沙门氏菌生化鉴定
沙门氏菌的检验方法
沙门氏菌的检验方法沙门氏菌（Salmonella）是一类革兰氏阴性的杆状细菌，是引起沙门氏菌属感染的病原菌。
这种细菌可以引发食物中毒和伤寒症，其中食物中毒是最常见的感染途径。
因此，对沙门氏菌的快速、准确的检测非常重要。
目前，沙门氏菌的检测方法主要包括传统培养分离法、免疫学方法和分子生物学方法。
以下是关于沙门氏菌检验方法的相关参考内容。
1. 传统培养分离法传统的沙门氏菌检验方法是利用富含寡糖的培养基，如XLD、SS等，以及一些选择性供氧培养基，如亚硫酸和肉汤琼脂培养基等，将样品进行培养。
通过培养，沙门氏菌会形成典型的红色或蓝绿色菌落。
然后，从菌落中挑取纯培养物，并进行生理生化反应和田纳氏试验以确定是否为沙门氏菌。
2. 免疫学方法免疫学方法是通过检测沙门氏菌特异性抗原或抗体来诊断沙门氏菌感染。
常用的方法有：- 血清凝集试验：利用特异性沙门氏菌抗原和患者血清，在特定条件下观察血清与抗原的凝集反应，可确定是否感染沙门氏菌。
- 酶联免疫吸附试验（ELISA）：利用特异性沙门氏菌抗原或抗体和酶标记的二抗，通过检测光学密度来判断是否存在沙门氏菌。
3. 分子生物学方法分子生物学方法可以通过检测沙门氏菌的基因或DNA来快速、准确地诊断沙门氏菌感染。
常用的方法有：- PCR（聚合酶链式反应）：通过特异性引物扩增沙门氏菌的DNA片段，然后进行凝胶电泳分析。
PCR可以提供快速、高效的沙门氏菌检测结果。
- 实时荧光PCR：使用带有荧光探针的PCR引物，通过检测荧光信号的强度来定量沙门氏菌的存在量。
- 基因芯片技术：基因芯片上固定了沙门氏菌特异性的探针，可以同时检测多个基因或DNA序列，提高检测效率。
除了上述方法，还可以利用质谱仪等仪器进行快速鉴定，甚至利用抗生素敏感试验、细菌溶解酶试验等进行进一步的鉴定和鉴别。
总结起来，沙门氏菌的检验方法主要包括传统培养分离法、免疫学方法和分子生物学方法。
这些方法可以单独或联合使用，以提供准确、快速的沙门氏菌检测结果，对于预防和控制沙门氏菌感染具有重要意义。
沙门氏菌的生物学特性及鉴定要点
甲型副伤寒
乙型副伤寒 丙型副伤寒 伤寒沙门氏菌 其它沙门氏菌
K K K K K
A + -/+ A + ++ A + ++ A - +/A + +
6.血清凝集步骤
6.1 筛选： 取营养琼脂斜面（或KIA斜面）培养物与AFO多价抗血清作玻片凝试 验，若呈明显凝集，提示被检菌可能属于AFO6个0群范围内，再 按0抗原血清凝集定群。若与多价0抗血清不凝集，有如下3种可 能：（1），含有Vi抗原 （2），AFO群之外的沙门氏菌 （3），沙门氏菌以外的细菌，按下述方法进一步检验。 将营养琼脂斜面培养物用1ml无菌生理盐水或蒸馏水洗下，制成浓厚 菌液，再合成2份，1份不经处理，为洗菌液，另一份放100℃水 浴中30分钟，为加热菌液。
6.2 定群
取O2（A群），O4（B群），O7（C1群），O8
（C2群），O9（D群），O3.10（E群），O11（F
群）分别进行玻片凝集试验。若与其中1种因子血 清凝集，可报告为阳性。
6.3 血清型分析：
菌群确定后先分析第1相鞭毛抗原，再分析第2相鞭毛 抗原。
A：第1相鞭毛抗原分析：根据菌群分析结果，分别选用第 1相鞭毛因子血清进行玻片凝集试验。
取活菌与Vi抗血清，取加热菌与Vi抗血清，AFO多价抗血清分别进行 玻片凝集试验。
根据结果作如下分析： （1）活菌与Vi抗血清凝集，加热菌与Vi抗菌，按下述定 群用O7和O9抗血清定群； （2）活菌与Vi抗血清不凝集，可能属于AFO群意外的沙
门氏菌或其他菌属细菌，应进行全面生化试验定属，若符
合沙门氏菌属细菌特征，宜送专门机构鉴定； （3）加热菌也与Vi抗血清凝集，而与AFO多价O抗血清 不凝集者，可报告为阴性。
沙门氏菌检验原始记录
D
E
阳性
报告
检验员： 审核员：
4.分别划线BS和沙门氏显色培养基；于36℃±1℃培养40～48h（BS）或18～24h（沙门氏显色培养基）观察典型菌落；
5.据生化鉴定试剂盒要求做沙门氏菌生化鉴定；据生化鉴定结果做沙门氏菌血清学鉴定；
样品
观察结果
项目
是否典型菌落
血清学鉴定
三糖铁琼脂
靛基质
尿素
KCN
赖氨酸
ONPG
甘露醇
山梨醇
抗原O
抗原H
□液体样品：吸取25mL于样品置于盛有225mLBPW的无菌均质袋内,振荡混匀。
检验程序
1.实验采集抽样方案来自GB4789.1；
2.上述样品匀液于36℃±1℃培养8～18h；
3.移取1mL转种于10mLTTB内42℃±1℃培养18～24h；移取1mL转种于10mLSC内36℃±1℃培养18～24h；
沙门氏菌检验原始记录表
样品名称
样品编号
检验项目
沙门氏菌检验
检验日期
检验地点
BSL-2实验室
温湿度（℃，RH%）
检验依据
GB 4789.4—2016
判定依据
检验仪器
生化培养箱均质器电子天平
生物安全柜
检验试剂
BPW，TTB、SC增菌液，BS平板，沙门氏显色平板，生化鉴定试剂盒，诊断血清等
样品制备
□固体和半固体样品：无菌称取25g样品，置于盛有225mLBPW的无菌均质袋内，拍击式均质器均质1min～2min。
沙门氏菌鉴定流程
沙门氏菌的检测方式主要包括血常规检查、便常规检查、ELISA法检查等，能够判断疾病的严重程度。
1、血常规检查：感染沙门氏菌时，多数患者的白细胞、中性粒细胞以及嗜酸性粒细胞计数出现偏低的情况，大儿童的白细胞计数通常出现升高的现象，该项结果可以辅助诊断沙门菌病。
2、便常规检查：感染沙门氏菌以后，部分患者可能会出现黏液样变或血便的情况，通过明确患者急性胃肠炎的症状来辅助诊断沙门菌病。
3、ELISA法检查：检测患者血清中沙门菌抗原、抗体是否出现异常的情况，有助于沙门菌感染的诊断。
除此之外，沙门氏菌的检测方式还包括B超检查、肥达试验等，如果自身的病情比较严重，建议应及时到正规医院的感染病科进行检查并治疗，以免延误病情。
沙门氏菌生化鉴定完整版
沙门氏菌生化鉴定 HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】沙门氏菌生化试验判定步骤三糖铁琼脂赖氨酸脱羧酶初步判断斜面底层产气硫化氢产碱红产酸黄＋（－）＋（－）黑＋紫可疑沙门氏菌产碱红产酸黄＋（－）＋（－）黑－黄可疑沙门氏菌产酸黄产酸黄＋（－）＋（－）黑＋紫可疑沙门氏菌三糖铁琼脂原理分析：本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。
用于观察细菌对糖的利用和硫化氢（变黑）的产生。
该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。
而发酵乳糖的细菌，则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色。
如培养基接种后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀。
底层产酸：是因为细菌分解糖类物质使酚红退色变黄。
斜面产碱，低层产酸：是细菌分解葡萄糖(不能分解乳糖和蔗糖),由于量较少进而分解蛋白胨而产碱变红。
因为底层是厌氧环境，葡萄糖分解慢，２４小时培养后还没分解蛋白胨产碱；而斜面是需氧环境分解较快，一般８小时左右就把葡萄糖分解完（此时斜面也是酸性），但继而分解蛋白胨产碱，斜面又转为碱性。
2－志贺氏菌：都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，不产生H2S。
4－大肠杆菌：能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳糖，不产生H2S。
3－沙门氏菌：能分解葡萄糖，不发酵乳糖，大多数产生H2S，多数产气。
赖氨酸脱羧酶试验1、试验管及对照管均要加一层约10mm厚的灭菌石蜡或矿物油以覆盖表面，此可使培养基中的溶解氧通过细菌消耗掉，并控制培养基的pH。
2、阳性试验管培养初期（10—12h）因发酵葡萄糖产酸变黄，继续培养由于氨基酸脱羧产生胺类而使培养基由酸变碱，故又由黄变为紫色。
沙门氏菌生化鉴定条
沙门氏菌生化鉴定条
沙门氏菌生化鉴定条是一种常用于沙门氏菌的生化鉴定方法。
它是一种基于菌株在不同生化反应中产生的酶活性或代谢产物的变化来进行鉴定的方法。
沙门氏菌生化鉴定条通常包含多个小孔，每个小孔上面涂有一种特定的生化试剂或底物。
当沙门氏菌菌株接种到鉴定条上后，如果菌株具有特定的酶活性或代谢能力，它们将与试剂或底物反应产生颜色变化或其他可观察到的变化。
通过观察菌株在不同孔上的反应情况，可以根据反应结果与已知的沙门氏菌生化特征进行比对，从而确定菌株是否为沙门氏菌。
沙门氏菌生化鉴定条的优势在于其操作简便、快速，且可以同时进行多个生化反应的鉴定。
不过，它的准确性可能受到一些因素的影响，比如菌株的新陈代谢状态、环境条件等。
总之，沙门氏菌生化鉴定条是一种常用的快速鉴定沙门氏菌的方法，可以帮助实验室迅速确定菌株的身份。
沙门氏菌检验国家标准
沙门氏菌检验国家标准沙门氏菌是一种常见的致病菌，可以通过食物、水源和接触感染等途径传播，引起食物中毒和肠道感染等疾病。
为了保障食品安全和公共卫生，我国对沙门氏菌的检验标准进行了规范，制定了相应的国家标准。
首先，沙门氏菌检验国家标准明确了检验对象和范围。
该标准适用于食品、饮用水、环境样品等的沙门氏菌检验，包括沙门氏菌的定性和定量检验方法。
针对不同的检验对象，标准中规定了具体的检验方法和技术要求，确保检验结果的准确性和可靠性。
其次，标准对沙门氏菌的检验方法进行了详细的描述。
在样品的处理和预处理过程中，标准规定了严格的操作要求，包括样品的采集、保存、运输和处理等。
针对不同的样品类型，标准中还规定了不同的处理方法，以确保样品中沙门氏菌的检出率和准确性。
此外，标准还对沙门氏菌的培养和鉴定方法进行了规范。
在培养基的选择和制备过程中，标准明确了培养基的成分和制备方法，以及培养条件和培养时间等。
在沙门氏菌的鉴定过程中，标准规定了生化试剂的选择和使用方法，以及鉴定结果的判定标准，确保鉴定结果的准确性和可靠性。
最后，标准对沙门氏菌的定量检验方法进行了规定。
在定量检验过程中，标准规定了菌落计数方法和计数结果的表达方式，以及检验结果的判定标准。
同时，标准还规定了质控要求和质控方法，确保检验结果的可比性和可靠性。
总的来说，沙门氏菌检验国家标准的制定为我国食品安全和公共卫生提供了重要的技术支撑和保障。
通过严格执行该标准，可以有效地预防和控制沙门氏菌引起的食物中毒和肠道感染等疾病，保障人民群众的身体健康和生命安全。
希望各相关部门和单位能够认真贯彻执行该标准，不断提升沙门氏菌检验工作的水平和质量，为我国食品安全和公共卫生事业作出积极贡献。
沙门氏菌检验及分析
沙门氏菌检验及分析沙门氏菌是一种常见的致病菌，能引起人体消化系统的疾病，如沙门氏菌食物中毒和肠炎等。
对食品和环境样品中的沙门氏菌进行检验和分析是非常重要的。
沙门氏菌的检验方法主要包括培养法和分子生物学法。
培养法是传统的沙门氏菌检验方法，该方法使用一系列专门的培养基，如XLD（Xylose Lysine Deoxycholate Agar）和SS（Salmonella Shigella Agar）等，以培养和鉴定沙门氏菌菌株。
将样品加入适当的培养基，然后在适当的温度下进行培养。
经过一段时间后，观察培养基上的菌落形态特征，如形状、色素和粘度等，进一步进行鉴定。
还可以使用生化试剂和抗生素敏感性试验来确定菌株的身份。
分子生物学法是一种快速准确的沙门氏菌检验方法，其基于沙门氏菌特有的基因序列，如invA和fliC等。
通过PCR（聚合酶链反应）技术，可以扩增出这些目标序列，并通过相应的检测方法，如凝胶电泳或实时荧光PCR等，进行检测。
这种方法不仅能够快速鉴定沙门氏菌，还可以检测沙门氏菌的数量和种类等重要信息。
沙门氏菌的分析主要涉及其在食品和环境样品中的存在和数量。
对于食品样品，可以通过抽样和分析的方法来确定沙门氏菌的存在情况和数量。
一般来说，可以选择一些高风险的食品，如家禽肉类、蛋制品和生鲜蔬菜等，进行检测。
对于环境样品，主要包括水源、污水、土壤等，可以通过采样和培养法来确定沙门氏菌的存在。
沙门氏菌的分析结果可以提供重要的参考信息，用于评估食品和环境的安全性。
通过分析沙门氏菌的数量和种类等信息，可以判断食品和环境中是否存在潜在的健康风险，并采取相应的措施进行预防和控制。
沙门氏菌检验详细流程
新的血清型名称的批准必须有巴斯德研究所、德国汉 堡卫生研究所及美国CDC 3个实验室的一致同意。
精品课件
沙门氏菌检验程序
精品课件
前增菌
目的：修复损伤的细菌细胞； 方法：25 g（mL）样品＋225 mL BPW的无菌均
57个O抗原 116个H抗原 Vi抗原
被分成2500多个血清型 。
Vi抗原 O抗原 H抗原
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沙门氏菌命名与书写方式
目前的命名方法规定：
肠道沙门菌肠道亚种（亚种Ⅰ）给予专用名，并采用 标本分离地址的地名。菌名的第一个字母需大写，且 亚种Ⅰ的所用菌名不能用斜体。例如：肠道沙门菌鼠 伤寒血清型应书写为Salmonella enterica subsp.enterica serotype Typhimurium，但在实际工 作中，可简写为S. Typhimurium。
精品课件
血清学鉴定时的注意要点：
做血清凝集时，同时应用生理盐水做对照。 O血清不凝集时，可将菌株转接于琼脂量较高(如
2.5%-3%)的斜面上，再做凝集。 如果由于Vi抗原的存在而阻止了O抗原的凝集反应
时，应挑取菌苔于1mL生理盐水中做成菌悬液。煮 沸后再检查。(常见于伤寒沙门菌)。 有极少数的二相沙门菌会同时出现2相H抗原，也 有一些沙门氏菌在培养过程中H抗原会出现第1项 和第2项之间的转变，所以血清诱导实验要用新鲜 的培养物进行诱导。
GB 4789.4-2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验
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沙门菌概况
沙门菌是1885年由Salmon氏等在猪霍乱流行 时，分离出的猪霍乱沙门菌，由于Salmon氏 对本属细菌的发现贡献卓越，故定名为沙门 菌属。
DBI-05 沙门氏菌干制生化鉴定试剂盒使用说明书
DBI-05 沙门氏菌干制生化鉴定试剂盒使用说明书1、用途：用于沙门氏菌的生化鉴定（GB 4789.4-2016）。
2、试剂盒明细：名称规格干制生化鉴定试剂9种×10套三糖铁生化管10支0.5麦氏浊度比浊管1支使用说明书1份一次性滴管10支配套试剂靛基质试剂1瓶、无菌液体石蜡1瓶注：一份生化鉴定试剂盒可鉴定10个可疑菌落3、实验操作：①从铝箔袋中取出试剂盒，打开盒盖，在试剂盒的长条槽中加入1mL无菌水或无菌生理盐水，防止培养过程中菌悬液干燥（注：1、取出时切勿将托盘倒置，以免试剂盒和生化管掉落；2、避免长条槽中水进入试剂圆孔中。
）；②先将可疑单菌落接种于非选择性培养基上进行纯化培养，用接种针挑取平板上新鲜培养物接种于三糖铁生化管，同时用接种环挑取同一纯化平板上新鲜培养物至适量0.85%生理盐水中，仔细研磨，与标准0.5麦氏浊度比浊管比较，制成0.5个麦氏浊度的均匀菌悬液；③使用无菌移液管吸取制备好的0.5麦氏浊度的均匀菌悬液，分别至试剂盒的9个圆孔中，每孔接种量为0.2mL，盖上盒盖，与三糖铁生化管统一于36℃±1℃培养，氰化钾试验若培养24h时仍为阴性，可延长培养至48h再观察结果。
注意：标有“”的生化项目表示在接种后需滴加无菌石蜡2-3滴，标有“【】”的生化项目表示在观察结果时需滴加附加试剂。
4、结果判定：结合表1和GB 4789.4-2016进行结果判定。
5、保存条件和保质期：2-8℃冷藏避光保存1年（除三糖铁生化管外，其余试剂可室温避光保存1年）。
表1结果判定表试验项目结果判定沙门氏菌生化现象培养时间说明阴性结果阳性结果三糖铁斜面K 斜面 A参见表218h-24h必要时延长至48h用接种针挑取可疑菌落先在斜面上划线，再于底层穿刺，竖直或水平放置于托盘对应的凹槽中。
底层K 底层 A 硫化氢不变黑硫化氢变黑产气无气孔产气有气孔氨基酸对照————18h-24h 接种后需滴加2-3滴无菌液体石蜡覆盖培养基表面。
沙门氏菌的生物学特性及鉴定要点
其它沙门氏菌 K A + +
MIU 动力、吲哚、脲酶
诊断血清凝集
+ --
AFO多价+ A+
+ --
AFO多价+ B+
+ --
AFO多价+ C+ Vi+
+ --
AFO多价+ D+ Vi+
+ --
AFO多价+ 肠炎+
6.血清凝集步骤
6.1 筛选：
取营养琼脂斜面（或KIA斜面）培养物与AFO多价抗血清作玻片凝试 验，若呈明显凝集，提示被检菌可能属于AFO6个0群范围内，再 按0抗原血清凝集定群。若与多价0抗血清不凝集，有如下3种可 能：（1），含有Vi抗原
6.2 定群
取O2（A群），O4（B群），O7（C1群），O8 （C2群），O9（D群），O3.10（E群），O11（F 群）分别进行玻片凝集试验。若与其中1种因子血 清凝集，可报告为阳性。
6.3 血清型分析：
菌群确定后先分析第1相鞭毛抗原，再分析第2相鞭毛 抗原。
A：第1相鞭毛抗原分析：根据菌群分析结果，分别选用第 1相鞭毛因子血清进行玻片凝集试验。
B：第2相鞭毛抗原分析：改用抗血清，通常是复合因 子（1，2，3，5，e，n，x，i，w）血清。
C：单相菌，若第1相已确定，可结合菌群分析及生化反 应结果判定血清型
Thank you !
根据结果作如下分析： （1）活菌与Vi抗血清凝集，加热菌与Vi抗菌，按下述定 群用O7和O9抗血清定群； （2）活菌与Vi抗血清不凝集，可能属于AFO群意外的沙 门氏菌或其他菌属细菌，应进行全面生化试验定属，若符 合沙门氏菌属细菌特征，宜送专门机构鉴定； （3）加热菌也与Vi抗血清凝集，而与AFO多价O抗血清 不凝集者，可报告为阴性。
国标法检测沙门氏菌流程
国标法检测沙门氏菌流程今天咱们来了解一下国标法检测沙门氏菌的流程呀。
沙门氏菌可不能小瞧它呢。
就像有一群小坏蛋藏在食物里，我们得把它们找出来。
检测沙门氏菌就像是一场侦探游戏。
最开始呀，要采集样品。
比如说，要是检测超市里的鸡肉有没有沙门氏菌，工作人员就会从好多鸡肉里选取一部分作为样品。
这就像从一堆宝藏里先挑出几个小盒子，看看里面有没有坏东西。
拿到样品后，要进行前增菌。
这就像是给那些可能存在的沙门氏菌喂点吃的，让它们快快长大。
把样品放到一种特殊的营养液里，然后放在合适的温度下，就像把小种子种到肥沃的土里，等着它发芽。
接着是选择性增菌呢。
这个时候呀，就像是把前面养大的细菌都放到一个新的环境里，这个环境是专门为沙门氏菌打造的。
其他的细菌可能在这个环境里就长不好啦，只有沙门氏菌能够茁壮成长。
这就好比是在一个特别的小岛上，只有特定的小动物才能生存。
然后就是分离培养啦。
把经过选择性增菌的东西放到一种特殊的平板上，这个平板就像一个大操场，沙门氏菌在上面会长成一个个小点点，就像操场上的小朋友们各自站在自己的位置上。
这些小点点的样子和其他细菌的小点点可能不一样哦。
之后就是生化鉴定啦。
这就像是给那些小点点做个小测试。
看看它们是不是真的沙门氏菌。
工作人员会用一些特殊的东西去和这些小点点反应，如果反应对了，那就很可能是沙门氏菌啦。
就像我们在学校做小实验，把醋倒在小苏打上会冒泡泡，这就是一种特殊的反应。
最后呀，还要进行血清学鉴定。
这就像是给可能是沙门氏菌的小点点再做一次身份确认。
如果所有的检测都表明这个小点点就是沙门氏菌，那我们就找到了这个藏在食物里的小坏蛋啦。
通过这样的流程，我们就能知道食物里有没有沙门氏菌这个小坏蛋啦。
这样我们就能吃到安全放心的食物啦。
是不是很有趣呢？就像一场特别的寻宝游戏，只不过我们找的是坏细菌。
沙门氏菌血清学鉴定
竭诚为您提供优质文档/双击可除沙门氏菌血清学鉴定篇一：沙门氏菌生化鉴定沙门氏菌生化试验判定步骤三糖铁琼脂原理分析：本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。
用于观察细菌对糖的利用和硫化氢（变黑）的产生。
该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。
而发酵乳糖的细菌(e.coli)，则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色。
如培养基接种后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀。
底层产酸：是因为细菌分解糖类物质使酚红退色变黄。
斜面产碱，低层产酸：是细菌分解葡萄糖(不能分解乳糖和蔗糖),由于量较少进而分解蛋白胨而产碱变红。
因为底层是厌氧环境，葡萄糖分解慢，２４小时培养后还没分解蛋白胨产碱；而斜面是需氧环境分解较快，一般８小时左右就把葡萄糖分解完（此时斜面也是酸性），但继而分解蛋白胨产碱，斜面又转为碱性。
2－志贺氏菌：都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，不产生h2s。
4－大肠杆菌：能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳糖，不产生h2s。
3－沙门氏菌：能分解葡萄糖，不发酵乳糖，大多数产生h2s，多数产气。
赖氨酸脱羧酶试验1、试验管及对照管均要加一层约10mm厚的灭菌石蜡或矿物油以覆盖表面，此可使培养基中的溶解氧通过细菌消耗掉，并控制培养基的ph。
2、阳性试验管培养初期（10—12h）因发酵葡萄糖产酸变黄，继续培养由于氨基酸脱羧产生胺类而使培养基由酸变碱，故又由黄变为紫色。
阴性试验管则始终呈黄色。
氨基酸脱羧酶试验(1)原理：某些细菌可产生氨基酸脱羧酶使氨基酸脱羧生成胺和二氧化碳。
由于胺的生成使培养基变为碱性，可用指示剂指示出来。
(2)方法：将待检菌分别接种于1支氨基酸（赖氨酸，鸟氨酸或精氨酸）脱羧酶试验管和1支氨基酸脱羧酶对照管（无氨基酸），各覆盖至少0.5cm高度的无菌石蜡油，35℃孵育1~4d，观察结果。
0040沙门氏菌生化试验检验操作规程
贵州明湖药业股份有限公司GMP文件目的建立沙门氏菌生化检验操作规程，确保检验数据的准确性。
依据《中国药典》2000版一部附录XIIIC-（80-81页）。
范围本标准适用于沙门氏菌生化检验操作。
责任人QC负责人、化验员。
内容1使用仪器、玻璃器皿、培养基、染色剂及试剂。
1.1仪器：托盘天平1.2玻璃器皿：150ml锥开瓶、试管、载玻片1.3试液：1.3.1靛基质试液：取对二甲基苯甲醛5.0g，加入乙醇75ml，充分振摇，使完全溶解后，再取浓盐酸25ml徐徐滴入（边滴边振摇，以免骤热使溶液色泽变深）即得。
1.3.2 0.9%氯化钠溶液：取氯化钠0.9g，加入蒸馏水100ml，微热使溶解，121℃灭菌30分钟，放冷，备用。
1.4染色剂：1.4.1结晶紫染液：取结晶紫1.0g，加入95%乙醇20ml使溶解，加1%草酸铵水溶液80ml，混匀，静置48小时使用，置密闭棕色瓶中贮存。
1.4.2碘液：取碘化钾2.0g，加水3-5ml使溶解，加入碘片1.0g，使全部溶解后加水稀释至300ml，置密闭棕色瓶贮存。
1.4.3沙黄试液：取沙黄0.25g，加95%乙醇10ml，使完全溶解后，加水100ml。
1.5培养基：1.5.1营养肉汤增菌液：取营养肉汤试药22g，加蒸馏水1000ml微热使溶解，按每瓶100ml分装，121℃灭菌15分钟，备用。
1.5.2四硫磺酸盐增菌液：取四硫磺酸盐试药4.6g，加蒸馏水100ml微热使溶解，121℃灭菌30分钟，备用。
1.5.3胆盐硫化琼脂培养基：取胆盐硫化琼脂培养基试药48g，加蒸馏水1000ml加热溶化后，116℃灭菌30分钟，冷却至60℃灭菌，倾注平皿，备用。
1.5.4曙红亚甲蓝琼脂培养基：取营养琼脂培养基（取营养琼脂试药4g，加水100ml，116℃灭菌备用）加热溶化后，取100ml，冷至60℃按无菌操作加入灭菌的20%乳糖溶液5 ml，曙红钠指示液2ml和亚甲蓝指示液1.5ml，摇匀，倾注平皿。
沙门氏菌生化鉴定条
沙门氏菌生化鉴定条
沙门氏菌（Salmonella）生化鉴定条是一种用于快速鉴定沙门
氏菌的试剂盒。
它通常包含多个培养基和化学物质，可以通过观察沙门氏菌的生化反应来确定其存在。
沙门氏菌生化鉴定条的使用方法一般如下：
1. 首先，将待检样品中的沙门氏菌分离出培养基上。
2. 取一根已消毒的针头，取出少量菌液并涂在鉴定条上的相应孔中。
3. 按照鉴定条的使用说明，放置于适当的温度下进行培养。
4. 根据鉴定条上的指示，观察菌液在不同培养基上的反应，如颜色变化、气泡产生等。
通过观察菌液在各孔上的反应，可以快速鉴定沙门氏菌。
常见的沙门氏菌生化鉴定条有API 20E和API 20NE等。
需要注意的是，沙门氏菌生化鉴定条虽然能够提供快速的结果，但是并不是最终的确认方法。
如果需要确保结果的准确性，还需要进行进一步的分子生物学检测或培养。
同时，操作人员在使用沙门氏菌生化鉴定条时需要遵守严格的操作规范，以防止交叉感染和误判。
沙门氏菌生化鉴定结果
沙门氏菌生化鉴定结果
一、引言
沙门氏菌是一种常见的致病菌，可引起肠胃道感染，严重者甚至会危及生命。
因此，对于沙门氏菌的生化鉴定结果具有重要的临床意义。
二、样品来源
本次实验所用样品为从患者粪便中分离出的沙门氏菌。
三、实验方法
1.革兰染色法
首先进行革兰染色法，观察细胞形态和结构。
结果显示该菌为革兰阴性杆菌。
2.氧化酶试验
将沙门氏菌接种于含有1%亚硝酸钠的液体培养基中，加入少量Tetramethyl-p-phenylenediamine溶液，观察是否产生蓝色反应。
结果显示该菌不产生氧化酶。
3.卡波芬染色法
采用卡波芬染色法检测该菌是否产生荧光素类似物。
结果显示该菌不产生荧光素类似物。
4.甲烷双酚蓝试验
将沙门氏菌接种于含有甲烷双酚蓝的液体培养基中，观察菌落是否产生变色。
结果显示该菌不产生甲烷双酚蓝。
5.利用API系统进行鉴定
利用API系统对该菌进行鉴定。
结果显示该菌为沙门氏菌，鉴定号为1104。
四、结论
综合以上实验结果，可以得出该样品中分离出的细菌为沙门氏菌，并且通过API系统得到了具体的鉴定号码。
五、临床意义
沙门氏菌是一种常见的肠道致病菌，能够引起严重的肠胃道感染。
通过对沙门氏菌进行生化鉴定，可以准确地确定其种属和特征，从而有助于制定有效的治疗方案和预防措施。
同时，这也为临床上的诊断和治疗提供了参考依据。
乙型副伤寒沙门菌生化鉴定
乙型副伤寒沙门菌生化鉴定
沙门菌属（Salmonella）是一类革兰氏阴性杆菌，其中包括乙型副伤寒沙门菌（Salmonella typhi）。
生化鉴定是通过对菌株在特定条件下的生化反应进行观察和测定，来确定细菌属种的一种方法。
以下是乙型副伤寒沙门菌生化鉴定的一些常见步骤和反应：
1.肠杆菌科的鉴定：通过常规方法，首先将细菌鉴定为肠杆菌科
（Enterobacteriaceae）成员。
2.气体生成反应：乙型副伤寒沙门菌通常会在肠杆菌科的气体生
成反应中产生气体，例如在Triple Sugar Iron Agar（TSI）培养
基上，乙型副伤寒沙门菌产生气体的反应为气体产生、葡萄糖
发酵，而乳糖和蔗糖不发酵。
3.硫化物产生：乙型副伤寒沙门菌通常能够产生硫化物，这可以
在Kligler Iron Agar（KIA）培养基上观察到。
乙型副伤寒沙门菌
在KIA上的反应为气体产生、葡萄糖和乳糖发酵，并产生硫化
物，而蔗糖不发酵。
4.尿素分解：乙型副伤寒沙门菌通常不能分解尿素。
5.麦尔加亮蓝（Malachite Green）试验：这是一种用于检测沙
门菌的方法。
在该试验中，沙门菌产生麦尔加亮蓝的颜色反应。
请注意，生化鉴定方法可能因实验室和使用的培养基而有所不同。
此外，现代分子生物学技术，如基因测序，也成为鉴定细菌属种的重要工具。
因此，在进行细菌鉴定时，通常需要结合多种方法来确保准确性。
如果你有具体的实验室样品，建议向专业的微生物实验室寻求
帮助。
沙门氏菌的实验报告
一、实验目的1. 学习沙门氏菌的分离方法。
2. 掌握沙门氏菌的鉴定技术。
3. 了解沙门氏菌的生物学特性。
二、实验原理沙门氏菌是一种革兰氏阴性杆菌，广泛存在于动物和人类肠道中。
沙门氏菌可以引起多种人类和动物疾病，如食物中毒、败血症等。
本实验通过分离和鉴定沙门氏菌，旨在了解其生物学特性，为食品安全和疾病防治提供依据。
三、实验材料1. 实验动物：小鼠。
2. 实验试剂：生理盐水、营养琼脂、麦康凯琼脂、革兰氏染色液、沙门氏菌诊断血清等。
3. 实验仪器：恒温培养箱、显微镜、离心机、高压灭菌器等。
四、实验方法1. 样品采集：采集疑似感染沙门氏菌的小鼠粪便、血液等样品。
2. 样品处理：将采集到的样品加入适量生理盐水，充分振荡，制成10^-1、10^-2、10^-3等不同稀释度的样品。
3. 分离培养：将不同稀释度的样品分别接种于营养琼脂和麦康凯琼脂平板，在37℃恒温培养箱中培养24小时。
4. 菌落观察：观察平板上的菌落特征，挑选典型的沙门氏菌菌落。
5. 革兰氏染色：将挑选出的菌落进行革兰氏染色，观察菌体形态。
6. 血清学鉴定：将革兰氏染色后的菌落进行血清学鉴定，确定菌种。
7. 生化试验：对鉴定出的沙门氏菌进行生化试验，进一步确定菌种。
五、实验结果1. 分离培养：在麦康凯琼脂平板上，观察到典型的沙门氏菌菌落，菌落呈红色，周围有透明圈。
2. 革兰氏染色：革兰氏染色结果显示，菌体呈革兰氏阴性，呈短小杆菌。
3. 血清学鉴定：血清学鉴定结果显示，该菌为鼠伤寒沙门氏菌。
4. 生化试验：生化试验结果显示，该菌能发酵葡萄糖、乳糖，不发酵蔗糖，不产生硫化氢，不形成吲哚。
六、实验讨论1. 本实验通过分离和鉴定沙门氏菌，成功从疑似感染小鼠样品中分离出鼠伤寒沙门氏菌。
2. 鼠伤寒沙门氏菌是一种常见的食源性病原菌，可引起人类和动物的食物中毒、败血症等疾病。
3. 实验过程中，要注意无菌操作，避免污染，确保实验结果的准确性。
七、实验结论1. 沙门氏菌可通过分离培养、革兰氏染色、血清学鉴定等方法进行鉴定。
实验五 食品中沙门氏菌的检验
实验五食品中沙门氏菌的检验一、实验目的要求1、了解食品的质量与沙门氏菌检验的意义。
2、掌握沙门氏菌的生物学特性。
3、掌握沙门氏菌检验的生化试验的操作方法和结果的判断。
4、掌握沙门氏菌属血清学试方法。
5、掌握食品中沙门氏菌检验的方法和技术。
二、原理沙门菌属是一大群寄生于人类和动物肠道，其生化反应和抗原构造相似的革兰氏阴性杆菌。
种类繁多，少数只对人致病。
其他对动物致病，偶尔可传染给人。
主要引起人类伤寒，副伤寒以及食物中毒或败血症。
在世界各地的食物中毒中，沙门氏菌食物中毒常占首位或第二位。
食品中沙门氏菌的检验方法有五个基本步骤：1 前增菌；2 选择性增菌；3 选择性平板分离沙门氏菌；4 生化试验，鉴定到属；5 血清学分型鉴定。
目前检验食品中的沙门氏菌是按统计学取样方案为基础，25g食品为标准分析单位。
三、试剂和仪器（一）最先准备的器材规格名称数量用途1、500ml广口瓶1个稀释样品2、500ml三角瓶1个制缓冲蛋白胨水3、250ml三角瓶8个制增菌液、培养基4、15×150mm试管18支制三糖铁培养基和PH7.2尿素5、13×130mm试管30支制蛋白胨水等6、1ml移液管5支7、10ml移液管 2 支8、直径为90 mm平皿12套制BS、SS平板9、250ml量筒1支（二）应灭菌的其它器材剪刀1把不锈钢汤匙1把称量纸适量（三）应准备的培养基和试剂培养基总量所用容器1.缓冲蛋白胨水(BP)：1瓶225ml/瓶500ml三角瓶2.氯化镁孔雀绿(MM)增菌液：1瓶100ml/瓶250ml三角瓶3.亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液：1瓶100ml/瓶250ml三角瓶4.亚硫酸铋琼脂(BS)：4皿1瓶60ml/瓶250ml三角瓶5.SS琼脂：6皿1瓶100ml/瓶250ml三角瓶6.三糖铁琼脂：6支6ml/支 40 ml 15×150mm试管7.尿素琼脂(pH7.2)：6支4ml/支 25 ml 15×150mm试管8.蛋白胨水：6支2ml/支 20 ml 13×100mm试管9.氰化钾(KCN)培养基：6支4ml/支 30 ml 13×130mm试管10.氨基酸脱羧酶试验培养基（赖氨酸）：6支1ml/支 10 ml 13×130mm试管11.氨基酸脱羧酶试验培养基（不含赖氨酸）：6支 1ml/支 10 ml 13×130mm试管12.沙门氏菌因子血清：多价血清；11种因子血清。
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沙门氏菌生化试验判定步骤
三糖铁琼脂原理分析：本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。
用于观察细菌对糖的利用和硫化氢（变黑）的产生。
该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。
而发酵乳糖的细菌(e.coli)，则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色。
如培养基接种后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀。
底层产酸：是因为细菌分解糖类物质使酚红退色变黄。
斜面产碱，低层产酸：是细菌分解葡萄糖(不能分解乳糖和蔗糖),由于量较少进而分解蛋白胨而产碱变红。
因为底层是厌氧环境，葡萄糖分解慢，２４小时培养后还没分解蛋白胨产碱；而斜面是需氧环境分解较快，一般８小时左右就把葡萄糖分解完（此时斜面也是酸性），但继而分解蛋白胨产碱，斜面又转为碱性。
2－志贺氏菌：都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，
不产生H2S。
4－大肠杆菌：能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳糖，不产
生H2S。
3－沙门氏菌：能分解葡萄糖，不发酵乳糖，大多数产生H2S，多
数产气。
赖氨酸脱羧酶试验
1、试验管及对照管均要加一层约10mm厚的灭菌石蜡或矿物油以覆盖表面，此可使培养基中的溶解氧通过细菌消耗掉，并控制培养基的pH。
2、阳性试验管培养初期（10—12h）因发酵葡萄糖产酸变黄，继续培养由于氨基酸脱羧产生胺类而使培养基由酸变碱，故又由黄变为紫色。
阴性试验管则始终呈黄色。
氨基酸脱羧酶试验(1)原理：某些细菌可产生氨基酸脱羧酶使氨基酸脱羧生成胺和二氧化碳。
由于胺的生成使培养基变为碱性，可用指示剂指示出来。
(2)方法：将待检菌分别接种于1支氨基酸（赖氨酸，鸟氨酸或精氨酸）脱羧酶试验管和1支氨基酸脱羧酶对照管（无氨基酸），各覆盖至少0.5cm高度的无菌石蜡油，35℃孵育1~4d，观察结果。
(3)结果：若为溴甲酚紫指示剂，则试验管紫色为阳性，黄色为阴性，对照管应为黄色。
(4)应用：主要用于某些细菌种间的鉴别，如赖氨酸用于产气肠杆菌（阳性）与阴沟肠杆菌（阴性）；鸟氨酸用于阴沟肠杆菌（阳性）和克雷伯菌（阴性）；精氨酸用于阴沟肠杆菌（阳性）和产气肠杆菌（阴性）等。
精氨酸双水解酶试验 (1)原理：精氨酸经两次水解后,生成鸟氨酸、氨及二氧化碳。
鸟氨酸又在脱羧酶的作用下生成腐胺。
氨及腐胺均为碱性物质，故可使培养基变碱，用指示剂指示出来。
(2)方法：将待检菌接种于试验培养上，置35℃孵箱孵育1~4d，观察结果。
(3)结果：溴甲酚紫指示剂呈紫色为阳性，酚红指示剂呈红色为阳性。
黄色为阴性。
(4)应用：主要用于肠杆菌科及假单胞菌属的鉴定。
非发酵菌：是一大群不发酵葡萄糖或以氧化形式利用糖、需氧或兼性厌氧、无芽孢的革兰阴性杆菌。
表2
进行判定。
反应3：补做ONPG。
ONPG为阴性，同时赖氨酸脱羧酶为阳性；赖氨酸脱羧酶为阴性时为甲型副伤寒沙门氏菌。
必要时按表4进行沙门氏菌生活群的鉴别。