Ⅱ型圆环病毒山东泰安株的分离鉴定及系统进化分析
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Ａｂｓｒ ｃ Ｗ ｉ ｈ ｅ ｐ ｏ ｎ ｉｅ ｔ ａ ｔ： ｔ ｔ ｅ ｈ ｌ ｆ ａ ｔｇ ｎ— ｃ ｐ ｕ ｅ ｅ ｚ ｍｅ—ｌｎ ｅ ｍｍｕ ｏ ｏ ｂ ｎ ｓ ａ ｎ ｏｙ ｒ ｓ ｈ ｉ ｅ ｃ ｈ ａ ｔｒ ｎ ｙ ｉｋ ｄ ｉ ｎ ｓ ｒ ｅ ｔａ ｓ ｙ ａ ｄ ｐ ｌ ｍｅ ａ ｅ ｃ ａ ｎ ｒ ａ —
一
Ｔ—Ｏ Ｆ 、ＭＤ ８一Ｔ—Ｏ Ｆ Ｒ １ｐ １ Ｒ ２和 ｐ １ ＭＤ ８一Ｔ—Ｐ Ｖ 。测 序结 果显示 ， Ｃ２ 所分离病毒的 Ｏ Ｆ 、 Ｒ ２和全基 因组序 Ｒ １Ｏ Ｆ
列长度分别 为 ９ ５ ｐ ７２ ｐ和 １６ ｂ 。Ｄ Ａ ｔｒ ４ ｂ 、０ ｂ ７ ７ ｐ Ｎ Ｓａ 生物学 软件 分析发 现 ， Ｃ ２分离 毒株与 参考 株 的全基 因组 同 ＰＶ
ｌ Ｓ０ＬＡ１１ ’０Ｎ ＡＮＤ ＤＥＮＴｌ ’ Ｉ 重Ｉ ＣＡＴｌ ０Ｎ ’ ｏ重 ＰＣ Ｖ２Ｓ ’ Ｄ１ Ａ Ｄ ＰＨ ＹＬｏＧＥＮＥＴｌ ＡＮＡＬＹＳＩ Ｃ Ｓ
ＬＯＵ ｏ ｇ— ｚ ，Ｗ ＡＮＧ ａ — ｈ Ｚｈ ｎ ｉ Ｔｉ ｎ ｕ，ＤＯＮＧ Ｌｉ—ｌ ｉ ＬＩ Ｓ ｎ ｎ， Ｕ ｉ—ｄａ ｇ ｎ
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山东农业大学学报 （ 自然科学版 ） ０ ７ ８ （ ） ０ ５ ４ ，２０ ，３ ４ ：５ ９— １
Ｊｕ ａ ｏ ｈ ｎ ｏ ｇＡ ｒ ｕｔ ａ Ｕ ｉ ｒｉ （ ａｕａ Ｓ ｉ ｃ ） ｏ ｒ ｌ ｆ ａ ｄ ｎ ｇ ｃ ｌ ｒｌ ｎｖ ｓ ｙ Ｎ ｔｒｌ ｃ ｎ ｅ ｎ Ｓ ｉ ｕ ｅ ｔ ｅ
Ⅱ型 圆环 病 毒 山东 安 株 的分 离 鉴 定 及 系统 进 化 分 析 泰
娄 忠子 王 天 户 董 李 民 刘 思 当 ， ， ，
（． １ 山东农业 大学 动物科技学 院基础 兽医系， ｊ 泰安 ２ １ １ ； ． Ｉ东 Ｊ ７ ０ ８ ２ 莱阳 市河洛镇兽医站 ， 山东 莱阳 ２ ５ ０ ） ６ ２ ０
ｃ ｌｓｗａ ｅｅ ｔｄ． ＤＮＡ ｅ ｌ ｔｓｆｏ ｔ ｅｌ ｒ ｘ ｒｃ ｅ ｎ ｓ ｄ ｔ ｍ ｐ ｉ ｅ ｌ ｓ ｄ ｔｃｅ ｔ ｍｐ ａｅ ｒ ｍ ｈｅｃ ｌｓｗｅ ｅ ｅ ｔａ ｔｄ ａ ｄ ｕ ｅ ｏ ａ ｌ ｙ ＯＲＦ１，ＯＲＦ ｎ ｈｅｗｈ ｌ ｆ ２ ａ ｄ ｔ ｏｅ ｇ ｎ ｍｉ ｅ ｕ ｎ ｅ，ＤＮＡ ａ ｄ ｆａ ｐ ｉｉａｉ ｎ ｐ ｏ ｕ ｔ ｂ ｕ ９ ｐ，７ ｂｐ ａ ｄ １ ７ｂ ｒ ｂ ａｎ ｄ． Ｔｈ ｅ ｏ ｃｓ ｑ ｅ ｃ ｂ ｎ ｓ ｏ ｍ ｌ ｃ ｔｏ ｒ ｄ ｃ ｓ ａ ｏ ｔ９ ９ｂ ｆ ４９ ｎ ７６ ｐ ｗｅ， 行 病 毒 基 因 组 １ 开 放 阅 读框 （ Ｒ １ 、 号 开放 阅 读 框 （ Ｒ ＇ 和 全 基 因 组 序 列 扩 增 ， 到 长 进 号 Ｏ Ｆ ）２ 、 Ｏ Ｆ） ２ 得
度分别约为 ９ ９ ｐ ７ ９ ｐ和 １６ ｂ 右 的产物条带 。将 产物 克隆到 ｐ １ ９ ｂ 、４ ｂ ７ ７ ｐ左 ＭＤ ８一Ｔ载体 上， 构建 重组质粒 ｐ ＭＤ１ ８
ｂ ＣＶ１ ｏ ｉｏａ ｅ ＰＣＶ２。 Ｓ ｃ ｅ ｓｕ ｌ ｔａｎ ｏ ｙＰ ｔ ｓ ｌｔ ｕ ｃ ｓ ｆ ｌ ａ ｓｒ ｉ ｆＰＣＶ２ ｎ ｍｅ ｙ ａ ｄ ＰＣＶ２ｓ ｔｗａ ｂ ａｎｅ ｄ ｓｏ ｔ ｉ ｄ． Ａｆｅ ｈ ｎ ｃ ｌｔｏ ｆ ｔ ｒｔ ｅ ｉ ｏ ｕ ａｉ ｎ ｏ
摘要 ： 采用双抗体夹 心 Ｅ ＩＡ方法和 Ｐ Ｒ技术 对来 自山东泰 安的病猪组织 病料进行猪 Ⅱ型 圆环 病毒 （ Ｃ ２ 检 ＬＳ Ｃ ＰＶ ） 测。将检测为 阳性 的病料悬 液接种无 Ｐ Ｖ Ｃ １污染的 Ｐ Ｋ一１ ５细胞进 行病 毒分 离 ， 得 一株 Ｐ Ｖ ， 获 Ｃ ２ 命名为猪 Ⅱ型 圆环病毒 山东泰安株 （ Ｃ ２ｄ ） Ｐ Ｖ ｓｔ 。问接免疫荧光试验 （Ｆ 检测可 见接种 病毒细胞 中散在 特异性荧光 。提取全 ＩＡ）
ｖ ｕ ａ ｐｅ ｉｄｒｃ ｆ ｏｅｃ ｎ ａ ｔ ｏｙ （Ｆ ｉ ｓｓｍ ｌ ， ｎ ｉ ｔ ｕ ｒ ｅ ｔ ｎｉ ｄ ＩＡ）ｍｅ ｏ ａ ｓｄ ｔ ｆ ｄ ｔｅｅ ｅｔ ｎ ｕｒｓｅｃ ｎｔｅ ｒ ｅ ｌ ｓ ｂ ｔ ｄｗ ｓｕ ｅ ｏｉ ｈ ｆ ｃ，ａｄ ｆ ｏｅｃ ｎｅｉ ｈ ｈ ｎ ｆ ｌ
源 性 介 于 ９ ．％ ～ ８ ８ 之 问 ， Ｒ １的 同 源 性 介 于 ９ ． ％ ～９ ． ％ ， Ｒ ２ 的 同 源 性 略 低 ， 于 ９ ． ％ ～ ８ ５４ ９ ．％ Ｏ Ｆ ７０ ８８ Ｏ Ｆ 介 １９ ９．
４ 之 间。 ％
关 键 词 ： Ⅱ型 圆 环 病 毒 ；双 抗体 夹 心 Ｅ Ａ； Ｃ 病 毒 分 离 ； 猪 １Ｓ Ｐ Ｒ； Ｉ 间接 免 疫 荧 光 试 验 中 图分 类 号 ：８２ ６ １ ￥５ ．５ 文 献 标 识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ ０—２２ （ ０ ７ ０ ０ ０ １０ ３ ４ ２ ０ ）４— ５９—０ ５
ｃ ｖｒ ｓｔｐ （ Ｃ ｏ ｉ ｙ ｅ２ Ｐ Ｖ２） ｈ ｏ ｉｖ ａ ｌｓｗ ｒ ｒ ａｅ ｎ ｈ ｎ ｉｏ ｕａｅ Ｋ一１ ｉｈ ｗａ ｏ ｐ ｌ ｔｄ ｕ ．Ｔ ｅ ｐ ｓｔ ｅ ｓｍｐｅ ｅｅｔｅ ｔｄａ ｄ ｔｅ ｎ ｃ ｌｔｄ Ｐ ｉ ｗｈｃ ｓｎ ｔ ｏｌ ｅ ５ ｕ
（ ｏｌ ｅｏ ｎｍ ｌ ｃｅｃ ｎ ｅｅ ｎｒ Ｍｅｉｉｅ ｈｎ ｏｇＡ ｒ ｕ ｎａ Ｕｎｖｒｉ ， ａ ｎ２ １ １ ， ｈｎ ） Ｃｌ ｇ ｆ ｉ ａ Ｓ ｉ ‘ ａｄＶ ｔｉａ ｄｃｎ ，Ｓ ａｄ ｎ ｇｉ ｈ ｒｌ ｉｅｓｙ Ｔ ｉ ７０ ８ Ｃ ｉａ ｅ Ａ ｎｅ ｒ ｙ ｃ ｔ ａ
Ａｂｓｒ ｃ Ｗ ｉ ｈ ｅ ｐ ｏ ｎ ｉｅ ｔ ａ ｔ： ｔ ｔ ｅ ｈ ｌ ｆ ａ ｔｇ ｎ— ｃ ｐ ｕ ｅ ｅ ｚ ｍｅ—ｌｎ ｅ ｍｍｕ ｏ ｏ ｂ ｎ ｓ ａ ｎ ｏｙ ｒ ｓ ｈ ｉ ｅ ｃ ｈ ａ ｔｒ ｎ ｙ ｉｋ ｄ ｉ ｎ ｓ ｒ ｅ ｔａ ｓ ｙ ａ ｄ ｐ ｌ ｍｅ ａ ｅ ｃ ａ ｎ ｒ ａ —
一
Ｔ—Ｏ Ｆ 、ＭＤ ８一Ｔ—Ｏ Ｆ Ｒ １ｐ １ Ｒ ２和 ｐ １ ＭＤ ８一Ｔ—Ｐ Ｖ 。测 序结 果显示 ， Ｃ２ 所分离病毒的 Ｏ Ｆ 、 Ｒ ２和全基 因组序 Ｒ １Ｏ Ｆ
列长度分别 为 ９ ５ ｐ ７２ ｐ和 １６ ｂ 。Ｄ Ａ ｔｒ ４ ｂ 、０ ｂ ７ ７ ｐ Ｎ Ｓａ 生物学 软件 分析发 现 ， Ｃ ２分离 毒株与 参考 株 的全基 因组 同 ＰＶ
ｌ Ｓ０ＬＡ１１ ’０Ｎ ＡＮＤ ＤＥＮＴｌ ’ Ｉ 重Ｉ ＣＡＴｌ ０Ｎ ’ ｏ重 ＰＣ Ｖ２Ｓ ’ Ｄ１ Ａ Ｄ ＰＨ ＹＬｏＧＥＮＥＴｌ ＡＮＡＬＹＳＩ Ｃ Ｓ
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山东农业大学学报 （ 自然科学版 ） ０ ７ ８ （ ） ０ ５ ４ ，２０ ，３ ４ ：５ ９— １
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Ⅱ型 圆环 病 毒 山东 安 株 的分 离 鉴 定 及 系统 进 化 分 析 泰
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源 性 介 于 ９ ．％ ～ ８ ８ 之 问 ， Ｒ １的 同 源 性 介 于 ９ ． ％ ～９ ． ％ ， Ｒ ２ 的 同 源 性 略 低 ， 于 ９ ． ％ ～ ８ ５４ ９ ．％ Ｏ Ｆ ７０ ８８ Ｏ Ｆ 介 １９ ９．
４ 之 间。 ％
关 键 词 ： Ⅱ型 圆 环 病 毒 ；双 抗体 夹 心 Ｅ Ａ； Ｃ 病 毒 分 离 ； 猪 １Ｓ Ｐ Ｒ； Ｉ 间接 免 疫 荧 光 试 验 中 图分 类 号 ：８２ ６ １ ￥５ ．５ 文 献 标 识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ ０—２２ （ ０ ７ ０ ０ ０ １０ ３ ４ ２ ０ ）４— ５９—０ ５
ｃ ｖｒ ｓｔｐ （ Ｃ ｏ ｉ ｙ ｅ２ Ｐ Ｖ２） ｈ ｏ ｉｖ ａ ｌｓｗ ｒ ｒ ａｅ ｎ ｈ ｎ ｉｏ ｕａｅ Ｋ一１ ｉｈ ｗａ ｏ ｐ ｌ ｔｄ ｕ ．Ｔ ｅ ｐ ｓｔ ｅ ｓｍｐｅ ｅｅｔｅ ｔｄａ ｄ ｔｅ ｎ ｃ ｌｔｄ Ｐ ｉ ｗｈｃ ｓｎ ｔ ｏｌ ｅ ５ ｕ
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