髋关节骨性关节炎软骨组织Ⅱ型胶原α1链和激活T细胞核因子1的表达水平及意义
骨标志物三项临床解读
骨标志物三项通常指的是总的1型胶原氨基酸延长肽、骨钙素和β-胶原特殊序列。
以下是它们的临床解读：
1.总的1型胶原氨基酸延长肽（TP1NP）：该标志物反映了成骨细胞的合成骨胶原的速度，是评估骨形成状态的重要指标。
其浓度的变化可以反
映成骨细胞的活跃程度和骨形成的速率。
2.骨钙素（OSTEOC）：骨钙素是反映骨形成代谢的活跃程度的指标，能够鉴别骨质疏松的不同类型，如高代谢型和低代谢型。
通过骨钙素的指标，
可以区分出不同类型的骨质疏松情况，对治疗非常有意义。
3.β-胶原特殊序列（β-CROSSL）：该标志物与破骨细胞活性相关，是评估骨吸收状态的重要指标。
其浓度的变化可以反映破骨细胞的活跃程度和
骨吸收的速率。
在临床上，通过对这三项指标的检测和分析，可以评估患者的骨代谢状态，判断是否存在骨质疏松及其类型，从而指导治疗方案的制定和调整。
需要注意的是，不同医院和实验室的检测方法和正常范围可能存在差异，因此具体解读应结合患者的临床情况和实验室检查结果进行综合判断。
ⅰ型胶原羧基端交联肽(ctxⅰ) 骨代谢意义
ⅰ型胶原羧基端交联肽(ctxⅰ) 骨代谢意义
ⅰ型胶原羧基端交联肽（ctxⅰ）是一种血清标志物，用于评
估骨代谢活动和骨重建的速度。
它是通过血液中骨重建过程中的骨吸收阶段释放出来的溶解性蛋白质产物。
骨是一个活动的组织，不断经历骨吸收和骨重建过程。
在骨吸收阶段，破坏骨组织的细胞释放一些酶和蛋白质，其中包括ⅰ型胶原羧基端交联肽。
这些物质进入血液循环后，可以用作评估骨重建过程中骨吸收的程度和速度的指标。
在骨代谢紊乱或骨疾病中，如骨质疏松症、骨转移瘤等，骨吸收通常会增加。
因此，通过测量血液中的ctxⅰ水平，可以评
估骨吸收的速度和程度，帮助医生了解患者的骨健康状况，并做出相应的治疗决策。
此外，ctxⅰ的测量结果还可以用于监测骨质疏松症治疗的疗效。
如果治疗有效，骨吸收过程会减少，ctxⅰ水平也会降低。
总之，ⅰ型胶原羧基端交联肽作为一种血清标志物，在骨代谢疾病的诊断和治疗中具有重要的意义。
它可以帮助医生评估骨吸收的程度和速度，监测治疗的疗效，为患者提供更好的骨健康管理。
二型免疫细胞（Th2
二型免疫细胞（Th2/ILC2）在肺部过敏性炎症中作用机制的研究进展张亚光1 孙兵2 （1.西安交通大学第一附属医院Med -X 研究院免疫代谢性疾病研究所，西安 710049；2.中国科学院分子细胞科学卓越创新中心，上海 200031）中图分类号 R392 文献标志码 A 文章编号 1000-484X （2024）01-0011-10［摘要］ 二型炎症反应主要由二型免疫细胞和二型细胞因子介导，例如二型辅助型T 细胞（Th2细胞）和二型先天样淋巴细胞（ILC2细胞），以及IL -4、IL -5、IL -13等。
二型炎症反应在体液免疫、抗寄生虫、中和毒素、组织损伤修复和再生等过程中发挥重要调控作用，但其也有促进疾病发生的作用。
目前认为二型炎症反应主要在皮肤、呼吸道、消化道和脂肪等组织中发挥生理和病理性作用，是导致过敏性疾病发生的主要炎症反应类型。
呼吸道由于其特殊的免疫微环境，是二型炎症高发区域，涉及的疾病包括慢性鼻窦炎、过敏性鼻炎、过敏性哮喘、过敏性支气管肺曲霉菌病、嗜酸性粒细胞增多的慢性阻塞性肺疾病等。
本文将重点综述二型炎症反应中的关键免疫细胞Th2和ILC2细胞在肺部过敏性炎症中的最新研究进展和过敏性炎症相关疾病靶向治疗的情况。
［关键词］ 二型辅助型T 细胞；二型先天样淋巴细胞；肺部过敏性炎症Progress on mechanism of type Ⅱ immune cells （Th2/ILC2） in allergic pulmonary inflammationZHANG Yaguang 1， SUN Bing 2. 1. Med -X Institute ， Center for Immunological and Metabolic Diseases ， the First Affiliated Hospital of Xi'an JiaoTong University ， Xi'an 710049， China ； 2. Center for Excellence in Molecular Cell Science ， Chinese Academy of Sciences ， Shanghai 200031， China［Abstract ］ The type Ⅱinflammatory response is primarily mediated by type 2 immune cells and cytokines ， such as helper 2 cells （Th2） and group 2 innate lymphoid cells （ILC2）， along with IL -4， IL -5 and IL -13. This response plays crucial roles in humoral immunity ， parasite defense ， toxin neutralization ， tissue damage repair and regeneration. However ， type -Ⅱ immune response can alsocontribute to the development of diseases. Currently ， type Ⅱ inflammation is recognized to have physiological and pathological impli‐doi ：10.3969/j.issn.1000-484X.2024.01.002张亚光，西安交通大学第一附属Med -X 研究院特聘研究员，博士生导师，西安交通大学青年拔尖人才。
骨标志物CTX-II、CTX-I检测项目简介-番禺
骨标志物(尿II型胶原C端肽、尿I型胶原C端肽)检测项目简介1、骨标志物推荐指标介绍II型胶原C端肽(CTX-II)软骨结构完整性的损伤是骨关节炎和类风湿关节炎的主要组织学表现。
II 型胶原蛋白是软骨的主要有机成分。
软骨降解后，II型胶原蛋白的片段(CTX-II)释放进入循环系统，随后排入尿中。
CTX-II是骨关节炎患者病情程度的有效指标之一[1]，可作为骨关节炎诊断的标志物[2]。
检测尿中CTX-II可用于鉴别高软骨转换风险的骨关节炎患者，而且是药物治疗疗效的最敏感指标[3]。
[1]Garnero P, Piperno M, Gineyts E, Christgau S, Delmas PD, Vignon E. Cross sectional evaluation of biochemical markers of bone, cartilage, and synovial tissue metabolism in patients with knee osteoarthritis: relations with disease activity and joint damage. Ann Rheum Dis. (2001); 60: 619-26.[2]Jung M, Christgau S, Lukoschek M, Henriksen DB, Richter W. Elevated urinary concentration of collagen type II C-telopeptide fragments in patients with osteoarthritis. Pathobiology. (2004); 71(2): 70-6.[3] Mazières B, Garnero P, Gueguen A, Abbal M, Berdah L, Freiburghaus C, Lequesne M, Nguyen M, Salles J-P, Vignon E, Dougados M. Molecular markers of cartilage breakdown and synovitis are strong independent predictors of structural progression of hip osteoarthritis (OA). the ECHODIAH cohort. ACR 2003.I型胶原C端肽(CTX-I)I型胶原是人体最丰富的胶原蛋白形式，是骨中唯一的胶原成分[1]，占骨基质的90％以上[2]。
M1巨噬细胞 标志基因
M1巨噬细胞标志基因M1巨噬细胞是免疫系统中的重要成员，其表现出一系列特定的标志基因。
本文将对M1巨噬细胞的标志基因进行介绍，以增进读者对该细胞类型的了解。
M1巨噬细胞是一类具有免疫活性的巨噬细胞，主要参与机体的炎症反应和细胞免疫。
在激发因子的刺激下，M1巨噬细胞会表达一系列特定的标志基因，这些基因的表达可以用来鉴定和描述M1巨噬细胞的功能和状态。
一、M1巨噬细胞的标志基因1. IL-1β（白细胞介素1β）：IL-1β是一种重要的炎症介质，能够刺激炎症反应的发生和持续。
M1巨噬细胞在活化过程中会产生大量的IL-1β，从而促进炎症反应的进行。
2. TNF-α（肿瘤坏死因子α）：TNF-α是一种重要的细胞因子，具有多种生物学功能。
M1巨噬细胞可以通过产生TNF-α来诱导炎症反应，并参与细胞免疫的调控。
3. iNOS（一氧化氮合酶）：iNOS是一种重要的酶类分子，能够催化一氧化氮的生成。
M1巨噬细胞在激活状态下会表达iNOS，从而产生大量的一氧化氮，进而参与对细胞的免疫杀伤作用。
4. CXCL10（趋化因子10）：CXCL10是一种趋化因子，能够引导免疫细胞向炎症部位迁移。
M1巨噬细胞在激活状态下会产生大量的CXCL10，从而吸引其他免疫细胞聚集在炎症部位。
5. IL-6（白细胞介素6）：IL-6是一种重要的细胞因子，能够调节炎症反应和免疫应答。
M1巨噬细胞在活化过程中会产生IL-6，从而参与调控免疫应答的进行。
二、M1巨噬细胞的功能和意义M1巨噬细胞在机体的免疫应答中扮演着重要角色。
其标志基因的表达使其具有以下功能和意义：1. 抗感染作用：M1巨噬细胞通过产生一系列炎症介质和趋化因子，能够引导其他免疫细胞迁移到感染部位，并参与对病原微生物的清除。
2. 免疫调节作用：M1巨噬细胞产生的细胞因子和趋化因子可以调节免疫细胞的活化状态和功能，从而参与免疫应答的调控。
3. 炎症反应调控：M1巨噬细胞通过产生炎症介质和趋化因子，能够调节炎症反应的过程和强度，从而维持炎症反应的平衡。
骨标志物CTX-II、CTX-I检测项目简介-番禺
骨标志物(尿II型胶原C端肽、尿I型胶原C端肽)检测项目简介1、骨标志物推荐指标介绍II型胶原C端肽(CTX-II)软骨结构完整性的损伤是骨关节炎和类风湿关节炎的主要组织学表现。
II 型胶原蛋白是软骨的主要有机成分。
软骨降解后，II型胶原蛋白的片段(CTX-II)释放进入循环系统，随后排入尿中。
CTX-II是骨关节炎患者病情程度的有效指标之一[1]，可作为骨关节炎诊断的标志物[2]。
检测尿中CTX-II可用于鉴别高软骨转换风险的骨关节炎患者，而且是药物治疗疗效的最敏感指标[3]。
[1]Garnero P, Piperno M, Gineyts E, Christgau S, Delmas PD, Vignon E. Cross sectional evaluation of biochemical markers of bone, cartilage, and synovial tissue metabolism in patients with knee osteoarthritis: relations with disease activity and joint damage. Ann Rheum Dis. (2001); 60: 619-26.[2]Jung M, Christgau S, Lukoschek M, Henriksen DB, Richter W. Elevated urinary concentration of collagen type II C-telopeptide fragments in patients with osteoarthritis. Pathobiology. (2004); 71(2): 70-6.[3] Mazières B, Garnero P, Gueguen A, Abbal M, Berdah L, Freiburghaus C, Lequesne M, Nguyen M, Salles J-P, Vignon E, Dougados M. Molecular markers of cartilage breakdown and synovitis are strong independent predictors of structural progression of hip osteoarthritis (OA). the ECHODIAH cohort. ACR 2003.I型胶原C端肽(CTX-I)I型胶原是人体最丰富的胶原蛋白形式，是骨中唯一的胶原成分[1]，占骨基质的90％以上[2]。
β-catenin与CD 44在骨关节炎关节软骨的表达及其意义的开题报告
β-catenin与CD 44在骨关节炎关节软骨的表达及其意义
的开题报告
关节软骨的削弱和破坏是骨关节炎的主要特征之一，而β-catenin和CD44是与
骨关节炎发生和发展密切相关的两种分子。
β-catenin是一种重要的细胞黏附分子，参与细胞间连接和信号传导。
很多研究
表明，在骨关节炎发展过程中，β-catenin的表达和激活都有所增加。
这可能通过增强软骨细胞的分化和活化，以及刺激软骨细胞内前炎性细胞因子的释放来导致软骨炎症
反应。
CD44是一种跨膜糖蛋白，在体内广泛存在。
CD44通过介导基底细胞和软骨细胞之间的作用，参与软骨细胞的分化、黏附和迁移。
在骨关节炎中，CD44的表达水平也有所提高。
研究表明，CD44与炎症反应和细胞凋亡相关，并且可能是骨关节炎中软骨降解的一个重要因素。
然而，β-catenin和CD44在骨关节炎关节软骨中的相互作用还需要进一步研究。
本研究旨在探讨β-catenin和CD44在骨关节炎关节软骨中的表达，并研究它们的相互
作用对软骨细胞的影响。
同时，研究还将评估β-catenin和CD44在骨关节炎病理生理
学上的作用，以期更好地理解骨关节炎的发展机制及寻求治疗策略。
成骨细胞在骨性关节中发挥的作用
成骨细胞在骨性关节中发挥的作用作者：万云鹏来源：《健康必读·下旬刊》2020年第05期【摘要】现在普遍认为骨性关节炎（osteoarthritis，OA）的发病不是单一的因素，而是一个整体的过程，涉及所有受到影响的关节结构，最终导致关节软骨的退化。
其中关节软骨的退变以及软骨下骨的骨重塑和硬化是骨性关节炎发病最为关键的因素。
软骨下骨的异常重塑以及硬化会引发其自身的应力改变，随之影响覆盖其表面的关节软骨的稳定，使其发生病变。
成骨细胞在软骨下骨的重塑以及硬化中发挥了及其重要的功能。
故研究成骨细胞对于骨性关节炎具有重要的意义。
Abstract It is now widely accepted that the onset of osteoarthritis （OA） is not a single factor，but a holistic process involving all affected joint structures that ultimately lead to the degradation of articular cartilage. Degeneration of articular cartilage and bone remodeling and sclerosis of subchondral bone are the most critical factors in the pathogenesis of osteoarthritis. Abnormal remodeling of the subchondral bone and hardening cause its own stress changes， which in turn affect the stability of the articular cartilage covering its surface， causing it to develop lesions. Osteoblasts play an important role in the remodeling and hardening of subchondral bone. Therefore， the study of osteoblasts has important implications for osteoarthritis.軟骨下骨的病变对骨性关节炎的影响骨性关节炎是一种退行性的关节病变，通常表现为关节软骨病变，非正常的软骨下骨骨重塑以及硬化，骨赘的形成以及滑膜组织的无菌性炎症[1]。
细胞因子与骨关节炎
细胞因子与骨关节炎李忆农细胞因子主要是指活化的免疫细胞和某些基质细胞分泌的一类非特异调节免疫应答和介导炎症反应的小分子蛋白质，包括由淋巴细胞产生的淋巴因子，单核-巨噬细胞产生的单核因子，及其他细胞因子，如趋化因子、粘附因子、生长因子等。
目前已阐明的细胞因子已达50多种，其中经实验或临床发现与骨关节炎(OA)有关的近十种，现就其主要种类分述如下。
1 白细胞介素-1(IL-1)及IL-1受体拮抗蛋白(IL-1ra)IL-1有两种，分别称为IL-1α和IL-1β，共同作用于同一个受体，发挥类似的生物活性，但其氨基酸序列仅1/4有同源性。
IL-1在关节软骨的代谢中有多方面的作用［1］，一方面促进透明软骨型胶原的降解，一方面促进纤维软骨型胶原的增生，同时还抑制蛋白聚糖的合成，促进其分解，是介导软骨破坏最直接的细胞因子。
IL-1与OA的关系最先由Herman和Sabiston发现［1］，他们从OA膝关节来源的滑膜中分离出一种软骨分解因子，后来证实为IL-1。
OA滑膜免疫组化染色进一步证实OA滑膜中有显著数量的IL-1存在。
而且OA滑膜的炎症变化可被IL-1很好地诱导出来，其特征为伴单核细胞浸润和纤维化增加的慢性滑膜炎。
OA软骨组织中亦有大量IL-1分布。
免疫组化显示，在正常人软骨细胞中，IL-1仅存在于上层软骨的个别细胞中，但是在OA软骨的上半部分细胞及细胞外基质均可见强阳性的IL-1α和IL-1β。
OA软骨中IL-1介导金属蛋白酶组织抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinases-1，TIMP-1)与金属蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)之间失衡［1］，是其引起软骨分解的主要机制。
体外实验证实，IL-1促MMPs合成，抑制TIMP-1产生，同时通过胞浆素原激活物(plasmomitogen activator,PA)的分泌，促进MMPs的活化，并抑制胞浆素原激活物抑制物(PAI-1)的合成［1-3］，导致OA中胞浆素和MMPs的激活，进一步加强对软骨的破坏作用。
髋关节骨性关节炎软骨组织Ⅱ型胶原α1链和激活T细胞核因子1的表达水平及意义
中国老年学杂志 2013 年 2 月第 33 卷
髋关节骨性关节炎软骨组织Ⅱ型胶原 α1 链和激活 T 细胞核因子 1 的 表达水平及意义
芦北极 王贵清 刘春磊 （ 暨南大学附属清远医院骨科，广东 清远关节炎软骨组织中Ⅱ型胶原 α1 链（ Col2α1） 和激活 T 细胞核因子 1（ NFAT1） 的表达水平及临床意义。方法 收集 36 例髋关节骨性关节炎患者的软骨组织样本，采用 RT-PCR 法检测 Col2α1 和 NFAT1 的 mRNA 水平，Western 印迹法检测样本中两指标的蛋 白水平； 分析不同病理参数的 Col2α1 和 NFAT1 的 mRNA 和蛋白水平。并选取同期的 40 例股骨颈骨折患者作对照。结果 髋关节骨性关节炎的 Col2α1 和 NFAT1 的 mRNA 和蛋白水平均高于股骨颈骨折患者，除 NFAT1 的 mRNA 水平（ P ＜ 0. 05） ，其余均为 P ＜ 0. 01； 髋关节骨性关节炎两指标的 mRNA 和蛋白水平在年龄、类型、病程、关节炎严重性指数评分（ ISOA） 、K-L 放射线分级及严重程度上有差异（ P ＜ 0. 05 或 P ＜ 0. 01） ，且在性别和侧 别上无统计学差异（ P ＞ 0. 05） 。结论 髋关节骨性关节炎软骨组织中 Col2α1 和 NFAT1 的表达水平上调，且在多数病理参数分布上有差异，提示两 者在骨性关节炎软骨组织退变中起作用，可用于该疾病的诊断和治疗方案制订。
〔关键词〕 髋关节； 骨性关节炎 〔中图分类号〕 R68 〔文献标识码〕 A 〔文章编号〕 1005-9202（ 2013） 03-0548-03； doi： 10. 3969 / j. issn. 1005-9202. 2013. 03. 025
髋关节骨性关节炎是一种高致残疾病，主要特征是关节功 能减退并伴有疼痛〔1〕。骨关节炎的主要病理表现为软骨组织 退变和磨损，软骨损伤后很难修复〔2〕，因此加快软骨组织修复 对治疗髋关节骨性关节炎意义重大。Ⅱ型胶原是关节软骨基 质胶原，由 3 条相同的Ⅱ型胶原 α1 链（ Col2α1） 组成，是软骨组 织修复的基础〔3〕。关节炎是一种炎症因子介导的免疫反应〔4〕。 激活 T 细胞核因子 1（ NFAT1） 是一种与炎症相关的基因，可在 T 细胞及其他免疫细胞中表达〔5〕，因此推测其水平与关节炎的 发生发展有关。目前，对髋关节骨性关节炎软骨组织中 Col2α1 和 NFAT1 的研究较少。因此本研究分析髋关节骨性关节炎的 Col2α1 和 NFAT1 表达水平及临床意义，为防治髋关节骨性关 节炎提供依据。
巨噬细胞极化在骨关节炎中的作用
巨噬细胞极化在骨关节炎中的作用骨关节炎是一种常见的慢性关节疾病，主要表现为关节炎、关节骨质疏松和软骨破坏。
巨噬细胞是免疫系统中的重要成分，它们在骨关节炎的发病过程中起着重要的作用。
本文将探讨巨噬细胞极化在骨关节炎中的作用。
巨噬细胞是免疫系统中最重要的抗原呈递细胞，它们具有吞噬和杀伤微生物的能力。
在骨关节炎中，巨噬细胞的极化状态发生改变，从而影响炎症反应和软骨破坏的进程。
巨噬细胞的极化状态可以分为两种类型：M1型和M2型。
M1型巨噬细胞主要分泌促炎因子，如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）和白细胞介素-6（IL-6），它们可以引起炎症反应和软骨破坏。
M2型巨噬细胞则主要分泌抗炎因子，如白细胞介素-10（IL-10）和转化生长因子-β（TGF-β），它们可以抑制炎症反应和促进软骨修复。
研究发现，在骨关节炎患者的关节组织中，M1型巨噬细胞的数量明显增加，而M2型巨噬细胞的数量减少。
这种巨噬细胞极化失衡的状态导致炎症反应过度激活，进而引起关节软骨的破坏。
巨噬细胞极化的失衡主要是由于细胞外环境的改变所致。
研究表明，炎症因子和细胞因子的过度产生会导致巨噬细胞向M1型极化，而生长因子和抗炎因子的不足则会导致巨噬细胞向M2型极化。
此外，炎症反应还可以激活巨噬细胞的Toll样受体，进一步促进M1型巨噬细胞的极化。
M1型巨噬细胞产生的促炎因子可以刺激炎症反应和软骨破坏。
TNF-α和IL-1β可以促进炎症细胞的浸润和激活，进而引起关节炎。
IL-6可以促进骨吸收细胞的形成和活化，导致关节骨质疏松。
这些促炎因子还可以刺激软骨细胞产生炎症介质，如羟基脯氨酸和前列腺素E2，进一步破坏软骨组织。
相反，M2型巨噬细胞产生的抗炎因子可以抑制炎症反应和软骨破坏。
IL-10和TGF-β可以抑制炎症细胞的浸润和激活，减轻关节炎的症状。
此外，TGF-β还可以刺激软骨细胞产生胶原蛋白和蛋白多糖，促进软骨修复。
因此，调节巨噬细胞的极化状态可能是治疗骨关节炎的一个新的策略。
骨关节炎关节软骨细胞基因表达谱的芯片研究
骨关节炎关节软骨细胞基因表达谱的芯片研究目的通过对于骨关节炎关节软骨细胞基因表达谱的芯片研究，为我国骨关节炎疾病治疗水平的提升奠定基础。
方法选取我院2013年收治的3例骨关节炎患者，将患有关节置换术的骨关节患者，当做骨关节组（第一组）、类风湿关节炎患者当做RA组（第二组）、没有关节炎有创伤的患者，当做是创伤组（第三组），进行软骨标本、细胞培养，利用微阵列差异性基因分析软件，分析骨关节组，分别与剩下两组软骨细胞的差异性，以及差异性基因的性质。
结果一、三组的差异基因有133个，包含的上调和下调分别是65个、68个；一、二组的差异基因有293个，包含的上调和下调分别是106个、187个。
第一组与其余两组的差异性基因功能，属于生物调节等，差异性基因的通路，符合统计学意义P＜0.05的包括细胞周期通路、一氧化氮通路等。
但同时三组配对的差异性基因，既存在差异性，同时也存在相互性。
结论从差异性基因的多角度入手分析其骨关节炎的生物信息，为以后骨关节，从基因表达方面进行治疗，有了实质性的进展。
标签：骨关节炎；关节软骨细胞；基因表达谱芯片技术骨关节炎是一种常见的疾病，但是治疗的过程和效果却没有达到理想状态，主要原因是由于该种疾病的发病原因多样，且病情程度不同，给治疗带影响；而采用基本表达谱芯片技术，对于患者的关节软骨细胞，与对照样品和芯片进行杂交，使其产生差距性基因，通过对于差异性基因的功能、通路等生物学信息特征进行分析，从而更好的检测基因表达水平的变化，有效的识别多基因，参与的杂交疾病；对此加强此方面的研究，更能确定其骨关节炎的发病原理，为以后骨关节疾病的根治提供依据。
1资料与方法1.1一般资料选取我院2013年收治的3例骨关节炎患者，将患有关节置换术的骨关节患者、类风湿关节炎患者、没有关节炎有创伤的患者；男性1例，女性2例，年龄分别是64岁、56岁和45岁；在患者同意之下，按照各个符合分类标准的三组患者，分别分为骨关节组（第一组）、RA组（第二组）以及创伤组（第三组）作为研究的对象。
软骨细胞标记基因
软骨细胞标记基因
软骨细胞的标记基因主要包括Sox9、Ⅱ型胶原蛋白（Col2al）和蛋白聚糖。
这些基因在软骨细胞的生长和分化过程中起着重要作用。
1. Sox9：这是一种转录因子，是软骨细胞的重要标记基因。
它参与软骨细胞的分化和增殖，以及软骨基质的形成和维持。
2. Ⅱ型胶原蛋白（Col2al）：这是软骨细胞分泌的一种主要蛋白质，是软骨基质的主要成分。
Col2al基因编码Ⅱ型前胶原蛋白，它是Ⅱ型胶原蛋白的前体，对于维持软骨细胞的形态和功能至关重要。
3. 蛋白聚糖：这也是软骨细胞分泌的一种重要成分，与Ⅱ型胶原蛋白共同构成软骨基质。
蛋白聚糖在软骨细胞的生长和分化过程中起着关键作用，对于维持软骨组织的弹性和稳定性具有重要意义。
总的来说，这些标记基因的表达水平和活性可以反映软骨细胞的生长和分化状态，为科研和临床工作中研究软骨组织生长和退行性疾病提供了重要的参考。
以上内容仅供参考，如需更多信息，建议查阅相关文献或咨询相关学者。
巨噬细胞极化在骨关节炎中的作用
巨噬细胞极化在骨关节炎中的作用骨关节炎是一种常见的退行性关节疾病，其主要特征是关节软骨的损伤和破坏，导致关节疼痛、僵硬和功能障碍。
巨噬细胞是一种重要的免疫细胞，其在骨关节炎中的作用备受关注。
最近的研究表明，巨噬细胞极化在骨关节炎的发生和发展中起着重要作用。
巨噬细胞是一种具有吞噬和抗原呈递功能的免疫细胞，其在骨关节炎中的作用主要表现为两个方面：一是参与炎症反应，二是参与软骨损伤和修复。
在骨关节炎的早期阶段，巨噬细胞主要参与炎症反应。
当关节受到损伤或感染时，巨噬细胞会被激活并释放多种炎症因子，如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）和白细胞介素-6（IL-6）等。
这些炎症因子会引起关节周围组织的炎症反应，导致关节肿胀、疼痛和红肿等症状。
此外，炎症因子还会促进软骨细胞的凋亡和基质分解，加速软骨的损伤和破坏。
在骨关节炎的晚期阶段，巨噬细胞主要参与软骨损伤和修复。
当软骨受到损伤时，巨噬细胞会被激活并分泌多种生长因子和细胞因子，如转化生长因子-β（TGF-β）、骨形态发生蛋白-2（BMP-2）和白细胞介素-10（IL-10）等。
这些生长因子和细胞因子能够促进软骨细胞的增殖和分化，促进软骨基质的合成和修复。
此外，巨噬细胞还能够分泌一些抗炎因子，如白细胞介素-4（IL-4）和白细胞介素-13（IL-13）等，抑制炎症反应，减轻关节疼痛和肿胀。
巨噬细胞的极化是其在骨关节炎中发挥作用的重要机制之一。
巨噬细胞的极化是指其在不同的微环境下表现出不同的功能和表型。
目前已经发现，巨噬细胞可以分为M1型和M2型两种亚型。
M1型巨噬细胞主要参与炎症反应，分泌多种炎症因子和细胞毒素，促进炎症反应的发生和发展。
M2型巨噬细胞主要参与组织修复和再生，分泌多种生长因子和细胞因子，促进组织的修复和再生。
在骨关节炎中，M1型巨噬细胞的数量明显增加，而M2型巨噬细胞的数量明显减少。
这种失衡会导致炎症反应的加剧和软骨的损伤和破坏。
ifitm1基因
ifitm1基因IFITM1基因是一种重要的免疫基因，在人体免疫应答中起着关键的作用。
本文将从IFITM1基因的发现背景、结构与功能、免疫调控、疾病与药物研究等角度进行介绍和探讨。
IFITM1基因的发现背景：IFITM1（Interferon induced transmembrane protein 1）基因最早是在人类内源性干扰素（IFN）受到诱导后，在肺癌细胞系A549中被发现。
该基因编码的蛋白质表达与外源性丝裂原活化蛋白（Serum protein）有关，故被称为IFITM1。
随后研究发现IFITM1是一种经过IFN信号通路诱导的次一级反应基因，也被称为IFN诱导转膜蛋白（IFN-induced transmembrane protein）。
IFITM1基因的结构与功能：IFITM1基因位于人类染色体11p15.5区，包含6个外显子，编码成一种长约135个氨基酸的蛋白质。
IFITM1蛋白是一种跨膜蛋白，具有两个跨膜结构域和一个细胞外的N-末端。
它主要定位于细胞膜上，参与细胞内外的信号传导和细胞膜的稳定。
IFITM1蛋白的功能主要表现在对病毒的抵抗以及调节细胞增殖和迁移等方面。
IFITM1的主要病毒抵抗机制是通过与病毒膜融合抑制病毒入侵细胞。
除此之外，IFITM1还通过与其他细胞因子或信号分子相互作用，调节多种免疫细胞、炎症因子的表达水平，影响免疫细胞的增殖、迁移、分化等免疫调控过程。
IFITM1基因的免疫调控：IFITM1基因的表达受多种免疫调控因子的影响。
研究发现，多种类型的干扰素以及其他免疫因子，如核因子κB（NF-κB）和调节细胞生长发育的因子（IGFs）等可以诱导IFITM1基因的表达。
此外，研究还发现某些DNA甲基化修饰酶能够通过甲基化介导IFITM1基因的表达调控。
IFITM1基因在疾病与药物研究中的意义：IFITM1基因与多种疾病的发生和发展密切相关。
例如，在肿瘤研究中，IFITM1的高表达与癌细胞的侵袭性和转移性增强相关。
双醋瑞因介导软骨细胞焦亡修复骨关
[１４]㊀张志恒ꎬ张文明ꎬ魏振朴ꎬ等.健骨颗粒对去卵巢小鼠ｍｉＲ－１４１及成骨基因Ｄｌｘ５/Ｍｓｘ２/Ｒｕｎｘ２的影响[Ｊ].康复学报ꎬ２０１８ꎬ３０(６):２６－３１.[１５]㊀张楚天ꎬ张文明ꎬ林燕萍ꎬ等.健骨颗粒含药血清调控ｍｉＲ－１４１对小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响[Ｊ].中国骨质疏松杂志ꎬ２０２０ꎬ２６(４):３５－３９＋１２２.[１６]㊀ＣｈｏｉＳＫꎬＫｉｍＨＳꎬＪｉｎＴꎬｅｔａｌ.ＯｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｍｉＲ－１４１/２００ｃｃｌｕｓｔｅｒｐｒｏｍｏｔｅｓｔｈｅｍｉｇｒａｔｏｒｙａｎｄｉｎｖａｓｉｖｅａｂｉｌｉ￣ｔｙｏｆｔｒｉｐｌｅ－ｎｅｇａｔｉｖｅｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅａｃｔｉｖａ￣ｔｉｏｎｏｆｔｈｅＦＡＫａｎｄＰＩ３Ｋ/ＡＫＴｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｓｂｙｓｅ￣ｃｒｅｔｉｎｇＶＥＧＦ－Ａ[Ｊ].ＢｍｃＣａｎｃｅｒꎬ２０１６ꎬ１６(１):５７０.ʌ文章编号ɔ１００６－６２３３(２０２２)１２－１９５６－０６双醋瑞因介导软骨细胞焦亡修复骨关节炎软骨损伤的机制研究袁㊀磊ꎬ㊀刘志元ꎬ㊀薛㊀涛ꎬ㊀杨㊀雷(江苏省常州市武进人民医院南院骨科ꎬ㊀江苏㊀常州㊀２１３０００)ʌ摘㊀要ɔ目的:探究双醋瑞因影响骨关节炎软骨损伤的机制ꎮ方法:购买软骨细胞系ꎬ通过ＬＰＳ诱导骨关节炎软骨损伤模型ꎮｑＲＴ－ＰＣＲ检测ｍｉＲ－１０７和ＳＭＡＤ２的表达水平ꎬＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测ＳＭＡＤ２和焦亡蛋白Ｃａｓｐａｓｅ－１的表达水平ꎬＥＬＩＳＡ反应检测炎症因子ＩＬ－１β和ＩＬ－１８的表达情况ꎬ使用Ｓｔａｒｂａｓｅ数据库和双荧光素酶实验预测㊁验证ｍｉＲ－１０７与ＳＭＡＤ２的靶向结合关系ꎮ结果:与Ｂｌａｎｋ组相比ꎬＬＰＳ组的ｍｉＲ－１０７水平显著降低ꎬＳＭＡＤ２水平显著升高ꎻ同时焦亡蛋白Ｃａｓｐａｓｅ－１的水平显著降低ꎬ炎症因子ＩＬ－１β和ＩＬ－１８的表达显著升高ꎮ在使用双醋瑞因处理细胞模型后ꎬｍｉＲ－１０７水平显著升高ꎬＳＭＡＤ２水平显著降低ꎬ焦亡蛋白Ｃａｓｐａｓｅ－１的水平显著升高ꎬ炎症因子ＩＬ－１β和ＩＬ－１８的表达显著降低ꎮ结论:双醋瑞因能够通过ｍｉＲ－１０７靶向ＳＭＡＤ２介导软骨细胞焦亡修复骨关节炎软骨损伤ꎮʌ关键词ɔ㊀骨关节炎ꎻ㊀软骨损伤ꎻ㊀双醋瑞因ꎻ㊀软骨细胞焦亡ʌ文献标识码ɔ㊀Ａ㊀㊀㊀㊀㊀ʌｄｏｉɔ１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１００６－６２３３.２０２２.１２.００４ＳｔｕｄｙｏｎｔｈｅＭｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＣａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓＣｅｌｌＰｙｒｏｐｔｏｓｉｓＭｅｄｉａｔｅｄｂｙＤｉａｃｅｒｅｉｎｉｎＲｅｐａｉｒｉｎｇＣａｒｔｉｌａｇｅＩｎｊｕｒｙｉｎＯｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓＹＵＡＮＬｅｉꎬＬＩＵＺｈｉｙｕａｎꎬＸＵＥＴａｏꎬｅｔａｌ(ＷｕｊｉｎＰｅｏｐｌｅ'ｓＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＣｈａｎｇｚｈｏｕꎬＪｉａｎｇｓｕＣｈａｎｇｚｈｏｕ２１３０００ꎬＣｈｉｎａ)ʌＡｂｓｔｒａｃｔɔＯｂｊｅｃｔｉｖｅ:Ｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｄｉａｃｅｔｙｌｒｕｉｙｉｎａｆｆｅｃｔｉｎｇｃａｒｔｉｌａｇｅｉｎｊｕｒｙｉｎｏｓｔｅｏａｒ￣ｔｈｒｉｔｉｓ.Ｍｅｔｈｏｄｓ:ＣａｒｔｉｌａｇｅｃｅｌｌｌｉｎｅｓｗｅｒｅｐｕｒｃｈａｓｅｄｆｏｒｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｃｃａｒｔｉｌａｇｅｉｎｊｕｒｙｍｏｄｅｌｂｙＬＰＳꎬａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆｍｉＲ－１０７ａｎｄＳＭＡＤ２ｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｑＲＴ－ＰＣＲ.ＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆＳＭＡＤ２ａｎｄｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎＣａｓｐａｓｅ－１ꎻＥＬＩＳＡｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｃｙｔｏｋｉｎｅｓＩＬ－１βａｎｄＩＬ－１８ꎻｓｔａｒｂａｓｅｄａｔａｂａｓｅａｎｄｔｈｅｄｕａｌｌｕｃｉｆｅｒａｓｅａｓｓａｙｗａｓｕｓｅｄｔｏｐｒｅｄｉｃｔａｎｄｖｅｒｉｆｙｔｈｅｔａｒｇｅｔｂｉｎｄｉｎｇｓｉｔｅｓｏｆｍｉＲ－１０７ａｎｄＳＭＡＤ２.Ｒｅｓｕｌｔｓ:ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅＢｌａｎｋｇｒｏｕｐꎬｔｈｅｍｉＲ－１０７ｌｅｖｅｌｉｎｔｈｅＬＰＳｇｒｏｕｐｗａｓｏｂｖｉｏｕｓｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄꎬａｎｄｔｈｅＳＭＡＤ２ｌｅｖｅｌｗａｓｓｉｇｎｉｆｉ￣ｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ.ＡｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅꎬＬＰＳｄｅｃｒｅａｓｅｄｔｈｅＣａｓｐａｓｅ－１ｌｅｖｅｌꎬａｎｄｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆｉｎ￣ｆｌａｍｍａｔｏｒｙｆａｃｔｏｒｓＩＬ－１βａｎｄＩＬ－１８ｄｒａｍａｔｉｃａｌｌｙ.ＨｏｗｅｖｅｒꎬｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｎｇｍｉＲ－１０７ｍｉｍｉｃｐａｒｔｉａｌｌｙｒｅｖｅｒｓｅｄｒｅｓｕｌｔｓｗｈｉｃｈＬＰＳ－ｉｎｄｕｃｅｄ.ＡｆｔｅｒｔｈｅｃｅｌｌｍｏｄｅｌｗａｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｄｉａｃｅｒｅｉｎꎬｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆｍｉＲ－１０７ａｎｄＣａｓｐａｓｅ－１ｐｒｏｔｅｉｎｗｅｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄꎬｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆＳＭＡＤ２ａｎｄｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｆａｃｔｏｒｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄ.Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ:ＤｉａｃｅｔｉｎｃａｎｒｅｐａｉｒｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓｃａｒｔｉｌａｇｅｉｎｊｕｒｙｂｙｍｉＲ－１０７/ＳＭＡＤ２.ʌＫｅｙｗｏｒｄｓɔ㊀Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓꎻ㊀Ｃａｒｔｉｌａｇｅｉｎｊｕｒｙꎻ㊀Ｄｉａｃｅｒｅｉｎꎻ㊀Ｃａｒｔｉｌａｇｅｃｅｌｌｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓ６５９１ʌ基金项目ɔ江苏省优势学科建设工程项目ꎬ(编号:ＹＳＨＬ０８０３－７１３)㊀㊀骨关节炎(ＯｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓꎬＯＡ)是最常见的关节炎类型ꎬ也是全球老年人致残的最重要的退行性关节病之一[１]ꎮ在全球范围内ꎬ２０１７年ＯＡ影响了３.０３亿人[２]ꎬ其中９.６％的男性和１８.０％的６０岁以上的女性患有ＯＡ症状ꎮＯＡ可以影响任何关节ꎬ尤其是影响膝㊁髋㊁手和脊柱ꎬ导致患者疼痛和残疾ꎬ并给社会带来经济负担ꎮ在ＯＡ中ꎬ骨骼变得更硬ꎬ吸收冲击载荷的能力降低ꎬ导致软骨承受更多压力ꎮＯＡ的共同特征包括软骨损失㊁关节间隙变窄㊁肥大性骨改变[３]ꎮＯＡ最常见的症状是慢性疼痛ꎮ残疾和疼痛都会导致生活质量显著下降[４]ꎮ而双醋瑞因(ＤＣＮ)被认为是一种结构修饰的ＯＡ药物ꎬ可特异性地阻碍人类单核细胞中的白细胞介素－１ｂ(ＩＬ－１ｂ)ꎬ对软骨的修饰具有重要作用ꎮＤＣＮ通常用于管理ＯＡ症状ꎬ针对主要原因ꎬ从而阻碍疾病的进展ꎮ近年来国外研究结果表明ꎬ双醋瑞因能够很好地改善ＯＡ的症状和抑制ＯＡ的发展[５]ꎮ但双醋瑞因对于ＯＡ的作用机制并不明确ꎬ需要进行进一步的研究和探索ꎮ同时有研究报道ꎬ涉及肌腱损伤和肌腱愈合的各种基因和生长因子受ｓｉＲＮＡ和ｍｉｃｒｏＲＮＡ(ｍｉＲＮＡ)的调控ꎬ从而参与了ＯＡ的发生和发展[６]ꎮ研究ｍｉＲＮＡ在关节生理和病理中的作用ꎬ可为ＯＡ的诊断㊁预防和治疗提供参考[７]ꎮｍｉＲＮＡ是小的单链ＲＮＡꎬ与多种疾病有关ꎬ如癌症㊁ＯＡ和糖尿病[８]ꎮ据报道ꎬｍｉＲ－１５５在脂多糖(ＬＰＳ)诱导的炎症性关节软骨细胞中上调[９]ꎮｍｉＲ－１５５通过调节相应的蛋白质参与细胞焦亡ꎮＳＭＡＤ家族成员２(ＳＭＡＤ２)在将细胞外信号从ＴＧＦ－β超家族配体转运到细胞核中发挥重要作用ꎬ从而调节各种细胞过程ꎬ例如细胞分化㊁增殖和凋亡[１０]ꎮＣｉｒｃＣＤＫ１４通过促进ＳＭＡＤ２表达来预防ＯＡꎮ核苷酸结合结构域样受体蛋白３(ＮＬＲＰ３)/ｃａｓｐａｓｅ－１通路参与ＮＬＲＰ３介导的炎性细胞因子的焦亡㊁释放和成熟[１１]ꎮＳＭＡＤ２/３通路的激活可以抑制ＮＬＲＰ３的转录ꎬ从而减少缺氧心肌细胞的焦亡ꎮ但目前还没有关于双醋瑞因能否通过调控ｍｉＲ－１０７/ＳＭＡＤ２Ｚ轴影响ａｓｐａｓｅ－１通路的激活ꎬ从而影响ＫＯＡ软骨细胞焦亡的报道ꎮ本研究从基因角度推测了双醋瑞因与ｍｉＲ－１０７对ＫＯＡ软骨细胞焦亡的作用机制ꎬ为ＫＯＡ的治疗提供了可能ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀细胞培养与分组:软骨细胞获自北京泽平科技有限公司(中国北京)ꎮ使用含有２０％胎牛血清(ＦＢＳꎻＧｉｂｃｏꎬＵＳＡ)的ＤＭＥＭ培养基ꎬ在３７ħ和５％ＣＯ２的潮湿环境中培养ꎮ本研究使用的细胞分组如下:Ｂｌａｎｋ组(不经任何处理)ꎻＬＰＳ组(用１μｇ/ｍＬＬＰＳ处理２４ｈ)ꎻＬＰＳ＋ｍｉｍｉｃｓ－ｍｉＲ－１０７组(用１μｇ/ｍＬＬＰＳ处理２４ｈ后ꎬ将ｍｉＲ－１０７ｍｉｍｉｃｓ转染至软骨细胞内)ꎻＬＰＳ＋ｍｉｍｉｃｓ－ＮＣ组(用１μｇ/ｍＬＬＰＳ处理２４ｈ后ꎬ将ｍｉｍｉｃｓＮＣ转染至软骨细胞内)ꎻＤＣＮ组(用１μｇ/ｍＬＬＰＳ处理２４ｈ后ꎬ用１０－５ｍｏＬ/Ｌ的双醋瑞因处理７２ｈ)ꎮ其中ｍｉＲＮＡ模拟物(ｍｉＲ－１０７ｍｉｍｉｃｓ)㊁ｍｉＲＮＡ模拟物阴性对照(ｍｉＲ－１０７ｍｉｍｉｃｓ－ＮＣ)购自ＲＩＢＯＢＩＯ(中国广州)ꎮ使用Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００(Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ)进行细胞转染ꎬ４８ｈ后用于后续实验ꎮ１.２㊀酶联免疫吸附试验:通过离心管收集软骨细胞上清液ꎬ将其离心并转移到灭菌管中ꎮ接下来ꎬ使用ＬＰＳ诱导的小鼠膝关节软骨细胞中炎症因子ＩＬ－１β(ＭＬＢ００ＣꎬＲ＆ＤＳＹＳＴＥＭＳꎬＭｉｎｎｅａｐｏｌｉｓꎬＭＮꎬＵＳＡ)和ＩＬ－１８(ＦＫ－ＫＪ２９００ꎬＦＡＮＫＥ)的释放水平进行测定ꎮ相应的ＱｕａｎｔｉｋｉｎｅＥＬＩＳＡ试剂盒ꎮ１.３㊀ｑＲＴ－ＰＣＲ分析:根据制造商的说明ꎬ使用ＴＲＩｚｏｌ试剂(ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃꎬＷａｌｔｈａｍꎬＭＡꎬＵＳＡ)提取总ＲＮＡꎮ使用ＮａｎｏＤｒｏｐ－１０００(ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉ￣ｅｎｔｉｆｉｃꎬＷａｌｔｈａｍꎬＭＡꎬＵＳＡ)测量ＲＮＡ浓度ꎮ然后根据制造商的建议进行ｃＤＮＡ合成ꎮ简而言之ꎬ使用ＲｅｖｅｒＡｉｄＦｉｒｓｔＳｔｒａｎｄｃＤＮＡ试剂盒(ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉ￣ｅｎｔｉｆｉｃ)结合ｍｉＲ－１０７引物对ＲＮＡ进行逆转录(ＲＴ)ꎮＵ６和ＧＡＰＤＨ分别用作标准化ｍｉＲ－１０７和ＳＭＡＤ２表达水平的内部对照ꎮ逆转录反应后ꎬ使用ＬｉｇｈｔＣｙ￣ｃｌｅｒ４８０ＳＹＢＲ－ＧｒｅｅｎＩＭａｓｔｅｒ和ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ４８０实时ＰＣＲ系统(均来自ＲｏｃｈｅＡｐｐｌｉｅｄＳｃｉｅｎｃｅ)检测ｍｉＲ－１０７和ＳＭＡＤ２ｍＲＮＡ的表达ꎮｍｉＲ－１０７和ＳＭＡＤ２的相对表达量由２－ΔΔＣｔ法计算所得ꎮ相关引物序列皆由上海英拜生物科技有限公司设计合成ꎮ引物序列见表１ꎮ１.４㊀蛋白质印迹分析:使用ＲＩＰＡ裂解缓冲液匀浆来自细胞的总蛋白质ꎮ并且通过ＢＣＡ蛋白质试剂(ＳａｎｇｏｎＢｉｏｔｅｃｈＣｏ.ꎬＬｔｄ.ꎬＣｈｉｎａꎬＳｈａｎｇｈａｉ)测定蛋白质浓度ꎮ如前所述进行蛋白质印迹ꎮ一抗如下:ＳＭＡＤ２兔多克隆抗体(ａｂ２８０８８８ꎬＡｂｃａｍꎬＵＳＡꎬ１ʒ１０００)ꎬＣａｓｐａｓｅ－１兔多克隆抗体(ａｂ１３８４８３ꎬＡｂｃａｍꎬＵＫꎬ１ʒ１０００)ꎻ二抗如下:山羊抗兔ＩｇＧＨ＆Ｌ(ＨＲＰ) (ａｂ９７０５１ꎬＡｂｃａｍꎬＵＫꎬ１ʒ２００００)ꎮ抗β－肌动蛋白抗体用作内参ꎮ使用Ｂｉｏ－Ｒａｄ数码图像系统拍照并保存分析图片ꎬ采用ＩｍａｇｅＪ软件(ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈꎬＢｅｔｈｅｓｄａꎬＭａｒｙｌａｎｄꎬＵＳＡ)对目的条带进行灰度值分析ꎮ１.５㊀荧光素酶报告基因测定:进行荧光素酶测定以鉴定ｍｉＲ－１０７和ＳＭＡＤ２之间的相互作用ꎮＷＴ－ＳＭＡＤ２７５９１或ＭＵＴ－ＳＭＡＤ２分别用ｍｉｍｉｃｓ－ｍｉＲ－１０７或ｍｉｍｉｃｓ－ＮＣ通过Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００试剂(ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎꎬＳｈａｎｇｈａｉꎬＣｈｉｎａ)转染到软骨细胞中ꎮ转染后使用双荧光素酶报告分析系统(Ｐｒｏｍｅｇａ)检测荧光素酶活性ꎮ表１㊀ｑＲＴ－ＰＣＲ中所用引物序列基因引物序列(５'－３')ｍｉＲ－１０７Ｆｏｒｗａｒｄ５'－ＧＣＣＧＡＡＴＴＣＡＡＡＧＣＧＡＧＡＴＴＣＣＡＴＣＡＧＣＡ－３'Ｒｅｖｅｒｓｅ５'－ＧＣＣＧＧＡＴＣＣＴＧＴＣＡＡＣＣＣＡＧＡＡＣＴＣＡＡＡＧＧ－３'ＳＭＡＤ２Ｆｏｒｗａｒｄ５'－ＣＡＣＧＣＡＣＴＴＣＣＧＣＡＣＡＴＴＣ－３'Ｒｅｖｅｒｓｅ５'－ＴＡＡＧＧＧＣＧＡＡＡＡＡＡＧＣＡＧＴＴ－３'Ｕ６Ｆｏｒｗａｒｄ５'－ＡＣＣＣＴＧＡＧＡＡＡＴＡＣＣＣＴＣＡＣＡＴ－３'Ｒｅｖｅｒｓｅ５'－ＧＡＣＧＡＣＴＧＡＧＣＣＣＣＴＧＡＴＧ－３'ＧＡＰＤＨＦｏｒｗａｒｄ５'－ＴＣＴＡＣＡＴＧＴＴＣＣＡＧＴＡＴＧＡＣＴＣ－３'Ｒｅｖｅｒｓｅ５'－ＡＣＴＣＣＡＣＧＡＣＡＴＡＣＴＣＡＧＣＡＣＣ－３'１.６㊀统计学分析:本研究数据使用ＳＰＳＳ２１.０(ＳＰＳＳꎬＩｎｃꎬＣｈｉｃａｇｏꎬＩＬꎬＵＳＡ)和ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ８.０１(Ｇｒａｐｈ￣ＰａｄＳｏｆｔｗａｒｅＩｎｃ)统计学软件对数据进行统计分析和作图ꎮ连续变量的正态分布采用Ｋｏｌｍｏｇｏｒｏｖ－ＳｍｉＲｎｏｖ验证ꎮ数据以平均值ʃ标准差表示ꎬ两组间比较采取独立样本ｔ检验ꎬ多组间数据比较采用ｏｎｅ－ｗａｙＡＮＯ￣ＶＡꎬ事后检验采用Ｔｕｋｅｙ'ｓｍｕｌｔｉｐｌｅｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓｔｅｓｔꎮＰ<０.０５为差异具有统计学意义ꎮ２㊀结㊀果２.１㊀在ＬＰＳ诱导的小鼠ＫＯＡ软骨细胞中ｍｉＲ－１０７低表达而ＳＭＡＤ２高表达:膝关节软骨细胞中的ｍｉＲ－１０７与ＫＯＡ密切相关[９]ꎮ为探讨其机制ꎬ本研究通过ＬＰＳ诱导小鼠膝关节软骨细胞ꎬ建立软骨细胞炎症模型(ＬＰＳ组)ꎮｑＲＴ－ＰＣＲ的结果表明ꎬ与Ｂｌａｎｋ组相比ꎬＬＰＳ组ｍｉＲ－１０７的表达水平显著下调ꎬ而ＳＭＡＤ２的表达水平显著上调(图１Ａ/Ｂꎬ均Ｐ<０.０５)ꎬＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ的结果表明ꎬ与Ｂｌａｎｋ组相比ꎬＬＰＳ组ＳＭＡＤ２的表达水平显著上调(图１ＣꎬＰ<０.０５)ꎮ上述结果说明在ＬＰＳ诱导的小鼠ＫＯＡ软骨细胞中ｍｉＲ－１０７低表达而ＳＭＡＤ２高表达ꎬｍｉＲ－１０７和ＳＭＡＤ２均可能参与了ＫＯＡ的发生ꎮ２.２㊀ｍｉＲ－１０７过表达降低ＬＰＳ诱导的软骨细胞焦亡:焦亡与炎症性疾病密切相关ꎬ在关节炎中起重要作用ꎬ抑制软骨细胞焦亡可以改善关节炎ꎮ为了探索ｍｉＲ－１０７是否可以调节ＬＰＳ诱导的ＫＯＡ软骨细胞焦亡ꎬ我们对ｍｉＲ－１０７在ＬＰＳ诱导的ＫＯＡ软骨细胞中进行了过表达ꎮ同时使用ｑＲＴ－ＰＣＲ检测软骨细胞中ｍｉＲ－１０７的表达ꎮ与ＬＰＳ＋ｍｉｍｉｃｓ－ＮＣ组相比ꎬＬＰＳ＋ｍｉｍｉｃｓ－ｍｉＲ组中ｍｉＲ－１０７表达上调(Ｐ<０.０５)(图２Ａ)ꎬ表明ｍｉＲ－１０７成功进行了过表达ꎮ随后ꎬ通过Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测细胞焦亡相关蛋白Ｃａｓｐａｓｅ－１的结果显示:与正常组相比ꎬＬＰＳ组Ｃａｓｐａｓｅ－１水平升高ꎬ而ｍｉＲ－１０７过表达后显着降低了Ｃａｓｐａｓｅ－１水平(均Ｐ<０.０５)(图２Ｂ)ꎮ最后ꎬ使用ＥＬＩＳＡ试剂盒检测细胞中炎症因子的水平ꎮ与正常组相比ꎬＬＰＳ组ＩＬ－１β和ＩＬ－１８水平升高ꎬ而ｍｉＲ－１０７过表达显着降低了促炎因子的释放(均Ｐ<０.０５)(图２Ｃ/Ｄ)ꎮ简而言之ꎬｍｉＲ－１０７的过表达可以抑制ＬＰＳ诱导的ＫＯＡ软骨细胞焦亡ꎮ图１㊀在ＬＰＳ诱导的小鼠ＫＯＡ软骨细胞中ｍｉＲ－１０７低表达而ＳＭＡＤ２高表达ｑＲＴ－ＰＣＲ分别检测ｍｉＲ－１０７(Ａ)与ＳＭＡＤ２(Ｂ)的表达水平ꎻＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测ＳＭＡＤ２的表达水平(Ｃ)ꎮ细胞实验重复３次ꎬ数据以平均值ʃ标准差表示ꎬ两组间数据比较采用ｔ检验ꎬ∗表示Ｐ<０.０５８５９１图２㊀ｍｉＲ－１０７过表达降低ＬＰＳ诱导的软骨细胞焦亡ｑＲＴ－ＰＣＲ检测ｍｉＲ－１０７(Ａ)的表达水平ꎻＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测细胞焦亡相关蛋白Ｃａｓｐａｓｅ－１(Ｂ)的表达ꎻＥＬＩＳＡ检测炎症因子ＩＬ－１β(Ｃ)和ＩＬ－１８(Ｄ)的表达ꎮ细胞实验重复３次ꎬ数据以平均值ʃ标准差表示ꎬ多组间数据比较采用ｏｎｅ－ｗａｙＡＮＯ￣ＶＡꎬ事后检验采用Ｔｕｋｅｙ'ｓｍｕｌｔｉｐｌｅｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓｔｅｓｔꎬ∗表示Ｐ<０.０５２.３㊀ｍｉＲ－１０７靶向抑制ＳＭＡＤ２:为进一步探究ｍｉＲ－１０７与ＳＭＡＤ２的关系ꎬ我们首先通过ｓｔａｒｂａｓｅ在线数据库(ｈｔｔｐ://ｓｔａｒｂａｓｅ.ｓｙｓｕ.ｅｄｕ.ｃｎ/)预测ｍｉＲ－１０７和ＳＭＡＤ２之间的结合位点(图３Ａ)ꎮ随后通过双荧光素酶测定进行验证ꎬ结果表明ꎬ与共转染ｍｉｍｉｃｓ－ＮＣ和ＳＭＡＤ－ＷＴ的正常小鼠膝关节软骨细胞相比ꎬ共转染ｍｉｍｉｃｓ－ｍｉＲ－１０７和ＳＭＡＤ－ＷＴ的软骨细胞荧光素酶活性降低(Ｐ<０.０１)ꎬ而用ＳＭＡＤ－ＭＵＴ转染的软骨细胞中荧光素酶活性没有显着变化(图３Ｂ)ꎮ先前的一项研究表明ꎬＳＭＡＤ２在关节炎中至关重要ꎬ并且在ＳＭＡＤ２敲低后可以抑制软骨细胞的增殖和迁移[１０]ꎮ因此ꎬ采用ｑＲＴ－ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测软骨细胞中ＳＭＡＤ２的ｍＲＮＡ水平和蛋白水平(图３Ｃ/Ｄ)ꎬ结果表明:ｍｉＲ－１０７的过表达显着降低了ＳＭＡＤ２的水平(均Ｐ<０.０５)ꎮ上述结果表明ꎬＳＭＡＤ２是ｍｉＲ－１０７的靶基因ꎮ图３㊀ｍｉＲ－１０７靶向抑制ＳＭＡＤ２Ｓｔａｒｂａｓｅ数据库预测ｍｉＲ－１０７与ＳＭＡＤ２(Ａ)的靶向结合位点ꎻ双荧光素酶实验验证ｍｉＲ－１０７与ＳＭＡＤ２(Ｂ)的靶向关系ꎻｑＲＴ－ＰＣＲ(Ｃ)与Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ(Ｄ)分别检测ＳＭＡＤ２的表达情况ꎮ细胞实验重复３次ꎬ数据以平均值ʃ标准差表示ꎬ两组间数据比较采用ｔ检验ꎬ∗表示Ｐ<０.０５ꎬ∗∗表示Ｐ<０.０１２.４㊀双醋瑞因可通过促进ｍｉＲ－１０７的表达降低ＬＰＳ诱导的软骨细胞焦亡:最后ꎬ为探究双醋瑞因介导软骨细胞焦亡修复骨关节炎软骨损伤的机制ꎬ我们通过ｑＲＴ－ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测了ｍｉＲ－１０７以及ＳＭＡＤ２的表达情况ꎬ结果表明:与ＬＰＳ组相比ꎬＤＣＮ组的ｍｉＲ－１０７水平显著升高ꎬＳＭＡＤ２水平显著降低(图４Ａ/Ｂ/Ｃꎬ均Ｐ<０.０５)ꎻ此外ꎬＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测Ｃａｓｐａｓｅ１的结果表明ꎬ与ＬＰＳ组相比ꎬＤＣＮ组的Ｃａｓｐａｓｅ１蛋白显著升高(图４ＤꎬＰ<０.０５)ꎻ同时ＥＬＩＳＡ试验的结果表明ꎬ与ＬＰＳ组相比ꎬＤＣＮ组的炎症因子ＩＬ－１８与ＩＬ－１β均显著降低(图４Ｅ/Ｆꎬ均Ｐ<０.０５)ꎮ上述结果表明双醋瑞因可通过促进ｍｉＲ－１０７的表达降低ＬＰＳ诱导的软骨细胞焦亡ꎮ图４㊀双醋瑞因可通过促进ｍｉＲ－１０７的表达降低ＬＰＳ诱导的软骨细胞焦亡ｑＲＴ－ＰＣＲ分别检测ｍｉＲ－１０７(Ａ)与ＳＭＡＤ２(Ｂ)的表达水平ꎻＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测ＳＭＡＤ２的表达水平(Ｃ)ꎻＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测细胞焦亡相关蛋白Ｃａｓｐａｓｅ－１(Ｄ)的表达ꎻＥＬＩＳＡ检测炎症因子ＩＬ－１β(Ｅ)和ＩＬ－１８(Ｆ)的表达ꎮ细胞实验重复３次ꎬ数据以平均值ʃ标准差表示ꎬ两组间数据比较采用ｔ检验ꎬ∗表示Ｐ<０.０５３㊀讨㊀论在本研究中ꎬ双醋瑞因通过过表达ｍｉＲ－１０７介导ＳＭＡＤ２下调从而调控Ｃａｓｐａｓｅ－１的表达来抑制软骨基质降解ꎬ这为我们在药物开发中将基础研究成果转化为对患者的实际治疗ꎬ能够填补基础科学与临床科学之间的空白ꎮ而软骨退变常被认为是ＫＯＡ进展的主要原因ꎬ软骨细胞功能的改善对ＫＯＡ的恢复很重要ꎮ本研究采用ＬＰＳ诱导的软骨细胞构建体外ＫＯＡ模型ꎮ９５９１经典的细胞焦亡主要依赖于炎症小体激活的Ｃａｓｐａｓｅ－１ꎬＣａｓｐａｓｅ－１表达增加与ＮＬＲＰ３炎性体介导的细胞焦亡信号传导有关ꎮ此外ꎬ有研究报道[１２]证明氧化的低密度脂蛋白和胆固醇晶体激活巨噬细胞中的ＮＬＲＰ３炎性体ꎬ进一步激活Ｃａｓｐａｓｅ－１成熟的促炎因子(ＩＬ－１β和ＩＬ－１８)ꎬ可诱导巨噬细胞焦亡ꎮ痛风关节炎是一种由尿酸钠(ＭＳＵ)晶体或焦磷酸二水合物(ＣＰＰＤ)晶体引起的炎症性疾病ꎮＭＳＵ和ＣＰＰＤ被ＮＡＬＰ３炎性体识别以激活ＮＡＬＰ３ꎬ然后激活Ｃａｓｐａｓｅ－１以产生诱导炎症的成熟ＩＬ－１β和ＩＬ－１８ꎮ在痛风性关节炎发作时ꎬＴＬＲ４信号通路参与调节细胞焦亡ꎮＴＬＲ４信号识别ＭＳＵ并与ＭｙＤ８８相互作用激活ＮＦ－κＢꎬ从而调节ｐｒｏ－ＩＬ－１β的表达ꎬ将其切割成成熟的ＩＬ－１β诱导细胞焦亡ꎮＣａｓｐａｓｅ－１的激活是细胞焦亡的核心ꎮ一项研究表明ꎬ针对ＮＬＲＰ３炎性体的抗炎疗法可能是治疗ＯＡ的一种新方法ꎮ有报道称ꎬ胶原性关节炎小鼠关节滑液中ＮＬＲＰ３㊁ＩＬ－１８㊁ＩＬ－１β的表达明显升高ꎬ且ＮＬ￣ＲＰ３的表达与临床关节炎的严重程度相关ꎮ还有报道发现ＯＡ患者滑膜中的尿酸可通过激活ＮＬＲＰ３炎性体激活ｐｒｏ－ＩＬ－１８和ｐｒｏ－ＩＬ－１βꎬ并且滑膜中的ＩＬ－１８和ＩＬ－１β与ＯＡ的严重程度呈正相关ꎮ因此ꎬ我们推测细胞焦亡可能参与了ＯＡ的过程ꎮ本研究发现ＬＰＳ诱导作用下软骨细胞中炎症因子ＩＬ－１β㊁ＩＬ－１８的表达增加ꎬ这一发现与之前的研究一致ꎮ此外ꎬ双醋瑞因导致Ｃａｓｐａｓｅ－１表达增加ꎬ刺激软骨细胞焦亡ꎮ近期ꎬｍｉＲＮＡ被证明对ＫＯＡ发展具有一定的调节作用ꎮ据报道ｍｉＲ－１０７在ＯＡ中下调ꎬ且提高ｍｉＲ－１０７表达水平可以减轻软骨细胞损伤ꎮ在本研究中ꎬ在ＬＰＳ诱导下ꎬ软骨细胞ｍｉＲ－１０７表达水平降低ꎬＳＭＡＤ２表达水平上升ꎬ而双醋瑞因处理使得软骨细胞ｍｉＲ－１０７及ＳＭＡＤ２表达水平都出现部分逆转ꎮ因此ꎬ我们猜测ｍｉＲ－１０７与ＳＭＡＤ２表达水平之间可能存在一定联系ꎬ随后通过ｓｔａｒｂａｓｅ在线数据库及双荧光素酶实验预测并证明ｍｉＲ－１０７靶向调控ＳＭＡＤ２ꎬ这辅佐了ｍｉＲ－１０７过表达下调ＳＭＡＤ２表达以减少细胞焦亡并促进软骨细胞增殖的现象ꎮ此外ꎬ双醋瑞因处理同样降低ＬＰＳ诱导的软骨细胞中ＩＬ－１β和ＩＬ－１８的表达ꎬ以上现象皆说明双醋瑞因能通过促进ｍｉＲ－１０７的表达从而介导软骨细胞焦亡修复骨关节炎软骨损伤ꎮʌ参考文献ɔ[１]㊀ＮｅｏｇｉＴ.Ｔｈｅｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙａｎｄｉｍｐａｃｔｏｆｐａｉｎｉｎｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ[Ｊ].ＯｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓＣａｒｔｉｌａｇｅꎬ２０１３ꎬ２１(９):１１４５－１１５３.[２]㊀ＫｌｏｐｐｅｎｂｕｒｇＭꎬＦＢｅｒｅｎｂａｕｍ.Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓｙｅａｒｉｎｒｅｖｉｅｗ２０１９:ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙａｎｄｔｈｅｒａｐｙ[Ｊ].ＯｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓＣａｒｔｉｌａｇｅꎬ２０２０ꎬ２８(３):２４２－２４８.[３]㊀ＡｓｈｋａｖａｎｄＺꎬＨＭａｌｅｋｉｎｅｊａｄꎬＢＳＶｉｓｈｗａｎａｔｈ.Ｔｈｅｐａｔｈｏ￣ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙｏｆｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｙＲｅ￣ｓｅａｒｃｈꎬ２０１３ꎬ７(１):１３２－１３８.[４]㊀ＭｏｓｋｏｗｉｔｚＲＷ.Ｔｈｅｂｕｒｄｅｎｏｆｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ:ｃｌｉｎｉｃａｌａｎｄｑｕａｌｉｔｙ－ｏｆ－ｌｉｆｅｉｓｓｕｅｓ[Ｊ].ＴｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＭａｎａｇｅｄＣａｒｅꎬ２００９ꎬ１５(８Ｓｕｐｐｌ):２２３－２２９.[５]㊀ＰａｎｏｖａＥꎬＧＪｏｎｅｓ.Ｂｅｎｅｆｉｔ－ｒｉｓｋａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｏｆｄｉａｃｅｒｅｉｎｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ[Ｊ].ＤｒｕｇＳａｆｅｔｙꎬ２０１５ꎬ３８(３):２４５－２５２.[６]㊀ＧａｒｇａｎｏＧꎬｅｔａｌ.ＳｍａｌｌｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇＲＮＡｓｉｎｔｅｎｄｏｎｈｏｍｅｏｓｔａ￣ｓｉｓ[Ｊ].ＢｒｉｔｉｓｈＭｅｄｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎꎬ２０２１ꎬ１３８(１):５８－６７. [７]㊀ＯｌｉｖｉｅｒｏＡꎬｅｔａｌ.ＭｉｃｒｏＲＮＡｉｎｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ:ｐｈｙｓｉｏｐａｔｈｏｌｏ￣ｇｙꎬｄｉａｇｎｏｓｉｓａｎｄｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｃｈａｌｌｅｎｇｅ[Ｊ].ＢｒｉｔｉｓｈＭｅｄｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎꎬ２０１９ꎬ１３０(１):１３７－１４７.[８]㊀ＬｉＧ－ＳꎬＬＣｕｉꎬＧ－ＤＷａｎｇ.ｍｉＲ－１５５－５ｐｒｅｇｕｌａｔｅｓｍａｃｒｏ￣ｐｈａｇｅＭ１ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｔｈｅｓｙｎｏｖｉａｌｆｌｕｉｄｏｆｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｋｎｅｅｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ[Ｊ].ＥｘｐＴｈｅｒＭｅｄꎬ２０２１ꎬ２１(１):６８.[９]㊀ＺｈｏｕＢꎬｅｔａｌ.ＴａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｒｅ￣ｓｐｏｎｓｅｉｎｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓｖｉａｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｍｉＲ－１５５/ＦＯＸＯ３ａｘｉｓ[Ｊ].Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙꎬ２０２１ꎬ１０６(１－２):２０－２８.[１０]㊀ＳｈｉＪꎬｅｔａｌ.ｍｉＲ－４８６－５ｐｉｓｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄｉｎｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｓｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｍｉｇｒａｔｉｏｎｂｙｓｕｐ￣ｐｒｅｓｓｉｎｇＳＭＡＤ２[Ｊ].ＭｏｌＭｅｄＲｅｐꎬ２０１８ꎬ１８(１):５０２－５０８.[１１]㊀ＦｕＱꎬｅｔａｌ.ＮＬＲＰ３/ｃａｓｐａｓｅ－１ｐａｔｈｗａｙ－ｉｎｄｕｃｅｄｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓｍｅｄｉａｔｅｄｃｏｇｎｉｔｉｖｅｄｅｆｉｃｉｔｓｉｎａｍｏｕｓｅｍｏｄｅｌｏｆｓｅｐｓｉｓ－ａｓ￣ｓｏｃｉａｔｅｄｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ[Ｊ].Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎꎬ２０１９ꎬ４２(１):３０６－３１８.[１２]㊀ＲａｊａｍｋｉＫꎬｅｔａｌ.ＣｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｃｒｙｓｔａｌｓａｃｔｉｖａｔｅｔｈｅＮＬＲＰ３ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅｉｎｈｕｍａｎｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ:ａｎｏｖｅｌｌｉｎｋｂｅｔｗｅｅｎｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｍｅｔａｂｏｌｉｓｍａｎｄｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ[Ｊ].ＰｌｏＳｏｎｅꎬ２０１０ꎬ５(７):１１７６５.[２４]㊀ＡｋａｈｏｓｈｉＴꎬＹＭｕｒａｋａｍｉꎬＨＫｉｔａｓａｔｏ.Ｒｅｃｅｎｔａｄｖａｎｃｅｓｉｎｃｒｙｓｔａｌ－ｉｎｄｕｃｅｄａｃｕｔｅｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ[Ｊ].Ｃｕｒｒｅｎｔｏｐｉｎｉｏｎｉｎｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙꎬ２００７ꎬ１９(２):１４６－１５０.[２５]㊀ＫｏｌｌｙＬꎬｅｔａｌ.ＩｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｒｏｌｅｏｆＡＳＣｉｎａｎｔｉｇｅｎ－ｉｎｄｕｃｅｄａｒｔｈｒｉｔｉｓｉｓｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｏｆｃａｓｐａｓｅ－１ꎬＮＡＬＰ－３ꎬａｎｄＩＰＡＦ[Ｊ].ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙꎬ２００９ꎬ１８３(６):４００３－４０１２.[２６]㊀ＺｈａｎｇＹꎬＹＺｈｅｎｇꎬＨＬｉ.ＮＬＲＰ３ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅｐｌａｙｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｃｏｌｌａｇｅｎ－ｉｎｄｕｃｅｄａｒ￣ｔｈｒｉｔｉｓ[Ｊ].ＭｅｄｉａｔｏｒｓｏｆＩｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎꎬ２０１６ꎬ２０１６.[２７]㊀ＤｅｎｏｂｌｅＡＥꎬｅｔａｌ.Ｕｒｉｃａｃｉｄｉｓａｄａｎｇｅｒｓｉｇｎａｌｏｆｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｒｉｓｋｆｏｒｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓｔｈｒｏｕｇｈｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎ[Ｊ].０６９１ＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓｏｆｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓꎬ２０１１ꎬ１０８(５):２０８８－２０９３.[２８]㊀ＱｉＨꎬＬＹａｏ.Ａｄｖａｎｃｅｓｉｎｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓａｃｔｉ￣ｖａｔｉｏｎａｎｄｒｅｌａｔｅｄｄｉｓｅａｓｅｓ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＰｒａｃｔｉｃａｌＤｉａｇｎｏｓｉｓａｎｄＴｈｅｒａｐｙꎬ２０１６ꎬ３０(５):４１７－４１９.[２９]㊀ＬｉｕＷꎬＺＺｈａꎬＨＷａｎｇ.ＵｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｍｉｃｒｏＲＮＡ－２７ａｉｎ￣ｈｉｂｉｔｓｓｙｎｏｖｉａｌａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｋｎｅｅｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓｒａｔｓｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＰＬＫ２[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｅｌｌｕｌａｒＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙꎬ２０１９ꎬ２３４(１２):２２９７２－２２９８４.[３０]㊀ＧｕＲꎬｅｔａｌ.ＭｉｃｒｏＲＮＡ－９ｒｅｇｕｌａｔｅｓｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｋｎｅｅｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅＮＦ－ｋａｐｐａＢ１ｐａｔｈｗａｙｉｎｃｈｏｎｄｒｏ￣ｃｙｔｅｓ[Ｊ].Ｍｅｄｉｃｉｎｅꎬ２０１６ꎬ９５(３６).[３１]㊀ＴｉａｎＦꎬｅｔａｌ.ｍｉＲ－１０７ｍｏｄｕｌａｔｅｓｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎꎬａｐｏｐｔｏｓｉｓꎬａｎｄｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘｓｙｎｔｈｅｓｉｓｂｙｔａｒｇｅｔｉｎｇＰＴＥＮ[Ｊ].ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌａｎｄＥｘｐｅｒｉｍｅｎ￣ｔａｌＰａｔｈｏｌｏｇｙꎬ２０１９ꎬ１２(２):４８８.[３２]㊀ＬｉｎＳ－Ｓꎬｅｔａｌ.ＨｙｐｅｒｂａｒｉｃｏｘｙｇｅｎｉｎｈｉｂｉｔｓｔｈｅＨＭＧＢ１/ＲＡＧＥｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｂｙｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｎｇＭｉｒ－１０７ｅｘｐｒｅｓ￣ｓｉｏｎｉｎｈｕｍａｎｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｃｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅｓ[Ｊ].Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓａｎｄｃａｒｔｉｌａｇｅꎬ２０１９ꎬ２７(９):１３７２－１３８１.ʌ文章编号ɔ１００６－６２３３(２０２２)１２－１９６１－０９新加肾元方调控ＲＩＰＫ１/ＲＩＰＫ３/ＭＬＫＬ通路对高糖诱导的糖尿病肾病肾小球足细胞损伤的影响郑㊀玲ꎬ㊀陈㊀立ꎬ㊀王㊀月(湖北文理学院附属医院襄阳市中心医院ꎬ㊀湖北㊀襄阳㊀４４１０２１)ʌ摘㊀要ɔ目的:探讨新加肾元方对高糖诱导的糖尿病肾病(ｄｉａｂｅｔｉｃｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙꎬＤＮ)大鼠肾小球足细胞损伤及ＲＩＰＫ１/ＲＩＰＫ３/ＭＬＫＬ通路的影响ꎬ并分析其可能的作用机制ꎮ方法:选取７０只ＳＤ大鼠ꎬ随机取１２只为正常对照组ꎬ另５８只采用高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射ＳＴＺ法建立糖尿病肾病大鼠模型成功４８只ꎬ随机分为模型组ꎬ阳性对照组ꎬ新加肾元方低㊁高剂量组ꎬ各１２只ꎮ阳性对照组厄贝沙坦水溶液０.０１７ｇ/ｋｇ灌胃ꎬ新加肾元方低㊁高剂量组０.７２ｇ/ｋｇ㊁１.４４ｇ/ｋｇ灌胃ꎬ正常对照组㊁模型组等体积生理盐水灌胃ꎮ检测肾功能:尿素氮㊁血清肌酐㊁蛋白尿ꎻＨＥ染色观察肾组织病理形态ꎻ透射电镜观察肾小球足细胞超微结构变化ꎻＴＵＮＥＬ染色检测肾组织细胞凋亡情况ꎻＥＬＩＳＡ检测肾组织ＴＮＦ－α㊁ＩＬ－６水平ꎻＷＢ检测肾组织ＲＩＰＫ１/ＲＩＰＫ３/ＭＬＫＬ通路相关蛋白表达ꎻ对新加肾元方中所含活性成分进行收集与筛选ꎬ并对 有效成分－靶点 拓扑分析所得度值较高的有效成分进行分子对接ꎮ结果:模型组大鼠蛋白尿㊁血清肌酐㊁尿素氮水平㊁凋亡指数㊁ＴＮＦ－α㊁ＩＬ－６水平㊁ＲＩＰＫ１㊁ＲＩＰＫ３㊁ＭＬＫＬ蛋白表达增加较正常对照组增加ꎬＷＴ－１蛋白表达较正常对照组下降(Ｐ<０.０５)ꎻ阳性对照组㊁新加肾元方低㊁高剂量组大鼠蛋白尿㊁血清肌酐㊁尿素氮水平㊁凋亡指数㊁ＴＮＦ－α㊁ＩＬ－６水平㊁ＲＩＰＫ１㊁ＲＩＰＫ３㊁ＭＬＫＬ蛋白表达较正常对照组下降ꎬＷＴ－１蛋白表达较正常对照组增加(Ｐ<０.０５)ꎮ模型组大鼠肾小球基底膜变厚ꎬ系膜细胞增生ꎬ肾小管浊肿变性ꎬ肾间质纤维化ꎻ阳性对照组㊁新加肾元方低㊁高剂量组肾组织病理形态改变较模型组出现不同程度减轻ꎮ模型组大鼠足细胞足突融合或消失ꎬ基底膜增厚ꎻ阳性对照组㊁新加肾元方低㊁高剂量组大鼠肾组织超微结构病理形态改变较模型组出现不同程度改善ꎮ新加肾元方中人参主要活性成分２２个ꎬ炙黄芪主要活性成分２０个ꎮ分子对接结果显示与关键靶点对接较好的成分有人参中的Ｃｅｌａｂｅｎｚｉｎｅ㊁炙黄芪中的Ｍａｉｒｉｎꎬ与ＲＩＰＫ１㊁ＲＩＰＫ３㊁ＭＬＫＬ的结合能分别为－５.３㊁－６.４２㊁－５.４８和－５.３９㊁－７.７１㊁－５.４１ꎮ结论:新加肾元方通过多成分㊁多靶点调控ＲＩＰＫ１/ＲＩＰＫ３/ＭＬＫＬ信号通路ꎬ降低炎症因子ＴＮＦ－α㊁ＩＬ－６水平ꎬ缓解炎症反应ꎬ改善糖尿病肾病大鼠肾小球足细胞损伤ꎮʌ关键词ɔ㊀新加肾元方ꎻ㊀ＲＩＰＫ１/ＲＩＰＫ３/ＭＬＫＬ通路ꎻ㊀高糖诱导ꎻ㊀糖尿病肾病ꎻ㊀肾小球足细胞损伤ʌ文献标识码ɔ㊀Ａ㊀㊀㊀㊀㊀ʌｄｏｉɔ１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１００６－６２３３.２０２２.１２.００５１６９１ ʌ基金项目ɔ湖北省卫生健康委２０２１－２０２２年度中医药科研面上项目ꎬ(编号:ＺＹ２０２１Ｍ０５２)ꎻ襄阳市科技局下发的２０１９年度医疗卫生指导性科技计划项目ꎬ(编号:２０１９ｚｄ１４)ʌ通讯作者ɔ王㊀月。
软骨细胞在类风湿性关节炎中的作用研究
综述CHINESE COMMUNITY DOCTORS 中国社区医师2018年第34卷第30期类风湿性关节炎(RA)为临床常见病、多发病。
软骨细胞生存状态以及外部基质代谢情况，在一定程度上对病患的软骨功能造成影响。
一般情况下，软骨细胞自身增殖能力存在局限性。
且在关节空间或者软骨下骨其余细胞类型渗透也具有局限性。
在缺少血管供应下，该类型细胞需要依靠关节面或者额软骨下骨，对最终代谢物质以及营养物质进行交换。
所以说软骨细胞对于营养物质相对缺乏，任何外界刺激性条件对于软骨细胞来讲都是敏感的。
当软骨细胞处于应激情况下，亚细胞代谢情况为一种值得研究的新方向。
结合实际情况，本文现就对软骨细胞在类风湿性关节炎中的作用进行分析，现将具体结果报告如下。
OPG/RANK/RANKL 系统情况骨保护素主要经成骨细胞表达形成，具备抑制骨吸收效果，其能够减少ADAMTS-5等细胞数目，上述两者为蛋白多糖降解主要因子。
其中ADAMTS-5发挥了主要作用，在敲除实验小鼠ADAMTS-5基因之后，OPG 破坏性显著减少[1]。
研究证实，OPG 不但可以削减ADAMTS-5表达以及分泌水平，其也能提升TIMP-4表达量，有学者证实：该物质加大MMP-13以及PAR-2基因表达量[2]。
证实OPG 对软骨细胞有着显著影响。
OPG 生物活性以及行为具备相关信号转导途径[3]。
其参与到例如Wnt/β-catenin 通路、PI3K/AKT 信号通路。
ERK1/2以及P38MAPK 均被确认参加到软骨细胞增殖分化过程之中。
有研究将上述通路作为软骨细胞的信号通道开展全面分析。
结果证实OPG 主要经MEK/ERK 信号通路，进而推进OPG 增殖速度，并非P38MAPK 通路。
最近几年内，有文献证实[4]：在骨破坏环境内，OPG/RANK/RANKL 备受瞩目。
RANK 经RA 滑膜细胞以及T 细胞而生成。
成骨细胞能够体现出RANKL 以及RANK 有机结合，进而引发OPG 损坏。
老年髋部骨折围术期Ⅰ型胶原交联N末端肽和骨钙素的检测及意义
老年髋部骨折围术期Ⅰ型胶原交联N末端肽和骨钙素的检测及意义李经堂;汤晓正;熊龙;刘剑军【摘要】目的：通过对老年髋部骨折围术期骨代谢生化指标[Ⅰ型胶原交联 N末端肽（NTX）和骨钙素（又称骨γ-羧基谷氨酸蛋，BGP）]变化的研究，为临床老年髋部骨折围术期的抗骨质疏松治疗提供一定的帮助。
方法对56例老年髋部骨折患者采用双能 X线骨密度仪行骨密度（BMD）测定，并根据BMD测定结果将56例患者分为2组：骨质疏松组（30例）和非骨质疏松组（26例）。
测定56例患者，术前、术后2周血清 NTX、BGP水平。
结果56例患者中术后2周30例患者（其中男9例，女21例）BMD值较成年人BMD峰值减低2．5个标准差以上，26例患者（其中男15例，女11例）BMD值较成年人BMD减低不足2．5个标准差，女性骨质疏松症发病率明显高于男性（P＜0．05）。
与术前比较，56例患者术后2周血清 NTX水平均明显升高，女性、骨质疏松组术后2周血清 BGP水平则均明显降低（均P＜0．05）；与男性比较，女性术后2周血清NTX差值明显升高，血清BGP差值则明显降低（均P＜0．05）；与非骨质疏松组比较，骨质疏松组术后2周血清 NTX差值明显升高，血清 BGP 差值则明显降低（均P＜0．05）。
结论老年髋部骨折患者围术期骨代谢加快，骨丢失大于骨形成，女性患者和骨质疏松患者骨丢失更明显，围术期应加强抗骨质疏松治疗。
%Objective To provide help for the treatment of osteoporosis during the periopera-tive period in elderly patients with hip fracture through investigating the changes in bone metabo-lism markers cross-linked N-telopeptide oftypeⅠcollagen(NTX)and osteocalcinduring(BGP). Methods The bone mineral density(BMD)was measured by dual energy X-ray absorptiometryin 5 6 elderly patients with hip fracture.According to the BMD values,these patients were divided in-to two groups:osteoporosis group(n=30)and non-osteoporosis group(n=26).Serum levels of NTX and BGP were determined before and 2 weeks after operation.Results Among the 5 6 pa-tients,30(9 males and 21 females)had BMD values more than 2.5 standard deviations below a-dult peak bone mass,and 26(15 males and 11 females)had BMD values less than 2.5 standard de-viations below adult peak bone mass.The incidence of osteoporosis in females was significantly higher than that in males 2 weeks after operation(P<0.05).Compared with preoperative levels, serum NTX increased in all patients and serum BGP decreased in females 2 weeks after operation (P<0.05).Compared with males,postoperative change in NTX levels increased and postopera-tive change in BGP levels decreased in females (P<0.05 ).Compared with non-osteoporosis group,postoperative change in NTX levels increased and postoperative change in BGP levels de-creased in osteoporosisgroup(P<0.05).Conclusion Elderly patients with hip fracture,especial-ly female patients and osteoporosis patients,have accelerated bone metabolism and bone loss dur-ing the perioperative period.Therefore,the anti-osteoporosis treatment should be strengthened during the perioperative period in elderly patients with hip fracture.【期刊名称】《实用临床医学》【年(卷),期】2015(000)008【总页数】4页(P30-33)【关键词】髋部骨折;骨质疏松;骨代谢;Ⅰ型胶原交联 N末端肽;骨钙素;骨密度【作者】李经堂;汤晓正;熊龙;刘剑军【作者单位】江西省人民医院骨一科，南昌 330006;江西省人民医院骨一科，南昌 330006;江西省人民医院骨一科，南昌 330006;江西省人民医院骨一科，南昌330006【正文语种】中文【中图分类】R683;R446.1老年髋部骨折是骨科的常见疾病，由于其合并症多，疗效差，处理往往比较棘手。
Hif--1α和Hif--2α在骨关节炎模型中的表达及其意义的开题报告
Hif--1α和Hif--2α在骨关节炎模型中的表达及其意
义的开题报告
1. 研究背景
骨关节炎是一种常见的退行性骨关节病，主要在老年人中发生，并
且其发病率随着人口老龄化的加剧而不断上升。
目前，尚无治愈骨关节
炎的方法，因此寻找其发病机制和治疗方法十分必要。
近年来，一些研
究发现，Hif-1α和Hif-2α在骨关节炎的发生和发展中发挥重要作用，因此本研究旨在探讨这两种因子在骨关节炎模型中的表达及其意义。
2. 研究内容
本研究计划采用小鼠骨关节炎模型，并通过免疫组织化学、Western blot等方法检测Hif-1α和Hif-2α在模型组和对照组中的表达情况。
同时，对比模型组和对照组的临床表现和组织学变化，探讨Hif-1α和Hif-2α是
否与骨关节炎的发生、发展有关。
最后，可以进一步分析Hif-1α和Hif-2
α的信号通路，探讨针对这两种因子的治疗策略。
3. 研究意义
本研究有望为骨关节炎的发病机制和治疗提供新的思路和方向。
如
果能够证实Hif-1α和Hif-2α在骨关节炎中的作用，可能会有望开发新的
治疗方法，进一步提高骨关节炎的治愈率和生活质量。
另外，本研究将
深入探讨Hif-1α和Hif-2α的信号通路，有助于对这两种因子在其他疾病
中的作用有更深入的了解。
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万方数据
・５４９・
采用ｔ检验比较，数据分布情况采用箱形图表示。 ２结果
２．１
表２髋关节骨性关节炎患者不同病理参数Ｃｏｉ２ａｌ和
ＮＦＡＴＩ的ｍＩ讯Ａ和蛋白水平（ｉ±ｓ）
项目
ｍＲＮＡ Ｃ０１２ａｌ ＮＦＡＴｌ Ｃ０１２ｎｌ
量自
ＮＦＡＴｌ
两组Ｃｏｌ２ａｌ和ＮＦＡＴｌ的表达水平比较
关节炎组
年龄（岁）
≤６０
５
ｍｉｎ），取适量上清液与等体积２×上样缓冲液混合后，６５℃
孵育１０ ｍｉｎ后，经过ＳＤＳ—ＰＡＧＥ电泳后，转至ＰＶＤＦ膜上，５％ 软骨组织标本用于ｍＲＮＡ抽提和蛋白 脱脂奶粉封闭１ ｈ后，以一抗为１：５００的抗Ｃｏｌ２ｃｄ，ＮＦＡＴｌ一 抗抗体进行杂交，室温，１ ｈ，以ＴＢＳＴ充分洗膜３×５ ｍｉｎ后，加 入二抗（１：５ ０００）进行杂交，室温１ ｈ，以ＴＢＳＴ充分洗膜３×
Ｃｏｌ２ａｌ和ＮＦＡＴＩ的ｍＲＮＡ和蛋白水平均高于骨折组，除 ＮＦＡＴＩ的ｍＲＮＡ水平（Ｐ＜０．０５），其余均为Ｐ＜０．０１，见表ｌ和
图１、图２。
１．２７士０．３２
Ｉ．８６±０．２４
２
０．３４±０．１２ ０．８６±０．３７
２１
０．３ｌ±０．０９ ０．７８±０．２５２
＞６０
１．８２±０．５７ ２）２．７４±０．６１
１．２
环。结束后确认扩增和溶解曲线，以ＧＡＰＤＨ为内参，采用 ＡＡＣｔ法分析实时定量扩增的效果。Ｃｏｌ２ａｌ上游：５’一ＧＧＴＧＴ—
ＣＡＧＧＧＣＣＡＧＧＡＴＧＴ－３ ＣＡＧＧＴＦ一３
７；下游：５ ７一ＡＣＡＡＴＡＴＣＣＴＩ＇ＧＡＴＧＴＣＴＣ—
７。ＮＦＡＴｌ上游：５’．ＡＧＣＡＧＧＧＣＧＡＧＡＧＧＡＧＡＡＡＣ一３’；
下游：５，＿ＡＧＴＣＡＣＴＧＧＧＡＴＧＣＴＧＣＡＧＡＴ一３’。ＧＡＰＤＨ上游：５，＿ ＴＧＡＣＴＩ＂ＣＡＡＣＡＧＣＧＡＣＡＣＣＣＡ－３’；下游：５ ７一ＣＡＣＣＣＴＧＴＴＧＣＴＧ—
ＴＡＧＣＣＡＡＡ一３’。 １．５
Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检蛋白水平
以１：１０（重量／体积）加蛋
０００ ｒ／ｍｉｎ×
白裂解液，冰上匀浆处理，静置１ ｈ，高速离心（１２
性别
Ａ １ Ｃ０１２ａｌ ＮＦＡＴｌ Ｃ０１２ａｌ ＮＦＡＴｌ
男
１．５８±０．４６ １．６９±０．５２
２．５３±０．４７ ２．３８±０．３５
０．６１±０．１５ ０．７４±０．０９
０．５８±０．１５ ０．５１±０．１７
女
Ｔ
白自 百自
图ｌ
Ｔ
Ｔ
自
上
ＩＳＯＡ
自
白申
上
≤４ ＞４
１．３６±０．３６
２．１３士０．３６
两组关节软骨中Ｉ师ＡＴｌ和Ｃｏｌ２ａｌ表达水平
３讨论 Ｃ０１２ａ１与关节软骨形成及关节内成骨密切相关。异常机
ｃ。１２ａ
ｌ●—Ｉ●ｌ，●——◆●◆
骨折组 关节炎组
械应力和滑膜炎症可影响软骨基质的代谢平衡，导致关节软骨 表面的Ⅱ型胶原水平降低，同时机体会代偿性的增加深面Ⅱ型 胶原水平哺３。本研究提示关节炎患者软骨组织中的Ｃｏｌ２ｅｄ水 平上调，可能原因是关节炎患者的炎症反应导致软骨组织代偿
髋关节骨性关节炎是一种高致残疾病，主要特征是关节功 能减退并伴有疼痛…。骨关节炎的主要病理表现为软骨组织 退变和磨损，软骨损伤后很难修复¨ｏ，因此加快软骨组织修复 对治疗髋关节骨性关节炎意义重大。Ⅱ型胶原是关节软骨基 质胶原，由３条相同的Ⅱ型胶原ｄｌ链（ｃｏｌ２Ⅸ１）组成，是软骨组 织修复的基础拍３。关节炎是一种炎症因子介导的免疫反应¨。。 激活Ｔ细胞核因子１（ＮＦＡＴｌ）是一种与炎症相关的基因，可在 Ｔ细胞及其他免疫细胞中表达＂ｏ，因此推测其水平与关节炎的 发生发展有关。目前，对髋关节骨性关节炎软骨组织中ｃ０１２理１ 和ＮＦＡＴＩ的研究较少。因此本研究分析髋关节骨性关节炎的 Ｃｏｒａｌ和ＮＦＡＴｌ表达水平及Ｉ临床意义，为防治髋关节骨性关 节炎提供依据。
组织标本收集
提取两部分，均在本院的伦理委员会监督下进行组织标本收
通讯作者：王贵清（１９６９．），男，博士后，主任医师，主要从事关节外科 研究。 第一作者：芦北极（１９７５一），男，博士后，主治医师，主要从事关节外科 研究。
５
ｍｉｎ后，采用ＥＣＬ法曝光，内参为ＧＡＰＤＨ，并运用Ｑｕａｎｔｉｔｙ—
Ｏｎｅ软件进行光密度分析。最终结果表示为与ＧＡＰＤＨ条带光 密度的比值。 １．６统计学处理采用ＳＰＳＳｌ３．０软件，数据均以孑±ｓ表示，
隆抗体，美国Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ公司；ＧＡＤＰＨ、辣根过氧化物酶（ＨＲＰ） 标记鼠二抗、兔二抗单克隆抗体，武汉博士德生物技术公司；其 他试剂均为分析纯。Ｃｏｌ２Ａ１和ＮＦＡＴｌ引物均由Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公 司合成。
１．４
ＲＴ－ＰＣＲ法检测ｍＲＮＡ水平称取软骨标本１．２ ｇ，提取
总ＲＮＡ，采用分光光度计检测ＲＮＡ浓度与纯度。配制ＲＴ反 应液（反应在冰上进行），在如下条件进行反转录３７。Ｃ
ＧＡＰＤＨ
性地增加Ｃｏｌ２ｅｄ水平，来促进软骨组织的修复。这与Ｐｉｅｋａｒｓｋｉ 等‘¨在前交叉韧带切断和半月板切除诱导的骨性关节炎模型 中的发现一致，同时还发现损伤部位关节软骨和软骨下骨中的 血管浸润标记物ＶＥＧＦ和ＣＤ３１水平的上调。此外，也有相关 报道指出Ｃ０１２口１可改变软骨细胞表型，进而导致软骨矿物质 成分改变和钙化增厚，使关节炎症状恶化旧’。张雪莲等一１认为
集，具体步骤：取全髋关节置换后的手术废弃物，用刀片轻轻刮 除髋关节表层软骨，取髋关节股骨头负重区域的深层软骨。 １．３试剂ＲＮＡｌａｔｅｒ保存液，美国Ｓｉｇｍａ公司；Ｒｎｅａｓｙ
Ｔｉｓｓｕｅ
Ｆｉｂｒｏｕｓ
Ｍｉｎｉ
ｋｉｔ，德国Ｑｉａｇｅｎ公司；逆转录试剂盒、荧光定量ＰＣＲ
试剂盒，大连宝生物工程有限公司；Ｃｏｌ２ａｌ、ＮＦＡＴＩ鼠抗人单克
ＣｏＬ２ ｏ【ｌ和ＮＦＡＴＩ的ｍＲＮＡ和蛋白水平均高于股骨颈骨折患者，除ＮＦＡＴＩ的ｍＲＮＡ水平（Ｐ＜０．０５），其余均为Ｐ＜０．０１；髋关节骨性关节炎两指标的
ｍＲＮＡ和蛋白水平在年龄、类型、病程、关节炎严重性指数评分（ＩＳＯＡ）、Ｋ—Ｌ放射线分级及严重程度上有差异（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜Ｏ．叭），且在性别和侧 别上无统计学差异（Ｐ＞０．０５）。结论髋关节骨性关节炎软骨组织中Ｃｏｌ２ａｌ和ＮＦＡＴＩ的表达水平上调，且在多数病理参数分布上有差异，提示两 者在骨性关节炎软骨组织退变中起作用，可用于该疾病的诊断和治疗方案制订。 ［关键词］髓关节；骨性关节炎 ［中图分类号］Ｒ６８ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００５－９２０２（２０１３）０３．０５４８－０３；ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００５－９２０２．２０１３．０３．０２５
・５４８・
髋关节骨性关节炎软骨组织Ⅱ型胶原仪１链和激活Ｔ细胞核因子１的 表达水平及意义
芦北极王贵清刘春磊
［摘要］
（暨南大学附属清远医院骨科，广东
清远５１１５００）
目的探讨髋关节骨性关节炎软骨组织中Ⅱ型胶原ｑｌ链（ＣｏＥｎｌ）和激活Ｔ细胞核因子ｌ（ＮＦＡＴｌ）的表达水平及临床意义。方法
收集３６例髓关节骨性关节炎患者的软骨组织样本，采用ＲＴ—ＰＣＲ法检测Ｃｏｌ２ｅｄ和ＮＦＡＴｌ的ｍＲＮＡ水平，Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检测样本中两指标的蛋 白水平；分析不同病理参数的Ｃｏｌ２ｃｔｌ和ＮＦＡＴｌ的ｍＲＮＡ和蛋白水平。并选取同期的４０例股骨颈骨折患者作对照。结果髋关节骨性关节炎的
Ｃ０１２仅１和ＮＦＡＴＩ的ｍＲＮＡ水平在年龄、类型、病程、ＩＳＯＡ、Ｋ－Ｌ 放射线分级及严重程度上有差异，除Ｃｏｌ２ｅｄ的Ｋ－Ｌ放射线分 级（Ｐ＜０．０５），其余均为Ｐ＜０．０１；两指标ｍＲＮＡ水平在性别和 侧别上无统计学差异。见表２。
２．３
髋关节骨性关节炎不同病理参数的蛋白水平情况
Ｃｏｌ２ｅｄ和ＮＦＡＴＩ的蛋白水平在年龄、类型、病程、ＩＳＯＡ、Ｋ－Ｌ放 射线分级及严重程度上有差异，除Ｃｏｌ２ｅｄ的类型（Ｐ＜０．０５）， 其余均为Ｐ＜０．０１；两指标ｍＲＮＡ水平在性别和侧别上无统计 学差异。见表２。
８５℃５ Ｓ，４。Ｃ ４ １５ ｍｉｎ，
ｈ，将ｃＤＮＡ贮存于一２０。Ｃ冰箱中备用。对ｃＤ—
１材料与方法
１．１
ＮＡ模板进行优化，配置ＰＣＲ反应液，两步法ＰＣＲ扩增目的基
因。预变性：９５。Ｃ
３０
一般资料本院２０１１年６月至２０１２年６月骨科收治的
Ｓ；ＰＣＲ反应：９５。Ｃ
５ Ｓ，６０℃３０
Ｓ，４０个循
３６例髋关节骨性关节炎患者为关节炎组，其中男性２１例，女性 １５例；年龄４３～７７岁，平均（６５．１±７．５）岁，＞６０岁者１１例； 左侧１７例，右侧１９例；原发性４例，继发性３２例；病程为 （２．３±０．９）年，＞２年者１４例；关节炎严重性指数评分 （ＩＳＯＡ）≤４者１６例，＞４者２０例；Ｋ—Ｌ放射线分级：Ｉ＋Ⅱ级 者１４例；ＩＩＩ＋Ⅳ级者２２例；轻度ｌｏ例，中度１５例，中度１ｌ例。 并选取同期的４０例股骨颈骨折患者为骨折组，其中男性２３ 例，女性１７例；年龄４１～７５岁，平均（６４．８±１０．２）岁，＞６０岁 者１６例；左侧２５例，右侧１５例；骨折部位：头下型３１例，颈中 型７例，合并股骨头骨折２例。排除类风湿关节炎、肿瘤骨转 移及股骨头坏死者。
０．４６±０．２６
Ｏ．２８±Ｏ．０７
１．９１±Ｏ．６１ ２）２．６６±Ｏ．５４２）０．８３±０．１４¨０．８２±Ｏ．２２２
１．３３±０．３５
２．０７±０．４２
０．４４±０．１５
０．３ｌ士０．１２
与骨折组比较：１）Ｐ＜０．０５，２）Ｊｐ＜０．ＯＩ
＞２
１．８７±０．７３２）２．７３±０．６３２）０．９１±０．３２２）０．７７±０．２４２
０．３５±０．１２
０．３３±０．１０
１．８８±０．７５２）２．８０±０．７２２）０．７８±０．ＩＩ Ⅲ＋Ⅳ
１．４５±０．２６ １．９３±０．２６ ０．２７±０．０８ ０．３６±０．１２