HER2检测试剂盒(免疫组化法)说明书-Agilent
HER2基因扩增检测试剂盒说明书
HER2基因扩增检测试剂盒（荧光原位杂交法）
说明书
【产品名称】
通用名称：HER2基因扩增检测试剂盒（荧光原位杂交法）
英文名称：Zyto Light SPEC HER2/CEN17 Dual Color Probe Kit
【包装规格】
货号Z-2020-5：5测试/盒
货号Z-2020-20：20测试/盒
【预期用途】
本试剂盒用于检测经10%中性缓冲福尔马林固定、石
蜡包埋的乳腺癌组织切片中HER2基因的扩增状态。
本试剂盒尤其适用于免疫组织化学HER2（ERBB2）蛋
白检测结果为不确定的标本的检测。
HER2基因扩增是确定靶向治疗适应症的重要指标，基于本试剂盒未与具体药物联合进行临床评价，临床医生应在本检测结果基础上结合患者病情、药物适应症、治疗反应及其他检测结果对患者的个体化治疗进行综合判断。
【检验原理】
荧光原位杂交技术（Fluorescent In Situ Hybridization, FISH）是一种以荧光标记的核酸探针与组织中的特异核酸
分子进行杂交的技术，其基本原理是利用荧光标记的核酸
探针在变性后根据碱基互补配对原则准确识别待检样本中
的靶核酸序列，经退火复性后形成靶DNA与核酸探针杂交体，通过荧光检测系统（荧光显微镜）直接观察和分析染
色体或基因的数量或结构的状态。
本试剂盒内HER2/CEN17双色探针液（以下简称为探针）设计序列来源图见图1和图2。将样本经福尔马林固定、石蜡包埋后制成4±1μm厚度的切片，固定于粘性玻片上。切片经预处理后，将HER2/CEN 17双色探针液与待测样本DNA变性、杂交。杂交完成后，通过一系列洗涤缓冲液洗去未结合探针，并用DAPI（4，6-二咪基-2-联苯基吲哚）对样本中的细胞核复染成蓝色。DAPI是一种蓝色荧光素，为DNA特异性染色剂。探针杂交信号可通过配置相应滤光片的荧光显微镜进行观察。在显微镜下观察细胞核内的荧光信号，对HER2基因（绿色荧光染料ZyGreen：激发波503nm，发射波528nm，同FITC）和CEN17着丝粒（橙红色荧光染料ZyOrange：激发波546nm，发射波572nm，同罗丹明）信号进行计数，计算比值（HER2/CEN17），从而判断HER2基因状态。
HER2检测试剂盒(免疫组化法)说明书-Agilent
外。该试剂盒所提供的材料足够用于最多 10 次免疫组化染色。
数量
说明
1×22 mL
过氧化物酶阻断剂。 3%的过氧化氢，含有15 mmol/L的叠氮钠（NaN3）。
1×12 mL
1×22 mL
兔抗人HER2多克隆抗体。 即用型亲和分离的抗体,保存在0.05 mol/L Tris/HCl, 0.1 mol/L NaCl, 1%BSA, 酒 石黄(Tartrazin), 专利蓝V(Patentblue V), 15 mmol/L NaN3, pH 7.2溶液中。 免疫原：合成的HER2蛋白的C-末端（细胞质部分）片段部分，并偶联至血蓝蛋 白上。
2.试剂配制： 在染色前可以很方便地制备相应的试剂： 抗原修复液 用蒸馏水或去离子水按照1：10的比例配制足够的抗原修复液，用于既定的染色过程。
未使用的稀释后的溶液，室温下存放效期为1周，2-8ºC条件下存放效期为1个月。若溶液变 浑浊，应丢弃。更详细的资料请参阅Dako公司的Automated Link Platform用户指南。
化学发光免疫分析法HER-2测定试剂盒的初步临床评价
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｅｑｕｉｖａｌｅｎｃｅ ｏｆ ＨＥＲ２ ｔｅｓｔ ｋｉｔ（Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ，ＳｈｅｎｚｈｅｎＮｅｗ ＩｎｄｕｓｔｒｙＢｉｏｍｅｄｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＣｏ．，Ｌｔｄ．）ａｎｄＨＥＲ２／ｎｅｕｐｒｏｔｅｉｎｔｅｓｔｋｉｔ （Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ，Ｓｉｅｍｅｎｓ）．ＭｅｔｈｏｄｓＴｗｏｒｅａｇｅｎｔｓｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｓａｍｐｌｅｓｂｙｐａｒａｌｌｅｌ ｂｌｉｎｄｍｅｔｈｏｄ．Ｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｒｅｓｕｌｔｓ，ｏｕｔｌｉｅｒｔｅｓｔ，ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓ，ＢｌａｎｄＡｌｔｍａｎｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙ ａｎａｌｙｓｉｓ，ｅｘｐｅｃｔｅｄｂｉａｓａｎａｌｙｓｉｓａｔｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆｍｅｄｉｃａｌｄｅｃｉｓｉｏｎａｎｄｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙａｎａｌｙｓｉｓｏｆｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅｒｅｓｕｌｔｓ ｗｅｒｅｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｆｏｒｂｏｔｈｒｅｆｅｒｅｎｃｅｐｒｏｄｕｃｔｓａｎｄｔｅｓｔｐｒｏｄｕｃｔｓ．ＲｅｓｕｌｔｓＡ ｔｏｔａｌｏｆ３６０ｃｌｉｎｉｃａｌｆｅｍａｌｅｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄｆｏｒｔｈｅｓｔｕｄｙ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆ３５５ｓａｍｐｌｅｓｉｎｃｌｕｄｅｄｉｎｔｈｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓｗｅｒｅｔｅｓｔｅｄｂｙｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄｏｆｏｕｔｌｉｅｒｔｅｓｔ，ａｎｄｎｏｏｕｔｌｉｅｒｗａｓｆｏｕｎｄ．Ｌｉｎｅａｒｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎｅｑｕａｔｉｏｎｗａｓｄｅｖｅｌｏｐａｓ：Ｙ＝０．９７５８Ｘ＋ ０．１６６８ｗｉｔｈＲ２ ＝０．９９１０．Ｔｈｅ９５％ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙｌｉｍｉｔ（ＬｏＡ）ｏｆｔｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｔｅｓｔ ｐｒｏｄｕｃｔａｎｄｔｈｅｒｅｆｅｒｅｎｃｅｐｒｏｄｕｃｔｗａｓ－２１．８０％ａｎｄ１８．８７％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ａｎｄｔｈｅｐｏｉｎｔｏｆ９８．８７％（３５１／ ３５５）ｗａｓｗｉｔｈｉｎｔｈｅ９５％ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙｌｉｍｉｔ．Ｔｈｅｅｘｐｅｃｔｅｄｂｉａｓｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆｔｈｅｔｗｏｍｅｔｈｏｄｓａｔｔｈｅｍｅｄｉｃａｌ ｄｅｃｉｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆ１５ｎｇ／ｍＬ ｗａｓ －１．３１％，ｗｈｉｃｈｍｅｔｔｈｅｅｖａｌｕａｔｉｏｎｃｒｉｔｅｒｉａ．Ｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅａｎｄｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｉｎｃｉｄｅｎｃｅｒａｔｅｓｗｅｒｅ９８．７６％ａｎｄ９８．４９％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｌｅａｄｉｎｇｔｏａｇｅｎｅｒａｌｒａｔｅｏｆ９８．６１％．Ｔｈｅｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ ｒｅｓｕｌｔｓｏｆｔｈｅｔｗｏｍｅｔｈｏｄｓｗｅｒｅｉｎｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔｉｎ５ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ，ｂｕｔｔｈｅｙｗｅｒｅａｌｌｆｒｏｍ ｎｏｎｍａｌｉｇｎａｎｔｇｒｏｕｐａｎｄ ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｗｅｒｅｃｌｏｓｅｔｈｅｒｅｆｅｒｅｎｃｅｖａｌｕｅ．ＴｈｅｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅｒｅｓｕｌｔｓｗｅｒｅｔｅｓｔｅｄｂｙＫａｐｐａｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙｔｅｓｔａｎｄκ ｖａｌｕｅｗａｓ０．９７１９．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＴｈｅＨＥＲ２ｔｅｓｔｋｉｔｉｓｅｑｕｉｖａｌｅｎｔｔｏｔｈｅＨＥＲ２／ｎｅｕｐｒｏｔｅｉｎｔｅｓｔｋｉｔｉｎｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｆｏｒｂｏｔｈｃｌｉｎｉｃａｌｅｆｆｉｃａｃｙａｎｄｓａｆｅｔｙ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｈｕｍａｎｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ２； Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ； Ｃｌｉｎｉｃａｌ
雌二醇(E2)测定试剂盒(磁微粒化学发光免疫分析法)产品技术要求beiaikang
雌二醇（E2）测定试剂盒（磁微粒化学发光免疫分析法）适用范围：用于体外定量测定人血清或血浆中雌二醇（E2）的含量。
1.1产品规格
试 100管份/盒。
1. 1.2主要组成成分
校准品靶值批特异，详见标签。质控品质控范围批特异，详见标签。
2.1 外观
a）试剂盒中的组份应澄清，应无沉淀和絮状物，内外标签、标识清晰，易识别；b）分离试剂摇匀后，应为均匀悬浊液，无明显凝集；
c）冻干组分呈白色或淡黄色疏松体，加水后应在30分钟内完全溶解,所得液体应无沉淀和不溶物质。
2.2 校准品溯源
根据GB/T21415及有关规定提供校准品的来源、赋值过程及测量不确定度等内容，溯源至企业工作标准品，并与贝克曼雌二醇试剂盒比对赋值。
2.3 净含量
试剂盒各液体组份的体积不得少于标称体积。
2.4 最低检出限
最低检出限不大于8pg/ml。
2.5 线性
在（0，3000pg/ml）范围内剂量-反应曲线相关系数（r）的绝对值应≥0.9900。
2.6 精密度
2.6.1分析内精密度：用高低两个浓度水平的样本，各重复检测10次其变异系数（CV）应不大于10%。
2.6.2 批间精密度：用三个批号试剂盒检测同一样本，则三个批号试剂盒试剂盒之间的变异系数（CV）应不大于15%。
2.7 冻干粉瓶间差
质控品按照规定复溶后，瓶间浓度变异系数CV≤15%。
2.8 准确度
按照EP9-A2文件要求与贝克曼化学发光免疫法雌二醇试剂进行比对，本试剂和比对试剂测定样本的浓度相关系数大于0.95，回归系数在0.8-1.2之间。
2.9 质控品测定值
质控品的测定结果应在质控范围内。
雌激素受体(ER)免疫组化试剂盒
雌激素受体（ER）免疫组化试剂盒
该试剂盒以 HRP 标记的链霉亲和素复合物（HRP Streptavidin Conjugate，HRP-SA）为基础，可用于检测细胞、组织内的特异性雌激素受体（ER）抗原。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。在所用的雌激素受体（ER）一抗与相应靶抗原结合后，用生物化二抗与一抗特异性结合，最后加入HRP-SA，形成抗原—特异一抗—生物素化二抗—HRP-SA 复合物，显微镜下观察成像。
试剂盒所含试剂：
试剂A 通透液：0.1% Triton-X 100 10 mL（选用）
试剂B 2 瓶封闭缓冲液（封闭用） 10 mL/瓶
试剂C （原装进口分装）已稀释的即用型雌激素受体（ER）一抗（2.5ml）
试剂D （原装进口分装）生物素化羊抗兔IgG 1 支
（浓度1.5 mg/mL，稀释比为1:300~1:500）50 μL+抗体稀释液20ml
试剂E HRP-SA 复合物1 支（浓度1 μM，稀释比1:50~1:200）100 μL
试剂F DAB 显色液 5ml
用户自备试剂：雌激素受体（ER）
1． 10mM TBS（pH7.2~7.4）
三羟基氨基甲烷1.21g 氯化
钠7.6g
加蒸馏水800mL，浓盐酸调pH 值至7.2~7.4，最后定容至1000mL
TBS-T：TBS+Tween 20（0.05%体积比）
2．抗原修复液（依检测抗原不同而选择不同的修复液）
10mM pH6.0 柠檬酸缓冲液
柠檬酸0.38g
柠檬酸三钠2.45g
加蒸馏水900mL，浓盐酸调pH 值至6.0，最后定容至1000mL
雌二醇定量检测试剂盒说明书
c) 样品的雌二醇浓度，首先在 Y 轴上查找 OD 值，横向延伸至标准曲线，以标准曲线上的点
拉垂直线与 X 轴相交，得出雌二醇的浓度值。
计算公式：4 参数或 Logit-Log。单位转换：1 pg/ml = 3.67 pmol/l
参考值（参考范围）
雌二醇（酶联免疫法）测试者为健康成人，观测值见下表。
雌二醇定量检测试剂盒（酶联免疫法）说明书
目录
● 产品名称 ● 包装规格 ● 预期用途 ● 检验原理 ● 主要组成成分 ● 储存条件及有效期 ● 适用仪器 ● 样本要求 ● 检验方法 ● 参考值（参考范围） ● 检验结果的解释 ● 检验方法的局限性 ● 产品性能指标 ● 注意事项 ● 参考文献 ● 生产企业 ● 医疗器械生产企业许可证编号 ● 医疗器械注册证书编号 ● 产品标准编号 ● 说明书批准及修改日期
5. 洗板：弃去孵育混合物，在吸水纸上拍干。每孔加洗液 400 uL，洗板之间浸泡时间为 10 秒或振荡
5 秒，弃去，重复上述操作 3 次。洗完后在吸水纸上拍干直至没有潮气。
6. 每孔添加 100 μl 的 底物溶液，混匀，室温孵育 15 分钟。
7. 每孔加入 50μl 的终止液，混匀，终止反应。
有效期：储存在 2～8℃，有效期从生产之日起 12 个月。
适用仪器
美国 Awareness Technoligy,Inc 公司生产的 Stat Fax 2100 酶标仪使用波长 450±10nm。
人类HER2基因扩增检测试剂盒说明书
ICS11.100
CCS44
CASME
中国中小商业企业协会团体标准
T/CASME XXXX—2023
人类HER2基因扩增检测试剂盒（荧光原位
杂交法）
Human detection kit for analysis of HER2gene abnormalities（fluorescent in situ
hybridization）
（征求意见稿）
在提交反馈意见时，请将您知道的相关专利连同支持性文件一并附上。
XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施
目次
前言..................................................................................II 1范围.. (1)
2规范性引用文件 (1)
3术语和定义 (1)
4要求 (1)
5试验方法 (2)
6标识、标签、使用说明书 (3)
7包装、运输和贮存 (4)
前言
本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件的发布机构提请注意，声明符合本文件时，本文件 3.2的相关内容涉及到(CN103409504B)《一种用于检测Her2基因不含重复序列的FISH探针、试剂盒及其检测方法》发明专利的使用。
本文件的发布机构作为此项专利的持有人愿意同任何申请人在合理且非歧视的条款和条件下，就专利授权许可进行谈判。该专利持有人的相关信息可以通过以下联系方式获得：
专利申请人或受让人：武汉康录生物技术股份有限公司。
联系地址：武汉东湖新技术开发区高科园三路9号武汉光谷精准医疗产业基地一期(全部自用)8号厂房1-4层（1)厂房号。
试剂盒使用说明书
大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）酶联免疫分析（ELISA）
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
1使用目的：
本试剂盒用于饲料、鱼、虾和肉类组织（如鸡、牛肉和猪肉），药物、血清和尿样中大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）残留的定量检测。
2实验原理
本试剂盒采用竞争ELISA方法，在微孔板包被有大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）偶联抗原，加入大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）标准品或样品，游离大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）与微孔条上预包被的大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）偶联抗原互相竞争抗大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）抗体酶标记物，用TMB底物显色，加入终止液后颜色由蓝色变为黄色，用酶标仪在450nm波长下进行检测，吸光值与样品中大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）含量成反比，通过标准曲线计算样品中大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）的含量。
3试剂盒组成
3.1预包被的大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）偶联抗原的可拆酶标板：1块（12孔×8条）。
3.2大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）标准品：6瓶（1ml/瓶），含量分别是：0ug/ml, 0.1ug/ml,0.3ug/ml,0.9ug/ml,2.7ug/ml,8.1ug/ml
3.3抗大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）抗体酶结合物：1瓶（6ml）。
HER-2基因扩增检测试剂盒(荧光原位杂交法)标准化操作流程.doc
HER-2基因扩增检测试剂盒（荧光原位杂交法）标准化操作流程
1、预期用途
用于检测乳腺癌组织细胞中的HER-2基因扩增情况°
1.1临床适用人群：临床上确诊为乳腺癌的患者。
1.2不适用的情况：未患有乳腺癌的患者。
1.3临床应用定位：用于检测患者乳腺癌组织细胞中的HER-2基因扩增情况，为乳腺癌的临床治疗和预后评估提供参考
2、仪器配置要求
荧光显微镜的配置包括：10x目镜，10x. 40x物镜和100x油镜。
建议顾客使用探针前向滤片组供应商了解所使用的滤片组的详细情况，以便选择与标记荧光染料相适应的滤片组。
绿色荧光：激发波长为490nm,发散波长为516nm,与FITC类似
橘红色荧光：激发波长为551nm,发散波长为572nm,与rhodamine类似。
移液器，振荡器，微型离心机，分析天平，高压灭菌锅，
3、耗材要求
玻片，染缸，保子，无菌带滤芯吸头、离心管，无粉一次性乳胶手套。
4、责任人
基因扩增实验室室长负责技术指导和质量监督。
5、执行人
操作人员应经过专业培训，具有合格的操作技能的检验专业技术人员
6、检测原理
乳腺癌组织样本，经处理后可用于荧光原位杂交分析。
杂交操作流程包括：细胞核中核酸DNA与探针位点特异性荧光原位杂交探针在高温下变性成单链脱氧核糖核酸，在37C环境中，这些己变性成单链的样本及探针核酸根据碱基互补的原则进行特异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸，洗涤非特异性杂交后，探针上标记的荧光信号既可在荧光显微镜下被检测。
本试剂盒包含一组探针：HER2（绿色）位点和CEN17 （红色）位点及FTSH操作配套试剂。
乳腺癌HER2检测指南(2014版)
·２６２·生堡痘堡堂盘圭！Ｑ！垒生兰旦笠箜鲞筮兰塑ｇ！也』里：垒Ｐ曼！！！！兰：！尘：箜：盟！：垒
乳腺癌ＨＥＲ２检测指南（２０１４版）
《乳腺癌ＨＥＲ２检测指南（２０１４版）》编写组
正确检测和评定乳腺癌的ＨＥＲ２蛋白表达和基因扩增状态对乳腺癌的临床治疗和预后判断至关重要…。ＨＥＲ２检测结果不仅涉及患者是否适合针对ＨＥＲ２的靶向治疗，并且对内分泌治疗、化疗方案的选择及预后评估起指导作用Ｌ２Ｊ。２００６年我国《乳腺癌ＨＥＲ２检测指南》的发布¨１对提高乳腺癌ＨＥＲ２检测水平起到了积极作用。２００９年我国病理学家再次发布了《乳腺癌ＨＥＲ２检测指南（２００９版）》【４Ｊ，强调了ＨＥＲ２检测结果的判读标准、检测的技术路线、内部及外部质量控制等，进一步推进了我国乳腺癌ＨＥＲ２检测的标准化。近年来针对ＨＥＲ２阳性乳腺癌的曲妥珠单抗在临床取得了较好疗效。新药如拉帕替尼、帕妥珠单抗、Ｔ—ＤＭｌ等也逐渐被用于临床。与此同时，ＨＥＲ２检测中也出现了一些新的问题∞ｏ。２０１３年，美国临床肿瘤学会／美国病理医师学院（ＡＳＣＯ／ＣＡＰ）公布了在２００７版ＡＳＣＯ／ＣＡＰＨＥＲ２检测指南∞。基础上的更新版本¨１。本指南结合我国实际情况，在《乳腺癌ＨＥＲ２检测指南（２００９版）》的基础上，补充相关领域的新内容和新观点，旨在进一步提高ＨＥＲ２检测的可重复性和准确性，更有效地评估乳腺癌患者的预后，为患者的个体化治疗提供依据。
一、检测方法
推荐采用免疫组织化学（ＩＨＣ）法检测ＨＥＲ２受体蛋白的表达水平，应用原位杂交（ｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＩＳＨ）法检测ＨＥＲ２基因扩增水平。ＩＳＨ包括荧光ＩＳＨ（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＦＩＳＨ）和亮视野ＩＳＨ。常用的亮视野ＩＳＨ方法有显色ＩＳＨ（ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＣＩＳＨ）¨圳和银增强ＩＳＨ（ｓｉｌｖｅｒ—ｅｎｈａｎｃｅｄｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＳＩＳＨ）¨““Ｊ。本指南推荐ＩＨＣ与ＩＳＨ相结合的检测策略。
HER2基因扩增检测(dPCR法)的操作规范与质控标准
HER2基因扩增检测（dPCR法）的操作规范与质控标准
一、检测实验室总体要求
开展HER2基因扩增检测试剂盒（dPCR法）检测HER2基因扩增的实验室应符合中国国家卫生健康委员会《临床基因扩增检验实验室工作规范》，原则上dPCR临床检测实验室应分为3个隔开的工作区域：①试剂贮存和准备区，②标本制备区，③dPCR扩增区和扩增产物分析区。每一区域都应有专用的仪器设备。与上述特定实验区有关的各个房间及设备物品必须有明确的标识，以避免不同工作区内的设备物品，如加样器、试剂等的移出或不同的工作区间发生混淆。进入各个工作区必须按单一方向进行，即从试剂贮存和准备区到标本制备区再到dPCR扩增区和扩增产物分析区。实验室各区应制定相应标准操作规程和严格的质控文件。由省级临床基因扩增实验室验收合格的实验室方可进行试验。
二、检测流程及操作规范
HER2基因扩增检测试剂盒（dPCR法）适用于HER2基因扩增的检测，其检测过程分为样本采集、核酸纯化及定量、dPCR检测和出具报告4个阶段。用户需根据产品使用说明书针对整个操作流程形成标准操作流程（standard operation procedure，SOP）并对SOP 进行验证，验证后对操作人员进行培训后方可开展检测。
1、样本采集、保存及转运
甲醛溶液固定、石蜡包埋组织样本要求肿瘤含量不低于10%，需采用4%甲醛溶液固定，严格按照《临床技术操作规范病理学分册》进行石蜡包埋。每例样本切5~10 μm的切片10张，其中1张切片用于确定肿瘤组织样本中肿瘤细胞比例，可采用临床常用方法；余下的1~9张切片用于提取样本DNA。切片及刮取肿瘤组织过程中，要避免不同病例组织间的交叉污染。
免疫组化试剂盒说明书
(HopeBiot) 镇江厚普生物科技有限公司
Zhenjiang Hope Biotechnology Co.，Ltd
订货电话：*************传 真：*************
网 站：http:// E-mail ：*******************
Histostain-Plus Kits
免疫组化染色试剂盒
货号：SP-9002
简介: 本试剂盒为美国ZYMED 公司SP 系列试剂盒，全称为过氧化物酶标记的链霉卵白素（Streptavidin/Peroxidase ）染色试剂盒。由美国ZYMED 公司于1986年首建。由于链霉卵白素的分子量是60kDa ，有四个亚基和生物素结合，等电点为6.5，所以该方法具有灵敏度高、特异性强、背景清晰、成本低廉的优点，是理想的免疫组化染色方法。 包装：
试剂（无色液体）： 3％ H 2O 2去离子水， 6ml ；
试剂A （蓝色液体）：封闭用正常山羊血清工作液， 6ml ；
试剂B （黄色液体）：生物素化山羊抗小鼠IgG 二抗工作液， 6ml ；
试剂C （橙色液体）：辣根酶标记链霉卵白素工作液（S-A/HRP ），6ml 。
标本染色步骤：
1， 石蜡切片，常规脱蜡至水。
2， 蒸馏水冲洗，PBS 浸泡5分。（如需采用抗原修复，在此步骤后进行） 3， 3％ H 2O 2去离子水（无色液体）孵育5-10分钟，以消除内源性过氧化物酶活性。 4， 滴加试剂A （蓝色液体）室温孵育10-15分钟，倾去，勿洗。
5， 滴加适当比例稀释的一抗，37℃孵育2-3小时或4℃过夜。
Agilent 2100 Bioanalyzer 说明书
Bioanalizzatore Agilent 2100Our measure is your success.
possibilità per l’analisi di DNA,
RNA, proteine
products | applications | software | services
Bioanalizzatore Agilent 2100 Tecnologia lab-on-a-chip applicata
Il bioanalizzatore Agilent 2100 rappresenta lo standard di riferimento per il QC di campioni di RNA e ha sostituito la piùimpegnativa elettroforesi su gel per questa applicazione. Inoltre, sta rapidamente sostituendo la stessa tecnica anche per l’analisi di frammenti di DNA e della tecnica SDS-PAGE per l'analisi delle proteine. Una caratteristica esclusiva del bioanalizzatore Agilent 2100 è la possibilità di utilizzarlo sia per le separazioni elettroforetiche sia per le analisi citometriche a flusso dei parametri di fluorescenza cellulare. Questa versatilità rende il Bioanalizzatore Agilent 2100 uno strumento indispensabile per la biologia e la biochimica miniaturizzazione della strumentazione analitica presenta numerosi vantaggi rispetto alle tecniche tradizionali. Questi vantaggi comprendono il miglioramento della precisione e della riproducibilità dei dati, i tempi di analisi più corti, il consumo minimo di campione, il potenziamento dell’automazione e l'integrazione di flussi operativi complessi. Introdotto nel 1999, il Bioanalizzatore Agilent 2100è stato il primo strumento commerciale a usare la tecnologia microfluidica per l’analisi di campioni biologici.
雌二醇(E2)测定试剂盒(磁微粒化学发光免疫分析法)产品技术要求北京北方生物技术
雌二醇（E2）测定试剂盒（磁微粒化学发光免疫分析法）
适用范围：本产品用于体外定量测定人血清中的雌二醇（E2）的含量。
1.1包装规格
100测试/盒，200测试/盒
1.2主要组成成分
注：1.不同批号试剂盒中各组分不可以互换使用。
2. 校准品和质控品具有批特异性，具体浓度见瓶签。
2.1外观
试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；磁微粒试剂摇匀后为棕色含固体微粒的均匀悬浊液，无明显凝集；其他液体组分应澄清，无沉淀或絮状物；包装标签应清晰，易识别。
2.2装量
各组分装量应不低于标示体积。
2.3溯源性
根据GB/T21415-2008及有关规定，提供试剂盒内校准品的来源、赋值过程以及测量不确定度等内容，溯源至企业一级校准品，一级校准品用纯品质量赋值，与已上市产品比对验证。
2.4线性
在[20，4000]pg/mL范围内，相关系数r应不低于0.9900。
2.5检出限
应不高于15pg/mL。
2.6准确度
回收率应在85.0%~115.0%范围内。
2.7重复性
取浓度（35±7）pg/mL、（200±40）pg/mL的样品，各重复检测10次，其变异系数（CV）应不大于10.0%。
2.8质控品的测定值
均应在规定的质控范围内。
2.9特异性
检测浓度不低于100ng/mL的孕酮（Prog）样本，在本试剂盒上的交叉反应率应不高于1.5%；检测浓度不低于100ng/mL的睾酮（Tes）样本，在本试剂盒上的交叉反应率应不高于1.0%。
2.10批间差
取浓度（35±7）pg/mL、（200±40）pg/mL的样品，分别用3个批号的试剂盒检测，其批间变异系数（CV）应不大于15.0%。
乳腺癌HER2_FISH检测、判读及报告
乳腺癌HER2 FISH检测-检测意义、建议及标本准备
HER2与乳腺癌
乳腺癌是女性恶性肿瘤中发病率最高的一种，正以每年3%～4%的速度急剧上升，已成为女性的第一杀手。临床上大约20-35%的浸润性乳腺癌存在HER2基因的扩增及蛋白的高表达。HER2基因(又名HER2/neu，c-erbB-2)位于17q12，是表皮生长因子受体（HER）家族成员之一，HER家族在细胞生理过程中发挥重要的调节作用。HER2编码相对分子量185KD的跨膜受体样蛋白，具有酪氨酸激酶活性。HER2是重要的乳腺癌预后判断因子，HER2阳性（过表达或扩增）的乳腺癌，其临床特点和生物学行为有特殊表现，治疗模式也与其他类型的乳腺癌有很大的区别。
HER2检测方法有免疫组化（IHC）和荧光原位杂交（FISH）等。《2014年NCCN乳腺癌临床实践指南》和《乳腺癌HER2检测指南2014版》均强调：FISH是检测HER2基因状态的金标准。
一．检测意义
1. 判断预后：HER2阳性的乳腺癌浸润性强，无病生存期短，预后差。
2. 指导治疗：HER2基因扩增的乳腺癌患者对内分泌治疗药物（如他莫昔芬）产生耐药。HER2基因扩增的乳腺癌患者对CMF方案不敏感，宜采用大剂量蒽环类药物和紫杉醇类药物方案；HER2基因扩增的乳腺癌患者明显受益于Herceptin（赫赛汀，2001年FDA批准上市）等靶向药物治疗。
二．检测建议
IHC和FISH检测HER2的状态一致性很高，但也存在着差异，数据统计如下表1和表2示，对于IHC 2+样本必须要用FISH进一步确认结果；0、1+或3+，根据条件，可再做FISH验证。
免疫组化知识普及、二抗免疫组化试剂盒
60ml 125ml
Storage: 2-8℃,18months
Permanent Fast permanently mounted red
Tablet Fast red aqueous mounted
DAB Quanto 1 2
DAB Quanto 1 DAB Plus 2
DAB Quanto 优势: Long stability 稳定性强，混合后可在室温保 存一周， 2-8 度保存2 周
UltraVision Quanto MOM Detection System---一抗检测种属及宿主都是鼠
• 啮齿类动物封闭液，封闭同源交叉反应， 减少非特异着色
• 微聚合物系统，避免生物素系统带来的内 源性背景
UltraVision Quanto MOM Detection System
UltraVision Quanto Mouse-on-Mouse HRP Detection System
货号
品名
TL-015-QHDM UV Quanto Mouse-On-Mouse
试剂盒包含
H202, Mouse-On-Mouse Block, Polymer
TL-060-QHDM UV Quanto Mouse-On-Mouse
Anti-Mouse, Anti-Rabbit
包装规格 种类 品名
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【检测原理】
HercepTest™检测试剂盒包含对常规处理的、石蜡包埋的样本进行两步法免疫组化染色 所需要的全部试剂。兔抗人 HER2 蛋白一抗孵育后，该试剂盒采用基于葡聚糖技术的即用型 显色试剂。该试剂包含羊抗兔二抗和偶联至葡聚糖多聚体骨架上的辣根过氧化酶分子。因此， 不需要再依次使用连接抗体，人免疫球蛋白显色试剂和胎牛血清之间的交叉反应也因为使用 固相吸附材料而消除。依次填加的色素原的酶转换，也使得显色反应发生于抗原所在部位。 标本需要复染和封片。反应结果在光学显微镜下观察。质控玻片包含 3 个福尔马林固定、石 蜡包埋的人类乳腺癌细胞系，染色强度分别在 0、1+、以及 3+，提供用于对染色结果进行 评估。这些细胞的染色强度与其所表达的受体密度一致。
P04605CN_01_SK00121-2CN/2017.02 1/26
P04605CN_01
【主要组成成分】
1. 所提供的试剂：代码 SK001
Leabharlann Baidu
以下所列举的材料足够用于 50 个测试（50 张切片与抗 HER2 蛋白一抗孵育，50 张切片
与相应的阴性质控试剂孵育）。测试数是根据每张切片使用 200 微升的试剂，抗原修复液除
每张切片包含3个福尔马林固定的、石蜡包埋的乳腺癌细胞系，代表了不同的 HER2表达水平：MDA-231（0），MDA-175（1+），以及SK-BR-3（3+）。质控切 片已经进行了热处理，以便使组织切片能够更好地黏附至玻片上。任何对质控切
外。该试剂盒所提供的材料足够用于最多 10 次免疫组化染色。
数量
说明
1×22 mL
过氧化物酶阻断剂。 3%的过氧化氢，含有15 mmol/L的叠氮钠（NaN3）。
1×12 mL
1×22 mL
兔抗人HER2多克隆抗体。 即用型亲和分离的抗体,保存在0.05 mol/L Tris/HCl, 0.1 mol/L NaCl, 1%BSA, 酒 石黄(Tartrazin), 专利蓝V(Patentblue V), 15 mmol/L NaN3, pH 7.2溶液中。 免疫原：合成的HER2蛋白的C-末端（细胞质部分）片段部分，并偶联至血蓝蛋 白上。
DAB 显色液。 5% 3, 3’-二氨联苯胺四盐酸显色剂溶液。
3×500mL
2×5
抗原修复液（包含清洗剂）（10×）。 0.1 mol/L柠檬酸盐缓冲液，1% 吐温-20，pH 5.7。
质控切片
P04605CN_01_SK00121-2CN/2017.02 2/26
P04605CN_01
10 × 试剂瓶
P04605CN_01
HER2 检测试剂盒（免疫组化法）说明书
【产品名称】
通用名称：HER2 检测试剂盒（免疫组化法） 英文名称：HercepTest™ for Automated Link Platforms
【包装规格】
50 测试/盒
【预期用途】
用于常规经福尔马林固定、石蜡包埋的乳腺癌组织的组织学评估和 HER2 的过表达的半 定量检测。以及经福尔马林固定、石蜡包埋的胃腺癌组织切片，包括胃食管连接处肿瘤中的 HER2 的过表达检测。
部分乳腺癌患者，HER2 蛋白过表达是其恶性转化及肿瘤进展过程的一部分（9）。乳腺 癌细胞的表面过表达 HER2，提示可能是抗体治疗的一个靶点。曲妥单抗是一种人源的单克 隆抗体（10），该抗体能够 HER2 蛋白高亲和力结合，而且，体内和体外研究已经证实，这 种结合可以抑制过表达 HER2 蛋白的细胞的生长。
2×22 mL
阴性质控试剂。
与HER2抗体等价蛋白浓度下的正常兔血清免疫球蛋白成分，保存在0.05 mol/L Tris/HCl, 0.1 mol/L NaCl, 15 mmol/L NaN3, pH 7.2，并含有1%BSA稳定剂的溶液 内。
1×1mL
DAB底物缓冲液。 50 mM咪唑, 1mM N, N'-乙基双 (2-[2-羟基苯基]甘氨酸) (EDHPA), 0.1%乙基苯基 聚乙二醇（Nonidet P-40）, 0.02% 过氧化氢, 0.01% 氯化苯二甲烃铵, pH 7.5。
该抗体着色为棕色 DAB 染色，定位于细胞膜。是一种半定量免疫组化分析方法，适用 于考虑接受曲妥单抗治疗患者的辅助评价方法。
人 HER2 基因（也称之为 ERBB2 或 NEU）编码蛋白通常称之为 HER2 或 p185HER2。 HER2 蛋白是一种膜受体酪氨酸激酶，与表皮生长因子受体（EGFR 或 HER1）具有同源性 (1-8)。HER2 蛋白通常由各种表皮细胞表达，是一种正常组织成分（8）。
特异性：HER2蛋白 纯化方法：该抗体采用固相的HER2蛋白肽段亲和分离。
1×10 mL
显色试剂。 辣根过氧化物酶偶联的葡聚糖聚合物和亲和分离的的羊抗兔免疫球蛋白。保存在
Tris/盐酸缓冲液内，该缓冲液内含 1.1% NaCl ，3.5% 聚乙二醇（PEG）及 2% BSA， 0.05% 氨基安替比林和0.05% 酪蛋白。