国内外沙门氏菌检测方法
沙门氏菌的检验过程
沙门氏菌的检验因沙门氏菌是最常见的食源性细菌病原体，因此在本节中重点介绍沙门氏菌的检验。
沙门氏菌是食物传播病原菌中研究最活跃的细菌。
从食品中分离和鉴定沙门氏菌，当前通用的方法学分5个步骤：1.前增菌-第一步使食物样品在含有营养的非选择性培养基中增菌，使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。
2.选择性增菌-在含选择性抑制剂的促生长培养基中间，样品进一步增菌的一个步骤。
此培养基允许沙门氏菌持续增殖，同时阻止大多数其他细菌的增殖。
3.选择性平板分离-这一步采用固体选择性培养基，抑制非沙门氏菌的生长，提供肉眼可见的疑似沙门氏菌纯菌落的识别。
4.生物化学筛选-排除大多数非沙门氏菌。
也提供了沙门氏菌培养物菌属的初步鉴定。
5.血清学技术提供了培养物菌种的鉴定。
这五个步骤代表理想状况。
不过一个有经验的检验员，可能在一个或几个步骤中看出特性和差别。
目前检验食品中的沙门氏菌是按统计学取样方案为基础，25g食品为标准分析单位。
三、从食品中分离沙门氏菌样品的制备下面的方法是以25g样品为检测单位，样品：肉汤为1∶9的比例。
除非另有说明，根据混合程度，加足够的肉汤保持1∶9的比例。
对不需准确称量检测的样品，例如：田鸡腿，可参看特定方法说明。
1、干蛋黄、干蛋白、干全蛋、液奶（去脂牛奶，含2%脂肪牛奶，全脂奶，和脱脂奶）、粉状调制食品（蛋糕，甜饼，炸面圈，饼干和面包）、婴儿食品、口食或软管进食含蛋的食品：检验前的冷冻样品最好不要解冻。
如果冷冻样品必须软化以获取待检测部分，则尽可能迅速的解冻所需部分，使竞争菌数少增加或降低沙门氏菌的可能损伤。
解冻需在45℃以下，有自动调温器自控的水浴锅内不断搅拌进行15min或在2�5℃，18小时内解冻。
无菌操作称取25g样品，放入灭菌带螺旋帽的广口瓶中（500mL）或其他合适的容器内。
非粉状的样品，加入225mL灭菌乳糖肉汤。
如果制品是粉状，加入约15mL灭菌乳糖肉汤，用灭菌玻璃棒，匙或灭菌压舌器搅拌，使成均匀悬液。
沙门氏菌基本知识及检测方法
沙门⽒菌基本知识及检测⽅法沙门⽒菌基本知识及检测⽅法沙门⽒菌属(Salmonella)是肠杆菌科的⼀个⼤属，有2000多个⾎清型，我国发现的约有100个。
沙门⽒菌⼴泛存在于猪、⽜、⽺、家禽、鸟类、⿏类等多种动物的肠道和内脏中。
1880年Eberth⾸先发现伤寒杆菌，1885年Salmon分离到猪霍乱杆菌，由于Salmon发现本属细菌的时间较早，在研究中的贡献较⼤，遂定名为沙门⽒菌属Salmonella 。
本属细菌绝⼤多数成员对⼈和动物有致病性，能引起⼈和动物的败⾎症与胃肠炎，甚⾄流产，并能引起⼈类⾷物中毒，是⼈类细菌性⾷物中毒的最主要病原菌之⼀。
根据沙门⽒菌的致病范围，可将其分为三⼤类群。
第⼀类群：专门对⼈致病。
如伤寒沙门⽒菌、副伤寒沙门⽒菌(甲型、⼄型、丙型)。
第⼆类群：能引起⼈类⾷物中毒——⾷物中毒沙门⽒菌群，如⿏伤寒沙门⽒菌、猪霍乱沙门⽒菌、肠炎沙门⽒菌、纽波特沙门⽒菌等。
第三类群：专门对动物致病，很少感染⼈，如马流产沙门⽒菌、鸡⽩痢沙门⽒菌。
致病性最强的是猪霍乱沙门⽒菌(Salmonella cholerae)，其次是⿏伤寒沙门⽒菌(Salmonella typhimurium)和肠炎沙门⽒菌(Salmonella enteritidis)。
⼀、沙门⽒菌属的⽣物学特征：1.形态染⾊特性：G-⽆芽孢杆菌。
⼤⼩通常为0.7～1.5µm ×2.0～5.0µm，菌端钝圆，散在，偶有短丝状，⽆荚膜，除鸡⽩痢沙门⽒菌和鸡伤寒沙门⽒菌外均有周⾝鞭⽑，能运动，绝⼤多数菌株有菌⽑。
需氧或兼性厌氧菌，⽣长温度范围为10～42℃，最适⽣长温度为37℃，适宜pH为6.8～7.8，对营养要求不⾼，在普通培养基中⽣长旺盛，胆盐可促进其⽣长。
2.培养特性：需氧或兼性厌氧菌；⽣长温度范围为10～42℃，最适⽣长温度为37℃；适宜pH为6.8～7.8；对营养要求不⾼，在普通培养基中⽣长旺盛；胆盐可促进其⽣长。
微生物检测系列之沙门氏菌检验技巧及详解
微生物检测系列之沙门氏菌检测过程详解及注意事项
严烨
沙门氏菌病是公共卫生学上具有重要意义的人畜共患病之一，其病原沙门氏菌属肠道细 菌科，包括那些引起食物中毒，导致胃肠炎、伤寒和副伤寒的细菌。它们除可感染人外，还 可感染很多动物包括哺乳类、鸟、爬行类、鱼、两栖类及昆虫。人畜感染后可呈无症状带菌 状态，也可表现为有临床症状的致死疾，它可能加重病态或死亡率，或者降低动物的繁殖生 产力。
所以将沙门氏菌检验规定为食品致病性菌种检验中的重要项目，它的检测过程一般包括 样品前增菌、选择性增菌、选择性平板分离划线、初步生化鉴定（确定可疑菌）、生化鉴定、 血清学鉴定及血清学分型（选做）共计 7 个步骤。整个步骤完全完成至少需要 7 天时间。下 面以样品检测示例对整个检测过程进行分析梳理。
食品卫生微生物学检验 沙门氏菌检验
沙门氏菌检验程序
1 取消样品分类，前增菌液统一为“缓冲蛋白胨 水” 原国标：BPW FDA、AOAC：多种前增菌液 ISO：BPW
2 对所有样品均进行8-18h前增菌 原国标只对冻肉、乳品、蛋品等加工食品进 行前增菌，FDA、AOAC、ISO、Canada MFHPB、CCFRA等组织或国家对所有样品都 进行前增菌。
65.3 81.0 52.0 83.2 80.0 83.0 86.2 106.6 77.7 68.4 98.4 71.6 100.0
I： 进口 C：国产
SS琼脂 上面的志 贺氏菌和 沙门氏菌
C-BS
I-BS
C-HE
I-HE
I-XLD
C-XLD（变形菌落-错误）
I-XLD
样品+BPW+SC+BS
DUPONT Qualicon BAX System 应用DNA分子核酸探针或基因探针技 术制造的全自动PCR分析仪。将已知核 苷酸序列DNA片段用同位素或其他方法 标记，加入已变性的被检DNA样品中， 在一定条件下即可与该样品中有同源序 列的DNA区段形成杂交双链，从而达到 鉴定样品中DNA的目的。
AOAC 967.25－967.28
处理样品 35℃ 1mL+10mLSC 35℃ 24±2h XLD & HE & BS 35℃ TSI 35℃ 纯培养物 尿素酶＋ 非沙门菌 尿素酶－ 24±2h（BS 24h&48h） & LIA 24±2h 不纯培养物 MAC or XLD or HE 纯培养物 非 沙 门 菌 非 沙 门 菌 24±2h 1mL+10mLTT
35± 1℃ 18~24h & 48h TSI & LIA 血清学试验
沙门氏菌检测操作规程
沙门氏菌检测操作规程1 原理沙门氏菌的检测需要四个连续的阶段见下图：1.1 用非选择性液体培养基预增菌将试料接种到缓冲蛋白胨水（BPW），在36℃±1℃下培养16~20h。
（样品中可能存在少量的沙门氏菌却含大量的肠杆菌科的其他菌，所以选择性增菌是必须的；为了检测受伤的沙门氏菌，常须进行预增菌。
）1.2 在选择性液体培养基上增菌将1.1中的培养物接种到四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液和亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液中。
于TTB增菌液内42℃±1℃培养18h～24h；SC 增菌液内36℃±1℃培养18h～24h。
1.3 初步筛选将1.2的培养物接种到以下两个选择性培养基：亚硫酸铋（BS）琼脂、木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂，于36℃±1℃分别培养40h～48h（BS 琼脂平板）或18h～24h（XLD 琼脂平板），根据菌落特性，辨别可疑沙门氏菌菌落。
1.4再次筛选挑出1.3中的可疑沙门氏菌菌落，在沙门氏菌显色培养基中培养再次筛选，再用合适的生化和血清学试剂进行鉴定。
2 试剂与仪器2.1所用器具三角烧瓶、玻璃珠、具塞试管、培养皿、1000μL枪头、5mL枪头、称量勺、接种环、接种针2.2 仪器：分析天平、恒温培养箱、微型振荡器、超净工作台、高压灭菌锅2.3 所用试剂和培养基2.3.1缓冲蛋白胨水培养基（BPW）称取BPW培养基20.1g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，以90mL/瓶分装到各锥形瓶，并于121℃灭菌15 min，冷至常温。
2.3.2 四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液取TTB增菌液基础93.6g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装于锥形瓶中，每瓶100mL。
将锥形瓶放入灭菌锅中，121℃灭菌20min；冷至30℃，每100mL基础培养基中加入TTB配套试剂碘液和煌绿各一支（开启前用75%酒精棉消毒西林瓶表面），混合均匀。
2.3.3 亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液取SC培养基23g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装锥形瓶，冷至常温备用。
沙门氏菌检验程序
沙门氏菌检验程序沙门氏菌是一种常见的致病微生物，能引起人类和动物的感染疾病。
因此，在食品、水源、环境等方面对沙门氏菌的检测尤其重要。
下面我们将介绍一下沙门氏菌检验的步骤和方法。
1. 样品采集对于食品、水源等样品的采集需要遵守严格的规定。
例如，食品样品需要在加工、贮存和分配之前采集，以确保沙门氏菌检验的准确性。
样品应当在采集之后尽快送到实验室进行检测。
2. 样品处理根据不同的样品类型和特性，采用不同的处理方法。
例如，对于牛奶、鸡蛋等液态食品，需要进行破坏性处理，以确保沙门氏菌的释放。
对于土壤、粪便等样品，需要进行外层细菌的去除处理。
3. 培养培养基选择含有适当氧气和营养物质的培养基，如SS（Salmonella-Shigella）培养基、XLD（Xylose-Lysine-Desoxycholate）培养基等。
将样品分别接种到不同的培养基上。
4. 培养将分别接种的培养基放入恒温箱中进行培养。
将温度设定为37°C至42°C，进行18小时至24小时的培养。
在培养过程中观察样品的生长和变化。
5. 分离取出培养好的样品进行观察。
将预处理样品浸泡在缓冲液中，将溶液过滤。
过滤的溶液留下来，转移到盘子上。
用肉眼观察菌落的形态，观察不同菌落的特点。
根据菌落的特点进行分离。
6. 鉴定在鉴定步骤中，需要进行各种化学试剂处理，如氧化氢酶测试、葡萄糖测试等。
同时需要使用专业仪器，如API试剂盒、ELISA试剂盒等。
通过这些鉴定手段，确定检测出的菌落是否为沙门氏菌。
7. 结论最后，根据检测结果得出客观和准确的结论，以便针对食品、水源或环境污染等问题采取相应的措施。
总之，沙门氏菌的检验程序是一个非常复杂和严谨的过程，需要专业的实验室和技术人员进行操作。
我们应当高度重视沙门氏菌检验的重要性，以确保我们的食品质量和健康安全。
沙门氏菌检测标准方法及实验关键点
沙门氏菌检测标准、方法及实验关键点．检验沙门氏菌的原因和意义：据统计我国细菌性食物中毒中70%～80%是由沙门氏菌引起的，人一旦摄入含有大量沙门氏菌(105～(106个/g)的动物性产品，就会引起细菌性感染，进而在毒素作用下发生食物中毒导致胃肠炎、伤寒和副伤寒且沙门氏菌的传播媒介众多，肉、蛋以及食品从加工到出售的过程中都十分容易发生污染。
因此对沙门氏菌的检验事关重大。
二、检测及鉴定：沙门氏菌的检测要在二级生物安全实验室及二级生物安全柜(在负压情况下防止致病微生物气溶胶飘离实验室对实验人员及环境造成污染)中进行。
沙门氏菌典型菌落形态：生化鉴定显示：API20E 生化鉴定是根据快速酶促反应及代谢产物的检测技术发展的一种细菌编码鉴定法，广泛应用于临床、食品中革兰氏阴性杆菌的快速鉴定。
限值要求：参考CAC、ICMSF、欧盟、澳大利亚和新西兰、美国、加拿大、香港、台湾等国际组织、国家和地区的即食食品中沙门氏菌限量标准及规定，《GB29921-2013食品中致病菌限量》按照二级采样方案对所有11类食品设置沙门氏菌限量规定，具体为n=5，c=0，m=0（即在被检的5份样品中，不允许任一样品检出沙门氏菌）。
三、沙门氏菌传统检测方法的关键控制点1、样品处理尽可能缩短解冻时间，使竟争菌群生长最少，并减小对沙门氏菌的损伤致病菌取样一定要均匀并具有代表性（蛋黄蛋清混匀取样）。
2、培养基及培养方面（1）没有一种培养基可疑准确无误的筛选出沙门氏菌，必须选择多种选择性培养基同时筛选，只能说显色培养基综合选择性更强。
（2）试剂和培养基的配置一定要严格按照说明书配置，是否需要高压灭菌，添加剂用量及培养基保存条件。
（3）有1%沙门氏菌乳糖发酵阳性，为了避免漏检乳糖阳性菌必须选择不依赖乳糖的培养基，目前BS培养基认为是最适合的。
（4）BS培养基是分离沙门氏菌的高效培养基，特别适用于伤寒类的沙门氏菌，不是所有的选择性培养基都能有效分离出伤寒沙门氏菌和副伤寒沙门氏菌，BS是分离伤寒类沙门氏菌的首选培养基。
沙门氏菌的检验方法与注意事项
沙门氏菌的检验方法与注意事项在日常微生物检验中，沙门氏菌比较常见，是一种致病性细菌，国家规定在每25g的食品样本中不能检测出沙门氏菌，所以在检验沙门氏菌时，对试剂与培养基有很高的要求，下面本文针对沙门氏菌的检验方式和注意事项作出简单介绍！一、沙门氏菌检测的原因和意义根据相关统计显示，我们国家因细菌性食物中毒的人中，有70%-80%左右的人是通过沙门氏菌造成的。
人体倘若含有过多的大量沙门氏菌的动物性食物，就会造成细菌性感染，以此在毒素的影响下产生食物中毒，造成伤寒、胃肠炎及副伤寒。
而且沙门氏菌的传播途径较多，肉、蛋和其他食物，从加工至销售的整个过程当中都极易引发感染情况，所以准确、有效检验沙门氏菌有重大意义。
二、沙门氏菌的检验（一）前增菌(无选择性)BPW（缓冲蛋白胨水）属于一种比较常见的增菌培养基，不包括任何抑制物质，有助于修复受损的沙门氏菌。
促使受损的沙门氏菌细胞复苏至相对平稳的生理状态。
（二）选择性增菌TTB（四硫磺酸钠煌绿增菌液）内含有硫代硫酸钠，结合四硫磺酸钠，能够对肠道共生菌进行有效抑制，而包含四硫磺酸钠还原酶的细菌，可以在这一培养基当中生长繁殖；煌绿及胆盐能够控制大肠群菌、革兰氏阳性菌的繁殖，而伤寒沙门氏菌依旧可以生长。
SC（亚硒酸盐胱氨酸增菌液）能够对其他和伤寒沙门氏菌进行选择性增菌，其含有的亚硒酸结合蛋白胨内的含硫氨基酸，促使亚硒酸与硫的复合物生产，对细菌硫的代谢产生干扰，进而减少肠球菌、变形杆菌、大肠埃希氏菌的繁殖生长。
（三）分离培养基(选择性)①BS（亚硫酸铋琼脂）内含亚硫酸铋指示剂，可对大肠菌群、革兰氏阳性菌进行抑制，但不会对沙门氏菌的繁殖产生影响；其他沙门氏菌、伤寒杆菌可以借助葡萄糖，还原亚硫酸铋，使其形成硫酸铋，使黑色菌落附近有黑棕色的环，对光可看到金属光泽。
BS的压力和温度不可过高，避免选择性下降，需在使用前配制，放置阴暗处储存，48小时后丧失选择性，储存不合理会造成色浅，表示效果开始减弱，联合TTB、SC使用能够提高检出率。
沙门氏菌检测方法的研究进展
沙门氏菌检测方法的研究进展摘要：沙门氏菌是一种重要的人畜共患病原菌，而且，沙门氏菌的检验在食品检测中具有重要意义。
建立一种快速而准确的检测方法一直是沙门氏菌检验研究的核心问题。
本文通过查阅大量文献，详细阐明了沙门氏菌的各种快速检测方法的原理，对近年来沙门氏菌的检测进展进行了综述。
认为，传统方法可以对沙门氏菌做出鉴定，但需要4~7 d的时间；以抗体为基础的ELISA方法和免疫荧光标记方法将检测时间缩短了一半，且灵敏性高和特异性强；以核酸为基础的PCR技术由于灵敏、简单、快速和特异已被广泛用于沙门氏菌检测。
但是这些方法仍然存在一定的不足，需要进一步加以改进，关于食品中沙门氏菌的检测方法的研究还有待进一步深入。
关键词：沙门氏菌；检测；传统方法；免疫；分子前言沙门氏菌病是公共卫生学上具有重要意义的人兽共患病之一，沙门氏菌属于肠杆菌科细菌，由此类细菌引起的各种动物的疾病称为沙门氏菌病。
沙门氏菌在自然界有广泛的宿主，少数沙门氏菌对宿主有选择性，属于偏嗜性沙门氏菌，绝大多数对人和动物均适应，可寄居在哺乳类、爬行类、鸟类、昆虫及人的胃肠道中，种类繁多的家养和野生动物的感染率在1%—20%或者更高。
故各种家禽、家畜在喂养、屠宰、运输、包装等加工处理过程中均有污染的机会。
各种动物源性食物是引起沙门氏菌感染的最常见媒介物。
除初生动物，人畜感染后一般呈无症状带菌状态,长期排菌，污染肉蛋产品，同时它们也可表现为有临床症状的致死疾病，可能加重病情或者增加死亡率，或者降低动物生产力等，对养殖业的经济效益影响较大，并严重影响人类健康。
近年来，随着免疫学实验技术和分子生物学技术的发展，沙门氏菌检验技术的研究也有了新的研究进展。
本文将近年来国内外关于沙门氏菌检验技术研究进展情况作以概述，供参考。
1 传统的检测方法（国标法）常规检验技术基本特征与步骤:沙门氏菌常规检验技术具有以下3项特征：常规方法是编入国标方法或国际方法中的基本方法，是检验其他检测方法准确性、敏感性的参照；常规方法最终将能分离到细菌纯培养物；常规方法简单、准确、可重复性强、有一定的灵敏性。
沙门氏菌菌检测方法
沙门氏菌菌检测方法沙门氏菌（Salmonella）是一类常见的食源性致病菌，可以引起人类各种疾病，如食物中毒、胃肠炎等。
因此，对食品中的沙门氏菌进行检测是非常重要的。
下面我将详细介绍几种常用的沙门氏菌检测方法。
1. 培养法培养法是最常用的沙门氏菌检测方法之一。
该方法需要将样品（如食品、水）在适当的培养基上进行培养，并观察是否有沙门氏菌的生长。
具体步骤如下：（1）将样品接种于含有选择性成分的培养基上；（2）将接种的培养基培养在适当的温度下，通常为37摄氏度；（3）观察培养基上是否有典型的沙门氏菌的形成，一般表现为黑色斑点；（4）进行进一步的确认试验，如生化试验和血清学试验。
2. PCR法PCR法是一种快速、准确且高度灵敏的沙门氏菌检测方法。
PCR法通过扩增样品中沙门氏菌的特定基因片段来检测其存在。
具体步骤如下：（1）提取样品中的DNA；（2）使用特定引物扩增沙门氏菌的基因片段；（3）通过电泳将扩增产物分离，并观察是否有目标片段的出现。
3. ELISA法ELISA法是一种常用的快速筛查大量样品的沙门氏菌检测方法。
该方法利用特异性抗体与沙门氏菌抗原结合，并通过酶催化反应来检测沙门氏菌的存在。
具体步骤如下：（1）将样品涂覆在固相酶标板上；（2）添加特异性抗体与沙门氏菌抗原结合；（3）洗涤去除非特异性结合的成分；（4）添加辣根过氧化物酶标记的二抗，并形成酶标复合物；（5）通过酶催化反应产生显色物质，观察是否有颜色的出现。
4. 质谱法质谱法是一种高分辨率、高灵敏度的沙门氏菌检测方法。
该方法通过检测样品中沙门氏菌的特定代谢产物来判断其存在与否。
具体步骤如下：（1）提取样品中的代谢产物；（2）使用质谱仪进行检测，并与数据库中的标准进行比对；（3）根据比对结果判断样品中是否有沙门氏菌的存在。
除了上述常用的沙门氏菌检测方法外，还有一些新兴的检测技术，如纳米技术、免疫传感器等。
这些方法具有高灵敏度、高特异性和快速的特点，可以用于食品、环境等多种领域的沙门氏菌检测。
沙门氏菌检测操作步骤
沙门氏菌检测操作步骤沙门氏菌是一种常见的细菌，其存在于许多环境中，包括食物、水源和动物体内。
由于沙门氏菌可能引起严重的食物中毒症状，因此对其进行检测和控制非常重要。
在本文中，我将介绍沙门氏菌检测的操作步骤，以帮助您了解如何进行有效的沙门氏菌检测。
1. 选择适当的检测方法在进行沙门氏菌检测之前，首先需要选择适当的检测方法。
常见的检测方法包括传统培养法、分子生物学方法和免疫学方法。
传统培养法需要将样品在富含营养物的培养基上培养并观察有无沙门氏菌生长。
分子生物学方法利用PCR技术检测沙门氏菌的DNA，而免疫学方法则使用抗体来检测沙门氏菌的存在。
根据您的需求和实验条件，选择合适的检测方法非常重要。
2. 样品采集在进行沙门氏菌检测之前，需要采集样品。
这些样品可以是食物、水源、表面物体或动物组织。
确保在采集样品之前，正确消毒采样工具以避免任何污染。
确保将样品收集到干净、密封的容器中，以避免污染和交叉感染。
3. 样品准备收集样品后，需要进行适当的样品准备以便于后续的沙门氏菌检测。
对于食物样品，可以使用均匀悬浮液方法将样品与适当的缓冲液混合均匀。
对于水样或表面物体样品，可以使用封闭的容器直接收集样品。
对于动物组织样品，需要先将样品进行处理，如挤压、切割或研磨，以获得足够的样品量进行检测。
4. 样品分析根据选择的检测方法，进行相应的样品分析。
如果使用传统培养法，可以将样品转移到含有适当培养基的培养皿中，并进行孵育。
培养过程中，需要注意培养皿的环境条件，如温度、pH值和氧气含量。
如果使用分子生物学方法，可以提取样品中的DNA，并使用PCR技术进行检测。
如果使用免疫学方法，可以使用特定的抗体与样品中的沙门氏菌结合，然后观察是否发生免疫反应。
5. 结果解读根据样品分析的结果，进行结果解读。
对于传统培养法，可以观察培养皿中是否有沙门氏菌的典型形态或颜色变化。
对于分子生物学方法，可以通过PCR扩增的产物的大小和带状图样来判断是否存在沙门氏菌的DNA。
沙门氏菌检测卫生标准
沙门氏菌是一种常见的食源性病原体，可能导致食物中毒。
为了确保食品安全，各国政府和卫生部门制定了相应的沙门氏菌检测卫生标准。
以下是我国和国际上常见的沙门氏菌检测卫生标准：
1. 中国：
我国《食品安全国家标准食品中病原微生物检测方法》（GB/T 4789.1-2016）对沙门氏菌的检测方法进行了规定，包括分离、鉴定和计数等步骤。
此外，针对不同食品类别，如肉类、禽类、水产制品、冷藏食品等，还有相应的沙门氏菌检测标准，如GB 29921-2013《食品安全国家标准食品中致病菌限量》等。
2. 国际：
（1）世界卫生组织（WHO）和联合国粮农组织（FAO）制定的《国际食品卫生法典》（Codex Alimentarius Commission，CAC）对沙门氏菌检测方法有详细规定，包括样品处理、分离、鉴定和计数等环节。
（2）美国食品和药物管理局（FDA）的《食品微生物学检测手册》（FDA Microbiological Laboratory Manual）提供了针对各类食品的沙门氏菌检测方法。
（3）欧盟（EU）制定的《食品安全微生物检测标准》（EC）对沙门氏菌检测方法进行了规定，并要求成员国家遵循相同的标准。
3. 沙门氏菌检测卫生要求：
沙门氏菌检测的卫生要求包括：
（1）检测实验室应具备相应的资质和条件，如符合ISO 17025 等国际标准；
（2）检测人员应具备专业知识和技能，进行严格的培训；
（3）实验设备和环境应保持清洁、消毒和防护；
（4）检测过程应遵循标准操作规程，确保检测结果的准确性和可靠性；
（5）检测结果阳性者，应立即采取措施对食品进行召回、销毁或处理，以防止病原菌传播。
沙门氏菌免疫学检测方法
沙门氏菌免疫学检测方法
沙门氏菌的免疫学检测方法为酶联免疫法，利用抗原-抗体之间的特异性结合反应为基础，用免疫力放大技术来鉴定病原菌。
灵敏度和特异性比较高，在增菌以后可以在短时间内检测出来。
酶联免疫法全称为酶联免疫法吸附测定法，英文缩写为ELISA，是一种酶标记测定方法，可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，是一种敏感性高、特异性强、重复性好的定量的实验诊断方法。
酶联免疫法原理是已经被包被在聚苯乙烯板上的固相包被的抗原或抗体与
过量待检测的抗体或抗原反应，一部分结合形成固相抗原抗体复合物，另一部为多余的游离抗体或抗原，通过洗板，保留固相抗原抗体复合物，洗去多余游离抗体或抗原，再加入酶标记的抗体，形成固相抗原抗体酶标记抗体复合物，洗去多余酶标抗体，加入底物，此时酶催化底物显色，颜色的深浅与待测的抗体或抗原含量成正比或反比。
酶联免疫法现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病，寄生虫病及非传染病等各方面的免疫诊断，也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定，如检测结核抗体、EB病毒抗体、HIV抗体、乙肝病毒抗原、破伤风抗毒素、流感病毒的抗原、梅毒抗体等。
酶联免疫法虽然应用广泛，但也存在一定的局限性，手工操作步骤繁琐，而且影响因素多，易出现假阳性结果等，因此有很多项目被兴起的化学发光法所取代。
沙门氏菌的鉴定
沙门氏菌的鉴定
沙门氏菌是一种常见的细菌，它可引起人和动物的肠道和其他部位的感染。
在进行沙门氏菌的鉴定时，需要采取一系列的操作步骤。
首先，需要从样品中分离出沙门氏菌。
这可以通过在富含营养物的培养基中培养样品进行筛选，然后进一步确认沙门氏菌。
接下来，需要对沙门氏菌进行生化测试。
这包括测定细菌的代谢产物、酶活性和其他特征。
这些测试有助于确认沙门氏菌的特征，以便进行进一步的鉴定。
最后，需要进行分子生物学鉴定。
这包括使用PCR等技术检测细菌的基因组，以确定其是否为沙门氏菌。
总的来说，进行沙门氏菌的鉴定需要多种技术和步骤，但这是必要的，以确保准确诊断和治疗沙门氏菌感染。
- 1 -。
论沙门氏菌的检测方法
食品安全论沙门氏菌的检测方法沙门氏菌是食品微生物中致病菌的一种，下面介绍几种检测沙门氏菌的方法。
１、传统的培养方法用于沙门氏菌分析的传统方法是食物样品分步增菌，以增加病原的可检出率，共有如下四步：（１）预增菌，将样品；ｇｒｉｎ培养基中，温度３７０Ｃ，使那些“致伤”的细菌复苏及使所有微生物生长。
（２）选择增菌，使沙门氏菌生长而使肉汤中同时存在的微生物数量减少，目前选择性培养基有３种类型：连四硫基盐肉汤、硒酸盐胱氨酸肉汤和ＩｋＶ培养基。
（３）分离，即选择性培养物在含一种或多种抑制非沙门氏菌生长制剂的琼脂平板上划线培养，然后对平板上肉眼可见的特征性菌落进行确认。
并对该菌落分离物进行生化和血清学检测，以做出鉴定。
２、以核酸为基础的方法所有的细胞都含有ＤＮＡ和ＲＮＡ这样唯一一类可携带信息的大分子，所以用它作为检测的标靶。
标靶通常是一个特异性核酸序列，它可通过以补体核酸分子作为探针来检出。
探针需要加附适当的标记，此法应用的探针含有放射性同位素标记的伤寒沙门氏菌ＤＮＡ片段，其敏感性高，经约４８小时的增菌步骤后，检测极限可达１０８个细菌／ｍｌ。
目前，以核酸杂交为基础的第二代技术——比色计目前也已发展起来，此法依赖于沙门氏菌核糖体ＲＮＡ（ｒＲＮＡ）——核糖体发育过程中储存的核酸成分的检测。
核糖体是细胞蛋白质合成器的一部分，每个细菌细胞中存在５０００＂－２００００个复制体，而相比之下染色体ＤＮＡ复制体仅２—１０个。
这种天然富含ｒＲＮＡ标靶序列的情况使得用无辐射计检测成为可能，同时又保持了与放射性同位素方法相当或更高的敏感性。
３、以抗体为基础的检测方法利用抗原——抗体反应的特异性，进行细菌的鉴别和血清学定性。
细菌菌体或鞭毛抗原的特异性抗体的存在。
使得人们可以建立一些快速方法来检测以食品为载体的病原。
广泛采用的是以双位点ＥＬＩＳＡ技术即夹心ＥＬＩＳＡ为基础的方法。
此法是指以固定在固体基质上的“捕捉”抗体来捕捉目标抗原，经洗涤除去未结合的成分，加入第二种酶标抗体，此者结合在捕捉到２０２００８年５期（上）文／王哲的抗原的不同位点上，第二次洗涤后加入酶作用基质，并令其与颜色成分反应，然后用分光光度法即很容易检测到目标抗原。
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沙门菌生物学性状
不分解乳糖（亚利桑那菌除外）。分解 葡萄糖产酸产气（伤寒沙门菌产酸不产 气）。多数产生H2S，不产生靛基质， 不液化明胶，不分解尿素，不产生乙酰 甲基甲醇，多数能利用枸橼酸盐，能还 原硝酸盐为亚硝酸盐，在氰化钾培养基 上不生长。
2020/4/24
沙门菌常用生化试验
三糖铁（TSI）
2020/4沙/24门菌
非沙门菌
USDA/FSIS MLG 4.02
肉、禽和蛋品中沙门菌的分离和鉴定
样品
BPW or BPW（含结晶紫）
35±1℃ 20-24h
0.5 ± 0.05mL ＋10mL TT
0.1 ± 0.02mL ＋10mL mRV
42± 0.5℃ 22~24h
42± 0.5℃ 22~24h
10mL＋SC100mL
36 ℃ ± 1 ℃ 18h～24h
直接增菌法 25g＋灭菌生理盐水25mL
检样匀液25mL ＋MM （或TTB）100mL
42 ℃ 18h～24h
检样匀液25mL
＋SC100mL
36 ℃ ± 1 ℃ 18h～24h
BS
36 ℃ ± 1 ℃ 40h～48h
DHL（或HE、WS、SS）
2020/4/24
沙门菌
2020/4/24
AOAC 967.25－967.28
食品中的沙门菌检测方法
处理样品
35℃ 24±2h
1mL+10mLSC
1mL+10mLTT
35℃ 24±2h
XLD & HE & BS
35℃ 24±2h（BS 24h&48h）
TSI & LIA
35℃ 24±2h
纯培养物
不纯培养物
2020/4/24
ONPG试验 阳性（黄） 空白
国内外沙门菌检测方法（传统方法）
国家标准 行业标准 FDA （Food & Drug Administration） AOAC (Association of Official Analytical Chemists) FSIS （FOOD SAFETY AND INSPECTION SERVICE） ISO 加拿大官方食品微生物分析方法
2020/4/24
尿素酶试验 阴性（黄）阳性（红）
沙门菌常用生化试验
吲哚试验 阴性（液面黄）阳性（液面红）
2020/4/24
VP试验 阳性（红色）阴性（不变）
沙门菌常用生化试验
赖氨酸脱羧酶试验 对照 阳性（紫） 阴性（黄）
2020/4/24
丙二酸盐试验 阳性（兰） 阴性（不变）
沙门菌常用生化试验
2020/4/24
沙门菌（Salmonella）
沙门菌属（Salmonella）是一大群寄生于人 类和动物肠道内生化反应和抗原构造相似的 革兰氏阴性杆菌统称为沙门杆菌。
2020/4/24
沙门菌（Salmonella）
目前至少有67种O抗原和2000个以上血清型，所致疾病称沙门菌病。
肠热症：是伤寒病和副伤寒病的总称，主要由伤寒杆菌和甲、乙、丙型副伤寒杆 菌引起。
急性肠炎(食物中毒):是最常见的沙门杆菌感染。多由鼠伤寒杆菌、猪霍乱杆菌 、肠炎杆菌等引起。
败血症：常由猪霍乱杆菌、丙型副伤寒杆菌、鼠伤寒杆菌、肠炎杆菌等引起。
2020/4/24
沙门菌生物学性状
2020/4/24
大小0.6～1.0×2～3um，无芽胞， 一般有鞭毛(鸡沙门菌除外)，无荚 膜，多数有菌毛，革兰氏阴性杆菌 ，需氧或兼性厌氧，最适生长温度 为35～37℃，最适pH值为6.8～7.8 。
乳糖
水杨苷
赖氨酸脱羧酶 西蒙氏枸橼酸盐
丙二酸
蔗糖
血清学试验
AOAC沙门菌检测方法
AOAC Official Method 967.25 Salmonella in Foods Preparation of Culture Media and Reagents AOAC Official Method 967.26 Salmonella in Processed Foods Detection AOAC Official Method 967.27 Salmonella in Foods Identification AOAC Official Method 967.28 Salmonella in Foods Serological Tests
国内外沙门菌检测方法介绍
中国疾病预防控制中心 营养与食品安全所 郭云昌
2020/4/24
沙门菌（Salmonella）
DANIEL ELMER SALMON, (1850-1914) 美国兽医微生物和病理学家。是美国授予的第 一位兽医学博士。1884年任美国农业部畜牧局 首任局长。他首次从病猪中分离出猪霍乱沙门 氏菌。在医学微生物中通用的沙门菌一词，就 是为纪念他而以 他的名字命名的。
MAC or XLD or HE
尿素酶＋ 非沙门菌
尿素酶－ 纯培养物
吲哚＋ & H血清－
H抗原，LIA，酚红卫矛醇肉汤，色氨酸肉汤
非沙门菌
（KCN，丙二酸盐，吲哚），O抗原
KCN＋ & LIA－
补充生化试验
非沙门菌
酚红乳糖肉汤，酚红蔗糖肉汤，MR－VP,西蒙氏柠檬酸盐
非沙门菌
2020/4/24
2020/4/24
2020/4/24
VIDAS
2020/4/24
沙门菌仪器检测法
• DUPONT Qualicon BAX System 应用DNA分子核酸探针或基因探针技术
制造的全自动PCR分析仪。将已知核苷酸序 列DNA片段用同位素或其他方法标记，加入 已变性的被检DNA样品中，在一定条件下即 可与该样品中有同源序列的DNA区段形成杂 交双链，从而达到鉴定样品中DNA的目的。
2020/4/24
DUPONT Qualicon BAX System
2020/4/24
商品化生化鉴定系统
VITEK GNI+
应用一系列小的多孔的聚苯乙烯卡片进行测试 ，卡片含有干燥的抗菌药物和生化基质。先制备一 定浓度的欲鉴定菌株的菌悬液，然后将菌悬液接种 到各种细菌的小卡上，将其放入具有读数功能的孵 箱内，每隔一定时间，仪器会自动检测培养基的发 酵情况，并换算成能被计算机所接受的生物编码。 最后由计算机判定，打印出鉴定结果。
反应 - + +
结果
+ ++
---
- - + + ++
+- + - +-
沙
门
应得 0 2 4 1 2 4 0 0 0 0 0 4 1 2 4 1 0 4 0 2 0 菌
树枝
组合
6
7
0
编码
4
7
5
2
2020/4/24
API 20E
2020/4/24
沙门菌检测显色培养基
沙门氏菌在海博公司显色培 养基上的菌落特征（红）
2020/4/24
沙门氏菌在CHROMagar 显色培养基上的菌落特（紫）
2020/4/24
36 ℃ ± 1 ℃ 18h～24h
TSI（排除A/A H2S－结果 ），靛基质，尿素，KCN，赖氨酸
沙门氏菌血清学试验
2020/4/24
H2S＋ 靛＋ 尿－ KCN－ 赖＋
甘露醇 山梨醇 沙门氏菌血清学试验
H2S－ 靛－ 尿－ KCN－ 赖＋/－
ONPG － 沙门氏菌
非如左述的各种反应结果 非沙门氏菌
沙门菌仪器检测法
• VIDAS（生物梅里埃公司） • BAX （杜邦公司）
2020/4/24
沙门菌仪器检测法
• VIDAS 应用酶联免疫技术制造的全自动免疫分析仪 ，
用荧光分析技术通过固相吸附器，用已知抗体来捕 捉目标生物体，然后以带荧光的酶联抗体再次结合 ，经充分冲洗，通过激发光源检测，即能自动读出 发光的阳性标本，其优点是检测灵敏度高，速度快 ，可以在48小时的时间内快速鉴定沙门氏菌、大肠 杆菌O157：H7、单核李斯特菌，空肠弯曲杆菌和 葡萄球菌肠毒素等。
BS & DHL (亚利桑那菌琼脂)
37 ℃ 24～48h
TSI & 赖氨酸脱羧酶
37 ℃ 24～48h
TSI & 尿素酶
37 ℃ 24～48h
生化试验
2020/4/24
血清学试验（“O”抗原，“Vi”抗原）
结果判定
细菌学分析手册（FDA/BAM）
第五章 沙门菌属
样品（20类）25g
225mL 乳糖肉汤（LB）or 胰酪胨大豆肉汤（ TSB）or 煌绿溶液 （BG）or 通用前增菌肉汤（UPB）or营养肉汤（NB）or 再造脱脂奶粉 or 四硫酸盐煌绿（TT）
BGS & DMLIA or XLT4
35± 1℃ 18~24h & 48h
TSI & LIA 血清学试验
商业生化试剂盒或自动鉴定系统 or 传统生化鉴定（AOAC Official Method 967.27 or "Edwards and Ewing's Identification of Enterobacteriaceae"）
非沙门菌
酚红卫矛醇肉汤，色氨酸肉汤（KCN， 丙二酸盐，吲哚），O抗原
5种商业生化鉴定系统（API 20E, Enterotube II, Enterobacteriaceae II,MICRO-ID, or Vitek GNI）
酚红乳糖肉汤，酚红蔗糖肉汤，MR－VP,西蒙氏柠檬酸盐 &
&O抗原&H抗原