FISH技术临床应用

FISH技术的临床应用
• FISH在血液及淋巴肿瘤中的应用 • FISH技术在产前诊断中的应用 • FISH在泌尿系肿瘤中的应用 • FISH技术在宫颈癌检测中的应用 • 其它
FISH在血液及淋巴肿瘤中的应用
赵荣 血象 （CML）
赵荣 骨髓象(CML)
覃长江血象 (MD/MPD)
覃长江骨髓象 (MD/MPD)
• 检测这一基因扩增的标准方法即为FISH技术
GLPTERC/CSP3阴性
GLPTERC/CSP3阳性
谢谢!
BCR/ABL阳性 (图片来自赵荣) CML
BCR/ABL阴性 (图片来自覃长江) MD/MPD
陆晓逸骨髓象（CLL）
D13S25/P53基因阴性 （来自陆晓逸）
CSP12基因阴性 （来自陆晓逸）
PMwenku.baidu.com/RARa阴性 (图片来自彭志新)
PML/RARa阳性 (图片来自卜丽敏)
• 破坏细胞膜利于探针 • 制备的质量 • 新鲜程度 杂交。 • 蛋白酶消化、HCl处理
制片
预处理
• 变性 结果分析 FISH • 杂交
• 洗涤
• 复染
操作流程简图
结
果
判
断
标本为新鲜细胞制片： 阈值建立 • 采集20例正常人细胞。 • 阈值测定：每例分析至少100个细胞，统计出现2个以上阳性信号细胞 数目的百分比。 阈值= 平均数（M）+ 3X标准差（SD） 结果判断 • 每例样本随机计数细胞（至少100个） • 如果检测值>阈值，判定为阳性结果； • 如果检测值<阈值，判定为阴性结果； • 如果检测值=阈值，加大观测样本细胞数目。
GLP13/GLP21阴性
13+
21+
FISH在泌尿系肿瘤中的应用
概
• • • •
述
常用诊断及监测膀胱癌 膀胱镜检查：病人痛苦，难以接受 细胞形态学检测：敏感性低 尿液中抗原检测：虽灵敏性高于细胞形态 学检测，但特异性较低，不能成为可靠的 诊断指标。
概
述
FISH检测： 9号染色体部分（如p16位点）或全部丢失。 3号、7号及17号染色体的非整倍性。 膀胱癌的灵敏度大约 80%, 特异性大约 96% 非创伤性及非痛苦性
84-100
FISH
90
90
宫颈癌 & TERC基因
• TERC（人类染色体末端酶 ）基因定位在3q26.3 ，该基因 的扩增可阻止细胞凋亡，导致肿瘤产生
• 宫颈细胞由非典型性发育异常向宫颈癌转变的过程中几乎 都伴有3号染色体长臂扩增。其中，涉及到的最重要的基 因可能是TERC基因。该基因扩增能准确区分宫颈细胞高度 癌前病变与低度癌前发育异常，鉴别诊断的敏感性及特异 性均在90%以上；同时，这一扩增也能预测52%－96%的癌 前病变有恶变的可能 • hTERC基因扩增的检测极有助于宫颈癌的筛查及早期诊断
FISH技术的临床应用
中南大学湘雅医院血研室
荧光原位杂交（Fluorescence in situ Hybridization，FISH） 生命科学中的“钓鱼” 技术
基本原理：应用荧光染料标记探针DNA，变性成 单链后与变性后的染色体或细胞核靶DNA杂交， 在荧光显微镜下观察并记录结果。
操作流程简图
膀胱癌FISH 探针组(二)
疾病 名称
检测探 针
标记颜 色
探针定位 CSP7: 7p11.1-
探针名称
患者中常见 异常类型
CSP 7/CSP3 膀胱 癌
红/绿
q11.1
CSP 3: 3p11.1q11.1
3 、7号染色 体着丝粒
3、7号染色 体非整倍性
临床意义 膀胱癌的发展与染色体不稳定性紧密相连，特别是与3号、7号 及17号染色体的非整倍性密切相关。3、7、17 染色体的不稳定 性与肿瘤的浸润行为有关 ，3，7，17改变在病程发展中出现。
• 活产新生儿发病率为1 /800 to 1 /1,100 , 唐氏综合症与文化、种族、 社会阶层以及地理区域都没有必然的联系。 • 智能较正常儿童低，认知困难，发育迟缓。他们也有很特殊的面貌， 通常双眼距离较远、眼睛向上斜、鼻梁骨平坦，嘴、牙齿及耳朵均细 小。肌张力低。
Turner 综合症
• 1个x染色体的全部或者部 分丢失 ，只发生在女性。 • 是最常见的染色体异常导 致的疾病 ( 活产女性新生 儿发病率大约为 1 / 2500 ) • 身材矮小、卵巢不发育、 性幼稚、 蹼颈、 肾脏和 甲状腺有问题, 骨骼畸形 等 • 生长激素治疗, 雌激素替 代治疗等
临床意义 随着对膀胱癌遗传学改变的深入研究，人们发现9号染色体部 分（如p16位点）或全部丢失是最常见遗传学改变，且这一改变与 膀胱癌的早期发生密切相关。P16为抑癌基因，通过CDK4对细胞增 殖分裂起负调控作用，CDK4与cyclin D形成复合物促进细胞从G1-S 转换，促进细胞有丝分裂，P16基因异常在膀胱癌发生早期出现.
卜丽敏骨髓象
FISH技术在产前诊断中的应用
染色体异常的发生机率
• 出生婴儿 – 先天性智力障碍（MR）患者 – 先天性心脏病 • SAB 夫妇 • 死胎和 围产期死亡胎儿 • 自然流产 (前三个月) 0.6% 23% 13% 5% 6.0% 60%
唐氏综合症
• 21号染色体三体, 95-97% 多余的染色体来自母亲, 唐氏综合症与母亲 的年龄有关系, 确切的病因不是很了解.
膀胱癌FISH 探针组(一)
疾病 名称 检测探针 GLP P16/CSP 17 膀胱癌 标记颜 色 探针定位 探针名称 患者中常见 异常类型
红/绿
P16：细胞周期 P16：9p21 蛋白依赖性激 P16缺失； CSP17:17p11. 酶抑制因子2A 17号染色体 CSP17:17号染 1-q11.1 非整倍性 色体着丝粒
CSP 7/CSP3阴性
CSP7/CSP3阳性
FISH技术在宫颈癌检测中的应用
临床检测方法
• 传统巴氏细胞学涂片&液基薄层细胞检测(TCT） • HPV病毒检测 • 荧光原位杂交（FISH）检测
三种检测方法比较
方 法 特异性（％） 90 敏感性（％） 55-80
形态学检测
HPV检测
64－95