脂肪肝模型动物及建立方法汇总
大鼠非酒精性脂肪肝模型的建立
摘Hale Waihona Puke 要： 利用不同高脂饲料配方建立大 鼠非酒精性脂肪肝病（ Ｎ Ａ Ｆ Ｌ Ｄ） 模型 ， 为非酒精性脂肪肝 的研究提供参考依据 。大 鼠饲喂
单纯高脂饲料以及分别含有去氧胆酸、 丙基硫 氧嘧啶的高脂 高胆 固醇饲料 ， 经６ 周 的实验周期。 结果显示 ， 单纯饲喂高脂饲料大 鼠（ Ｈ ６ ） 呈现出显著的体重增加 以及 肝脏脂肪浸润。 饲 喂添加去氧胆酸盐 的高脂饲料后大 鼠肝脏胆固醇水平显著 降低 ， 但血液丙 氨酸转氨酶（ Ａ Ｌ Ｔ ） 和丙氨酸转氨酶（ Ａ Ｓ Ｔ ） 水平显著高于 Ｈ ６大 鼠。丙基硫氧嘧啶介导 甲状腺机能减退脂肪肝 模型（ Ｈ Ｐ ６ ） 组大 鼠
肝 的发生。而在 四环素刺激下 ， 甲状腺机 能减退大 鼠存 在进行性肝纤维化 以及肝脏疾病晚期 的可能。为非酒精性脂肪肝研究提
供 了有力的基础数据 。
关键词 ： 高脂饮食 ； 非酒精性脂肪肝 ； 丙硫氧 嘧啶 ； 去氧胆酸盐 ； 盐酸四环素
中图分类号 ： ￥ ８ ５ ６ ． ４ 文献标识码 ： Ａ 文章 编号 ： １ ０ ０ ２ — ２ ０ ９ ０ （ ２ ０ １ ７ ） ０ ３ — ０ ０ １ ５ — ０ ５
呈现前期体 重生长缓慢后期的体重减轻且高的血清甘油三酯（ Ｔ Ｃ ） 、 低密度脂蛋 白胆 固醇（ Ｌ Ｄ Ｌ — ｃ ） 、 Ａ Ｌ Ｔ 。 四环素刺激下的 甲状腺 机能减退大鼠（ Ｈ Ｐ Ｔ ６ ） 呈现严重肝脏病变以及 低下肝脏脂肪蓄积 和高水平的血清 Ａ Ｌ Ｔ 。 表明 Ｈ Ｐ ６大鼠存在进行性非酒精性脂肪
ｔ ｈ ｉ ｓ ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ． ｗ ｉ ｓ ｔ ａ ｒ ｒ ａ ｔ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ｆ ｅ ｄ ｗ ｉ ｔ ｈ ｈ ｉ ｇ ｈ — ｆ ａ ｔ ｄ ｉ ｅ ｔ ｓ（ ｗ ｉ ｔ ｈ ｏ ｒ ｗ ｉ ｔ ｈ ｏ ｕ ｔ ｄ ｅ ｏ ｘ ｙ ｃ ｈ ｏ ｌ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ｏ ｒ ｐ ｒ ｏ ｐ ｙ ｈ ｈ ｉ ｏ ｕ ｒ ａ ｃ ｉ ｌ ） ｆ ｏ ｒ ６ ｗ ｅ ｅ ｋ ｓ ． Ｏ ｕ ｒ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｓ ｈ ｏ ｗ ｅ ｄ ｔ ｈ ａ ｔ ｒ ａ ｔ ｓ ｅｄ ｆ ａ ｈ ｉ ｇ ｈ — ｆ ａ ｔ ｄ ｉ ｅ ｔ （ Ｈ６ ） ｇ ａ ｉ ｎ ｅ ｄ ａ ｓ ｉ ｇ ｎ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｎ ｔ ａ ｍｏ ｕ ｎ ｔ ｏ ｆ ｗ ｅ ｉ ｇ ｈ ｔ ａ ｎ ｄ ｓ ｅ ｖ ｅ ｒ ｅ ｓ ｔ ｅ ａ ｔ ｏ ｓ ｉ ｓ ． Ｃ ｏ ｍ ｐ ａ ｒ ｅ ｄ ｗ ｉ ｔ ｈ Ｈ ６ ｒ ａ ｔ ｓ ， ｒ ａ ｔ ｓ ｗ ｈ ｉ ｃ ｈ
高脂饮食致大鼠脂肪肝实验模型的建立
高脂饮食致大鼠脂肪肝实验模型的建立目的：探讨脂肪肝动物模型的制作方法。
方法：高脂乳剂灌胃复制脂肪肝模型，将大鼠随机分为生理盐水灌胃组和高脂乳剂灌胃组，分别于高脂乳剂灌胃14d、28d和3d时检测血脂4项和肝功能，并采用肝脏病理切片分析肝脏脂变情况。
结果：在高脂乳剂灌胃14d后，大鼠出现高血脂症状并伴有轻度脂肪肝，随后出现血脂水平稳定上升，肝系数增大；28d时出现中度脂肪肝；3d时出现重度脂肪肝。
结论：经过高脂饲料灌胃，3d内即可形成不同脂变程度的大鼠脂肪肝模型，而且造模时间短、价格低廉，是一种较好的脂肪肝模型制作方法。
标签：大鼠；脂肪肝；动物模型随着人们膳食结构的改变，加上缺乏运动等原因，脂肪肝的发病率逐渐增高。
目前，西方发达国家中的脂肪肝发病率为10%～24%，而我国脂肪肝发病率也成为病毒性肝炎之后的第二大肝病，上海和广州两地，脂肪肝的发病率就高达20%。
如果不及时治疗，将会进一步恶化，导致肝纤维化甚至肝硬化，严重影响人们的身体健康，给家庭和社会带来很大的负担。
本实验旨在探讨脂肪肝模型的复制方法，为进一步研究脂肪肝发病机理提供一种较好的动物模型。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 高脂饲料配方胆固醇（批号：F20030410）、脱氧胆酸钠（批号：F20030410）、吐温80（批号：F20030410）、1-2丙二醇（批号：F20030410）均为分析纯，够自西格玛奥德里奇上海贸易有限公司；丙赛优（批号：0300，上海朝晖药业有限公司）；猪油自制。
1.1.2 脂肪乳的配制[1] 按12.%吐温80、10%1-2丙二醇、0.%丙基硫氧嘧啶、1%猪油、1%脱氧胆酸钠、%胆固醇的比例配制。
先将猪油30g放在200ml的烧杯中，放在磁力搅拌器上加热至40℃水浴中融化，加入10g胆固醇、1g研细的丙基硫氧嘧啶，充分搅匀，加入适量吐温不断搅拌直至乳化现象产生，制成油相。
另一烧瓶中加入30ml蒸馏水和1-2丙二醇20ml，加热至60℃，然后加入胆盐2g溶解，制成水相。
非酒精性脂肪肝小鼠模型介绍
非酒精性脂肪肝小鼠模型介绍
非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）是当前我国第一大肝病，作为代谢综合征在肝脏的表现，与肥胖、胰岛素抵抗（IR）、糖尿病、高脂血症等代谢异常具有密切的联系。
近年来，随着人们生活方式的改变和饮食结构的西化，非酒精性脂肪肝的发病率呈不断上升的趋势，因此研究非酒精性脂肪性肝病的动物模型十分必要。
造模方法
通过给实验动物喂食高脂饲料来进行非酒精性脂肪性肝病的造模。
对照组：正常饮食饮水
模型组：高脂饲料+正常饮水
检测指标
第8周后进行体重、肝指数、肝组织超氧化物歧化酶活性检测，观察血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、三酰甘油、胆固醇等生化指标检测。
模型组中三酰甘油、胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇等都有明显提高。
取肝组织进行病理学检测。
模型组病理切片可见肝组织有大油滴和小脂滴，肝细胞肿胀，胞质易见脂肪空泡，肝细胞有明显炎性改变。
小鼠非酒精性脂肪肝实验模型建立的最佳饲料配比方案
小鼠非酒精性脂肪肝实验模型建立的最佳饲料配比方案目的探讨建立小鼠非酒精性脂肪肝动物模型的最佳饲料配比方案，为进一步开展脂肪肝及其治疗的相关研究提供有价值的实验数据。
方法80只KM小鼠随机分为4组，甲、乙、丙为模型组，丁组为对照组。
模型组给予不同梯度的高脂饮食，对照组给予正常饮食。
在造模后每1周分别取模型组动物各5只处死，观察其病理模型形成情况，做血液指标检测及病理切片；采用全自动生化分析仪检测生化指标；取肝脏，制肝匀浆，测定LTG、LTC。
结果造模过程中，模型组动物乙组造模后体重增长较正常对照组及模型组甲组、丙组迅速。
至实验结束时，甲组体重较正常组平均重7.62%，乙组体重较正常组平均重16.76%，丙组体重较正常组平均重11.14%，模型动物体重及肝指数均较正常组显著增加（P＜0.01）。
生化指标检测显示模型组小鼠的TC、TG、ALT、AST、LDL-C、LTG、LTC水平，均有一定程度的降低（P＜0.01），HDL-C水平显著升高（P＜0.01），其中乙组小鼠的变化幅度最大（P＜0.01）。
在病理方面，造模组1周后乙组小鼠最早出现了轻度的肝脂肪变，造模2周乙组小鼠多呈中度脂肪变。
造模4周乙组小鼠呈中重度的大泡性脂肪变。
结论适当的高脂高胆固醇配比饮食是一种快速有效的脂肪肝模型制作方法。
标签：非酒精性脂肪性肝炎；动物模型；肝指数；动物实验Non-alcoholic fatty liver in mice experimental models of optimal feed ratio of programs YAO Peng，QI An-long，ZHANG Yu，et al.Tianjin Medical University School of Clinical Medicine，Tianjin 300270，China【Abstract】Objective Explore the establishment of non-alcoholic fatty liver in mice animal models of feed ratio of the best programs.Methods 80KM mice were randomly divided into 4 groups A，B，C as a model group，D as the control group.Model group were given different gradient of high-fat diet，normal diet control group.Then in another week we collected five each from the five model group randomly.And then killed them to observe the formation of pathological model，to do blood testing and do biopsy，and detected by biochemical analysis of serum biochemical indicators and the liver，liver homogenate system measured LTG，LTC.The results of the modeling process，the model group B increased the fastest than the pared with the average weight of the normal，to the end of the experiment，group A were 7.62% heavier，group B were 16.76%，group C were 11.14%，the model animal weight and liver index increased significantly compared with the normal group (P＜0.01).Biochemical tests showed the model group mice TC，TG，ALT，AST，LDL-C，LTG，LTC level，there is a certain degree of reduction (P＜0.01)，HDL-C levels were significantly increased (P＜0.01)，where the sharpest change in group B mice (P＜0.01).In pathology，after a week the group B first appeared in the mild hepatic steatosis，group B，2 weeks after，mostly appear moderate fatty change.Modeling for 4 weeks in group B mice showed severe macrovesicular fatty change.Conclusion The ratio of the appropriate high-fathigh-cholesterol diet is a fast and efficient production method of fatty liver model.【Key words 】Non-alcoholic steatohepatitis；Animal model；Liver index；Animal experiments目前，非酒精性脂肪性肝炎的发病率为1.2%～4.8%，随着人民物质生活的改善，非酒精性脂肪性肝病的发病率将逐年上升。
大鼠非酒精性脂肪肝模型构建的方法探讨
#论著#大鼠非酒精性脂肪肝模型构建的方法探讨杨晓红1,徐富翠2,余鸿2,梅欣明2(1.泸州医学院形态学实验中心; 2.泸州医学院组胚教研室,四川泸州 646000)作者简介:杨晓红(1968),女,汉族,四川省泸州市人,助理实验师。
=摘要> 目的 建立大鼠非酒精性脂肪肝动物模型,为深入探讨非酒精性脂肪肝的发病机制及药物治疗提供实验参考。
方法 取Wista r 大鼠60只,随机分为对照组15只(常规饮食喂养),模型组45只(高脂、高胆固醇饮食组)喂养,12周后处死动物取出肝脏,经H 2E 染色、组织化学与免疫组织化学染色观察造模情况。
结果 模型组大鼠肝细胞脂肪变性明显,eNOS 免疫组化显示肝中央静脉和门管区内皮细胞呈强阳性。
结论 高脂、高胆固醇饮食是诱导非酒精性脂肪肝形成的重要诱因,降低其摄入是有效预防该疾病的重要措施,此外eNOS 在病变早期起到减轻肝损伤的作用。
=关键词> 非酒精性脂肪肝;高脂饮食;高胆固醇=中图分类号> R 57515 =文献标识码> AEstablishment the Model of Rat Nonalcoholic Fatty LiverY a ng Xiao 2hong 1,Xu F u 2cui 2,Y u H ong 2,Mei X in 2ming2(1.E xper emental center of Morp hology ,Luz hou Medical College,Luzhou 646000;2.Dep ar tmentof H istology and E mbr yology ,Luzhou Medical Colleg e,Luzhou 646000)=Abstract > Objective T o establish the model of rat nonalcoholic fatty liver(NAFL)and observed the originating mechanism and drug therapy of this disease.Methods 60Male SD rats were ran 2domly divided into two gr oups:control group(n=15),fed chow diet;and model group(n=45),these rats were fed high fat diet.A fter 12weeks,all rats were sacrificed,and their livers were taken for histology observation.The results were detected by basic histology,cell chemistry and immuno 2histochemistry.Results H igh fat and cholesterol diet can significantly increase nonalcoholic fatty liver ,and increas the expression of eNOS.Conclusion H igh fat and cholesterol diet were an impor 2tant factor inducing nonalcoholic fatty liver,eN OS may play an important r ole in preventing the damages of liver cell in N AFL.=KeyWor ds > nonalcoholic fatty liver;high fat;high cholesterol diet 脂肪肝是指由于多种诱因导致肝脏脂肪代谢障碍最终导致脂肪在肝内储积,且当组织脂肪含量超过肝重量的5%以上,或在组织上有1/3以上的肝细胞发生脂肪化为特征的临床综合症。
脂肪肝的动物模型研究进展
（ 建 中 医学 院 中西 医结 合 系 ， 福 福建 福 州 ３０ ０ ） ５ １８
关键 词 ： 乙醇 性 脂 肪 肝 模 型 ： 乙醇 性 脂 肪 肝 模 型 ， 究 进展 非 研
中 图分 类 号 ： ５ ５ Ｒ ７
文 献 标 识 码 ： Ａ
文 章编 号 ：０ ４ ５ ２ （ ０ ８ ０ — ０ ８ ０ １０ — ６ ７ ２ ０ ） ２ ０ ６ — ３
ｄ按 ｌ ／ ｇ灌 服 ５ ５ ｍｌ ｋ ２％的 白酒 。 天上 午 １ 。 每 次
长 期 摄人 乙醇 可 致小 鼠 、 鼠肝脏 脂 肪 变性 。 大
收 稿 日期 ： ｏ ７ １ Ｏ ２ ｏ 一ｌ 一 ５
同时 给 与 自制 饲 料 （ 含猪 油 １％ ． ５ 每公 斤饲 料 中加
作 者 简 介 ： 海 涛 （ ９ ２ ） 男 ，０ ６级 中西 医结 合 基 础 专 业 研 究 生 ， 要 从 事 细 胞 分 子 生 物 学 与 中 医 药 应 用 的 研 究 。 周 １８一 ， ２０ 主
测 量抑 菌 圈直径 。 观察 药 液对金 黄 色 葡萄 球菌 、 白
学分 析 ， 鼠易 于得 到 ， 大 动物 种 属差 异小 。二 甲苯
致小 鼠耳 廓肿 胀 法无 需 特殊设 备 ， 法 简便 。 方 见效
快 ， 量 少 ， 复 制 成 功率 高 ， 用 且 适用 于新 药抗 炎 药
物 的常规 筛 选 。
比率降 低 ． Ａ Ｈ 的积 聚 增强 脂 肪生 成 酶 的 活性 ， Ｎ Ｄ 促使 脂 肪 酸 和三 酰 甘油 的合 成 。 乙醇还 可 抑 制 肝 脏 三酰 甘 油 、 Ｄ ＶＬ Ｌ的 释 放 。 冯 志 强 等 …采 用 Ｗｉａ 雄 性 大 鼠 ， ３ｄ先 饮用 ｌ ｓｒ ｔ 前 ５％的 白酒 。 ４ 第
肝损伤动物模型的造模方法
肝损伤动物模型的造模方法
1. 化学物质诱导，这是最常用的方法之一，可以使用一些化学
物质如四氯化碳（CCl4）、醋酸乙酯（TAA）、二甲基硫醚（DME）
等来诱导肝损伤。
这些化学物质可以通过不同的途径进入动物体内，导致肝细胞损伤和肝功能异常。
2. 手术诱导，通过手术方法，可以直接对动物的肝脏进行切割、缺血再灌注等操作，从而引起肝损伤。
这种方法可以控制损伤的程
度和范围，适用于研究特定类型的肝损伤模型。
3. 遗传工程模型，利用转基因技术或基因编辑技术，可以构建
特定基因缺陷的动物模型，如肝细胞特异性基因敲除或过表达，从
而模拟特定的肝损伤情况。
4. 营养学诱导，通过控制动物的饮食，可以诱导脂肪肝、酒精
性肝病等肝损伤模型。
例如，高脂饮食可以导致脂肪肝，酒精饮食
可以导致酒精性肝病。
5. 辐射诱导，辐射也可以用来诱导肝损伤，如通过X射线或其
他辐射源对动物的肝脏进行照射，引起肝细胞的损伤和炎症反应。
总的来说，选择合适的肝损伤模型方法需要考虑研究的具体目的、动物种类、研究经费和实验条件等因素，并且在进行实验时需要严格控制实验条件，确保模型的可靠性和稳定性。
同时，也要遵守动物实验伦理规范，保障动物的福利和权益。
nafld 造模方法
NAFLD（Non-Alcoholic Fatty Liver Disease，非酒精性脂肪肝病）是一种常见的肝脏疾病，涉及到其发展和进展的模型构建可以帮助研究和理解该疾病的机制。
以下是一些常见的NAFLD 造模方法：
1.动物模型：
●转基因小鼠模型：通过改变小鼠基因表达来模拟NAFLD，例如过表达脂肪合成相关
基因或抑制脂肪酸氧化相关基因。
●高脂饮食模型：通过给予动物高脂饮食来诱导NAFLD，可以使用不同组分的饲料，
并结合适当的控制组进行比较。
●化学诱导模型：利用化学物质（如二甲硫代乙酸、四氯化碳等）来诱导肝脏脂肪堆
积和炎症反应。
2.细胞模型：
●水平转染模型：通过转染肝细胞系，引入特定基因或siRNA来调节脂肪代谢相关通
路，模拟NAFLD发生和进展。
●三维细胞培养模型：利用体外培养的三维肝脏组织结构，包括肝细胞、非肝细胞和
基质成分，以模拟NAFLD的复杂生理环境。
3.计算机模型：
●数学模型：应用数学方程和模型来描述NAFLD的病理生理过程，例如脂肪酸代谢、
脂质积累和炎症反应等。
●机器学习模型：通过训练和应用机器学习算法，从大量数据中探索和预测NAFLD
的发展和进展趋势，可以利用图像分析、遗传学数据等进行建模。
以上是一些常见的NAFLD 造模方法。
这些方法可以单独或结合使用，以便更好地理解NAFLD的发病机制、研究药物治疗策略，并提供有效的治疗途径。
具体选择何种造模方法应根据研究目的、资源可行性以及模型对于所研究问题的适用性来决定。
nash造模方法
nash造模方法NASH（非酒精性脂肪性肝炎）的造模方法有多种，以下是其中的一些：1. 高脂饮食（HFD）模型：通过给动物喂食高脂、高糖、高胆固醇的食物，模拟人类疾病形成机制。
这种方法周期较长，适用于NASH模型构建。
2. 蛋氨酸限制、胆碱缺乏饮食：这种方法成模周期短，适用于肝炎、肝纤维化等研究。
常用的有MCD（蛋氨酸、胆碱缺乏饮食）和MRCD（蛋氨酸微量、胆碱缺乏饮食）等。
3. CCl4诱导：CCl4是最早采用的试验性脂肪肝模型诱导剂，可单独施用或配合高脂饮食来诱发脂肪肝或肝纤维化。
这种方法造模时间较短（8周左右），形成率高，适用于肝纤维化的研究。
但是发病机制、病程变化及组织学形态与人类脂肪肝存在较大差异，并且CCl4具有较强的毒性，易致动物死亡。
4. 四环素诱导：四环素属于抗生素类药物，具有肝毒性，可用于诱发动物脂肪肝。
其主要通过干扰线粒体DNA复制或转录，抑制载脂蛋白合成并影响线粒体脂肪酸β-氧化，抑制肝脏极低密度脂蛋白的释放，脂质以脂滴形式聚于肝细胞内，继而造成肝细胞脂肪变性。
该模型造模时间短，费用低，药物毒性较CCl4弱，脂肪变性显著，适用于模拟某些环境因素所致的NAFLD研究。
5. 正常小鼠饮食诱导：用高脂饲料造模（40周以上），可出现显著的肥胖、胰岛素抵抗以及脂肪肝，但是炎症浸润和纤维化（尤其是纤维化）表型不够显著；用MCD（methionine- and choline deficient diet）饲料造模（4周或以上），可出现较为严重脂肪肝，并伴随较严重的炎症和纤维化，缺点在于小鼠体重下降显著，与正常的NASH发病机制差异较大；在上述基础上，MCD饲料改良为HFD-MCD饲料（6周及以上喂养），这样既能确保NASH发生，小鼠体重也不会降低；目前较常用的NASH造模方式为：含高脂高糖高胆固醇的AMLN（Amylin Liver NASH）饲料诱导（24周以上），可出现较为显著的脂肪肝。
非酒精性脂肪肝动物模型
非酒精性脂肪肝动物模型目录1、饮食诱导模型 (2)2、化学物质诱发模型 (2)3、基因编辑模型 (3)4、复合模型 (4)最常用的复合模型： (4)参考文献： (5)非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是一种无酒精滥用的肝病综合征，包括单纯性脂肪肝、脂肪性肝炎、脂肪性肝纤维化和肝硬变。
可从单纯性脂肪肝经非酒精性脂肪性肝炎（NASH）发展为肝纤维化，甚至导致肝硬化、肝细胞癌（HCC）或肝功能衰竭等终末期肝病。
根据Younossi等人的研究，“NAFLD是世界范围内肝脏疾病最重要的原因之一，并且很可能在未来几十年成为终末期肝病的主要原因，这种疾病会影响成人和儿童。
”图1. 全球NAFLD大概的患病率和PNPLA3基因型的分布NASH诊断的金标准是肝脏活组织检查，但是这种方法非常具有侵入性。
NAFLD患者的肝酶有时是正常的。
虽然超声波可以检测到脂肪肝，但它无法检测纤维化或炎症。
目前还没有针对NAFLD的批准治疗方法，因此研究不仅针对NASH治疗药物的开发，还针对新的诊断方法，制药和生物技术公司正在大力投资NAFLD / NASH研究。
动物模型在阐明非酒精性脂肪肝的病理生理机制以及新药的开发中起着重要的作用。
临床前研究需要根据研究的特定NAFLD表型使用不同的动物模型。
NAFLD和NASH的临床前动物模型可分为四类：饮食诱导模型、化学物质诱导模型、基因编辑模型、复合模型。
1、饮食诱导模型给予动物高脂、高糖饲料喂养建立的脂肪肝模型，其主要发病机制是营养过剩，食物中脂类、胆固醇和（或）糖类过量，无法完全吸收利用，脂类堆积于肝而引发脂肪肝，进一步出现肝炎性改变及纤维化。
该模型与人类NAFLD 相似，是最常见的NAFLD动物模型。
不同的饮食诱导模型具有不同的特点。
饮食诱导模型的一个挑战可能是在开始研究之前需要较长的时间造模。
表1. 不同的饮食诱导模型的特点2、化学物质诱发模型小剂量链脲佐菌素结合高脂饮食，已被用于制备小鼠的NAFLD，可导致脂肪变性，炎症，纤维化甚至肝细胞癌。
一种非酒精性脂肪肝动物模型及建立方法[发明专利]
![一种非酒精性脂肪肝动物模型及建立方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/fb586a6c777f5acfa1c7aa00b52acfc789eb9f20.png)
专利名称：一种非酒精性脂肪肝动物模型及建立方法专利类型：发明专利
发明人：来丽丽,池喜峰,王宇,赵成成
申请号：CN202210266150.1
申请日：20220315
公开号：CN114503955A
公开日：
20220517
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种动物模型建立技术领域，具体而言，涉及一种非酒精性脂肪肝动物模型及建立方法。
该动物模型采用NR4A1‑/‑基因敲除的小鼠建立。
采用NR4A1‑/‑基因敲除的小鼠建立非酒精性脂肪肝动物模型，充分利用了NR4A1‑/‑基因与糖代谢和肝脏的脂肪代谢的关系，使NR4A1‑/‑基因敲除的小鼠糖脂代谢紊乱，经高脂饲养后可使脂肪沉积于肝脏，形成非酒精性脂肪肝；该方法操作简单，效果明显。
该动物模型伴有肥胖、血脂异常等特征，与NAFLD临床病理相似度高。
申请人：北京基谱生物科技有限公司
地址：100085 北京市海淀区显龙山路19号1幢3层2座317
国籍：CN
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大鼠脂肪肝 文档
清脂益肝汤对非酒精性脂肪肝大鼠治疗的实验研究1．2．1 动物分组与模型建立：43只大鼠在动物房内适应性喂养1周后，随机分为4组：正常对照组(I组)10只，模型组(1I 组)l1只，清脂益肝汤组(Ⅲ组)11只、二甲双胍组(Ⅳ组)11只。
Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组饲以高脂饲料，配方为：普通饲料+1％胆固醇+ 14％猪油，由天津市华容实验动物中心饲料厂配制；正常对照组饲以普通饲料，实验动物自由饮水和进食。
4周后随机抽取Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ三组中各一只大鼠脱颈处死，病理证实脂肪肝已形成。
清脂益肝汤组给生药16 g·ks ·d～，灌胃治疗；二甲双胍组给170 mg·ks～·d (按成人剂量1．5 g／d折算)溶于5 rnl蒸馏水中灌胃。
正常对照组、模型组给予同量蒸馏水灌胃，各组按原饲料进行饲养。
8周后，全部脱颈处死，取血及肝组织待测。
1．2．2 观察指标及检测方法：(1)观察大鼠食欲、体重、毛发及死亡情况。
(2)血清指标测定：测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三酯(TG)、胆固醇(CHO)、空腹血糖(FBS)、游离脂肪酸(FFA)；放免法测定空腹胰岛素(FINS)。
胰岛素抵抗指数计算：胰岛素抵抗指数(HOME-IR)：(~33s×F~NS)／22．50。
(3)取肝组织一块马上置于液氮中用RTPCR 法检测肝组织中瘦素mRNA(1eptin mRNA)的表达。
1．3 组织病理学标本的制备取肝左叶用10％甲醛溶液固定，石蜡包埋，HE染色，光镜下观察组织学改变。
2、化痰泄浊方对脂肪肝模型大鼠胰岛素抵抗及瘦素的影响1．2．1 分组与模型制作 SD大鼠48只，常规饲养1周后随机分为5组：正常对照组、模型组、DBGTT组、HTXZR高剂量和低剂量组，其中正常对照组8只，其余4组各1O只。
正常对照组予以基础饲料喂养，其余4组均以高脂饲料(84 9／6基础饲料+1o猪油+5 蛋黄粉+1 胆固醇)喂养，并于造模第1天予以腹腔注射四环素150 mg／kg，后每隔6 d腹腔注射四环素110 mg／kg 1次，共6次。
脂肪肝造模方法
非酒精性脂肪肝
1 常规饲养1 w后,除空白对照组予基础饲料外,模型组等4组均饲以高脂饲料(84%基础饲料+
10%猪油+5%蛋黄粉+1%胆固醇),并于造模第1天腹腔注射5 mg/100 g鼠重,其后每6天1次腹腔注射四环素10 mg/100 g鼠重,计6次。
2 单纯的高脂肪饲料
普通饲料+20g/kg胆固醇+100g/kg猪油（胆固醇购自上海生化试剂商店，猪油自备），猪油加热熔化后加入胆固醇，然后拌入饲料中.
大鼠造模4wk主要表现为肝细胞脂肪变性，造模8wk肝细胞脂肪变性进一步加重，达到脂肪肝诊断标准.12、16和24wk 则表现为脂肪性肝炎，即在肝细胞脂肪变性的基础上，出现以小叶内单个核细胞浸润为主的炎症，
酒精性脂肪肝
50%的酒精灌胃1次每天四周。
mcd脂肪肝模型原理
mcd脂肪肝模型原理
MCD（脂肪肝模型）是一种常用的小鼠模型，用于研究脂肪肝的发生机制以及潜在的治疗方法。
MCD模型是通过给小鼠喂养一种特殊的饮食而制造的。
这种饮食称为甲硫氨酸/胆碱不足饮食（Methionine-Choline Deficient，简称MCD饮食）。
MCD饮食的特点是，去除了饲料中的甲硫氨酸和胆碱这两种营养物质。
甲硫氨酸和胆碱是人体正常脂肪代谢所必需的，其中胆碱是在体内合成磷脂的关键成分。
给小鼠喂养MCD饮食后，小鼠体内甲硫氨酸和胆碱的水平会显著下降，导致脂肪酸无法正常合成和代谢。
这使得肝脏不能有效地分解和转运脂肪，脂肪开始在肝脏内大量积累，形成脂肪肝。
MCD模型的优势在于模拟了饮食引起的脂肪肝，能够研究脂肪肝的早期发生过程以及潜在的治疗方法。
然而，MCD模型也有一些局限性，比如不能模拟与肥胖、代谢综合征等相关的脂肪肝，而且给小鼠喂养MCD饮食会引起其他营养不良的问题，例如贫血和体重下降。
总之，MCD脂肪肝模型通过破坏脂肪代谢的关键营养物质平衡，使小鼠产生脂肪肝，为脂肪肝的研究提供了可靠的实验模型。
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1.中药药理与临床2007标题：大鼠高血脂及脂肪肝模型的建立（本实验选用高脂饲料诱导大鼠高血脂、脂肪肝，为预防脂肪肝药物的筛选提供实验模型。
）目的：建立大鼠高血脂及脂肪肝模型。
方法：SD大鼠随机分为2组，分别接受正常饲料、高脂饲料，连续3周，测定大鼠血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL—C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL—C)、极低密度脂蛋白(VLDL—C)。
1．1动物：SD大鼠，SPF级，20只，雌雄各半，体重180—220g, 实验动物质量合格证明号：2006A1．2高脂饲料：高脂饲料由猪油(12％自制)、胆固醇(2％)、丙硫氧嘧啶(0.2％)、3号胆盐(0.5％)、普通混合饲料粉(85.3％)组成，将以上各物先人工充分混匀，再经搅拌，压成圆条状颗粒，真空包装后，经”co辐照消毒备用，由南方医科大学实验动物中心制作。
1．3方法：将大鼠随机分为正常对照组(10只)、高脂模型组(10只)，雌雄各半。
正常对照组投喂普通颗粒饲料，高脂模型组以高脂饲料替代普通饲料投喂，平均每天每只约20克左右。
动物造模3周，实验结束前1天晚上禁食，不禁水，次日上午麻醉后，腹主动脉采血，分离血清，送南方医科大学附属南方医院医学检验中心检测血脂五项。
取肝脏，称肝湿重，计算肝指数，并在肝右叶离边缘1cm处，横切一块肝组织用10％中性福尔马林固定，常规脱水，HE染色。
讨论：本文用高脂饲料成功地复制了大鼠高脂血症及脂肪肝模型，严重的肝细胞的变性可导致部分动物出现不同程度的肝细胞坏死。
高脂模型组大鼠肝脏体积增大，重量增加，质软切面油腻为奶黄色。
高脂模型组大鼠血清TG、TC、LDL—c、VLD含量都非常显著升高。
对于HDL—c所占Tc的百分率，正常对照组非常显著高于高脂模型组，虽然高脂模型组HDL —C含量明显高于正常对照组，但由于正常对照组TC含量远远低于模型对照组，故HDL —C含量必然低于模型对照组。
HDL—C为动脉粥样硬化性心脑血管病的保护因子，本实验可知，正常对照组H／T明显高于模型对照组，故将H／T作为一项衡量HDL—C在体内相对含量高低的指标，更有实际意义。
在本实验中，正常对照组平均每只大鼠饲料消耗量为5369，高脂模型组平均每只大鼠饲料消耗量为M89。
高脂模型组大鼠体重的减轻，与大鼠形成严重脂肪肝后，影响摄食量有关。
2.吉林大学学报(医学版)标题：大鼠脂肪肝模型的建立目的：探讨脂肪肝动物模型的制作方法。
方法：用缺乏蛋氨酸和胆碱的饲料喂养大鼠，复制脂肪肝模型，并进一步研究门静脉压、肝重／体重比以及肝脏病理结构的变化。
结论：用缺乏蛋氨酸和胆碱的饲料喂养大鼠复制脂肪肝模型，喂养时间短，价格低廉，是一种较好的脂肪肝模型制作方法。
配方成分：蔗糖360g，右旋麦芽糖200 g，猪油250 g，植物纤维素50g，玉米粉50g，食盐7.5g，黑豆30 g，CaCO32.5 g，MgO1.5 g,维生素A15000u，维生索D2 1500u，维生素E0.5 g。
一、方法①雄性wiscar大鼠36只，体重(200士l0)g，随机抽取12只，作为对照组．用正常饲料喂养21 d后行门静脉压、肝重测定以及肝脏病理检查。
其余24只大鼠作为实验组行脂肪肝模型复制，用该饲料喂养后的第8、14、2l和28天各取3只大鼠处死，进行肝脏病理切片(锇酸染色>，观察肝脏脂肪变性程度，第21天另取12只大鼠行门静脉压和肝重测定。
②实验前14h禁食，可以自由饮水，戊巴比妥纳30 mg/kg腹腔内注射麻醉。
上腹正中横行切口入腹，游离肝十二指肠韧带，用54头皮针(接有脑脊液I，型测压管)穿刺测门静脉压。
取肝行肝重量测定后，另取部分肝，用lo％甲醛固定，行常规病理切片检查。
二、目前文献报道脂肪肝模型建立有以下几种方法：①给予营养全面、包含乙醇的渡体饲料(低碳水化合物，占能量的5．5％)喂养。
该方法能够建立酒精性脂肪肝模型，但难于控制乙醇的平均浓度。
②乙醇加入饮水中(浓度40％)，同时给予鼠维持正常生长所需的蛋白质和胆碱喂养。
这是～种比较简单的复制酒精性脂肪肝动物模型方法．但缺点是用时较长。
③雄性wIslar鼠先禁食48h，然后给予高碳水化合物和脂肪的混合饲料。
该方法时间较短，但禁食时间较长，对指标的测定影响较大。
④通过近亲交配建立的FIS(fatty liver shionogi)鼠。
这是一种较理想的方法，但国内尚无此种鼠出售。
⑤用CCL4和四环素诱导鼠脂肪肝动物模型。
该法费时长，毒性大。
⑥用HarlanT验室的CMDD饲料喂养14 d即可诱发肝脂肪变性。
CMDD饲料能提供大鼠生长所需成分，用食用脂肪配制增加饲料的可食性，无需再增添其他成分，但价格昂贵。
目前国外大多数鼠的非酒精性脂肪肝模型均采用HarlanTeklad实验室的饲料。
本实验所用的饲料是由CMDD饲料改良而成，具有CMDD饲料的可食性，并且喂养时间短，价格低廉。
用CMDD饲料诱发非酒精性脂肪肝的机理是饲料缺乏蛋氨酸和胆碱，前者为合成载脂蛋白所需，后者缺乏引起卵磷脂合成不足，从而导致极低密度脂蛋白合成下降，无法将甘油三酯运出肝外，引起肝内脂肪堆积，形成脂肪变性。
文献报道用CMDD喂养的大鼠肝脏，经气相色谱法证实肝脏沉积的脂质大部分为甘油。
甘油在1周内增长快，至2周达高峰，保持恒定至42 d，组织学检查发现超过2／3的肝细胞内含有脂滴，14～42d脂肪肝中脂肪含量无明显差别。
3.中国老年学杂志标题：酒精合并高脂饮食建立大鼠脂肪肝模型目的：探讨建立大鼠脂肪肝动物模型的方法。
方法：60只雄性SD大鼠随机分成3组：正常对照(NS)组每日灌胃生理盐水和普通饲料喂养，高剂量模型(HM)组和低剂量模型(LM)组每天按照5g/kg体重对大鼠灌胃浓度为60％(V／V)和30％(v／V)的乙醇和按照5ml／kg灌胃脂肪乳剂的方法，连续3 W，分别在第2周末和第3周末随机选取各组大鼠10只，观察其肝脏病理改变及血液生化指标的变化。
1．1动物3月龄SPF级SD大鼠60只，雄性，体重(220+/-10)g，由广东医学院实验动物中心提供(广东省动物质量合格证编号：2007A021)。
饲养室内温度保持在24℃一26℃，湿维持在50％-60％，专室饲养，专人负责。
高脂饲料：高脂高糖脂肪乳剂(50g／L胆固醇、500g／L猪油、50g/L胆酸钠和50g／L丙基硫氧嘧啶、270g／L蔗糖)1．2方法60只SD大鼠随机分为正常对照组(NS组)、高剂量模型组(HM组)和低剂量模型组(LM组)，每组20只。
所有大鼠均于晚上10点后禁食不禁水，次日NS组每Et灌喂生理盐水和普通饲料乳剂5ml／kg；HM组和LM组分别予60％(V和30％(V／V)按照5g·kg～·d “灌胃，1h后予脂肪乳剂灌胃5ml／kg，随后恢复饲料喂养，每日1次，连续3w，分别在第2周末和第3周末随机选取各组大鼠lO只，取材检测相应指标。
每日观察大鼠的一般症状、进食。
本课题造模采用灌胃脂肪乳剂的方法造模，保证了实验条件的一致性。
于造模更加有利。
本造模方法与人类酒精性脂肪肝病变类似，实验周期较短，造模方法简单易行，一般实验室均可进行，为今后酒精性脂肪肝的研究提供了较有价值的动物模型。
4.造瘘法、酒精灌胃法制作酒精性肝病及高脂营养饮食复制非酒精性肝病的三种动物模型制作方法和优点和缺点。
用刚断乳雄性SD大鼠。
胃造瘘法克服了酒精灌胃模型的缺点，是适合我国国情的简便易行、经济可靠、死亡率低的酒精性肝病动物模型，值得推广应用。
5.福建中医学院学报标题：脂肪肝的动物模型研究进展6、中华肝脏病杂志2010年1月第18卷高脂饮食诱导幼鼠脂肪肝模型的建立及其相关代谢研究目的：通过高脂饮食诱导幼龄大鼠建立非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型。
方法：3周龄刚离乳SD大鼠30只，雌雄各半，随机分为正常(N)组、20％高脂饮食组(HFI 组)、30％高脂饮食组(HF2组)。
无特定病原环境下饲养6周，第6周末处死大鼠，分别进行如下检测：(1)身长、体质量、肝脏质量测量，计算肝指数；(2)采血测空腹ALT、AsT、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、胰岛素、血糖水平，计算HOMA胰岛素抵抗指数；(3)肝组织匀浆，检测肝脏TG水平；(4)肝组织切片苏木素一伊红染色观察肝组织病理形态，油红O 染色显示脂质沉积；(5)免疫组织化学EnVision法染色，显示肝组织固醇调节元件结合蛋白一1、瘦素的表达。
组间均数比较采用One-wayANOV A、两两比较采用LSD方法进行统计学分析。
结论：30％高脂饲料饲养6周，可以诱导幼龄大鼠建立NAFLD模型，高脂饮食导致幼鼠肝脏固醇调节元件结合蛋白一l表达增加，脂肪合成增加，瘦素表达增加。
7、中国医学创新小鼠非酒精性脂肪肝实验模型建立最佳饲料配比方案目的：探讨建立小鼠非酒精性脂肪肝动物模型的最佳饲料配比方案，为进一步开展脂肪肝及其治疗的相关研究提供有价值的实验数据。
方法：80只KM小鼠随机分为4组，甲、乙、丙为模型组，丁组为对照组。
模型组给予不同梯度的高脂饮食，对照组给予正常饮食。
在造模后每1周分别取模型组动物各5只处死，观察其病理模型形成情况，做血液指标检测及病理切片；采用全自动生化分析仪检测生化指标；取肝脏，制肝匀浆，测定LTG/LTC。
结论：适当的高脂高胆固醇配比饮食是一种快速有效的脂肪肝模型制作方法。
8、非酒精性脂肪肝模型小鼠的建立目前文献报道非酒精性脂肪肝小鼠模型建立常用方法为：通过高脂和/或高胆固醇饲料喂养，但该方法成模周期长；●禁食后摄入髙糖、高淀粉诱发脂肪肝，主要缺点是不符合临床上脂肪肝的发病过程；●全胃肠外营养造成的脂肪肝模型，该模型与人类相似，但由于操作复杂限制了其推广应用；●通过胆碱和蛋氨酸缺乏饲料喂养制备模型，但该方法饲养成本较贵[7-9]。
此外，高脂饮食是形成NAFLD的最主要因素，也是NAFLD模型制备的常用方法，目前动物实验中采用的高脂饲料的配方是在基础饲料的基础上添加胆固醇、猪油、胆酸钠，胆酸钠可以乳化脂肪，促进吸收。
喂养8~12周后可以形成肝脏脂肪变性，但形成效果不稳定，并且很难进展到肝纤维化、肝硬化阶段。
为此，实验对造模方法加以改进，方法为：高脂饮食的配方中添加0.2%丙基硫氧嘧啶，抑制胆固醇分解，增加脂质在肝脏中沉积[12]。
在采用复合高脂饲料2周后，腹腔注射5%CCl4植物油溶液，缩短脂肪肝形成时间。
腹腔注射50%的CCl4，2次/周，是常用的制备肝纤维化模型的方法[13-15]，CCl4进入体内后，在肝脏内经肝细胞色素P450激活，生成活泼的三氯甲基自由基和氯自由基[3,16]。
这些自由基可与细胞内和细胞膜的大分子发生共价结合，使酶的功能丧失，细胞膜脂质过氧化，胞浆钙离子浓度升高，导致肝细胞损伤坏死。