家畜早期胚胎性别鉴定技术的应用_乌达巴拉

性别异性抗原的存在主要用于研究组织相容性 9 抗原 （或称 A"9 抗原） 。A"9 抗原是雄性哺乳动物 细胞膜上的一种糖蛋白，无组织器官的特异性， 是 雄性特异 A"9 抗原基因表达的产物，该基因定位 在 9 染色体的长臂上。A"9 抗原法包括细胞毒性 分析法和间接免疫荧光法。 间接免疫荧光法是先用 再与异硫氰酸 （BCDE） 标记的免 A"9 抗原处理样品， 疫球蛋白 （CFG） 抗体反应， 经荧光镜检查有荧光素 的为雄性， 该方法准确率达 <7 :。细胞毒性分析法 是用 A"9 抗血清和补体溶解雄性胚胎的细胞来鉴 定胚胎性别。 该方法操作相对简便， 便于商业生产， 胚胎鉴别比率很高， 但其准确率一般认为难以超过 对于 A"9 抗原的存在也有不同的看法。 <= :， !"% 分子生物学方法：是新发展起来的一种利用雄
关键词： 家畜； 早期胚胎； 性别鉴定 中图分类号： H<1I0= 文献标识码： J 文章顺序编号： （5667） 12=5"71@6 65"66I6"65
! 胚胎性别鉴定方法 又称染色体核型分析法， 是通过 !"! 细胞学方法： 查明胚胎细胞的性染色体类型为 88 型或 89 型
来鉴定胚胎性别。胚胎的核型， 虽然各种家畜的染 色体数目不一样，但是在早期胚胎发育过程中雌 性胚胎中的一条 8 染色体处于暂时失活状态。因 此，从胚胎中取出部分细胞直接进行染色体分析 或阻断培养在细胞分裂中期进行染色体分 析 ， 可 对胚胎进行性别鉴定。这种方法准确率为 166 : ，
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畜 牧 与 饲 料 科 学
பைடு நூலகம்
但是采集细胞对胚胎有损伤，并且获得高质量的 中期染色体分裂相的难度比较大，分散相的获得 率为 2106 :;<106 : ， 能进行性别鉴定的是 20= :; 而且鉴别过程耗时长， 难以在生产中推广。 26 : ， 目前主要用来验证其它性别鉴定方法的准确率。
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免疫学方法 （A"9 抗原法） ’用免疫学方法证实
收稿日期： 5667"15"16 改回日期： 5667"63"63
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作者简介： 乌达巴拉 （1@=@—） ， 女， 在读硕士研究生， 主要研究方向为家畜胚胎学。
5667 年 第 5 期
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综 ! "#$! % &’()! "*+,
性特异性基因探针和 234 扩增技术来鉴别家畜性别 的方法。其实质是检测 5 染色体上的 645 基因是否 存在来判断雌雄， 存在则判为雄性。 （786!） ： 是分子杂交与组织 !"#"! 荧光原位杂交技术 化学相结合的一项新技术。 该技术利用已知碱基序列 的非同位素标记的核酸探针，依据碱基互补配对原 理， 通过荧光亲和素免疫组化检测体系， 在组织切片、 细胞间期核及染色体等标本上，对待测核酸进行定 性、 定位及相对定量分析。 探针和靶 9:; 的变 786! 包括荧光素探针制备、 性与杂交， 以及观察鉴定部分。 由于 786! 技术制备了 特异性序列片段探针杂交在细胞内进行， 能使用试剂 而发光、 显色， 既能在细胞分裂间期杂交， 也能在分裂 中期杂交， 更具有广泛应用性。 由于 786! 允许使用体 细胞杂交探针与 < 和 5 探针结合检测性别中非整体 变异， 因而具有高效快速和错误率低的优势。 （234 ） 法： !"#"$ 多聚酶链反应 234 技术是 /0 世 纪 =0 年代后期出现的分子生物学新技术。其原理 是在靶 9:; （欲 扩 增 的 9:; 片 段 ） 的两端合成 > 对引物， 分别互补于扩增序列的 / 条链， 在脱氧核 苷三磷酸和 ?@A 9:; 聚合酶的存在下，经变性退 火， 延伸 B 步 （称为一个循环） 进行 9:; 合成， 经多 个循环后， 可将靶序列在 /CB D 内扩增至百万倍以 上， 经琼脂糖电泳检查扩增结果， 从而达到检测目 的。在一定条件下进行 234 扩增反应， 能扩增出目 标片段的胚胎， 即雄性胚胎， 否则即为雌性胚胎。 用 234 法 鉴 定 家 畜 胚 胎 性 别 主 要 程 序 为 胚 胎的获取、 引物的设计， 用显微镜操作， 从胚胎中 取出几个细胞， 热 处 理 后 进 行 234 扩 增 ， 电泳检 测。 !EFF 等 （>GG0） 首先成功建立了家畜胚胎性别 鉴定的 234 法， 具有快速、 特异、 高效的特点。用 于胚胎性别鉴定时， 需要样品量少。由于 234 是 一种非常灵敏的技术，一旦有极少量的外源 9:; 的污染， 就有可能出现假阳性结果， 因此一定要严 格操作， 以防止外源污染和非特异性扩增。 剂、 特殊仪器。 它采用雄性特异性以及雌雄共同引 物， 因此， 可以最大限度地排除误判。只 需 一 台 就能完成整个过程。 有无 HNN#@)# 终 点 浊 度 仪 ， 扩增反应是通过反应过程中获得的副产物焦磷 酸 镁 所 形 成 的 白 色 沉 淀 的 浑 浊 度 来判定。
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示剂与早期胚胎一起孵育，记录各胚胎着色的深 浅来进行分类， 从而鉴定胚胎的性别。 （1@@2 ） 测定了小鼠的从桑椹胚到囊胚 >%&&$#? 阶段胚胎 8 连锁酶 2" 磷酸葡萄糖脱氢酶的活性， 性别鉴定准确率雌性为 =5 : ， 雄性为 7= : ， 活性 高的胚胎死亡率较高。由于人们对 8 染色体失活 的确切时间不清楚，加上畜种之间 8 染色体失活 时间的差异， 影响了鉴别的准确率。该方法不可用 于桑椹胚期以后的胚胎。
综
述 ! "#$! % &’()! "*+,
家畜早期胚胎性别鉴定技术的应用
乌达巴拉 1， 赖双英 1， 石
（10 内蒙古农业大学动物科学与医学学院， 内蒙古 古 呼和浩特 呼和浩特
泉5
内蒙 61661<； 50 内蒙古动物卫生防疫监督检验所，
616671 K
动物的性别控制技术是通过对动物正常的生 殖过程进行人为干预，使成年雌性动物产出所需 性别后代的一门生物技术。早期胚胎的性别鉴定 技术是性别控制的主要途径，是家畜胚胎移植技 术的一项重要内容。通过控制后代的性别比例， 可 充分发挥受性别限制的生产性状 （如泌乳等） 和受 性别影响的生产性状 （如生长速度、 肉质等） 的最 大经济效益， 增加选种强度， 加快育种进程， 克服 牛胚胎移植中出现的异性孪生不育现象，排除伴 性有害基因的危害。 摘要： 家畜早期胚胎性别鉴定技术是家畜 性别控制和胚胎移植技术的一项重要内 容， 对畜牧业生产具有重要意义。随着胚 胎性别鉴定技术的不断发展， 出现了很多 新的方法。 笔者对有关早期胚胎性别鉴定 方法、 存在问题及前景进行了综述。
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通过测定与 8 染色体 8 连锁酶活力测定法：
连锁相关的酶的活性来鉴定胚胎性别的一种方 法。在哺乳动物中， 同型配子组成的胚胎有 5 条 8 染色体， 虽然其中一条染色体会在胚胎早期失活， 但研究显 示 ， 8 染色体的失活与胚胎基因组启动 之间存在明显的间隙。 因此在一个细胞中， 与8染 色体相联系的酶活性和浓度在雌性胚胎中是雄性 胚胎的 5 倍。据此， 将 8 连锁酶的底物、 辅酶和指
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〔K 〕 周荣家 ’ 胚 胎 性 别 鉴 定 及 其 遗 传 基 础 〔P 〕 ’中 国 畜 牧 杂 志， （K ） ： >G=G， /1 1BC11’ 〔1 〕 王海浪， 等 ’ 简便快速的胚胎性别鉴定方法 OH;I2 法 （>> ） ： 〔P 〕 ’黑龙江动物繁殖， /00B， K B=CBG’ 〔J 〕 曾溢滔， 胡明信’应用 234 扩增牛 645 序列进行奶牛胚 胎性别鉴定 〔P〕 （R 辑） ， （K） ： ’中国科学 >GGB， / BQ>CBQJ’ "
述
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存在的问题 所有的胚胎性别鉴定方法，都或多或少存在
对胚胎的损害问题，如核型分析法、 786! 法、 234 法都必须从胚胎上取样， 而 < 连锁酶活力测定法、 不是使用染料就是使用荧光物质， 都 !O5 抗原法， 对胚胎的存活有影响。从研究方法上看， 目前比较 关注准确率和可鉴别比率，而对鉴别后移植妊娠 率的重视不够，而且任何一种方法从实验室走向 生产实践时很多现实因素也必须要考虑到，如环 境条件、操作的难易程度以及对操作人员技术水 平的要求等。目前，有些基础问题还有待深入研 究 ， 如 !O5 抗 原 的 获 得 、 < 染色体失活的时间、
645 的种间差异等，只有把这些基础问题研究透
彻， 才能使相应的方法更加完善。
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应用与展望 畜牧业的发展促进了哺乳动物性别控制的研
究， 同时促进了将性别控制的方法应用于实践， 也 对畜牧业的发展产生了巨大的推动作用。对养羊 业来说，目前急需扩大良种母羊育种核心群的繁 殖数量，绵羊的胚胎性别鉴定对于加速良种绵羊 的繁育速度以及养羊业的发展具有重要意义。从 卵泡的角度来说， 尤其是对珍稀动物和高产家畜， 如要等到授精后， 才鉴别淘汰不需要的胚胎， 对卵 泡资源是一种浪费， 如果能通过某种方法， 抑制或 改变 645 的作用，从而使胚胎的性别发生改变， 或许这才是真正意义上的性别控制。