双歧杆菌与乳酸菌筛选培养基

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产细菌素双歧杆菌的筛选及其分泌条件研究_尚楠

产细菌素双歧杆菌的筛选及其分泌条件研究尚楠，王洋，任发政，李平兰*(中国农业大学食品科学与营养工程学院，北京100083)摘要：以32株我国广西巴马长寿老人源双歧杆菌为材料，以植物乳杆菌PL-2为指示菌，经筛选获得1株具有明显抗菌效果的双歧杆菌L-SN 。

排除有机酸、H 2O 2等干扰因素，经硫酸铵沉淀粗提，蛋白酶敏感性实验后确定其产生的抗菌物质为细菌素。

通过形态学、生理生化以及16S rRNA 序列分析鉴定菌株L-SN 为动物双歧杆菌乳亚种(Bi ﬁ dobacterium animalis subsp . lactis L-SN)。

进一步研究菌株L-SN 产细菌素的生物学特性，确定其最佳分泌细菌素条件为起始pH6.5、培养温度30℃、培养时间28h 。

在此基础上，考察菌株L-SN 所产细菌素的抗菌谱，发现其具有广谱的抗菌效果，尤其对金黄色葡萄球菌、单增李斯特氏菌等致病菌有显著的作用，显示出该双歧杆菌的潜在开发应用前景。

关键词：双歧杆菌；筛选；细菌素；分泌特性Screening of Bacteriocin-producing Bi ﬁdobacterium Strain and Culture Coditions for Bacteriocin Secretion SHANG Nan，WANG Yang，REN Fa-zheng，LI Ping-lan *(College of Food Science and Nutritional Engineering, China Agricultural University, Beijing100083, China)Abstract ：Bi ﬁ dobacterium L-SN capable of producing an antimicrobial substance that was effective against Lactobacillus plantarum PL-2 was screened from 32 strains of Bi ﬁ dobacterium isolated from the feces of centenarians in Bama county of Guangxi region. By eliminating the effects of organic acid and H 2O 2, we con ﬁ rmed the antimicrobial role because of bacteriocin. Based on morphological, physiological and biochemical characteristics and 16S rRNA sequence analysis, the strain L-SN was identi ﬁ ed as Bi ﬁ dobacterium animalis subsp. lactis . We investigated the secretion characteristics of Bi ﬁ dobacterium animalis L-SN and established the optimum incubation conditions for producing bacteriocin: 28 h of culture at 30 ℃ and initial medium pH 6.5. The bacteriocin had a wide spectrum of antibacterial activities against Gram-positive and Gram-negative bacteria, especially against Staphylococcus aureus , Escherichia coli and Listeria monocytogenes showing a potential application prospect.Key words ：Bi ﬁ dobacterium ；screening ；bacteriocin ；secretion characteristics 中图分类号：Q 936 文献标志码：A 文章编号：1002-6630(2013)23-0170-06doi:10.7506/spkx1002-6630-201323036收稿日期：2013-09-21基金项目：国家自然科学基金项目(31071591)作者简介：尚楠(1990—)，女，硕士研究生，主要从事益生菌的研究。

乳酸菌检验原始记录

乳酸菌检验原始记录（平板计数法）4结果表述1 .若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（m1）样品中菌落总数结果。

2 .若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按式（1）计算。

N= --------------------（.+o.ι%）d式中：N一一样品中菌落数；ΣC——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；nι一一第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；n2一一第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；d——稀释因子（第一稀释度）。

3 .若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU,则对稀释度最高的平板进行计数,其他平板可记录为多不可计,结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。

4 .若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

5 .若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。

6 .若所有稀释度的平板菌落数均不在30CFU-300CFU之间，其中一部分小于30CFU或大于300CFU时，则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

计算过程：方法复核日期报告1 .菌落总数小于Ioe）CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。

2 .菌落总数大于或等于100CFU时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，采用前2位数字，后面用。

代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五人”原则修约后，采用两位有效数字。

3 .称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CF∪∕m1为单位报告。

报告人报告日期复核人。

婴儿粪便中益生菌的分离筛选及培养

婴儿粪便中益生菌的分离筛选及培养作者：郑丽君吴秀英李洪亮来源：《农产品加工·上》2019年第04期摘要：采用从婴儿粪便中提取具有益生作用的菌种，为下一步的研究开发做乳酸菌种库做积累。

选取河南省洛阳市 5位志愿者进行样品采集，得到5份完全由母乳喂养的婴儿（2月龄）自然排出的粪便样，并分离纯化出5株乳酸菌（RS1， RS2，RS3，RS4，RS5）和5株双歧杆菌（SQ1，SQ2，SQ3，SQ4，SQ5），经鉴定，确定RS3和SQ1具有益生作用的。

结果表明，此2株菌具有较好的耐酸性、胆盐耐受力，对温度敏感，对模拟胃液和肠液具有较强的耐受力，且对大肠杆菌、沙门氏菌具有95%以上的抑菌率，可作为优良的益生菌候选菌种。

关键词：婴儿粪便；乳酸菌；双歧杆菌；分离鉴定中图分类号：S852.6 文献标志码：A doi：10.16693/ki.1671-9646（X）.2019.04.003Isolation and Cultivation of Probiotics from Infant FaecesZHENG Lijun，WU Xiuying，LI Hongliang，SUN Tao（Inner Mongolia Mengniu Dairy Industay（Group）Co.，Ltd，Huhot，Inner Mongolia 011517，China）Abstract：Along with increased recognition of the probiotics， however， the basic mechanism of probiotics hasn't been completely unified up to now，which needs further research and analysis. The purpose of this study was to isolate probiotic strains from the feces of infants，and to lay the foundation for constructing the library of probiotics next step. Five natural excrement samples were collected from full breastfeeding babies（2 months）of Luoyang He'nan，five Lactic acid bacteria （RS1，RS2，RS3，RS4，RS5）and five Bifidobacterium（SQ1，SQ2，SQ3，SQ4，SQ5）were isolated after purification. Furthermore，two strains（RS3，SQ1）were characterized to have probiotic function. The results showed that these two strains were well resistant to acid and bile condition，sensitive to temperature，and highly tolerant to simulated gastric and intestinal fluid. In addition，up to 95% E. Coli and Salmonella were inhibited by these two strains. Based on their phenotypic characteristics，（RS3）and（SQ1）can be excellent candidates of probiotics library.Key words：baby faeces；Lactobacillus；Bifidobacterium，；isolation and identification0 引言益生菌是一類可以对宿主细胞起到有益作用的活性微生物，定植在人体肠道和生殖系统中[1]，分为乳酸菌类、双歧杆菌类、革兰氏阳性双歧杆菌。

双歧杆菌与乳酸菌筛选培养基

BBL培养基双歧杆菌选择性培养基成份蛋白胨酵母粉葡萄糖可溶性淀粉氯化钠5%半胱氨酸西红柿浸出液吐温80肝提取液琼脂蒸馏水MRS培养基乳酸细菌培养基（MRS）蛋白胨 g牛肉膏 g酵母膏 g柠檬酸氢二铵[（NH4）2HC6H5O7] g葡萄糖(C6H12O6·H2O) g吐温80 mL乙酸钠（CH3COONa·3H2O） g磷酸氢二钾（K2HPO4·3H2O） g硫酸镁（MgSO4·7H2O） g硫酸锰（MnSO4·H2O） g琼脂 g蒸馏水 1 000 mLpH ~当乳酸菌生长代谢出乳酸后，会使pH下降而使颜色由绿变为黄绿，也由于pH值降低再加上抗生素及厌氧培养的作用，所以一般的微生物不容易在此培养基上生长，因此十分容易鉴别乳酸菌。

2005-03-10 08:08 消息引用收藏分享奉上一篇实验，以供参考！厌氧菌的分离和培养目前培养厌氧微生物的简便而又有效的技术包括有：厌氧箱培养技术；厌氧罐培养技术；厌氧袋培养技术；亨盖特厌氧滚管技术。

这里介绍的是亨盖特厌氧滚管技术。

亨盖特厌氧滚管技术是美国微生物学家亨盖特（Hungate）于1950年首次提出并应用于瘤胃厌氧微生物研究的一种厌氧培养技术。

以后这项技术又经历了几十年的不断改进，从而使亨盖特厌氧技术日趣完善，并逐渐发展成为研究厌氧微生物的一整套完整技术。

而且多年来的实践已经证明它是研究严格、专性厌氧菌的一种极为有效的技术。

亨盖特厌样滚管培养技术不仅可用于有益厌氧菌如双歧杆菌等的分离、与活菌培养计数，还可以用于有害***菌（如酪酸菌）或病原菌（如肉毒梭状芽孢杆菌）的分离与鉴定。

1材料样品双歧酸奶（液体）、双歧杆菌制剂（固体）。

培养基改良MRS培养基，PTYG 培养基。

仪器和器具亨盖特厌氧滚管装置一套，厌氧管，厌氧瓶，滚管机，定量加样器。

2 流程铜柱除氧→预还原培养基→稀释用液制备→稀释样品→滚管→培养→计数3方法铜柱系统除氧铜柱是一个内部装有铜丝或铜屑的硬质玻璃管。

乳酸菌和双歧杆菌制剂对小鼠肠道菌群失调模型的调节作用

第１３卷
第１６期
２０１３年６月
科
学
技
术
与
工
程
Ｖｏ１．１３Ｎｏ．１６Ｊｕｎ．２０１３
１６７１ —１８１５（２０１３）１６－４４９７ — ０４
ＳｃｉｅｎｃｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
于选择肠球菌；乳酸杆菌选择培养基（ＭＲＳ）用于
菌、乳酸菌、双歧杆菌的菌落数，并以每克盲肠内容物中菌落数的常用对数表示。
１．３．４双歧杆菌和乳酸杆菌的调节治疗
选择乳酸杆菌；双歧杆菌选择培养基（ＢＢＬ）选择
后，检测被检菌群的数量。结果不同剂量头孢曲松钠灌胃的小鼠盲肠体积均有所增大，模型组的优势菌的数量显著减少。通
过口服乳酸菌和双歧杆菌制剂，可以适当的恢复乳酸菌和双歧杆菌的数量。与对照组比较差异显著。说明实验成功地制备了小鼠的肠道菌群失衡模型，模拟长期应用抗生素的机能环境，通过外源性的补充乳酸菌和双歧杆菌，对保持肠道菌群的平衡具有调节和修复作用。
关键词
乳酸菌
双歧杆菌
抗生素文献标志码
菌群失调Ｂ
中图法分类号
１１３７８．９１；
哺乳动物肠道内存在数量庞大、结构复杂的正常菌群，对宿主具有营养、免疫和生物拮抗等作

双歧杆菌和乳酸菌的一种简便快速计数法

双歧杆菌和乳酸菌的一种简便快速计数法/Lf/微生7l,)双歧杆菌和乳酸菌的一种简便快速计数法(复美军互磊,和微生物:j=海南433)|一3当前,含双歧杆菌和乳酸菌的各种微生态调节剂正在国内外迅速发展''为确保这类制剂的质量,活菌计数极其重要可是,由于这两类细菌都是厌氧菌,在计数方法上需要特殊的设备和较复杂的操作技术,因此现有方法还很不理想.我们根据高层半固体琼脂培养基具有良好厌氧性能的原理在必要的条件试验基础上,提出了一种适用于双歧扦菌和乳酸菌等不产气厌氧菌的简便快速活菌计数法(下称本法),现简报如下.l材料和方法.1l菌种两歧双歧杆菌(Bifidobacteriumb~dum)A TCC29521菌株(由美国UMDNJ的J.Fu教授喜赠):青春双歧杆菌(B.adolescentis)FTB[菌株r由本实验室自国内纯菌产品中分得):嗜酸乳扦菌(Lactobacillusacidophilus)FALA菌株(由本实验室自国外纯菌胶囊中分离).1.2培养基VL琼脂培养基:按文献【3]方法配制:MRS培养基和LAB培养基:按文献[4】方法配制.2结果2I本法的操作步骤和实验条件操作步骤如图IIImIImIImlhnlImli图I用高层半固体琼脂试曾进行系列稀释l试样:2装有玻璃珠和99mi生理盐水的250ml血浆瓶(预先煮沸除氧):3.9ml高层半固体培养基(未凝前)经试验,本法的最适琼脂谁度为O.3%～O4%:稀释时,用吸管上下轻搅3～5敬{不能产生气泡)培养温度为37℃;培养时间一般为16～24h(不超过36h),稀释度以每管菌落数在30～300为宜/一,I∑】xl0/9计算公式为:活菌数(个/m1)='-一×稀释倍数:用来计数的试管数:N:不同试管中所长的菌落数.上悔市高拉科技发展基垒项目.微生物学专业1995届本科生严二平和孙刚曾参加部分实验1996届硕士研究生.本文于1995年7月26H收到.1期马向前等:双歧杆菌和乳酸苗的一种简便快速计数法63由于在此法中,稀释管和计数管是同一试管,所以计数时应注意两点,一是因每支试管在混匀后都要吸出Ina].最后均为9ml,所以应乘以10/9才能表示每毫升菌液实际含苗落数;二是后稀释度的试管中长出的菌落数实为前一稀释度每毫升的活菌数,所以在乘稀释倍数时切忌出错22本法与其他方法的比较本法与平板厌氧罐培养法通用乳酸菌计数法比较的结果见表1表l本法与其f酉涪的比较注:双歧杆菌用VL琼脂培养基培养.乳酸菌和酸奶样品用MRS培养基培养.从表I可以看出,本法与常规的两种计数方法相比,既简便又快速,而且活菌检出率也高,所以在以下实验中,均采用本法2.3最适培养基的选择对用于双歧杆菌或乳酸菌计数的三种培养基进行比较,结果见表2.表2不同培养基对计数结果的影响表3若干含双歧扦茁和乳酸茁商品中的活菌数微生物37卷从表2可看出,无论对双歧杆菌(ATCC2952I,FTBI),还是对乳酸菌(FALA,酸奶中的乳酸菌),都以LAB的检出率为高,故在以下试验中均采用LAB.2,4各商品中所台双歧杆菌和乳酸菌数的捡测为检验本法的实际效果,我们对市售商品(包括国外产品)进行了活菌检测,结果见表3.3讨论双歧杆菌和乳酸菌的传统计数法主要包括试样分散一系列稀释一滁布或倾注平板一厌氧培养菌落计数五步操作,由此必然带来设备特殊,操作繁琐和耗时费力等缺点本文作者在验证了高层半固体琼脂培养基具有良好厌氧性能的基础上,提出了集稀释(凝固前)和计数(凝固后)于周一试管的设想,使禚菌计数只需试样分散一系列稀释+常规培养一菌菇计数三步经试验,证明它但可省略厌氧培养装置和简化许多操作,而且还有明显缩短培养时间等优点,因此,这是一种有较高应用价值的计虬参考文献…1康自微生态学原理大连:大连出版社,1996131～144【2】周德庆微生物学教程.北京:高等教育出版社,1993200.f]】RasicJLKurmannJABilidobacrmandTheirRole.BirkhauserV eflag,BaselBostonStuttgart ,I983144～158.1O～17Il许率发.李宏建,柴金贞酸奶和乳酸菌饮料加工.北京:中国轻工业出版社,19941～169[5】赵国屏,周德庆微生物学通报.1984,II(I):26--29 ASIMPLERANDFASTERMETH0DFORENUMERA TING BIFIDoBACTERIAANDLA(1lCACIDBACTERIA MaXiangqianZhouDeqing(Depc~tmeniM/cro6/dogvandM砌B/oted'~/ogv.FudanUmters/r),,s蜘21)0433) AbstractAnewmethodiSreportedfortheenumerationofbindobacteriaandlactJcacid bacteriawhichdon'tproducegas.Theadvantagesofthismethodare:(1)simcity——the tIlbewhichcontainshighlayer$emi-solidhastwofunctions:dilutionandenumeration.so theoverelaborateenumerationprocedurebyusingplatecanbeabolished;theins~umentfor anaerobiccultivationandrelatedoperationcanbeomittedbecauseofthegoodanaerobic propertyofhighlayersemi-solidagartube.(2)rapidity-—一山ecountingofbifidobacteria andIactieacidbacteriacanbedoneafterincubationabout16～24hifweu9ethismethod, WhileinthetraditionaIplatemethod,48～72haleneeded.(3)preciseness--countsof bifidobacteriaorlacticacidbacteriaaresimiLartoorhigherthanthatofthetraditionalD1ate method.WehadmeasuredtheviablecountofbifidobacteriaandIactieacidbacteriain commercialprobioticsandyogurtsbyusingthismethod.KeywordsSemi-solidagarmedium,Enumeration,Bifidobacterh~cticacidbacteria。

乳酸菌的制作原理

乳酸菌的制作原理
乳酸菌的制作原理是指利用合适的培养基和条件培养乳酸菌菌株，使其产酸和生长，最终得到活性乳酸菌产品的过程。

乳酸菌的制作过程可以分为以下几个步骤：
1. 菌株的选取：乳酸菌菌株的选择通常基于其对人体有益的特性，如抗菌作用、免疫调节功能等。

常见的乳酸菌菌株包括嗜酸乳杆菌、双歧杆菌等。

2. 培养基的准备：选择合适的培养基是保证乳酸菌生长和繁殖的重要条件。

常用的培养基包括牛乳、乳清、大豆蛋白等，其中添加了一定的碳水化合物作为乳酸菌的能量来源。

3. 接种和培养：将选取的乳酸菌菌株接种到准备好的培养基中，然后在适当的温度和湿度下进行培养。

乳酸菌通常适合在温度为35-40摄氏度的环境中进行培养，而pH值在
4.5-6.5之间是
乳酸菌最适宜的生长条件。

4. 发酵和产酸：培养一段时间后，乳酸菌会开始进行发酵作用，将培养基中的碳水化合物转化为乳酸。

乳酸的积累会降低培养基的pH值，创造出适宜乳酸菌生长的环境。

5. 停止发酵和分离：发酵达到一定程度后，需要停止发酵过程。

通常通过改变培养条件或者降低温度来停止发酵。

然后通过离心、过滤等方法将乳酸菌分离出来。

6. 产品加工和包装：分离出的乳酸菌经过适当的处理和加工，如冻干、稳定剂添加等，最终制成乳酸菌产品。

然后将其进行严格的检验，包装并储存，以保持其活性和稳定性。

总之，乳酸菌的制作原理是通过选择适宜的菌株和培养条件，促使乳酸菌进行发酵作用并产酸，最终得到高活性的乳酸菌产品。

乳酸菌、双歧杆菌检验培养基

改良番茄汁培养基Tomato Juice Agar,Modified 用途：用于食品中乳酸菌总数测定改良MC培养基Chalmers Agar ,Modified 用途：用于食品中乳酸菌总数测定MRS琼脂MRS Agar Base 用途：用于食品中乳酸菌总数测定LBS琼脂LBS agar 用途：用于乳酸菌检测和分离培养BLB培养基BLB Modified 用途：用于双歧杆菌的分离培养改良的M17培养基M17培养基是酸奶中嗜热链球菌计数的重要培养基,它也是从酸奶或牛奶中分离嗜热链球菌的常用培养基。

配方：胰蛋白胨5.0g、鱼蛋白胨5.0 g、牛肉膏5.0 g、酵母浸膏2.5 g、抗坏血酸0.5g、硫酸镁0.25g、甘油10.0g、乳糖3.0g、磷酸二氢钾5.0g、琼脂11.0 g、蒸溜水lL，用NaOH调节pH至6.9，121℃蒸汽灭菌15min。

乳酸杆菌选择性琼脂Lactobacillus Selective Agar用途：用于乳酸杆菌检测和分离培养APT琼脂APT Agar用途：用于乳酸菌分离培养BL琼脂培养基BL Agar Medium 用途：用于双岐杆菌分离培养（GB标准）BBL琼脂培养基BBL Agar Medium 用途：用于双岐杆菌分离培养（GB标准）TPY琼脂培养基TPY Agar Medium 用途：用于双岐杆菌分离培养（GB标准）PYG液体培养基基础PYG Broth Medium Base用途：用于双岐杆菌增菌培养，使用时需加入氯化血红素和维生素K1（GB标准）MC培养基MC Medium 用途：用于食品中乳酸菌检测的肉汤APT Broth用途：用于异质发酵乳酸杆菌和其它需高含量盐酸硫酸胺素菌的培养。

乳酸杆菌肉汤培养基Lactobacillus broth Medium用途：用于乳酸杆菌增菌培养MRS肉汤MRS Broth 用途：用于乳酸菌增菌培养双歧杆菌BS培养基Bifidobacterium BS Medium 用途：用于双歧杆菌分离培养。

用于肠道中的乳酸菌和双歧杆菌研究的分子生物学技术

对dgge谱图进一步分析也可以发现不同人群的结肠黏膜上的双歧杆菌的谱图较简单但是乳杆菌的谱图比较复杂并且不同的个体以及取样部位不同谱图也不一样18另一个dna指纹技术末端限制性片段多态性分析技术trflp已用来研究肠道中labb及种群的优势并且已建立了对人体粪便微生物进行trflp分析的数据库padhcm这个数据库可以在种的水平上对末端限制性片段进行预测
ＡｃｄＢａｔｒａｎｄＢｉｄｏａｔｒａｉｃｅｉａｆｂｃｅｉｉ
ＳｎＦｕｈｎ，ＺｈｎＬｎｉｕｃｕａｇａｗｅ
（ｏｄＣｌｇ，ＮｒｅｓＡｒｕｔｒｌＵｉｒｔ，Ｈｒｉｏｅｌｎｊｎ５００．Ｃｉａ１ＦｏｏｅｅｏｔａｔｇｉｌａｎｖｓｙａｂｎｆＨｉｇａｇ１０３，ＰＲ．ｈｎ；ｌｈｃｕｅｉｏｉ
维普资讯
《乳业科学与技术》
２００７年第４期
（总第１５期）２
１１９
综述与专题评论
、ｓ
用于肠道中的乳酸茵和双歧杆菌研究的分子生物学技术
孙福春，张兰威
（东北农业大学食品学院，１黑龙江哈尔滨１０３；２哈尔滨工业大学食品科学与工程学院）５００
Ｋｅｒｓａｔｃｄｂｃｅｉ；ｂｆｏａｔｒａ１Ｓｒｙｗｏｄ：ｌｃｉａｉａｔｒａｉｄｂｃｅｉ；ＲＮＡｅｅｃｉ６ｇｎ
乳酸菌包括乳杆菌属、球菌属、球菌属、链乳肠球菌属、串珠菌属、明片球菌属、魏斯氏菌属等，

实验方案(双歧杆菌的分离)

1 双歧杆菌的分离1.1 样品取出生后20天母乳喂养健康婴儿粪便。

1.2 培养基根据目前的双歧杆菌选择性培养基，以及X-Gal在这方面的应用。

选择使用NPNL培养基，在其基础上添加X-Gal。

1.2.1 缓冲蛋白胨水溶液（BP）成份：蛋白胨10g 磷酸氢二钠2g葡萄糖5g 磷酸二氢钾2g氯化钠5g 蒸馏水1000ml制法：精确称取各种试剂，加人到1000ml的蒸馏水中，加热溶化后分装于250ml的三角瓶中，每瓶90ml，121℃，杀菌15min后置4℃的冰箱中备用。

1.2.2 选择性改良NPNL培养基（苏世彦）成份：酵母膏5g 淀粉0.5g蛋白胨10g L-半胱氨酸0.5g胰蛋白胨5g 溶液A 10ml大豆蛋白胨5g 溶液B 5ml葡萄糖10g 溶液C 50ml乳糖3g 琼脂 15g吐温80 1g pH 7.2牛肝提取液150ml制法：将各成分准确量取后，分别加热溶化，混合摇匀后分装，121℃杀菌10min，备用。

溶液A：K2HPO4 10g、KH2PO4 10g溶于蒸馏水100ml。

溶液B：FeSO4·7H2O 0.2g、MgSO4·7H2O 4g、MnSO4·4H2O 0.135g、NaCl 0.2g溶于蒸馏水100ml。

溶液C：丙酸钠30g、硫酸巴龙霉素400mg、硫酸新霉素200mg、NaCl 6g溶于蒸馏水1000ml。

1.2.3 NPNL培养基(孙雪)培养基成分及用量：牛肉浸汁粉(oxoid)3g，蛋白胨10g，胰蛋白酶5g，植胨3g，酵母浸出汁5g，肝浸出汁150ml，葡萄糖10g，可溶性淀粉0.5g，溶液A 10ml，溶液B 5ml，吐温80 1g，盐酸半胱氨酸0.5g，琼脂15g，蒸馏水815ml，X-Gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D- 半乳糖苷)60mg。

pH 7.2，121℃，15min 高压灭菌。

溶液A：K2HPO425g，KH2PO425g，蒸馏水250ml。

乳酸菌的连续培养(双歧杆菌)

人体肠道中双歧杆菌的数量随年龄而异，在母乳喂养的初生婴儿的肠道中最多，几乎达到肠道总细菌量的99%以上，它起着保卫婴儿健康的作用。随着年龄的增长，肠道中双歧杆菌的数量逐渐减少，而产气荚膜梭状茵、大肠杆菌等有害腐败细菌逐渐增加。进入老年时，双歧杆菌的比例降到很低，肠道中大量充斥着腐败细菌，而病人和身体衰弱的人，其肠道环境也与老人相仿，但健康长寿的老人，他的肠道环境则与青壮年无异，双歧杆菌多而腐败菌少。
连续培养(continuous culture)
蠕动泵
无氧空气管道
除氧装置
培养基储瓶
取样处反应器
溢流管
无氧空气
温控仪（38℃） pH控制仪（6.0）搅拌器
培养物收集瓶
谢谢观赏
ห้องสมุดไป่ตู้
能控制内毒素血症和防治便秘，预防贫血和佝偻病；
可降低亚硝胺等致癌物前体的形成，有防癌和抗癌作用；
能拮抗自由基、羟自由基及脂质过氧化，具有抗衰老功能。
双歧杆菌产品(production)
培养基成分
TPY 培养基
蛋白胨 15.0g 酵母粉 2.0g 葡萄糖 20.0g 可溶性淀粉 0.5g 氯化钠 5.0g 5%半胱氨酸 10.0mL 西红柿浸出液 400.0mL 吐温80 1.0mL 肝提取液 80.0mL 琼脂 20.0g 蒸馏水 520.0mL
培养基成分
培养基（CPT）配比：
大豆蛋白胨1．67％，酪蛋白胨0．83％，乳糖0.5％，酵母浸出粉0．5％，低聚糖0．7％，胡萝卜汁15％
氮源
碳源生长因子生长因子
东北农业大学乳品科学教育部重点实验室,哈尔滨150030文献资料

肠道益生菌分离鉴定及应用研究

肠道益生菌分离鉴定及应用研究一、引言肠道微生物群落对人体健康的重要性日益受到关注，其中益生菌在维持肠道平衡、促进营养吸收和增强免疫功能等方面发挥着关键作用。

肠道益生菌的分离鉴定及应用研究成为了当前微生物学和医学领域的热门课题。

二、肠道益生菌的分离方法（一）样本采集要分离肠道益生菌，首先需要从健康个体的粪便样本中获取。

在采集过程中，需要确保样本的新鲜度和无污染，通常使用无菌容器进行收集。

（二）选择性培养利用特定的培养基来培养肠道微生物。

例如，一些益生菌如双歧杆菌和乳酸菌在特定的营养条件和环境下能够生长，而其他杂菌则受到抑制。

（三）稀释涂布法将样本进行一系列稀释，然后将稀释液均匀涂布在培养基上，以获得单个菌落。

（一）形态学鉴定观察菌落的形态、大小、颜色和边缘特征，以及菌体的形态、大小和排列方式等。

（二）生理生化鉴定检测微生物的代谢产物、酶活性、对不同物质的利用能力等生理生化特性。

（三）分子生物学鉴定通过 PCR 技术扩增特定的基因片段，如 16S rRNA 基因，然后进行测序和比对分析，以确定其种属。

四、常见的肠道益生菌及其功能（一）双歧杆菌能改善肠道微生态平衡，抑制有害菌生长，增强免疫力，还参与维生素的合成和营养物质的吸收。

（二）乳酸菌产生乳酸降低肠道 pH 值，抑制病原菌生长，促进钙、铁等矿物质的吸收。

（三）芽孢杆菌具有较强的抗逆性，能够调节肠道菌群结构，提高机体抗氧化能力。

（一）食品工业广泛应用于酸奶、奶酪、发酵乳等乳制品，以及饮料、保健品等产品中，为消费者提供营养和健康益处。

（二）医药领域用于治疗肠道疾病，如腹泻、便秘、炎症性肠病等。

还可作为辅助治疗手段，增强药物的疗效，减轻药物的副作用。

（三）畜牧业添加到动物饲料中，提高动物的生长性能、免疫力和饲料利用率，减少疾病的发生。

六、肠道益生菌应用的挑战与展望（一）挑战1、益生菌的存活和定植能力在经过胃肠道的复杂环境后，益生菌的存活数量和在肠道内的定植能力是影响其效果的关键因素。

微生物学实验报告——双歧杆菌分离

微生物学实验报告乳酸菌分离纯化——双歧杆菌的分离纯化2012/6/5实验目的：从酸奶等富含乳酸菌的物质中分离到具有活性的双歧杆菌并进行初步鉴定。

实验原理：双歧杆菌是动物体肠道内的正常优势生理细菌，革兰氏阳性，无芽孢，没有运动能力，最适生长温度37℃~41℃，专性厌氧。

双歧杆菌的细胞呈现多样形态，有短杆较规则形、纤细杆状具有尖细末端形、球形、长杆弯曲形、分枝或分叉形、棍棒状或匙形。

单个或链状、V形、栅栏状排列，或聚集成星状。

双歧杆菌的菌落光滑、凸圆、边缘完整、乳脂至白色、闪光并具有柔软的质地(7)。

因为双歧杆菌是严格厌氧细菌，所以双歧杆菌的培养条件必须无氧，且培养基要具有低氧化还原电势。

培养双歧杆菌最常用的方法是亨盖特厌氧滚管法(1, 5, 7)，此外还有厌氧箱法，厌氧袋法和厌氧罐法等。

亨盖特厌氧滚管法是亨盖特（Hungate）于1950年发展起来的一套严格厌氧微生物的培养技术，主要原理是利用铜柱氧化除氧的滚管分离纯化法。

亨盖特厌氧滚管法的优点是可以实时检查培养物，无氧效果好且花费不高，但需要专门的仪器和技术性很强的操作。

本实验采用的简易厌氧罐法是一种操作简单且成本很低的方法，主要原理是利用焦性没食子酸除去厌氧罐内的氧气。

该方法的缺点是焦性没食子酸与NaOH反应过程中会产生一定量的NO，可能不利于细菌的生长；此外，过量的NaOH 会将厌氧罐中的CO2一起除掉，而CO2对多数厌氧菌的生长有促进作用。

另外，在同一个培养皿上接种好氧细菌（如大肠杆菌和枯草杆菌）能加强除氧的效果。

本实验所用的培养基参考了NPNL培养基(6)和BS培养基的配方，其中鱼粉、牛肉膏、酵母浸粉、胰蛋白胨的作用是提供氮源、维生素和生长因子，葡萄糖和乳糖为乳酸菌发酵提供糖类底物，磷酸氢二钾和磷酸二氢钾为酸碱缓冲剂，硫酸亚铁、硫酸锰为乳酸菌提供生长因子，氯化钠维持均衡的渗透压。

如果在培养基中加入一定浓度的抗生素，比如硫酸卡那霉素（75μg/ml）、硫酸新霉素（30-200μg/ml）、硫酸巴龙霉素（20-200μg/ml）、萘啶酮酸（15或80μg/ml）、氧化锂（3mg/ml）、丙酸钠（10或15g/L）、山梨酸（0.4g/L）等，培养基就成为双歧杆菌的选择性培养基(7)。

乳酸菌标准

乳酸菌标准一、菌种分类乳酸菌是一类对人体有益的微生物，它们通常存在于人体肠道、乳制品、蔬菜等场所。

根据乳酸菌的形态、代谢和遗传特性等不同方面，乳酸菌可分为多个种类，如乳酸杆菌、双歧杆菌、链球菌等。

其中，乳酸杆菌和双歧杆菌是常见的益生菌种类。

二、菌种筛选乳酸菌的筛选是利用其特定的生长特性和生理特征，从自然界或发酵产品中分离出具有优良性能的菌株。

筛选出的乳酸菌应具有以下特点：1. 耐酸、耐胆盐能力强；2. 黏附肠道黏膜能力强；3. 在肠道定植能力强；4. 具有良好的益生作用；5. 无毒、无致病性。

三、发酵工艺乳酸菌的发酵工艺主要包括以下步骤：1. 菌种活化：将筛选出的乳酸菌菌株进行活化，使其恢复活性。

2. 培养基制备：选用适宜的培养基成分，如牛奶、豆奶、葡萄糖等，以支持乳酸菌的生长。

3. 接种与发酵：将活化的菌株接种到培养基中，在适宜的温度和时间内进行发酵。

4. 后处理：发酵结束后，对发酵液进行过滤、浓缩、干燥等后处理，得到乳酸菌制剂。

四、菌种保藏乳酸菌菌种需要保存在低温、干燥、缺氧的环境中，以保持其活性。

常用的保藏方法有：低温冰箱保藏、液氮保藏、真空干燥保藏等。

在保藏过程中，应定期检查菌种的活性和纯度。

五、安全性评估乳酸菌制剂的安全性评估应包括以下方面：1. 无毒害性：通过动物试验等方法检测乳酸菌制剂是否含有有毒物质。

2. 基因稳定性：对乳酸菌制剂的遗传稳定性进行评估，以确保其在生产和保藏过程中不会发生基因突变或产生有害代谢产物。

3. 免疫原性：评估乳酸菌制剂的免疫原性，以确定其是否会对人体免疫系统产生刺激或不良反应。

4. 抗生素抗性：对乳酸菌制剂进行抗生素抗性检测，以确保其不会对抗生素的治疗效果产生负面影响。

5. 临床试验：对乳酸菌制剂进行临床试验，以评估其疗效和安全性。

六、质量控制乳酸菌制剂的质量控制应包括以下方面：1. 产品质量标准制定：制定乳酸菌制剂的产品质量标准，以确保产品质量符合要求。

益生菌培养基配方

益生菌培养基配方益生菌培养基是特别设计用于培养益生菌的一种培养基。

益生菌是指一类有益于宿主健康的微生物，主要包括一些菌株的乳酸菌和双歧杆菌等。

益生菌培养基的配方要求能够提供生长所需的营养物质，并且能够维持菌株的稳定性和活性。

以下是一种常见的益生菌培养基配方。

1.碳源益生菌需要碳源来产生能量和维持生长。

常用的碳源包括葡萄糖、麦芽糊精、果糖等。

在益生菌培养基的配方中，葡萄糖通常是最常用的碳源。

2.氮源氮源是益生菌合成蛋白质和其他重要分子的关键成分。

常见的氮源包括酵母提取物、蛋白胨和氨基酸等。

酵母提取物在益生菌培养基中通常是最常用的氮源。

3.矿物质4.维生素维生素是益生菌生长所必需的营养物质之一、益生菌培养基中通常添加一定量的维生素，如维生素B群和维生素K等。

这些维生素能够提供菌株的生长所需的营养物质，同时有助于维持菌株的活性。

5.pH调节剂pH调节剂的添加可调节益生菌培养基的酸碱度。

大多数益生菌适宜在酸性环境中生长，因此通常使用柠檬酸和琼脂来调节培养基的pH值。

6.防腐剂为了防止培养基被细菌和真菌污染，常常在培养基中添加适量的防腐剂，如苯甲酸和对羟基苯甲酸等。

7.硫酸镁和硫酸锰硫酸镁和硫酸锰是益生菌培养基中的重要组成部分，它们能够提供营养物质给益生菌，同时对其生长和代谢过程有积极的影响。

8.氨基酸氨基酸是益生菌合成蛋白质和其他生物活性分子的重要组成部分。

在益生菌培养基中通常添加少量的氨基酸，以提供益生菌生长所需的营养物质。

9.激素激素可以促进益生菌的生长和活性。

一些常见的激素包括生长因子（如细胞因子）和植物激素（如生长素）等。

这些激素可以通过调节菌株的生长和代谢过程来提高菌株的存活率和活性。

以上是一种常见的益生菌培养基配方。

不同的菌株可能有不同的营养要求，因此具体的培养基配方应根据菌株的需要进行调整。

同时，在培养益生菌时还需注意合适的温度、pH、培养时间等条件。

双歧杆菌微胶囊化及其应用研究

双歧杆菌微胶囊化及其应用研究双歧杆菌微胶囊化及其应用研究引言双歧杆菌是一种益生菌，常被用于维护肠道健康。

然而，双歧杆菌的存活率受限于酸性环境和胃液对其的破坏。

为了提高双歧杆菌的生存率并扩大其应用范围，学者们开始研究将双歧杆菌微胶囊化的方法。

本文将系统地探讨双歧杆菌微胶囊化及其应用的研究进展。

双歧杆菌微胶囊化的方法1. 壳聚糖微胶囊化壳聚糖作为一种生物可降解材料，被广泛应用于微胶囊化工艺中。

研究者通过静电喷雾、包埋法等方法将双歧杆菌包裹在壳聚糖微胶囊中，形成一层保护层，保护菌株不受外界环境的侵害。

2. 乳酸菌培养基微胶囊化将双歧杆菌培养在含有乳酸菌培养基的纳米胶囊中，通过微生物发酵作用，让双歧杆菌自行形成微胶囊。

这种方法能够提高双歧杆菌的存活率，并保证微胶囊内营养物质的供应。

3. 多糖复合微胶囊研究人员还尝试使用多糖材料制备微胶囊，以提高双歧杆菌的存活率和释放效果。

多糖材料能够提供良好的保护层，保持微胶囊的结构稳定性，并在合适的条件下释放双歧杆菌。

双歧杆菌微胶囊化的应用1. 食品工业双歧杆菌微胶囊可以应用于酸性食品中，如酸奶、发酵饮料等，提供更好的益生菌供给。

微胶囊化处理可以保护双歧杆菌不受环境的影响，并延长其在食品中的存活时间。

2. 药品开发双歧杆菌微胶囊化可以改善其在药物中的应用效果。

通过微胶囊化，双歧杆菌可以更好地存活于酸性胃液中，提高生物利用度。

另外，微胶囊化还可以降低药物剂量，减少副作用。

3. 动物饲料添加剂双歧杆菌微胶囊添加到动物饲料中，可以提高动物的消化吸收效果，增强免疫力。

同时，微胶囊化也可以减少营养物质的流失，提供更加可靠的营养支持。

结论双歧杆菌微胶囊化是一种提高双歧杆菌存活率和应用效果的有效手段。

壳聚糖微胶囊化、乳酸菌培养基微胶囊化、多糖复合微胶囊是常见的微胶囊化方法。

双歧杆菌微胶囊化的应用领域涉及食品工业、药品开发以及动物饲料添加剂等多个领域。

未来的研究应重点关注微胶囊化技术的改进及其在更多领域中的应用综上所述，多糖材料制备的微胶囊可以有效提高双歧杆菌的存活率和释放效果。

乳酸菌冻干粉的原料

乳酸菌冻干粉的原料乳酸菌冻干粉是一种常见的保健品和食品添加剂，其主要原料是乳酸菌。

乳酸菌是一类生活在人体肠道中的有益菌群，具有很强的生物活性和保健功能。

乳酸菌冻干粉通过冷冻干燥技术将乳酸菌培养物转化为粉末，便于保存和使用。

乳酸菌冻干粉的原料主要包括以下几个方面：1. 乳酸菌菌种：乳酸菌冻干粉的主要成分是乳酸菌菌种。

乳酸菌菌种是从人体肠道中分离和筛选出来的具有生物活性的菌株。

常见的乳酸菌菌种有嗜酸乳杆菌、双歧杆菌等。

这些菌种经过培养和提取后，可以得到乳酸菌冻干粉的原料。

2. 培养基：乳酸菌的培养需要一定的培养基。

培养基是提供营养和环境条件的物质，使乳酸菌能够生长和繁殖。

常见的培养基成分包括葡萄糖、酵母提取物、氨基酸等。

这些成分能够提供乳酸菌所需的能量和营养物质。

3. 培养条件：乳酸菌的培养需要适宜的温度、pH值和氧气条件。

乳酸菌一般生长在中性或微酸性环境中，温度在30℃左右为最适宜。

此外，乳酸菌的培养还需要一定的氧气供应，但不需要过多的氧气。

4. 冻干技术：乳酸菌冻干粉的制备过程中，最关键的环节是冻干技术。

冻干技术是将乳酸菌培养液在低温下迅速冷冻，并施加适当的真空条件，使水分直接从固态转变为气态，从而将乳酸菌培养物转化为粉末状。

这种冻干技术可以有效保留乳酸菌的活性和营养价值。

乳酸菌冻干粉的原料选择和制备过程对产品的质量和效果有着重要影响。

选用优质的乳酸菌菌种和合适的培养基，控制好培养条件，能够获得高活性的乳酸菌冻干粉。

此外，精细的冻干技术也是确保产品质量的重要环节。

乳酸菌冻干粉的原料来源多样，可以通过人工培养和分离得到，也可以通过天然发酵食品中提取得到。

无论是哪种方式，都需要确保原料的纯度和活性，以确保乳酸菌冻干粉的质量和效果。

乳酸菌冻干粉的原料是乳酸菌菌种和培养基，制备过程中需要控制好培养条件和采用精细的冻干技术。

这些原料和制备过程的选择和控制对乳酸菌冻干粉的质量和效果有着重要影响。

乳酸菌冻干粉作为一种常见的保健品和食品添加剂，具有促进肠道健康、增强免疫力等保健功能。

双歧杆菌与乳酸菌筛选培养基

产细菌素双歧杆菌的筛选及其分泌条件研究_尚楠

乳酸菌检验原始记录

婴儿粪便中益生菌的分离筛选及培养

双歧杆菌与乳酸菌筛选培养基

乳酸菌和双歧杆菌制剂对小鼠肠道菌群失调模型的调节作用

双歧杆菌和乳酸菌的一种简便快速计数法

乳酸菌的制作原理

乳酸菌、双歧杆菌检验培养基

用于肠道中的乳酸菌和双歧杆菌研究的分子生物学技术

实验方案(双歧杆菌的分离)

乳酸菌的连续培养(双歧杆菌)

肠道益生菌分离鉴定及应用研究

微生物学实验报告——双歧杆菌分离

乳酸菌 标准

益生菌培养基配方

双歧杆菌微胶囊化及其应用研究

乳酸菌冻干粉的原料

乳酸菌标准