粒+微泡造影剂组及单纯质粒浸泡组(P<0.05).苏木精-伊红染色观察血管组织并无坏死灶出现.结论微泡造影剂结合超声辐照可以实现基因靶向转染至大鼠移植静脉桥的血管平滑肌中.【期刊名称】《华中科技大学学报(医学版)》【年(卷),期】2010(039)002【总页数】4页(P239-242)【关键词】超声波;微泡造影剂;基因转染;静脉桥【作者】胡敏;张凯伦;项飞翔【作者单位】华中科技大学同济医学院附属协和医院心脏外科,武汉,430022;华中科技大学同济医学院附属同济医院心胸外科,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属协和医院心脏外科,武汉,430022;华中科技大学同济医学院附属协和医院超声影像科,武汉,430022【正文语种】中文【中图分类】R319.2静脉桥再狭窄是影响冠状动脉旁路移植(coronary artery bypass graft,CABG)术后远期疗效的主要因素。
目前研究表明,血管平滑肌细胞的增殖、移行是血管再塑和重排,并最终导致移植静脉再狭窄或闭塞的细胞学基础[1]。
基因治疗作为一种在分子水平干扰和纠正疾病的治疗手段,在移植静脉桥再狭窄的防治上有良好的应用前景。
研究表明超声辐照结合微泡造影剂可促进裸质粒进入细胞中[2-3]。
本研究运用微泡造影剂结合超声辐照介导增强型绿色荧光蛋白质粒(pEGFP)转染移植静脉,探讨该方法的有效性、可行性,为临床预防CABG术后再狭窄的基因治疗提供新的思路。
超声微泡造影剂促进GFP质粒转染卵巢癌细胞的实验研究
超声微泡造影剂促进GFP质粒转染卵巢癌细胞的实验研究王斌;贾新秋;赵岐刚;傅庆诏【期刊名称】《现代妇产科进展》【年(卷),期】2007(16)10【摘要】目的:探讨超声微泡造影剂促进GFP质粒转染卵巢癌(SKOV3)细胞的有效性。
方法:将SKOV3细胞分为3组:第1组为脂质体组,加入脂质体和GFP质粒;第2组为超声单独作用转化组,加入脂质体、GFP质粒并以一定能量的超声分别辐照30s、60s和5min;第3组为超声介导造影剂组,加入脂质体、质粒和微泡,并用相同能量的超声分别照射30s、60s、5min,每一时间脂质体浓度分别采用2、5和10μl/ml。
转染24—48h后用荧光显微镜、流式细胞仪评价GFP转染率。
结果:用超声触发破坏微泡促进GFP质粒转染SKOV3细胞,其转染效率明显高于其他两组;其中脂质体5μl/ml超声照射60s组转染效率最高。
结论:利用低频率和一定能量的超声击碎微泡造影剂能有效地提高GFP质粒在SKOV3细胞中的转染效率。
【总页数】4页(P733-735)【关键词】超声;微泡造影剂;基因疗法;卵巢肿瘤【作者】王斌;贾新秋;赵岐刚;傅庆诏【作者单位】山东大学齐鲁医院妇产科;聊城市人民医院妇产科【正文语种】中文【中图分类】R737.33【相关文献】1.自制脂质微泡联合超声辐照介导pGL3-Promoter-EGFP质粒转染卵巢癌细胞的实验研究 [J], 朱元方;胡丽娜;李攀;王志刚2.比较不同频率低频超声联合微泡促进脂质体介导的pEGFP质粒转染人前列腺癌细胞的实验研究 [J], 张蔚;白文坤;寿文德;王玉;陈旖旎;杨雨;胡兵3.超声微泡造影剂促进GFP质粒转染喉癌细胞的效果 [J], 郝亚宁;骆文龙4.超声微泡造影剂促进GFP质粒转染喉癌细胞的效果 [J], 郝亚宁; 骆文龙5.微泡造影剂及超声促进绿色荧光蛋白质粒在人肝癌细胞HepG2内表达的实验研究 [J], 郑颖;王文平;赵平;赵奕文因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
低频超声联合微泡造影剂增强脂质体介导pEGFP-N1基因转染体外前列腺癌细胞
低频超声联合微泡造影剂增强脂质体介导pEGFP-N1基因转染体外前列腺癌细胞吴作辉;白文坤;张吉臻;胡兵【期刊名称】《中国医学影像技术》【年(卷),期】2012(028)008【摘要】目的探讨低频超声联合微泡造影剂增强脂质体介导增强型绿色荧光蛋白质粒(pEGFP-N1)转染前列腺癌细胞的可行性,并对超声微泡浓度参数进行优化.方法将前列腺癌PC-3细胞悬液分为空白对照组、超声组、微泡组、微泡+超声组、脂质体组、脂质体+微泡组、脂质体+超声组、脂质体+微泡+超声组,其中脂质体+微泡+超声组根据微泡体积浓度不同分为(0、10%、20%、30%、40%和50%)6个亚组.经超声辐照,24 h后用荧光显微镜观察细胞中基因表达情况,并用流式细胞仪检测转染率.结果脂质体+微泡+超声组基因转染效率最高,与其他组比较差异均有统计学意义( P均<0.05);在脂质体+微泡+超声亚组中,微泡浓度为20%亚组基因转染率最高.结论低频超声联合微泡能有效增强脂质体介导pEGFP-N1基因在体外前列腺癌细胞中的转染率,20%是体外基因转染前列腺癌细胞的最佳微泡浓度.【总页数】5页(P1460-1464)【作者】吴作辉;白文坤;张吉臻;胡兵【作者单位】上海交通大学附属第六人民医院超声医学科,上海200233;遵义医学院附属医院超声科,贵州遵义563003;上海交通大学附属第六人民医院超声医学科,上海200233;上海交通大学附属第六人民医院超声医学科,上海200233;上海交通大学附属第六人民医院超声医学科,上海200233【正文语种】中文【中图分类】R445.1;Q782.4【相关文献】1.超声辐照SonoVue增强脂质体介导pEGFP-N1转染乳腺癌细胞 [J], 张时君;李凤华;杜晶2.比较不同频率低频超声联合微泡促进脂质体介导的pEGFP质粒转染人前列腺癌细胞的实验研究 [J], 张蔚;白文坤;寿文德;王玉;陈旖旎;杨雨;胡兵3.低频超声联合微泡增强脂质体介导Rac1-shRNA质粒转染前列腺癌细胞及对其生物学行为的影响 [J], 林艳端;胡兵;申锷4.超声靶向微泡破坏联合脂质体介导pSilencer 3.1-SATB1基因转染前列腺癌细胞效果观察 [J], 张娟娟;陈英红;林旭红5.寻找基因转染人脂肪来源的成体干细胞合适载体:脂质体介导质粒pEGFP-N1、重组腺病毒Ad5-EGFP与重组腺相关病毒rAAV-2/1-EGFP [J], 靳小兵;孙永生;娄思权;张克因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
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微 泡造 影 剂联 合 超 声 辐 照介 导 的绿 色 荧 光 蛋 白质粒
转 染 小 鼠 肝 癌 的 实 验 研 究
聂 芳 徐 辉 雄 吕 明 德 汤 庆
摘 要
目的 探讨 微 泡 造 影 剂 S n Vu 联 合 超声 辐 照 在 介 导 体 内基 因 转 染 中 的作 用 。 oo e 方 法 建 立 小 鼠肝 癌 皮 下 移 植 瘤 模 型 ,尾 静 脉 注 入 绿 色 荧 光 蛋 白质 粒 (E F ) p G P ,添加 或 不 添 加 s n Vu , 冲多 普 勒 超 声 辐 oo e 脉 照 ( H ,2w /r2 1M c )瘤 组 织 。持 续 时 间 1 、1 i,7d后 流式 细胞 仪 、荧 光 显 微 镜 评 价 p G P转 染 率 。HE染 色行 肿 瘤 病 n 、5 0r n a E F
Ni ng, Xu H u xi g, Lu M i g e Fa i on n de, e l ta
De r m e tofM e c lU lr s is, FistAf iit d Hospia , Su Y a — en U n v r iy, G ua z u 5 00 Chi pa t n dia t a on c r fla e i tl n t S i e st ng ho 1 80 na
Abs r c Ob e t e Toiv sia et ee fc fmir b b l o ta ta e t lsuta o n x o u eo e e t a t: jci v n e tg t h fe to co u bec n rs g n u lr s u de p s r ng n p ta se to n vv . eh d Th d lo e ai c rio n miewe ee t bih d b ne t g h p l 6 c l r n f cin i io M t o s e mo e fh p tc a cn ma i c r sa l e y iici e a 一 el s n s s b u a e u l. ls d e h n e re lo e c n r ti ( EGF u c tn o sy Pa mi n a cd g e n fu r se tp o en p P)wa ne td it h alv i t rwi o t sijce n o t eti en wi o t u h h
差异 ( P> O 0 ) . 5 。HE染 色 肿 瘤 组 织 无 坏 死 辐 照 可 明 显 提 高 基 因 转 染 率 ,且 对 组 织 无 损 害 。
关键 词
微 泡造影剂 超声 基因转染 肝 癌
Ef e t o i r ub l - nh nc d U l r s un f c f M c ob b e e a e t a o d Ex o u e o p s r n
c mb n d wi o o e t a h t i r u lr s u d e p s d o l ( o i e t S n Vu h n t a n g o p u t a o n x o e n y P< O 0 ) . e e p e so fp h .1 Th x r s i n o EGF x o e P e p sd
S n Vu o o e,P le p lrutao n su e ( Hz 2W / m o 。5a d l n ts Th x rs ino us d Do pe lr s u d wa sd 1M , c )fr1 n 0miu e . ee p e so fEGF P
i h at a cnom a e l n ep oc r i c l wa e m i d y l s xa ne b fow yt e r d fuor s en e ir s o c om t y an l e c c m c o c py, a h u or ts u a nd t e t m is e w s ob e v d w ih H E t i s r e t s an.Re uls T he tan f c i fiinc s t r s e ton e fce y ofpEG FP a i iia l ghe n gr p ulr s w s sgn fc nty hi ri ou ta oun d
理学检查 。
结果
S n Vu o o e联 合 超 声 辐 照 组 p GF 的转 染率 显 著 高 于 单 纯 超 声 辐 照 组 ( o 0 ) E P P< . 1 ;仅 S n Vu o o e与单
p GF E P2组 间 转
染 率 无 显 著差 异 ( > o0 ) P . 5 ;辐 照 时 间 5 0ri p G P表 达 明 显 高 于 1ri ( O 0 ) 5与 1 i 间 p G P表 达 无 显 著 、1 n时 E F a n P< . 5 。 a 0r n组 a E F
G e a s e to f G r e u e c ntPr t i a m i n H e at c Iul r Ca c n ne Tr n f c i n o e n Fl or s e o e n Pi s d i p o e I a r i om a: Ex e i e t lSt d p r m n a u y