酵母菌细胞的显微镜计数
实验八 酵母菌细胞数量和大小的测定
实验八酵母菌细胞数量和大小的测定一、实验目的1. 学习和掌握显微镜的使用方法2. 学习和掌握酵母菌细胞数量和大小的测定方法3. 了解酵母菌作为微生物的特点和应用二、实验原理1. 显微镜使用方法显微镜是一种用于观察细小物体的仪器。
其主要部分包括光源、物镜、目镜、台架等组成部分。
在观察物体时，需要先将待观察的物体放置在载玻片上，涂上适量的药液，然后将载玻片放置在台架上，在显微镜下逐渐调整光源、物镜和目镜，直到达到最佳观察效果。
酵母菌是一种典型的单细胞真菌，其细胞大小通常在5-10微米之间。
在实验中，可以用显微镜对酵母菌进行观察和计数，也可以通过简单的模拟实验估算酵母菌细胞数量。
三、实验步骤1. 准备工作准备所需的实验器材和试剂：载玻片、盖玻片、万能药液、盐水、酵母菌培养液、移液管等。
2. 酵母菌细胞数量的估算（1）取一支移液管，吸取适量的酵母菌培养液（约0.5毫升）。
（2）加入适量的盐水（约0.5毫升），充分混合。
（3）将混合液滴在一张载玻片上。
（4）在载玻片上随意涂抹，使混合液均匀分布在玻片表面。
（5）在显微镜下对涂片进行观察，估算酵母菌细胞数量。
（1）准备一份酵母菌培养液。
（4）将盖玻片放置在载玻片上。
四、注意事项1. 实验操作过程中需要注意卫生和安全，遵守实验室安全规定。
2. 在观察酵母菌时，需要小心操作，避免将酵母菌培养液污染到实验室环境中。
3. 在显微镜操作时，需要小心调整光源和物镜，避免损坏镜头和影响观察效果。
五、实验结果分析通过上述实验，可以获得酵母菌细胞数量和大小的估算结果。
根据所得结果，可以了解到酵母菌在不同培养条件下的数量和大小变化情况，从而为后续的酵母菌研究提供参考依据。
六、实验总结通过本次实验，我学习和掌握了显微镜的使用方法和酵母菌细胞数量和大小的测定方法。
同时，我也了解了酵母菌作为微生物的特点和应用。
通过实际操作，我对科学实验有了更加深入的认识和理解，也进一步了解了微观世界的神秘和奥妙。
实验三 酵母菌形态及菌落特征的观察及显微镜下血球计数板计数
（一）注意事项
1.熟知血球计数板的计数原理 2.血球计数板计数时酵母菌菌液需稀释到可 计数的浓度
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《工程微生物学》实验教学多媒体课件 15
七、注意事项和问题
（二）问题
1. 将实验结果填入下表中 每个大方格菌数
计数次数 稀释 倍数 菌液浓度 平均值
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《工程微生物学》实验教学多媒体课件 8
五、实验方法及步骤
（一）酵母菌形态及假菌丝的观察 (1) 视菌悬液浓度，加无菌水适当稀释。
(2) 用接种环取酵母菌悬液少许，放在洁净的 载玻片上，于低倍镜下观察酵母菌和假菌丝的形 态。
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二、实验原理
大多数酵母菌形成的菌落与细菌的相似、但较细 菌的菌落大而厚、湿润、粘稠、易被挑起。菌落多呈 乳白色，少数为红色(如红酵母)，酵母菌菌落的颜色、 光泽、质地、表面和边缘特征均为识别时的重要依据。 酵母菌的某些种类在液体培养基中或在人为的不通气 条件下，培养较长时间后，则生长成长形的细胞，且 相互连接并分枝，形成藕节状排列结构，称为假菌丝。 它是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。
生物论文：实验酵母菌培养及计数
实验酵母菌培养及计数实验目的1．设计酵母培养条件，培养设计可行的实验方案的能力，培养科学的思维方式。
2．通过培养酵母，观察、收集数据，利用数学方法处理和解释数据、主动构建科学模型。
探究酵母种群数量变动，亲身体验和理解知识的形式过程，感悟种群变动内在规律性，发展科学探究能力。
3．实验过程通过合作交流，信息共享，使全体学生共同发展；培养求真务实、客观公正的科学态度。
实验用具烧杯、试管、玻璃棒、滴管铁架台、酒精灯、纱布、灭菌锅、培养箱显微镜、计数板等课时2（培养基配制、接种一课时，培养后计数、分析一课时）准备工作查阅相关资料，准备好实验器具、材料、设计好实验方法和培养条件，设计计数的时间与方法，设计研究结果的记录表格。
实验步骤1、培养基的配制。
可采用豆芽计蔗糖培养基。
配制方法是：称新鲜豆芽100g，放入烧杯中，加水1000ml，煮沸约半小时，用纱布过滤。
用水补足原量，再加入蔗糖50g，煮沸溶化。
98kPa灭菌20min。
2、培养。
无菌条件下接种适量啤酒酵母（或其他酵母），在25°C、有氧、无菌条件下培养24h。
3、计数。
可采用显微镜直接计数法计数。
具体步骤如下：①取样。
从接种后开始，每隔1h吸取一次样液，连续吸取24 h。
培养后期，菌体浓度变大，可适当稀释（记录稀释倍数）。
②加样品。
将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，用无菌的细口滴管将啤酒酵母菌液由盖玻片边缘滴一小滴（不宜过多），让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室。
注意不可有气泡产生。
③显微镜计数。
静止5分钟后，将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍物镜找到计数室所在的位置，然后换成高倍镜进行计数。
每个计数室选5个中格（可选4个角和中央的中格）中的菌体进行计数。
位于格线上的菌体一般只数上方和右边线上的。
如遇酵母出芽，芽体大小达到母体细胞一半时，即作为两个菌体计数。
为了减小误差，计数一个样品要至少从两个计数室中计得的值来计算样品的含菌量。
实验七酵母菌的形态观察大小测定及直接计数
❖ （5） 清洗血细胞计数板 ❖ 使用完毕后，将血细胞计数板在水龙头上用水冲洗干净，切勿用硬物洗
死、活细胞。
（4）染色约0.5h后再次进行观察，注意死细胞数量是否增加。 （5）绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征，并计算0.5h后酵母菌的死亡率。
酵母菌
❖ 1、基本原理
❖
微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。微生物大小的测定需借助测
微尺---目镜测微尺和镜台测微尺。
子囊孢子。
• 美蓝是一种无毒性的染料。它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于 细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此 酵母活细胞是无色的，而死细胞或衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，以此进行鉴别。
• 美蓝浸片的观察： （1）在载玻片中央加一滴0.05%吕氏碱性美蓝染色液，用滴管取1滴酵母菌菌液于染液中，混合均匀。 （2）加盖玻片。注：不要产生气泡。 （3）将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母菌的形态和出芽情况，并根据颜色区别
镜台测微尺： 是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般将1mm等分为100小格，每格长0.01mm。用于校正目镜测
微尺每格的相对长度。 目镜测微尺：
是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，测量时，需要将其放在接目镜中的隔 板上，用以测量经显微镜放大后的细胞物象。
❖ 由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微尺每小格代表的实际长度也不一 样。因此，用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定 放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度，然后根据微生物细胞相当于目镜测 微尺的格数，计算出细胞的实际大小。
酵母菌大小测定及显微镜直接计数[指南]
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实验一：酵母菌大小测定一、实验器材1、菌种：酵母菌液体培养物2、仪器和其他物品目镜测微尺，镜台测微尺，普通光学显微镜，擦镜纸，载玻片，滴管等。
二、实验目的及要求1、学习并掌握使用显微测微尺测定微生物大小的方法。
2、掌握对不同形态细菌大小测定的分类学基本要求，增强对微生物细胞大小的感性认识。
三、基本原理微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。
微生物大小测定需借助测微尺---目镜测微尺和镜台测微尺，两者配合使用。
镜台测微尺是一个在特制载玻片中央封固的标准刻尺，其尺度总长为1mm，精确分为10个大格，每个大格又分为10个小格，共100个小格，每个小格10μm。
镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于校正目镜测微尺每格地相对长度。
目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，一般有等分为50小格和100小格两种。
测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以测量经显微镜放大后的细胞物像。
由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微尺每小格在不同条件下所代表的实际长度也不一样。
因此，用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求该显微镜在一定放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。
然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞实际大小。
四、操作步骤1、装目镜测微尺(换目镜)把目镜上的透镜旋下，将目镜测微尺刻度朝上放在目镜镜筒内的格板上，然后旋上目镜透镜，再将目镜插入镜筒内。
※双目显微镜的左目镜通常配有屈光度调节环，不能被取下，因此使用双目显微镜时目镜测微尺一般都安装在右目镜中。
2、校正目镜测微尺（1）放镜台测微尺将镜台测微尺刻度面朝上放在显微镜载物台上。
（2）校正先用低倍镜观察，将镜台测微尺有刻度的部分移至视野中央，调节焦距，当清晰地看到镜台测微尺的刻度后，转动目镜使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行。
酵母菌的简单染色和血细胞计数板计数
用油镜，常用于个体相对较大的酵母细胞、霉菌孢子等
的计数。 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四 个槽构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短 横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每
个方格网共分9个大方格，中央的一大方格作计数室。
•
计数区的刻度有两种：一种是计数区分为 16个中
个小格），位于格线上的菌体一般只数上方和右边线
上的。如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时， 即作两个菌体计数。 遵循“数上不数下，数左不数右”的原则。 计数一个样品要从两个计数室中计得的值来计算样 品的含菌量。
4、清洗血球计数板：使用完毕后，将血球计数板在水龙头上 用水柱冲洗，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹风 机吹干。镜检，观察每小格内是否有残留菌体或其化沉淀 物。若不干净，则必须重复洗涤至干净为止。
的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3， 每 个 小 方 格 的 体 积 为 1 / 4 0 0 0 m m
3
。
• 计数时，通常数5个中方格的总菌数（四角中格及中间中 格），然后求得每个中方格的平均值，再乘以25或16，就 得出一个大方格的总菌数，然后在换算成1ml菌液中的总
菌数。
方格（大方格用三线隔开），而每个中方格又分成
25 个小方格；另一种是一个计数区分成 25 个中方格
（中方格之间用双线分开），而每个中方格又分成
16 个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们
都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。
计数区边长为1mm，则计数区的面积为lmm2，每个
小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，计数区
4 、染色30分钟后再次观察注意死活细胞比例是否发生变化。
实验五 酵母菌的形态观察、死活细胞的鉴别及显微镜直接计数法
五、实验报告
1、绘图说明你所观察的酵母菌的形态特征 填表： 2、填表：
各中格中菌数 1 2 3 4 5 二次平均值 菌数/mlAຫໍສະໝຸດ B 5二、实验原理
酵母菌是不运动的单细胞真核微生物， 酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见 细菌大几倍甚至十几倍。大多酵母菌以出芽方式进行无性繁殖， 细菌大几倍甚至十几倍。大多酵母菌以出芽方式进行无性繁殖， 有的分裂繁殖，有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。 有的分裂繁殖，有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验是通 过美蓝染液水浸片来观察酵母菌的形态和出芽生殖方式。 过美蓝染液水浸片来观察酵母菌的形态和出芽生殖方式。
菌种： 1、菌种：酿酒酵母 仪器或其他用品：血细胞计数板，显微镜， 2、仪器或其他用品：血细胞计数板，显微镜，盖玻 片，载玻片等 0.1%美蓝染色液等 3、0.1%美蓝染色液等
四、实验内容： 实验内容：
1、美蓝浸片观察 在载玻片中央加一滴0.1%的美蓝染色液， 在载玻片中央加一滴0.1%的美蓝染色液，然后用 0.1%的美蓝染色液 接种环取少量酵母菌于染液中，混合均匀； 接种环取少量酵母菌于染液中，混合均匀； 用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触， 用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然 后慢慢将盖玻片放下，使其盖在菌液上。 后慢慢将盖玻片放下，使其盖在菌液上。将玻片放置 约三分钟后，用显微镜观察酵母的形态和出芽情况， 约三分钟后，用显微镜观察酵母的形态和出芽情况， 并判断细胞的死活。 并判断细胞的死活。
利用血细胞计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生 物计数方法。该计数板是一块特制的载玻片， 物计数方法。该计数板是一块特制的载玻片，其上由四条槽构 成三个平台，中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半， 成三个平台，中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边 的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为几个大方格， 的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为几个大方格， 中间的大方格即为计数室。血细胞计数板构造如图1 中间的大方格即为计数室。血细胞计数板构造如图1，计数室的 刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成25个中方格，而 刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成25个中方格， 25个中方格 每个中方格又分成16个小方格，另一种是一个大方格分成16 16个小方格 16个 每个中方格又分成16个小方格，另一种是一个大方格分成16个 中方格，而每个中方格又分成25个小方格， 25个小方格 中方格，而每个中方格又分成25个小方格，但无论是哪一种规 格的计数板，每一个大方格中的小方格400 400个 格的计数板，每一个大方格中的小方格400个，每一个大方格 边长为1毫米，则每一个大方格的面积为1mm 盖上盖玻片后， 边长为1毫米，则每一个大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后， 盖玻片与载玻片之间的高度为0.1毫米， 0.1毫米 盖玻片与载玻片之间的高度为0.1毫米，所以计数室的容积为 万分之一毫升）。 0.1mm3（万分之一毫升）。
酵母菌的形态观察及死活鉴别与显微直接计数法
酵母菌的形态观察及死活鉴别与显微镜直接计数法I 酵母菌的形态观察及死活鉴别一、目的要求观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。
二、基本原理酵母菌是多形的、不运动的单细胞微生物，细胞核与细胞质已有明显的分化，菌体比细菌大。
繁殖方式也较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖，仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。
本实验通过用美蓝染色制成水浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。
美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的。
用它采对酵母细胞进行染色。
活细胞内由于新陈代谢作用而具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母活细胞染色后无色。
而死细胞或代谢缓慢的老细胞因无还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。
因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。
三、器材酿酒酵母（Saccharomyces cerevissiae）；0.1％吕氏碱性美蓝染液，革兰氏染色用的碘液；显微镜，载玻片，盖玻片等。
四、操作步骤（美蓝浸片观察）(1)在载玻片中央加一滴0.1％吕氏碱性美蓝染液，液滴不可过多或过少，以免盖上盖玻片时，溢出或留有气泡。
然后按无菌操作法取在豆芽汁琼脂斜面上培养48小时的酿酒酵母少许，放在吕氏碱性美蓝染液中，使菌体与染液均匀混合。
(2)用镊子夹盖玻片一块，小心地盖在液滴上。
盖片时应注意，不能将盖玻片平放下去，应先将盖玻片的一边与液滴接触；然后将整个盖玻片慢慢放下，这样可以避免产生气泡。
(3)将制好的水浸片放置3分钟后镜检。
先用低倍镜观察，然后换用高倍镜观察酿酒酵母的形态和出芽情况，同时可以根据是否染上颜色来区别死、活细胞。
五、实验报告(1) 绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征。
II 显微镜直接计数法一、目的要求1．明确显微镜计数的原理。
2．学习使用血球计数板进行微生物计数的方法。
二、基本原理利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。
实验七 酵母菌细胞大小的测定
实验七酵母菌细胞大小的测定一、实验目的1.了解测量微生物大小的原理；2.学习并掌握接目测微尺的校正方法及微生物大小的测定方法，增强微生物细胞大小的感性认识。
二、实验材料1.菌种：啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）菌悬液2.仪器或其他用具：显微镜，接目测微尺，镜台测微尺，载玻片，盖玻片三、实验原理微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。
微生物细胞个体较小，需要在显微镜下借助于特殊的测量工具—测微尺来测定其大小。
测微尺包括镜台测微尺和接目测微尺。
镜台测微尺是一张中央部分刻有精确等分线的载玻片，专门用于校定接目镜测微尺每小格的相对长度。
通常，刻度的总长是1mm，被等分为100格，每格0.01mm（即10μm）。
镜台测微尺不直接用来测量细胞的大小。
接目测微尺是一块可以放入接目镜的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，有等分为50小格和100小格的两种。
在测量时将接目测微尺放在目镜的隔板上，即可来测量经显微镜放大后的细胞物象。
也有专用的目镜，里面已经安放好了接目测微尺。
由于接目测微尺所测量的是经显微镜放大后的细胞物象，因此，在不同的显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，接目镜测微尺每一小格所代表的实际长度也不一样。
所以，在用接目测微尺测量微生物大小之前，必须先用镜台测微尺校定接目镜测微尺，以确定该显微镜在特定放大倍数的目镜和物镜下，接目镜测微尺每一小格所代表的实际长度，然后根据微生物细胞相当于的接目镜测微尺格数，计算出微生物细胞的实际大小。
图7-1测微尺的安装图7-2目镜测微尺图7-3用镜台测微尺校正接目测微尺四、操作步骤1.装接目测微尺：取下显微镜的目镜，换上专用目镜。
如果没有专用的目镜，则取下显微镜的目镜，旋下透镜，将接目镜测微尺刻度朝下放在接目镜的隔板上，再旋上目镜透镜，将装有测微尺的目镜装回镜筒。
2.接目测微尺的标定：1)放镜台测微尺：将镜台测微尺刻度面朝上固定在显微镜的载物台上，注意不可放反。
酵母菌形态的观察和显微镜直接计数法
酵母菌形态的观察和显微镜直接计数法
1.显微镜直接计数法，使用显微镜观察并直接数出酵母菌的总数量，此方法适用于酵母菌数量较少的情况。
2.血球计数板计数法，也称分层抽样法，此方法适用于酵母菌总数较大时，可将含有酵母菌的溶液按一定比例进行稀释，置于显微镜下观察并计数，按稀释比例计算酵母菌总数量。
酵母菌是基因克隆实验中常用的真核生物受体细胞，培养酵母菌和培养大肠杆菌一样方便。
酵母菌是一种单细胞真菌，在有氧和无氧环境下都能生存，属于兼性厌氧菌。
实验：应用血细胞计数板对酵母菌进行计数
数据整理
02
03
数据校验
我们将实验数据整理成表格，方 便后续分析。
在数据整理过程中，我们进行了 数据校验，确保数据的准确性和 可靠性。
数据处理与图表绘制
数据处理
我们对实验数据进行处理，包括数据 清洗、数据转换和数据变换等。
图表绘制
根据处理后的数据，我们绘制了图表， 包括柱状图、折线图和饼图等，以便 更好地展示数据和发现数据之间的关 系。
实验应用血细胞计数 板对酵母菌进行计数
目录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 实验结果与分析 • 实验结论 • 参考文献
01
实验目的
掌握血细胞计数板的使用方法
了解血细胞计数板的构造和原理
血细胞计数板是一种用于细胞计数的工具，由一块载玻片和一块盖玻片组成， 上面刻有方格，用于放置细胞悬液。通过显微镜观察，可以对细胞进行计数。
03
实验步骤
准备实验材料
01
02
03
04
血细胞计数板：用于计数酵母 菌的数量。
显微镜：用于观察和计数酵母 菌。
试管、吸管、培养皿等：用于 制备酵母菌悬液。
无菌水、营养琼脂培养基等： 用于培养和制备酵母菌。
制备酵母菌悬液
将营养琼脂培养基倒入培养皿 中，待其冷却凝固。
用接种环取少量酵母菌，轻 轻划线在培养基上，放置在
学习正确使用血细胞计数板的方法
在实验过程中，需要掌握如何制备细胞悬液、如何将细胞悬液滴加到计数室、 如何进行显微镜观察等操作步骤。
学习酵母菌的计数方法
了解酵母菌的形态特征
酵母菌是一种单细胞真菌，具有椭圆 或球形的细胞形态，通过出芽方式进 行无性繁殖。
学习酵母菌的计数方法
酵母细胞计数与大小测量
答：血细胞计数的误差分别来源于技术误差和固有误差。其中由于操作人员采血不顺利，器材处理、使用不当，稀释不准确，细胞识别错误等因素所造成的误差属技术误差；而由于仪器（计数板、盖片、吸管等）不够准确与精密带来的误差称仪器误差，由于细胞分布不均匀等因素带来的细胞计数误差属于分布误差或计数域误差（filed error）。仪器误差和分布误差统称为固有误差或系统误差。技术误差和仪器误差可通过规范操作、提高熟练程度和校正仪器而避免或纠正，但细胞分布误差却难于彻底消除。减少误差可以通过：①避免技术误差，纠正仪器误差；②缩小计数域误差或分布误差；③排除异常标本的干扰。
6.5
7.2
6.4
7.5
7.6
6.4
7.5
6.8
数据的格数为目镜测微尺上对应的格数
长轴
7.8
8.5
8.8
8.3
9.2
8.4
8.3
7.8
9.3
8.5
短轴
5.7
6.3
7.2
6.6
7.4
6.2
6.3
5.8
7.6
6.3
酵母菌长轴平均值（um）= 8.53um
酵母菌短轴平均值（um）= 6.75um
3.酵母菌稀释液的计数
三、实验仪器、材料和用具
1.实验用具
载玻片、盖片、200uL移液器及tip、擦镜纸、 装有蒸馏水的洗瓶。
2.实验仪器
普通生物显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、血球计数板、手动计数器。
3.菌种
稀释20倍的酿酒酵母溶液。
四、实验操作步骤
1.稀释：
1.1200rpm,28℃, 24h,用YPD培养基稀释15~25倍。(助教统一完成)
酵母菌数量的测定—显微镜直接计数法
五、数据处理
各中格中的菌数（个）
二室 平均
菌数
A
B
值 （个/
1
2
3
4
5
（个 mL）
） 第一
室 第二
室
15
六、思考题 能否利用显微镜直接计数的方法测定
酵⺟菌菌液中的死细菌与活细菌？如果可 以，如何进行？如果不可以，请说明原 因。
16
式1：总菌数（个/mL）=A/5×16×10000×B 式2：总菌数（个/mL）=A/5×25×10000×B
三、实验器材 血球计数板、显微镜、盖玻片、滴管、 酿酒酵⺟菌液
8
四、实验步骤
1、加样品
•取净洁干燥的血球计数板盖上盖玻片。 •将菌悬液适当稀释（稀释1倍），摇匀。
•用滴管吸取菌悬液，加1～2滴于盖玻片边 缘，让菌液靠毛细渗透作用进入计数室。 •放置5 min左右让计数室充满菌液。
• 如遇酵⺟出芽，芽体大小达到⺟细胞一般时，即作 为两个菌体计算。
• 计算一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来 计算样品的含菌量。
• 菌体在血球计数板处于不同空间，要在不同焦距下 才能看全，所以，观察时必须不断调节细螺用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷； •镜检观察是否清洗干净； •洗后干燥（晾干、吹干，或乙醇、丙酮等有 机溶剂脱水干燥）。
4
5
血球计数板规格
计数室高度：0.1mm 大方格边⻓：1mm。 每个大方格分成400个小方格。
规格一：每个大方格分成16个中方格，每个中方格又分 成25个小方格。 规格二：每个大方格分成25个中方格，每个中方格又分 成16个小方格。
设五个中方格的总菌数为A，菌液的稀释倍 数为B，规格一、规格二计数板，分别采用式 1、式2计算。
用血球计数板计数酵母菌个数的计算方法
用血球计数板计数酵母菌个数的计算方法血球计数板是一种用于计数细胞的装置，通常用于测定血液中各类细胞的数量。
然而，血球计数板也可以应用于计数其他类型的微生物，如酵母菌。
下面将详细介绍使用血球计数板计数酵母菌个数的计算方法。
1.准备工作-准备血球计数板：将血球计数板放在平整、干净的工作台上。
-准备显微镜：确保显微镜的放大倍数适合酵母菌的观察。
2.制备样品-培养酵母菌：选择适用于酵母菌的培养基，并在温度适宜的条件下培养酵母菌至合适的生长阶段。
-稀释样品：取适量酵母菌培养物，并使用物理或化学方法将其稀释至适宜的浓度。
常规稀释范围为10^-1至10^-73.接种样品-将适量的稀释后的酵母菌样品吸入移液管中。
-用移液管加样品到血球计数板的一个大格中。
重复这个过程，直到填充至少3个大格。
-轻轻拍打血球计数板，以使酵母菌分布均匀。
4.观察和计数-将装有血球计数板的试管放置在显微镜下，以便于观察。
-调节显微镜的焦距，以清晰地观察酵母菌。
-随机选择一个大格开始计数。
对于每个大格，观察所有四个角以及中央的九个小格。
计数以一个有效酵母菌可见于格子线与其相交的点为依据。
-对于每个大格中酵母菌的计数结果，将计数值乘以10（表示小格数），然后累加得到总数。
例如，如果一个大格中计数到45个酵母菌，总数应为45x10=450。
-重复以上步骤，直到至少3个大格被计数。
如果计数结果在这些大格之间差异较大，则需要继续计数至一个统一的结果。
5.计算酵母菌的浓度-计算平均数：将各个大格的计数结果相加，并除以计数的大格数，得到平均数。
-计算总体浓度：将平均数乘以初始的稀释倍数。
例如，如果初始稀释倍数为10^-4且平均数为80，总体浓度应为80x10^4=800,000CFU/mL （菌落形成单位/毫升）。
-根据需要，可以根据大格的面积进行进一步的修正。
需要注意的是，血球计数板通常用于测量血液细胞的数量，而不是酵母菌等微生物。
因此，使用血球计数板计数酵母菌需要一些修正和适应。
实验五酵母菌形态的观察和显微镜下细胞测量和计数
实验五酵母菌形态的观察和显微镜下细胞测量和计数刘洋生物101 1002040120一、实验目的1、观察酵母菌的形态，掌握区分酵母菌死活细胞的染色方法。
2、掌握利用显微测微尺测量酵母菌大小的方法。
3、学习利用血球计数板测定微生物细胞数量的原理和方法。
二、实验原理（一）酵母菌的形态观察酵母菌是单细胞真核微生物，细胞呈圆形、椭圆形或柱状。
酵母的细胞比细菌大得多，经过特殊的染色，在高倍镜下就可以观察到。
酵母菌既可无性繁殖，又可有性繁殖。
无性繁殖有芽殖和裂殖两种，芽殖又有单出、双出和多出之分。
酵母菌的有性生殖一般能形成4~8个子囊孢子。
在一定条件下，有的酵母菌进行芽殖后，长大的子细胞不与母细胞立即分离，并继续出芽，细胞成串排列，这种菌丝状的细胞串就称为假菌丝。
假菌丝的各细胞间仅以狭小的面积相连，呈藕节状。
酵母菌的死活细胞可以通过美兰染色加以区分。
美兰是一种无毒性染色剂，其氧化型为蓝色，还原型为无色。
由于活细胞具有较强的还原能力，可以使美兰由蓝色的氧化型转变为无色的还原型。
处于代谢旺盛的细胞还原美兰的能力强，细胞为无色，为代谢缓慢的老细胞、幼嫩芽体为浅蓝色，死细胞为深蓝色。
（二）显微镜下的细胞计数本次实验采用血球计数法测定微生物细胞数。
方法是将经过适当稀释的菌体细胞或孢子悬液，加到血球计数板的计数室内，在显微镜下逐格计数。
因为计数室的容积是固定的（0.1mm3），所以可以将在显微镜下计得的菌数换算成单位体积试样中的菌数。
血球计数板使一块特制的载玻片，中部有H形的沟槽将中部分成上下两个计数室。
计数室方格的边长为3mm，每个方格分为9个大方格，正中央的大方格被分为25个中方格，而每个中方格又被分为16个小方格。
这样正中央的大方格总共分成400个小方格，每个小方格的体积为1/4000mm3（计数室的高度为0.1mm）。
由此得到如下公式：每毫升的菌数个=平均每个中方格内的菌数16×稀释倍数×4000×1000（三）显微镜下细胞大小的测量用来测量微生物大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。
酵母菌细胞的显微镜计数
6．排除异常标本的干扰
2.血球计数板的使用原理
显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上（又称计菌器），于显微镜下直接计数，然后推算出含菌数的一种方法。血球计数板是常用的计菌器之一。
血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器，由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网。方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室。这一大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其容积为0.1mm3，即1mm×1mm×0.1mm方格的计数板；大方格的长和宽各2mm，深度为0.1mm，其容积为0.4mm3，即2mm×2mm×0.1mm方格的计数板。在血球计数板上，刻有一些符号和数字(见图一)，其含义是：XB-K-25为计数板的型号和规格，表示此计数板分25个中格；0.1mm为盖上盖玻片后计数室的高；1/400mm2表示计数室面积是1mm2，分400个小格，每小格面积是1/400 mm2。
酵母细胞个数／1mL=100个小方格细胞总数/ 100 ×400×10000×稀释倍数
2．25×16型的计数板 中央大方格以双线等分成25个中方格，每个中方格又分成16个小方格，供细胞计数用。一般计数四个角和中央的五个中方格（80个小方格）的细胞数。计数重复3次，取其平均值。计数完毕后，依下列公式计算：
5.6清洗
计数板用毕后先用95%的酒精轻轻擦洗，再用蒸馏水淋洗，然后吸干，最后用擦镜纸揩干净。若计数的样品是病原微生物，则必须先浸泡在5%石炭酸溶液中进行消毒后再进行清洗。然后放回原位，切勿用硬物洗刷。
6.实验结果及结论
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8.思考题
（1）能否用血细胞计数板在油镜下进行计数？为什么？
答：不能。因为计数时滴在血球计数板上的是菌悬液，相当于在镜头和计数板直接加了一层水，水层会降低视野的亮度和显微镜的分辨率，造成图像不清晰。
广州大学学生实验报告
开课学院及实验室：生化楼3282014年5月15日
学院
化学化工学院
年级、专业、班
食品122
姓名
刘子瑞
学号
1205300075
实验课程名称
食品微生物实验
成绩
实验项目名称
酵母菌细胞的显微镜计数
指导老师
刘鹏
1.实验目的
（1）掌握显微镜的调整方法。
（2）了解血球计数板的构造和计数原理。
（3）掌握用血球计数板测定酵母菌细胞总数的方法。
计数室通常也有两种规格：一种是16×25型，即大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是25×16型，即大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成。
1．16×25型的计数板 将计数室放大，可见它含16中格，一般取四角：1、4、13、16四个中方格（100个小方格）计数（见图二）。将每一中格放大，可见25个小格。计数重复3次，取其平均值。计数完毕后，依下列公式计算：
酵母细胞个数／1mL=100个小方格细胞25×16型的计数板 中央大方格以双线等分成25个中方格，每个中方格又分成16个小方格，供细胞计数用。一般计数四个角和中央的五个中方格（80个小方格）的细胞数。计数重复3次，取其平均值。计数完毕后，依下列公式计算：
（2）根据自己体会，说明血细胞计数板计数的误差主要体现在哪些方面？如何减小误差
答：技术误差：由于操作人员采血不顺利，器材处理、使用不当，稀释不准确，细胞识别错误等因素所造成的误差；仪器误差：由于仪器（计数板、盖片、吸管等）不够准确与精密带来的误差；分布误差：由于细胞分布不均匀等因素带来的细胞计数误差。
3活酵母有芽殖现象，若芽体达到母细胞大小的一半时，即可作为两个菌体计数，若芽体小于母细胞一半时为1个酵母细胞。
4对于压在方格界线上的酵母菌应当计数同侧相邻两边上的菌体数，一般可采取“数上线不数下线，数左线不数右线”的原则处理，另两边不计数。计数时，如果使用16格×25格规格的计数室，要按对角线位，取左上、右上、左下、右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数；如果规格为25格×16格的计数板，除了取其4个对角方位外，还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数。
5.6清洗
计数板用毕后先用95%的酒精轻轻擦洗，再用蒸馏水淋洗，然后吸干，最后用擦镜纸揩干净。若计数的样品是病原微生物，则必须先浸泡在5%石炭酸溶液中进行消毒后再进行清洗。然后放回原位，切勿用硬物洗刷。
6.实验结果及结论
下列数据是每小格里酵母菌的数量。
编号
1
2
3
4
5
6
7
平均数
个数
7
7
4
14
10
8
9
8.4
2.血球计数板的使用原理
显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上（又称计菌器），于显微镜下直接计数，然后推算出含菌数的一种方法。血球计数板是常用的计菌器之一。
血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器，由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网。方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室。这一大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其容积为0.1mm3，即1mm×1mm×0.1mm方格的计数板；大方格的长和宽各2mm，深度为0.1mm，其容积为0.4mm3，即2mm×2mm×0.1mm方格的计数板。在血球计数板上，刻有一些符号和数字(见图一)，其含义是：XB-K-25为计数板的型号和规格，表示此计数板分25个中格；0.1mm为盖上盖玻片后计数室的高；1/400mm2表示计数室面积是1mm2，分400个小格，每小格面积是1/400 mm2。
待细胞不动后进行镜检计数。先用低倍镜找出计数室方格后，再用高倍镜测数。一般应取四角及中央5个中格的总菌数。计数时若遇到位于线上的菌体，一般只计数格上方（下方）及右方（左方）线上的菌体。每个样品重复3次。
5.5计算
取以上计数的平均值，按下列公式计算出每毫升菌液中的含菌量。
菌体细胞数（cfu/mL)=小格内平均菌体细胞数×400×104×稀释倍数
5.2稀释样品
将培养后的酵母培养液振摇均匀，然后作一定倍数的稀释。稀释度选择以小方格中分布的菌体清晰可数为宜。一般以每小格内含4或5个菌体的稀释度为宜。
5.3加样
取出一块干净盖玻片盖在计数板中央。用滴管取一滴菌稀释悬液注入盖玻片边缘，让菌液自行渗入，若菌液太多可用吸水纸吸去。静置5～10min。
5.4镜检
高倍镜测数，取计数的平均值，每小格约为8个
菌体细胞数（cfu/mL)=8个×400×10000×1=32000000个
7.注意事项
1从试管中吸出培养液进行计数之前，要将试管轻轻震荡几下，这样使酵母菌分布均匀，防止酵母凝聚沉淀，提高计数的代表性和准确性，求得的培养液中的酵母菌数量误差小。
2如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当对培养液进行稀释以便于酵母菌的计数。具体方法是：摇匀试管，取1mL酵母菌培养液，加入成倍的无菌水稀释，稀释n倍后，再用血球计数板计数，所得数值乘以稀释倍数。以每小方格内含有4—5个酵母细胞为宜。特别是在培养后期的样液需要稀释后计数。
酵母细胞个数／1mL ＝80个小方格细胞总数/ 80 ×400×10000×稀释倍数
3.实验材料
材料：酵母菌菌悬液、显微镜、血球计数板、擦镜纸、滴管、95%酒精。
4.实验流程
检查计数板→稀释样品→加样→计算→清洗
5 实验步骤
5.1检查血细胞计数板
取血细胞计数板一块，先用显微镜检查计数板的计数室，看其是否沾有杂质或干涸着的菌体，若有污物则通过擦洗、冲洗，使其清洁。镜检清洗后的计数板，直至计数室无污物时才可使用。
5．缩小计数域误差或分布误差
6．排除异常标本的干扰
1．避免技术误差，纠正仪器误差
2．所用器材均应清洁干燥，计数板、血盖片、微量吸管及刻度吸管的规格应符合要求或经过校正。
3．细胞稀释液应新鲜、无杂质微粒。
4．严格操作，从消毒、采血、稀释、充池到计数都应规范，尤其应注意的是血样稀释及充池时既要作到充分混匀，又要防止剧烈震荡为破坏红细胞。必须一次性充满计数室，防止产生气泡，充入细胞悬液的量以不超过计数室台面与血盖片之间的矩形边缘为宜。