高效液相色谱法测定抗真菌化合物在小鼠血清中的降解水平
高效液相色谱法测定血清中氟康唑的药物浓度
高效液相色谱法测定血清中氟康唑的药物浓度卢家梅【摘要】目的:建立高效液相色谱法(HPLC)测定血清中氟康唑药物浓度的方法.方法:采用HPLC法,血清样品采用乙酸乙酯进行提取,用氨苯蝶啶做内标,Lichrospher-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈∶水∶磷酸(22:78:0.28,加乙二胺调pH为4),流速1.0 ml/min,柱温20 ℃,检测波长295 nm.结果:HPLC法在0.1～6.0 μg/ml之间线性良好(r=0.999 9),日间精密度和日内精密度相对标准差均<10%,低、中、高三个浓度样品平均提取回收率85.93%～100.60%.结论:本方法快速、准确、重现性好,为氟康唑临床血药浓度监测和药代动力学研究提供参考.【期刊名称】《蚌埠医学院学报》【年(卷),期】2013(038)010【总页数】3页(P1331-1333)【关键词】氟康唑;高效液相色谱法;血药浓度【作者】卢家梅【作者单位】安徽省蚌埠市食品药品检验所,233000【正文语种】中文【中图分类】R978.5氟康唑是三唑类第三代抗真菌药，是唯一的水溶性抗真菌药，能很好地通过血脑屏障而进入脑脊液，主要用于治疗念珠菌病和隐球菌病，是目前治疗全身性真菌感染的首选药物，具有抗真菌谱广、抗菌活性强、临床疗效好、不良反应少且轻等特点［1］。
笔者在参考有关文献［2－3］的基础上，建立了高效液相色谱法(HPLC)测定人血清中氟康唑的药物浓度，现作报道。
1 材料与方法1.1 仪器与试剂 LC－10A型HPLC，LC－10ATvp型输液泵，SPD－10ATvp型紫外监测器，苏州岛津公司产品;TGL－16B型高速离心机，上海安亭科学仪器厂。
SK－1型快速混匀器，金坛市科析仪器有限公司。
乙腈(TEDIA公司)，色谱纯;甲醇(中国医药集团上海化学试剂公司)，色谱纯;磷酸(安徽省铜官山化工总厂)，分析纯;乙二胺(Switzerland)，分析纯;水:重蒸水，自制;空白血清:蚌埠市血液中心提供。
高效液相色谱法测定小鼠组织及血浆中紫杉醇含量
紫杉 醇 （ａｌａｅ，Ｐ Ｘ） 美 国新 化 合物 实 体 ｐｃｔ ｌ Ｔ 被 ｉｘ （ ｅ ｈｍｉ ｌ ｎｉ ， Ｃ ） 为 近 ２ Ｎｗ Ｃ ｅ ｃ ｔｙ Ｎ Ｅ 称 ａＥ ｔ ０年来 最 伟 大 的发现之 一 ， 具有 独 特 的微 管 稳定 作 用 而 被广 泛 它 用 于乳腺 癌 、 列腺癌 、 前 卵巢癌 、 颈部肿 瘤 、￣ ，Ｈ 头 ３ ｄｔｔ
２０ ０ ０ ８— ８—１ ０接 收
作者单位 ： 安徽医科大学药学 院， 合肥
２ ０ ３ ３０ ２
安徽医科大学附属省立医院药剂科 ， 合肥
安徽 中医学院药学 院２ ０ ０ ８届毕业生 ， 合肥 作 者简介 ： 卢 金 今， ， 女 硕士研究生 ；
２０ ０ ３０ １
２ ０ ３ ３０ １
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５ ０‘ ９
安徽 医科大 学学报
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高效液相色谱法测定 小鼠组织及血浆中紫杉醇含量
卢 今 ， 伍长娟 杨 肖琳 高 ， ， 雷 陈礼明 ， ， 金 涌
涌， ， 男 博士 ， 教授 ， 硕士 生导 师 ， 责任 作者 ， — ａｌ Ｅｍｉ
ｊａｄ ｍ ｉ ｃｉａ ＣＨ ｙｙ＠ ａｌ ｈｎ．Ｏ１ ．
董佳生．腹壁下动脉 穿支皮瓣乳 房再造的 手术要 点 ［ ］ 外 科 Ｊ． 理论与实践 ，０ ６ ｌ （ ） １２— ． ２ ０ ， １２ ：０ ３ 杨建敏 ， 王 颀， 李文萍 ， 乳 腺癌改 良根治术同期假体 植入 等． 重建乳房 ［ ］ 中华乳腺病杂志 ，０ ８ ２ １ ：５— ． Ｊ． ２ ０ ， （ ） １ ７
高效液相色谱紫外检测法同时测定小鼠红细胞中S-腺苷甲硫氨酸和S-腺苷同型半胱氨酸
高效液相色谱紫外检测法同时测定小鼠红细胞中S-腺苷甲硫氨酸和S-腺苷同型半胱氨酸唐秀芳;王箭;张晓清;高茹菲;丁敏【摘要】建立了高效液相色谱紫外检测同时测定红细胞中.S-腺苷甲硫氨酸(SAM)和S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)的方法.采用ZORBA×Eclipse×DB-C8色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),以含3 mmol/L庚烷磺酸钠的40 mmol/L磷酸钠缓冲溶液(pH 3.72)-甲醇(95∶5,V/V)为流动相,流速0.9 mL/min,柱温35℃,紫外检测波长设置:0 ～8.00 min,450 nm; 8.01～16.00 min,260 nm.SAH与SAM的线性范围分别为0.25～ 3.0 mg/L和0.50 ～ 10 mg/L,检出限分别为0.15和0.07 mg/L.方法日内和日间相对标准偏差(RSD)分别小于6.5％和7.4％,平均回收率为80.9％～116.2％.利用本方法对19例叶酸缺乏孕小鼠和11例健康对照孕小鼠红细胞进行测定.结果表明:叶酸缺乏组SAH明显高于健康对照组,而SAM两组间无显著差异.【期刊名称】《分析化学》【年(卷),期】2013(041)004【总页数】5页(P570-574)【关键词】高效液相色谱;S-腺苷甲硫氨酸;S-腺苷同型半胱氨酸;红细胞【作者】唐秀芳;王箭;张晓清;高茹菲;丁敏【作者单位】重庆医科大学检验医学院,临床检验诊断学教育部重点实验室,重庆400016;重庆医科大学检验医学院,临床检验诊断学教育部重点实验室,重庆400016;重庆医科大学检验医学院,临床检验诊断学教育部重点实验室,重庆400016;重庆医科大学生殖生物学研究室,重庆400016;重庆医科大学检验医学院,临床检验诊断学教育部重点实验室,重庆400016【正文语种】中文甲硫氨酸(Methionine,Met)在腺苷转移酶催化下与ATP反应生成S-腺苷甲硫氨酸(S-Adenosylmethionine,SAM),SAM是体内最主要的甲基供体,在甲基转移酶的催化下,参与乙酰胆碱、磷脂类、生物信息大分子DNA和RNA[1]的甲基代谢。
荧光-反相高效液相色谱法同时测定小鼠脑组织中3种单胺类神经递质
１３ ３ 线 性 范 围 ： 制 ５ ０ ｇ ｍＬ ， 百 草 枯溶 液 ， 其 用 ．． 配 ０ ・ 一 的 将 健康 人 血 清 逐 级 稀 释 成 ５ 、 ０ ４ ２ ０８ ０ ４ ０ ２ ０ １ ０ １ 、 、 、 ．、 ．、 ．、 ．、
００ ・ ． ５ ｇ ｍＬ ， 照 １ ３ １节 方 法 处 理 。在 ２ ７ ｍ 处 测 定 吸 按 ．． ５ｎ
［］ 环 境 与 健 康 杂 志 ．０ ７ ２ （ ）３ ５ Ｊ． ２ ０ ，４ ５ ：４ ．
１ ３６ 反 应 条 件 的选 择 ： 第 ～ 和 第 二 方 法 使 用 连 二 亚 硫 酸 ．． 与 钠法 比较 ， 面 二 法 操 作 条 件 较 为 苛 刻 ， 为连 二 亚 硫 酸 钠 溶 前 因
理， 清中百草枯浓度分别为 １ ． 血 ７２和 ９ ９ ／ ・ ．１ ｇ ｍＬ＿。 ｚ 。
２ 讨 论
百草 枯 是 毒 性 较 大 的 农 药 ． 旦 中 毒 时 ， 死 亡 率 可 达 一 其
５ ％～８ ％ ； 报 告 【 认 为可 达 ８ ％ ～９ ％ 。 体 液 中 的 浓 度 ０ ０ 有 ５ ］ ５ ５ 检 测 常 可 预 测 抢救 的 成 功 率 。 文 献 报 道 的 检 测 方 法 有 气 相 色
液本 身 稳 定 性 较 差 （ ．ｈ后 就 不 能 再 用 ） 须 随 用 随 配 ， 便 １５ ， 不
（］ 瑞 萍 ， 泽 武 ． ５张 邱 循证 医学 在 中毒 领 域 中 的 应 用 ［］ Ｊ ．中 国 急 救 医
时 较 长 ， 利 于 突 发 事 件 的 检 测 。 分 光 光 度 计 由 于 已 较 为 普 不
及， 作 简 便 快 速 。 敏 度 高 ， 有 实际 的 临 床 意 义 ， 操 灵 具 尤其 是 本
高效液相色谱法检测饲料中的硝基呋喃类药物
２６ 混合 型 阳离 子交 换柱 ： ． 规格 为 ６ ｍ 。 ０ ｇ ２７ 微孔滤 膜 ： 格 为 ０２ ｍ。 ． 规 ．１ ｘ ２８ 呋喃西 林 （ ｉｏｕａｏ ｅ ： ． Ｎ ￣ ｆｒ ｎ ） 纯度 Ｉ９ ％。 ｚ ＞ ９ ２９ 呋喃妥 因（ ｉｏｕ ｎｉｎ ： 度 Ｉ９ ％。 ． Ｎ ｔ ｆａ ｔ ）纯 ＞ ９ ｒ ｏ ２１ 呋 喃它酮 （ ｕＭ ａ ｏ ｅ ： 度 ＞９ ％。 ． ０ Ｆ ｒ ｔｄ ｎ ）纯 １ ９ ２１ 呋 喃唑酮 （ ｕａｏｉｏ ｅ ： 度 Ｉ９ ％。 ．１ Ｆ ｒｚｌ ｎ ）纯 ＞ ９ ｄ ２１ ２ ． ２ ％甲酸 溶液 ： 甲酸＋ ＝ ＋ ８ 水 ２９。 ２１ ｌ ．３ ％氨水 溶液 ：５ ３ ％氨水＋ ＝ ＋ ９ 水 １９ 。 ２１ 固相 萃取 柱洗脱 液 ：％氨水＋ ． ４ ｌ 甲醇＝ ０ ７ 。 ３ ＋０ ２１ 硝 基 呋 喃 类 药 物 混 合 标 准 贮 备 液 （０ ｍ￣ ． ５ １０ ｍＬ ： 称 取 ４ 种 硝 基 呋 喃 类 药 物 （． ，． ， ） ２８ ２９ ２１ ，．１ 各 １ ０ （ 确 到 ００ ０ ｇ 于 １ｍＬ容 ． ２１ ） ０ ． ｇ精 ０ ． １） ０ ０ 量瓶 中 。 乙腈溶 解定 容 。一 ０ 用 ２ ℃保存 ６个月 。 ２１ 硝 基 呋 喃 类 药 物 混 合 标 准贮 备 液 （０ １ ／ ．６ ２ ０ｘ ｇ
中 的硝 基 呋 喃 类 药 物 。 缩 近 干 ， ２ 甲酸 溶 解 ， 混 合 浓 用 ％ 经
除非 另有 说 明 ． 分 析 中仅使 用 确 认 为分 析 在 纯 的试 剂 和 Ｇ ／ ６ ２ ２ ０ （ 析实 验室 用水 规 ＢＴ ６ ８ — ０ ８ 分 格 和试 验方 法》 中规定 的二级 水 。
农药降解微生物的筛选和鉴定
农药降解微生物的筛选和鉴定随着农业生产的不断发展和进步，农药的使用逐渐成为了提高农作物产量和品质的重要手段。
然而，长期高强度使用农药也给生态环境和人类健康带来了一定的风险和威胁。
为了减少农药对环境和人体的危害，寻找一种安全、高效的降解方法已经成为了重要的研究方向之一。
而利用微生物进行农药降解成为了一种备受关注的解决途径，因为微生物可以通过吸附、降解、转化等方式将农药降解无害物质，从而实现环境和人健康的保护。
然而，微生物降解效率的高低，直接决定了它在农药降解过程中的应用价值。
因此，寻找适合的微生物进行农药降解，成为了重要的研究点之一。
第一步要做的事情是筛选。
为了寻找适合降解农药的微生物，首先需要从自然界中的土壤、水体等样本中开展微生物的筛选研究。
一般而言，选择样本时要尽量选取与目标农药污染草地有较强的关联性和相似地理位置的样本，以期能够找到更适合的菌种。
在筛选的过程中，应该注意到不同菌种在降解效率、降解速度、生长适应条件、细胞生命等方面存在较大差异。
因此，需要针对目标农药，制定更加具体的微生物鉴定方案，设计合理的实验方案促进筛选工作的开展。
接下来，就要进行种菌和鉴定。
在筛选出适合降解农药的微生物后，需要进行种菌工作，并发展良好的微生物种质资源。
在细菌鉴定过程中，可以通过以形态、生理生化、分子生物学等方法进行鉴定，以期更加准确地判定细菌种类和特征，进一步验证其对农药的降解能力和效率。
比如，针对目标农药的种类与形式不同，可能导致微生物对其降解效率与速度差异较大，因此在进行初步筛选工作的同时，就要进行微生物的鉴定和潜力评价。
最后，就需要量化评价。
针对筛选的适合降解农药的微生物进行量化评价与实验验证，是推动微生物农药降解向工业化、标准化方向的主要应用手段。
在量化评价的过程中，主要包括解析菌株对农药的降解效率、降解速度、降解产物和适应环境等方面的具体表现。
同时，建立科学合理的微生物降解评价标准，对于促进微生物降解的推广应用也有着重要的意义。
高效液相色谱法检测水产品中的ATP关联化合物
高效液相色谱法检测水产品中的ATP关联化合物刘亚;章超桦;陆子锋【摘要】研究了利用高效液相色谱法对水产品中的ATF'关联化合物进行检测,确定了缓冲液的最佳pH值、流速和浓度,并对方法的准确度、精确度和检测限进行了测定.实验结果显示:pH值6.5,流速0.70 mL/min时色谱峰的分离情况较好.7种ATP关联化合物含量在2～500μg/mL时,浓度与色谱峰面积呈良好的线性关系.本方法的相对标准偏差为0.08%～6.81%,加标平均回收率为98.11%～102.25%.方法检出限为52～53 ng/mL.【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2010(036)006【总页数】5页(P137-141)【关键词】高效液相色谱;ATP关联化合物;测定【作者】刘亚;章超桦;陆子锋【作者单位】水产品深加工广东普通高校重点实验室,广东湛江,524088;广东海洋大学食品科技学院广东,湛江,524088;水产品深加工广东普通高校重点实验室,广东湛江,524088;广东海洋大学食品科技学院广东,湛江,524088;广东海洋大学食品科技学院广东,湛江,524088【正文语种】中文ATP关联化合物是由嘌呤碱基、嘧啶碱基、尼克酰胺等与糖磷酸酯组成的一类化合物,如鸟苷酸(GMP)、肌苷酸(IMP)、三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、一磷酸腺苷(AMP)、次黄嘌呤核苷(Hx)和次黄嘌呤(HxR)等。
它们与水产原料的风味和新鲜度紧密相关[1]。
如AMP有着压抑苦味的特性,能使食物产生理想的甜味和咸味,是贝肉中良好的风味增强剂。
而与AMP所产生的鲜味相反,ATP降解的一种最终产物——次黄嘌呤会产生苦味[2]。
肌苷酸(IMP)、鸟苷酸(G MP)是主要的呈味核苷酸,作为新型的食品添加剂,已逐渐广泛应用于食品调味中[3]。
MP增加食品鲜味的能力比谷氨酸钠强40倍,它与味精合用具有协同作用,含2%～8%肌苷酸的味精通常称为强力味精[4]。
综述-高效液相色谱-质谱联用技术在代谢组学中的应用进展
高效液相色谱-质谱联用技术在代谢组学中的应用进展摘要：代谢组学是对一个生物系统的细胞在给定时间和条件下所有小分子代谢物质的定性定量分析, 从而定量描述生物内源性代谢物质的整体及其对内因和外因变化应答规律的科学。
而高效液相色谱-质谱联用法（HPLC-MS）作为代谢组学中一种重要的分离检测方法，在代谢组学中有着方方面面的应用。
本文介绍代谢组学中的高效液相色谱-质谱联用技术，并从药物分析、生理病理代谢、临床诊断标志物和细胞鉴定等方面介绍高效色谱-质谱联用技术在代谢组学中的应用。
关键词：高效液相色谱-质谱联用技术；代谢组学代谢组学的研究目的就是从尿液、血浆、血清、唾液和胆汁等生物体终端样本中检测代谢物，或跟踪代谢水平整体的动态变化，提取“组学”信息，以此来反映生物体在外源刺激作用下的体内生物学过程变化情况。
代谢组学研究的基本流程包括样品采集、预处理、代谢组分析、数据分析以及研究结果的解释与应用等。
1.检测工具其中的样品采集分离与分析离不开分离检测工具。
常用的分离检测工具包括色谱(Chromatography)、质谱(Mass Spectrometry，MS)、核磁共振(Nuclear Magnetic Resonance，NMR)等。
【1】1.1核磁共振（NMR）NMR快速、选择性好,其样品处理简单且不造成破坏,只要含氢的代谢物都可以被检测,即可以对所有的分析对象达到无歧视分析。
对样品无损伤且重复性好,能够广泛应用于药物工业和病人的尿、血样分析。
样本制备简单且易自动化。
但是复杂混合物的NMR谱的解析非常困难。
对全面的代谢谱图分析, NMR最大的缺陷是灵敏度相对较低, 从而使得它不适合分析大量的低浓度代谢物。
【2】所需硬件投资也比较大1.2色谱（Chromatography）气相色谱(Gas Chromatography，GC)广泛用于微量、痕量组分的分析。
但是，气相色谱受组分挥发性和热稳定性的限制，需对样品进行衍生化处理。
高效液相色谱法测定小鼠血浆中芦荟大黄素的浓度
Ｓ ｉｄＲ １ ａ ｏｉ ｈｓ ｗ ｓ ｅ ａ０ ＿ ｔ —ｃｔ ｉ （ ： ．２ ａｄｎ ｏ ｓｅｃ ｅ ｃ０ ａ ｔ ｔ ４ Ｏ ｍ ｈ ｌ ＰＣ８ ｂ ｅ ａｅ ａ ｔ Ｉ１ｗ ｅ ａｅｃ ｃ ６ ３ ０ ） ｎ ｕｒ ｃｎｅｄｔ ｔ ｎ ｓ ｅ ａＡ ＝ ｌ ｅ ， ｍ １ ｐ Ｌ ｍ ｈ ｌ— ａ ｒ ｉａ ｄ ５ ５ ． ｅ ｅ ｉ ｗ ｓ ｎ
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高效液相色谱_荧光法测定小鼠脑组织中的单胺类神经递质
·774· ◇调查与分析 ◇
安徽医科大学学报 A cta U n iversita tis M ed icina lis A nhu i 2009 Dec; 44 (6)
急性白血病 1 185例次住院患者血流感染特点及危险因素分析
秦 慧 ,杨明珍 ,宋万灯 ,武琳琳 ,缪华伟 ,程 歆 ,吴 炜 ,刘沁华 ,王永庆
安徽医科大学学报 A cta U n iversita tis M ed icina lis A nhu i 2009 Dec; 44 (6)
·773·
1. 4 统计学处理 数据结果以 x ±s表示 ,采用线 性回归最小二乘法计算单胺类神经递质的标准曲 线。
2 结果
2. 1 标准色谱图 实验得到各标准物质谱图见图 1, 3种标准物质都达到了基线分离 。得到了小鼠脑 组织匀浆样品的色谱图 (图 2) ,除了多巴胺前有一 大的未知峰与多巴胺未达到基线分离外 ,其余各种 化合物均达到基线分离 。标准液和脑匀浆样品中的 NE、DA 和 52HT的峰之间分离较好 (样品中 DA 与 杂质峰的分离尚有待改善 ) 。
相关系数 0. 999 7 0. 999 9 0. 998 9
2. 3 回 收率 和精 密度 的测 定 按 113 操 作 , 按 0110 g脑 (湿重 )加入 110 m l的比例加入低 、中 、高 浓度的标准溶液 ,于同日内分别测定 NE、DA 和 52 HT加入量的对照品脑组织匀浆样品 ,每种加入量样 品平行测定 5次 ,计算各种标准物不同浓度的脑组 织匀浆样品回收率 ,结果如表 3。连续测定混合标 准液 5次 , NE、DA 和 52HT的峰面积日内测定的相 对标准偏差分别为 217%、215%和 314%。
图 1 3种神经递质混合标准溶液色谱图 (1: NE; 2: DA; 3: 52HT)
40%苯醚·肟菌酯悬浮剂的高效液相色谱分析
Ａ 为试样溶液中苯醚 甲环唑 （肟菌酯 ）峰面积 的平 均值
ｍ 为标样的质量 （ｇ） ｍｚ为 试样 的 质 量 （ｇ） Ｐ为标样 中苯醚甲环唑 （肟菌酯 ）的质量分数 （％ ）
图 ３ 苯 醚 甲 环唑 紫 外 吸 收 谱 图 图 ４肟 菌酯 紫外吸收谱 图
３４ ２０１８．８中 国 农 药
１－３溶液 的配 制 １．３．１标样溶液的配制 称 取苯醚 甲环 唑标样 ０．０２ ｑ（精确至 ０．００００２ ｇ）
和 肟 菌 酯标 样 ０．０２ｇ（精 确至 ０．００００２ ｇ），置于 １００ ｍ Ｌ容量瓶中 ，加入流动相超声溶解 ，冷却至室温定容 ， 摇 匀 备用 。
１．３．２试样溶液的配制 称 取试样 ０．１ｑ（精确 至 ０．００００２ｇ），置于 １００ ｍＬ 容量瓶 中 ，加入流动相超声溶解 ，冷却至室温定容 ，摇 匀用 ０．４５ ｍ 针头 过 滤器 过 滤备 用 。 １．３．３测定 采 用上 述 色谱 条 件 ，待 仪 器 稳 定 后 ，连 续 注 入 数 针 标样溶液 ，直至相 邻两针的响应值变化小于 １．５％ 后 ，再 按照标 样溶液 、试样溶液、试样溶液、标样溶液顺序进 样分析。标样溶液和试样溶液的色谱 图分别见图 １、２。
肟菌酯广谱杀菌剂是从天然产物 Ｓｔｒｏｂｉｌｕｒｉｎｓ作为先 导化合物成 功开发 的～类新的合氟杀菌剂。对几乎所有 真菌纲 （子囊菌纲、担子菌纲、卯菌纲和半知菌类 ）病 害如 白粉病、锈病 、颍枯病、网斑病 、霜霉病、稻瘟病 等 均 有 良好 的活 性 。
高效液相色谱法测定发酵液中3－羟基丁酮
高效液相色谱法测定发酵液中3－羟基丁酮汤丹丹;王腾飞;王瑞明【摘要】The acetoin microorganism fermentation system was prepared by biological method. The method to determine acetoin by high performance liquid chromatography was studied. The fermentation broth was pre-treated by centrifuging and filtering with 0. 22 μm microporous membrane.A column of Hypersil NH2(300 mm × 4. 6 mm,5 μm)with an mobile phase containing acetonitrile and water(90∶10,V/V) was used for the analysis of acetoin in fermentation system,the flow rate was 1 mL/min,the column tem-perature and detector temperature was 35 ℃,the chromatography was completed in just 25 min. The re-covery rate was 95 . 96% ~101 . 2% and the relative standard deviations 1 . 69% ~2 . 09%. The method was proved to be a rapid and effective quantitative analysis method with simple pretreatment and high sen-sitive to determine the acetoin in fermentation broth,which was fit for guiding real-time monitoring the fermentation process.%针对生物法制备3－羟基丁酮的微生物发酵体系，研究了利用高效液相色谱法测定3－羟基丁酮的方法。
高效液相色谱法测定血清中富马酸奎的平浓度
一
晚 禁 食 禁 水 。 每 日上 午第 一 组 和第 二组 灌 胃生 理
盐 水 ０ ２ ．５ｍＬ・ １ ） 体 重 ， （０ｇ 以及 第 三 组 灌 胃解 酒
保 肝 口服 液 ０ ２ ． ５ｍＬ・ １ ） 体 重 ， ０ｍｉ 第 二 （ ０ ｇ ３ ｎ后
组 别 动物 数 对 照 组 ２ ０ 口服液组 ２ ０
醉酒 时间 ／ ｎ 醒酒 时 间／ ｎ ｍｉ ｍｉ ３ ９ ２±ｌ ． ２ ０． ｌ ３ ８ ８６ ９ ９± ５ ．
（＂＝ ｌ ５） （ ：ｌ ” ３）
死亡 率 ／ ％ ３ （ ／ ０ ５ ７２ ） ５ １２ ） 。 （ ／ ０
实 验 前 晚 禁 食 禁 水 。 一 组 用 生 理 盐 水 ０ ２ ． ５ｍＬ・ １ （０ ｇ 体 重 灌 喂 （ 照 组 ） 另 一 组 按 ０ ２ ） 对 ， ． ５ ｍＬ・ １ （０ ｇ 体 重 灌 喂 解 酒 保 肝 口服 液 （ 服 液 组 ） 记 录 每 ） 口 ， 只 动 物 的 具 体 灌 喂 时 间 。 ３ ｎ后 ， 别 按 ０ １ ０ ｍｉ 分 ．４ ｍＬ・ １ ） 体 重 灌 喂 白酒 。 观 察 小 鼠活 动 情 况 ， （ ０ ｇ 记 录 小 鼠 翻正 反 射 消 失 （ 酒 ） 恢 复 （ 酒 ） 需 时 醉 至 醒 所 间（ ｎ ｌ ， 观察 ２ ｍｉ ）ｌ 并 Ｊ ４ ｈ内 小 鼠 的死 亡 只 数 。 ２ ２ 乙 醇 及 乙醇 脱 氢 酶 含 量 测 定 ． 雄 性 小 鼠３ 只 ， ０
死 动 物 ， 即取 出 肝 脏 和 胃 ， 脏 去 包 膜 ， 立 肝 胃去 内 容 物 并 经 预 冷 的 生 理 盐 水 反 复 冲 洗 ， 到 干 净 为止 ， 直 滤 纸吸干 、 重 ， １ １ 称 按 ： ０加 入 预 冷 的 １ １ ％ 氯 化 钾 溶 ．５ 液分别制成肝 、 胃匀 浆 ， 照 卿 笃 信 等 的方 法 测 定 肝 参 组织、 胃组 织 乙醇 脱 氢 酶 （ Ｈ） 量 。 ＡＤ 活性 以 ＡＤ 含 Ｈ 每 １ ｇ组 织 每 １ ｍｉ 生 成 ＮＡＤＨ 的 纳 摩 尔 数 表 ｎ 示 血 清 乙 醇 浓 度 测 定 参 照 文 献 报 道 的 方 法 进 ２。 Ｊ
反相高效液相色谱法测定小鼠血浆和组织中阿昔洛韦浓度
柱 ， 动相 为 甲醇一 （ ：５ ｖ Ｖ） 流速 １０ｍ／ ｉ， 流 水 ５９ ，／ ， ． ｌｍ ｎ 检测 波 长 ２４ ｎ 样 品采 用 １ ％三 氯 醋 酸 去 蛋 白 。结 果 ５ ｍ， ２ 结论 该 方 法灵 敏 、 精确 ， 可供 药 代动 力学 研究 使用 。
韦浓 度 在 ００ ．５±２ ｇ Ｌ范 围 内 与 峰 面 积 呈 良好 线 性 关 系 ， 低 检 测 浓 度 分 别 为 ００ ， ．５ｍｇ Ｌ 天 内 及 天 问 精 密 度 均 小 于 ６ 。 ０ｍ ／ 最 ．２ ０ ０ ／ ， ％
是 ２ ８Ｓ清 晰 的 带 型 ， 常 认 为 所 提 取 的 Ｒ Ａ 未 被 降 通 Ｎ 解 ， 以用 提 取 的 Ｒ Ａ进 行 后 续 实验 。 我 们 实 验 室 还 可 Ｎ 提 取 过 多 种 组 织 Ｒ Ａ 如 外 周 血 淋 巴 细 胞 培 养 后 的 Ｎ Ｒ Ａ、 肪 组 织 Ｒ Ａ、 脏 Ｒ Ａ 等 ， 此 方 法 鉴 定 的 Ｎ 脂 Ｎ 肝 Ｎ 经 Ｒ Ａ 的质 量 同 分 子 克 隆 手 册 等 参 考 书 用 变 性 琼 脂 糖 Ｎ 凝 胶 鉴 定 的 Ｒ Ａ完 全 无 异 ， 果稳 定 可 靠 。 Ｎ 结
成 为 治 疗 单 纯 疱 疹 和带 状疱 疹 病 毒 感 染 尤 其 是 重 症 感 染 的 首 选 药 。后 经 临床 试 验 证 实 其 对 慢 性 乙 肝 也 有 治 疗 效 果 。 其 血 中药 物 浓度 的 测 定 虽 已 有 Ｈ Ｌ Ｐ Ｃ方 法 报 道 ＿． ， 不 理 想 且 无 法 用 于 测 定 靶 器 官 中 的 药 物 浓 １ｊ但 ２
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第２ ４卷 第 ８期 ２０ ０ ２年 ８月
第 ｉ
军
医
大
生物药物分析与检验
生物药物分析与检验生物药物分析与检验的特点：1.需要进行相对分子质量的测定、2.需要检查生物活性3.需做安全性检查4.需做效价测定5.要用生化法确证结构终点测定法的条件：1.必须有专一地作用该被测物质的酶，并能得到它的制品；2.能够确定使这种酶反应接近进行完全的条件；3.反应中底物的减少、产物的增加、辅酶物质的改变等可以借助简便的方法进行测定高效液相色谱法的定性分析1.利用已知物质定性的方法①利用保留特性②利用不同柱比较2.色谱法与其他方法结合定性①利用化学反应定性②利用选择性检测器定性③液相色谱-质谱联用技术、液相色谱-核磁共振联用技术生物检定的范围:1.药物的效价测定2.体内微量生物活性物质的测定3.中药质量的控制4.某些有害杂质的限度检查基因工程药物的特点：1.分泌量极低而生理、药理活性极高2.具有细胞和组织特异性3.多数细胞生长因子具有多功能性4.细胞因子间存在复杂的相互作用5.具有低免疫原性特殊杂质检查方法：物理化学区分方法一、物理法“1. 臭味及挥发性的差异2. 颜色上的差异3. 溶解行为上的差异二、化学分析法1. 酸碱反应2. 呈色或沉淀反应3. 产生气体4.氧化还原反应免疫电泳技术：将琼脂电泳与免疫扩散结合起来，即利用电场作用下带电蛋白质在琼脂凝胶中具有不同的迁移率，以及相同的蛋白质具有完整的抗原性的特点，用于分析抗原或抗体性质的一种技术。
电泳：带电颗粒在电场的作用下，向着与其电性相反的电极移动的现象。
终点测定法：先借助酶反应（单独的反应或几种酶构成的偶数酶反应）使被测物质定量地进行转变，然后在转化完成后，测定底物、产物或辅酶物质（第二底物）等的变化量生物检定：利用生物体（整体动物、离体组织/器官、细胞和微生物等）的作用以测定其效价或生物活性的一种方法。
质反应：当一定剂量的药物注入动物体内后，观察某一反应或反应的某一程度出现与否，只有质的变化。
量反应：药物对生物体所引起的反应随着药物剂量的增加产生的量变可以测量者。
一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血清中抗真菌药物的方法[发明专利]
![一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血清中抗真菌药物的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/630dd0f68ad63186bceb19e8b8f67c1cfad6eead.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010477006.3(22)申请日 2020.05.29(71)申请人 南京品生医学检验实验室有限公司地址 210043 江苏省南京市江北新区浦东北路7号扬子科创总部基地5号楼10层(72)发明人 成晓亮 李美娟 (74)专利代理机构 镇江基德专利代理事务所(普通合伙) 32306代理人 邓月芳(51)Int.Cl.G01N 30/02(2006.01)G01N 30/06(2006.01)G01N 30/72(2006.01)G01N 30/86(2006.01)(54)发明名称一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血清中抗真菌药物的方法(57)摘要本发明公开了一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血清中抗真菌药物的方法，所述的抗真菌药物包括：氟康唑(FCZ)、伏立康唑(VCZ)、伏立康唑N ‑氧化物(OVCZ)、泊沙康唑(PCZ)、伊曲康唑(ICZ)、羟基伊曲康唑(HICZ)、卡泊芬净(CPF)；采用超高效液相色谱串联质谱法检测预处理血清中抗真菌药物的含量，利用质谱同位素内标法定量，以标准品与内标物的浓度比为X轴，标准品与内标物峰面积比为Y轴，建立校准曲线，计算出血清中目标药物的浓度；本发明方法灵敏度高、特异性强、准确且前处理过程简单，5.0min之内同时完成7种常用的抗真菌药物的分离和检测，准确度与精密度基本满足要求，为临床上抗真菌药物浓度监测提供简单快速的检测方法。
权利要求书3页 说明书12页 附图1页CN 111766312 A 2020.10.13C N 111766312A1.一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血清中抗真菌药物的方法，其特征在于，所述的抗真菌药物包括FCZ、VCZ、OVCZ、PCZ、ICZ、HICZ和CPF；采用超高效液相色谱串联质谱法检测预处理血清中FCZ、VCZ、OVCZ、PCZ、ICZ、HICZ和CPF的含量，利用质谱同位素内标法定量，以标准品与内标物的浓度比为X轴，标准品与内标物峰面积比为Y轴，建立校准曲线，计算出血清中目标药物的浓度；(1)具体色谱条件：流动相A：含0.01％～0.2％甲酸的水；流动相B：乙腈；色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB C18(3×100mm,1.8μm)；采用梯度洗脱的方式，见表1；流速为0.2～0.5mL/min，每个样品采集时间为5.0min，柱温为30～50℃，进样体积为0.2～5μL；表1流动相梯度洗脱参数(2)具体质谱条件：电喷雾电离正离子检测模式，多反应监测的质谱扫描模式；喷雾电压：3.0kV；源温度：120℃；雾化气温度：400℃，雾化气流速：800L/h，锥孔气流速：150L/h；同时监测目标物对应的标准品和内标母离子、子离子、去簇电压和碰撞电压，参数见表2；表2质谱检测参数。
氟苯尼考的高效液相色谱检测方法
武汉轻工大学毕业论文论文题目：鸡血浆中氟苯尼考的高效液相色谱检测方法Development of a HPLC for determinationof florfenicol in chicken plasma姓名：吕阳学号： 110703112院（系）动物科学与营养工程学院专业动物生物技术指导教师刘宇2015年6月1日目录摘要 (1)Abstract (2)第一章绪论 (3)1氟苯尼考的研究进展 (3)1.1氟苯尼考的药品信息 (3)1.2氟苯尼考的临床应用 (4)1.3氟苯尼考的检测方法 ..................................................... 错误！未定义书签。
2研究目的与意义 ....................................................................... 错误！未定义书签。
3研究内容 (6)第二章试验研究 ............................................................................. 错误！未定义书签。
1 材料与方法 .............................................................................. 错误！未定义书签。
1.1试验材料 ......................................................................... 错误！未定义书签。
1.2试验动物 ......................................................................... 错误！未定义书签。
1.3试验方法 (7)2 结果与计算 (8)2.1波长选取 (8)2.1工作曲线 (10)2.2回收率与精密度 ............................................................. 错误！未定义书签。
高效液相色谱法及其在药物分析中的应用
高效液相色谱法及其在药物分析中的应用以液体为流动相的色谱法称为液相色谱法。
用常压输送流动相的方法为经典液相色谱法，这种色谱法的柱效能低、分离周期长。
高效液相色谱法（highperformanceliquidchromatography，简称HPLC）是在经典液相色谱的基础上发展起来的一种色谱方法。
与经典的液相色谱法相比，高效液相色谱法具有下列主要优点：①应用了颗粒极细（一般为10µm以下）、规则均匀的固定相，传质阻抗小，柱效高，分离效率高；②采用高压输液泵输送流动相，流速快，一般试样的分析需数分钟，复杂试样分析在数十分钟内即可完成；③广泛使用了高灵敏检测器，大大提高了灵敏度。
目前，已经发展了多种不同的固定相，有多种不同的分离模式，使高效液相色谱法的应用范围不断扩大。
下面介绍高效液相色谱法的有关知识，新的方法和技术以及在药物分析中的应用。
一、分类高效液相色谱法按分离机理的不同可分为以下几类：（一）吸附色谱法（adsorptionchromatography）以吸附剂为固定相的色谱方法称为吸附色谱法。
使用最多的吸附色谱固定相是硅胶，流动相一般使用一种或多种有机溶剂的混合溶剂。
在吸附色谱中，不同的组分因和固定相吸附力的不同而被分离。
组分的极性越大、固定相的吸附力越强，则保留时间越长。
流动相的极性越大，洗脱力越强，则组分的保留时间越短。
（二）液-液分配色谱法（liquid-liquidchromatography)液-液分配色谱的固定相和流动相是互不相溶的两种溶剂，分离时，组分溶入两相，不同的组分因分配系数（K)的不同而被分离。
目前广泛使用的化学键合固定相是将固定液的官能团键合在载体上而制成的，使用化学键合固定相的色谱方法（简称键合相色谱法）可以用分配色谱的原理加以解释。
键合相色谱法在HPLC中占有极其重要的地位，是应用最广的色谱法。
按照固定相和流动相极性的不同，分配色谱法又可分为正相色谱法和反相色谱法两类。
多杀菌素的高效液相色谱法测定
多杀菌素的高效液相色谱法测定农药第42卷第10-~(2003)27多杀菌素的高效液相色谱法测定张苑,金志华,林建平,Wr沛霖(浙江大学材料与化工学院生物工程研究所.杭州310027)摘要采用高效液相色谱法对Sacvharpolysporasg.,,su发酵液中多杀茸素含量进行测定.本方法的相对标准偏差为0.11%.变异系数为0.15%.线性相关系数为0.99916.平均回收率为96.94%.关键词多杀茵素高效液相色谱分析多杀菌素是由刺糖多孢菌(Saccharpol~pora,脚)产生的大环内酯类生物杀虫剂【】J.它具有高效,低毒,对环境友好等优点,是一种绿色广谱杀虫剂.兼具生物农药的安全性和化学合成农药的快速效果【3.4】.本文采用高效液相色谱法对S.spinosa发酵液中多杀菌素含量进行了定量分析,该方法快速,准确,重复性好,适合于发酵液中多杀菌素含量的测定,也可用于产品质量控制.1仪器和试剂1.1仪器Agilend1100高效液相色谱仪;pH计PHS一25数显(0.01级)(上海雷磁精密仪器厂);电子天平(BP190SMax200gd=0.1mg);台式离心机TDL80—2B(上海安亭科学仪器厂);超声波清洗器;微孔滤膜(F型0.45/~m,天津自动科学仪器公司).1.2试剂甲醇(色谱纯,上海化学试剂研究所);乙腈(色谱纯.中国医药集团上海化学试剂公司);超滤水(自制);多杀菌素标准品(含量≥99%)o2色谱工作条件色谱柱:Agilend0213Nucleosil100—5C185/zm,250×4.0mm;检测器:紫外光度检测器.波长250nm;流动相:甲醇/乙腈/水=45/45/10(v/v),含有0.05%的乙酸钠:流速:1.0ml/min;进样量:20~1;柱温:室温.3实验方法3.1标准溶液的配制准确称取多杀菌素标样0.025g,加入10ml甲醇.并反复振荡,使标样完全溶解,离心.上清液用0.45/~m的滤纸过滤,即可用于HPLC测定.3.2试样溶液的配制取1Oral发酵液样离心,弃去上清液,向沉淀中添加10ml甲醇.并反复振荡.使多杀菌素完全溶解..再次离心, 用0.45/zm的滤纸过滤上清液.即可用于HPLC测定.3.3测定方法在上述色谱工作条件下.待仪器基线稳定后,连续注入数针标准溶液.计算各针相对响应值的重复性.待相邻两针的响应值变化小于1.5%后.按照标准溶液,样品溶液,样品溶液,标准溶液的顺序进行高效液相色谱分析.采用外标法对样品进行定量分析.多杀菌素含量(mg/I)按下列公式进行计算:x:^J×P,12式中:A.为标准溶液中多杀菌素的峰面积平均值A:为样品溶液中多杀菌素的峰面积平均值P为标样中多杀菌素的含量(mg/l)4结果与讨论4.1色谱条件的确定据文献报道【?和实验对比筛选,确定了检测波长,流动相配比,色谱柱,流速等条件.在此条件下能快速,灵敏,准确地进行定量分析,标样和发酵液样品的HPLC图见图1 和图2.(多杀菌素A的出峰时间为9.389min,多杀菌素D的出峰时间为10.940min)图1多杀菌素标样膏效液相色谱图(多杀菌素A的出峰时问为9.403rain,多杀菌素D的出峰时间为10.972min)图2多杀菌素发酵液膏效液相色谱图28PESTICIDESV01.42No.10(2003)4.2分析方法的线性相关性测定多杀菌素标准品分别配制成50,125,250,500,1000,1250rag/L六种不同浓度的标准溶液,在要求的色谱条件下进行相同体积的进样,以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标作图可得一直线(图3).考察峰面积Area(mAU*rain)与浓度Amt(mg/l)的关系.从图3得到多杀菌素HPIC分析法的回归方程Area=15.481*Amt+321.7,相关系数r=0,99916.多杀菌素浓度在50～1250mg/1.范围内,峰面积与多杀菌素浓度之间都有良好的线性相关性.mAU★m;n20000l5000100005000050010001500mg/I图3多杀菌素HPIC分析法峰面积与多杀菌素含量线性相关性曲线4.3分析方法的精密度测定以处理好的发酵液为样品,用本方法进行六次重复测定,结果多杀菌素HPI.C分析法的相对偏差为0.11%,变异系数为0.15%,说明本方法的重复性良好.'4.4分析方法的准确度测定采用标准添加法,在已知含量的样品中添加?一定量的已知标准品,在上述液相色谱条件下进行6次重复测定,测得平均回收率为96.94%.参考文献(1]KirstHA.MichelKH,MynderseJS.a1.Discovery.isolation. andstructureelucidationofafamilyofstr~cturaUyunique.fer. mentation—derivedtetracyclicmacrolides.In:BakerDR,FenyesJ G.SteffensJJ.(Eds.)SynthesisandChemistryofA~rochemi. cals,AmericanChemicalSociety,WashingtonDC.1992.214—225(2]NakatsukasaWM,BoeckI.OccolowitzJL,et口f.A83543A—D.uniquefermentation—derivedtetracyclicmacrolides.Tetrahed. tonLett.,1991.32:4839—4842【3]CrouseGD.SparksTC.Naturallyderivedmaterialsasproducts andleadsforinsectcontrol:thespinosyns.Rev.Toxico1..1998.2:l33—146(4】.吴霞.多杀菌素——以天然产物开发新农药的范例.世界农药.2001,23(1);24—28(5】WestSD.TurnerLG.Determinationofspintyaynsandits metabolite.sincitruscropsandorangeprocessedcommoditiesby HPLCwithUVdetection.J.Agric.Food.Chem.,2000.48(2): 366—72[6】WestSD.YehI.T.TurnerLG,et口f.Determinationof spinosynsanditsmetabolitesinfoodandenvironmentalmatrices.1.High—performanceliquidchromatographywithultravioletde.tection.J.Agric.Food.Chem.,2000.48(11):5131—5l37 DeterminationofSpinosynsbyHPLCZhangYuan,JinZhihua,LinJian/n'ng,CenPeilin(InstituteofBioengineering,CollegeofMaterialsScienceandChemical Engineering,Zh~iangUniversity.Hangzhou310027.China)Abstract:QuantitativeanalysisofspinosynsbyHPI.CwithNucleosilCI8columnatUV250nmwasintroduced.Theresultshowsthatthe relativestandarddeviation.thecoefficientsofvariation,thelinearcorre.1ationandtheaveragerecoverywere0.11%.0.15%.0.99916and96.94%respectively.Keywords:spinosyns.HPIC,analysis.收稿日期:2002.12.7欢迎订阅2004年<河北化工>杂志2004年<中国化学化工文摘>征订启事<河北化工>为化工综合性技术期刊r由河北省化学工业研究院和河北省化学工业技术情报中心站主办,国内外公开发行,国内统一刊号CN13—1058/TQ,国际标准刊号ISSN1003—5096.本刊为大16开64页码,双月刊,逢双月20日出版.国内订价8.5O元/本.全年51元(舍邮寄费).邮发代号18—333.国内可通过全国各地邮局征订或直接向编辑部汇款订阅.<河北化工>主要报道化工新成果,新工艺,新产品,新设备和先进经验及行业发展方向,动态,市场信息等.<河北化工>常年承办广告业务(广告经营许可证13010241300007),封面用纸为157g铜版纸,设计,印刷精美.欢迎来人,来电,来函联系广告.地址:石家庄市建华南大街18号邮编:050031电话;10311l5051579传真:{03I1l5051096E—mail:hgbjb@163.tom户名:河北省石油化学工业技术情报中心站帐号:0402022409221000187开户行:工商行石家庄建华办事处联系人:赵健<中国化学化工文摘>是中国化工信息中心主办的针对化学化工科技文献方面的检索期刊,是检索全国化学化工发展现状的主要工具.近年来,本刊不断加大对化学化工期刊及高校的报道力度;合并了原<化工科技资料目录>;增加了对国内化工图书,会议文献及高校硕博士论文的报道;并以分册的形式报道国内化工专利.<中国化学化工文摘>为月刊(另附主题,作者索引),大16开本,年订价360元.刊号cN11—3163/TQ,ISSN1004—8235.本刊自办发行.本刊承接广告业务,欢迎企事业单位刊登广告,宣传企业产品及形象.地址:北京市安外小关街53号邮编:100029电话:010—64444070传真:010—64434107E—mail:w—wsf@mail.户名:中国化工信息中心帐号:0200004209089l13680开户行:北京市工商银行和平里分理处联系人:王盛发41-*41-*41-41--IF41-***41-41-41-41-41-**************************-D41-*44-41-41-..宰.竿牵.^^丰..苹+中率+.苹.苹牵半年幸车。
RP-HPLC法测定小鼠血清及脏器中白藜芦醇浓度
RP-HPLC法测定小鼠血清及脏器中白藜芦醇浓度王莉;周红;张三奇;文爱东;王婧雯;连佳芳【期刊名称】《第三军医大学学报》【年(卷),期】2006(28)16【摘要】目的建立可快速测定小鼠血清及部分脏器匀浆中白藜芦醇浓度的RP-HPLC法。
方法取血清或组织匀浆液0．1ml，加入1．0ml乙醚提取两次，每次振荡，离心（6400r／min，10min），取有机层在40℃水浴中氮气流吹干，残渣用100m甲醇混悬溶解，取上清液20μl进样。
选用分析柱：Kromasil C18（150mm×416mm，5μm）；流动相：甲醇：水（48：52）；流速：1ml／min；柱温：室温；柱压：12kPa；检测波长：303nm；进样体积：20μl。
结果各工作曲线线性范围为0．25～25μg／ml，最低检测浓度为100ng／ml（S／N≥3）。
各样品平均绝对回收率大于88％，方法回收率在96％～100％之间，日内和日间精密度的RSD均小于10％。
结论此方法经济、可靠、简单、快速，可用于白藜芦醇血药浓度分析及动物体内分布研究。
【总页数】4页(P1688-1691)【关键词】反相高效液相色谱法;白藜芦醇;血清;组织匀浆【作者】王莉;周红;张三奇;文爱东;王婧雯;连佳芳【作者单位】第三军医大学基础医学部药理学教研室;第四军医大学西京医院药剂科【正文语种】中文【中图分类】R282.71;R284.1【相关文献】1.RP-HPLC法测定人血清中丙戊酸浓度及在癫痫患儿中的应用 [J], 张伟东;马金秋;王娜2.RP-HPLC法测定小鼠血浆中10-羟基喜树碱的浓度 [J], 郭宏红;郑健;井立佳;李思阳;阎秀峰;王洋3.反相高效液相色谱法测定小鼠血清及脏器中白藜芦醇浓度 [J], 王莉;周红;张三奇;文爱东;顾宜;连佳芳;王婧雯4.反相高效液相色谱法测定小鼠血清及脏器中氟尿苷的浓度 [J], 连佳芳;张三奇;顾宜;方坤泉;奚苗苗;王莉5.RP-HPLC法测定小鼠血清及脏器中拉米夫定的浓度 [J], 薛克昌;顾宜;张三奇;蒋永培因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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分类 号 Ｏ ５／９ ６ Ｒ６ ８ 在 ５μ ０Ｌ小 鼠血 清 中加入 ２０Ｌ 甲醇 ， 旋 涡 蘈 ５μ 蘈 于
１ 前言 Ｌ４氧代赖氨酰－ －－ 正缬氨酰－ －－ Ｎ３４甲氧基－ 富马
Ｎ ａ Ｎ ａ ＭＤ ， ｖ 和 ｖ－ Ｐ 预初试验表明这两个化合物在 Ｆ 血清中极易再降解成 Ｉ ７，ｖ 和Ｆ Ｐ而 Ｉ ７ － ７Ｎ ａ ＭＤ ， － ７ ６ ６ 及Ｎ ａ １ｎ ｖ 在２４ｍ处吸收极弱， 因此我们选择测定了 Ｉ ７－ｖ－ＭＤ － ７Ｎ ａ ６ Ｆ Ｐ及Ｆ Ｐ的变化。 ＭＤ ３３ 小鼠血清去蛋白试验 ． 血清去蛋白可采用添加水溶性有机溶剂、 强酸
＊硕 士研究生已 毕业， 现在广州白 云山 制药厂
本文 收稿 日期 ：９６０－３修 回日期 ：９６０－５ １９－１１ ， １９－３２
或中性盐等方法（。 ２ 在本色谱条件下， ） 我们试验了乙
腈、 甲醇、 高氯酸 、 三氯 乙酸等对血清去蛋 白的影响 。
３６ 回收率试验 ． 回收率试验结果见表１Ｉ ７－ｖ－ＭＤ 。 ６７ ａ － Ｎ Ｆ Ｐ的回 收率尚可， 但随着添加量的减少， 回收率有所降低， 从色谱图推测这是由于它在血清中部分降解所致。 Ｆ Ｐ的回收率较低， ＭＤ 且随着在血清中添加量的减
念珠菌试验表明， 该化合物从０ ｎ到６ｍｎ ｍｉ ０ ｉ抑菌圈
大 小基 本不变 ， 随着时 间的 延长 ， 中化合物 的 但 血清 活 力下 降 ， 明化合物可能在血 清中降解 。 了研 究 表 为
３ 结果和讨论
３１ 色谱条件的选择 ． Ｉ ７－ｖ－ＭＤ － ７Ｎ ａ ６ Ｆ Ｐ为三肽类化合物， 肽类化合 物常以Ｔ Ａ水溶液与乙腈或甲醇的混合液为流动 Ｆ
相 （。我们先以 ００ ％ Ｔ Ａ 与 甲醇 的混合液 为流 １ ） ．５ Ｆ
Ｉ ７－ｖ－ＭＤ － ７Ｎ ａＦ Ｐ在小鼠血清中的降解水平， ６ 我们
建 立 了 Ｈ Ｌ 探 讨 了 Ｉ ７－ ｖ－ＭＤ Ｐ Ｃ， － ７Ｎ ａＦ Ｐ及 其 降解 ６
产物 Ｎ ａＦ Ｐ和 Ｆ Ｐ的色谱分离条件， ｖ－ＭＤ ＭＤ 进行
少而大 幅度 降低 ， 因尚需进一步探讨 ， 其原 初步推 测 可能 是 由于 Ｆ Ｐ与 血清中蛋 白、 ＭＤ 肽等成 分结合 所
致， 这与后面血清中降解试验的现象是一致的。
表１ 回 收率试验结果
１％三氯乙酸在 ２４ｍ处有较多的吸收峰， ０ １ｎ 影响检
测 ， 能使 用 ； 不 乙腈 及 １％高 氯酸 去 蛋 白后血清 中 ０
Ａ ｓ ａｔ ４ ｘｌｓ ｙ ｎ ｒａｎｌ －－ ｅｈｘ ｆ ａｏｌ －，－ｉ ｉ ｐｏａｏ ａｉ Ｉ ７－ ｖ－ＭＤ ） ｂｔ ｃ Ｌ － ａ ｉ ｌ ｏｖｌ ｙ Ｎ３ ｍ ｔｏｙｕ ｒｙ Ｌ ２３ ａ ｎ ｒ ｎ ｉ ｃ － ７Ｎ ａ ｒ －ｏ ｙｎ － ｉ － ４ ｍ － ｄ ｍ ｏ ｐ ｃ ｄ（ ６ Ｆ Ｐ ｉａ ｔｐｐｉ ｓｎｈｓ ｅ ｉ ｏｒ ｕ ． ｈ ｐｐｉ ｅｈｂ ｓ ｅｔ ｉ ｎ ｉ Ａｂ ａｓ ｉ ｔ．ｎ ｓ ｅ ｒ ｅｔ ｅ ｔｅｉ ｄ ｕ ｇｏｐ Ｔ ｉ ｅｔ ｅ ｉ ｔｐｔ ａｔａｄ ａ ｉ ｎ ａｔ ｉ Ｉ ｔｅ ｎｗ ｉ ｄ ｙ ｚ ｎ ｒ ｓ ｄ ｘ ｉ ｏ ｎ ｎ ｃ ｄ ｌ ｃ ｃｖｙ ｈ ｐｅｅｃ ｏ ｓｒｍ，ｈ ａｔｕ ｇｌ ｉｔ ｏ Ｉ ７－ ｖ－ＭＤ ｄｃ ａｅ ａ ｅ ｉ ｕａ ｎ ｏｅ １．Ｉ ｏｄｒ ｒｓ ｅ ｅ ｎ ｆ ｕ ｔｅ ｉ ｎ ａ ｖ ｙ － ７ ａＦ Ｐ ｒ ｓ ｆ ｒ ｂｔ ｇ ｒ ｎ ｅ ｎ ｆ ａ ｃ ｉ ｆ Ｎ ｔ ６ ｅ ｅ ｓ ｎ ｔ ｃ ｉ ｖ ｈ ｒ
（－７ － ａＦ Ｄ ） Ｉ６ ７Ｎｖ － Ｍ Ｐ 。
作出曲线 １ 图４ ， 曲线１ （ ）从 中可得 出Ｉ ６ ７ －７ －
Ｎ ａＦ Ｐ的半衰期 ｔ２ ７ｍｎ 这与生物试验结 ｖ－ＭＤ １ ＝ ０ ｉ， ／ 果 是 一致的 。ＭＤ Ｆ Ｐ则不 同， ０ ｉ 到 １０ ｉ ， 从 ｍｎ ２ｍｎ时
３５ 标样线性关系的测定 ． 在本色谱条件下，ＭＤ Ｆ Ｐ的标样浓度在 ００２ ．１５ ～２５ｇ和Ｉ ７－ｖ－ＭＤ ．μ － ７ ａＦ Ｐ在 ０２ ０ｇ ６ Ｎ ．～２μ 范围内
８ ％。结果表 明， 甲醇浓度 以 ８ ％为最好 ， 个化合物 ３
血清中Ｉ ７－ｖ－ＭＤ －７ ａ ６ Ｎ Ｆ Ｐ的降解水平。
２ 实验部分 ２１ 仪器和试剂 ．
Ｗａ ｒ ５０ ７２ 进样阀日 立 ２０１ 紫外 ｔ ｓ 泵，１５ ｅ １ ０－０ 可变波长检测器， 岛津ＣＲ Ａ数据处理仪。 －３
Ｉ ７－ ｖ－ＭＤ ， ＭＤ － ７Ｎ ａ ６ Ｆ Ｐ Ｆ Ｐ及 Ｎ ａ ＭＤ ｖ－ Ｆ Ｐ均 为
与 峰 面 积 有 良好 的 线 性 关 系 ， 归 方 程 分 别 为 回
Ｙ＝ － ００４ ． ２ １＋ ０ ００ Ｘ（ Ｍ Ｄ ）Ｙ ＝ ０ １ ７ ．０５ Ｆ Ｐ， ． ６ ９＋
Ｆ Ｐ浓度随时间的增长而增加， ２ｍｎ时达到 ＭＤ 于１０ ｉ
最高值 ， 是 由于 Ｉ ７－ ｖ－ＭＤ 这 － ７Ｎ ａＦ Ｐ的 降解 所致 。 ６ 但
酰－－ ，－ 氨基丙 酸 （ ６７ ｖ－ＭＤ ） 我所研 Ｌ ２３二 Ｉ ７－ ａ － Ｎ Ｆ Ｐ是 制 的抗 真菌化合物 。在 小鼠血清存在下 的体外抗 白
振荡器中混旋 ２ｓ使蛋白质沉淀， ０， 于台式冷冻离心 机 （ ， ０ｇ） ０ ４５０ｆ离心 １ｍｎ取 ２μ ０ ｉ， ０Ｌ上清液用于
ＨＬ Ｐ Ｃ测 定。
从１０ ｎ到３０ ｎ时却随时间的增加而减少， ２ｍｉ ０ｍｉ 其
原因 尚需 进一步研 讨 。 此现象 与 回收率试 验 中回 但
０００Ｘ（ ６７ ｖ－ＭＤ ） 相关系数 ｒ ．０３ Ｉ ７－ ａＦ Ｐ ， － Ｎ 均大于
０９９检测 限为００ ２μ （ＭＤ ） ．μ （－７－ ．９ ， ． １５ ｇＦ Ｐ 和０ ２ｇＩ６７ 蘥
＝７分别为０５ Ｆ Ｐ 和０６ Ｉ６７Ｎ ａ ） ． ％（ＭＤ ） ． ％（－７－ ｖ－
Ｆ Ｐ） 日间Ｒ Ｄ（ ＝ ５ 为 １ （ ＭＤ ） ０ ５ ＭＤ ， Ｓ ｎ ） ％ Ｆ Ｐ ，． ％
（－７ － ａＦ Ｄ ） Ｉ６７Ｎｖ －Ｍ Ｐ 。
点， 其余放入３ 恒温箱中， ７ 每隔３ｍｎ或１ 取样 ０ｉ ｈ ５μ ， ０Ｌ 经样品预处理后用于 Ｈ Ｌ 蘈 Ｐ Ｃ分析。 ３为 图 ３ｍｎ －７－ｖ－ＭＤ 在血清中的降解色谱图。 ０ ｉ时Ｉ６７Ｎ ａＦ Ｐ ３８ ６７Ｎ ａＦ Ｐ ． Ｉ ７－ｖ－ＭＤ 在小鼠血清中降解水平 － 从 ０ｉ ｍｎ到１０ ｉ ８ｍｎ内Ｉ ７－ ａＦ Ｐ含量随 － ７ －ＭＤ ６ Ｎｖ
２２ 色谱条件 ．
色 谱 柱 为 １０ ｍ × ５ ｍ ｉ ． 填 料 为 ５ｍ ｍ ．ｄ ，
ＬＣ ｒｓｒ Ｒ －８５ｍ）本所装填， ｉｈｏｏｂ １（μ ， Ｐ 流动相为甲醇
； ．％三氟 乙酸－ 乙胺 缓冲液 （Ｈ ３０ ＝８： ２ ０１ 三 ｐ ．） ９ （ ／ ） 流速 １３ Ｌ ｍｎ 检测波长 Ｕ ２４ｍ。 ＶＶ ， ．ｍ ／ ｉ， Ｖ １ｎ ２３ 样品预处理 ．
有对Ｆ Ｐ的干扰物； ＭＤ 甲醇及 ２％高氯酸去蛋白效 ０
果均可 ， 以甲醇 为最佳 （ ２ 。 图 ） 因此选择 了甲醇作为 血清 去蛋 白试剂 。
生物样本中的最小检测量：Ｍ Ｐ为６ ｇＬ ＦＤ ０ ／ ｍ
血清，６７Ｎ ａＦ Ｐ为２０ ｇＬ血清， Ｉ ７－ｖ－ＭＤ － ０ｍ ／ 信噪比大
于３ 。
３７ ６７Ｎ ａＦ Ｐ ． Ｉ ７－ｖ－ＭＤ 在小鼠血清中的降解试验 －
时间 的增 长而 减少 ， ２０ ｉ 至 １ｍｎ时已检测 不 出。 们 我 以 ０ ｉ 测得 的 Ｉ６７ ｖ－ＭＤ ｍ ｎ时 －７－ ａ Ｎ Ｆ Ｐ浓 度 为 １０ ０％
标样峰面积 的 日内 Ｒ Ｄ（ ７ 分别 为 １８ Ｓ ｎ＝ ） ．％ （ＭＤ ， ． ２ｇ ２Ｌ ， ． （ ６７ ｖ－ＭＤ ， Ｆ Ｐ ０６５／０ ） １５％Ｉ ７－ ａＦ Ｐ － Ｎ ５ ／０ ） 日间 Ｒ Ｄ（ ５ 为 ４ Ｆ Ｐ ．． ％ ｇ ２Ｌ ， Ｓ ｎ＝ ） ％（ＭＤ ）２２
ｔ ｉ ｅｔａｅ ｒｌｉ ｓｉ ｂｔｅｎ ｅ ｒｄｔｎ ｄ ｔｕｇｌ ｉｔ ｏ Ｉ ７－ｖ－ＭＤ ，ｈ ｏ ｓｇｔ ｔｅ ａｏ ｈ ｅｗｅ ｔ ｄｇａａｏ ａ ａ ｉｎａ ａｔｉ ｆ ７ ａ ｎ ｉ ｖ ｈ ｅ ｔｎ ｐ ｈ ｅ ｉ ｎ ｎｆ ｃｖｙ － Ｎ Ｆ Ｐ ｔｅ ６
本组合成， 乙腈、 甲醇为色谱纯， 高氯酸、 三氟乙酸 （Ｆ ）三氯乙酸、 ＴＡ、 三乙胺均为国产分析级试剂， 水
为超纯 水。
的保留时间分别为３９１．，６５ｉ 图１。 ．， ８ １．ｍｎ ） ０ （
３２ ６７ ｖ－ＭＤ ． Ｉ ７－ ａＦ Ｐ在血清中的降解产物 － Ｎ
Ｉ ７－ ｖ－ＭＤ 在 血 清 中 可 降 解 成 Ｉ ７－ － ７Ｎ ａ ６ Ｆ Ｐ － ７ ６
供了信息 。
参
考
文
献
１ ｅｎｔ Ｈ Ｊ ｒｗ ｅ Ｂ ｎｅ ｔ Ｐ ，Ｂｏ ｎ Ｃ Ａ，Ｓｌｍ ｎ Ｊ ｑ ｏ ｏ Ｓ ｏ ． Ｌ ｉ
Ｃ ｒ ａ ｇ，９０３９： ５ ｈ ｍｔ ｒ １８；（） ３３ ｏ ｏ １ ２ 保博昭． 久 药事， ８； （ ： ５ １ ４２ ４ １ ９ ６）４
Ｄ ｔ ｍｉａ ｏ ｏ Ｄ ｇａａｉ Ｌ ｖｌ Ａ ｔ ｕｇｌ ｅｔ ｅ ｒ ｎｔ ｎ ｅｒｄｔ ｎ ｅ ｏ ｎｉ ｎａ Ａ ｎ ｅ ｉ ｆ ｏ ｅ ｆ ｆ ｇ
高效液相色谱法测定抗真菌化合物在小鼠血清中的降解水平
唐琴梅
提 要
冯胜昔＊
徐修容
黄嘉鑫
（ 科学院上海药物研究 中国 所 上 海 ２０３） ００１
以反相高效 液相色谱法 测定 了抗深部真菌 化合物 Ｌ４氧代赖 氨酰－ －－ 正缬氨酰－ －－ Ｎ３４甲氧基－ 富马酰－
Ｌ２３ －， 二氨基丙酸在小鼠 － 血清中 的降解水平， 其半衰期 ｔ２ ７ ｉ左右。并进行了乙腈、 醇、 １为 ０ ｎ ／ ｍ 甲 三氯乙酸及高