第七章 嵌合

嵌合体分析色素分析法
a 色素分析法 c 遗传分析法
色素分析法
色素分析法简单、直观，比较实用。一般选用肤色、毛色差 异明显的动物的胚胎作为供体胚，如用白鼠或黑鼠。幼鼠生 下4-5天后，就可以分析其肤色或毛色，怀孕10天左右的小鼠 胎儿，眼睛就有色素沉积。或者在出生时，检查眼睑色素情 况，确定是否是嵌合体。
三、嵌合体的制作原理与制作方法
三、嵌合体的制作原理与制作方法

注射法
1、通过显微操作将一些细胞注入到发育胚胎的卵周隙 或者囊胚腔内以制备嵌合体的方法。 2、注射法的常见形式 A 8细胞-桑椹胚卵周隙注入法 B 囊胚腔注入法 C 囊胚内细胞团置换法
三、嵌合体的制作原理与制作方法

囊胚注射法
把某些种类细胞注射入囊胚的囊胚腔中，注 射的细胞可以是卵裂球、内细胞团细胞、胚 胎干细胞，甚至是已经分化的细胞。若注入 的细胞并入内细胞团并参与胚体的形成，那 么就形成了嵌合体。注射时，选取生长良好 的细胞。将10-12个细胞吸入到注射吸管中。 用固定吸管吸住内细胞团与滋胚层交界处， 让内细胞团位于囊胚的底部位置。调整注射 吸管与固定吸管使处于同一焦点平面，选择 滋胚层细胞的“间隙处”，将注射吸管插入 囊胚腔。将细胞推入囊胚腔，使之落到内细 胞团之上。操作后的囊胚形态不规则，经短 期培养后，可以恢复正常状态。
第七章
哺乳动物胚胎嵌合技术
一、胚胎嵌合体
嵌合体（Chimera，也叫镶嵌体，Mosaic）是是指在 同一个体中，由于基因型不同的细胞或组织互相接触， 且各自独自并存的混合状态。
发育早期，如卵裂球甚至受精卵所形成的嵌合体称为原 发性嵌合体（primary chimera），而把在发育的较 晚期，如胚层已经分化，或器官开始形成后，通过组织 移植或嫁接等方法所形成的部分组织或器官的嵌合，称 为次生性嵌合体（sencondary chimera）
三、嵌合体的制作原理与制作方法

聚合法（Aggregation)
1、将两个或两个以上去除透明带的早期胚胎聚合在一 起培养，最终形成一个嵌合体胚胎的过程； A 采集胚胎 B 去除透明带 C 聚合 D 聚合胚胎培养（wow）及移植 2、常见聚合类型 A 胚胎与胚胎聚合 B 卵裂球或细胞与胚胎聚合 C 两组细胞间聚合
三、嵌合体的制作原理与制作方法

卵裂球互换法
1、通过显微操作将不同来源的2-细胞胚胎卵裂球互换 后以制备嵌合体的方法。
小
鼠 嵌 合 体 的 制 作 过 程
四、嵌合体标记及分析

嵌合体标记（Makers of chimera）
1、人工标记：活体染色色素、荧光胶质金、黑色素 颗粒等； 2、遗传标记：基于遗传差异。
遗传分析法
STR检测：利用个体间微卫星（microsatellite analysis）即短串联重复序列(short tandem repeat， str)具有长度多态性进行检测，微卫星是由2～6bp重 复单位构成的DNA序列，通常多态性片段长度在 100～300bp。
四、嵌合体面临的问题



二、胚胎嵌合体研究意义
1、发育生物学研究中的价值;
胚胎细胞的命运和发育能力？决定发育的因子是什么？ 分化能否逆转？基因表达是如何调控的？发育时细胞之 间是以什么样的关系发生互相作用并参与发育的？
2、动物模型构建；
3、畜牧生产。
二、胚胎嵌合体发展概况



1901，Spemann， 两栖类（蛙）开展研究； 1942，Nicholas 和Hall，大鼠； 1965，Mints，嵌合体小鼠，成活至成年； 1968，Gardner，囊胚注射法嵌合小鼠； 20世纪70年代，大鼠、兔、羊嵌合体； 20世纪80年代，牛、猪嵌合体；小鼠/大鼠 种间、绵羊/山羊以及马/斑马属间嵌合体；
嵌合体的免疫排斥问题 种间嵌合体的问题 嵌合体的生殖与遗传问题
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三、嵌合体的制作原理与制作方法

细胞识别与粘附
一个细胞对另一个细胞的认识和鉴别，称为细胞识别 （cell recognition）。 发育中的细胞具有选择性的与其它细胞相亲和的现象， 这种现象称为细胞粘附（cell adhension）。

细胞识别与粘着的分子基础
细胞表面粘着分子（cell adhesion molecule， CAM)；钙粘素（cadherin）；整合素（integrin）；