第7章 内膜和蛋白分选

细胞组分
细胞质基质 细胞核 内质网 高尔基体 溶酶体 胞内体 过氧化物酶体 线粒体
数
目
1 1 1 1 300 200 400 1700
体积比
54 6 12 3 1 1 1 22
肝细胞中细胞质基质及细胞其它组分的数目及所占的体积比
酶和细胞骨架构成的 一 个高度 有序的体系：核糖体（绿色）、 蛋白质（红色）、tRNA、 mRNA
热休克蛋白
三、sER的功能
脂类的合成 参与类固醇激素的合成（生殖腺内分泌细胞） 肝的解毒作用（Detoxification） System of oxygenases---cytochrome p450 family； 肝细胞糖原释放葡萄糖（G-6PG） 与肌肉收缩有关：肌质网膜上的Ca2+-ATP酶将
具有弹性和伸缩性、粘滞性 pH 7.1-7.2
细胞骨架和酶
二、细胞质基质的成分
小分子物质：水、无机离子、溶解的气体。
中分子物质：包括各种代谢物，如脂类、糖、氨基酸、 核苷酸及核苷酸衍生物。 大分子物质：蛋白质、脂蛋白、RNA，少许多糖、大量 的酶。 如参与蛋白质、核酸、脂肪等合成酶； 糖酵解、戊糖磷酸途径、糖原代谢等所需酶。
ER是细胞内蛋白质与脂类合成的基地， 几乎全部脂类和多种重要蛋白都是在内质网合成的。
rER的功能 sER的功能
二、rER的功能
蛋白质合成
蛋白质的修饰与加工
新生肽的折叠与组装
1.蛋白质合成
分泌蛋白；整合膜蛋白；内膜系统各种细胞器的可溶 性蛋白（需要隔离或修饰）。 其它的多肽是在细胞质基质中“游离”核糖体上合成 的（含有信号肽）。包括：细胞质基质中的驻留蛋白 、质膜外周蛋白、核输入蛋白、转运到线粒体、叶绿 体和过氧物酶体的蛋白。 注意：细胞中蛋白质都是在核糖体上合成的， 并都是起始于细胞质基质中“游离”核糖体。
反面的分泌泡负责物质从高尔基体向细胞的其它位置运输
ERGIC或者VTC负责ER—Golgi cis
高尔基体顺面网状结构 CGN
rER（蛋白质和脂类）——（蛋白质KDEL 或 HDEL ER驻留蛋白）CGN； 蛋白丝氨酸残基发生O--连接糖基化； 跨膜蛋白在细胞质基质一侧结构域的酰基化； 日冕（冠状）病毒的装配
泛素-蛋白酶体降解途径
细胞内膜系统概述 endomembrane system
细胞内膜系统是指细胞内在结构、功能及发生上相
关的由膜包绕形成的细胞器或细胞结构。主要包括 内质网、高尔基体、溶酶体、胞内体、分泌泡等。 真核细胞细胞内的区域化
细胞内的膜相结构：指与膜结合的细胞器 , 即细胞 质中所有具有膜结构的细胞器。
一般1～4个糖残基， 但ABO血型抗原较长 N—乙酰半乳糖胺等
4 最终长度
5.第一个糖残基
N-连接与O-连接的寡糖比较
3.新生肽的折叠与组装
新生肽的折叠组装：
非还原性的ER内腔，易于二硫键形成；
正确折叠涉及ER膜驻留蛋白：具有KDEL or HDEL信号 （1）蛋白二硫键异构酶（protein disulfide isomerase，PDI） 切断二硫键，帮助新合成的蛋白重新形成二硫键并处 于正确折叠的状态。 （2）结合蛋白（Bip，hsp70家族，chaperone ）
高尔基体反面网状结构 TGN
TGN中的低pH值； TGN的主要功能： 参与蛋白质的分类与包装、运输； 某些“晚期”的蛋白质修饰
（如半乳糖唾液酸化、蛋白质酪氨酸残基的硫酸化及蛋白原 的水解加工）
在蛋白质与脂类的转运过程中的“瓣膜”作用，保证单 向转运。
5. 在没有极性的细胞中，高尔基体分布在微 管的负端——微管组织中心处。
三、细胞质基质的功能
完成各种中间代谢过程 蛋白质与脂肪酸的合成 蛋白质的分选与运输 与细胞质骨架相关的功能 蛋白质的修饰、蛋白质选择性的降解、蛋白质折叠 蛋白质的修饰 控制蛋白质的寿命 降解变性和错误折叠的蛋白质 帮助变性或错误折叠的蛋白质重新折叠，形成正确 的分子构象
识别错误折叠的蛋白或未装配好的蛋白亚单位，并促进重新 折叠与装配，进入Golgi体。
4.分子“伴侣”（molecular chaperones）
细胞中的某些蛋白质分子可以识别正在合 成的多肽或部分折叠的多肽并与多肽的某些部 位相结合，从而帮助这些多肽转运、折叠或装 配，这一类分子本身并不参与最终产物的形成， 因此称为分子“伴侣”。
高尔基体顺面网状结构（cis-Golgi network，CGN）
又称cis膜囊 高尔基体中间膜囊（medial Golgi） 多数糖基修饰； 糖脂的形成； 与高尔基体有关的多糖的合成 高尔基体反面网状结构（trans Golgi network，TGN） 周围大小不等的囊泡
顺面囊泡负责物质在ER和CGN之间运输
磷脂的转运: transport by budding：ER→GC、Ly、PM
transport by phospholipid exchange proteins（PEP）：
ER→other organelles（including Mit and Chl）。
2.磷脂酰胆碱在内质网膜上的合成过程
又可能划分出更精细的间隔
1. 高尔基体是有极性的细胞器： 位置、方向、物质转运 扁囊弯曲成凸面 又称形成面（forming face）或顺面（cis face） 面向质膜的凹面（concave） 又称成熟面（mature face）或反面（trans face）
2.高尔基体各部膜囊的４种标志细胞化学反应
胞质基质中Ca2+ 泵入肌质网腔中。
返回
1.脂类的合成
ER合成细胞所需绝大多数膜脂（包括磷脂和胆固醇）。 两种例外： 鞘磷脂和糖脂（ER开始→Golgi complex完成 ）； Mit/Chl某些单一脂类是在它们的膜上合成的。 磷脂合成酶是ER膜整合蛋白，活性位点朝向cytosol； 磷脂转位因子 / 转位酶与膜质转位
M6P受体在肝细胞中溶酶体酶还存在不依赖于M6P的另一种分选
途径 尽管内质网中合成的蛋白多数是糖蛋白，在高尔基体中经历
复杂的修饰，但糖链在蛋白质的分选过程中并不起决定作用
蛋白质的分选及其转运的信息仅存在于编码该蛋白质的基因本身
溶酶体的发生过程
流感病毒囊膜蛋白 上皮细胞游离端的质膜 水泡性口炎病毒囊膜蛋白上皮细胞基底面的质膜 双酸分选信号（Asp-x-Gln或DxE）
分离的高尔基体的膜囊上，既存在微管的马达 蛋白细胞质臂动力蛋白（dynein）和驱动蛋 白（kinesin），又存在微丝的马达蛋白和几 种肌球蛋白。最近还发现特异的血影蛋白网架 也存在于高尔基体处。 它们在维持高尔基体动态的空间结构以及复杂 的膜泡运输中起重要的作用。
二、 高尔基体的功能
高尔基体与细胞的分泌活动
各种不同的细胞器具有明 显不同的脂类组成： phosphatidylcholine （PC）：ER→GC→PM （高→低）
phosphatidylserine （PS）：ER →other organelle （PEP高→低）
四、内质网与基因表达的调控
内质网蛋白质的合成、加工、折叠、组装、转运及向高尔
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细胞内蛋白质的分选与细胞结构的组装
第一节 细胞质基质
细胞质基质的涵义 主要化学成分 细胞质基质的性质 细胞质基质的功能
一、细胞质基质含义（cytoplasmic matrix）
用差速离心法分离细胞匀浆物组分，先后除去细胞核、
线粒体 、 溶酶体、高尔基体和细胞质膜等细胞器或细胞结
构后，存留在上清液中的主要是细胞质基质的成分。生物 化学家多称之为胞质溶胶cytosol。 从细胞学上讲，光镜下为透明质，又称细胞液（ cell sap）；电镜下，细胞质基质是细胞质的连续相。 细胞质基质：简单地说，在真核细胞中除去可分辨 的细胞器以外的胶状物质。 细胞质基质是细胞的重要的结构成分，其体积约占细胞 质 的一半 。
（ N－乙酰半乳糖胺）
酰基化发生在ER的细胞质基质侧：软脂酸→跨膜蛋白的Cys
蛋白质糖基化类型
特 征 1. 合成部位 2. 合成方式
3. 与之结合的 氨基酸残基
N-连接
粗面内质网 来自同一个寡 糖前体
O-连接
粗面内质网或高尔基体 一个个单糖加上去
天冬酰胺
至少5个 糖残基 N—乙酰葡萄 糖胺
丝氨酸、苏氨酸、 羟赖氨酸、羟脯氨酸
蛋白质的糖基化及其修饰
蛋白酶的水解和其它加工过程
1.高尔基体与细胞的分泌活动
负责对细胞合成的蛋白质进行加工，分类，并运出，其过程
是rER上合成蛋白质，进入ER腔，出芽形成囊泡，进入CGN, 在medial Golgi中加工，在TGN形成囊泡。 溶酶体酶的分选：共同标志M6P（ 6-磷酸甘露糖） 反面膜囊
基体转运的复杂过程显然是需要有一个精确调控的过程。
影响内质网细胞核信号转导的三种因素： 内质网腔内未折叠蛋白的超量积累。 折叠好的膜蛋白的超量积累。 内质网膜上膜脂成份的变化——主要是固醇缺乏
不同的信号转导途径诱导不同的基因活化，以保证内质网正常行使其功能。
第三节 高尔基体
1889年，意大利医生Golgi用镀染法，在猫头鹰的神经细胞内观察到
2.蛋白质的修饰与加工
修饰加工：糖基化、羟基化、酰基化、二硫键形成等
糖基化在glycosyltransferase作用下发生在ER腔面 N- linked glycosylation（Asn） （N－乙酰葡萄糖胺） O- linked glycosylation（Ser/Thr or Hylys/Hypro）
微粒体microsome： 不是细胞内固有的结 构，而是细胞匀浆经 差速离心分离出来的， 由破碎的内质网形成 的近似球形的囊泡结 构，它包含内质网膜 与核糖体两种基本组 分。微粒体具有蛋白 质合成，蛋白质的糖 基化和脂质合成等内 质网的基本功能。