chelex100的原理
以Chelex100为介质抽提DNA解析
以Chelex 100为介质抽提DNA近年来，DNA的分析技术已广泛地应用于肿瘤学的研究中。
获取DNA 的传统方法是以新鲜、-70℃或液氮保存的标本为材料，通过蛋白酶K消化，酚、氯仿抽提而获取DNA。
1987年，Fey等［1］首先用NP40成功地从骨髓涂片中提取到较高分子量的DNA，用于Southern印迹分析。
国内的一些学者［2,3］也用相似的方法，从骨髓涂片中提取到DNA。
但这两种方法均需蛋白酶K消化，酚、氯仿抽提，乙醇沉淀等步骤，操作复杂，费时。
同时，需要在多个离心管之间转移，增加了标本间的交叉污染。
由于PCR技术对DNA样品的纯度和分子量的要求相对较低：对微量的DNA即可扩增，且只需待扩增的靶序列完整即可，不要求高分子量。
因此，部分降解的DNA均可作PCR检测。
由于PCR有极高的敏感度，需严格控制标本间的交叉污染，同时为了适应血液系统恶性肿瘤标本来源的特点，我们通过与常规酚、氯仿提取DNA进行比较，以了解以Chelex 100为介质提取DNA对PCR的影响。
一、材料和方法1.细胞：(1)细胞株：B-NHL细胞株-村林细胞。
(2)外周血有核细胞：由健康志愿者提供。
2.DNA获取率比较：(1)将不同培养瓶中已培养的村林细胞混合；A组取10份，5 ml/份；B组取10份，0.5ml/份。
(2)A组用酚、氯仿抽提DNA ：按Sambrook等［4］介绍的方法提取DNA。
(3)B组用Chelex 100为介质提取DNA：将已培养定量的村林细胞加入Eppendorf管中，加去离子水1ml，间歇振荡30 分钟。
15 000r/min离心5分钟，弃去上清液470 μl，加10% Chelex 100 170 μl，56℃温育30分钟。
超速振荡15秒，沸水浴8分钟，15 000 r/min 离心5分钟，上清液即为DNA模板［5］。
(4)DNA定量：在微量紫外分光光度计上分别测两种不同方法提取DNA的吸光度(A，曾称光密度OD)值，换算出DNA的浓度和获得量：DNA浓度(μg/ml)=OD×50×稀释倍数260DNA获得量(μg)=DNA浓度×DNA溶液体积 (5)统计学处理：采用两样本均数检验法进行检验。
法医DNA常量检材Chelex-100提取法探究
量检材Ｃ ｈ ｅ ｌ ｅ ｘ － ｌ Ｏ ０ 提取法探究
吴俊蓉 李宗壮 云南云通司法鉴定中心
【 摘■ ｌ目 的： 对Ｃ ｈ ｅ ｌ ｅ ｘ － １ ０ ０ 提取 法在常量检 材Ｄ Ｎ Ａ 提 取中的应 用情 子具 有非 常高的亲和 力， 其在低离子 强度 、 碱性温 浴的作用下能 够裂 解 改变与Ｄ ＮＡ 结合蛋 白的性 质… 。 通常来说 ， 常量 检材基质中含 有 况进行 研究。 方法： 选取２ ０ 份送 检 的常量检 材， 包括 烟蒂、 染血 棉签 ， 纱 细胞膜 ， 条、 Ｆ Ｔ Ａ 卡片等检 材， 采 用Ｃ ｈ ｅ ｌ ｅ ｘ － １ ０ ０ 提 取 法对唾 液、 血 痕进行检 测， 并对 大量的金 属离子 ， 在低离子强度 和加 热条件下能够 降解Ｄ Ｎ Ａ， 同时能 够 检测情况进行整理分析。 结果： １ 组Ｄ Ａ Ｎ 浓度 为 ２ ． ５ １ 士 ０ ． ２ ｎ ｇ ／ Ｍ ｌ ； ２ 组Ｄ Ｎ Ａ 浓度 抑ｆ ｌ ￣ Ｉ Ｊ Ｐ Ｃ Ｒ 反应 ， 因此 在提 取Ｄ ＮＡ 时 加入Ｃ ｈ ｅ ｌ ｅ ｘ － １ ０ ０ 能够 阻止Ｄ ＮＡ降 为２ ． ２ ８ ＋Ｏ ． ４ ｎ ｇ ／ｐ ． ｆ ； ５ 组Ｄ Ｎ Ａ浓度 为２ ． ４ ０ 士０ ． ３ ｎ ｇ ／ ｐＩ ， 不 同浓度 的 Ｃ ｈ ｅ ｌ ｅ ｘ －１ ０ ０ 解， 同时提 升Ｐ Ｃ Ｒ扩增率 。 但 此 种方式 在临床 中也 存在一定 的不足 ， 检 测 的Ｄ Ｎ Ａ 浓 度 比 较 无 明显 差异 ， 且 均 能 够达 到检 验 目的 。结 论 ： 低浓度 Ｃ ｈ ｅ ｌ ｅ ｘ － １ ０ ０ 提取 法检测 很容易受到 基质中杂质的干扰 ， 导致部 分Ｄ Ｎ Ａ Ｃ ｈ ｅ ｌ ｅ ｘ － １ ０ ０ 在常量检材Ｄ Ｎ Ａ 提取 中即可取得 良好 的效果 ， 能够准确的提 取 丢失 。 但其 在实践中操 作非常 方便 ， 且 时间非常短 ， 在 提取 的过程 中无 Ｄ Ｎ Ａ。 需更换试 管， 大大 降低 了污染发 生率 ｊ 。 此 外， 在研 究中也可以看 出， 低 【 关键词 】 常量检 材； Ｃ ｈ ｅ ｌ ｅ ｘ － １ ０ ０ 提取 法； Ｄ Ｎ Ａ 浓度 的Ｃ ｈ ｅ ｌ ｅ ｘ － １ ０ ０ 与高浓 度Ｃ ｈ ｅ ｌ ｅ ｘ － １ ０ ０ 提 取的Ｄ ＮＡ 浓 度并无明显 差 异， 因此可 以认 为低浓度 Ｃ ｈ ｅ ｌ ｅ ｘ － ｌ Ｏ ０ 能 够有效 的提取 常量 检材Ｄ Ｎ Ａ， 降低了不必要的浪费和 污染。 Ｄ ＮＡ的独有性 和 个体 识 别性进 行 亲子鉴 定和 嫌疑 人鉴 定 。 法 医Ｄ ＮＡ 有机提 取法 主要是 采用饱 和酚 、 氯 仿等物 质按 照不同 比例 进行混 检 验 的主要 对 象为生 物物 证 ， 也 就 是人体 中的细 胞 核基 因组 ， 其通 常 合， 而后提取Ｄ ＮＡ 的方 式。 Ｄ Ｎ Ａ 非 常容易溶于水 中， 但不溶于有机溶 剂 存在 于血液 、 唾 沫 中。 目前， 最常用的检 测方法 为Ｃ ｈ ｅ ｌ ｅ ｘ － １ ０ ０ 提取 法， 中川 。 此种 提 取方式提 取 的Ｄ ＮＡ 纯 度非 常高， 不会 受到杂 质干扰 ， 但 此 主要 是 由于此 种 检测 方 式成 本较 低 、 操作 方便 、 时间较 短 。 笔者 将对 种方 式 由于在 提炼 过程 中需要 利用大 量有机试 剂进 行辅 助， 有 机试 剂 Ｃ ｈ ｅ ｌ ｅ ｘ － １ ０ ０ 提取法在常量检材Ｄ Ｎ Ａ 提 取中的作用进行研 究。 多存在较 大的 毒性 ， 会对人体造成影 响 ， 且容易造 成环境 污染 。 此外， 有机提取方式 操作复杂、 提取 时间较长 ， 已经很 少被 采用。 １ ． 资 料与 方法
Chelex-100法提取口腔脱落细胞DNA
Chelex-100法提取口腔脱落细胞DNA日期姓名学号指导教师成绩10.0【实验目的】1. 掌握Chelex-100法提取口腔粘膜上皮细胞DNA的基本原理与方法；2. 了解并熟悉PCR基本原理与试验方法；3. 学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术；4. 掌握群体遗传学基因频率与基因型频率的计算方法。
【实验原理】一. 我们提取的是ACE基因: 人类ACE基因定位于染色体17q23.3，全长21kb，包括26个外显子，在16号内含子上存在Alu片段插入型（insertion，I）或缺失型（deletion，D）多态性。
血管紧张素原在肾素作用下，转变为血管紧张素Ⅰ，血管紧张素Ⅰ在ACE用下转换为血管紧张素Ⅱ，作用受体分为AT1受体以及AT2受体。
当作用于AT1受体时，引发效应有：收缩血管，促进醛固酮释放，促进肾上腺素释放，心血管的增殖与重构。
肾素-血管紧张素系统RAS 是人体内重要的体液调节系统，对心血管系统的正常发育、心血管功能稳态、电解质和体液平衡的维持、以及血压的调节均有重要作用。
二、 DNA提取总的原则：1. 保证核酸一级结构的完整性；2. 其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度；3. 核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；4. 其他核酸分子，如RNA，也应尽量去除。
三. 1.细胞内的核酸包括DNA与RNA两种分子，均与蛋白质结合成核蛋白。
2.真核生物的DNA又有染色体DNA和细胞器DNA之分，前者为双链线性分子；后者为双链环状分子。
3.除此之外，在原核生物中还有双链环状的质粒DNA；在非细胞型病毒颗粒内，DNA的存在形式多种多样。
四. 1. Chelex-100是以成对的亚氨基二乙酸盐离子为吸附因子的苯乙烯与二乙基苯的共聚物，它对高价金属离子有很高的亲和力和螯合作用。
当检材较少时，或者基因分型只需少量DNA时，可以用Chelex-100提取方法提取DNA。
法医DNA提取方法
• 血痕要求在75～80 ℃之间保温5 min，若检
材为陈旧性，尚应适当延长保温时间5～ 10min。
一种改良方法
• 将 chelex-100 法或碱性裂解法处理的血痕， 用等体积的饱和酚-氯仿（1:1）处理一次， 再用冰无水乙醇沉淀，挥干后，加适量无 菌水溶解。这样提取的DNA，经过PCR 扩 增电泳 后，显示结果会更好。
Chelex-100法：
• 优点：快速、方便，且仅在一个管内进行， 减少污染 • 缺点：DNA提取的浓度小，对检材条件要 求较高，对被泥土、石灰粉、染料污染的检 材效果不佳，常导致扩增效率下降或失败。
Chelex-100法：
• 所取全血与DNA含量之间的关系： 全血（ul） 理论DNA 产量（ug） 1 0.04~0.06 10 0.2~0.4 100 2~4 200 4~6 400 8~10
Chelex-100法：
• 注意事项：
• A．核膜和其它试剂一起保留下来了，DNA纯度比 有机溶剂提取法低； • B．chelex-100法将DNA双螺旋打开，不能用像EB 染料插入方法进行定量，只能用杂交方法定量； • C．由于沸水浴8min和快速振荡使DNA片段受到损 害而断裂，对于大于500bp的片段扩增成功率低。 • D．chelex-100在配置数小时后螯合能力就有下降 趋势，将会导致提取的DNA溶液中有各种金属离 子或抑制剂，对PCR反应可能有影响。
和真菌的影响，生物检材中可能存在的病原体与FTA卡接 触后也将失活。 保存的DNA可以方便快捷的进行纯化和 洗脱。
FTA技术
• 注意事项：
•
直接使用固定在FTA载体上的全血DNA进行 STR复合扩增，可以得到稳定的分型结果，但是相
chelex100法口腔脱落细胞提取
chelex100法口腔脱落细胞提取摘要：一、引言二、chelex100法口腔脱落细胞提取方法简介1.chelex100法的原理2.chelex100法的操作步骤三、chelex100法口腔脱落细胞提取的优点1.操作简便2.高效提取3.细胞完整度高四、chelex100法口腔脱落细胞提取的应用1.疾病诊断2.基因检测3.其它领域五、结论正文：一、引言口腔脱落细胞是指口腔黏膜上皮细胞、唾液腺细胞等在口腔内自然脱落或通过简单擦拭即可获得的细胞。
这些细胞对于疾病诊断、基因检测等领域具有重要价值。
然而，传统的细胞提取方法存在操作复杂、提取效率低、细胞完整度差等问题。
近年来，chelex100法作为一种新型的口腔脱落细胞提取方法，因其具有操作简便、高效提取、细胞完整度高等优点，受到广泛关注。
二、chelex100法口腔脱落细胞提取方法简介1.chelex100法的原理chelex100法是一种基于化学沉淀原理的细胞提取方法。
该方法通过选择适当浓度的chelex100（一种季铵盐聚合物）与细胞混合，使细胞表面的负电荷与chelex100的正电荷结合，形成稳定的沉淀物。
通过离心等操作，可将细胞与chelex100沉淀物分离，实现细胞的提取。
2.chelex100法的操作步骤（1）准备试剂：chelex100、生理盐水、PBS缓冲液等。
（2）取材：采集口腔脱落细胞样本。
（3）细胞与chelex100混合：将chelex100按一定比例加入生理盐水或PBS缓冲液中，与细胞混合。
（4）沉淀：静置一段时间，使细胞与chelex100结合形成沉淀物。
（5）分离：通过离心等方法，将沉淀物与细胞分离。
（6）洗涤：用适当缓冲液洗涤细胞，去除残留的chelex100。
（7）细胞悬液：重新悬浮细胞，用于后续实验。
三、chelex100法口腔脱落细胞提取的优点1.操作简便：chelex100法操作简单，无需复杂的仪器设备，适用于实验室和临床操作。
chelex100法口腔脱落细胞提取
chelex100法口腔脱落细胞提取摘要：1.引言2.chelex100 法口腔脱落细胞提取的原理3.chelex100 法的操作步骤4.chelex100 法的优点与局限性5.总结正文：口腔脱落细胞提取是一种广泛应用于临床和研究领域的细胞收集方法。
其中，chelex100 法作为一种简单、高效且可靠的方法，越来越受到人们的关注。
chelex100 法口腔脱落细胞提取的原理是利用chelex100 树脂对细胞表面的亲和力，通过物理吸附作用将细胞从口腔黏膜表面分离出来。
这种方法既不会对细胞造成损伤，又能有效地收集到足够数量的细胞。
具体操作步骤如下：（1）准备chelex100 树脂：将chelex100 树脂溶解在适量的生理盐水中，制成浓度为10% 的溶液。
（2）采集口腔脱落细胞：嘱咐受试者漱口后，用无菌牙签在口腔黏膜侧壁刮拭数次，然后涂抹在载玻片上。
（3）加入chelex100 溶液：将制备好的chelex100 溶液滴在载玻片上，使其覆盖在细胞样本上。
（4）孵育：将载玻片放入恒温箱中，孵育10-15 分钟。
（5）洗涤：用生理盐水洗涤细胞，去除未结合的chelex100 树脂。
（6）固定：用乙醇固定细胞，使其停止代谢活动。
（7）染色：用甲醇和伊红混合液对细胞进行染色。
（8）观察：在显微镜下观察染色后的细胞形态和数量。
chelex100 法具有操作简便、对细胞损伤小、收集效率高等优点。
然而，该方法也存在一定的局限性，如对于某些特殊类型的细胞，如口腔鳞癌细胞，chelex100 法的收集效果可能不佳。
总之，chelex100 法作为一种有效的口腔脱落细胞提取方法，在临床和研究领域具有广泛的应用前景。
各种检材DNA的提取
酚-氯仿法——注意事项
酚-氯仿法是目前最常用、最可靠的方法之一，无论 是血液还是血痕标本均适用 所提取的DNA纯度高，可满足各种分子生物学检测技 术的需要
但该法操作较为繁琐、耗时长，影响了其在实践工作 中的广泛应用。
（三）碱性裂解法
碱性裂解法是指在强碱作用下，使构成细胞的蛋白质 成分谷氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、酪氨酸残基等迅 速发生电离，从而快速破坏蛋白质的一级结构。 检材在强碱性pH条件及一定温度状况下能迅速破碎细 胞膜及核膜，使核酸酶变性及DNA释放。
Chelex-100法——步骤
取适量血痕检材置1.5ml EP管中，加入1ml 灭菌无菌 水浸泡20min，>10000rpm离心3min，用1000ul进样器 小心地吸去上清液。 加5％chelex-100 200u1，于水浴锅中56℃水浴30min， 振荡混匀。 沸水中煮10min，取出后立即置于冰上3min，>10000 rpm离心1min。上清液即为DNA提取液，可在2-6℃保 存1个月，在-20℃长期保存。
酚-氯仿法——步骤
取适量血痕检材置于1.5ml EP管中，加入1ml 无菌水 浸泡20min，>10000rpm离心3min，弃去上清。 加入500μ l STE液悬浮沉淀物，加入20μ l 10 % SDS 及10 mg/ ml 蛋白酶K 4 μ l ，54℃水浴消化3小时
离心取上清液至另一EP管中，加入500μ l苯酚/氯仿/ 异戊醇混合物，振荡到出现絮状物，>10000rpm离心 3min。
各种检材DNA的提取
夏
水
秀
一、DNA的提取方法
DNA提取方法原理简介
DNA提取方法原理简介DNA是脱氧核糖核酸，是绝大多数生物的最主要的遗传物质。
随着生命科学技术的发展，从生物样本中提取DNA的方法也日益多样、成熟。
下面就几种常见的DNA提取方法的原理作个简介。
1 酚氯仿法酚氯仿法为DNA提取的经典方法，价格较低。
加入Tris饱和酚能使蛋白质变性，令DNA与组织蛋白质分开，同时抑制DNase的作用，保护DNA免于降解。
随后加入的氯仿/异戊醇经过混匀和离心后，能使溶液分为上层水相和下层有机相。
由于DNA存在于水相，蛋白质等杂质存在于有机相，这样就能使DNA与其他杂质分开。
吸取上层水相后，加入无水乙醇能使DNA从溶液中沉淀下来，经过离心去除上清液就能得到DNA沉淀了。
可以再使用75%乙醇洗涤一次，去除残留的一些有机物，使DNA更纯。
最后等乙醇挥发干燥后，加入TE缓冲液就能得到理想的DNA样本。
2 Chelex-100法Chelex-100是一种由苯乙烯、二乙烯苯共聚体组成的化学树脂，可以螯合多价离子。
Chelex-100法提取DNA是一种快速方便的方法，但DNA模板的纯度比较低，不适合长期保存。
Chelex-100溶液与血液样品等混匀后，通过煮沸、离心等步骤，可以使样品中大部分蛋白质变性，金属离子被Chelex-100螯合，从而使样品上清液的DNA模板能用于后续反应。
3 膜吸附法常用硅胶膜作为吸附DNA的载体。
部分的商品化DNA提取试剂盒会采用这种方法。
提取的DNA纯度高，效果好，但试剂盒成本较高。
其原理是在高盐缓冲液条件下，硅胶膜会吸附DNA，经过数次缓冲液洗涤离心后，吸附在膜上的DNA已经很纯，这时再用适当体积的低盐TE缓冲液进行洗脱。
4 磁珠法经过特殊表面处理的磁珠，在缓冲液条件下对DNA有很强的吸附力。
部分的商品化DNA提取试剂盒会采用这种方法。
提取的DNA纯度高，效果好，但试剂盒成本较高。
其原理是在缓冲液条件下，磁珠能吸附DNA，通过使用磁力棒能使磁珠聚集，去除含杂质的上清液。
Chelex_100快速提取放线菌DNA作为PCR扩增模板
・研究报告・生物技术通报B I O TECHNOLOGY BULL ET I N2010年第2期Chelex 2100快速提取放线菌DNA作为PCR 扩增模板周双清 黄小龙 黄东益 胡新文 陈吉良(海南大学农学院,儋州571737) 摘 要: 旨在建立有效扩增16S r RNA 基因序列的放线菌DNA 快速提取的方法。
采用Chelex 2100法提取放线菌DNA,使用PCR 扩增16S r RNA 基因序列评价提取核酸的质量。
结果显示,Chelex 2100法能够在10m in 之内从放线菌中快速提取DNA,所提取的DNA 可以直接用于PCR 扩增反应,PCR 扩增产物电泳条带清晰,符合理论预期结果。
因此,Chelex 2100法提取放线菌DNA 可以作为16S r RNA 基因序列PCR 扩增的模板,该方法具有经济、简便、快速的特点,适合于放线菌菌株大规模地筛选和分类鉴定。
关键词: Chelex 2100 放线菌 DNA 提取 PCR 16S r RNAA Rapi d M ethod for Extracti n g DNA fro mActi n o mycetes by Chelex 2100Zhou Shuangqing Huang Xiaolong Huang Dongyi Hu Xinwen Chen Jiliang(Agrono m y College,Hainan U niversity,D anzhou 571737) Abs trac t: To establish a rap id method f or extracting DNA fr om actinomycetes,DNA was extracted fr om actinomycetes by Chelex 2100.The quality of the extracti on by 16S r RNA gene was evaluated with PCR technique .The PCR p r oduct of 16S r RNA gene was used as a mark frag ment .Results showed the Chlex 2100can quickly extract the DNA fr om actinomycetes about in 10m in .The DNA can be directly app lied t o the foll owing step 2PCR a mp lificati on as DNA te mp late .Electr ophoresis results of the PCR p r oducts was clear .There 2fore,Chelex 2100extracti on method could be an efficient and reliable method f or PCR detecti on and used in actinomycetes screening and identificati on rap idly .Key wo rd s: Chelex 2100 Actinomycetes DNA extracti on PCR 16S r RNA 收稿日期:2009211202基金项目:海南省高等学校博士生创新科研课题(Hx wby2008207)作者简介:周双清,女,硕士生,研究方向:应用微生物资源;E 2mail:annizhou23@1261com 通讯作者:黄小龙,博士,研究方向:微生物资源;E 2mail:hxl2012@近年来,16S r RNA 基因序列分析技术已广泛地应用于放线菌分类鉴定的研究中,16S r RNA 分子普遍存在于各种原核生物细胞中,其基因既存在高度保守区域,也存在局部的可变区。
Chelex-100法提取生物检材中的DNA
Chelex-100法提取生物检材中的DNA一、原理当检材较少时或者基因分型只需要少量的DNA时，可以用Chelex-100提取方法提取DNA。
Chelex-100是一种化学整合树脂，由苯乙烯、二乙烯苯共聚体组成。
含有成对的亚氨基二乙酸盐离子，整合多价金属离子，尤其是选择性整合二价离子，比普通离子交换剂具有更高的金属离子选择性和较强的结合力．能结合许多可能影响一步分析的其他外源物质。
通过离心除去Chelex-100颗粒，使这些与Chelex-100结合的物质与DNA分离，防止结合到Chelex中的抑制剂或杂质带到PCR反应中，影响下一步的DNA分析，并通过结合金属离子，防止DNA降解。
二、实验目的掌握各种法医学生物检材DNA提取方法。
三、仪器设备干热器、恒温水浴箱、高速离心机、离心管四、试剂Chelex-100法提取生物检材所需试剂的配制1．5％Chelex-100 （w/v）称取5克Chelex-100，加100ml灭菌纯水，放4℃保存。
2．10％SDS称取10克优级纯的SDS，加纯水到100ml溶解，室温保存。
3．5mg/ml PK酶（蛋白酶K）称取5mg PK酶，溶于1ml灭菌纯水中，－20℃保存。
4．1M DTT (二硫苏糖醇)称取154.3mg DTT加1ml灭菌纯水溶解，－20℃保存。
五、实验方法---Chelex-100法1. 全血1) 取3～10μl全血加到0.5ml离心管中，加人500μl纯水，剧烈振荡，室温下放置15分钟。
2) 13,000rpm离心3分钟，去上清，收集沉淀。
（必要时可用蒸馏水反复洗沉淀物，直至无色或血色素很少）。
3) 沉淀中加入200μl 5％Chelex-100溶液（5％Chelex-100为悬浊液，使用前要充分振摇，使Chelex-100颗粒悬浮），在振荡器上反复振荡，放入56℃保温30分钟以上。
4) 取出后振荡，100℃保温8分钟，振荡后，13,000rpm离心3分钟，上清用于PCR扩增，或放4℃保存备用。
DNA的提取方法.ppt
2、氯仿的作用？ 氯仿：克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。 最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。（酚易溶于氯 仿中）
3、用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加 少许异戊醇，为什么？ 异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇 可以降低表面张力，从而减少气泡产生。另外，异戊醇有 助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋 白相及下层有机溶剂相维持稳定。 4、用乙醇沉淀DNA时，为什么加入单价的阳离子？ 用乙醇沉淀DNA时，通常要在溶液中加入单价的阳离子， 如NaCl 或 NaAc，Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA 分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。
（3）软组织样品 ① 将组织于-20℃以下冷冻。 ② 用手术刀片刮取1~5g 组织.放入1.5ml 离心管中。 2. DNA 提取 （1）处理后的样品中加入200μl 悬浮好的5%Chelex-100 溶液（ 软组织检材同时还应加入10mg/ml 蛋白酶K 2~3μl）， （2）在56℃水浴中温浴30min 以上，震荡5~10s。 （3）100℃温浴8min 后，剧烈震荡5~10s。 （4）120000rpm 离心3min，以沉淀Chelex-100 颗粒，上清液可 用于PCR 反应。 注意事项： 1.Chelex-100 放置后会沉淀，使用前必须混匀。 2.Chelex-100 法提取DNA 煮沸非常关键，温度和时间要足够。 3.提取的DNA 应在短时间内使用。若放置时间较长，应充分混匀 再离心后，取上清液扩增。
斑迹样本（血滤纸或FTA）中DNA的提取： ①剪取适量斑迹样本（大小约3mm×3mm，血液 不宜超过6ul）放入0.5或1.5ml离心管中，加入 150ul裂解液及1.5ul 1mol/LDTT（视检材而定） ，涡旋振荡混匀后，95℃温浴30min，温浴后旋 涡振荡混匀； ★长期样本和难以裂解样本，将样本尽量剪碎并 95℃温浴45min，如水浸泡不脱色样本。 ★每次提取时使用的样本量不宜过多，否则获得 DNA样品的纯度和产率将受影响。这是因为起始 样本量大时裂解体系粘度过高将使磁珠不易从溶 液中磁吸出来。 ★如需要使用更多的起始样本量，可适当增加裂解 液的用量对体系进行稀释）
chelex100法口腔脱落细胞提取
chelex100法口腔脱落细胞提取【原创版】目录1.Chelex-100 法的概述2.口腔脱落细胞提取的意义3.Chelex-100 法在口腔脱落细胞提取中的应用4.Chelex-100 法的优势与局限性5.结论正文一、Chelex-100 法的概述Chelex-100 法是一种常用的细胞提取方法，其主要成分为聚乙二醇(PEG) 和氯化钠 (NaCl)，具有较高的细胞吸附和溶解能力。
这种方法在口腔脱落细胞提取领域得到了广泛应用，为研究口腔黏膜病变的发生机制提供了有效手段。
二、口腔脱落细胞提取的意义口腔脱落细胞提取是指从口腔黏膜表面脱落的细胞中提取相关生物组织或细胞成分，以便进行实验室检测和研究。
这种提取方法对于了解口腔黏膜病变的发生、发展及治疗具有重要意义。
三、Chelex-100 法在口腔脱落细胞提取中的应用Chelex-100 法在口腔脱落细胞提取中的应用主要包括以下几个步骤：首先，将采集到的口腔脱落细胞样本与 Chelex-100 法混合，使细胞被充分溶解；其次，通过离心等方法将细胞碎片、杂质等分离出去；最后，收集上清液，对提取的细胞进行实验室检测和分析。
四、Chelex-100 法的优势与局限性1.优势：（1）操作简便，提取效率较高；（2）对细胞损伤较小，能保持细胞结构和功能的完整性；（3）适用范围广泛，可用于多种口腔黏膜病变的细胞提取。
2.局限性：（1）提取过程中可能会损失部分细胞；（2）提取效果受样本质量、操作方法等因素影响较大；（3）需要与其他提取方法相互验证，以确保提取结果的准确性。
五、结论总之，Chelex-100 法作为一种有效的口腔脱落细胞提取方法，在口腔黏膜病变的研究中发挥着重要作用。
以Chelex100为介质抽提DNA解析
以Chelex 100为介质抽提DNA近年来，DNA的分析技术已广泛地应用于肿瘤学的研究中。
获取DNA 的传统方法是以新鲜、-70℃或液氮保存的标本为材料，通过蛋白酶K消化，酚、氯仿抽提而获取DNA。
1987年，Fey等［1］首先用NP40成功地从骨髓涂片中提取到较高分子量的DNA，用于Southern印迹分析。
国内的一些学者［2,3］也用相似的方法，从骨髓涂片中提取到DNA。
但这两种方法均需蛋白酶K消化，酚、氯仿抽提，乙醇沉淀等步骤，操作复杂，费时。
同时，需要在多个离心管之间转移，增加了标本间的交叉污染。
由于PCR技术对DNA样品的纯度和分子量的要求相对较低：对微量的DNA即可扩增，且只需待扩增的靶序列完整即可，不要求高分子量。
因此，部分降解的DNA均可作PCR检测。
由于PCR有极高的敏感度，需严格控制标本间的交叉污染，同时为了适应血液系统恶性肿瘤标本来源的特点，我们通过与常规酚、氯仿提取DNA进行比较，以了解以Chelex 100为介质提取DNA对PCR的影响。
一、材料和方法1.细胞：(1)细胞株：B-NHL细胞株-村林细胞。
(2)外周血有核细胞：由健康志愿者提供。
2.DNA获取率比较：(1)将不同培养瓶中已培养的村林细胞混合；A组取10份，5 ml/份；B组取10份，0.5ml/份。
(2)A组用酚、氯仿抽提DNA ：按Sambrook等［4］介绍的方法提取DNA。
(3)B组用Chelex 100为介质提取DNA：将已培养定量的村林细胞加入Eppendorf管中，加去离子水1ml，间歇振荡30 分钟。
15 000r/min离心5分钟，弃去上清液470 μl，加10% Chelex 100 170 μl，56℃温育30分钟。
超速振荡15秒，沸水浴8分钟，15 000 r/min 离心5分钟，上清液即为DNA模板［5］。
(4)DNA定量：在微量紫外分光光度计上分别测两种不同方法提取DNA的吸光度(A，曾称光密度OD)值，换算出DNA的浓度和获得量：DNA浓度(μg/ml)=OD×50×稀释倍数260DNA获得量(μg)=DNA浓度×DNA溶液体积 (5)统计学处理：采用两样本均数检验法进行检验。
DNA实验室常用的DNA提取方法有哪些？
DNA实验室常用的DNA提取方法有哪些？DNA实验室常用的DNA提取方法有Chelex100法、有机法、磁珠法、盐析法、NaOH法等，本文详细介绍这些方法。
(一)Chelex100法原理：Chelex100是一种螯合树脂，由苯乙烯、二乙烯苯共聚体组成，含有成对的亚氨基二乙酸盐离子，起着螯合基团作用，对多价金属离子有极强亲和力。
在低离子强度、碱性及100℃煮沸条件下，可以使细胞膜裂解，并使与DNA结合的蛋白质变性，DNA游离。
检材基质中一般含有大量金属离子，在低离子强度及加热条件下，金属离子可以辅助脱氧核糖核酸酶降解DNA，也可以抑制PCR 反应，所以在提取DNA时，加入Chelex100，螯合了金属离子，防止了DNA降解，提高了PCR扩增成功率。
方法：剪取适量血斑、精斑、汗斑、鼻涕斑、指甲、毛根、软组织等等生物检材，置于0.5ml离心管内，加入适量纯水，室温浸泡，13,000rpm离心5min，上清丢弃，管底留约20μl左右液体及检材基质，加入100-200μl 5%Chelex100(有时需加适量PK)56℃15min至数10小时不等，100℃8min，13,000rpm离心5mim，上清备用。
(二)有机法原理：有机法提取DNA一般是指用平衡酚(又叫饱和酚)、氯仿等按不同比例混合，采用不同方法提取DNA。
DNA易溶于水，不溶于有机溶剂，蛋白质分子表面带有亲水性基因，很容易进行水合作用，并在表面形成一层水化层，使蛋白质分子能够顺利地进入到水溶液中，形成稳定的胶体溶液。
在有机溶剂存在的情况下，破坏了蛋白质胶体溶液的稳定性，使蛋白质变性沉淀，离心后，有机溶剂于试管底层(有机相)，DNA继续稳定的存在于上层水相，蛋白质沉淀存在于两相之间。
水相中的DNA在大量冷无水乙醇及单价阳离子存在的情况下，水会溶于乙醇中，而DNA从水相中析出，沉淀，通过离心回收。
方法：剪取适量检材，置于0.5ml离心管内，清洗方法同用Chelex100法提取DNA，加入适量纯水及终浓度为100μg/ml PK，37℃-56℃孵育15min至数10小时，有时间隔一段时间补加适量PK →13,000rpm 5min → 吸上清于另一管 → 加入等体积平衡酚 → 振荡或颠倒彻底混匀 → 13,000rpm5min →吸上清水相于另一管，加入等体积1：1混合平衡酚：氯仿 → 振荡或颠倒彻底混匀 →13,000rpm 5min → 吸上清水相于另一管 →加入等体积氯仿 → 振荡或颠倒彻底混匀 →13,000rpm 5min → 吸上清水相于另一管 →加入2.5倍体积冷无水乙醇冷冻保存10min以上 →13,000rpm 5-10min → 弃上清 → 室温凉干或100℃ 5min烤干 → 加入10-20μl纯水 → 室温溶解或100℃5min帮助溶解 → 离心上清备用(三)磁珠法原理：(异)硫氰酸胍(GuSCN)是强烈蛋白变性剂，不破坏蛋白质一级结构，能破坏细胞膜及核膜蛋白，并使核酸酶失活，释放DNA。
chelex100法口腔脱落细胞提取
chelex100法口腔脱落细胞提取摘要：1.介绍Chelex 100 法口腔脱落细胞提取技术2.阐述Chelex 100 法的优势3.描述Chelex 100 法在口腔脱落细胞提取中的应用4.总结Chelex 100 法的前景和局限性正文：一、介绍Chelex 100 法口腔脱落细胞提取技术口腔脱落细胞提取技术是研究口腔黏膜病变的重要手段之一。
近年来，随着细胞学和分子生物学技术的发展，口腔脱落细胞提取技术在口腔疾病诊断、预防和治疗方面发挥着越来越重要的作用。
其中，Chelex 100 法作为一种高效、简便的口腔脱落细胞提取技术，在口腔医学领域得到了广泛的应用。
二、阐述Chelex 100 法的优势1.高效：Chelex 100 法提取口腔脱落细胞的效率较高，可以快速获得大量的细胞样本，为后续实验研究提供充足的材料。
2.简便：采用Chelex 100 法提取口腔脱落细胞操作简单，不需要复杂的实验设备和专业技能，适合在临床实验室中推广应用。
3.细胞形态保持完好：使用Chelex 100 法提取的口腔脱落细胞形态完整，有利于进行后续的细胞学和分子生物学实验。
4.提取液无污染：Chelex 100 法提取的口腔脱落细胞液中杂质较少，有利于后续实验结果的准确性。
三、描述Chelex 100 法在口腔脱落细胞提取中的应用1.口腔黏膜病变的诊断：通过Chelex 100 法提取口腔脱落细胞，可以观察细胞形态和结构变化，从而为口腔黏膜病变的诊断提供依据。
2.口腔疾病病因研究：通过Chelex 100 法提取口腔脱落细胞，可以研究口腔疾病的病因和发病机制，为预防和治疗提供理论依据。
3.口腔疾病治疗效果评价：通过Chelex 100 法提取口腔脱落细胞，可以评价口腔疾病治疗效果，为临床治疗提供参考。
四、总结Chelex 100 法的前景和局限性1.前景：随着口腔医学研究的深入，Chelex 100 法在口腔脱落细胞提取领域的应用前景广阔，有望为口腔疾病的诊断、预防和治疗提供更加有效的手段。
chelex100法口腔脱落细胞提取
chelex100法口腔脱落细胞提取（最新版）目录1.介绍 Chelex 100 法口腔脱落细胞提取技术2.阐述 Chelex 100 法的优势与应用3.说明提取过程的注意事项4.总结 Chelex 100 法在口腔脱落细胞提取中的重要性正文一、介绍 Chelex 100 法口腔脱落细胞提取技术口腔脱落细胞提取技术在医学研究中具有重要应用，特别是在口腔癌的早期诊断、预后评估及疾病监测方面。
近年来，Chelex 100 法作为一种高效、安全的口腔脱落细胞提取技术，得到了广泛关注。
二、阐述 Chelex 100 法的优势与应用1.优势（1）操作简便：Chelex 100 法采用口腔刷取样，操作过程简单，便于推广和普及。
（2）提取效率高：该方法能够有效提取口腔上皮细胞，且细胞形态完整，便于后续实验分析。
（3）安全性好：与其他提取方法相比，Chelex 100 法对口腔黏膜的刺激较小，降低了受试者的不适感。
2.应用（1）口腔癌筛查：Chelex 100 法可用于早期筛查口腔癌，提高口腔癌的早期诊断率。
（2）疾病监测：通过定期进行口腔脱落细胞提取，可实时监测口腔黏膜细胞的变化，为疾病治疗提供依据。
三、说明提取过程的注意事项1.取样前应充分告知受试者，以取得其知情同意。
2.操作过程中要确保口腔刷的清洁，避免细菌污染。
3.提取细胞后，要及时进行实验分析，以保证细胞形态和活力。
4.对提取的细胞进行实验时，要严格遵循实验规程，确保实验结果的可靠性。
四、总结 Chelex 100 法在口腔脱落细胞提取中的重要性综上所述，Chelex 100 法在口腔脱落细胞提取方面具有明显优势，为口腔癌的早期诊断、预后评估及疾病监测提供了有力支持。
chelex100法口腔脱落细胞提取
chelex100法口腔脱落细胞提取摘要：I.引言- 简要介绍chelex100 法口腔脱落细胞提取II.chelex100 法的原理- 口腔脱落细胞的收集- chelex100 的作用- DNA 的提取过程III.chelex100 法的操作步骤- 准备工作- 具体操作步骤IV.chelex100 法的优点与局限性- 优点- 局限性V.总结- 回顾chelex100 法口腔脱落细胞提取的主要内容正文：I.引言口腔脱落细胞提取是一种常见的生物样本收集方法，通过从口腔黏膜上采集脱落细胞，可以用于DNA 检测、基因分析等研究。
其中，chelex100 法作为一种高效的提取方法，得到了广泛的应用。
本文将详细介绍chelex100 法口腔脱落细胞提取的原理、操作步骤及优缺点。
II.chelex100 法的原理为了更好地理解chelex100 法，我们首先需要了解口腔脱落细胞的收集和DNA 提取过程。
1.口腔脱落细胞的收集口腔脱落细胞是指从口腔黏膜上自然脱落的细胞，可以通过简单的擦拭或漱口等方式收集。
这些细胞包含了大量的DNA，可以用于基因分析等研究。
2.chelex100 的作用chelex100 是一种具有高度交联结构的聚合物，具有良好的DNA 结合能力。
在chelex100 法中，chelex100 能与DNA 结合，从而使DNA 从细胞中释放出来。
3.DNA 的提取过程在chelex100 法中，首先将收集的口腔脱落细胞裂解，然后通过离心、洗涤等步骤，将细胞中的DNA 与chelex100 结合。
最后，通过盐浓度梯度、洗涤等步骤，将DNA 从chelex100 上释放出来，从而完成DNA 提取。
III.chelex100 法的操作步骤1.准备工作- 准备收集口腔脱落细胞的器械和试剂- 准备chelex100 溶液2.具体操作步骤- 收集口腔脱落细胞- 将收集的细胞与chelex100 混合，孵育一段时间- 离心，收集细胞裂解物和chelex100 复合物- 用洗涤液洗涤细胞裂解物和chelex100 复合物- 通过盐浓度梯度，使DNA 从chelex100 上释放出来- 收集释放出的DNA，进行后续分析IV.chelex100 法的优点与局限性1.优点- chelex100 法操作简便，提取效率高- 提取的DNA 纯度高，适合于后续分析2.局限性- chelex100 法可能对某些样本的提取效果不佳- 需要严格控制实验条件，以保证提取效果V.总结综上所述，chelex100 法是一种高效的口腔脱落细胞提取方法，具有操作简便、提取效率高等优点。
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类型：1% 3,500 4–14/0–14 0.4 0.65钠盐，铁盐
应用：用于缓冲液和离子试剂的超纯化。可清除金属污染物而不改变非金属离子的浓度。铁盐形式用于草甘膦浓缩。
Chelex-100法提取DNA
Chelex100能有效除去非核酸有机物，主要用于提取全血或血痕、精液或精斑、混合斑、毛发、培养细胞等。
Chelex-100是一种由苯乙烯、二乙烯苯共聚体组成的化学螯合树脂，含有成对的亚氨基二乙酸盐离子，可螯合多价离子，特别是对高价金属离子有很高的亲和力和螯合作用。在低离子强度、碱性及煮沸的条件下，可以使细胞膜破裂，并使蛋白质变性，通过离心除去