三尖杉内生真菌SR1-26挥发油成分及抑菌活性研究
三尖杉内生真菌次生代谢产物及抑菌活性的研究的开题报告
三尖杉内生真菌次生代谢产物及抑菌活性的研究的
开题报告
一、研究背景
三尖杉（Taxus chinensis）是杉科植物，被广泛应用于癌症治疗。
而三尖杉内生真菌是三尖杉体内生长的一类微生物。
近年来，越来越多
的研究表明，三尖杉内生真菌中的次生代谢产物具有良好的生物活性，
可以被应用于药物开发。
在这些次生代谢产物中，抗菌活性尤为突出，
因此对三尖杉内生真菌次生代谢产物的抗菌活性进行研究，有助于拓展
抗菌药物的种类。
二、研究目的
本研究旨在分离鉴定三尖杉内生真菌产生的次生代谢产物，并测试
其对多种细菌的抑菌活性。
同时，通过分析其化学结构，探索其抗菌活
性的分子机制，为新型抗菌药物的开发提供理论依据。
三、研究内容
1. 采集三尖杉树皮样品并进行内生真菌的分离
2. 对内生真菌进行分离鉴定，并对其产生的次生代谢产物进行筛选
3. 对筛选出的次生代谢产物进行抑菌活性测试，比较不同产物的抗
菌活性
4. 对抗菌活性强的代谢产物进行结构鉴定，并分析其抗菌分子机制
四、研究意义
本研究可以深入了解三尖杉内生真菌次生代谢产物的多样性和生物
活性，为新型抗菌药物的研发和应用提供理论基础。
同时，通过探究抗
菌分子机制，可以揭示抗菌活性的分子机制，为药物研发提供设计思路。
药用植物内生真菌及活性物质多样性研究进展_孙剑秋
西北植物学报,2006,26(7):1505-1519Acta Bot.Boreal.-Occident.Sin. 文章编号:1000-4025(2006)07-1505-15＊药用植物内生真菌及活性物质多样性研究进展孙剑秋1,2,3,郭良栋2＊,臧 威1,3,迟德富1(1东北林业大学林学院,哈尔滨150040;2中国科学院微生物研究所真菌地衣系统学重点实验室,北京100080;3齐齐哈尔大学生命科学与工程学院,齐齐哈尔161006)摘 要:药用植物具有丰富的物种多样性,是人类生存与发展的重要自然资源。
内生真菌广泛存在于健康植物组织内部,是植物微生态系统的重要组成部分,各种药用植物中蕴藏着非常丰富的内生真菌。
通过与药用植物的“协同进化”,某些内生真菌具有了产生与宿主植物相同或相似的生物活性物质的能力。
内生真菌产生的各种活性物质,在生物制药、农业生产、工业发酵等方面都表现出美好的应用前景,受到世界各国专家的广泛关注。
利用内生真菌发酵实现生物活性物质的工业化生产,可以提高产量、降低产品成本,满足人们日益增长的需求;同时有利于珍稀、濒危药用植物资源的保护,对减少野生药用植物多样性的破坏具有重要意义。
本文从药用植物内生真菌物种多样性与产生生物活性物质多样性等方面总结近年最新的研究进展,提出了内生真菌及活性物质研究的未来发展方向。
关键词:药用植物;内生真菌;生物活性物质;协同进化中图分类号:Q949.95文献标识码:AResearch Advances in the Diversities of Endophytic Fungi inMedicinal Plants and Their Bioactive IngredientsSUN Jian-qiu1,2,3,G UO Liang-dong2＊,ZANG Wei1,3,C HI De-fu1(1College of Forestry,Northeast Fores try University,H arbin150040;2S ystematic M ycology and Lichenology Laboratory,In sti-tute of M icrobiology,Chinese Academy of S ciences,Beijing100080;3College of Life Science and Engineering,Qiqih ar University,Qiqih ar161006)A bstract:Medicinal plants,w hich are of rich species diversity,a re im po rtant na tural reso urces for human e xistence and develo pment.Endo phy tic fungi,w idely existing inside the tissues of healthy plants,are im-po rtant com po nents o f plant micro-ecosy stems and various medicinal plants are rich in endo phytic fungi. Co-evolving w ith medicinal plants,some endophy tic fung i have developed the abilities to produce same o r similar bioactive substances as or to w hat their host plants produce.V ario us bioactive substances that endo-phytic fung i have show ed a bright prospect in biological pharmaceutical pro duction,agricultural produc-tion,industrial fermentatio n thereby attracting ex tensive interest from ex perts of various countries in the w orld.The industrial productio ns of bioactive substances that m ake use o f endophy tic fungi are capable of increasing their yields and low ering their pro ductive co sts and thus conducive to satisfying people's ever-in-creasing dem ands.In the meantime,it is co nducive to the co nserv ation of precious and endangerd medicinal plants and of g reat impo rtance in avoiding the damage to the diversity of w ild m edicinal plants.The paper summa rizes la test research advances in terms of the diversity of endophy tic fungi and their bioactive sub-＊收稿日期:2006-03-28;修改稿收到日期:2006-05-19基金项目:国家自然科学基金(30370006,30230020)作者简介:孙剑秋(1969-),男(汉族),黑龙江德都人,博士,副教授,硕士研究生导师,主要从事微生物学方面的科研与教学工作。
三株植物内生真菌化学成分及生物活性研究
三株植物内生真菌化学成分及生物活性探究摘要：内生真菌是与植物共生的一种微生物，既是真菌学中的热点探究对象，也是植物学领域的重要探究方向。
本探究选取三株植物内生真菌进行了化学成分及生物活性探究。
通过对内生真菌的提取、纯化和分析鉴定，得到了其中的化学成分，并通过一系列生物活性试验评估了这些化合物的活性。
试验结果显示，内生真菌提取物具有一定的抗氧化、抗菌、抗肿瘤和抗病毒活性，为开发新药和农药提供了科学依据。
关键词：内生真菌，化学成分，生物活性，抗氧化，抗菌，抗肿瘤，抗病毒一、引言内生真菌是一类共生于植物体内的微生物，与植物形成共生干系，通过互相交换物质实现共生进步。
内生真菌的化学成分一直是植物学领域的探究热点，其中的生物活性分子成为了抗菌、抗病毒和抗肿瘤等药物和农药的重要来源。
本探究旨在探究三株植物内生真菌的化学成分及其生物活性，为植物内生真菌的应用开发提供科学依据。
二、材料与方法2.1 植物内生真菌的筛选从不同植物根系中分离得到3株内生真菌，定名为F1、F2和F3。
2.2 内生真菌提取物的制备将F1、F2和F3培育在适合培育基上，接受乙醇浸提进行提取，蒸发浓缩得到3个内生真菌提取物。
2.3 化学成分的分离与鉴定接受色谱和质谱等技术对内生真菌提取物进行分离纯化，并通过红外光谱、核磁共振等技术对化合物进行结构鉴定。
2.4 生物活性评判接受一系列生物活性试验，包括抗氧化、抗菌、抗肿瘤和抗病毒等活性测试，评估内生真菌提取物的生物活性。
三、结果与谈论3.1 化学成分的分离与鉴定经过分离纯化和结构鉴定，得到了F1、F2和F3内生真菌提取物中的多种化合物。
其中，鉴定出了A、B、C三种化合物。
3.2 生物活性评判对内生真菌提取物进行一系列生物活性评判，结果显示：内生真菌提取物具有一定的抗氧化、抗菌、抗肿瘤和抗病毒活性。
其中活性最强的为F1内生真菌提取物，其具有较强的抗氧化活性和抗肿瘤活性。
3.3 活性物质的可能机制结合文献资料分析，F1内生真菌提取物中的活性物质可能通过抑止氧自由基的生成、改善细胞免疫功能、干扰肿瘤细胞生长以及抑止病毒复制等方式发挥生物活性。
4种裸子植物内生真菌抗肿瘤菌株的筛选
MTT 法对具有杀卤虫活性的菌株进行复筛 ,结果显示 9 株菌株 (占总分离菌株的 8. 0 %) ,对 KB 或 HL260 细胞具有显
著的抑制作用 ( ID50 为 80～7 290) . 罗汉松 、南方红豆杉 、三尖杉内生真菌的抗肿瘤活性菌株分别占各分离菌株的 7.
4 %、11. 1 %、8. 3 % ,这显示了药用裸子植物内生真菌在抗肿瘤生物活性物质的研究与应用中具有重要的价值. 作者
1. 2 方 法
内生真菌分离 :采用组织块法分离内生真菌[4] , 取新采集的茎的树皮和用无菌刀片剥下的侧枝的树 皮 ,然后用无菌刀片去除外层部分 ,切成 0. 5 cm ×0. 5 cm 的小块 ,置于 75 %的乙醇中消毒 5 min ,无菌水 冲洗多次 , 贴放于含终浓度 50 mgΠL 庆 大 霉 素 的 PDA 固体平板培养基上 ,25 ℃培养 ,待菌丝长出后 , 挑取尖端菌丝移到新的固体平板上继续培养 ,几次 纯化后得到内生真菌.
三尖杉属植物内生真菌及次生代谢产物活性研究进展
从 经过严格表 面消毒 的植物组织或植物组织 内部可分离
出植 物内生菌 。虽 然在 同一 地 区同一种 植 物上 内生真 菌
类群基本相似 ， 但是有的 内生真菌在不 同年龄植 株和组 织上 的分布 明显不 同 Ｊ ， 同时也受不 同气候 条件 、 树冠 高度 和郁
闭度 “ ］ 、 采集地湿度 、 季节 变化 、 地点 高度 、 周 围其他植 物 类群¨ 和环境污染程度 的影 响 。通 常 ， 生长在热 带、 亚热 带地区的植物内生真菌 种类和数 目比生 长在较干燥 、 寒 冷环 境条件下的植物多 。朱 明旗等通 过对 中国粗榧 的研究 发 现， 在数量上韧皮部 内生真菌最多 ， 呈现韧皮部 ＞叶部 ＞木质
关键 词 ： 三尖杉属 ； 内生真菌 ； 次 生代谢产 物 ； 活性 中图分 类号 ： Ｑ ９ ４ ８ ． １ ２ ２ ． ３ 文献标 志码 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ ２—１ ３ ０ ２ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ８— ０ ０ １ １— ０ ３
三尖杉属 （ Ｃ ｅ ｐ ｈ ａ ｌ ｏ ｔ ａ ｘ ｕ ｓ ） 隶 属 于 裸 子 植 物 三 尖 杉 科 （ Ｃ ｅ ｐ ｈ ａ ｌ ｏ ｔ ａ ｘ ａ ｃ ｅ ａ ｅ ） ， 该科仅 三尖杉 １属 ９种 。有 药用价 值 的 主要是三尖 杉 （ Ｃ ． ｆ ｏ ｒ ｔ ｕ ｎ ｅ ｉ ） 、 中国粗榧 （ ｅ ｓ ｉ ｎ ｅ ｎ ｓ ｉ ｓ ） 、 海 南粗 榧（ ｃ ．ｈ ａ ｉ ｎ ａ ｎ ｅ ｎ ｓ ｉ ｓ ） 及篦子 三尖 杉 （ Ｃ ．ｏ ｌ ｉ ｖ ｅ ｒ ｉ ） ， 分布 于我 国秦 岭至 山 东 鲁 山 以南 各 省 区及 台湾 ， 多生长在 海拔 ２ ０ ０～ ３ ０ ０ ０ ｍ 的山谷地带 ， 种子 、 根、 茎、 树皮 均可入药 。
台湾杉叶挥发油的成分及其生物活性
１ 材料 与方 法
１ １ 材 料 与仪 器 ．
得到淡 黄 色透 明油 状 物 ２ ５ ， 发 油 得 率 为 ．２ｇ 挥
１２ ％ ， 对密 度小 于 １低 温 ４℃保存 备用 。 ．６ 相 ，
１３ 气相 色谱 质谱 条件 ．
Ｇ Ｃ条 件 ： 谱 柱 为 Ｈ 色 Ｐ一５ ＭＳ石 英 毛 细 管 柱 （０Ｉ ０ ２ ｍ × ．５Ｉ ； 温 ： 细管 柱 。程 ３ ｎ× ．５ｍ ０ ２ ｍ） 柱 ｘ 毛
（ ．２ ％ ） ｔｕ一 ６４ ４ ， ａ 杜松醇 （ ．７ ％） ６ １２ 。抑菌试验及抗肿瘤试验结果表 明 ， 台湾杉挥发油抑细菌 、 抗肿瘤作用都不 明 显， 但具有较好 的抗红酵母 活性 。 关键词 ：台湾杉 ；化学成分 ； 一 气 质联用
中图 分 类 号 ： ９ ６ ８ Ｑ ４ ．１ 文献标志码 ： Ａ 文章 编 号 ：０ ２—１０ （０ ８ ０ ０ ３ ０ １０ ３２ ２０ ）５— ２ ５— ２
提取 器 （ 规 玻 璃 仪 器 ） Ｒ 常 ， Ｅ一５ Ａ 型 旋 转 蒸 发 仪 ２ （ 海亚 荣 生化 仪器 厂 ） 上 ；气 一质 联 动 分 析 仪 为 ６９ ／９３ Ｇ ／ 联 用 仪 （ 国安 捷 伦 公 司 ） ８０ ５７ Ｎ ｃ ＭＳ 美 。所
用试 剂均 为分 析纯 。 供试 菌株 ： 黄 色葡 萄 球 菌 （ ｔ ｈ ｌｃｃｕ ｌ 金 Ｓａ ｙｏｏｃｓａ — ｐ ｚ ｒ ） ｅ ，大 肠 杆 菌 （Ｅｃｅｉ ｉ ｏｉ ，红 酵 母 ｓ ｕ ｓ ｒ ｈａ ｌ ） ｈ ｃ ｃ （ ｈ ｄｔｒｌ ｌｔ ｉ） 肿 瘤 细胞 株 ： 非 小 细 胞 肺 Ｒ ｏ ｏ ｕａｇｕｉ ｓ ； ｏ ｎ 人
几种药用植物内生真菌抗真菌活性的初步研究
参考文献[1]Masatoshi GO TO,Eiji KUWA NO,Werasit KAN LAYAKRIT,Shins aku HAYASHID A,Bi osi Biotech Biochem,1995,59:16~20.[2]MASTOSH GO TO,TSUYO SHI SEMIMAR U,KENSUKE F UR UKAWA,SHINSAKU HAYASHID A,APPL ENVIRON MI-CROBIO L,1994,60:3926~3930.[3]Keiji KAINUMA,Hiros hi ISHIGAMI,Shoichi KOBAYASHI,J Jpn Soc.Starch sci,1985,31:136~141.[4]Shinsaku HAYASHIDA,and Perfecto Q.FLOR,Agric Biol Che m,1981,45:2675~2681.[5]Cheor-l Ho Kim,Suk-Tae Kwon,Hajime Taniguchi,Dae-Sil Lee,Biochimica et Biophys ica Acta,1992,1122:243~250.[6]Hiros hi Morita,Kouhei Mizuno,M ayumi M atsunage,Yusaki Fujio,J Appl Glycoci,1999,46:15~21.[7]Jun-ichi ABE,Sus umu HIZUKURI,J Jpn Soc Starch Sci,1988,35:p.43~47.[8]Tomoko TAKAHASHI,Keiko KATO,Yos hio IKEGAMI,Mas achika IRIE,J Biochem,1985,98:663-671.[9]Kohsai Fukuda,Yuji Teramoto,M.Goto,J.Sakamoto,S.Mits uiki,Hayas hida,Bios ci Biotech Biochem,1992,56:556~559.[10]M itts uru MONM A,et al,Agric Biol Chem,1989,53:1503~1508.几种药用植物内生真菌抗真菌活性的初步研究*李桂玲王建锋黄耀坚郑忠辉苏文金**(厦门大学生命科学院厦门361005)摘要:从三尖杉,南方红豆杉及香榧中分离出172株内生真菌,对其进行抗菌活性检测,结果表明共90株内生真菌对一种或多种植物病原真菌,如红色面孢霉(Neurospora s p.),木霉(Trichoderma sp.),镰刀菌(Fusarium sp.)等有抑制作用,来自三尖杉、南方红豆杉和香榧的抗菌活性菌株比例分别为40%,5412%及5711%。
2株三尖杉内生放线菌的分离鉴定与活性研究
１ １ 材料 ．
物 内生放线 菌 （ｎ ｏｈｔ ｃｎｍ ｃｔ ） ｅｄｐ ｙｃａｔ ｏ ｙｅｅ 是指 存活 于健康 植 ｉ ｉ ｓ
物组织 内部 ， 而又不引发（ 至少暂时不引发 ） 主植物 表现 出 宿 明显感染症状 的放线菌 。这一微生物类群 资源多样 ， Ｊ 在与
关键词 ： 三尖杉 ；内生放线菌 ； 鉴定 ； 活性
中图分类号 ： ９ １ ２ Ｑ ３ ．３ 文献标 志码 ： Ａ 文章编号 ：０ ２—１０ （０ ２ ０ ０９ ０ １０ ３ ２ ２ １ ）５— ２ ６— ３
放线菌（ 主要来 自土壤 ） 是一类 具有 巨大经济价值 的微
生物资源 。据不完全统计 ， 目前发现 的具有生物 活性 的微生
ｎｍ ｃｎ的链霉菌属放线菌 ， ａ ｙｉ 对多 种病原真菌均 有抑制作用 ， 特别是对腐霉菌 （ ｙｈｕ 表现出强烈 的拮抗活性 ， Ｐ ｔｉ ｍ） 可作为新
一
代杀真菌药 物的候选菌株 。Ｉａ ｓｉ ｇｒ ｈ 等从 １株植物 内生 ａ
小单孢菌属新种 的发酵液中成功分离到 ２种新 的蒽醌类化 合 物 （ｕ ｉ ｃ ｉｓ Ｂ）对多种肿瘤 细胞 表现 出了明显 的拮抗 １ｐｎ ｉ ｎ ａ ｄ Ａ、 ， 活性 。另外 ， 国的秦盛 等 、 我 鲁春 花等 也开 展 了植 物 内生放线菌拮抗活性方面的研究。 药用植物中因含有多种 活性 成分而受 到广 泛关注 ， 生活 于其 中的 内生菌可能与宿主植物之 间存在着更为特殊 的共生 关系 。刘宁等对云南西双版纳多种药用植物的内生放线菌类 群进行了大量分析研究 ， 终从菌株发酵 液 中筛选到 ５种 已 最 知化合物和 １ 种新化合物 ， 拮抗试验均表现 出较高的抗菌 、 抗
张 晓伟 ，解修超 ，张 曼 ，陈文强 ，张 佳 ，邓 百万 ，彭 浩 ， 亚 男 张 晶 晶 ｔ 孔 一 ，
篦子三尖杉内生真菌gyzy-9的鉴定及其抑菌活性研究
篦子三尖杉内生真菌gyzy-9的鉴定及其抑菌活性研究摘要:为研究濒危药用植物篦子三尖杉(Cephalotaxus oliveri Mast)内生真菌gyzy-9的发酵产物及其抑菌活性,对其发酵产物进行了HPLC分析,并对其抑菌活性进行了纸片法检测,同时还对菌株gyzy-9的ITS序列进行了聚类分析｡HPLC分析结果表明,菌株gyzy-9能够产生高三尖杉酯碱(Homoharringtonine),其发酵液对表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)､提取物对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的抑菌效果较强,抑菌圈直径均大于15 mm｡对gyzy-9菌株ITS序列的系统发育聚类分析结果表明,gyzy-9为平革菌属(Phanerochaete sp.)真菌｡对此菌株的研究为进一步研发生产三尖杉药用活性成分提供了条件｡关键词:篦子三尖杉;内生真菌;高三尖杉酯碱;高效液相色谱Identification and Antimicrobial Activity Analysis of Endophytic Fungi Straingyzy-9 from Cephalotaxus oliveriAbstract: In order to analyze the fermented products and detect the antimicrobial activity of the endophytic fungi strain gyzy-9 isolated from Cephalotaxus oliveri Mast, a rare and endangered medicine plant, the fermented products, antibacterial activity and internal transcribed spacer(ITS) sequence of gyzy-9 were studied by HPLC analysis, paper disc method and cluster analysis respectively. The results of HPLC showed that gyzy-9 could produce homoharringtonine. Additionally, the extracts from its ferment broth and mycelium pellet showed the bacteriostasis on Staphylococcus epidermidis and Bacillus subtilis was stronger as the inhibition zone diameter was wider than 15 mm. The strain gyzy-9 was identified as Phanerochaete sp. based on the morphological traits and ITS sequence cluster. This research was important for further study on the officinal components production.Key words: Cephalotaxus oliveri Mast; endophytic fungus; homoharringtonine; HPLC植物内生菌是一种多样性十分丰富的微生物类群,生活在健康植物组织内部,与宿主植物长期协同进化,在与宿主植物长期共存的过程中,能形成产生与宿主植物相同或相似生物活性物质的能力｡药用植物内生真菌活性成分的研究,如小檗碱[1]､紫杉醇[2]､细胞松弛素[3]､鬼臼毒素[4]､长春新碱[5]､喜树碱[6]等已有相关报道｡三尖杉属植物(Cephalotaxus spp.)为珍稀药用植物,其种子和枝叶是生产抗白血病药物三尖杉酯碱(harringtonin,HRT)和高三尖杉酯碱(homoharringtonin,HHT)的原料[7]｡但是,药用植物资源的短缺和滥砍滥伐的破坏,限制了以三尖杉为原料的酯碱类药物的生产｡对三尖杉内生菌及其活性物质的开发利用,可以弥补资源短缺､保护生态平衡,并且能够通过对其代谢产物中活性物质的提取,降低生产成本｡在前期已从濒危药用植物篦子三尖杉的枝叶中分离出了20多株内生真菌的基础上,该试验通过HPLC分析获得了1株产高三尖杉酯碱的内生真菌菌株gyzy-9,并对其进行了分子鉴定及产物抑菌活性分析,为进一步挖掘三尖杉内生真菌发酵产物的药用活性物质打下基础｡1材料与方法1.1材料和试剂内生真菌gyzy-9分离自篦子三尖杉植株,保存于贵阳中医学院微生物教研室;高三尖杉酯碱标准品购自陕西辰光生物公司;大肠杆菌(Escherichia coli)､枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)､腐生葡萄球菌(Staphylococcus saprophyticus)､表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)､产气杆菌(Clostridium perfringen)､变形杆菌(Proteusbacillus vulgaris)均由贵阳医学院微生物教研室提供,菌种存于贵阳中医学院形态实验室｡超声波细胞破碎仪(宁波新芝,JY02-2D);高效液相色谱仪(HPLC)(日本,Shimadzu LC-20A),检测器SPD-20A,C18色谱柱250 mm×4.6 mm;色谱纯甲醇为天津大茂试剂;水为0.45 μm滤膜过滤的蒸馏水;其他试剂为市售分析纯｡PDA 培养基和NA培养基按常规方法配制｡1.2方法1.2.1发酵产物提取和HPLC分析将分离的内生真菌gyzy-9接种至装有100 mL 液体PDA培养基的250 mL三角瓶中,室温下130 r/min振荡培养,7 d后用超声波细胞破碎仪破碎发酵液中的菌丝球,时间为4 min,打击时间4 s,间隔时间4 s,功率400 w｡将经超声波处理后的发酵液5 000 r/min离心15 min后取上清液,在60 ℃水浴中浓缩至原体积的1/20,加无水Na2CO3调pH值为9,加入二氯甲烷达原始上清液体积后充分混合静置1 h以上,5 000 r/min离心15 min,取下层沉淀,自然挥发干,得到提取物｡将提取物用5 mL甲醇溶解定容｡对各菌株发酵产物提取物中的生物碱进行分析,HPLC流动相CH3OH∶H2O(体积比)=2∶3,流速1.0 mL/min,进样量10 μL,柱温30℃,运行时间15 min｡1.2.2ITS 序列扩增发酵培养的菌丝球经抽滤至干后,加液氮快速研磨,然后用DNA 提取试剂盒提取DNA,分光光度计法测定DNA纯度和浓度｡采用引物ITS1(5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′) 和ITS4(5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′)扩增ITS区｡PCR反应体系:DNA聚合酶2.5 U,10×PCR缓冲液5 μL,dNTP 2 μL,引物各2 μL,模板DNA 2 μL,加水至50 μL｡反应条件为:94 ℃预变性5 min;94 ℃变性30 s,55 ℃退火45 s,72℃延伸1 min,30个循环;72 ℃延长10 min｡将PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳,电泳产物直接送生工生物工程(上海)有限公司测序｡1.2.3ITS序列分析将测定所得的ITS序列在GenBank用Blastn进行同源性比较,选择同源性较近的序列构建系统发育树｡应用Clustal X 1.83 对选择的序列进行排列,再用Seeview将排列结果中的冗余序列剔除,最后输入Mega 4.0 软件,采用邻接法(neighbor-joining,NJ)构建系统发育树,自展法检测其可靠性,自展数据集为1 000次｡根据内生真菌的形态特征和ITS序列系统发育树,对内生真菌进行种属分类和多样性分析｡1.2.4抑菌试验将菌株接种至装有500 mL液体PDA培养基的1 000 mL三角瓶中,室温下130 r/min振荡培养,7 d后取发酵液上清液,浓缩至5 mL备用｡菌丝球超声波破碎后加等体积甲醇,无水Na2CO3调pH值为9,4 ℃冰箱过夜,浓缩至5 mL 备用｡将大肠杆菌､枯草芽孢杆菌､腐生葡萄球菌､表皮葡萄球菌､产气杆菌､变形杆菌分别制成1×105~1×107个/mL菌悬液,取30 μL加入无菌NA培养基中用涂布棒将其均匀涂布,制成含菌平板,然后将无菌纸片(Φ=6 mm)放入发酵液和提取液中浸泡30 min后,均匀分散放置于含菌平板上｡每个平板放5片滤纸片｡将制备好的平板置于37 ℃恒温培养18 h后观察,测其抑菌圈直径｡2结果和分析2.1高三尖杉酯碱色谱分析对60 μg/mL的高三尖杉酯碱标准品在291 nm波长下进行HPLC分析,发现高三尖杉酯碱标准品的峰型对称,响应值较高,保留时间为2.532 min(图1a)｡经连续进样5次分析,保留时间的RSD为1.14%,稳定性和精密度较好｡将分离自叶片的gyzy-9菌株的发酵产物进行HPLC分析发现在2.536 min(图1b)出现与高三尖杉酯碱标准品的保留时间基本一致的吸收峰,表明gyzy-9菌株的发酵产物含有高三尖杉酯碱成分｡2.2菌株gyzy-9的ITS序列聚类分析利用通用引物ITS1和ITS4对内生真菌gyzy-9的ITS序列进行PCR扩增,获得618 bp的单一DNA条带,测序结果提交GenBank数据库进行Blastn检索,发现菌株gyzy-9与平革菌Phanerochaet esordida(GenBank accession:EU047806)的ITS序列覆盖率达到98%,同源性高达97%｡选取同源性较高的序列与菌株gyzy-9用NJ 法聚类分析,构建了系统发育树(图2),表明菌株gyzy-9的ITS序列与平革菌属遗传距离最近,证明内生真菌gyzy-9菌株属于平革菌属｡2.3gyzy-9抑菌活性分析gyzy-9菌株的抑菌实验表明,其发酵液及其提取物对所选的试验菌株(大肠杆菌､枯草芽孢杆菌､腐生葡萄球菌､表皮葡萄球菌､产气杆菌､变形杆菌)均有抑制作用,其中gyzy-9发酵液上清液对表皮葡萄球菌有明显的抑制作用,最大抑菌圈直径可达20 mm,最小也达到15 mm(图3c),对枯草芽孢杆菌､腐生葡萄球菌及产气杆菌的抑菌活性中等(表1),但最大抑菌圈仍可分别达到11 mm､13 mm及12 mm｡提取物对枯草芽孢杆菌有显著的抑制效果,抑菌圈直径为19 mm(图3e)｡通过上述试验可以看出发酵产物中含有抑菌物质,并有一定的抑菌效果｡3讨论内生真菌在与植物长期协同进化中,其生物学特性为了适应内生环境可能发生了某些改变｡在实验室条件下培养内生真菌,往往因离开了宿主植物,生物发育过程受到一定影响,而不能产生孢子或虽能产生孢子但孢子量极少,在实验室中采用传统的微生物分类方法进行菌种鉴定存在一定困难｡该试验利用ITS序列聚类分析,将此菌株初步鉴定为平革菌属(Phanerochaete sp.)真菌｡关于平革菌属,已有在环境有机物降解中发挥着重要作用的报道[8]｡当在291 nm下用HPLC分析其发酵提取物时,发现gyzy-9在2.536 min的保留时间有明显吸收峰,与60 μg/mL的高三尖杉酯碱标准品的保留时间2.532 min基本一致,说明gyzy-9中有高三尖杉酯碱成分｡通过进一步的抑菌试验证明此菌株的发酵液及提取物对试验菌株均有一定的抑菌效果,特别是对表皮葡萄球菌､枯草芽孢杆菌抑菌效果较明显｡这为下一步对此菌株产物的抗真菌､抗肿瘤的研究打下了一些基础,为利用植物内生真菌,寻找新的药用成分来源提供了参考｡参考文献:[1] 高扬,殷红,孙宇宏,等.黄檗植物产小檗碱的内生真菌的分离鉴定[J].菌物研究,2008,6(4):216-219.[2] STIERLE A, STROBEL G, STICRLE D. Taxol and taxane production by Taxomyces andreana, an endophytic fungus of Pacific yew [J]. Science,1993,260(5105):214-216.[3] WAGENAAR M M, CORWIN J, STROBEL G, et al. Three new cytochalasins produced by an endophytic fungus in the genus Rhinocladiella[J]. J Nat Prod,2000,63(12):1692-1695.[4] 郭仕平,蒋斌,苏莹珍,等. 川八角莲内生真菌产鬼臼毒素类似物的初步研究[J].生物技术,2004,14(2):55-57.[5] 杨显志,张玲琪,郭波,等. 一株产长春新碱内生真菌的初步研究[J].中草药,2004,35(1):79-81.[6] PURI S C, VERMA V, AMNA T, et al. An endophytic fungus from Nothapodytes foetida that produes camptothecin [J]. J Nat Prod,2005,68(12):1717-1719.[7] 孙超,张勇民,朱立.贵州珍稀濒危药用植物与可持续开发利用[J].资源开发与市场,2006,22(4):368-370.[8] 徐淑霞,张世敏,尤晓颜,等. 黄孢原毛平革菌对黄瓜连作土壤酚酸物质的降解[J].应用生态学报,2008,19(11):2480-2484.。
三尖杉内生真菌的季节动态和组织分布研究
三尖杉内生真菌的季节动态和组织分布研究相延英;明乾良;李文超;韩婷;秦路平【摘要】目的研究不同季节药用植物三尖杉(Cephalotaxus fortunei Hook.f.)不同组织部位内生真菌的种类组成、数量和分布规律的差异.方法采用组织分离法分离出春、夏、秋、冬4次采样的三尖杉叶片、枝条和树皮中的内生真菌,根据形态分型后进行分子鉴定.结果从4次采样的3个组织部位中共分离得到内生真菌1 851株.根据培养特征共划分为77个形态型,分子鉴定为70个分类单元.研究表明,季节和组织对内生真菌定殖率、分离率和种类组成均有明显的影响,但是季节的影响远大于组织的影响.结论三尖杉内生真菌具有丰富的生物多样性,结合内生真菌丰度和多样性指数综合分析,春季为获得较多种类的内生真菌的最佳取样时间.【期刊名称】《药学实践杂志》【年(卷),期】2013(031)004【总页数】5页(P267-270,289)【关键词】三尖杉;内生真菌;季节动态;组织分布【作者】相延英;明乾良;李文超;韩婷;秦路平【作者单位】解放军第161医院药剂科,湖北武汉430010;第二军医大学药学院生药学教研室,上海200433;第二军医大学药学院生药学教研室,上海200433;第二军医大学药学院生药学教研室,上海200433;第二军医大学药学院生药学教研室,上海200433【正文语种】中文【中图分类】R979.1植物内生真菌(endophytic fungi)是指在生活史中的某一个阶段存在于健康植物组织内部，不会引起宿主明显病症或者对宿主造成明显伤害的真菌[1]。
1993年，Strobel等[2]首次报道了从短叶紫杉Taxus brevifolia的树皮中分离得到一株能够产生紫杉醇的内生真菌Taxomyces andreanae，引起了国内外众多研究者的极大关注，纷纷把目光投向药用植物内生真菌的研究。
随着研究的深入，研究者发现内生真菌与宿主植物存在着密切的互利共生关系。
篦子三尖杉内生真菌的分离鉴定和抑菌活性分析
篦子三尖杉内生真菌的分离鉴定和抑菌活性分析作者：韩洁桂艳玲付强邹颉赵杰宏来源：《山地农业生物学报》2021年第01期摘要：珍稀濒危药用植物篦子三尖杉（Cephalotaxus oliveri Mast）是临床白血病药物三尖杉酯碱和高三尖杉酯碱的重要来源，因此，篦子三尖杉的内生真菌具有潜在的药用价值。
通过从篦子三尖杉中分离纯化，筛选出16株外观差异较大的菌株，其中4株无产孢结构。
经显微结构和ITS分子鉴定，发现其中11株属于链格孢属。
抑菌试验表明，10号菌株对金黄色葡萄球菌的抑制作用较大，11号对白葡萄球菌的抑制作用较大;11号和12号对枯草芽孢杆菌的抑制作用较大;7号对大肠杆菌的抑制作用较大;有5株真菌的抑菌谱较广。
筛选的内生真菌具有药用活性，为进一步筛选有药用价值的内生真菌及其代谢产物奠定基础。
关键词：篦子三尖杉;内生真菌;ITS;抑菌活性Abstract：The rare and endangered medicinal plant Cephalotaxus oliveri Mast is an important source of Harringtonine and Homoharringtonine for clinical leukemic therapy，so that the endophytic fungi of C.oliveri have somewhat potential medicinal value.Here，there were sixteen strains with different appearance screened out by isolation and purification from the leaves and branches ofC.oliveri.Among them，there were four strains without sporulation structure，and eleven strains identified as Alternaria by microscopic morphology and ITS identification.The results of bacteriostatic experiment showed that the No.10 strain had greater inhibitory effects on Staphylococcus aureus.The same inhibitory effects were also found for No.11 strain on Staphylococcus albus，the No.11 stainand the No.12 strain on Bacillus subtilis，and the No.7 strain on Escherichia coli.Among which，there were five strains with a wide spectrum of bacteriostatic activity.It provides basis for further screening endophytic fungi for medicinal use.Keywords：Cephalotaxus oliveri; Endophytic fungi; Internal transcribed spacer; Antimicrobial activity珍稀瀕危药用植物篦子三尖杉隶属于三尖杉科（Cephalotaxaceae）三尖杉属（Cephalotaxus），为国家二级保护植物，喜温暖湿润的生态环境，多分布在贵州、云南、四川等地海拔300～1500 m的山林中[1]。
贡山三尖杉化学成分研究
贡山三尖杉化学成分研究张云梅;姚波;谭艳霞;王宇【期刊名称】《昆明冶金高等专科学校学报》【年(卷),期】2014(000)003【摘要】从贡山三尖杉枝叶中通过溶剂提取、硅胶柱层析、Sephadex LH-20柱层析、制备薄层层析等方法分得7个化合物。
波谱分析（核磁共振氢谱、碳谱和质谱）确定它们的结构分别为11-hydroxyhainanolidol （1）， fortunolide A （2），p-hydroxybenzaldehyde （3），3-methoxy-4-hydroxybenzaldehyde （4），sitosteryl-3β-glucoside-6′-O-palmitate （5），β-sitosterol （6），daucosterol （7），化合物1～5系首次从贡山三尖杉中分离得到。
【总页数】5页(P80-84)【作者】张云梅;姚波;谭艳霞;王宇【作者单位】昆明冶金高等专科学校化工学院，云南昆明650033;昆明冶金高等专科学校化工学院，云南昆明650033;昆明冶金高等专科学校化工学院，云南昆明650033;昆明冶金高等专科学校化工学院，云南昆明650033【正文语种】中文【中图分类】O656【相关文献】1.火焰原子吸收光谱法对贡山三尖杉中6种金属元素含量的测定 [J], 张云梅;陈业高;黄遵锡2.福建三尖杉活性成分研究Ⅰ.三尖杉酯碱的提取与光谱鉴定 [J], 郭文杰;方少忠;蔡宣梅;林真;鲁雪华3.贡山三尖杉 [J], 冯倩4.三尖杉属植物中生物碱的研究：V,三尖杉碱类生物碱的园二色谱研究 [J], 沈春镒;马广恩5.贡山三尖杉的新名称(Cephalotaxus talonensis Cheng et Feng ex S.G.Lu et ng)及分类地位(英文) [J], 郎学东;苏建荣;陆树刚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
三颗针抗菌活性成分研究
有 良好 的 稳 定 性 和 重 现 性 ， 这 些 研 究 为 三 颗针 进一 步 的 开 发 奠 定 了 基 础 。 关键词 ： 三颗针 ； 湖 北 小 檗 ； 抗 微 生物 活性 ； 生 物 碱 ； 制 备 型 高 效 液 相
中图分类号 ： Ｒ２ ８ ４ ． １ ／ Ｒ２ ８ ４ ． ２ Ｄ Ｏ Ｉ ： １ ０ ． ３ ８ ７ ０ ／ ］ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ ２ － ０ ７ ４ １ ． ２ ０ １ ５ ． ０ ５ ． ０ １ ４
合物的结构 ， 采 用 ＨＰ Ｌ Ｃ — Ｐ ＤＡ 法 分 析 不 同 来 源 的 ８个 三 棵 针 样 品 甲醇 提 取 物 ， 采 用 肉汤 稀 释 法 测 试 上 述 ８个 甲 醇 提 取 物 和单 体 生 物 碱 成 分 的 抗 菌 活 性 结 果 小 檗胺 （ ２ ） 、 药根 碱 （ ３ ） 、 巴马汀（ ４ ） 、 小檗碱 （ ５ ） 、 ４ － 羟基苯 甲酸（ ６ ） 、 谷 甾醇 （ ７ ） ， 化合物 １ ～ ７为 首 次 从 该 植 物 中 分 得 。８
ｔ ｒ ｕ ｍ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ． Ｔｈ ｅ ＨＰＬ （ 、 － Ｐ ＤＡ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｗａ ｓ ｐ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ ｍｅ ｄ ｔ ｏ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｚ ｅ ｅ ｉ ｇ ｈ ｔ ｍｅ ｔ ｈ ａ ｎ ｏ ｌ ｉ ｃ ｅ ｘ ｔ ｉ ＇ ａ ｃ ｔ ｓ ｆ ｒ ｏ ｍ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｒ ｅ ｇ ｉ ｏ ｎ ｓ ． Ａｎ ｔ ｉ ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｂ ｉ ａ ｌ
（ １ ） ｉ ｓ ｏ ｃ ｏ ｒ ｙ ｄ ｉ ｎ ｅ ， （ ２ ）ｂ ｅ ｒ ｂ ａ ｍｉ ｎ ｅ ，（ ３ ）ｊ ａ ｔ ｒ ｏ ｒ ｒ ｈ ｉ ｚ ｉ ｎ ｅ ，（ ４）ｐ ａ ｌ ｍａ ｔ ｉ ｎ ｅ ， （ ５ ）ｂ ｅ ｒ ｂ ｅ ｒ ｉ ｎ ｅ ， （ ６ ）４ 一 ｈ ｙ ｄ ｒ ０ ｘ ｙ ｂ ｅ ｎ ｚ ｏ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ａ ｎ ｄ（ ７ ）Ｉ ￣ － ｓ ｉ ｔ ｏ ｓ ｔ ｅ ｒ —
三尖杉属植物化学成分与药理活性研究进展
三尖杉属植物化学成分与药理活性研究进展
梅文莉;吴娇;戴好富
【期刊名称】《中草药》
【年(卷),期】2006(37)3
【摘要】三尖杉属植物主要含有生物碱和黄酮两大类化学成分。
因其三尖杉酯类生物碱具有抗癌活性,所以生物碱类成分得到了广泛的研究和重视。
我国已将三尖杉酯碱HT和高三尖杉酯碱HHT开发成药物,对急性非淋巴细胞性白血病和慢性粒细胞性白血病有较好疗效。
综述了三尖杉属植物的化学成分与药理活性研究进展,包括各类化合物的结构、药理活性、活性成分及衍生物的构效关系、HT和HHT 的药理机制研究等。
【总页数】7页(P452-458)
【关键词】三尖杉科;生物碱;黄酮;三尖杉酯碱;高三尖杉酯碱
【作者】梅文莉;吴娇;戴好富
【作者单位】中国热带农业科学院热带生物技术研究所热带作物生物技术国家重点实验室
【正文语种】中文
【中图分类】R282.71
【相关文献】
1.三尖杉属植物内生真菌及次生代谢产物活性研究进展 [J], 刘兆迪;解修超;陈文强;邓百万;彭浩;孔亚男;刘小红
2.红豆杉属植物化学成分及药理作用研究进展 [J], 张学玉;曲玮;梁敬钰
3.三宝木属植物化学成分和药理活性研究进展 [J], 岑长春;刘景龙;张卫丽;陈文婷;陈光英;韩长日
4.红豆杉属植物化学成分及其药理作用机制研究进展 [J], 邸亮;许燕;殷光发;张欢;刁方婷
5.三尖杉属植物中生物碱的研究——Ⅸ.三尖杉酯碱类似物的半合成及其抗白血病活性 [J], 王定志;马广恩;徐任生
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篦子三尖杉产高三尖杉酯碱内生真菌的分离与鉴定
篦子三尖杉产高三尖杉酯碱内生真菌的分离与鉴定韩洁;赵杰宏【摘要】Endophytic fungi were isolated and screened out by culturing leaf and stem explant of Cephalotaxus oliveri with surface sterilization on PDA medium, investigated by HPLC analysis and ITS sequence analysis to isolate and screen out endophytic homoharringtonine-producing fungi from Cephalotaxus oliveri. Results show that ten strains with various morphological structures were screened out, in which gyzy-7, gyzy-8, gyzy-9 and gyzy-ll hold conidiogenous structure; gyzy-6, gyzy-8 and gyzy-9 could produce homoharringtonine which are grouped into Schizophyllurn, Phyllosticta and Phanerochaete respectively. Endophytic homoharringtonine-producing fungi are preliminarily isolated from Cephalotaxus oliveri.%为从药用植物篦子三尖杉中分离筛选产高三尖杉酯碱的内生真菌,采用枝叶外植体表面消毒后接种在PDA平板基上培养的方法分离筛选内生真菌,并对分离菌株进行了HPLC分析和ITS分子鉴定.结果表明:筛选出的10个菌株菌落形态和显微结构有明显差异,其中,gyzy-7、gyzy-8、gyzy-9和gyzy-11具产孢结构;gyzy-6、gyzy-8和gyzy-9可产生高三尖杉酯碱;gyzy-6为裂褶菌属,gyzy-8为叶点霉属,gyzy-9为平革菌属真菌.从笼子三尖杉中初步分离出产高三尖杉酯碱的内生真菌.【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2011(039)001【总页数】4页(P158-161)【关键词】篦子三尖杉;内生真菌;高三尖杉酯碱;高效液相色谱【作者】韩洁;赵杰宏【作者单位】贵阳中医学院,基础部微生物教研室,贵州,贵阳,550002;贵州省烟草科学研究所,贵州,贵阳,550081【正文语种】中文【中图分类】Q939.5近年来，人们从114种药用植物中分离到171个属的内生真菌[1]。
黔产三尖杉抗肿瘤活性成分研究
黔产三尖杉抗肿瘤活性成分研究周玫;马琳;郝小江;杨小生【期刊名称】《中国药科大学学报》【年(卷),期】2009(40)3【摘要】目的:对黔产三尖杉抗肿瘤活性成分进行研究。
方法:用硅胶、葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)柱色谱等方法进行分离纯化,通过理化性质及光谱数据确定化合物的结构;采用磺酰罗丹明(SRB)法和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法对粗提物和部分单体化合物进行抗肿瘤活性的测定。
结果:分离得到11个化合物,它们分别是:芹菜素(Ⅰ)、β-谷甾醇(Ⅱ)、乙酰三尖杉碱(Ⅲ)、柯伊利素(Ⅳ)、桥氧三尖杉碱(Ⅴ)、正三十一烷醇(Ⅵ)、7,3′,4′-三羟基黄酮(Ⅶ)、柳杉酚(Ⅷ)、三尖杉碱(Ⅸ)、台湾三尖杉碱(Ⅹ)和海南粗榧内酯hainanolide(Ⅺ);活性筛选结果表明,部分化合物具有一定的抗肿瘤活性。
结论:初步阐明了黔产三尖杉中的主要化学成分,其中化合物Ⅱ、Ⅵ～Ⅷ为首次从该植物中分离得到;化合物(Ⅺ)对人肺癌细胞株(A549)和人白血病细胞株(K562)有较好的抑制活性。
【总页数】4页(P209-212)【关键词】三尖杉;化学成分;抗肿瘤活性【作者】周玫;马琳;郝小江;杨小生【作者单位】贵州大学药学院,贵阳550025;贵州省、中国科学院天然产物化学重点实验室,贵阳550002【正文语种】中文【中图分类】R284;R962【相关文献】1.福建三尖杉活性成分研究Ⅰ.三尖杉酯碱的提取与光谱鉴定 [J], 郭文杰;方少忠;蔡宣梅;林真;鲁雪华2.黔产钩藤茎、叶化学成分及抗肿瘤活性研究 [J], 刘扬;张妮;罗俊;王苗苗;潘卫东3.三尖杉属生物碱的研究Ⅰ.三尖杉中抗癌有效成分的分离和鉴定(续) [J], 马广恩;林隆泽;赵志远4.新抗肿瘤药——三尖杉酯碱及高三尖杉酯碱研究进展 [J], 李占荣;韩锐因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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０ 引 言
植 物 内生 真菌 （ ｅ ｎ ｄ ｏ ｐ ｈ ｙ ｔ ｉ ｃ ｆ ｕ ｎ ｇ ｉ ） 是 指 生活 在植 物体 内或生 活 史 的一 定 阶段 处 于 植 物体 内 的真 菌 。 研究 表 明某 些抗 癌药 用植 物 中个 别 内生真 菌 能够产 生 与宿 主相 同或相 似 的生 理 活性 成 分 ， 已 日渐 引 起
气相 色谱 一 质 谱联 用技 术 （ Ｇ Ｃ — ＭＳ ） 分 离和鉴 定其化 学成 分 ， 并通过 滤纸 片扩散 法初 步研 究挥发 油的 抑 茵 活 性 。从 内生 真 菌 Ｓ Ｒ１ － ２ ６的 挥 发 油 中 共 鉴 定 出 １ ８种 化 学 成 分 ， 主 要 为 油 酸 （ ５ ８ ． ６ １ ％） 、 棕榈 酸 （ １ ０ ． Ｏ ６ ％） 、 油酸 乙酯 （ １ ２ ． Ｏ ５ ％） 等 脂 肪 酸 类及 部 分脂 肪 烷 烃 和 烯 醛 类 物
导致三 尖杉 资源 急剧减 少 。本研 究 以分 离 自秦 巴山 区三 尖 杉 的 内生 真 菌 Ｓ Ｒ １ － ２ ６为材 料 ， 通过 Ｇ Ｃ — Ｍ Ｓ 技 术分 析 了其挥发 油 的化学 成分 ， 并初 步研究 了挥发油 的抗 菌活 性 ， 以期 为 三尖杉 内生 真菌 资源 的开发 与利用 奠定 基础 。
科研工作者的注意。从微生物 ， 特别是从植物 内生真菌中寻找有抗癌、 抗菌活性 的成分对获得更多的天
然产 物 ， Biblioteka 保护 生物 多样性 具 有重 大意 义 。因真菌 等微 生物 除了种 类多 、 资源 丰富 外 ， 还有 生 长繁殖 快 、
易培养、 易控制 、 代谢能力强、 产量高 、 成本低 ， 不受季节 、 气候和地域的限制， 便于组织大规模工业化生 产， 并可 通过诱 变育 种等 手段来 提 高菌种 性能 等优 点 。这使 工 业化 发 酵 生产 抗 癌 、 抗 菌 药 物成 为 可 能 ， 其发展潜力巨大 。 三尖 杉 （ Ｃ ｅ ｐ ｈ ａ ｌ ｏ ｔ ａ ｘ ｓｆ ｕ ｏ ｒ ｔ ｕ ｎ ｅ ｉ ） 为三尖 杉科 三尖 杉属植 物 ， 分 布 于我 国陕 西南 部 、 甘 肃 南部 、 华东 、 华 南、 西南地区， 散生于海拔 ８ ０ ０～ ２ ０ ０ ０ Ｉ ｎ的山林边缘 、 路旁及 山涧潮湿地带。该植物在陕西境 内主要分 布 于秦 岭南坡 和 巴 山地 区 的镇 巴 、 佛坪 、 留坝 、 略阳、 勉县、 旬阳、 石泉、 宁陕等 县 引。从 其根 、 树皮 、 种 子 等部位中提取的多种生物碱被临床证明是有效的抗癌药物， 特别是在 白血病治疗方面具有较高的药用 价 值和 润肺 、 止咳、 消积 、 杀 虫等功 效 引。 由于植 株生 长缓 慢 ， 加 之人类 对 天然药 物需 求量 的逐年 增加 ，
收稿 日期 ： ２ ０ １ ３ － ０ ３ － ２ ７
基金项 目： 陕西省教育厅专项科研计划资助项 目（ ０ ８ Ｊ Ｋ ２ ４ ７ ） ； 陕西理工学 院人才引进科研启动项 目（ Ｓ Ｌ Ｇ Ｑ Ｄ ０ ７ １ ７ ） 作者简介 ： 解修超（ １ ９ ７ ８ 一） ， 男， 山东省临沭县人 ， 陕西理工学院讲 师 ， 硕士研究生导师 ， 博士 ， 主要研 究方向为微生物资源 开发与利用 ； 陈文强（ １ ９ ５ ６ ～） ， 男， 陕西省洋县人 ， 陕西理工学院教授 ， 硕士研究生导师 ， 主要研究方 向为微生物资 源的保 护 与利用 ； 邓百万 （ １ ９ ６ ３ 一） ， 男， 陕西省眉县人 ， 陕西理工学 院教授 ， 硕士 ， 主要研究方向为微生物资源 的保护 、 开发与利用。
Ａｕ ｇ ． ２ ０１ ３
Ｖｏ １ ． ２ ９ Ｎｏ ． ４
第２ ９卷第 ４期
【 文章编号］ １ ６ ７ ３ — ２ ９ ４ ４ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ４— ０ ０ ５ ６— ０ ６
三尖杉 内生真菌 Ｓ Ｒ １ — ２ ６ 挥发油成分及抑菌活性研究
解修超 ，陈文强 ，邓百万 ， 彭浩 ， 刘 兆迪 ，阮昌应
２ ０ １ ３年 ８月
陕西理工 学院学报 （ 自然科学版 ）
Ｊ ｏ ｕ ｎａ ｒ ｌ ｏ ｆ Ｓ ｈ ａ ａ ｎ ｘ ｉ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ（ Ｎ ａ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ Ｅ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ）
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第 ４期
解修超 ， 陈文强 ， 邓百万 ， 等
三尖杉 内生真菌 Ｓ Ｒ１ － ２ ６挥发油成分及抑菌活性研究
１ 材 料 和 方 法
１ ． １ 材 料 与仪 器
１ ． １ ． １ 供 试材 料
（ １ ） 内生菌菌株 。三尖杉内生真菌 Ｓ Ｒ １ — ２ ６由陕西省食药用菌工程技术研究中心从三尖杉根部的健 康组织分离获得。三尖杉种子样品采 自陕西省汉 台区褒河森林公 园三尖杉野生植株。内生真菌 Ｓ Ｒ １ － ２ ６ 经显微观察初步鉴定为镰孢菌属 （ Ｆ ｕ ｓ ａ ｒ ｉ ｕ ｍ ｓ ｐ ． ） 真菌 ， 保存于陕西省食药用菌工程技术研究中心。 （ ２ ） 靶标菌株 。大肠杆菌 （ Ｅ ｓ ｃ ｈ ｅ ｒ ｉ ｃ ｈ ｉ ａ ｃ ｏ ｌ ｉ ） 、 沙门氏菌 （ Ｓ ａ ｌ ｍ ｏ ｎ ｅ ｌ ｌ ａ ｔ ｙ ｐ ｈ １ ） 、 金黄色葡萄球菌（ Ｓ ｔ ａ ｐ ｈ ｙ ｌ ｏ —
质； 活性检测表明挥发 油样品对金黄 色葡萄球菌（ Ｓ ｔ ａ ｐ ｈ ｙ ｌ ｏ ｃ ｏ ｃ ｃ ｕ ｓ ６ ｔ ｌ ￣ ｌ ｌ ＇ ｅ ｓ） ｕ 、 大肠杆菌（ Ｅ ｓ ｃ ｈ ｅ ｒ ｉ ｃ ｈ ｉ ａ ｃ ｏ ｌ ｉ ） 和 沙 门氏 茵（ Ｓ ａ ｌ ｍ ｏ ｎ ｅ ｌ ｌ ａ ｔ ｙ ｐ ｈ １ ） 显示较 强 的抑 制作 用 。
（ １ ． 陕西 理工 学院 生物科 学与工程 学院 ， 陕西 汉 中 ７ ２ ３ ０ ０ ０ ； ２ ． 陕西省食药用菌工程技术研究 中心 ，陕西 汉 中 ７ ２ ３ ０ ０ ０ ）
［ 摘
要］ 采 用 索氏回 流提 取 法提取 三 尖杉 内生真 菌 Ｓ Ｒ １ － ２ ６ （ Ｆ ｕ ｓ ａ ｒ ｉ ｕ ｍ ｓ ｐ ． ） 的挥 发 油 ， 利用