负载Ad5-HIVgagenv的DC疫苗在小鼠体内的免疫原性研究重点
2023年华中农业大学分子生物学精品课程试题库选择题有答案
选择题（注: 单项和多项）1. 证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是: 肺炎球菌在老鼠体内的毒性和T2噬菌体感染大肠杆菌。
这两个实验中重要的论点证据是（C）。
A. 从被感染的生物体内重新分离得到DNA作为疾病的致病剂B. DNA突变导致毒性丧失C. 生物体吸取的外源DNA（而并非蛋白质）改变了其遗传潜能D. DNA是不能在生物体间转移的, 因此它一定是一种非常保守的分子E. 真核生物、原核生物、病毒的DNA能互相混合并彼此替代2. 1953年Watson和Crick提出（A）。
A. 多核苷酸DNA链通过氢键连接成一个双螺旋B. DNA的复制是半保存的, 经常形成亲本-子代双螺旋杂合链C. 三个连续的核苷酸代表一个遗传密码D. 遗传物质通常是DNA而非RNAE. 分离到回复突变体证明这一突变并非是一个缺失突变3．DNA双螺旋的解链或变性打断了互补碱基间的氢键, 并因此改变了它们的光吸取特性。
以下哪些是对DNA的解链温度的对的描述？（C.D）A．哺乳动物DNA约为45℃, 因此发热时体温高于42℃是十分危险的B．依赖于A-T含量, 由于A-T含量越高则双链分开所需要的能量越少C．是双链DNA中两条单链分开过程中温度变化范围的中间值D．可通过碱基在260nm的特性吸取峰的改变来拟定E．就是单链发生断裂（磷酸二酯键断裂）时的温度4. DNA的变性（A.C.E）。
A. 涉及双螺旋的解链B. 可以由低温产生C. 是可逆的D. 是磷酸二酯键的断裂E. 涉及氢键的断裂5．在类似RNA这样的单链核酸所表现出的“二级结构”中, 发夹结构的形成（A.D）。
A．基于各个片段间的互补, 形成反向平行双螺旋B．依赖于A-U含量, 由于形成的氢键越少则发生碱基配对所需的能量也越少C．仅仅当两配对区段中所有的碱基均互补时才会发生D．同样涉及有像G-U这样的不规则碱基配对E．允许存在几个只有提供过量的自由能才干形成碱基对的碱基6. DNA分子中的超螺旋（A.C、E）。
DNA疫苗免疫佐剂的研究进展
DNA疫苗免疫佐剂的研究进展摘要: DNA疫苗是一种很有希望的免疫方法，经多途径接种质粒DNA能引起有效的免疫应答，重复给予不会产生抗载体免疫。
然而，质粒DNA疫苗在小型实验动物中诱导的免疫应答远强于在人类和其他非人灵长类动物中。
已设计多种佐剂通过直接刺激免疫系统或增强DNA表达来提高疫苗的免疫原性，这些佐剂包括细胞因子、免疫协同刺激分子、补体分子、脂质体、核酸、聚合物佐剂等。
此文对DNA疫苗佐剂的研究进展作一综述。
关键词:疫苗；DNA；佐剂；免疫；细胞因子；聚合物20世纪90年代以来，DNA疫苗的快速发展给疫苗研究带来了新的变革，已逐步显示出巨大的应用潜力。
然而，DNA疫苗也存在着明显的不足，即DNA疫苗刺激机体产生免疫应答的能力往往比常规疫苗接种引起的免疫反应弱，这就给DNA疫苗的研究提出了新的挑战。
因此，新型疫苗佐剂已成为当今倍受关注的研究热点。
免疫佐剂是指与抗原同时或预先应用，能促进、延长或增强对疫苗抗原特异性免疫应答的物质。
DNA疫苗又称基因疫苗或核酸疫苗，是将编码某种抗原蛋白的基因置于真核表达元件的控制之下，构成重组DNA质粒，当将重组DNA质粒直接导入受者体内后，宿主细胞通过自身转录翻译系统合成抗原蛋白，进而刺激机体产生特异性体液和细胞免疫应答。
DNA疫苗常见的接种途径为肌肉注射，在小动物模型中质粒DNA经静脉、腹腔、舌下、阴道和鼻内接种均能诱导抗原特异性免疫应答；口服能耐受降解的质粒DNA也可引起免疫应答；DNA 疫苗经淋巴组织内接种显示安全，且诱导的免疫应答明显强于肌肉注射。
基因枪可增强质粒DNA导人皮肤，已应用于AIDS、麻疹等多种疫苗接种系统。
与肌肉注射相比，基因枪接种诱导的免疫应答有所提高。
DNA疫苗在小型实验动物中可诱导有效的细胞免疫应答，但在人体临床试验中效却不明显[1]。
DNA疫苗的免疫原性受到接种途径的限制，因吸收差、表达效率低和降解快，质粒DNA只能诱导有限的体液和细胞免疫反应[2]。
大肠埃希菌毒力基因研究进展
大肠埃希菌毒力基因研究进展张金宝;李晓娜;王桂琴【摘要】大肠埃希菌是寄生于人或动物肠道内的一种肠杆菌科的革兰阴性菌，常引起幼畜严重腹泻和败血症、猪水肿病、人的出血性结肠炎-溶血性尿毒综合征、新生儿脑膜炎及肾炎等多种疾病，其毒力基因主要有escs、eaeA、Stx1、Stx2、Stx2e、sep、esp、astA、aggA、hlyE、ST （STa、STb）、LT 等。
论文主要介绍eaeA、Stx2e、ST（STa、STb）、astA 4个毒力基因的来源、结构、所致疾病及其与大肠埃希菌耐药性之间的相关性，旨在为动物疾病的传染源及疾病的流行病学调查和防控提供相关证据。
%Escherichia coli is a Gram-negative bacteria of Enterobacteriaceae in the intestine of human or animals .It often causes severe diarrhea and sepsis in young animals ,pig edema disease ,human hemor-rhagic colitis-hemolytic uremic syndrome ,neonatal meningitis and nephritis and other diseases .Its viru-lence genes mainly includeescs ,eaeA ,Stx1 ,Stx2 ,Stx2e ,Sep ,esp ,astA ,aggA ,hlyE ,ST (STa ,STb) ,LT ,etc .This article briefly described the source ,structure ,the illness caused of the eaeA ,Stx2e , ST (STa ,STb) and astA ,and the correlation between virulence genes and E .coli resistance .The aim is to provide relevant evidence for the infectious source of animal diseases and epidemiology investigations and control .【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2014(000)008【总页数】5页(P70-73,74)【关键词】大肠埃希菌;毒力基因;耐药性【作者】张金宝;李晓娜;王桂琴【作者单位】宁夏大学农学院，宁夏银川750021;宁夏大学农学院，宁夏银川750021;宁夏大学农学院，宁夏银川750021【正文语种】中文【中图分类】S852.612大肠埃希菌是澳大利亚医学家Escherich在1885年借助显微镜首次发现的。
2023年四川省宜宾重点中学中考语文二诊试卷-普通用卷(含解析)
2023年四川省宜宾重点中学中考语文二诊试卷一、单选题（本大题共3小题，共9.0分）1. 下列每对词语中加点字读音完全相同的一项是（）A. 借．口/慰藉．发酵．/校．勘琐屑．/机械．咯．血/客．居B. 溯．流/夙．愿翌．日/肄．业济．南/脊．梁瀑．布/曝．光C. 殷．红/咽．喉省．亲/醒．悟讣．告/奔赴．忌讳．/污秽．D. 腼．腆/分娩．纤．细/鲜．花点缀．/拾掇．酗．酒/畜．牧2. 依次填入下列横线处的词语，正确的一项是（）ㅤㅤ面对柜台里五彩十色、的手机，跃入眼帘的首先是手机的色彩和款式。
有时消费者甚至由于偏爱手机的色彩而放弃对性能或其它方面的苛求；有的手机色彩平庸媚俗，粗糙乏味，即使功能齐全、价格便宜也。
消费者对手机外观色彩需求，口味越来越高，眼光越来越挑剔，各有所好，各有所宜，。
富有创意的手机色彩设计，使手机有灵魂，有生命力，能强烈地刺激消费者的购买欲。
更多时候会让消费者，购买的就是可心、倾心、醉心的颜色。
A. 眼花缭乱无人问津见仁见智心驰神往B. 琳琅满目无人问津众口难调心驰神往C. 琳琅满目门可罗雀见仁见智魂牵梦萦D. 眼花缭乱门可罗雀众口难调魂牵梦萦3. 下列句子，不能明确表达“你应该去翠屏山参加集体活动”意思的一项是（）A. 你安排一下，明天还是一起去翠屏山参加集体活动吧！B. 你明天真有事吗，一起去翠屏山参加集体活动？C. 你是组织者之一，明天不去翠屏山参加集体活动？D. 你不会不去翠屏山参加集体活动吧？二、默写（本大题共1小题，共6.0分）4. 在空白处按要求填写。
(1) 一抹晚烟荒戍垒，______ 。
（纳兰性德《浣溪沙•身向云山那畔行》）（2）______ ，归雁入胡天。
（王维《使至塞上》）(2) 陶渊明在《桃花源记》中，描写桃花源人精神面貌的句子是：______ ，______ 。
(3) 《＜论语＞十二章》中运用对比的手法，强调个人不能改变志向的句子是：______ ，______ 。
中和抗体检测应用于新型冠状病毒mRNA_疫苗效力分析
国家药监局重点实验室专栏[重点实验室简介]国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室是国家药监局２０１９年首批认定的重点实验室ꎬ依托单位为中国食品药品检定研究院生物制品检定所ꎮ生物制品检定所主要开展应用基础研究ꎬ方向包括:治疗类生物技术产品㊁预防类菌苗/疫苗及其创新性产品和一些重要的体内外诊断试剂(血液筛查)的质量控制和质量评价研究ꎻ建立符合国际规范的质量检定用标准物质㊁生产与检定用菌种库和细胞库等ꎮ通过提供疫苗及生物技术产品等国家标准物质㊁建立标准的检验技术㊁研究与制定完善的药品质量标准ꎬ生物制品检定所在我国药品质量控制㊁创新性药品研究与产业化发展中起到不可或缺的技术支撑作用ꎮ生物制品质量研究与评价重点实验室具备完善的生物制品检验检测体系ꎬ检测技术范围与检测能力在国内相同领域是唯一的也是最全面的ꎬ共获得的ＣＮＡＳ实验室资质认定的项目２２２项ꎮ２０１３年生物制品检定所被评估认定成为ＷＨＯ生物制品标准化和评价合作中心ꎬ２０１７年通过ＷＨＯ生物制品标准化和评价合作中心再认定ꎮ通过广泛的国际药交流(ＷＨＯ㊁英国ＮＩＢＳＣ㊁美国药学会㊁美国ＦＤＡ和人用药物注册技术要求国际协调会议ＩＣＨ等)ꎬ重点实验室不仅引进国外先进的药品质量监管理念和技术ꎬ还将我国的一些优势技术运用于国际标准品和国际药品质量标准的建立中ꎬ在相关领域的国际标准制定中发挥重要作用ꎮ实验室主任:徐苗ꎬ女ꎬ医学博士ꎬ研究员ꎬ博士生导师ꎬ中国食品药品检定研究院生物制品检定所所长ꎮ主要从事疫苗等生物制品质量控制与评价的研究和管理工作ꎮ先后主持国家级课题４项ꎬ参与省部级以上课题６项ꎬ以第一或通信作者在«Ｎａｔｕｒａｌｐｒｏｔｏｃｏｌｓ»«ＥｍｅｒｇｉｎｇＭｉｃｒｏｂｅｓ＆Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ»等杂志上发表论文８０余篇ꎬ编写专著５部ꎬ获授权专利６项ꎬ其中３项已经完成转化ꎬ先后获得中华预防医学会科学技术一等奖㊁中国防痨协会科学技术奖一等奖㊁中国药学会科学技术奖二等奖㊁北京市科学技术二等奖等多个奖项ꎮ获国家市场监管总局抗击新冠疫情先进个人㊁中国药学会以岭生物青年生物奖等ꎮ㊀基金项目:国家重点研发计划(Ｎｏ.２０２１ＹＦＣ２３０２４０４)作者简介:吴小红ꎬ女ꎬ硕士ꎬ副研究员ꎬ研究方向:新型冠状病毒ｍＲＮＡ疫苗及狂犬病疫苗质量控制ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｗｕｘｉａｏｈｏｎｇ＠ｎｉｆｄｃ.ｏｒｇ.ｃｎ通信作者:刘欣玉ꎬ男ꎬ博士ꎬ研究员ꎬ研究方向:疫苗质量控制ꎬＴｅｌ:０１０－５３８５１７８０ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｌｉｕｘｉｎｙｕ＠ｎｉｆｄｃ.ｏｒｇ.ｃｎ中和抗体检测应用于新型冠状病毒ｍＲＮＡ疫苗效力分析吴小红ꎬ赵丹华ꎬ所玥ꎬ彭沁华ꎬ王红玉ꎬ刘欣玉ꎬ李玉华(中国食品药品检定研究院虫媒病毒疫苗室ꎬ国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室ꎬ北京１０２６２９)摘要:目的㊀通过对新型冠状病毒(２０１９ｎｏｖｅｌｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓꎬ２０１９－ｎＣｏＶ)ｍＲＮＡ疫苗(新冠ｍＲＮＡ疫苗)免疫小鼠后产生的中和抗体进行检测ꎬ探索中和抗体检测法应用于ｍＲＮＡ疫苗体内效力评价的可行性ꎮ方法㊀采用６~８周ＢＡＬＢ/ｃ小鼠进行后肢肌肉免疫ꎬ检测不同免疫剂量和不同免疫程序的中和抗体滴度ꎮ并对８家企业生产的新冠ｍＲＮＡ疫苗免疫的小鼠血清进行中和抗体和ＩｇＧ抗体检测ꎮ结果㊀２㊁５㊁１０μｇ不同剂量ｍＲＮＡ疫苗按照不同免疫程序免疫小鼠后中和抗体检测结果显示ꎬ抗体阳转率均为１００％ꎬ中和抗体反应有明显的剂量－效应关系ꎮ２针间隔１４ｄ加强免疫组抗体滴度显著高于间隔７ｄ加强免疫组及１针组(Ｆ＝５７.１３ꎬＰ<０.００１)ꎮ２μｇ剂量间隔７ｄ加强免疫和间隔１４ｄ加强免疫产生的中和抗体几何平均滴度(ｇｅｏｍｅｔｒｉｃｍｅａｎｔｉｔｅｒꎬＧＭＴ)分别为２１８和４６８ꎬ差异有统计学意义(ｔ＝３.４０ꎬＰ＝０.００３)ꎻ５μｇ剂量间隔７ｄ加强免疫和间隔１４ｄ加强免疫产生的中和抗体ＧＭＴ分别为４９９和１４３６ꎬ差异有统计学意义(ｔ＝３.６２ꎬＰ＝０.００２)ꎻ１０μｇ剂量间隔７ｄ加强免疫和间隔１４ｄ加强免疫产生的中和抗体ＧＭＴ分别为６０８和１９０９ꎬ差异有统计学意义(ｔ＝３.２３ꎬＰ＝０.００５)ꎮ国内８家企业生产的新冠ｍＲＮＡ疫苗免疫小鼠后均可产生高滴度的ＩｇＧ抗体(１０４.５~１０７.５)和中和抗体(１０２.６~１０４.８)ꎬ效力测定结果均符合企业质量标准ꎮ各企业生产的ｍＲＮＡ疫苗的中和抗体滴度结果差异有统计学意义(Ｆ＝７０.０３ꎬＰ<０.００１)ꎮ结论㊀小鼠免疫后中和抗体检测可用于ｍＲＮＡ疫苗的体内效力评价ꎮ关键词:新型冠状病毒ꎻｍＲＮＡ疫苗ꎻ中和抗体ꎻＩｇＧ抗体ꎻ效力中图分类号:Ｒ９１７㊀文献标志码:Ａ㊀文章编号:２０９５－５３７５(２０２３)１１－０８９６－００６ｄｏｉ:１０.１３５０６/ｊ.ｃｎｋｉ.ｊｐｒ.２０２３.１１.００９ＳｔｕｄｙｏｎｔｈｅｐｏｔｅｎｃｙｏｆｍＲＮＡＣＯＶＩＤ－１９ｖａｃｃｉｎｅｉｎｖｉｖｏｕｓｉｎｇｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙａｓｓａｙＷＵＸｉａｏｈｏｎｇꎬＺＨＡＯＤａｎｈｕａꎬＳＵＯＹｕｅꎬＰＥＮＧＱｉｎｈｕａꎬＷＡＮＧＨｏｎｇｙｕꎬＬＩＵＸｉｎｙｕꎬＬＩＹｕｈｕａ(ＮＭＰＡＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒＱｕａｌｉｔｙＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＥｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＰｒｏｄｕｃｔｓꎬＤｉｖｉｓｉｏｎｏｆＡｒｂｏｖｉｒｕｓＶａｃｃｉｎｅꎬＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｆｏｒＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌꎬＢｅｉｊｉｎｇ１０２６２９ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀ＴｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｐｏｔｅｎｃｙｏｆｍＲＮＡＣＯＶＩＤ－１９ｖａｃｃｉｎｅｉｎｖｉｖｏｂｙｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙａｓｓａｙａｆ￣ｔｅｒｍｉｃｅｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎꎬａｎｄｅｓｔａｂｌｉｓｈａｍｅｔｈｏｄｆｏｒｅｖａｌｕａｔｉｎｇｔｈｅｅｆｆｉｃａｃｙｏｆｔｈｅｖａｃｃｉｎｅ.Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀ＢＡＬＢ/ｃｍｉｃｅａｔ６~８ｗｅｅｋｓｗｅｒｅｉｍｍｕｎｉｚｅｄｗｉｔｈｍＲＮＡＣＯＶＩＤ－１９ｖａｃｃｉｎｅａｎｄｔｈｅｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙｔｉｔｅｒｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉｍｍｕｎｅｄｏｓａｇｅａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎｓｃｈｅｄｕｌｅｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄ.Ｔｈｅｖａｒｉａｎｔｖａｃｃｉｎｅｓｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅｓｗｅｒｅｉｍｍｕｎｉｚｅｄａｔｉｎｔｅｒｖａｌｓｏｆ７ｄｏｒ１４ｄꎬａｎｄｓｅｒｕｍｓａｍｐｌｅｓｗａｓｃｏｌｌｅｃｔｅｄａｔ７ｄａｆｔｅｒｔｈｅｓｅｃｏｎｄｄｏｓｅｏｆｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ.２０１９ｎｏｖｅｌｃｏｒｏｎａｖｉｒ￣ｕｓ(２０１９－ｎＣｏＶ)ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙｔｉｔｅｒａｎｄＩｇＧａｎｔｉｂｏｄｙｔｉｔｅｒｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｐｓｅｕｄｏｖｉｒｕｓｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎｔｅｓｔａｎｄｅｎ￣ｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙｓｅｐａｒａｔｅｌｙ.Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉｍｍｕｎｅｄｏｓａｇｅｏｆ２ꎬ５ꎬ１０μｇｍＲＮＡｖａｃｃｉｎｅｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｓｅｒｏｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅｏｆａｎｔｉｂｏｄｙｉｎｍｉｃｅｗａｓ１００％ａｎｄｔｈｅｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙｒｅａｃ￣ｔｉｏｎｈａｄａｎｏｂｖｉｏｕｓｄｏｓｅ－ｅｆｆｅｃｔｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ.Ｔｈｅｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎａｎｔｉｂｏｄｙｔｉｔｅｒｏｆｔｈｅ１４－ｄａｙｉｎｔｅｒｖａｌｇｒｏｕｐｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｔｈｅ７－ｄａｙｉｎｔｅｒｖａｌｇｒｏｕｐａｎｄｏｎｅｄｏｓｅｇｒｏｕｐ(Ｆ＝５７.１３ꎬＰ<０.００１).Ｔｈｅｇｅｏｍｅｔｒｉｃｍｅａｎｔｉｔｅｒｓ(ＧＭＴ)ｏｆｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙｉｎｄｕｃｅｄｂｙ２μｇｄｏｓａｇｅｉｎｔｅｒｖａｌｏｆ７－ｄａｙａｎｄ１４－ｄａｙｗｅｒｅ２１８ａｎｄ４６８ꎬｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙꎬｗｉｔｈｓｉｇｎｉｆｉ￣ｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ(ｔ＝３.４０ꎬＰ＝０.００３)ꎻＴｈｅＧＭＴｏｆｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙｉｎｄｕｃｅｄｂｙ５μｇｄｏｓａｇｅｉｎｔｅｒｖａｌｏｆ７－ｄａｙａｎｄ１４－ｄａｙｗｅｒｅ４９９ａｎｄ１４３６ꎬｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙꎬｗｉｔｈｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ(ｔ＝３.６２ꎬＰ＝０.００２)ꎻＴｈｅＧＭＴｏｆｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙ１０μｇｄｏｓａｇｅｉｎｔｅｒｖａｌｏｆ７－ｄａｙａｎｄ１４－ｄａｙｗｅｒｅ６０８ａｎｄ１９０９ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙꎬｗｉｔｈｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ(ｔ＝３.２３ꎬＰ＝０.００５).ＨｉｇｈｌｅｖｅｌｓｏｆＩｇＧａｎｔｉｂｏｄｙ(１０４.５~１０７.５)ａｎｄｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙ(１０２.６~１０４.８)ｃｏｕｌｄｂｅｄｅｔｅｃｔｅｄａｆｔｅｒｉｍｍｕｎｉｚｉｎｇｍｉｃｅｗｉｔｈｔｈｅＣＯＶＩＤ－１９ｍＲＮＡｖａｃｃｉｎｅꎬｐｏｔｅｎｃｙｏｆｔｈｅｖａｃｃｉｎｅｓｗｅｒｅａｌｌｍｅｔｗｉｔｈｔｈｅｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓｗｉｔｈｇｏｏｄｌｏｔｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｅꎬｔｈｅｒｅｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｎｔｈｅａｎｔｉｂｏｄｙｔｉｔｅｒｓａｍｏｎｇｔｈｅｖａｒｉｏｕｓｖａｃｃｉｎｅｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍａｎ￣ｕｆａｃｔｕｒｅｒｓ(Ｆ＝７０.０３ꎬＰ<０.００１).Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ㊀ＴｈｅｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙｔｅｓｔｏｆｔｈｅｍｉｃｅａｆｔｅｒｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎｃａｎｂｅｕｓｅｄｔｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｐｏｔｅｎｃｙｏｆＣＯＩＤ－１９ｍＲＮＡｖａｃｃｉｎｅｉｎｖｉｖｏ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:２０１９ｎｏｖｅｌｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓꎻｍＲＮＡｖａｃｃｉｎｅꎻＮｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙꎻＩｇＧａｎｔｉｂｏｄｙꎻＰｏｔｅｎｃｙ㊀㊀新型冠状病毒感染(ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓｄｉｓｅａｓｅ２０１９ꎬＣＯＶＩＤ－１９)的流行对人类健康造成了严重影响ꎮ疫苗接种已被证实对严重疾病㊁降低住院率和死亡率非常有效[１－２]ꎮ其中ｍＲＮＡ疫苗由于具有能够同时诱导体液免疫和细胞免疫㊁研发和生产周期短㊁容易实现量产等优势ꎬ成为国际上主要采用的ＣＯＶＩＤ－１９疫苗研发技术ꎮ随着新型冠状病毒(２０１９－ｎＣｏＶ)变异株的不断出现ꎬ单价变异株疫苗及多价变异株疫苗可作为加强免疫以及异源序贯免疫来应对病毒变异造成的感染威胁[３]ꎮ新冠ｍＲＮＡ疫苗的效力评价目前尚无国际标准ꎬ欧洲及世界卫生组织(ＷＨＯ)专家多推荐体外活性研究作为该疫苗效力评价的主要方法[４－６]ꎮ鉴于ｍＲＮＡ疫苗为创新技术疫苗ꎬ缺乏系统的疫苗质量研究经验ꎬ我国现阶段采用体内和体外双效力指标进行评价[７]ꎬ体内效力的评价可利用动物免疫后检测中和抗体和/或总抗体的方法来进行[８]ꎮ本研究对新冠ｍＲＮＡ疫苗不同免疫剂量和不同免疫程序诱导的中和抗体反应进行初步研究ꎬ并对新冠变异株ｍＲＮＡ疫苗及二价ｍＲＮＡ疫苗免疫小鼠后的抗体阳性率和抗体水平进行体内效力分析ꎬ从而评价ｍＲＮＡ疫苗的质量ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀实验动物㊀ＳＰＦ级ＢＡＬＢ/ｃ小鼠ꎬ６~８周龄ꎬ体重１８~２２ｇꎬ雌雄不限ꎬ由中国食品药品检定研究院动物所提供ꎬ实验动物生产许可证号:ＳＣＸＫ(京)２０２２－０００２ꎬ使用许可证号:ＳＹＸＫ(京)２０２２－００１４ꎬ动物实验伦理批准文号:中检动(福)第２０２２(Ｂ)００８号ꎮ１.２㊀主要试剂及仪器㊀１０ˑＰＢＳ㊁ＴＭＢ㊁终止液购自索莱宝公司ꎻＨＲＰ标记的羊抗小鼠ＩｇＧ购自美国Ｊａｃｋｓｏｎ公司ꎻＢＳＡ购自美国Ｓｉｇｍａ公司ꎻＤＭＥＭ㊁胎牛血清㊁胰酶㊁ＨＥＰＥＳ㊁双抗均购自美国Ｇｉｂｃｏ公司ꎻ荧光素酶检测试剂购自美国普洛麦格Ｐｒｏｍｅｇａ公司ꎻＰｒｏｍｅｇａＧｌｏＭａｘ９６微孔板化学发光检测仪(Ｇｌｏｍａｘｎａｖｉｇａｔｏｒ)购自美国普洛麦格Ｐｒｏｍｅｇａ公司ꎻ酶标仪(ＩｎｆｉｎｉｔｅＭ２００)购自美国蒂肯公司ꎮ１.３㊀实验用疫苗㊁细胞㊁不同型别假病毒㊀实验用疫苗为国内企业生产的ｍＲＮＡ疫苗ꎬ编号Ｖ１~Ｖ９ꎮ其中Ｖ１为原型株疫苗ꎬＶ２~Ｖ７为二价２０１９－ｎＣｏＶ变异株ｍＲＮＡ疫苗(ＯｍｉｃｒｏｎＢＡ.４/５株和Ｄｅｌｔａ株双价㊁ＯｍｉｃｒｏｎＢＡ.４/５株和Ｂｅｔａ株双价㊁ＯｍｉｃｒｏｎＢＡ.２株和原型株双价以及ＯｍｉｃｒｏｎＸＢＢ.１.５株和ＢＱ.１.７株双价)ꎬＶ８~Ｖ９是２０１９－ｎＣｏＶ变异株ｍＲＮＡ疫苗(ＯｍｉｃｒｏｎＢＡ.１)ꎻＶｅｒｏ细胞购自ＡＴＣＣꎬ本室传代保存ꎻ假病毒原型株㊁Ｄｅｌｔａ株㊁Ｂｅｔａ株㊁Ｏ￣ｍｉｃｒｏｎＢＡ.１㊁ＯｍｉｃｒｏｎＢＡ.２㊁ＯｍｉｃｒｏｎＢＡ.４/５㊁ＯｍｉｃｒｏｎＸＢＢ.１.５购自北京云菱生物技术公司ꎻ不同株２０１９－ｎＣｏＶＳ蛋白抗原分别购自北京义翘神州生物技术有限公司和北京百普赛斯公司ꎮ１.４㊀免疫剂量及免疫程序１.４.１㊀ｍＲＮＡ疫苗免疫剂量和免疫程序研究㊀将Ｖ１ｍＲＮＡ疫苗(原型株)配制成不同浓度后ꎬ按照不同的免疫程序分成Ａ㊁Ｂ㊁Ｃ３组:Ａ组程序为免疫１针ꎬ１４ｄ采血ꎻＢ组程序为间隔７ｄ加强免疫１针后７ｄ采血ꎻＣ组程序为间隔１４ｄ加强免疫１针后７ｄ采血ꎮ每种免疫程序按照不同的免疫剂量分成３个小组ꎬ分别是每只小鼠注射２㊁５和１０μｇꎬ共计９组ꎬ每组１０只小鼠ꎮ同时１０只小鼠注射生理盐水作为阴性对照组ꎮ每只小鼠后肢肌肉注射１００μＬ疫苗ꎬ眼球取血分离血清ꎬ－２０ħ保存备用ꎮ用假病毒中和试验法检测抗２０１９－ｎＣｏＶ中和抗体ꎮ１.４.２㊀实验疫苗免疫和检测㊀ｍＲＮＡ变异株疫苗及二价疫苗均按照企业的免疫剂量和免疫程序进行免疫和采血ꎬ分离血清后于－２０ħ保存ꎮ分别进行中和抗体和ＩｇＧ结合抗体的检测ꎮ１.５㊀假病毒中和试验(ＰＢＮＡ法)㊀按照操作规程进行[９－１０]ꎬ在９６孔板上３倍系列稀释的血清１００μＬꎬ分别加入各型假病毒[用ＤＭＥＭ培养基稀释至１.３ˑ１０４半数组织培养感染剂量(ＴＣＩＤ５０)/ｍＬ]ꎬ每孔加入５０μＬꎬ同时设立病毒对照和细胞对照ꎮ３７ħ５％ＣＯ２培养箱中和１ｈꎬ加入２ˑ１０５个/ｍＬ的Ｖｅｒｏ细胞悬液ꎬ每孔１００μＬꎬ３７ħ５％ＣＯ２培养箱培养２０~２８ｈ后ꎬ从细胞培养箱中取出９６孔板ꎬ用多道移液器从每个上样孔中吸弃１５０μＬ上清ꎬ然后加入１００μＬ荧光素酶检测试剂ꎬ室温避光反应２ｍｉｎꎮ反应结束后ꎬ用多道移液器将反应孔中的液体反复吹吸６~８次ꎬ使细胞充分裂解ꎬ从每孔中吸出１００μＬ液体ꎬ加于对应９６孔化学发光检测板中ꎬ置于化学发光检测仪中读取发光值ꎮ计算抑制率＝{１－[样品组的发光强度均值－空白对照ＣＣ(ＣｅｌｌＣｏｎｔｒｏｌꎬＣＣ)均值]/[阴性组的发光强度ＶＣ(ＶｉｒｕｓＣｏｎｔｒｏｌꎬＶＣ)均值－空白对照值ＣＣ均值]}ˑ１００％ꎮ根据中和抑制率结果ꎬ按照ＲｅｅｄＭｕｅｎｃｈ法计算中和抗体滴度半数效应剂量(５０％ｍａｘｉｍａｌｅｆｆｅｃｔｉｖｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎꎬＥＣ５０)ꎬＥＣ５０>３０为抗体阳性ꎮ１.６㊀特异性抗２０１９－ｎＣｏＶＳｐｉｋｅ蛋白ＩｇＧ抗体检测㊀将２０１９－ｎＣｏＶ各株抗原分别用１ˑＰＢＳ稀释至２μｇ ｍＬ－１ꎬ取９６孔板每孔加１００μＬꎬ(５ʃ３)ħ条件下包被过夜１６ｈꎬＰＢＳＴ洗板３次ꎬ拍干后加入封闭液(２％ＢＳＡ溶液)ꎬ１００μＬ/孔ꎬ３７ħ孵箱里封闭２ｈꎬ加入系列稀释后的待检测血清样本ꎬ３７ħ孵箱里孵育后１ｈꎬＰＢＳＴ洗板３次ꎬ加入辣根过氧化物酶(ＨＲＰ)标记的羊抗小鼠ＩｇＧ抗体ꎬ每孔１００μＬꎬ３７ħ孵育后１ｈꎬＰＢＳＴ洗板３次ꎬ加入底物ＴＭＢ５０μＬꎬ室温避光显色３~５ｍｉｎꎬ加入１ｍｏｌ Ｌ－１硫酸溶液终止液终止ꎬ１５０μＬ/孔ꎬ在酶标仪上检测波长４５０ｎｍ/６３０ｎｍ的ＯＤ值ꎬ以阴性小鼠吸光度均值的２.１倍为ｃｕｔｏｆｆ值ꎮ血清Ａ值大于ｃｕｔｏｆｆ值为抗体阳性ꎬ取阳性Ａ值最大的血清稀释度为血清的ＩｇＧ抗体滴度ꎮ１.７㊀统计学方法㊀使用ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ８.０进行数据分析ꎬ相同免疫剂量不同免疫程序以及相同免疫程序不同免疫剂量间中和抗体滴度以及不同企业ｍＲＮＡ疫苗免疫后中和抗体之间比较采用单因素方差分析评估组间差异ꎬ中和抗体和ＩｇＧ抗体之间差异采用ｔ检验分析ꎬＰ<０.０５表示差异有统计学意义ꎮ２㊀结果２.１㊀不同免疫剂量和不同免疫程序的抗体反应㊀针对原型株ｍＲＮＡ疫苗不同免疫剂量和免疫程序的中和抗体检测结果显示ꎬ２㊁５㊁１０μｇｍＲＮＡ疫苗免疫小鼠后ꎬ１针免疫组和２针免疫组抗体阳性率均为１００％ꎮ２㊁５㊁１０μｇ首针免疫后１４ｄ或２１ｄ中和抗体反应具有明显的剂量－效应关系ꎮ相同免疫剂量㊁不同免疫程序结果显示ꎬ２针免疫组高于１针免疫组ꎬ其中２μｇ剂量组不同针次之间抗体滴度结果差异有统计学意义(Ｆ＝２０.６４ꎬＰ<０.００１)ꎻ５μｇ剂量组不同针次之间抗体滴度结果差异有统计学意义(Ｆ＝１８.２７ꎬＰ<０.００１)ꎻ１０μｇ剂量组不同针次之间抗体滴度结果差异有统计学意义(Ｆ＝１１.３７ꎬＰ<０.００１)ꎮ２针免疫组中１４ｄ加强免疫组高于７ｄ加强免疫组及１针组(Ｆ＝５７.１３ꎬＰ<０.００１)ꎮ其中２μｇ间隔７ｄ加强免疫和间隔１４ｄ加强免疫组产生的中和抗体几何平均滴度(ｇｅｏｍｅｔｒｉｃｍｅａｎｔｉｔｅｒꎬＧＭＴ)分别为２１８和４６８ꎬ１４ｄ为７ｄ的２.１５倍ꎬ差异有统计学意义(ｔ＝３.４０ꎬＰ＝０.００３)ꎻ５μｇ间隔７ｄ加强免疫和间隔１４ｄ加强免疫产生的中和抗体ＧＭＴ分别为４９９和１４３６ꎬ１４ｄ为７ｄ的２.８８倍ꎬ差异有统计学意义(ｔ＝３.６２ꎬＰ＝０.００２)ꎻ１０μｇ间隔７ｄ加强免疫和间隔１４ｄ加强免疫产生的中和抗体ＧＭＴ分别为６０８和１９０９ꎬ１４ｄ为７ｄ的３.１４倍ꎬ差异有统计学意义(ｔ＝３.２３ꎬＰ＝０.００５)ꎮ相同免疫程序㊁不同免疫剂量诱导的抗体反应结果显示ꎬ１针免疫组不同剂量间相比(Ｆ＝７.３３ꎬＰ＝０.００３)ꎻ２针免疫组ꎬ间隔７ｄ不同剂量间相比(Ｆ＝６.４０ꎬＰ＝０.００５)ꎻ２针免疫组ꎬ间隔１４ｄ不同剂量间相比(Ｆ＝７.６４ꎬＰ＝０.００２)ꎬ差异均有统计学意义ꎬ结果见表１ꎮ表１㊀Ｖ１疫苗不同免疫剂量和免疫程序的中和抗体滴度及阳性率剂量/μｇＧＭＴ(９５％ＣＩ)Ａ组Ｂ组Ｃ组Ｆ值Ｐ值阳性率(％)２６０(４６~７３)２１８(１６７~６２９)４６８(２６３~６７４)２０.６４Ｐ<０.００１１００.０５１８７(１０２~２７１)４９９(３１１~６８８)１４３６(７５９~２１１２)１８.２７Ｐ<０.００１１００.０１０３４９(５２~６４６)６０８(２６９~９４８)１９０９(７０９~３１０９)１１.３７Ｐ<０.００１１００.０Ｆ值７.３３６.４０７.６４３.４０ａ３.６２ｂ３.２３ｃＰ值０.００３０.００５０.００２０.００３ａ０.００２ｂ０.００５ｃ阳性率(％)１００.０１００.０１００.０///㊀注:ＧＭＴ为几何平均滴度:９５％ＣＩ:９５％可信区间ꎻ/表示无统计ꎻａｂｃ２㊁５㊁１０μｇ间隔７ｄ和间隔１４ｄ中和抗体滴度分别进行ｔ检验ꎮ２.２㊀８家企业生产的新冠变异株ｍＲＮＡ疫苗体内效力检测结果㊀８家企业生产的疫苗Ｖ２~Ｖ９按照企业的免疫剂量和免疫程序免疫ＢＡＬＢ/ｃ小鼠后ꎬ中和抗体及特异性ＩｇＧ抗体检测结果见表２ꎮ表２㊀不同企业生产的ｍＲＮＡ疫苗抗体检测结果生产者免疫程序检测批数ＬｇＩｇＧ(ＧＭＴ)中和抗体ＥＣ５０(ＧＭＴ)(ＬｇＥＣ５０)Ｖ３７ｄ２针免疫１４ｄ采血Ｖ４７ｄ２针免疫１４ｄ采血Ｖ５１４ｄ２针免疫２１ｄ采血Ｖ６１４ｄ２针免疫２１ｄ采血Ｖ７１４ｄ２针免疫２１ｄ采血Ｖ８１４ｄ２针免疫２８ｄ采血Ｖ９１４ｄ２针免疫２８ｄ采血２５.９５.６１２０２(３.１)Ｎ/Ａ３５.６５.７１２６８(３.１)Ｎ/Ａ１５.９６.０４１０(２.６)９６６(３.０)２６.０５.７６１７(２.８)１４５６(３.２)３６.０５.７６４４(２.８)１６７１(３.２)４６.９６.６６６７(２.８)３９３５(３.６)１４.５４.８１２９１(３.１)２０８０(３.３)２４.７４.９１５５６(３.２)２３５３(３.４)３４.７４.８１３６１(３.１)２５８２(３.４)４４.６４.９１０５０(３.０)１９３１(３.３)１６.０６.１１２７４(３.１)３８１２(３.６)２６.１５.８１１７０(３.１)２７９８(３.４)３６.０５.８１５８９(３.２)３０９７(３.５)４６.０６.０１２９８(３.１)４０７４(３.６)１５.０４.８７４９５(３.９)１４２７(３.２)２５.１５.０６２３０(３.８)１２５７(３.１)３５.３５.２９５８０(４.０)２８０６(３.４)１７.１/２４４５３(４.４)/２７.５/２７９７６(４.４)/３７.５/２６９７９(４.４)/１５.６/６５６３０(４.８)/２５.６/４０４４５(４.６)/３５.６/２５３４３(４.４)/Ｆ值或ｔ值１１.４７ａ１７.５６ｂ７０.０３ｃＰ值Ｐ<０.００１ａＰ<０.００１ｂＰ<０.００１ｃ㊀注: / 代表该疫苗为单价疫苗ꎻ Ｎ/Ａ 代表该组分未检测ꎻ １㊁２㊁３㊁４ 分别代表检测批数ꎮａ代表组分１ＩｇＧ结合抗体和中和抗体滴度ｔ检验结果ꎻｂ代表组分２ＩｇＧ结合抗体和中和抗体滴度ｔ检验结果ꎻｃ代表各企业之间中和抗体滴度方差分析结果ꎮ组分１和组分２代表双价疫苗中的单价组分ꎬ如Ｖ７疫苗:组分１为德尔塔株ꎬ组分２为奥密克戎ＢＡ.４/５株ꎮ２.３㊀特异性ＩｇＧ结合抗体和中和抗体结果分析㊀检测结果以对数转换后进行ｔ检验ꎬ组份１ＩｇＧ和ＥＣ５０比较ｔ＝１１.４７ꎬＰ<０.００１ꎻ组份２ＩｇＧ和ＥＣ５０比较ｔ＝１７.５６ꎬＰ<０.００１ꎬ均显示中和抗体检测结果和ＩｇＧ结合抗体检测差异有统计学意义ꎮＰｅａｒｓｏｎ相关系数ｒ分别为０.４２和０.２２ꎮ虽然两种方法抗体检测结果相关性较差ꎬ但均可以检测到高水平的抗体特异性反应ꎮ两种方法检测各企业３~４批疫苗ꎬＩｇＧ抗体结果批间变异系数在１.０％~７.６％ꎬ中和抗体结果批间变异系数在２.０％~７.９％ꎬ提示两种抗体检测方法均可以用于评价疫苗体内效价的批间一致性ꎮ各企业ｍＲＮＡ疫苗的中和抗体结果对数转换后进行组间方差分析ꎬ差异有统计学意义(Ｆ＝７０.０３ꎬＰ<０.００１)ꎮ３㊀讨论新冠ｍＲＮＡ疫苗临床前和临床研究中均证实疫苗的有效性与动物或人群保护力之间有一定的量效关系[１１－１４]ꎮ中和抗体是最重要的保护性抗体ꎬ与２０１９－ｎＣｏＶ感染者症状严重程度之间也有一定的相关性[１５－１６]ꎮ因此建立标准的中和抗体检测平台技术对ＣＯＶＩＤ－１９疫苗进行评价尤为重要[１７]ꎮ本研究采用的假病毒中和方法经国内多家实验室联合验证[９ꎬ１８]ꎬ抗体检测结果相对客观ꎬ与ＩｇＧ结合抗体检测相比更能体现疫苗的免疫原性ꎮ尤其对于多价疫苗ꎬ假病毒中和抗体检测方法可实现对不同变异株抗体分别进行检测ꎬ能较好的反映出针对多价疫苗各毒株组份疫苗诱导的抗体中和活性ꎮ通过对１批ｍＲＮＡ原型株疫苗不同免疫剂量和不同免疫程序的分析ꎬ提示ｍＲＮＡ疫苗免疫小鼠后的中和抗体水平与免疫剂量和免疫程序有密切关系ꎮ本研究发现ꎬ同等剂量下(２㊁５㊁１０μｇ)间隔７ｄ与间隔１４ｄ２针免疫的抗体结果差异有统计学意义ꎬ对于ｍＲＮＡ疫苗来说ꎬ间隔７ｄ的第２针加强免疫不是产生高滴度中和抗体的最适宜的程序ꎬ疫苗实际使用过程中第２针加强免疫的时间选择在２１ｄ或２８ｄ[１１－１２]ꎮ因此ｍＲＮＡ疫苗体内效力的评价应适当关注免疫程序的设计ꎮ研究结果显示ｍＲＮＡ变异株单价疫苗或二价疫苗中针对不同组分的ＩｇＧ抗体滴度均在１０４.５~１０７.５间ꎬ符合各企业的质量标准(不低于１０３或１０４)ꎬ且各企业生产的疫苗ＩｇＧ抗体结果批间一致性良好ꎬ变异系数在１.０％~７.６％之间ꎮ假病毒法检测中和抗体滴度在１０２.６~１０４.８之间ꎬ不同企业生产的疫苗免疫后中和抗体水平差异有统计学意义(Ｆ＝７０.０３ꎬＰ<０.００１)ꎬ与国产ｍＲＮＡ疫苗已公布的Ⅰ~Ⅱ期临床研究数据一致ꎬ不同企业新冠ｍＲＮＡ疫苗在人体内产生的中和抗体滴度有差异[１２－１５]ꎮ各企业不同批次中和抗体检测结果变异系数为２.０％~７.９％ꎮ因此中和抗体检测可用于不同企业ｍＲＮＡ疫苗效力的比较研究以及疫苗批间一致性的评价ꎮ辉瑞公司生产的ＢＮＴ１６２ｂ为３０μｇ/剂ꎬ莫德纳公司ｍＲＮＡ－１２７３为１００μｇ/剂ꎮ两款疫苗对２０１９－ｎＣｏＶ感染的保护效力分别达到了９４.６％和９４.１％ꎬ不同的人用剂量和免疫程序可产生相同的临床保护力[１９－２１]ꎮｍＲＮＡ－１２７３Ⅲ期临床研究结果显示接种该疫苗后假病毒法检测中和抗体滴度半数抑制稀释(５０％ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｄｉｌｕｔｉｏｎꎬＩＤ５０)为１０㊁１００和１０００ꎬ测算疫苗保护效力分别为７８％㊁９１％和９６％[２２]ꎻ新冠灭活疫苗ＮＶＸ－ＣｏＶ２３７３中和抗体滴度ＩＤ５０为５０㊁１００和７２３０(ＩＵ５０ ｍＬ－１)ꎬ疫苗保护效力分别为７５.７％㊁８１.７％和９６.８％[２３]ꎮ本研究结果显示国产新冠ｍＲＮＡ疫苗小鼠免疫后中和抗体均达到较高水平ꎬ无论是１针免疫还是２针免疫ＥＣ５０除个别企业因单价组分配比含量低ꎬ造成滴度偏低(Ｖ４)外ꎬ其余企业中和抗体滴度均在在１０００以上甚至更高ꎬ提示国产新冠ｍＲＮＡ疫苗的体内效力结果已达到较高的标准要求ꎮ虽然本研究未利用上述新冠ｍＲＮＡ疫苗进一步开展攻毒保护力研究ꎬ但随着ｍＲＮＡ疫苗大量的临床研究数据以及真实世界的保护力数据公布ꎬ会对疫苗的效力评价标准提供更有效的数据支持ꎮ尽快建立效力评价用疫苗参考品和血清检测用标准物质ꎬ提高国产ｍＲＮＡ疫苗的质量评价水平是下一步研究方向ꎮ参考文献:[１]㊀ＥＡＲＬＥＫＡꎬＡＭＢＲＯＳＩＮＯＤＭꎬＦＩＯＲＥ－ＧＡＲＴＬＡＮＤＡꎬｅｔａｌ.ＥｖｉｄｅｎｃｅｆｏｒａｎｔｉｂｏｄｙａｓａｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｃｏｒｒｅｌａｔｅｆｏｒＣＯ￣ＶＩＤ－１９ｖａｃｃｉｎｅｓ[Ｊ].Ｖａｃｃｉｎｅꎬ２０２１ꎬ３９(３２):４４２３－４４２８. 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[９]ＮＩＥＪꎬＬＩＱꎬＷＵＪꎬｅｔａｌ.Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔａｎｄｖａｌｉｄａｔｉｏｎｏｆａｐｓｅｕｄｏ－ｖｉｒｕｓｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎａｓｓａｙｆｏｒＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２[Ｊ].ＥｍｅｒｇＭｉｃｒｏｂｅｓＩｎｆｅｃｔꎬ２０２０ꎬ９(１):６８０－６８６.[１０]ＮＩＥＪꎬＬＩＱꎬＷＵＪꎬｅｔａｌ.ＱｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙｂｙａｐｓｅｕｄｏ－ｔｙｐｅｄｖｉｒｕｓ－ｂａｓｅｄａｓｓａｙ[Ｊ].ＮａｔＰｒｏｔｏｃꎬ２０２０ꎬ１５(１１):３６９９－３７１５.[１１]ＬＩＪＬꎬＬＩＵＱꎬＬＩＵＪꎬｅｔａｌ.ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆＢｉｖａｌｅｎｔｍＲＮＡＶａｃｃｉｎｅｓａｇａｉｎｓｔＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｖａｒｉａｎｔｓ[Ｊ].Ｖａｃ￣ｃｉｎｅｓ(Ｂａｓｅｌ)ꎬ２０２２ꎬ１０(１１):１８０７.[１２]ＹＡＮＧＲꎬＤＥＮＧＹꎬＨＵＡＮＧＢＹꎬｅｔａｌ.Ａｃｏｒｅ－ｓｈｅｌｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｄＣＯＶＩＤ－１９ｍＲＮＡｖａｃｃｉｎｅｗｉｔｈｆａｖｏｒａｂｌｅｂｉｏ￣ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｐａｔｔｅｒｎａｎｄｐｒｏｍｉｓｉｎｇｉｍｍｕｎｉｔｙ[Ｊ].ＳｉｇｎａｌＴｒａｎｓｄｕｃｔＴａｒｇｅｔＴｈｅｒꎬ２０２１ꎬ６(１):２１３.[１３]ＣＨＥＮＧＬꎬＬＩＸＦꎬＤＡＩＸＨꎬｅｔａｌ.Ｓａｆｅｔｙａｎｄｉｍｍｕｎｏｇｅ￣ｎｉｃｉｔｙｏｆｔｈｅＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ＡＲＣｏＶｍＲＮＡｖａｃｃｉｎｅｉｎＣｈｉｎｅｓｅａｄｕｌｔｓ:ａｒａｎｄｏｍｉｚｅｄꎬｄｏｕｂｌｅ－ｂｌｉｎｄꎬｐｌａｃｅｂｏ－ｃｏｎ￣ｔｒｏｌｌｅｄꎬｐｈａｓｅ１ｔｒｉａｌ[Ｊ].ＬａｎｃｅｔＭｉｃｒｏｂｅꎬ２０２２ꎬ３(３):ｅ１９３－ｅ２０２.[１４]ＸＵＫꎬＬＥＩＷＷꎬＫＡＮＧＢꎬｅｔａｌ.ＡｎｏｖｅｌｍＲＮＡｖａｃｃｉｎｅꎬＳＹＳ６００６ꎬａｇａｉｎｓｔＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２[Ｊ].ＦｒｏｎｔＩｍｍｕｎｏｌꎬ２０２３(１３):１０５１５７６.[１５]ＧＡＲＣＩＡ－ＢＥＬＴＲＡＮＷＦꎬＬＡＭＥＣꎬＡＳＴＵＤＩＬＬＯＭＧꎬｅｔａｌ.ＣＯＶＩＤ－１９－ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｐｒｅｄｉｃｔｄｉｓｅａｓｅｓｅｖｅｒｉｔｙａｎｄｓｕｒｖｉｖａｌ[Ｊ].Ｃｅｌｌꎬ２０２１ꎬ１８４(２):４７６－４８８. [１６]ＫＨＯＵＲＹＤＳꎬＣＲＯＭＥＲＤꎬＲＥＹＮＡＬＤＩＡꎬｅｔａｌ.Ｎｅｕ￣ｔｒａｌｉｚｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙｌｅｖｅｌｓａｒｅｈｉｇｈｌｙｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅｏｆｉｍｍｕｎｅｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎｆｒｏｍｓｙｍｐｔｏｍａｔｉｃＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ[Ｊ].ＮａｔＭｅｄꎬ２０２１ꎬ２７(７):１２０５－１２１１.[１７]ＷＡＮＧＹＣ.ＳｔａｎｄａｒｄｉｚｅｄｎｅｕｔｒａｌｉｓｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙａｓｓａｙｓａｒｅｎｅｅｄｅｄｆｏｒｅｖａｌｕａｔｉｎｇＣＯＶＩＤ－１９ｖａｃｃｉｎｅｓ[Ｊ].ＥＢｉｏＭｅｄｉ￣ｃｉｎｅꎬ２０２１(７３):１０３６７７.[１８]ＧＵＡＮＬＤꎬＹＵＹＬꎬＷＵＸＨꎬｅｔａｌ.ＴｈｅｆｉｒｓｔＣｈｉｎｅｓｅｎａ￣ｔｉｏｎａｌｓｔａｎｄａｒｄｓｆｏｒＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙ[Ｊ].Ｖａｃｃｉｎｅꎬ２０２１ꎬ３９(２８):３７２４－３７３０.[１９]ＰＯＬＡＣＫＦＰꎬＴＨＯＭＡＳＳＪꎬＫＩＴＣＨＩＮＮꎬｅｔａｌ.ＳａｆｅｔｙａｎｄＥｆｆｉｃａｃｙｏｆｔｈｅＢＮＴ１６２ｂ２ｍＲＮＡＣｏｖｉｄ－１９Ｖａｃｃｉｎｅ[Ｊ].ＮＥｎｇｌＪＭｅｄꎬ２０２０ꎬ３８３(２７):２６０３－２６１５.[２０]ＳＫＯＷＲＯＮＳＫＩＤＭꎬＤＥＳＥＲＲＥＳＧ.ＳａｆｅｔｙａｎｄｅｆｆｉｃａｃｙｏｆｔｈｅＢＮＴ１６２ｂ２ｍＲＮＡｃｏｖｉｄ－１９ｖａｃｃｉｎｅ[Ｊ].ＮＥｎｇｌＪＭｅｄꎬ２０２１ꎬ３８４(１６):１５７６－１５７７.[２１]ＢＡＤＥＮＬＲꎬＥＬＳＡＨＬＹＨＭꎬＥＳＳＩＮＫＢꎬｅｔａｌ.ＥｆｆｉｃａｃｙａｎｄｓａｆｅｔｙｏｆｔｈｅｍＲＮＡ－１２７３ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ｖａｃｃｉｎｅ[Ｊ].ＮＥｎｇｌＪＭｅｄꎬ２０２１ꎬ３８４(５):４０３－４１６.[２２]ＧＩＬＢＥＲＴＰＢꎬＭＯＮＴＥＦＩＲＲＩＤＣꎬＭＣＤＥＲＭＯＴＴＡＢꎬｅｔａｌ.ＩｍｍｕｎｅｃｏｒｒｅｌａｔｅｓａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｍＲＮＡ－１２７３ＣＯ￣ＶＩＤ－１９ｖａｃｃｉｎｅｅｆｆｉｃａｃｙｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌ[Ｊ].Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ２０２２ꎬ３７５(６５７６):４３－５０.[２３]ＦＯＮＧＹꎬＨＵＡＮＧＹꎬＢＥＮＫＥＳＥＲＤꎬｅｔａｌ.Ｉｍｍｕｎｅｃｏｒｒｅ￣ｌａｔｅｓａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅＰＲＥＶＥＮＴ－１９ＣＯＶＩＤ－１９ｖａｃｃｉｎｅｅｆｆｉｃａｃｙｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌ[Ｊ].ＮａｔＣｏｍｍｕｎꎬ２０２３ꎬ１４(１):３３１.(收稿日期:２０２３－１０－１３)(上接第８８３页)[１５]ＷＵＹＢꎬＰＥＮＧＭＣꎬＺＨＡＮＧＣꎬｅｔａｌ.Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｄｅｔｅｒ￣ｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｍｕｌｔｉ－ｃｌａｓｓｂｉｏａｃｔｉｖｅｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｆｏｒｑｕａｌｉｔｙａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｏｆｔｅｎＡｎｏｅｃｔｏｃｈｉｌｕｓꎬｆｏｕｒＧｏｏｄｙｅｒａａｎｄｏｎｅＬｕｄｉｓｉａｓｐｅｃｉｅｓｉｎＣｈｉｎａ[Ｊ].ＣｈｉｎＨｅｒｂＭｅｄꎬ２０２０ꎬ１２(４):４３０－４３９.[１６]ＤＵＸＭꎬＩＲＩＮＯＮꎬＦＵＲＵＳＨＯＮꎬｅｔａｌ.ＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｌｙａｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｕｎｄｓｉｎｔｈｅＡｎｏｅｃｔｏｃｈｉｌｕｓａｎｄＧｏｏｄｙｅｒａｓｐｅｃｉｅｓ[Ｊ].ＪＮａｔＭｅｄꎬ２００８ꎬ６２(２):１３２－１４８.[１７]ＤＵＸＭꎬＳＵＮＮＹꎬＣＨＥＮＹꎬｅｔａｌ.Ｈｅｐａｔｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅａｌｉ￣ｐｈａｔｉｃｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓｆｒｏｍｔｈｒｅｅＧｏｏｄｙｅｒａｓｐｅｃｉｅｓ[Ｊ].ＢｉｏｌＰｈａｒｍＢｕｌｌꎬ２０００ꎬ２３(６):７３１－７３４.[１８]张婉菁ꎬ刘量ꎬ胡荣ꎬ等.斑叶兰抗氧化活性组分研究及其乳膏的制备[Ｊ].中医药导报ꎬ２０１７ꎬ２３(１):５９－６２. [１９]朱平福ꎬ赵怡ꎬ金晶.斑叶兰抗炎作用的实验研究[Ｊ].中国民族民间医药ꎬ２０１０ꎬ１９(４):３５－３６.[２０]ＤＡＩＬＹꎬＹＩＮＱＭꎬＱＩＵＪＫꎬｅｔａｌ.ＧｏｏｄｙｓｃｈｌｅＡꎬａｎｅｗｂｕｔｅｎｏｌｉｄｅｗｉｔｈｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔＢｃｈＥｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙａｃｔｉｖｉｔｙｆｒｏｍＧｏｏｄｙｅｒａｓｃｈｌｅｃｈｔｅｎｄａｌｉａｎａ[Ｊ].ＮａｔＰｒｏｄＲｅｓꎬ２０２１ꎬ３５(２３):４９１６－４９２１.[２１]ＤＵＸＭꎬＳＵＮＮＹꎬＴａｋｉｚａｗａＮꎬｅｔａｌ.Ｓｅｄａｔｉｖｅａｎｄａｎｔｉ￣ｃｏｎｖｕｌｓａｎｔａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｇｏｏｄｙｅｒｉｎꎬａｆｌａｖｏｎｏｌｇｌｙｃｏｓｉｄｅｆｒｏｍＧｏｏｄｙｅｒａｓｃｈｌｅｃｈｔｅｎｄａｌｉａｎａ[Ｊ].ＰｈｙｔｏｔｈｅｒＲｅｓꎬ２００２ꎬ１６(３):２６１－２６３.[２２]党友超ꎬ黄哲ꎬ李蒙禹ꎬ等.黔产金线莲及其易混品(斑叶兰)的显微鉴定研究[Ｊ].贵阳中医学院学报ꎬ２０１８ꎬ４０(４):３０－３４.[２３]黄哲ꎬ党友超ꎬ王世清.黔产金线莲与其易混品斑叶兰的叶表皮显微特征研究[Ｊ].贵阳中医学院学报ꎬ２０１９ꎬ４１(２):３４－３７.(收稿日期:２０２３－０５－０８)。
DC-CIK与间充质干细胞在肿瘤治疗中的研究进展
DC-CIK与间充质干细胞在肿瘤治疗中的研究进展雷茜;谭小军;刘丽【摘要】Malignant tumor is one of the diseases with the highest mortality at present .The biological immunotherapy therapy as an important adjuvant therapy of malignant tumors to the three conventional treatments ,has demonstrated excel-lent anti-tumor properties and the ability to enhance the immune system in patients withcancer .Mesenchymal stem cells are pluripotent stem cells with self-renewal and multilineage differentiation potential ,which can inhibit graft versus host reac-tion,and have a direct inhibitory effect on tumor growth. Because of its unique advantages, the combination of biological immune therapy and stem cells has attracted more and more attention , but there is mutual inhibition between the two meth-ods.How to combine the two methods to achieve the best effect of the treatment of cancer is still in an immature stage .A large number of basic experiments are needed to explore the best combination of the two methods ,and provide a basis for the clinical applications .%恶性肿瘤是目前病死率最高的疾病之一,而生物免疫疗法作为恶性肿瘤三大常规治疗后的重要辅助治疗,在临床上表现出很好的抗肿瘤特性及重建与增强肿瘤患者的免疫系统的能力.间充质干细胞是一群具有多向分化及自我更新能力的多能干细胞,并具有抑制移植物抗宿主反应的作用,同时也具备直接抑制肿瘤生长的作用.生物免疫疗法与干细胞联合应用因具有其独特的优势而越来越受关注,但两者联合的同时存在相互抑制作用.对于两者如何联合来发挥各自的最大优势,并进行肿瘤的治疗仍处于不成熟阶段,故需大量的基础试验来探索两者的最佳联合方式,并为临床的应用提供依据.【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2017(023)005【总页数】5页(P921-925)【关键词】肿瘤;树突状细胞;细胞因子诱导的杀伤细胞;间充质干细胞【作者】雷茜;谭小军;刘丽【作者单位】南华大学,湖南衡阳421000;湘潭市中心医院生殖中心,湖南湘潭411000;中南大学湘雅三医院超声科,长沙 410008【正文语种】中文【中图分类】R730.54根据2015年全国肿瘤登记中心的最新数据显示，2012年全国癌症死亡数达218.7万例,其中肺癌是发病率和病死率最高的肿瘤，其次为胃癌、食管癌和肝癌[1]。
黏膜疫苗的研究现状与进展_王志明
vaccines are facing many difficulties and challenges，the progress of research work will bring new opportunities to mucosal vaccines de-
免疫系统， 而黏膜疫苗诱导的免疫应答具有多型性 ， 不仅产 生黏膜免疫应答， 还能诱导系统性免疫应答 ， 且能在病原体 入侵的最起始阶段产生免疫保护作用 ， 对疾病的预防和控制 具有重要的意义。另外， 黏膜疫苗还具有成本低 、 易免疫、 避 免注射免疫造成的副反应及易于广泛免疫的优点 ， 故而备受 科研与医疗工作者的青睐 。
［7 ］
。
VLP 黏膜疫苗上市的数量不是很多 ， 但却是一个发展新 型黏膜疫苗的平台。VLP 与病毒小体体积非常小 ， 可以使用 不同的表达系统表达， 通过表面化学组成的设计改造可最小 化与黏液的疏水和静电作用 ， 通过基因工程技术它们还可以 重组表达为多个抗原决定簇组成的共刺激免疫调节蛋白 。 但是 VLP 技术的发展瓶颈为规模扩大 、 纯化重组表达产物、 以及需要有效的佐剂。到目前为止， 只有关于病毒小体没有 加入佐剂而能有效刺激免疫应答的报道 2 2. 1 递送载体 黏膜疫苗佐剂、 黏膜疫苗佐剂 新型黏膜疫苗普遍存在分子小 、 免疫原性弱， 且通过黏 膜途径给药难以诱导机体产生有效免疫应答等不足 ， 迫切需 要免疫佐剂来增强其免疫作用 。 尽管目前可用于黏膜疫苗 的佐剂种类很多（ 表 1 ） ， 但是在人类疫苗中还主要依赖铝为 基础的复合物作为主要的佐剂 。 铝盐作为疫苗佐剂使用已超过 80 年的历史， 可是它的 具体作用机制尚不明确 ， 存在广泛的争论。 对疫苗佐剂作用 机理认识的欠缺严重阻碍了其发展 ， 因此许多研究就此展 开。不同佐剂的免疫增强活性可能是由不同机制介导的 （ 表 1 ） 。一些佐剂能够诱导促炎症反应环境 ， 促使吞噬细胞特别 是 APCs 向免疫部位聚集， 以增强抗原的免疫原性 ； 佐剂也可 以通过增强细胞因子表达与激活 APCs 来强化抗原递呈作 用。特定的抗原与佐剂的组合还需要大量的试验进行摸索 ， 但在临床试验中一些种类的黏膜疫苗佐剂能够诱导获得性
新城疫病毒的进化及其新型疫苗的研制_刘秀梵
[摘 要 ] 新城疫病毒 (NDV)虽然只有一个血清型 , 但其强毒已进化出现了九个基因型 。近年 来 , ND疫苗在世界范围内得到了广泛使用 , 但免疫鸡群中 ND强毒感染仍然常见 。 常用疫苗株 LaSota对不同基因型的 ND强毒流行株虽能产生完全的临床保护 , 但并不能防止流行株在免疫 鸡中的感染复制和排出 。 国内外研究结果显示 :当疫苗株与流行株的基因型一致时 , 其不仅能提 供理想的临床保护 , 而且能显著降低免疫鸡的强毒感染率和排毒量 , 在临床上可有效控制免疫鸡 群中非典型 ND的发生 。 当前我国 NDV的优势流行株属基因 VII型 , 因此该型 ND疫苗在控制我 国 ND的流行中将具有非常广阔的应用前景 。 [关键词 ] 新城疫病毒 ;疫苗 ;流行株 ;基因 VII型
2010, 44(1):12～ 18/刘秀梵 , 等 中国兽药杂志
· 13·
仍然是当前困扰广大养殖户的重要疾病之一 。另 一方面 , 自上世纪 90年代中期以来 , 在鹅群中也常 见 ND的爆发与流行 [ 1 -2] , 此外 , 近年来也偶见一些 鸭群发生 ND[ 3 -4] , 说明 ND的易感宿主范围在进一 步扩大 。 NDV一直处于不断的进化之中 , 目前已产 生了多个不同的基因型 , 由近十多年来的 ND流行 特点可知 , 从不同种类宿主临床病例中所分离到的 NDV毒株绝 大多 数 属于 基因 VII型 [ 1, 5] , 而 常用 ND疫苗株 LaSota的基因型为 II型 , 虽然它们同属 一个血清型 , 但在遗传距离上流行株与常用疫苗株 相差较远 。 因此 , 国内外多位学者研究认为 :常规 疫苗对当前 NDV强毒株的攻击并不能提供理想的 免疫保护效力 , 有必要研制新型的替代疫苗或者进 一步改善疫苗当前的生产工艺 [ 6 -7] , 以应对 ND流 行的新情况 。 1 新城疫病毒基因组及其遗传进化
CDVN重组狂犬病病毒的毒力及其免疫原性测定
动物医学进展,2019,40(4):21-27Progress in Veterinary MedicineCDV-N 重组狂犬病病毒的毒力及其免疫原性测定文兆海，周海產，翟少华，陈凯云，胡远，简子健*(新疆农业大学动物医学学院，新疆乌鲁木齐830052)摘 要：为了探究CDV-N 重组狂犬病病毒的毒力及对小鼠的免疫效果，将CDV-N 重组狂犬病病毒于BSR 细胞上扩毒培养、浓缩后测定其FFDg 及LD 5o ；将浓缩后的重组病毒液与复合佐剂按一定比例混匀.按不同免疫剂量、不同免疫方式分组免疫接种小鼠，利用ELISA 试剂盒对狂犬病、犬瘟热的特异性抗体进行定 性/定量检测。
结果显示，重组病毒浓缩后的FFD 50值为7.85 logFFD 5o/0.1 mL,LD 5。
值为7.67 logLD 50/0.03 mL ；免疫接种后第14天抗体阳性率达100%,小鼠血清中的特异性抗体IgG 水平随着免疫剂量的递增而递增。
试验结果可为CDV-N 重组狂犬病病毒制备口服弱毒疫苗的进一步研究提供试验数据。
关键词：重组狂犬病病毒；半数荧光灶形成量；半数致死量；免疫；抗体中图分类号：S852.659.5狂犬病是由狂犬病病毒(Rabies virus, RV)引 起的以侵犯中枢神经系统为特征的一种高度致死性 人兽共患传染病⑴幻。
患病动物的唾液中含有大量的RV, —般通过咬伤的方式，RV 经唾液进入伤口 沿着外周神经向中枢神经系统进犯，一旦到达大脑神经中枢,则引发狂犬病°4〕。
而犬瘟热是由犬瘟热文献标识码：A 文章编号：1007-5038(2019)04-0021-07病毒(Canine distemper virus, CDV )引起的病死率高达80%以上的一种急性高度接触性传染病，具有 极强传染性⑸。
目前，预防狂犬病、犬瘟热最为有效的方法就是疫苗接种，在全球范围内应用最广的就是灭活苗。
DNA 疫苗、弱毒活疫苗、活病毒载体 苗大多还处于研发或临床试验中，灭活疫苗虽然安收稿日期:2018-03-12基金项目：国家自然科学基金项目(31360623)作者简介：文兆海(1990-),男，广西北海人，硕士研究生，主要从事兽医分子病理与免疫病理学研究。
肠道粘膜免疫应答机制综述
肠道粘膜免疫应答机制摘要：人体肠道内的黏膜是人体内环境与外环境间直接交流的主要界面。
肠道黏膜不仅是营养吸收及水分、矿物质交换的主要场所,同时也是许多病原体感染或起始感染的主要位点。
肠道粘膜免疫是机体免疫系统的重要部分，近年发现了病原体、肠道菌群、免疫疫苗、免疫载体在其免疫调节的机制发挥着极其的重要地位。
肠道黏膜免疫系统是由肠相关淋巴组织组成的复杂网络,具有完善的免疫反应机制和严格的免疫调控机制。
可以说,肠道黏膜免疫系统是机体抵御肠道病原体感染的第1 道防线,同时,也在宿主与外环境间黏膜稳态的建立和维持上发挥重要的作用。
本文简要综述简要介绍肠道黏膜免疫应答机制的研究进展以及介绍这些影响因素在肠道粘膜免疫的作用。
关键词：肠道黏膜免疫细胞应答机制肠道粘膜免疫病原体肠道菌群免疫疫苗免疫载体研究进展1 肠道黏膜免疫系统简介黏膜免疫系统由呼吸道、胃肠道、泌尿生殖道及某些外分泌腺(如唾液腺、泌乳的乳腺等)粘膜相关的淋巴组织共同构成一个相对独立的体系，由于其所处的解剖位置相分布部位的特殊性，粘膜免疫系统既是机体系统免疫的重要组成部分，同时又具有其相对独立性。
传统观念认为淋巴细胞是来自骨髓或胸腺，在中枢淋巴器官巾分化、成熟后经淋巴循环定居于周围淋巴器官，担负免疫监视功能。
近年来大量的资料［37］显示脏器巾的淋巴细胞不完全由淋巴器官移入，存在着固有淋巴细胞，并统称为组织相关性淋巴细胞。
胃肠道黏膜不仅是消化、吸收营养物质的场所，而且还是重要的免疫器官，具有重要的免疫功能，与呼吸道的淋巴组织共同构成免疫系统的第一道防线。
2 肠道黏膜免疫系统组成肠道黏膜免疫系统，也称之为肠道相关淋巴组织（GALT），直接参与和调控肠道黏膜免疫调节，也是机体免疫系统的重要组成部分。
肠道黏膜免疫系统有以下部分组成：肠上皮细胞（IEC），肠上皮细胞间淋巴细胞（IEL），黏膜固有层淋巴细胞（LPL），肠粘膜下集合淋巴结（PP），以及黏膜组织内各种单核淋巴细胞，如T细胞、B细胞、巨噬细胞和树突细胞（DC）等［35］。
Science重磅报道一种强大佐剂2'3'-cGAMP,可显著增强流感疫苗的抗病毒能力!
Science重磅报道一种强大佐剂2'3'-cGAMP，可显著增强流感疫苗的抗病毒能力！APExBIO2月21日，国际顶级期刊《Science》报道了一篇重磅文章，来自哈佛大学Mei X. Wu和复旦大学陆路等研究人员发现在流感疫苗中添加某种佐剂可以提高其抗多种流感病毒的能力。
这种佐剂是2'3'-cGAMP（2', 3'-环鸟苷单磷酸-腺苷单磷酸），将该佐剂与灭活的病毒一起制成鼻喷雾剂使用可有效诱导小鼠和雪貂体内的异型免疫反应，可以强效防御所有五种测试的流感病毒株。
2'3'-cGAMP使用肺表面活性剂的脂质成分来封装，可以在不破坏肺表面活性剂层和肺泡上皮细胞屏障的情况下，进入肺泡巨噬细胞，激活该细胞和肺泡上皮细胞中的STING 通路，导致有效的抗病毒T细胞和体液免疫反应，而没有伴随的免疫病理学。
研究论文题目为“ Pulmonary surfactant–biomimetic nanoparticles potentiate heterosubtypic influenza immunity ” 。
Science 21 Feb 2020.对于流感疫苗开发，最好的一种情况是使用单一疫苗来对抗多种流感病毒菌株，即诱导抗病毒常驻记忆T细胞（TRM细胞），该细胞可以介导针对多种不同亚型菌株的交叉保护（异型免疫）。
不幸的是，这种疫苗通常使用减毒的活性病毒，这对于某些人群来说可能是不安全的。
I型干扰素（IFN）是机体免疫系统在抗感染中产生的一种蛋白质，当被病毒感染后，肺泡上皮细胞（AECs）和免疫细胞都会分泌干扰素引起免疫应答。
在这个过程中，干扰素基因的刺激因子STING被激活。
2'3'-cGAMP是STING激动剂。
然而，在不破坏肺表面活性剂（PS）层完整性的情况下，将STING激动剂递送到肺泡上皮细胞的胞质溶胶中是非常困难的，因为PS层形成了强大的保护屏障来阻止纳米颗粒和亲水性分子进入它们。
人类免疫缺陷病毒单克隆抗体在小麦胚乳中的表达
蛋 白 ＶＰ １ ， 这是 首次 在植 物 中表达 了对病 毒性 疾 病 场前 景 。本研 究 的 目的是利 用基 因枪 介导 法将抗 体 ｇ Ｇ转 入 小 麦 ， 获 得 转基 因植 株 ， 并 在 分 子 水 具 有免 疫作 用 的抗原 。在 植物 中成 功表 达 的疫苗 还 基 因 Ｉ 有 Ｓ ＡＲＳ － Ｃ ｏ Ｖ Ｓ蛋 白［ ２ ］ 、 口蹄疫 病 毒 多聚 蛋 白［ ３ ］ 和 平上证 实 目的基 因的整合 、 转 录 和表达 。 狂犬 病 病毒 核蛋 白［ ４ ３ ， 这 些 蛋 白都 具 有 抗 原 结 合 活
１ ． 华 中农业 大学生命科 学技术 学院， 武汉 ４ ３ ０ ０ ７ ０ ； ２ ． 华 中农 业大学麦类作 物分子生物技 术 实验 室， 武汉 ４ ３ ０ ０ ７ ０ ； ３ ． 华中农 业大学植 物科学技 术学院 ， 武汉 ４ ３ ０ ０ ７ ０ ；４ ． 香港大学李嘉诚 医学院微 生物 系艾 滋病研 究所 ， 香港
Ｓ ３ ３ ６ 文献标识码 Ａ 文章编号 １ ０ ０ ０ — ２ ４ ２ １ （ ２ ０ １ ３ ） ０ １ — ０ ０ ０ ９ — ０ ５ 中 图分 类 号
人 类 免疫 缺 陷 病 毒 （ ＨＩ Ｖ） 会 造 成 机 体 终 身 感 胃肠蛋 白酶 的降解 ｌ ７ ］ 。人类 Ｉ ｇ Ｇ 具有 ＨＩ Ｖ 广 谱抗 而 且可 以阻止 ＨＩ Ｖ 的传 播 Ｅ ８ ３ ， 因此 在 植 物 中表 染， 使 免疫 系统失去抵 抗 力， 最 终 导 致 艾 滋 病 性 ，
性及 免 疫原性 。
１ 材 料 与 方 法
料
Ｗｉ ｌ ｄ ｅ 等［ ５ ］ 在马 铃 薯 中表 达 了全 抗 体 Ｉ ｇ Ｇｓ和 １ ． １ 材
Ｆ ａ ｂ片段 。研究 表 明 ， 马 铃 薯 块茎 储 存 ６个 月 时其
mRNA_疫苗的研究及应用进展
生物技术进展 2023 年 第 13 卷 第 4 期 492 ~ 498Current Biotechnology ISSN 2095‑2341进展评述ReviewsmRNA 疫苗的研究及应用进展蔚丹1 ， 马云龙1 ， 万方1 * ， 武建强2 *1.内蒙古农业大学生命科学学院，呼和浩特 010010；2.内蒙古医科大学基础医学院，呼和浩特 010107摘要：与传统疫苗相比，mRNA 疫苗具有高效、安全、低成本等优点，但它的应用一直受到体内传递不稳定、翻译效率较低等技术问题的限制。
新型冠状病毒的流行及其疫苗的研发加速了mRNA 疫苗的研发和批准，特别是在mRNA 结构修饰及脂质纳米颗粒构建等方面有了突破性进展，如使用优化后核苷、帽子结构的mRNA 疫苗稳定性大大提高，替换低使用频率的密码子可提高其翻译效率等。
目前常用的mRNA 递送系统有脂质纳米颗粒、聚合物载体、类病毒载体等。
综述了mRNA 疫苗的发展历程、作用机制、修饰技术突破和递送系统方面的研究及应用进展，以期促进mRNA 疫苗的深入研究及应用。
关键词：mRNA 疫苗；作用机制；递送系统DOI ：10.19586/j.20952341.2023.0015中图分类号：Q812， R373 文献标志码：AAdvances on Research and Application of mRNA VaccinesYU Dan 1 ， MA Yunlong 1 ， WAN Fang 1 * ， WU Jianqiang 2 *1.Faculty of Life Science ， Inner Mongolia Agricultural University ， Huhehot 010010， China ；2.College of Basic Medicine ， Inner Mongolia Medical University ， Huhehot 010107， ChinaAbstract ：Compared with traditional vaccines ， mRNA vaccines have the advantages of high efficiency ， safety and low cost ， but its application has been limited by technical problems such as unstable in vivo delivery and low translation efficiency. The prevalence of SARS -CoV -2 virus and their vaccine development have accelerated the development and approval of mRNA vaccines ，especially breakthroughs in mRNA structural modification and construction of lipid nanoparticles ， for example ， the stability of mRNA vaccines using optimized nucleoside and cap structures is greatly improved ， and the replacement of codons with low fre⁃quency of use can improve their translation efficiency. The commonly used mRNA delivery systems are lipid nanoparticles ， poly⁃mer vectors ， virus -like vectors ， etc. The research and application progress of development history ， mechanism of action ， techno⁃logical breakthroughs in modification ， and delivery systems of mRNA vaccines were reviewed in order to promote the in -depth re⁃search and application of mRNA vaccines.Key words ：mRNA vaccine ； mechanism of action ； delivery systemmRNA 疫苗是一种通过体外转录技术合成后选择合适的递送系统将mRNA 运输进入机体，依靠细胞自身的翻译系统将mRNA 翻译成目标蛋白，从而达到临床治疗目的的先进疗法［1］。
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ＤＣ纯度。
１．４
ＤＣ－Ａｄ５－ＨＩＶｇａｇ和ＤＣ－Ａｄ５－ＨＩＶｅｎｖ制备及
鉴定采用１００ ＭＯＩ的Ａｄ５．ＨＩＶｇａｇ／ｅｎｖ分别感染
万方数据
一南愀
图１
Ｆｉｇ．１
Ｔ，，—Ｌ１
ＣＤ８０
●‘●‘。。１。。’’。一
ＤＣｓ流式细胞术纯度检测
Ｔｈｅ ｐｕｒｉｔｙ ｒｅｓｕｈ ｏｆ ＤＣｓ ｂｙ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒ）
＞０．０５）；联合免疫组诱导的ＨＩＶ Ｅｎｖ特异性细胞 免疫反应水平与ＤＣ—Ａｄ５一ＨＩＶｅｎｖ疫苗单独免疫组 相比，在免疫后第１、２周两者水平相当，免疫后３周
未感染病毒的ＤＣｓ
Ｎ｛ｆｉｖｅ ＤＣｓ
感染Ａｄ５－ＨＩＶｇａｇ的ＤＣｓ感染ＡｄＳ．ＨＩＶｅｎｖ的ＤＣｓ
ＤＣｓ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ＡｄＳ－ＨＩＶｇａｇ ＤＣｓ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ Ａｄ５－ＨＩＶｅｎｖ
ＤＣｓ，吸附２ ｈ后，然后在含成熟因子的ＤＣ培养基 中，其中含ｒｍＧＭ—ＣＳＦ（４０ ｎｇ／ｍ１）、ｒｍｌＬ４（２０
ｎｇ／
重要作用。离体的ＤＣｓ经抗原刺激后回输到体内，
能够迁移到淋巴结并释放出多种细胞因子，同时激 活Ｔ淋巴细胞的分化和增殖…，诱导产生抗原特异 性的细胞毒性Ｔ细胞（ＣＴＬ），进而对特异性靶细胞 进行杀伤，这是将ＤＣ疫苗用于细胞治疗的理论基 础¨。。使用表达ＨＩＶ－１抗原的ＤＣ疫苗对ＨＩＶ．１感 染者进行免疫治疗的研究已取得了初步进展∞Ｊ。 本研究中，我们使用表达ＨＩＶｇａｇ／ｅｎｖ基因的腺病毒 载体疫苗（Ａｄ５．ＨＩＶｇａｇ、Ａｄ５．ＨＩＶｅｎｖ）感染小鼠骨髓 ＤＣｓ，获得负载ＨＩＶ Ｇａｌｇ／Ｅｎｖ的ＤＣｓ疫苗（ＤＣ．Ａｄ５一
ＨＩＶ特异性细胞免疫反应。结论Ａｄ５一ＨＩＶ ｇａｇ／ｅｎｖ负载的树突状细胞疫苗可以在小鼠体内诱导较 强的ＨＩＶ特异性细胞免疫反应。
【主题词】
树突状细胞疫苗；细胞治疗；腺病毒；ＨＩＶ．１
基金项目：国家科技重大专项（２０１２ＺＸｌ０００１—００５）
Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｉｌｓ ｐｕｌｓｅｄ ｗｉｔｈ Ａｄ５－ＨＩＶｇａｇ／ｅｎｖ ｉｎ ｍｉｃｅ
ｗｅｒｅ
ｂｙ
ｐｏｓｔ
ｉｎｔｒａｍｕｓｅｕｌａｒ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ ｖａｃｃｉｎｅｓ ｉｎ
ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ
ＨＩＶ
ａｂｏｖｅ ＤＣ
ａｌｏｎｅ
ｉｎ
ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ。ａｔ
ｄｉｆ托ｒｅｎｔ
ｓｐｅｃｉｆｉｃ
ｃｅｌｌｕｌａｒ ｉｍｍｕｎｅ
ｗｅｒｅ
ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｇｅｎｅｒａｔｅｄ
ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＥＬＩＳＰＯＴ ａｓｓａｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＨＩＶ Ｇａｇ
ＤＣ的培养与鉴定
去除非贴壁细胞，加入细
８２．３％，见图１。
２．３
胞因子ｒｍＧＭ—ＣＳＦ（４０ ｎｇ／ｍ１）、ｒｍｌＬ－４（２０ ｎｇ／ｍ１）、 ｒｍＴＮＦ一Ⅱ（１０ ｎｇ／ｍ１），３７℃５％ＣＯ：继续培养７ ｄ后 收集悬浮细胞团，即为小鼠的ＤＣ。收集贴壁法分离 的ＤＣｓ，按照说明书分别加入ＰＥ标记的抗小鼠
１．３ ｈ。 ｏＣ ５％
细胞形态观察
贴壁培养法分离、纯化、诱导
得到的原代ＤＣｓ具有典型的树突状细胞形态，细胞 表面具有树枝状突起。 ２．２成熟ＤＣ表面标志的表达 利用流式细胞技
术检测通过贴壁法纯化ＤＣｓ的细胞纯度，结果显 示，带有ＣＤ８６、ＣＤ８０及ＣＤｌｌ ｅ表面标记的阳性细 胞占总细胞比率的百分数分别为９２．１％，９４．７％和
２
ｐｒｏｇｒａｍ惠赠）；２ Ｇ１
抗体（购于苏州杰恩公司）；生物素标记的抗小鼠 ＩｇＧ、生物素标记的抗人ＩｇＧ、ＦＩＴＣ标记的链酶卵白 素ＩｇＧ均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。 ＰＥ标记的小鼠ＣＤ８０、ＣＤＩ １ｃ、ＣＤ８６抗体购自美国 Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ公司；重组鼠细胞因子ｒｍＧＭ．ＣＳＦ、ｒｍｌＬ－ ４、ｒｍＴＮＦ．Ｏｔ购自美国Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ公司；ＥＬＩＳＰＯＴ试剂 盒购自瑞典ＭａｂＴｅｃｈ公司。 １．２小鼠骨髓细胞采集和分离 颈椎脱臼法处死
ｉｎｄｕｃｅｄ ｉｎ ｍｉｃｅ ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ ｗｉｔｈ ａｂｏｖｅ ＤＣ ｖａｃｃｉｎｅｓ Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｎ
ｌｏａｄｅｄ ｗｉｔｈ Ａｄ５一ＨＩＶｇａｇ／ｅｎｖ ｃｏｕｌｄ ｅｌｉｃｉｔ ｐｏｔｅｎｔ ＨＩＶ ｓｐｅｃｉｆｉｃ
【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｅｍａ．ｉ．ｉｓｓｎ．１００３—９２７９．２０１６．０４．００８
【摘要】
目的
用Ａｄ５一ＨＩＶ ｇａｇ／ｅｎｖ负载小鼠树突状细胞（Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ，ＤＣ），探索其在小鼠体
内诱导的ＨＩＶ Ｇａｇ／Ｅｎｖ特异性细胞免疫应答。方法
贴壁法分离纯化ＢＡＬＢ／ｃ小鼠ＤＣｓ，并用细胞
ｐｒｅｓｅｎ－
ｔｉｎｇ
ｃｅｌｌｓ，ＡＰＣ），其对抗原的提呈能力远高于巨噬
细胞等其他免疫细胞，同时，ＤＣ也是唯一能激活初
万方数据
史堡塞堕塑堕鏖题垂堂盘查！！！！至！旦箜！！鲞箜！塑蔓！ｉ！！！！！垦！Ｐ ｇ塑！！竺！：垒！ｇ！壁！！！！：！！！：！！：堕！：！
始型Ｔ细胞的ＡＰＣ，在特异性免疫应答过程中起到
Ｖｉｒａｌ Ｄｉｓｅａｓｅ
Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００５２，Ｃｈｉｎａ
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：Ｆｅｎｇ Ｘｉａ，Ｅｍａｉｌ：．Ｗｅｎｇｘｉａ６２ １＠１ ２６．ｃｏｒｎ；Ｚｅｎｇ
ｎｅｔ．Ｃｎ
Ｙｉ，Ｅｍａｉｌ：ｚｅｎｇｙ＠ｐｕｂｌｉｃ．ｂｔａ．
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】０ｂｊｅｃｔｉｖｅ
ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｂｙ
ｗａｓ
Ｔｏ
ｅｖａｌｕａｔｅ ＨＩＶ Ｇａｇ／Ｅｎｖ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｎｄｕｃｅｄ
ｉｎ
ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ ｗｉｔｈ ｍｏｕｓｅ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｐｕｌｓｅｄ ｗｉｔｈ Ａｄ５一ＨＩＶｇａｇ／ｅｎｖ．Ｍｅｔｈｏｄｓ
Ｆｕｎｄ
ｃｅｌｌ
ｖａｃｃｉｎｅ；Ｃｅｌｌ ｔｈｅｒａｐｙ；Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ；ＨＩＶ－１
ｐｒｏｇｒａｍｓ：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｃｉｎｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｍａｊｏｒ Ｐｒｏｊｅｃｔ ｏｆ Ｃｈｉｎａ（（２０１２ＺＸｌ０００１．００５）
树突状细胞（Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ，ＤＣ）在人体内分布 广泛，是功能最强的抗原提呈细胞（Ａｎｔｉｇｅｎ
ＨＩＶ ｇａｇ、ＤＣ－Ａｄ５一ＨＩＶ
ｍ１）、ｒｍＴＮＦ－Ｏｒ．（２０ ｎｇ／ｍ１），继续培养４８ ｈ，收集培养 细胞，即为ＤＣ—Ａｄ５－ＨＩＶｇａｇ、ＤＣ－Ａｄ５一ＨＩＶｅｎｖ。利用 间接免疫荧光法和流式细胞术检测ＤＣ细胞中Ｇａｇ／ Ｅｎｖ蛋白的表达情况。
１．５
ＤＣ疫苗免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠
雌性ＢＡＬＢ／Ｃ
１．６酶联免疫斑点（ＥＬＩＳＰＯＴ）实验
在免疫后不
同时间点分离小鼠脾淋巴细胞，分别用ＨＩＶ Ｇａｇ和 Ｅｎｖ特异性多肽刺激脾细胞，按照ＭａｂＴｅｃｈ试剂盒 说明书操作检测小鼠的ＨＩＶ Ｇａｇ和Ｅｎｖ特异性细胞 免疫应答。 １．７统计学方法 特异性细胞免疫应答强度用每
Ｆｏｒｍｉｎｇ Ｐｒｉｓｍ ５
ＡＩＤＳ
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３６９・
．论著
负载 Ａｄ５一ＨＩＶｇａｇ／ｅ１１ｖ的 ＤＣ疫苗在小鼠体 内的免疫原性研究
刘超 何小周 刘雪
徐柯
曾毅
冯霞
１００１２４北京工业大学生命科学与生物医学工程学院病毒与药理室（刘超、刘雪、曾 毅）；１０００５２北京，中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重 点实验室（何小周、徐柯、冯霞） 通信作者：冯霞，Ｅｍａｉｌ：ｆｅｎｇｘｉａ６２１＠１２６．ｃｏｒｎ；曾毅，Ｅｍａｉｌ：ｚｅｎｇｙｉ＠ｐｕｂｌｉｃ．ｂｔａ．ｎｅｔ．ｃｎ
小鼠、４－６周龄，随机分为７组，每组２０只。将收获 的ＤＣ—Ａｄ５－ＨＩＶｇａｇ和ＤＣ—Ａｄ５一ＨＩＶｅｎｖ疫苗单独或 联合经肌肉注射免疫，免疫剂量为组作为 阳性对照组，以及ＤＣ—Ａｄ５－ＬＭＰ２组作为表达无关抗 原的腺病毒负载的ＤＣ对照组，单纯ＤＣ作为阴性对 照组。分别在免疫后１周、２周、３周、４周检测各组 小鼠的细胞免疫应答水平。
ｅｎｖ），单独或联合免疫小鼠，
观察其诱导产生的ＨＩＶ抗原特异性细胞免疫反应。 １材料与方法 １．１材料腺病毒载体疫苗ｒＡｄ５一ＨＩＶｇａｇ和ｒＡｄ５一 ＨＩＶｅｎｖ均由本实验室构建，委托深圳源兴生物医药 科技有限公司生产；Ｐ２４抗体（由美国ＮＩＨ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｒｅａｇｅｎｔ
Ｘｕｅ，Ｘｕ Ｋｅ，Ｚｅｎｇ Ｙｉ，Ｆｅｎｇ Ｘｉａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｌｉｕ Ｃｈａｏ，Ｈｅ Ｘｉａｏｚｈｏｕ，Ｌｉｕ
ｏｆ
Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １
ａｎｄ Ｐｈａｒｍｏｃｏｌｏｇｙ，Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｂｅｑｉｎｇ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ
ＣＤ８６、ＣＤ８０和ＣＤｌｌ Ｃ抗体，利用流式细胞仪检测
目的抗原在树突状细胞中的表达
我们分别
采用了间接免疫荧光方法和流式细胞技术检测目的 基因在ＤＣ细胞中的表达，免疫荧光结果显示，目的 抗原均在细胞内有表达。见图２。利用流式细胞技 术对其进行分析，结果显示，Ａｄ５－ＨＩＶｇａｇ负载的 ＤＣｓ中表达Ｇａｇ蛋白的细胞占总细胞比率为８８％、 Ａｄ５．ＨＩＶｅｎｖ负载的ＤＣｓ中表达Ｅｎｖ蛋白细胞比
ＢＡＬＢ／ｃ ｍｏｕｓｅ ＤＣｓ