拟穴青蟹视神经节孕酮受体的免疫识别
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ｅａ ｕ ｉ ｕ ｕ ）２、 洲 龙 螯 虾 （ ｍａ ｕ ｍｅｉ — ｎ ｅｓ ｓ ｒｓＬ 美 ｆ ｓ ］ Ｈｏ ｒ ｓａ ｒｃ ａ
蛋 白质 提取 ： 将两 个 视神 经 节 用玻 璃 研磨 器 冰上
研 磨 ， 照全 蛋 白提 取试剂 盒说 明书提 取全蛋 白 ， 按 考马
斯亮 蓝法 测定 蛋 白浓 度 ， 品 于 一 ７ 样 Ｏ℃保 存 ， 于 免 用
第４卷 ９
第２ 期
厦 门大 学 学报 （ 自然 科 学版 ）
Ｊ ｕ ｎ ｌｏ ａ ｎ Ｕｎｖ ｒ ｉｙ （ ｔ ｒ ｌ ｃｅ ｃ ） ｏ ｒ ａ ｆＸｉｍｅ ｉｅ ｓｔ Ｎａｕ ａ ｉｎ ｅ Ｓ
Ｖｏ Ｉ ９ Ｎｏ ２ ｌ４ ．
Ｍ ８．２行 Ｓ ＳＰ Ｅ电泳 ． Ｄ — ＡＧ 浓缩胶 为 ５ ，０Ｖ； 离胶 为 ８ 分 ２ ， １ 电泳 完成 后 ， 浓 缩胶 切下 ， ０ １ ＯＶ． 将 用半 干转 膜
疫 印迹分析 ．
组 织 固定 ： 视神 经节置 于 Ｂ ｕｎ氏液 中 ， 将 ｏｉ ４℃冰
ｎ ￥ ［ 和锯缘青 蟹 （ ｃ ｌ ｒａａ ［ 等 甲壳动 物检测 Ｕ ）３ ］ Ｓ ｙ ｌ ｓ ｒ ｔ ）４ ａｅ
箱 过夜 ， 于梯 度 酒精 中脱 水 ， 石蜡 包 埋 ， 片 ６ ｍ 用 切 于 免疫组 织化 学实 验．
固定．
ｍｉｏ ｅ ｚｄｎ ｅｅ ｙ ｒ ｃ Ｊｒ ｅＤ ） Ｓｇ ｎ ｂ ｎ ｉｉｅｔｒｈ ｄ ｏｈｏｉ ， ＡＢ 为 ｉｍａ公司 ｄ
产品．
１ ３ 免疫 印迹 ．
将全 蛋 白提取 液 与上 样 缓 冲液 按 １： （ 积 比） ３体
的比例混合 ． 别 取 ５ Ｌ的 样 品 与预 染 蛋 白 Ｍａｋ ｒ 分 ｒ ｅ
酮受体 （ Ｒ） 行识 别和定位 研究 ， Ｐ 进 旨在 为孕 酮参 与调 控 视神 经节生理 活动提 供理论 依据 ．
生 物素 标记 的羊抗兔 抗体 ， 酶菌 抗生 物素一 氧化 物 链 过 酶 ） 兔 抗人孕 酮 受 体 （ Ｒ） 体 购 自武 汉博 士 德生 物 、 Ｐ 抗
工 程有 限公 司 ； ， － 氨 基 联苯 胺 四盐酸 盐 （ ，－ ａ ３ ３二 ３ ３Ｄｉ －
论． 用 免疫 印迹 和免 疫 组 织 化 学 方 法对 拟穴 青 蟹 （ ｃ ｌ ａａ ｍｏａｎ 视 神 经 节 孕 酮 受 体 （ Ｒ） 行 免 疫 识 别 ． 果 应 Ｓ ｙｌ ｐ ｒｍａ ｓｉ ） ａ Ｐ 进 结 发现 ， 拟穴 青 蟹 视 神 经 节 中 存 在 Ｐ 免疫 阳性 反 应 ； 分子 量 约 为 ７ ｕ 该 物 质 广 泛 分 布 于 视 神 经 节 的 神 经 细 胞 核 内． Ｒ 其 Ｏｋ ， Ｐ Ｒ在 拟 穴青 蟹 视 神 经 节 的 发 现 暗示 着其 类 似 于 脊 椎 动 物 调 节 机 制 的 存 在 ； Ｒ在 神 经 细 胞 核 中 的 定位 表 明其 为 核 受 体 。 Ｐ 很 有 可 能在 基 因水 平 上 参 与 拟 穴 青 蟹视 神经 节 的生 理 活 动 调 节 ．
到孕酮 的存在． 有关 甲壳 动 物孕 酮 的作 用 机 制仍 需 进
一
步阐 明． 在脊椎 动物 ， 类 固醇激素 可 以与脑 内相 应 性
１ ２ 主 要 试 剂 ．
全蛋 白提取 试剂盒 购 自南京凯 基生物科 技发展 有 限公 司 ； 染 蛋 白 Ｍａｋ ｒ 自 Ｆ ｒ ｎａ ； 样 缓 冲 预 ｒｅ 购 ｅｍｅ ｔｓ 上 液（ ×） 自北京 赤 索莱 宝科 技 有 限公 司 ； 烯 酰胺 、 ４ 购 丙
１ 材 料 和方 法
１ １ 实 验 材 料 ．
雌性 拟穴青 蟹体质 量 ８ ～ ２ ０ｇ 体 长 ５ ０ ． Ｏ ７ ， ． ～８ ２ ｅ 购 自厦门市农 贸市 场． 拟穴 青 蟹 置 于冰上 麻 醉 ， ｍ， 将
解剖 ， 取其视 神经节 分 别用 于全 蛋 白质 提 取及 组 织 学
亚 甲基双 丙烯 酰 胺 、 ｒｓ 甘胺 酸 、 Ｄ Ｔ ｉ、 Ｓ Ｓ等 电泳 材料 购
的受 体结合从 而发 挥激 素 反 馈调 节 作 用． 视神 经 节 是
甲壳动 物调节生 殖 、 皮 、 糖浓 度变化 等生理 活动 的 蜕 血 神 经 内分泌 器 官Ｃ５ 孕 酮 对 视 神 经 节 的生 理 活 动 是 Ｉ］ ，．
否 具有调 节作用 ， 今 尚未见报 道． 实验应 用免 疫 印 迄 本
迹 和 免 疫 组 织 化 学 方 法 ， 我 国南 方 重 要 的养 殖 蟹 对
类—— 拟穴青 蟹 （ ｃ ｌ ａ ａ ｍｏａｎ 视 神 经 节 孕 Ｓ ｙｌ ｐ ｒｍａ ｓ ｉ ） ａ
自 Ｓｇ ｉｍａ公 司 ； ＮＣ膜 购 自 ＧＥ公 司 ； 根 过 氧化物 标 辣 记 的羊 抗兔 ＩＧ 购 自北 京 中杉 金 桥 生 物技 术 有 限 公 ｇ 司 ； ＡＢ Ｓ Ｃ免疫 组织 化 学 试剂 盒 （ 内含 正 常 山羊血 清 ，
关键 词 ： 孕酮受体 ； 拟穴青蟹 ； 视神经节 ； 免疫识别
中图分 类号 ： １ Ｑ４ ２
文 献标识 码 ： Ａ
文章编 号 ：４８ ４９２ １）２ ２２０ ０３— ７（０００— ８— ０ ０ ４
业 已证实 ， 甲壳 动物体 内存在雌 二 醇 、 酮和睾酮 孕 等 性类 固醇 激 素［ ． 酮 的 生 殖 作 用 主要 表 现 为 ： ） １孕 ］ １ 直 接参与 动物 的性 腺发 育 ； ）作 为 雌 、 激素 等 性 类 ２ 雄 固醇激 素 的前 体 物质 ． 目前 已从 长 缝 拟对 虾 （ ａ ａ — Ｐ ｒ ｐ
拟 穴 青蟹 视 神 经 节 孕酮 受体 的免疫 识 别
宋 萍 ， 叶海 辉 ， 王桂 忠 ， 少菁 李
（ 门 大学 海 洋 与 环 境 学 院 ， 建 厦 门 ３ １ ０ ） 厦 福 ６ ０５
摘要 ： 研究表 明， 甲壳类 中可能存在类固醇的调控 系统 ， 在 然而核受体在进化的过 程中是 否依赖 配体 作用一直存在着争
蛋 白质 提取 ： 将两 个 视神 经 节 用玻 璃 研磨 器 冰上
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第４卷 ９
第２ 期
厦 门大 学 学报 （ 自然 科 学版 ）
Ｊ ｕ ｎ ｌｏ ａ ｎ Ｕｎｖ ｒ ｉｙ （ ｔ ｒ ｌ ｃｅ ｃ ） ｏ ｒ ａ ｆＸｉｍｅ ｉｅ ｓｔ Ｎａｕ ａ ｉｎ ｅ Ｓ
Ｖｏ Ｉ ９ Ｎｏ ２ ｌ４ ．
Ｍ ８．２行 Ｓ ＳＰ Ｅ电泳 ． Ｄ — ＡＧ 浓缩胶 为 ５ ，０Ｖ； 离胶 为 ８ 分 ２ ， １ 电泳 完成 后 ， 浓 缩胶 切下 ， ０ １ ＯＶ． 将 用半 干转 膜
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组 织 固定 ： 视神 经节置 于 Ｂ ｕｎ氏液 中 ， 将 ｏｉ ４℃冰
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论． 用 免疫 印迹 和免 疫 组 织 化 学 方 法对 拟穴 青 蟹 （ ｃ ｌ ａａ ｍｏａｎ 视 神 经 节 孕 酮 受 体 （ Ｒ） 行 免 疫 识 别 ． 果 应 Ｓ ｙｌ ｐ ｒｍａ ｓｉ ） ａ Ｐ 进 结 发现 ， 拟穴 青 蟹 视 神 经 节 中 存 在 Ｐ 免疫 阳性 反 应 ； 分子 量 约 为 ７ ｕ 该 物 质 广 泛 分 布 于 视 神 经 节 的 神 经 细 胞 核 内． Ｒ 其 Ｏｋ ， Ｐ Ｒ在 拟 穴青 蟹 视 神 经 节 的 发 现 暗示 着其 类 似 于 脊 椎 动 物 调 节 机 制 的 存 在 ； Ｒ在 神 经 细 胞 核 中 的 定位 表 明其 为 核 受 体 。 Ｐ 很 有 可 能在 基 因水 平 上 参 与 拟 穴 青 蟹视 神经 节 的生 理 活 动 调 节 ．
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一
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１ 材 料 和方 法
１ １ 实 验 材 料 ．
雌性 拟穴青 蟹体质 量 ８ ～ ２ ０ｇ 体 长 ５ ０ ． Ｏ ７ ， ． ～８ ２ ｅ 购 自厦门市农 贸市 场． 拟穴 青 蟹 置 于冰上 麻 醉 ， ｍ， 将
解剖 ， 取其视 神经节 分 别用 于全 蛋 白质 提 取及 组 织 学
亚 甲基双 丙烯 酰 胺 、 ｒｓ 甘胺 酸 、 Ｄ Ｔ ｉ、 Ｓ Ｓ等 电泳 材料 购
的受 体结合从 而发 挥激 素 反 馈调 节 作 用． 视神 经 节 是
甲壳动 物调节生 殖 、 皮 、 糖浓 度变化 等生理 活动 的 蜕 血 神 经 内分泌 器 官Ｃ５ 孕 酮 对 视 神 经 节 的生 理 活 动 是 Ｉ］ ，．
否 具有调 节作用 ， 今 尚未见报 道． 实验应 用免 疫 印 迄 本
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类—— 拟穴青 蟹 （ ｃ ｌ ａ ａ ｍｏａｎ 视 神 经 节 孕 Ｓ ｙｌ ｐ ｒｍａ ｓ ｉ ） ａ
自 Ｓｇ ｉｍａ公 司 ； ＮＣ膜 购 自 ＧＥ公 司 ； 根 过 氧化物 标 辣 记 的羊 抗兔 ＩＧ 购 自北 京 中杉 金 桥 生 物技 术 有 限 公 ｇ 司 ； ＡＢ Ｓ Ｃ免疫 组织 化 学 试剂 盒 （ 内含 正 常 山羊血 清 ，
关键 词 ： 孕酮受体 ； 拟穴青蟹 ； 视神经节 ； 免疫识别
中图分 类号 ： １ Ｑ４ ２
文 献标识 码 ： Ａ
文章编 号 ：４８ ４９２ １）２ ２２０ ０３— ７（０００— ８— ０ ０ ４
业 已证实 ， 甲壳 动物体 内存在雌 二 醇 、 酮和睾酮 孕 等 性类 固醇 激 素［ ． 酮 的 生 殖 作 用 主要 表 现 为 ： ） １孕 ］ １ 直 接参与 动物 的性 腺发 育 ； ）作 为 雌 、 激素 等 性 类 ２ 雄 固醇激 素 的前 体 物质 ． 目前 已从 长 缝 拟对 虾 （ ａ ａ — Ｐ ｒ ｐ
拟 穴 青蟹 视 神 经 节 孕酮 受体 的免疫 识 别
宋 萍 ， 叶海 辉 ， 王桂 忠 ， 少菁 李
（ 门 大学 海 洋 与 环 境 学 院 ， 建 厦 门 ３ １ ０ ） 厦 福 ６ ０５
摘要 ： 研究表 明， 甲壳类 中可能存在类固醇的调控 系统 ， 在 然而核受体在进化的过 程中是 否依赖 配体 作用一直存在着争