生物技术实验报告

1 mlH2O
电泳分析样品纯度
电泳方法同实验九
按常规制备电泳用聚丙烯酰胺凝胶，浓度12％。
将发酵收获的细胞、酶提取液、硫酸铵分级沉淀和 离子交换洗脱液样品处理后，进行电泳分析。
电泳2～3h后，取出凝胶，用0.15%考马斯亮蓝R250进行染色。过夜后倾出染液，不断脱色，起初每 20min换液1次，1h后每小时换液1次，直到区带明显 ，画出电泳区带图谱。
• 刘景 ， [J].药
健
.€5杆菌L-Œ- 酰胺 肠 门 术，1995,2（1）：16-19.
纯
• ‚E—©‹¡ 杆菌( E. coli As 1. 357) L2Œ-€„ . €5 肠 酰胺 氨 氨 . 科学 报,1982 ,16∶1015
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重组门冬酰胺酶Ⅱ 重组门冬酰胺酶Ⅱ表达制备
EC Ⅱ的简介 AnsB •ïŒ•• 酰胺 门 Œ氨。 细 门 胺，L -Œ门 胺 将 细 质 导 细 。 目前国内所有化学治疗中应用的 EC II 主要是依 赖进口, 完成表达 EC II 的基因工 程菌株构建, 并逐步进行 EC II 的工业化生产, 对于国内 ALL 的临床化疗有积极意义。为此, 我们克隆了EC II 的基因, 在大肠杆菌中获得 了高效表达, 并探讨了其突变复性及后续纯化 的简便方法。 L -Œ- 酰胺 门 氨
实验步骤
表达制备
PCR扩增 ANSB基因
重组质粒PKK 233 -ANSB 的构 建
阳性转化 子的筛选
分离纯化
1 2 3 4
• 蔗糖溶液渗透振扰法和酶解法联用提取酶
• 硫酸铵分级沉淀
• 透析脱盐
• DEAE-52阴离子交换柱层析
比活力测定方法
精确称取 纯化产物 10mg
Lowry法
rL-ASPⅡ比活 力=酶活力(U)/ 蛋白含量
来自百度文库
结果分析
（1）用箭头图表示重组L-门冬酰胺酶Ⅱ制备的操作流程。 （2）绘制洗脱曲线。 （3）重组L-门冬酰胺酶Ⅱ的纯化过程分析
纯化步骤
A.粗提酶液 B.硫酸铵沉淀 C.DEAE-52 纤维素柱层析
总蛋白(mg) 总活力(U) 比活(U/mg) 纯化倍数 收率%
（4) 电泳图谱分析
参考文献
• 兰 学, 复 订. ƒÄ: 高 京 学. ˆ¼ 机 教 学实验[M ]. …n . ‡ê 订 清 , 1994. 272～ 275