Solexa测序技术
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Solexa测序技术
Solexa测序技术属于新一代测序技术（第二代），其的核心思想感是 边合成边测序（sequencing by synthesis or ligation, SBS&SbL）。即生成新 DNA互补链时，要么加入的dNTP通过酶促级联反应崔化底物激发出荧光， 要么直接加入被荧光标记的dNTP或半简并引物，在合成或连接生成互补链 时，释放出荧光信号。通过捕获光信号并转化为一个测序峰值，获得互补 链序列信息。 以下主要介绍Solexa测序的基本原理。
Solexa测序具体流程下图所示
• 1.添加接头。 利用物理方法将待测样品DNA打碎， 在单链DNA碎片两端加上接头(1)。
2.表面结合Flow Cell又补分成8条Lane(FIGURE1)，每条Lane的内表面上 能与共价键的形式随机固定。 Solexa的测序时利用微注射系统将已经加过接头和待测片断随机添加到 玻璃Flow Cell内，每一个单链接头序列和带接头的单链待测DNA片断(2)。
3.桥型扩增循环获得多拷贝待测DNA片断。 在Flow cell内加入未被标记的dNTP和酶起始固相桥型扩增(3)。所有单 链桥型待测片段被扩增成双链桥片断，通过变性，释放出互补的单链，锚定 到附近的固相表面(4,5)。通过不断循环，将会在Flow cell的固相表面上获得 上百万条成簇分布的双链待测片断(6)。
4.测序。 加入DNA聚合酶和被荧光标记的dNTP 和接头引物进行扩增，在每一个测序列簇延伸互补 链时，每加入一个被荧光标记的dNTP就能释放出相应的荧光，测序仪通过捕获荧光信号， 并通过计算机软件将光信号转化为测序峰，从获得待测片段的序列信息(7,8,9,10,11,12)。
Solexa测序技术属于新一代测序技术（第二代），其的核心思想感是 边合成边测序（sequencing by synthesis or ligation, SBS&SbL）。即生成新 DNA互补链时，要么加入的dNTP通过酶促级联反应崔化底物激发出荧光， 要么直接加入被荧光标记的dNTP或半简并引物，在合成或连接生成互补链 时，释放出荧光信号。通过捕获光信号并转化为一个测序峰值，获得互补 链序列信息。 以下主要介绍Solexa测序的基本原理。
Solexa测序具体流程下图所示
• 1.添加接头。 利用物理方法将待测样品DNA打碎， 在单链DNA碎片两端加上接头(1)。
2.表面结合Flow Cell又补分成8条Lane(FIGURE1)，每条Lane的内表面上 能与共价键的形式随机固定。 Solexa的测序时利用微注射系统将已经加过接头和待测片断随机添加到 玻璃Flow Cell内，每一个单链接头序列和带接头的单链待测DNA片断(2)。
3.桥型扩增循环获得多拷贝待测DNA片断。 在Flow cell内加入未被标记的dNTP和酶起始固相桥型扩增(3)。所有单 链桥型待测片段被扩增成双链桥片断，通过变性，释放出互补的单链，锚定 到附近的固相表面(4,5)。通过不断循环，将会在Flow cell的固相表面上获得 上百万条成簇分布的双链待测片断(6)。
4.测序。 加入DNA聚合酶和被荧光标记的dNTP 和接头引物进行扩增，在每一个测序列簇延伸互补 链时，每加入一个被荧光标记的dNTP就能释放出相应的荧光，测序仪通过捕获荧光信号， 并通过计算机软件将光信号转化为测序峰，从获得待测片段的序列信息(7,8,9,10,11,12)。