无菌检查用培养基适用性验证报告
无菌检查用培养基灭菌后的保存有效期的验证方法
无菌检查用培养基灭菌后的保存时限验证方法1项目描述质量控制部无菌检查用培养基为硫乙醇酸盐流体培养基及胰酪大豆陈液体培养基，此两种培养基均为商品化的脱水培养基。
根据《中国药典》2023版规定，无菌检查用的硫乙醉酸盐流体培养基和胰酪大豆豚液体培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求，制备好的培养基若不即时使用，应置于无菌密闭容器中，在2~25℃、避光的环境下保存，并在经验证的保存期内使用。
因此，拟对胰酪大豆月东液体培养基及硫乙醛酸盐流体培养基在灭菌后的保存期进行验证，验证方法为：培养基灭菌后冷处保存（冰柜保存2~10°C）,确认在保存期内两种培养基的PH值、无菌性及灵敏度是否符合要求；每种培养基应进行三个配制批次验证；分别确认培养基在灭菌后保存0天、1天、2天、3天、4天、5天的PH值、无菌性检查及灵敏度检查是否符合要求；根据验证结果，确认硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆腺液体培养基在灭菌后的保存时限。
2.目的对无菌检查用培养基灭菌后的保存时限进行验证，确认无菌检查用培养基灭菌后在保存有效期内的PH值、无菌性检查及灵敏度检查是否符合要求。
3.范围本验证文件的范围仅适用于质量控制部无菌检查用培养基制备好后的保存时限的验证，验证项目包括：先决条件确认、实验设备及器材确认、培养基确认、灭菌效果确认、包装储藏确认、培养基PH值确认、培养基无菌性检查确认及培养基灵敏度检查确认。
4.职责4.1质量控制部职责：负责验证方案、报告的起草；负责按照批准的方案进行验证操作；负责对验证数据进行收集、整理、分析；负责记录在确认过程中所有发生的偏差及变更；负责针对偏差及变更，并提出解决方案，以采取纠正行动；负责验证过程中的相关检验工作；负责验证结果的总结、分析评价工作；负责人负责审核文件。
4.2质量保证部职责：负责监督整个验证活动，确保验证按计划进度进行；负责过验证项目的验证；负责对验证数据进行收集、整理、分析；负责变差、变更的调查和处理，偏差调查报告及变更情况上报审批；负责人负责审核文件。
培养基适用性检查
培养基适用性检查▪计数实验的培养基适用性➢该部分内容均为新增➢规定了该内容的应用范围➢采用标准菌种计数，回收率以及形态比较的判定方法➢标准菌种为：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉；规定了稀释后的工作菌液的保存条件和保存期限➢引入了对照培养基的概念➢判定的依据：回收率大于70％，且形态一致▪控制菌检查的培养基适用性➢该部分内容均为新增➢规定了该部分内容的应用范围以及检查的项目➢采用标准菌种比较的判定方法➢根据培养基的用途不同，分为增菌培养基的促生长能力、固体培养基的促生长能力、培养基的抑制能力、固体培养基的指示能力、液体培养基的指示能力等5种检查方法➢在检查中引入了涂布接种的概念1.概述培养基质量是影响微生物检验结果的重要环节。
计数测定用培养基的促生长能力是微生物限度检查结果判断的重要影响因素，控制菌检查用培养基也可能由于其促生长能力、指示能力、抑制能力的差异，从而对菌落颜色、形态等指标存在较大差异，影响结果判断的客观性。
培养基适用性检查是通过检验用培养基与对照培养基的比较，以阳性菌的生长状态或特征来评价拍段检验用培养基是否符合检验要求。
微生物限度检查用培养基主要分为细菌、霉菌及酵母菌计数测定用培养基和控制菌检查用培养基两部分。
2010《版中国药典》微生物限度检查法中收载了“适用性检查”对培养基质量进行控制。
2、培养基适用性检查实验的一般要求2.1培养基适用性检查适用范围2010版《中国药典》规定微生物限度检查中成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。
培养基使用性检查试验可用于确定实验室所用培养基(包括购置的不同批号的成品培养基、不同批号的脱水培养基干粉、按处方自行配制培养基不同批次的原材料等)、制备程序（包括水质控制、配制方法、灭菌程序等）、保存条件（温度、湿度、时间及盛装培养基的容器条件等）等是否满足微生物限度检查用要求。
即上述影响培养基质量的各关键控制点应通过培养基使用性检查试验确定，如果任一控制点发生变化应重新进行培养基适用性检查。
无菌检查用培养基的适用性检查标准操作规程
无菌检查用培养基的适用性检查标准操作规程目的：建立无菌检查用培养基适用性检查标准操作规程。
范围：适用于无菌检查使用培养基的适用性检查。
依据：中国药典》2015年版《药品生产质量管理规范》2010年修订《中国药品检验标准操作规程》2010年版责任：QC化验员对实施本规程负责。
内容:1、概要：无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符合培养基的无菌检查及灵敏度检查要求。
本检查可在供试品的检查前或与供试品的检查同时进行。
2、材料及设备2.1 生化培养箱2.2 生物安全柜2.3 中国浊度标准管（由中国药品生物制品检定所提供）2.4 灭菌试管、灭菌注射器2.5 0.9%无菌氯化钠溶液2.6 0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液：取聚山梨酯80 0.05ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠至100ml，混匀，灭菌即可。
3、无菌检查培养基的适用性检查3.1无菌性检查取新鲜配制灭菌的培养基各5瓶，硫乙醇酸盐流体培养基置30～35℃，胰酪大豆胨液体培养基置20～25℃，培养14天，应无菌生长。
3.2灵敏度检查3.2.1菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
金黄色葡萄球菌[Staphylococcus aureus CMCC(B) 26003]铜绿假单胞菌[Pseudomonas aeruginosa CMCC(B) 10104]枯草芽孢杆菌[Bacillus subtilis CMCC(B) 63501]生孢梭菌[Clostridium sporogenes CMCC(B) 64941]白色念珠菌[Candida albicans CMCC(F) 98001]黑曲霉[Aspergillus niger CMCC(F) 98003]3.2.2菌液制备3.2.2.1 金黄色葡萄球菌菌悬液制备3.2.2.1.1 取金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30～35℃培养18～24小时，取新鲜传代菌种一支待用。
无菌检查方法验证
无菌检查方法验证：取本品，分别加灭菌注射用水 1ml 溶解，采用薄膜过滤法依法检查(中国药典 2022 年版二部附录Ⅺ H )，应符合规定。
菌液制备： 10 倍稀释法培养基 营养琼脂培养基营养琼脂培养基营养琼脂培养基硫乙醇酸盐培养基改良马丁培养基改良马丁琼脂斜面 培养基菌悬液制备计数结果菌种 代数 稀释级 菌落数(cfu/ml )枯草芽孢杆菌 4 10-6 61金黄色葡萄球菌 4 10-7 89大肠埃希菌 4 10-6 78生孢梭菌 4 10-6 67白色念珠菌 4 10-7 83黑曲霉菌 4 10-4 401、供试品处理将供试品去掉铝塑盖，外表面用75%酒精全面消毒，然后向每支样品中注 入 1.0ml0.1%的蛋白胨灭菌溶液，备用。
2、检查阳性对照： 将等量的试验菌直接加入到液体硫乙醇酸盐培养基或者改良马丁液 体培养基管中，在相应的温度下培养。
液体硫乙醇酸盐培养基管在 30-35℃下培菌种枯草芽孢杆菌 CMCC(B)63501 金黄色葡萄球菌 CMCC(B)26003 大肠埃希菌 CMCC(B)44102生孢梭菌 CMCC(B)64941白色念珠菌 CMCC(F)98001黑曲霉菌 CMCC(F)98003菌悬液制备用 0.9% 无菌氯化钠溶液制成每 1ml 含菌少于 100cfu (菌落行程单 位)的菌悬液加入 5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将 孢子洗脱，再同上制成每 ml 含菌 小于 100cfu 的菌悬液养；改良马丁液体培养基管在23-28℃下培养3-5 天。
观察记录。
阴性对照：将灭菌的液体硫乙醇酸盐培养基或者改良马丁液体培养基管直接放在相应的温度下培养。
液体硫乙醇酸盐培养基管在30-35℃下培养；改良马丁液体培养基管在23-28℃下培养3-5 天。
观察记录。
样品 (薄膜过滤法)：每种实验菌取10 支处理好的供试品溶液，将溶液合并后加入制备好的菌悬液1ml，用0.1%的蛋白胨灭菌溶液稀释至100ml，按薄膜过滤法过滤，取出滤膜，将其分为3 等份，分别置于含硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基的容器中，其中一份作为阳性对照用。
培养基适用性检查验证方案
编号: AB/06-31-B培养基适用性验证方案计数培养基****药厂有限公司标题培养基适用性验证方案编号AB/06-31-B页码共5页、第1页执行200 年月日颁发部门GMP综合办公室分发部门行政管理办公室分发数起草人起草日期审核人审核日期批准人批准日期目录1. 概述 (2)2. 验证目的 (2)3. 验证的范围 (2)4. 验证人员及职责 (2)5. 验证程序和方法 (2)6. 验证可接受的标准 (3)7. 验证步骤 (3)8. 结果分析及评价： (4)9. 验证报告 (5)10. 建议 (5)11. 最准批准 (5)12. 所使用的记录 (6)1. 验证目的：细菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的适用性检查。
本次验证的目的是确认营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基适合细菌、霉菌及酵母菌数测定。
2. 参照标准：2010版中国药典二部附录XI J微生物限度检查法。
3. 验证项目：营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基的适用性检查。
4.验证小组人员及职责：4.1验证小组人员:4.2验证人员职责及要求4.2.1按验证方案及相关文件实施验证。
4.2.2认真观察并做好验证原始记录。
4.2.3对实施验证的结果负责。
4.3验证中各部门的职责4.3.1验证领导组职责4.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。
4.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。
4.3.1.3负责验证方案的批准工作。
4.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。
4.3.1.5负责验证报告的批准工作。
4.3.2验证工作小组职责4.3.2.1负责验证方案的起草工作。
4.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。
4.3.2.3负责验证方案的实施。
4.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。
4.3.2.5参与验证结果的评价工作。
4.3.3质量部职责4.3.3.1负责公司验证日常管理工作。
4.3.3.2负责验证方案的审核工作。
4.3.3.3负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。
无菌检查方法验证报告
无菌检查方法验证报告目录1. 目的 (3)2. 适用范围 (3)3. 接受标准 (3)4. 抽样计划 (3)5. 设备、试剂和菌种信息 (3)6. 试验步骤 (4)7. 供试品检查 (6)8. 结论 (6)9. 再验证周期 (6)10. 附件清单 (6)1.目的支据中国药典2020版无菌检查法的要求，对产品的无菌检查法进行验证，以确定一种无菌检查的方法能有效的消除该产品对微生物的抑制作用，从而证实该方法的有效性和实用性。
2.适用范围适用于本司产品的无菌检查。
3.接受标准与阳性对照比较，含供试液各容器中的试验菌（金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌、白色念珠菌、枯草芽孢杆菌和黑曲霉）均生长良好，则可照此检查方法和检查条件进行供试品的无菌检查。
如含供试品的任一容器内的试验菌生长微弱、缓慢或不生长，则说明供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用，需进一步改进检验条件再进行方法验证试验。
4.抽样计划随机抽取灭菌后的样品24份。
具体信息见表一：表一样品信息确认人/日期：复核人/日期：5.设备、试剂和菌种信息5.1设备信息详见表二表二设备信息确认人/日期：复核人/日期：5.2试剂信息详见表三：表三试剂信息确认人/日期：复核人/日期：5.3菌种信息详见表四：表四菌种信息确认人/日期：复核人/日期：5.3.1菌液的制备用接种环取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的第三代培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成浓度≤100cfu/mL的菌悬液；用接种环取生孢梭菌的第三代培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成浓度≤100cfu/mL的菌悬液；用接种环取白色念珠菌的第四代培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成浓度≤100cfu/mL的菌悬液；用接种环取黑曲霉的第三代培养物，向培养物中加入10mL0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，转移孢子悬液至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成浓度≤100cfu/mL的孢子悬液。
以上操作均在微生物检验室阳性菌室的生物安全柜中进行。
培养基适用性检查记录A
培养基适用性检查记录A一、引言培养基的适用性检查是指通过相关试验和分析，对培养基的成分、性质和质量进行评估，以确认其适用性和可靠性。
本报告记录了对培养基A 的适用性检查结果。
二、试验目的本次检查的目的是评估培养基A在不同温度、pH值和气氛条件下的生长性能，以确定其适用范围和最佳条件。
三、试验设备和材料1.培养基A：按照制备方法配制得到的培养基。
2.培养皿：用于培养细菌的培养皿。
3.细菌菌种：选择一种常见的细菌菌种作为试验菌种。
4.灭菌器：用于培养基和培养器具的灭菌处理。
5.恒温培养箱：用于控制培养温度。
6.pH计：用于测量培养基的pH值。
四、试验方法1.培养基质量检查：对培养基进行外观检查，观察是否存在悬浮物、沉淀物或变色等异常情况。
2.培养基成分测试：对培养基进行化学分析，检测关键成分的含量是否符合规定标准。
3.温度适应性试验：将培养基A分装至多个培养皿中，接种细菌菌种后，在不同温度条件下培养一段时间，观察细菌的生长情况。
4.pH适应性试验：将培养基A分装至多个培养皿中，调整pH值到不同水平，接种细菌菌种后，在恒温培养箱中培养一段时间，观察细菌的生长情况。
5.气氛适应性试验：将培养基A分装至多个培养皿中，分别置于不同的气氛条件下，接种细菌菌种后，在恒温培养箱中培养一段时间，观察细菌的生长情况。
五、试验结果与分析1.培养基质量检查结果显示，培养基A外观正常，无悬浮物、沉淀物或变色等异常情况。
2.培养基成分测试结果显示，培养基A关键成分的含量符合规定标准，满足培养需求。
3.温度适应性试验结果显示，培养基A在不同温度条件下均能支持细菌的生长，生长速度和菌落数量与温度呈正相关关系。
4.pH适应性试验结果显示，培养基A在pH值在6~8范围内能够支持细菌的生长，菌落数量在不同pH值条件下有所差异，但均能生长。
5.气氛适应性试验结果显示，培养基A在不同气氛条件下均能支持细菌的生长，但生长速度和菌落数量会受到气氛条件的影响。
培养基适用性检查报告
培养基适用性检查报告1. 试验目的：对培养基性能的质量控制，以保证微生物检验的质量。
2. 适用范围：适用于细菌、霉菌及酵母菌计数用培养基和控制菌检查用的培养基的适用性检查。
需检查的培养基包括成品培养基、由脱水培养基和按处方配制的培养基。
3. 试验内容：3.1 .计数培养基的适用性检查3.1.1. 菌种：大肠埃希菌[CMCC( B)44102]金黄色葡萄球菌[CMCC( B)26003]枯草芽抱菌[CMCC( B)63501]白色念珠菌[CMCC (F) 98001]黑曲霉[CMCC ( F) 98003]接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基或琼脂斜面培养基中，33C培养24小时，接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂斜面培养基中，26C培养48小时。
上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数50〜100cfu的菌悬液。
接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，26C培养7天，加入4ml含0.05% ( ml/ml )聚山梨酯80的0.9%的无菌氯化钠溶液，将抱子洗脱。
然后，用管口带有薄的无菌棉花吸出抱子悬液至无菌试管内，用含0.05% (ml/ml )聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数50〜100cfu的菌悬液。
菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在 2~8C ，可在24小时内使用。
黑曲霉孢子悬液可保存在2~8C ，在验证过的贮存期内使用。
3.1.3.适应性检查3.1.3.1.细菌计数用培养基适应性检查取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各1ml (50〜100cfu ),分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备 2个平皿，混匀，凝固，置33C 培养48小时，计数。
用被检培养基和对照培养基(若无对照培养基可用其他厂家生产的培养 基)按上述方法进行试验，并记录。
试验结果报告见表 1。
(精选)无菌检查法培养基的适用性检查
(精选)无菌检查法培养基的适用性检查无菌检查法是一种用于检测生物培养基中是否存在细菌、真菌等微生物的方法。
对于无菌检查法培养基的适用性检查，其主要目的是通过一系列实验探究不同基质中培养基的适用性，并验证其能否满足质量控制要求。
关于无菌检查法培养基适用性检查，其需要考虑以下几个方面：1. 检测的菌种无菌检查法的适用性检查主要是针对检测的菌种进行的。
在检查培养基适用性时，应选取常见的菌种，如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌等，以测试其在不同基质中生长情况。
2. 基质的选择适用性检查需要考虑基质的选择。
一般情况下，培养基要适应于常见的基质中，如水、空气、土壤等。
同时，针对基质特性有所不同的检测培养基，还需要进行不同基质特性的适用性测试，如pH值、含盐量等。
3. 实验室条件在进行无菌检查法培养基适用性检查时，还需要考虑实验室条件。
一般情况下，必须要有一定的实验室基础设施和操作规范，如洁净室、灭菌设备等。
4. 实验材料适用性检查还需要考虑实验材料的选择。
一般情况下，适用性检查需要使用经过严格检测和认证的实验材料，如蒸馏水、洗涤剂、试管等。
需要注意的是，在进行无菌检查法培养基适用性检查时，需要进行详细的实验记录，并对实验结果进行分析和总结，以便更好地指导检测实际生产和应用过程中的无菌检测工作，确保其可靠和稳定。
总之，无菌检查法培养基适用性检查，是一项非常重要的质量控制工作。
只有通过严格的实验探究和检测，才能保证培养基在实际应用过程中具有较好的适应性和稳定性，积极促进无菌检测工作的提高和优化，更好地维护人类的健康与安全。
培养基无菌模拟灌装验证方案及报告
5.4.2.1 负责设备的安装、调试和维护保养，并做好相应的记录； 5.4.2.2 负责提供设备的详细资料及相关 SOP； 5.4.2.3 负责建立设备档案； 5.4.2.4 负责提供设备的计量器具校验详细情况。 5.4.3 质量部
5.4.3.1 负责组织 QA 人员对验证全过程进行监控； 5.4.3.2 负责验证相关的检验及结果分析报告； 5.4.3.3 负责数据的选择与评价。 5.4.4 生产部
产品接触的灌装设备部件的清洗、 灭菌、 安装过程必须遵循与实际生产操作相同的标准操作规程。 检查结果见附表 1、附表 2、附表 3、附表 4、附表 5、附表 6、附表 7、附表 8 及附表 9。 6.3.2 灌装机灌装速度保持与正常冻干粉针剂灌装及半压胶塞生产时的速度相同或略低于正
常的灌装速度。检查结果见附表 10、附表 11 及附表 12。 6.3.3 所有参加模拟试验的操作人员均应经过 GMP、无菌操作、无菌更衣程序技术等相关知识
页码：4/34 编号：VA-PV-A-201-01-12
模 拟 验 证 方 案
Simulation Validation Project
附表 17 附表 18 附表 19 附表 20 附表 21 附表 22 附表 23 附表 24 附表 25 附表 26 附表 27 附表 28 附表 29 附表 30
无菌培养基一般选用胰蛋白胨大豆肉汤培养基，按每 30g 加 1L 过滤纯化水的比例，配
制足够量（如考虑进行 3000 瓶的试验，每瓶灌装 3ml(约等于 3g)，则至少要配制 10～12L） 。 6.3 操作过程及操作规程 6.3.1 模拟灌装试验中使用的玻璃瓶和胶塞的清洗、灭菌，灌装及冻干设备的清洗、消毒，与
清洁情况灭菌情况维护保养使用情况设备名称标准实际结论精滤罐及微孔滤膜过滤圆盘应清洁无任何残余物符合规定符合sop规定良好玻璃瓶清洗应清洁无上一批残余物符合sop规定良好胶塞清洗机胶塞清洗应清洁无上一批残余物符合sop规定良好铝盖清洗机铝盖清洗应清洁无上一批残余物符合sop规定良好灌装及半压缩灌装半压塞应清洁无任何残余物符合规定符合sop规定良好应清洁无任何残余物符合规定符合sop规定良好应清洁无任何残余物符合sop规定良好结论
无菌、微生物限度检查及方法验证
此法为实验室工作用菌种的最常用的保藏方法，仅能用于工作用菌种的短期保藏。
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琼脂斜面低温保藏法保藏法（厂家常用）
保藏芽胞液对
产芽胞的微生物宜制成芽胞菌悬液后再保藏， 无菌操作，取1ml孢子液接入茄形瓶或培养皿内，轻轻转动使菌液均匀分布于培养基表面。 将培养皿在适当的温度下培养。一般需要7天或更长时间 在层流台下，取3~5ml氯化钠磷酸盐缓冲液（pH7.0）加入培养皿内 用无菌玻璃L棒轻轻刮下菌苔，注意不要划破培养基。 用无菌注射器或无菌吸管吸取菌悬液，收集于试管中。 将收集的芽胞液放在80~90℃水浴中加热15分钟，冷却。 做好标记，放至2~8℃冰箱中保藏。原始芽胞液可保存1年。 每次使用前用平皿法重新标定其浓度。
微生物实验室的质量管理
设施—洁净室、净化工作台、生物安全柜。 设备—高压蒸汽灭菌器、电热恒温干烤箱、培养箱、冰箱。 实验仪器—全封闭薄膜过滤装置、电动匀浆仪、电热恒温水浴箱、离心机、显微镜，及刻度吸管、试管、三角烧瓶、培养皿等。 建立主要设施、设备、仪器的明细记录，内容包括名称、型号、生产厂家、购买日期。 质量保证档案：购买发票、安装验收或开箱验收记录、调试记录、计量检定或运行校验合格证、指定专人负责、制订标准操作规程（SOP）、建立使用登记册，维修、保养记录、改造或更新记录、直至报废记录。
记录温湿度是否在规定的范围内，每次实验时，对操作室和层流台做微生物沉降菌落计数并记录；如发现问题应找原因，及时报修和报告并将报修原因和结果记录归档。如遇停电，应立即停止实验，重新进入无菌室前，至少开启机房运转1小时以上。
实验室使用管理
微生物实验室的质量管理
平时实验室内应尽可能减少人员的走动或活动，通向洁净室的门要关闭或安装自动闭门器使其保持关闭状态。
枯草芽孢杆菌 [CMCC（B）63501] 金黄色葡萄球菌 [CMCC（B）26003] 生孢梭菌 [CMCC（B）64941] 铜绿假单胞菌 [CMCC（B）10104] 大肠埃希菌 [CMCC（B）44102] 乙型副伤寒沙门菌 [CMCC（B）50094] 白色念珠菌 [CMCC（B）98001] 黑曲霉 [CMCC（B）9 003]
无菌检查用培养基适用性检查记录
□中国药品生物制品检定所□其他：
检验依据：版
仪器名称：生化培养箱型号：编号：
仪器名称: 超净工作台型号：编号:
二、检验方法
1.培养基的无菌性检查
每批培养基随机取不少于5支，培养14天, 逐日观察结果。
2.培养基的灵敏度检查
2.培养基的灵敏度检查
□硫乙醇酸盐流体培养基：取每管装量为12的硫乙醇酸盐流体培养基7支，分别接种小于100的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照。
于30～35℃培养3天，逐日观察结果。
□胰酪大豆胨液体培养基：取每管装量为9的胰酪大豆胨液体培养基7支，分别接种小于100的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲菌各2支，另1支不接种作为空白对照。
于20～25℃培养5天，逐日观察结果。
三、检验结果
□培养基的无菌性检查
检验者：日期：复核者：日期：
□培养基的灵敏度检查
注：“+”为生长，“-”为不生长，“”为生长良好
检验者：日期：复核者：日期：
四、结论
本品照《无菌检查用培养基适用性检查操作规程》（00434）检查，结果：
□符合规定□不符合规定。
药品无菌检查(薄膜过滤法)能力验证结果与分析
备供试品溶液，进样测定，测得样品中芍药苷的平均含量为１ ９８ｍｇ·ｇ－１，计算其ＲＳＤ为０ ５６％。
２ ５ 加样回收率２ ５ １ 对照品溶液配制：取芍药苷对照品１５ ２６ｍｇ，精密称定，置２５ｍＬ量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为芍药苷加样母液（Ａ）。
２ ５ ２ 样品溶液的制备：取９个１００ｍＬ具塞锥形瓶，标记瓶号１～９，分别准确移取１ ０ｍＬ（Ａ）加入到１～３号瓶，准确移取２ ０ｍＬ（Ａ）加入到４～６号瓶，准确移取３ｍＬ（Ａ）加入到７～９号瓶，将１～９号瓶吹干，分别取约０ ６ｇ的样品加入１～９号瓶，按１ ２ ３精密称定之后操作。
表２ 加样回收试验结果 （ｎ＝９）项目芍药苷回收量（ｍｇ）芍药苷实际加入量（ｍｇ）回收率（％）平均回收率（％）ＲＳＤ（％）加样回收０ ５倍 １０ ５７５０ ５８０９９ ０８加样回收０ ５倍 ２０ ５８４０ ５８０１００ ５４加样回收０ ５倍 ３０ ５７５０ ５８０９８ ９８加样回收１倍 １１ １５４１ １６１９９ ３８加样回收１倍 ２１ １６２１ １６１１００ ０６９９ ３８０ ７１加样回收１倍 ３１ １４９１ １６１９８ ９４加样回收１ ５倍 １１ ７４１１ ７４１９９ ９６加样回收１ ５倍 ２１ ７２９１ ７４１９９ ２８加样回收１ ５倍 ３１ ７１０１ ７４１９８ １９２ ６ 稳定性试验 在“１ ２ １”项色谱条件下，精密吸取供试品溶液５μＬ，注入液相色谱仪，分别于０、２、４、６、８、１２、１６ｈ测定，求得芍药苷峰面积的ＲＳＤ值为０ ２４％。
结果表明，供试品溶液在１６ｈ内稳定。
２ ８ 耐用性实验 考察不同色谱柱、柱温、流速对测定方法的影响，芍药苷平均含量为２ ００ｍｇ·ｇ－１，ＲＳＤ为０ ８２％。
２ ９ 十批次疏风愈痛丸含量测定结果 测定十个批次疏风愈痛丸中芍药苷含量，测得平均含量为２ ００ｍｇ·ｇ－１，下浮２０％，将芍药苷的限度定为每１ｇ不少于１ ６０ｍｇ，列入含量测定项正文。
无菌检验方法适用性试验方案
无菌检验方法适用性试验方案无菌检验是一种用于确认样品是否含有微生物的技术方法，广泛应用于药品、医疗器械、食品等行业中。
为了确保无菌检验方法的可靠性和准确性，需要进行适用性试验。
本文将详细介绍无菌检验方法的适用性试验方案。
一、背景介绍二、试验目的1.验证培养基的适用性：验证所选培养基是否能够有效地促进微生物的生长，并区分不同的微生物种类。
2.验证培养条件的适用性：验证所选培养条件（如温度、湿度、压力等）对于无菌检验结果的影响。
3.验证无菌器材的适用性：验证所选无菌器材是否能够有效地防止微生物的污染。
三、试验内容1.培养基适用性试验（1）准备不同类型的培养基，如营养琼脂、马铃薯葡萄糖琼脂、选择性琼脂等。
（2）分别接种已知数量的目标微生物（如大肠杆菌、枯草杆菌、白色念珠菌等）。
（3）分别在不同培养基上培养，并进行菌落计数。
（4）比较同一微生物在不同培养基上的菌落计数结果，评估培养基的适用性。
2.培养条件适用性试验（1）选取不同的温度、湿度、压力等培养条件。
（2）分别接种已知数量的目标微生物。
（3）在不同培养条件下培养，并进行菌落计数。
（4）比较同一微生物在不同培养条件下的菌落计数结果，评估培养条件的适用性。
3.无菌器材适用性试验（1）准备不同类型的无菌器材，如培养皿、试管、注射器等。
（2）分别接种已知数量的目标微生物。
（3）使用无菌器材进行培养，并进行菌落计数。
（4）比较不同无菌器材上的菌落计数结果，评估无菌器材的适用性。
四、数据处理和结果分析根据试验结果进行数据统计和分析，并评估不同培养基、培养条件和无菌器材的适用性。
可以使用统计方法，如t检验、方差分析等，对数据进行处理和分析，以验证试验结果的可靠性。
五、质量控制1.试验过程中要严格遵循无菌操作规程，防止试验过程中的交叉污染。
2.试验中使用的培养基、培养条件和无菌器材应符合相关标准和规范，确保试验结果的可靠性。
六、结论根据试验结果，对所选的无菌检验方法进行适用性评估，判断其是否符合要求。
培养基适用性验证方案-wm
培养基适用性验证方案编制人：________________ 日期：_________________ 审核人：________________ 日期：_________________批准人：________________ 日期：_________________目录1. 概述2. 验证目的3. 验证依据4. 验证项目5. 验证小组成员及职责6. 验证时间7. 验证材料8. 验证内容8.1.无菌检查用培养基适用性验证8.2.计数用培养基适用性验证9. 验证方案的评定与建议10. 验证方案的最终审核意见培养基适用性验证报告1.概述培养基是无菌检查和微生物限度检查的关键物品之一，培养基的是否符合检验要求，影响着检验结果的准确性、有效性。
2.验证目的验证培养基是否符合检验要求3.验证依据《中国药典》2015版通则1101生物检查法4.验证项目无菌检查用培养基：硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基、营养肉汤；计数用培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基、沙式葡萄糖琼脂培养基、R2A琼脂培养基、大豆酪蛋白琼脂培养基5.验证小组成员6.验证时间本次验证于2016年1月18日开始进行，将于2016年1月22日完成7.验证材料7.1.仪器设备手提式压力蒸汽灭菌器、生物安全柜、生化培养箱、霉菌培养箱、电热鼓风干燥箱、净化工作台7.2.对照培养基胰酪大豆胨琼脂对照培养基、沙式葡萄糖琼脂对照培养基、R2A琼脂对照培养基、大豆酪蛋白琼脂对照培养基7.3.其他器具酒精灯、试管、75%乙醇、灭菌刻度吸量管(1ml)、灭菌硼硅酸玻璃培养皿(© 90mr K 15mm)、锥形瓶，移液器，无菌吸头等。
7.4. 菌种金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌、黑曲霉、白色念珠菌；8. 验证内容8.1.无菌检查用培养基适用性验证8.1.1. 无菌性验证随机选取灭菌后硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基各5 瓶，并对培养基分别编号。
新版GMP培养基适用性检查验证方案
新版GMP培养基适用性检查验证方案导言：为了确保药品的安全性和有效性，广泛应用的GMP（Good Manufacturing Practice）准则规定了药品生产过程中的各个环节的要求。
其中，培养基是药品生产过程中重要的组成部分，为菌种的培养提供了必要的营养物质。
因此，对于新版的GMP培养基的适用性进行检查和验证是至关重要的。
本文将针对新版GMP培养基适用性检查验证方案进行详细介绍。
一、目的本方案的目的是确保新版GMP培养基在菌种的培养中具有适用性，并满足GMP准则中对培养基的要求，以确保药品生产过程的安全性、有效性和一致性。
二、检查和验证内容1.培养基的配方和成分检查通过检查新版GMP培养基的配方和成分，确认其是否与GMP准则中的要求相符。
包括但不限于：（1）培养基主要成分是否符合GMP准则的规定；（2）培养基配方中的添加剂的使用是否符合GMP准则的规定；（3）培养基中可能存在的致病菌、毒素或其他有害物质是否符合GMP准则的规定。
2.培养基的物理和化学指标检查通过检查新版GMP培养基的物理和化学指标，确认其是否符合GMP准则中的要求。
包括但不限于：（1）培养基的pH值和渗透压是否符合GMP准则的规定；（2）培养基的可溶性是否符合GMP准则的规定；（3）培养基的凝胶化能力、均匀性和稳定性是否符合GMP准则的规定；（4）培养基的透明度和色泽是否符合GMP准则的规定。
3.培养基的无菌性检查通过对新版GMP培养基进行无菌性检查，确认其是否符合GMP准则中的要求。
包括但不限于：（1）对培养基进行菌检，确认是否存在任何细菌、真菌或其他微生物的污染；（2）对培养基进行代菌试验，确认培养基对于不同种类的菌株是否具有适用性。
4.培养基的性能验证通过对新版GMP培养基进行性能验证，确认其在菌种的培养中的表现是否符合预期。
包括但不限于：（1）通过验证试验确认培养基的培养时间、生长速度和最终菌落数量是否符合预期；（2）通过对不同种类的菌株进行培养，并对培养基的表现进行评估，确认其在不同菌株的培养中的适用性。
无菌检查用培养基适用性验证报告
有限公司文件文件编号：VR-03-49页码：0/8无菌检查用培养基适用性验证报告审核批准表O方案经下列部门审核和批准后生效项目职责姓名签字日期起草质保部质保部审核质保部长批准质量副总1.验证目的：为证明硫乙醇酸盐流体培养基、营养肉汤、改良马丁培养基适合于细菌，真菌的无菌检查，总结本验证报告。
2.参照标准：《中国药典》 2010版二部附录XI H无菌检查法。
3.验证项目：硫乙醇酸盐流体培养基、营养肉汤、改良马丁培养基适用性检查。
4.验证小组姓名部门职责质保部负责对验证进行总结和评价批准方案及报告质保部负责制定确认方案及报告的编制质保部负责确认过程的相关检测，确保检验结论正确可靠质保部负责确认过程的相关检测，确保检验结论正确可靠4.试验材料：4.1. 被验证培养基：品名：硫乙醇酸盐流体培养基规格：批号：生产厂家：品名：营养肉汤培养基规格：批号：生产厂家：品名：改良马丁培养基规格：批号：生产厂家：4.2. 仪器设备：4.2.1. 压力蒸汽灭菌器：型号：编号：4.2.2. 双人净化工作台：型号：编号：4.2.3.电热鼓风干燥箱：型号：编号：4.2.4.生化培养箱 (23～28℃)：型号：编号：4.2.5.恒温培养箱(30～35℃)型号：编号：4.3. 稀释剂： 0.9%无菌氯化钠溶液4.4. 验证用培养基：4.5. 验证用菌株：5.菌液制备：5.1.取经培养18～24小时的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的营养肉汤新鲜培养物1ml 加入到9ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至小于100cfu ∕ml 的菌悬液备用。
5.2.取经培养24～48小时的白色念珠菌的改良马丁培养物1ml 加入到9ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至小于100cfu ∕ml 的菌悬液备用。
6.菌液计数：（每种菌液接种2个平皿）分别取上述制备的金黄色葡萄糖球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌各1ml 加入培养皿，每种菌液平行做2皿，注入不超过45℃营养琼脂培养基15～20ml ，置30～35℃培养箱培养二天，取上项制备的白色念珠菌菌液1ml 加入培养皿，平行做2皿，注入不超过45℃的玫瑰红钠琼脂培养基约15～20ml ，置23～28℃培养箱培养三天。
成品无菌鉴定实验报告
成品无菌鉴定实验报告一、实验目的通过对成品的无菌鉴定实验，判断成品是否符合无菌要求，为保证产品的质量和安全提供依据。
二、实验原理成品无菌鉴定是通过培养基的接种和培养来判断样品中是否有微生物存在的一种方法，常用的方法有菌落计数法和滚珠接种法。
本实验选用菌落计数法进行无菌鉴定。
三、实验步骤1. 准备培养基：将需要的培养基根据配方准备好，并按照要求进行灭菌。
2. 取样：在无菌操作条件下，将待检样品取0.1g放入无菌培养基中。
3. 震荡均匀：将培养基和样品充分混合，确保样品中微生物的均匀分布。
4. 接种：将混合液接种于已经灭菌平板上，注意操作时要保持无菌状态。
5. 培养：将接种的平板培养于适宜的温度和湿度条件下，通常为37，24-48小时。
6. 计数：在培养时间结束后，观察培养基上是否有菌落形成，并用计数板或计数仪器进行计数。
四、结果与分析经过48小时培养，观察检测样品的培养基上，未发现有任何菌落形成，即样品在本次实验中通过了无菌鉴定。
通过菌落计数法确定样品的菌落形成总数为0 CFU/mL。
五、结论根据本次实验的结果，成品在无菌鉴定中通过了检测，证明成品符合无菌要求。
这一结果说明成品在生产过程中进行了严格的无菌处理，能够避免微生物污染，保证了产品的质量和安全。
六、实验总结通过本次实验，我们了解了成品无菌鉴定的方法和步骤，并了解了菌落计数法的应用。
同时，我们也深入了解了无菌操作的重要性和无菌实验的操作要点。
本次实验结果证明了成品的优质和可靠性，为我们进一步研究和生产成品提供了基础数据和依据。
在未来的工作中，我们将继续强化无菌操作，保证成品质量的稳定和持续改进。
以上是本次成品无菌鉴定实验的详细报告内容。
感谢各位的参与和合作，希望本次实验对大家有所帮助。
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无菌检查用培养基
适用性验证报告
1.验证目的：为证明硫乙醇酸盐流体培养基、营养肉汤、改良马丁培养基适合于细菌，真菌的无菌检查，总结本验证报告。
2.参照标准：《中国药典》 2010版二部附录XI H无菌检查法。
3.验证项目：
硫乙醇酸盐流体培养基、营养肉汤、改良马丁培养基适用性检查。
品名：硫乙醇酸盐流体培养基
生产厂家：批号：规格：
品名：营养肉汤培养基规格：
批号：生产厂家：
品名：改良马丁培养基
生产厂家：规格：批号：
仪器设备：4.2.
编号： 4.2.1. 压力蒸汽灭菌器：型号：双人净化工作台：4.2.2. 编号：型号：
电热鼓风干燥箱：型号：编号： 4.2.3. ～生化培养箱4.2.4. (2328：型号：) 编号：℃ )℃35(30恒温培养箱
4.2.
5.～型号：编号：稀释剂：4.3. 无菌氯化钠溶液 0.9%
5.菌液制备：小时的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的营养肉24取经培养5.1.18～的ml倍稀释至小于100cfu∕1ml加入到9ml 0.9%无菌氯
化钠溶液中，10汤新鲜培养物菌悬液备用。
无菌氯9ml 0.9%1ml加入到取经培养24～48小时的白色念珠菌的改良马丁培养物5.2. ml的菌悬液备用。
100cfu 化钠溶液中，10倍稀释至小于∕ 2个平皿）6.菌液计数：（每种菌液接种加入培养皿，枯草芽孢杆菌各1ml分别取上述制备的金黄色葡萄糖球菌、铜绿假单胞菌、℃培养箱3530～，置皿，注入不超过45℃营养琼脂培养基15～20ml每种菌液平行做2皿，注入不超过21ml加入培养皿，平行做培养二天，取上项制备的白色念珠菌菌液℃培养箱培养三天。
23，置～281545℃的玫瑰红钠琼脂培养基约～20ml 无菌培养基的无菌性检查7. 7.1培养基的配制蒸馏水，加热1L29.25g硫乙醇酸盐流体培养基的配制：取硫乙醇酸盐流体培养基，加。
15min℃灭菌121，12ml 煮沸使其完全溶解，摇匀分装到试管中，每只试管装量
营养肉汤培养基的配制：取营养肉汤培养基18g，加1L蒸馏水，加热搅拌使其
完全溶解，摇匀分装到试管中，每只试管装量12ml，121℃灭菌15min。
改良马丁培养基的配制：取改良马丁培养基28.5g，加1L蒸馏水，加热搅拌使
其完全溶解，摇匀分装到到试管中，每只试管装量9ml，121℃灭菌15min。
7.2培养基的培养
硫乙醇酸盐流体培养基和营养肉汤培养基5支，置于30～35℃的培养箱中培养
14天；改良马丁培养基5支，置于23～28℃的培养箱中培养14天℃，逐日观察情况。
”为不生长”为生长，“-注：“+7.培养基灵敏度检查次独立的平行试验。
硫乙醇酸盐流体培养基等灵敏度检查至少应进行7.1.3 7.2培养基的配制蒸馏水，加热
1L，加29.25g硫乙醇酸盐流体培养基的配制：取硫乙醇酸盐流体培养基
煮沸使其完全溶解，摇匀分装到试管中，每只试管装量12ml，121℃灭菌15min。
营养肉汤培养基的配制：取硫乙醇酸盐流体培养基18g，加1L蒸馏水，加热搅拌使其完全溶解，摇匀分装到试管中，每只试管装量12ml，121℃灭菌15min。
改良马丁培养基的配制：取改良马丁培养基28.5g，加1L蒸馏水，加热搅拌使其完全溶解，摇匀分装到到试管中，每只试管装量9ml，121℃灭菌15min。
7.3.培养基接种
取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种小于100cfu/ml的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天；取每管装量为9ml的改良马丁培养基5支，分别接种小于100cfu/ml的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。
逐日观察结果。
7.4.结果判断
空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。
注：“+”为生长，“-”为不生长
验证周期：同种培养基的不同批号，不同生产厂家均应进行适用性验证。
8 9结论：
无菌培养基的适用性检查记录培养基：1. 硫乙醇酸盐流体培养基批号：_______________ 检验日期：
2. 营养肉汤培养基批号：_______________ 检验日期：
3. 改良马丁培养基批号：_______________ 检验日期：
一、培养基的无菌性检查
培养温度：硫乙醇酸盐流体培养基℃改良马丁培养基℃
注：“+”为生长，“-”为不生长
二、培养基的灵敏度检查
1. 菌液制备：
（1）金黄色葡萄球菌0.9%无菌NaCl溶液至含菌量 CFU/ml 第___代[CMCC(B)26003]
（2）枯草芽孢杆菌0.9%无菌NaCl溶液至含菌量 CFU/ml 代[CMCC(B)63501] 第（3）铜绿假单胞菌0.9%无菌NaCl溶液至含菌量 CFU/ml 第 [CMCC(B) 10104]
___代（4）生孢梭菌[CMCC(B)64941] 0.9%无菌NaCl溶液至含菌量 CFU/ml
代第___（5）白色念珠菌0.9%无菌NaCl溶液至含菌量 CFU/ml [CMCC(F)98001] 第代（6）黑曲霉0.9%无菌NaCl溶液至含菌量 CFU/ml 代第
[CMCC(F)98003]
2. 检查结果
细菌培养温度____℃ 3天霉菌及酵母菌培养温度____℃ 5天
-“”为生长，+注：“”为不生长附录无菌检查法培养基的适用性检查，《中华人民共和国药典》本品按三、结论：年版2010（二部）结果_______________。
日期：/复核人
日期：/检查人。