上海交大网络课程检验微生物讲义4培训讲学
《微生物学》讲义
微生物学第一章第一章绪言一、一、微生物概述1、1、什么是微生物微生物(microbe，microorganism)通常是描述一切不借助显微镜用肉眼看不见的微小生物。
这类微生物包括病毒、细菌、古菌、真菌、原生动物和某些藻类。
微生物是指大量的、极其多样的、不借助显微镜看不见的微小生物类群的总称。
因此，微生物通常包括病毒、亚病毒（类病毒、拟病毒、朊病毒）、具原核细胞结构的真细菌、古生菌以及具真核细胞结构的真菌（酵母、霉菌、蕈菌等）、原生动物和单细胞藻类，它们的大小和特征见表1.1所示。
但是有些例外，如许多真菌的子实体、蘑菇等常肉眼可见；相同的，某些藻类能生长几米长。
一般来说微生物可以认为是相当简单的生物，大多数的细菌、原生动物、某些藻类和真菌是单细胞的微生物，即使为多细胞的微生物，也没有许多的细胞类型。
病毒甚至没有细胞，只有蛋白质外壳包围着的遗传物质，且不能独立存活。
表1.1 微生物形态、大小和细胞类型2、2、生物中哪些是微生物物生非细胞生物病毒、亚病毒细胞生物原核生物真细菌、古细菌真核生物生动物真菌、单细胞藻类、原3、3、微生物的特点a a 个体微小，结构简单在形态上，个体微小，肉眼看不见，需用显微镜观察，细胞大小以微米和纳米计量。
b b 繁殖快生长繁殖快，在实验室培养条件下细菌几十分钟至几小时可以繁殖一代。
c c 代谢类型多，活性强。
d d 分布广泛有高等生物的地方均有微生物生活，动植物不能生活的极端环境也有微生物存在。
e e 数量多在局部环境中数量众多，如每克土壤含微生物几千万至几亿个。
f f 易变异相对于高等生物而言，较容易发生变异。
在所有生物类群中，已知微生物种类的数量仅次于被子植物和昆虫。
微生物种内的遗传多样性非常丰富。
所以微生物是很好的研究对象，具有广泛的用途。
二、二、微生物学的重要性微生物与人类生活所有方面紧密联系，下面仅列出几个：1、1、环境微生物在碳循环、氮循环和磷循环(地球化学循环)中承担主要作用，构成生物体的所有基本成分。
微生物实验培训课件
，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。 • 2.采样方法 • 将已制备好的培养皿按要求放置，打开培养皿盖，使培养
基表面暴露0.5h，再将培养皿盖盖上后倒置。 • 2.2.培养 • 全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。在
最少采样点数目
同时满足最少平皿数
采样点的布置
• 采样点的位置可以同悬浮粒子测试点。 • a）工作区采样点的位置离地0.8m～1.5m
左右（略高于工作面）。 • b）可在关键设备或关键工作活动范围处增
加采样点。 • 采样点位置的详细规则见附录B（标准的附
录）。
采样点布置
环境检测参照标准
微生物实验室管理
四、培养基管理
• 1、培养基的制备 • 2、培养基的贮藏 • 3、培养基的质量控制实验
四、培养基管理
• 灵敏度检查 （中国药典2019）
• 无菌检查（ISO11737.2:2009或 GBT20193.2-2019）
五、 无菌操作
• 定义：是指在执行实验过程中，防止一切微生物 侵入机体和保持无菌物品及无菌区域不被污染的 操作技术和管理方法。无菌操作技术是微生物实 验的基本技术，是保证微生物实验准确和顺利完 成的重要环节。
• 无菌操作技术主要包括两方面：创造无菌的培养 环境及在操作和培养过程中防止一切其它微生物 的侵入。创造无菌的培养环境包括提供密闭的培 养容器、培养容器的灭菌、培养基的灭菌等；防 止一切其它微生物的侵入的措施包括紫外线杀菌、 甲醛熏蒸、超净台的消毒与检测、操作工具、器 皿灭菌、操作方法等。
微生物实验前准备
菌落计数。 • 4.注意事项 • 4.1测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。 • 4.2采取一切措施防止人为对样本的污染。 • 4.3对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。 • 4.4由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背
《微生物检验技术》课件
食品中常见的微生物种类：细菌 、霉菌、酵母菌等。
微生物在食品中的分布特点：食 品的种类、加工方式、储存条件 等对微生物的分布有显著影响。
微生物的来源：食品生产、加工 、运输、储存等环节中可能引入
的微生物。
食品中微生物的检测方法与操作
01
02
03
04
传统检测方法
培养法、镜检法等。
现代检测技术
免疫分析法、PCR技术、生物 传感器等。
消毒灭菌效果的监测
对医院环境、医疗器械等进行 微生物学检测，评估消毒灭菌 效果，确保医疗安全。
抗菌药物敏感性试验
通过抗菌药物敏感性试验，指 导临床医生合理选用抗菌药物 ，降低耐药性的产生。
感染暴发调查
在发生医院感染暴发时，进行 流行病学调查和溯源分析，查 找感染源和传播途径，采取有
效控制措施。
疫苗的研究与开发
病原微生物的分离与鉴定
从患者体内分离出病原微生物，并进行鉴定，为疫苗的研制提供基础 资料。
疫苗株的筛选
通过微生物检验技术对病原微生物进行筛选，选择适合作为疫苗株的 菌株或病毒株。
疫苗制备过程的监控
在疫苗制备过程中，对原材料、半成品和成品进行质量检验和安全性 评估，确保疫苗的安全性和有效性。
疫苗效果评价
微生物的生长与繁殖
微生物的生长
微生物生长是指微生物细胞数目的增加和质量的增加。其生 长过程分为迟缓期、对数生长期、稳定期和衰亡期。
微生物的繁殖
微生物繁殖是微生物生长的必然结果，繁殖方式包括二分裂 、出芽生殖、孢子生殖等。繁殖过程中，微生物的遗传物质 会复制并传递给后代。
微生物的生理生化特性
微生物的代谢
利用微生物降解污染物，处理废水、废气等，降低环境污染。
医学检验微生物ppt课件完整版x
个人防护措施及注意事项说明
实验服与护目镜
进入实验室需穿着实验服，佩戴合适的护目镜， 防止试剂飞溅或粉尘刺激。
手套与口罩
根据实验需要选择合适的手套和口罩，避免皮肤 接触有害试剂或吸入有害气体。
实验操作规范
规范实验操作，避免产生气溶胶或飞溅物，减少 交叉污染的风险。
实验废弃物处理及环保要求讲解
废弃物分类处理
医学检验微生物ppt课件完 整版x
目录
• 微生物学基础 • 医学微生物学概述 • 常见病原微生物介绍 • 微生物检验技术与方法 • 临床标本中常见病原微生物检测实例分析 • 实验室安全与防护措施
01 微生物学基础
微生物定义与分类
微生物定义
微生物是一类形体微小、结构简单、 必须借助光学显微镜或电子显微镜 才能看到的微小生物。
微生物生长与繁殖
01
微生物营养
微生物从外界环境中摄取和利用营养物质的过程称为营养。微生物营养
类型有光能自养型、光能异养型、化能自养型和化能异养型四类。
02 03
微生物生长
微生物在适宜的环境条件下，通过摄取营养物质、合成细胞物质、增加 细胞数量的过程称为生长。生长曲线可分为迟缓期、对数期、稳定期和 衰亡期四个时期。
通过对微生物基因组进行测序和 分析，了解其基因组成和功能， 为微生物的鉴定和分型提供准确
依据。
基因芯片技术
将大量特异性基因探针固定在芯 片上，通过与待测微生物DNA杂
交来鉴定其种类和型别。
宏基因组学技术
通过对环境中所有微生物的基因 组进行高通量测序和分析，了解 微生物群落的组成和功能，为环 境微生物检测和生态学研究提供
尿液标本中常见病原微生物检测实例分析
尿常规检查
微生物检验技术培训PPT课件
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二、无菌检查
4.供试品的无菌检查
•无菌检查法包括
• 薄膜过滤法 • 直接接种法
•只要供试品性质允许，应采用薄膜过滤法。 •供试品无菌检查所采用的检查方法和检验条件应与方法适 用性试验确认的方法相同。 •无菌试验过程中，若需使用表面活性剂、灭活剂、中和剂 等试剂，应证明其有效性，且对微生物无毒性。
3d
培养基
生孢梭菌
空白
1支
枯草芽孢杆菌
各2支 胰酪大豆胨液体
白色念珠菌 黑曲霉
培养基
20～25℃
5d
【10版：改良
马丁培养基】
结空果白判定:
1支
空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏
度检查符合规定。
16
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二、无菌检查
3.方法适用性试验（方法验证试验）
•当 进 行 产 品 无 菌 检 查 法 时 ， 应 进 行 方 法 适 用 性 试 验 ， 以 确 认 所 采 用 的 方 法 适 合 于 该产品的无菌检查。若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，应重新进 行方法适用性试验。 •验 证 时 ， 按 “ 供 试 品 的 无 菌 检 查 ” 的 规 定 及 下 列 要 求 进 行 操 作 。 对 每 一 试 验 菌 应 逐一进行验证。 •方法适用性试验也可与供试品的无菌检查同时进行 。
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第24页/共80页
二、无菌检查
4.供试品的无菌检查
•结 果 判 断
• 当符合下列至少一个条件时方可判试验结果无效： • （1）无菌检查试验所用的设备及环境的微生物监控结果 不符合无菌检查法的要求。 • （2）回顾无菌试验过程，发现有可能引起微生物污染的 因素。 • （3）供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证是因无菌 试验中所使用的物品和（或）无菌操作技术不当引起的。
上海交通大学微生物课件第1章
法国人巴斯德（Louis Pasteur） 德国人柯赫（Robert Koch）
2021/2/23 （1822～1895）
（ 1843～1910）
二、微生物的发现和微生物学的建立与发展
（二）微生物学的奠基
1.巴斯德 (1) 发现并证实发酵是由微生物引起的； 化学家出生的巴斯德涉足微生物学是为了治疗“酒病”和“蚕病 (2) 彻底否定了“自然发生”学说； 著名的曲颈瓶试验无可辩驳地证实，空气内确实含有微生物， 是它们引起有机质的腐败。 (3) 免疫学——预防接种 首次制成狂犬疫苗 (4) 2巴021/2斯/23 德消毒法：60～65℃作短时间加热处理，杀死有害微生物
抗热： 有些细菌的芽孢，需加热煮沸8小时才被杀死；
抗寒：有些微生物可以在―12℃ ~ ―30℃的低温生长； 抗酸碱：细菌能耐受并生长的pH范围：pH 0.5 ~ 13； 耐渗透压：蜜饯、腌制品，饱和盐水（NaCl, 32%)中
都有微生物生长； 抗压力：有些细菌可在1400个大气压下生长；
2021/2/23
很多细菌都可以非常方便地进行人工培养！
数量大：
在自然界中（土壤、水体、空气，动植物体内和体表） 都生存有大量的微生物！
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级界宽：
Woese三原界分类系统
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变异易：
SARA病毒 流感病毒 细菌耐药性
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细菌抗药性的产生：
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抗（逆）性强：
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个体小:
测量单位：微米、纳米 病毒：纳米 球菌：直径（微米） 杆菌：长、宽（微米） 当然也有很大的肉眼可见的微生物：蘑菇
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食谱广：
微生物获取营养的方式多种多样，其食谱之广 是动植物完全无法相比的！
微生物知识及消毒与灭菌知识培训 PPT
吸收多、转化快
微生物有惊人的繁殖速度,大多数微生物几十 分钟内就能够繁殖一代,如细菌一般每20~30分 钟既可分裂一次;
微生物的食谱特别广泛,凡是动植物能利用的 营养,微生物都能利用,大量的动植物不能利用 的物质,甚至剧毒的物质,微生物照样能够视为 美味佳肴。如大肠杆菌在合适条件下,每小时 能够消耗相当于自身重量2000倍的糖,而人体 则需要40年之久。
碳源:碳源是构成细胞的重要物质。有些微生物 的碳源必须来自有机碳化合物如糖、蛋白质、 脂肪、有机酸等(同时利用其化学能),属异养型; 有些微生物不需有机碳化合物,以CO2为碳源, 属自养型(分为光能自养型和化能自养型)。
氮源:氮是组成蛋白质和核酸的重要元素。
无机盐类:细菌所需无机盐包括磷、硫、镁、 铁、钾、钠、钙、氯、锰、锌、钴、铜等。 其中磷、硫、镁、钾、钠、铁需要量较多,其 他只需微量。
微生物知识及消毒与灭菌知识培训
我们所生活的环境中,到处都存在着大量 的微生物。在一般空气中,微生物达800~3500 个/m3,在土壤中达1~500×108个/g,在严重污 染的水中可达107个/ml。(饮用水要求细菌总 数≤100个/ml,大肠杆菌≤3个/ml。经水塔或 贮水池贮存后,短期内可繁殖至105~106个 /ml。)人的头皮上有140万个/cm2,两手上约有 4~40万个,1g指甲污垢有38亿个,1g粪便可达 10~1000亿个。能够说微生物是无处不在,无 处不有。许多往常被人们认为是极端(高温、 高压、强酸、强碱、低温等)甚至是致死的环 境,现在已发现生活着各种类型的微生物(称 为极端微生物)。事实说明,微生物有特别顽 强的生存、繁殖和变异能力来习惯环境。
概念
灭菌——使达到无菌状态的方法(GMP指 南)。用物理或化学方法杀灭传播媒介上 所有的微生物,使其达到无菌(GB)。通常 是指杀灭或除去全部活的微生物(包括繁 殖体和芽孢)。
微生物检验PPT培训课件
检测特定生物有机体之间是否存在 亲缘关系
1.待检菌株的DNA双链 2.用碱或热变性使双链解开（DNA的变性） 3. 将单链DNA在硝酸纤维素膜上的固定 4.加放射性标记的DNA或RNA 5.保温（一般是66℃，24h）进行互补碱基配
应 用： (1)检测特定生物有机体之间是否存在亲缘关系； (2)用来揭示核酸片段中某一特定基因的存在与否、
拷贝数及表达丰度。
杂交的类型
（1）按杂交对象：
DNA-DNA RNA-DNA
（2）按作用环境：
固相杂交：是将参加反应的一条核酸链先固定在固体支 持物上，一条反应核酸（标记探针）游离在溶液中。
二、核酸探针的工作原理
两条碱基互补的DNA链在适当条件下按碱 基配对原则形成杂交DNA分子。根据DNA遗 传序列的相对稳定性和互补原则，用已知特异 的碱基序列作成有标记的一小段单链(或核苷 酸序列)与被检测材料进行分子杂交。如果被 检测材料中病原的遗传序列与探针具有互补的 碱基序列，就会形成杂交双链，从而证明它们 之间具有一定程度的同源性。（p108）
感器的探针利用
第二节 PCR技术检测微生物
一、 PCR反应的基本原理
聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)就是模板DNA、引物以及四种脱氧核糖核 苷三磷酸(dNTPs )在DNA聚合酶的催化作用下 所发生的酶促聚合反应，PCR反应是由变性--退 火--延伸三个基本反应步骤构成的。
对（杂交） 6.用缓冲溶液洗脱未杂交的部分 7.测定膜的放射性，计算杂交率
微生物限度检查法ppt课件
恒温培养箱
30～35℃ 36±1℃
霉菌培养箱
25～28℃
恒温水浴箱
45±1℃
净化工作台
生物显微镜 1500X
体视显微镜或放大镜
电冰箱
电热干燥箱 250～300℃
高压蒸汽消毒器
电子天平或药物天平 感量0.1g
匀浆仪或研钵
锥形瓶
100ml，250m. l，500ml，1000ml
直形吸管
1ml，10ml
凡能从药品、瓶（外盖内侧及瓶口周围）外观看出发霉、生虫以及 变质的药品不必再继续检验，应直接判为不合格。不能以有时外观 有上述情况而检验内容为合格，来判定该药品合格，因为瓶口染菌， 对服用者是不安全的，如自瓶口直接服药时，所染菌随之进入人体， 同时发现瓶口一旦染菌，瓶内药液最终要受到污染。
检验量与抽样量是两种不同范畴的量，后者指从全批产品 .
1．1972年开展此项工作 2．1978年颁布我国第一个“药品卫生标准” 3．1986年颁布修改后的“药品卫生标准”，1987年12月1日起供 内部执行 4．1989年下达“药品卫生标准补充规定和说明” 5．1990年版药典第二增补本收载了20个化学药品种的微生物限 度标准规定，与国际惯例一致 6．1995年版药典少数几个剂型（滴眼剂等）收载了微生物限度。 规定按微生物限度检查法检查不得有菌生长 7．2000年版药典按剂型、中西药分类规定微生物限度，还对几 个生化药品在各论中项下作了具. 体规定
活体特征：药典中以活的微生物作为检验对象也是独特特性。
由于以上特殊性，抽样对微生物限度检测值将产生很大的影响。当 药品无污染时，抽样将不影响检验，当批产品存在污染品时，抽样 的样本是随机变量，抽样的影响如下：
抽样方法：不同的抽样方法对批产品总体的代表性是不同的，测定 值也是有差异的。如抽取可疑样品与随机抽样，其检出率与数字显 然前者大于后者。
上海交大微生物学专业课程设置
上海交大微生物学专业课程设置微生物学专业是现代生命科学领域中的重要学科之一，上海交通大学作为国内一流高校，注重培养具备深厚专业知识和扎实实践能力的微生物学人才。
为此，在微生物学专业课程设置方面，上海交大积极创新，努力提高教学质量和培养效果，以满足社会对人才的需求。
首先，微生物学专业课程设置旨在培养学生掌握微生物学的基本理论和实验技能。
学生将系统学习细菌学、真菌学、寄生虫学、病毒学等专业核心内容，深入了解微生物的结构、功能、分类以及相关疾病的预防与控制。
课程内容紧密联系实践，通过实验课程，学生将学习到微生物学实验的操作技巧，培养动手能力和团队合作精神。
其次，微生物学专业课程设置注重培养学生的创新思维和科研能力。
学生将学习科研课程，了解微生物学的前沿发展和研究方法，培养学生批判性思维和科学问题解决能力。
此外，学生将有机会参与科研项目，并进行科研实训，锻炼实际操作和科学探究的能力。
最后，微生物学专业课程设置还注重培养学生的综合素质和社会责任感。
学生将学习相关的公共卫生知识和法律法规，了解微生物与人类健康的关系，并深入探讨微生物学的伦理和安全问题。
此外，还将进行学科交叉课程，培养学生的人文素养和跨学科的综合能力。
总的来说，上海交大微生物学专业课程设置旨在培养具备扎实的专业知识、具备创新能力和团队合作精神的微生物学人才。
通过全面的课程设置和实践教学，学生将具备从事微生物学研究、教学和专业技术工作的能力，为促进社会的健康发展和科学进步做出贡献。
以上即是上海交大微生物学专业课程设置的简要介绍。
期望这些内容能够为广大学子了解微生物学专业课程提供参考，并对将来的学习和职业规划有所帮助。
《微生物检测培训》课件
常见微生物检测方法
本节将详细介绍微生物快速检测、传统检测方法和分子生物学检测方法，以及它们各自的优缺点。
1 快速检测方法
探讨快速微生物检测方法的原理和应用领域。
2 传统检测方法
介绍传统的微生物检测方法，如培养和染色。
3 分子生物学检测方法
讲解分子生物学技术在微生物检测中的作用。
微生物检测实验操作
本节将解释如何正确进行微生物检测实验，包括样品采集和处理、实验室安全措施以及实际的培养 和检测步骤。
样品采集和处理
学习如何采集和处理微生物样品以确保准确的检测结果。
2
实验室安全措施
了解在微生物实验室中必须遵循的安全措施。
3
微生物培养和检测实验步骤
深入了解微生物培养和检测的各个步骤，包括培养基和仪器使用等。
《微生物检测培训》PPT 课件
本课程将为您介绍微生物检测的基本知识和实验操作。通过学习本课程，您 将掌握微生物分类、常见检测方法以及实验室安全措施。
课程概述
在本节中，您将了解本课程的背景、学习目标以及课程内容。
课程背景
介绍微生物检测在当今科 学和医学领域中的重要性。
学习目标
明确课程学习目标，为学 员提供明确的学习方向。
课程总结
在最后一节中，总结课程的重点要点，并强调微生物检测技术的重要性和应用前景。
检测技术的
探索微生物检测技术在各行业中的应用领域和未来发展趋势。
课程内容
概括课程涵盖的基本知识 和实践操作。
微生物检测基础知识
这一部分将介绍有关微生物的基本定义和分类，以及常见的微生物检测方法和微生物生长技术。
微生物的定义和分 类
解释微生物的定义，以及它 们如何根据特定特征分类。
微生物限度检验员培训(2024)
采用自动化仪器对微生物进行检测和计数，提高 检测效率和准确性。
2024/1/29
快速检测法
利用免疫学、分子生物学等技术，实现在短时间 内对微生物的快速检测和鉴定。
检验原理
根据微生物的生理生化特性，选择适当的培养基 和培养条件，使目标微生物得以生长并形成可见 的菌落；通过菌落计数和形态观察，判断微生物 的种类和数量是否符合规定标准。
去除杂质
对采集的样品进行初步处理，去除其 中的杂质和异物。
均质化处理
稀释处理
对于浓度过高的样品，需要进行适当 的稀释处理，以避免对检验结果的影 响。
对于不均匀的样品，需要进行均质化 处理，以保证后续检验的准确性。
2024/1/29
17
样品保存条件及期限
保存条件
根据样品的性质和检验要求，选 择合适的保存条件，如温度、湿
2024/1/29
25
审核流程及责任人
审核流程
微生物限度检验报告需经过初审、复审和终 审三个环节。初审由实验人员负责，对实验 数据和结果进行初步核对；复审由实验室负 责人或指定人员进行，对报告内容进行全面 审查；终审由质量管理部门或相关领导进行 ，对报告进行最终审批。
2024/1/29
责任人
各审核环节的责任人应认真履行职责，对报 告内容进行严格把关。实验人员应对实验数 据和结果的真实性、准确性负责；实验室负 责人应对报告的完整性和规范性负责；质量 管理部门或相关领导应对报告的合规性和科 学性负责。同时，各责任人之间应相互协作
考核评估方式及标准
理论考试
采用闭卷形式，主要考察学员对微生物基础知识、检验方法和相关 法规的掌握情况。
实践操作考核
要求学员在规定时间内完成无菌操作、微生物限度检验等实际操作 ，评估其操作技能水平。
微生物基础知识培训(共44张PPT)
➢ 繁殖条件 沙门氏菌最适繁殖温度为37℃，在20℃以上即能大
量繁殖，因此，低温储存食品是一项重要预防措施 。
沙门氏菌
➢ 污染渠道
沙门氏菌的来源主要是患病的人和动物，及人和动物 的带菌者，其中在肉类中最为多见。
球菌、类白喉杆菌
胃
正常一般无菌
肠道 类杆菌、双歧杆菌、大肠杆菌、厌氧性链球菌、粪链球
菌、 葡萄球菌、白色念球菌、乳酸杆菌、变形杆菌、破
伤风杆菌、产气荚膜杆菌等
鼻咽腔 甲型链球菌、奈氏球菌、肺炎球菌、流感杆菌、乙型链
球菌、葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、变形杆菌等
眼结膜 皮表葡萄球菌、结膜干燥杆菌、类白喉杆菌等
➢ ④生长旺，繁殖快：微生物有惊人的繁殖速度，大多数微生物几十
分钟内就可以繁殖一代
➢ ⑤适应性强，易变异（耐药性产生的原因）
二、微生物的分布
1.微生物在自然界的分布：
➢ 土壤：是微生物生活的最适环境，土壤中的微生物又可分为 如下几类：
细菌：占土壤微生物总数的70%~90%。 放线菌：占土壤中微生物含量的5%~30%。
人不体同微 洁➢生净物度污分级布别情的染况房间：药应有品足够的的压细差 菌：常见污染药品的细菌是一些生命力 较强的细菌，如：葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、 酵母菌：普通土壤中酵母菌含量很少。
病毒与人类的关系极为密切，人类的传染病约75％是由病毒引起的。 酵母菌：普通土壤中酵母菌含量很少。
大肠菌群为枯人和动草物肠杆道中菌的常及居菌一，在一些定条霉件下菌可引，起肠道抵外感抗染。力弱的细菌一般不易造成
微生物基础知识的培训教程
二、微生物定义
微生物(microorganism) 是指存在于自然界的一大群形体微小、结构 简单、进化低级、肉眼直接看不见，必须借 助光学显微镜或电子显微镜放大数百倍、数 千倍，甚至数万倍才能观察到的微小生物。
二、微生物的特征
小（形体微小）：μm（微米）级在光学显微 镜下可见、nm（纳米）级在电子显微镜下可 见 简（结构简单）：单细胞、简单的多细胞、 非细胞 低（进化低级）：原核类、真核类、非细胞 类
三、微生物的五大共性
1、体积小，面积大 为五大共性的基础。小体积大面积系统必然有一个 巨大的营养物吸收面、代谢废物的排泄面、环境信 息的接收面。 2、吸收多，转化快 为其高速生长繁殖和产生大量代谢产物提供了充分 的物质基础。 3、生长旺，繁殖快 微生物具有极高的生长和繁殖速度。
三、微生物的五大共性
细菌的结构：
细胞质：无色透明，呈粘液状。其内含有某 些结构和内含物。 细胞核：细菌的核位于细胞质内，没有核膜、 核仁，没有固定形态，结构也很简单，因而 称之为原核。 荚膜：有些细菌在一定营养条件下，可向细 胞壁表面分泌一层松散透明、粘度极大、粘 液状或胶质状的物质称为荚膜。
细菌的结构：
（一）5个基本概念
⑶ 消毒：杀灭物体上病原微生物的方法。并 不一定杀死含芽孢的细菌或非病原微生物。 用来消毒的药品叫消毒剂。一般消毒剂在常 用浓度下只对细菌的繁殖体有效，对其芽孢 则需提高消毒剂的浓度和延长作用时间。
（一）5个基本概念
⑷ 无菌：不存在活菌。
⑸ 灭菌：杀灭物体上所有微生物的方法。比 消毒要求高，它杀灭了包括细菌芽孢在内的 全
2、口腔 口腔中有很多微生物。常见的主要有唾液链 球菌、溶血链球菌、乳酸杆菌、流感杆菌、 类白喉棒杆菌等，它们组成口腔内的正常微 生物群落。
微生物基础知识培训课件课件
③ 1g/m3 熏蒸 ➢ 乳酸： ① 0.33~1mol/L熏蒸或与等量苯酚合用熏蒸
② 1~1.5ml/m3 ， 喷雾，用于空气消毒，有强杀菌作用 熏蒸，密闭12h以上 ➢ 麝香草酚：5%麝香草酚溶于50%乙醇， 喷洒墙面、地面，杀霉菌
道应当满足产品要求，并定期清洗、消毒。
药典明确规定了纯化水、注射用水的微生物限度。
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人
人是洁净室最大的污染源，占90%左右。 一般男性每人每分钟向周围排放1000个以上的含菌粒子，女
性为750个以上。穿无菌服时，静止时的发菌量为10~300个/min， 一般活动时发菌量为150~1000个/min，行走时发菌量为 900~2500个/min。咳嗽一次发菌量为70~700个/min，喷嚏一次为 4500-150000个/min。所以在洁净室中，人的数量和活动应有特别严
格的限制。
人员污染的途径和方式 人员卫生 人员进出洁净区的程序
人员在洁净区的活动
人员卫生
人的头发和皮肤：人的头皮上有140万个/cm2，两手上约有4~40万 个，1g指甲污垢有38亿个，1g粪便可达10~1000亿个。可以说微
生物是无处不在，无处不有。
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人员进出洁净区的程序
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三、微生物与人类的关系
微生物无处不在，我们无时不生活 在“微生物的海洋”中。
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微生物在哪里?
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土壤数亿/g细菌，土壤中的细菌总重量估计为：10034
× 10 12 吨； 每张纸币带细菌：900万 人体体表及体内存在大量的微生物： 皮肤表面：平均10万个细菌/平方厘米；
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第十三章弯曲菌属和螺杆菌属一、教学大纲要求（1）弯曲菌属的主要特点及分类、临床意义、细菌特性、实验室检查。
（2）螺杆菌属的主要特性、分类。
（3）幽门螺杆菌的临床意义、细菌特性、实验室检查。
二、教材内容精要（一）弯曲菌属1．弯曲菌属的主要特点及分类弯曲菌属(Campylobacter) 是一类呈逗点状或S形的革兰阴性杆菌，广泛分布于动物界，其中有些可引起动物和人类的腹泻、胃肠炎和肠道外感染。
目前弯曲菌属共有18个菌种和亚种，引起人类疾病的主要是空肠弯曲菌空肠亚种，其次是胎儿弯曲菌和大肠弯曲菌等。
2．细菌特性（1）形态染色本属细菌为革兰阴性无芽孢的弯曲短杆菌，不易染色，菌体弯曲呈S状或海鸥展翅状等，一端或两端各有一根鞭毛，运动活泼，暗视野显微镜下呈“投标样”运动。
（2）培养特性微需氧菌，最适生长环境是含氧气5％、二氧化碳10％、氮气85％；孵育温度通常取决于所需要分离的菌株，在不同的温度下培养基的选择性也不同，通常绝大多数实验室用42℃作为初始分离温度，这一温度对空肠弯曲菌、大肠弯曲菌的生长有利，相反其他菌株在37℃生长良好。
营养要求高，在普通培养基上不生长，分离弯曲菌常用的选择性培养基大多含有抗生素（主要为头孢哌酮），以抑制肠道正常菌群。
常用的有含血的Skirrow培养基、头孢哌酮-万古霉素-两性霉素琼脂培养基（CV A）和不含血的碳-头孢哌酮-去氧胆酸盐（CCDA）、碳基选择性培养基（CSM）和半固体动力培养基等。
（3）生化反应氧化酶和触酶阳性，可还原硝酸盐为亚硝酸盐，不分解和不发酵各种糖类，不分解尿素，具体生化反应见表13－1。
（4）抵抗力本属细菌的抵抗力弱，对一般消毒剂敏感，但耐寒，在4℃冰箱或水中可存活达4周。
表13-1 弯曲菌属的生化特征生化试验空肠弯曲菌空空肠弯曲菌多大肠弯曲菌胎儿弯曲菌胎胎儿弯曲菌性海鸥弯曲菌乌普萨拉弯曲豕肠炎弯曲菌唾液弯曲菌唾唾液弯曲菌牛唾液弯曲菌粪瑞士弯曲菌粘膜弯曲菌简明弯曲菌屈曲弯曲菌粪弯曲菌昭和弯曲菌肠亚种氏亚种儿亚种病亚种菌液生物型生物型生物型氧化酶+ V + + + + W + - - + - - - - - + 硝酸盐还原+ - + + + + + + + + + + + + + + +亚硝酸盐还原- - - - - - - - + + + ND + ++ +ND需H2- --- - - -V ----+ + ++ +脲酶- - - -- - V - - - - - + + + + +H2S - - - - - - - + + + + - + + + + +马尿酸盐水解+ V - - - - - - - - - - - - - -醋酸吲哚酚水解+ + + - - - + - - - - + - - + + +15℃生长- - - - - - - - - - - - - - - -25℃生长- - - + + - - + - - - - - - - - -42℃生长+ - + - - + + + + + + + + + + W +3.5%NaCl生长- - - - - - - - - + - V - - - - -1％甘油+ + + + - + V + + + + V + + + + V麦康凯培养基+ - + + + + - + + - + ND + + ND ND ND萘啶酸V S S V R R S R S R R S R R S S R头孢噻吩R S R S S R S S S S S S S R ND ND S 注：+，＞90％阳性；-，＜10％阳性；V，可变；ND，未定；W，反应较弱；S，敏感；R，耐药3．临床意义弯曲菌的传播途径主要为食物和水，传播方式多为经口传播，食用未煮熟的鸡、饮用未经处理的水和未经消毒的牛奶均可引起弯曲菌肠炎的发生。
本菌具有黏附定居和入侵上皮细胞的能力，通过产生的肠毒素、细胞毒素和内毒素等多种毒力因子致病，病变部位通常在空肠、回肠，也可蔓延至结肠。
空肠弯曲菌空肠亚种是弯曲菌中最重要也是最常见的的人体致病菌（占弯曲菌腹泻的80％～90％），腹泻是空肠弯曲菌感染最常见的临床表现。
除肠炎外，近年来也出现了空肠弯曲菌继发关节炎败血症、脑膜炎和格林巴利综合征。
GBS病人分离到的空肠弯曲菌大都具有特殊的血清型O:19，可与人体的神经组织发生交叉免疫反应而致病。
胎儿弯曲菌主要引起肠道外感染，其中胎儿亚种和猫、绵羊的感染性流产关系密切，较少引起人类感染，感染人体常引起全身症状。
4．微生物学检验（1）检验程序见图13-1。
血液、脑脊液卡-布运送培养基分离培养动力检查直接镜检（弯曲菌选择性培养基）7天后不生长弃去微需氧环境25℃、37℃、42℃48～72h可疑菌落+）报告图13-1 弯曲菌属的检验程序（2）标本采集可采集粪便、肛拭子及剩余食物，标本采集后应立即送检，或将标本接种于卡-布运送培养基中送检；对于高烧和患脑膜炎的病人，可于用药前抽取静脉血或脑脊液，注入布氏肉汤中送检。
（3）检验方法1）显微镜检查①悬滴法动力检查：显微镜下观察有无螺旋状或投标样运动，脑脊液标本经离心沉淀后再制成悬滴标本检查；②染色标本检查：取新鲜粪便或脑脊液离心沉淀物涂片、革兰染色，查找革兰阴性、弯曲呈S状或螺旋状杆菌，鞭毛染色见一端或两端单根鞭毛；2）分离培养可将标本直接接种于选择性培养基上，也可将标本过滤后培养，弯曲菌形成的菌落为灰色、扁平、表面湿润、圆形凸起、边缘不规则，常沿穿刺线蔓延生长的菌落，在血平板上不溶血。
本属细菌在布氏肉汤中呈均匀混浊生长。
培养时需注意气体环境和适合的温度，空肠弯曲菌最适的温度为42℃～43℃，胎儿弯曲菌在42℃不生长。
3）鉴定弯曲菌属的鉴定比较复杂，必须综合多种试验才能确定。
通常在弯曲菌选择培养基上氧化酶阳性、革兰染色阴性、弯曲呈S形或螺旋形的细菌初步鉴定为弯曲菌，进一步的鉴定试验有：①马尿酸盐水解试验：本试验是鉴别空肠弯曲菌空肠亚种和多氏亚种的重要试验，在弯曲菌选择性培养基上经42℃孵育，氧化酶阳性、有特征性的弯曲菌形态、辅以马尿酸盐试验阳性即可报告为空肠弯曲菌空肠亚种；②醋酸吲哚水解试验：本试验空肠弯曲菌为阳性而胎儿弯曲菌为阴性；③萘啶酸、头孢噻吩耐药试验：空肠弯曲菌和大肠弯曲菌对萘啶酸敏感，对头孢噻吩耐药；胎儿弯曲菌对萘啶酸耐药而对头孢噻吩敏感。
近来出现了对萘啶酸耐药的空肠弯曲菌和大肠弯曲菌，应结合马尿酸盐水解试验进行鉴定。
弯曲菌的其余鉴定试验有：不同温度的生长试验（25℃、37℃、42℃）、触酶试验、硝酸盐还原试验、产H2S试验等（见表13-1）。
（4）耐药性由于弯曲菌感染大多呈轻症和自限性，一般不需特异性治疗。
体外试验显示，绝大多数弯曲菌对头孢菌素和青霉素耐药，环丙沙星治疗弯曲菌感染非常有效，但近年来也出现了不少耐药菌株。
空肠弯曲菌通常对红霉素敏感，其耐药率小于5％；而80％以上的大肠弯曲菌对红霉素耐药。
胎儿弯曲菌引起的全身感染可用红霉素、氨苄西林、氨基糖苷类和氯霉素治疗。
（二）幽门螺杆菌1．螺杆菌属的主要特点及分类螺杆菌属（Hilicobacter）是一群氧化酶和触酶阳性、微需氧、37℃能够生长、在25℃和42℃均生长不良的革兰阴性弯曲菌。
本属细菌最早根据形态染色、培养条件等归于弯曲菌属，1989年Goodwin根据其超微结构、酶活性、脂肪酸序列、生长特性等的不同，建议将其从弯曲菌属中划分出来而成立一个新的属Hilicobacter（螺杆菌属）。
本属中现已鉴定的有19个种，研究得最多、最常见的是幽门螺杆菌（H. pylori，Hp）。
2．幽门螺杆菌的细菌特性（1）形态染色HP为革兰阴性、无芽孢、呈螺旋状弯曲的杆菌，尤其在胃黏膜环境中，HP具有典型的螺旋形或弯曲形形态，但在陈旧培养物中菌体可呈圆球状；大多数细菌具有位于菌体一端的多根带鞘鞭毛，运动活泼。
（2）培养特性HP为微需氧菌，在需氧及厌氧环境下均不能生长，在潮湿环境37℃同时提供5％～10％O2、5％～12％CO2的条件下生长良好，5％～10％H2可刺激其生长；最适生长温度35℃～37℃，30℃和42℃均生长不良，此点可与其他弯曲菌相区别，pH5.5～8.5均能生长；营养要求高，普通培养基不能生长，常用的培养基有心脑浸出液琼脂、布氏琼脂、哥伦比亚琼脂等，培养基中需补充一些特殊物质如血液、血清、淀粉、活性炭等，在Campy-BAP培养基上不生长。
选择培养基可用改良的Skirrow琼脂培养基加入万古霉素、两性霉素和cefsulodin，本菌在非选择性血平板上经3～5天孵育后形成小的半透明灰色菌落，有微弱的溶血环，革兰染色很浅。
（3）生化反应生化反应不活泼，氧化酶和触酶阳性，不分解任何糖类，脲酶强阳性，可与本属其他细菌区别，也是检测HP的快速诊断方法之一。
具体生化特征见表13-2。
表13-2 螺杆菌属各菌种的生化特征菌种触酶硝酸盐碱性磷脲酶醋酸吲哚谷氨酸42℃1％萘啶头孢还原酸酶酚水解转肽酶生长甘油酸噻吩幽门螺杆菌+ + + + - + - - R S毕氏螺杆菌+ + + + + + + - R S犬螺杆菌- - + - + ND + ND S I同性恋螺杆菌+ + - - - - - + S I菲氏螺杆菌+ - + - + - - + S S幼禽螺杆菌+ + - - - ND + ND R SH.westmeadii + + + - ND ND - ND S R注：+，＞90％阳性；-，＜10％阳性；ND，未定；S，敏感；R，耐药；I，中介（4）抵抗力HP对酸敏感，尿素对HP可起到保护作用，1％胆盐可抑制HP生长。
2．临床意义HP有较强的鞭毛动力和对胃黏膜/黏液有较强的黏附力，使HP能在接近中性的黏膜层中定植，产生强活性的尿素酶，分解尿素，在菌体周围形成保护性氨环境，以抵抗胃黏膜上皮细胞分泌的胃酸；HP产生的蛋白酶能有效分解黏液蛋白，提供营养。
HP在胃内定植后，通过对胃黏膜上皮细胞的黏附性、胃肠激素的作用、细胞壁脂多糖中脂质A的致炎作用、产生多种酶（包括：尿素酶、蛋白酶、过氧化氢酶、脂酶和磷脂酶等）以及产生的细胞毒素等等，这些因素的共同作用导致临床疾病的发生。
在临床上主要引起消化性溃疡（十二指肠溃疡、胃溃疡）、慢性活动性胃窦炎等，长期感染易发展为萎缩性胃炎、胃腺癌和胃黏膜淋巴组织淋巴瘤。
3．微生物学检验（1）检验程序见图13-2。
血清、胃液IgG SIgA初报30革兰染色、氧化酶（＋）触酶（＋）动力（＋）生化反应报告图13-2 幽门螺杆菌检验程序（2）标本采集多部位采集胃、十二指肠黏膜标本，标本要新鲜，保持湿润，置2ml无菌等渗盐水中保存，在运送途中不超过3h，在4℃下最多保存5h。
流行病学调查和检测治疗效果时可取血清检查。