多种细胞的培养方法,步骤,心得,经验(大总结)!
MTT实验心得2
MTT实验心得MTT实验是检测细胞活力的实验方法，由于细胞活力与细胞数呈正相关，因此也常常用来检测细胞的增殖情况。
MTT的原理：活细胞有琥珀酸脱氢酶，将MTT还原成棕褐色沉淀。
由于一般介绍园子里已经很多，笔者将自己的心得按照实验流程与大家交流交流。
1、培养好细胞点板。
养细胞没啥好说的，如果不知道细胞如何养，那就看看相关的文献方法。
如果知道了细胞的名字，就可以上检索细胞的培养信息，这个网站上的培养方法是标准培养方法。
当然可以根据自己实验要求进行修改。
由于细胞计数很繁琐，点板时的细胞浓度是最难掌握的，这一点笔者的心得如下：自己先将细胞养一段时间，大概了解细胞的增殖情况，在MTT检测时实际上要求细胞大概能长满96-孔板的80-90%，如果打算养48小时就检测，根据细胞的生长情况反推点板时的细胞浓度状况。
这时可以将细胞不进行计数，将消化好的细胞混匀后（可能是10 ml）直接在一个废弃（最好进行过无菌处理）的96孔板中依次加入180、100、50微升细胞，将细胞放置几分钟就会沉到板底了，这时在显微镜下观察，推测哪个孔的细胞48 h能基本长满板底，假设50 微升的孔比较合适，而点板时没孔需点200 微升，那么就将细胞浓度再稀释4倍就可以正式点板了，这时顺便将细胞进行计数（因为实验记录要求写啊）。
这样就OK了！如果细胞还太多，将细胞稀释4倍后再重复以上操作。
注意：不要过分信赖细胞计数，因为细胞计数的取样量为20 微升左右，由于颗粒的分布不均匀，代表性是很差的。
建议：细胞计数一定要会，但不要完全依赖它。
点板时一定要将细胞消化成单个细胞，而且一定要混匀，最好用排枪，否则，MTT的SD会狂大。
2、点板布局。
其实这一点很多人不懈一顾。
如果你的细胞要养48 h或更长，建议不要吝啬96-孔板的四周边孔，这32个边孔不能使用，建议加入灭菌PBS以饱和中间64个孔的水分。
因为细胞培养过程中，边孔的水分蒸发很快，培养液及里面的药物会出现浓缩现象，细胞的状况就复杂了，有些人称之为“边缘效应”这些孔的SD也会狂大，既然如此，不如不用。
RAW经验总结
最后更新：2010-11-4 阅读次数：1350 【字体：小 中 大】
培养条件：1640培养液+四季青10%新生牛血清。PH：2gNaHCO3每1L 1640培养液。
在我培养的过程中，从来没有用过胰酶消化传代。我一直是直接用弯嘴滴管吹打的。只要按照顺序一片片地吹打，很容易就能够把该细胞吹打下来。吹打一遍之后，置镜下观察哪里还有未吹下的细胞，再着重吹打。吹打过程中，注意用力，要比常规稍加力度以能够吹下细胞。当然，用胰酶消化也是可以的，但是细胞的生长状态就是没有不用直接吹打下来的好。
对于RAW264.7细胞，他的生长时喜欢扎堆的。正常的生长状态应该是一小片一小片地生长。片片之间不连接，等到长的更多更密的时候就会连成大片，并且会叠加成层。所以，要很好地控制好细胞的生长速度，不要等到叠加成层的时候再传代。一般，在细胞小片小片地铺满瓶底而未连成大片的时候就该传代了。并且一旦有片细胞叠加成层就要进行传代。否则该处细胞必老化。影响整体生长状态！
RAW264.7细胞生长速度非常得快，贴壁速度很快，对生长空间的要求比较敏感。所以传代的时候以及培养的时候都要注意不要太多的细胞在培养瓶里，这样细胞状态会比较好。很多反而不利于该细胞生长。并且巨噬细胞比较喜欢扎堆生长，而堆与堆之间是有空间的。如果长成相连在一起的一满片的时候，细胞形态基本上就会差了，老化的会比较多，对后期实验结果是不好的。所以在养细胞的时候应该把我好该细胞喜欢的生长空间密度。
其次，把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内，培养瓶事先加入培养基，放入培养箱内培养，按时间点观察细胞贴壁情况。10分钟观察一次，20分钟，30分钟观察一次。选择一个时间点，已经有部分细胞贴壁的情况下，重新置于洁净台，底面朝上迅速倒出其中的培养基，加入3ml新培养基再轻轻洗一次。然后加入完全培养基培养。后续观察细胞生长情况以及形态。我称之为“二传”。呵呵。
细胞培养心得
目录293和293T293T细胞的培养心得293T细胞的培养与传代Jurcat细胞的传代悬浮细胞培养方法Jurcat细胞培养方法293T细胞的培养心得点击次数： 12 发表于：2008-08-24 23:25转载请注明来自丁香园来源：丁香园293T细胞差点被我养死，幸好我又将它起死回生，一点心得。
细胞传代：当细胞在细胞培养瓶内长满达到80％时就要传代，一传二，24小时后再传代。
48小时传就不好了，如果在24小时后细胞没有长到80％，应该换新的培养基，不然，培养基变黄，细胞脱落。
细胞消化：将细胞培养瓶竖立放置，吸走培养基，如果培养基中的脱落细胞较多，说明细胞现在很容易脱落，只要加入1ml的PBS+EDTA(0.02%)，来回轻微晃动培养瓶直到细胞完全脱落，加入10mlMEM(10%杭州四季青胎牛血清），混匀，不能吹打，分装2瓶，如果细胞没长满就脱落，则只需加入5mlMEM，不分装。
如果培养瓶中的细胞贴壁较牢固，培养基上清没有细胞脱落碎片，且细胞长满达到80％以上，吸走培养基，加入5ml 的PBS+EDTA(0.02%)，迅速轻微晃动，竖立培养瓶，吸走，加入1ml0.05%胰酶，37度消化不超过3min，细胞完全消化脱壁，取出加入10ml培养基轻微吸打混匀，分装2瓶。
培养基：MEM(GIBCO)+10%胎牛血清（杭州四季青）＋双抗293T细胞的培养与传代点击次数： 24 发表于：2008-08-25 20:47转载请注明来自丁香园来源：丁香园293细胞是转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系，293T细胞由293细胞派生，同时表达SV40大T抗原，含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。
大家注意293T细胞的一个重要特性：室温下不贴壁，但37度时可以重新贴壁。
我的293T细胞时老板从美国千里迢迢带回来的，当时正是冬天，老板把瓶子放在大衣口袋里在飞机上折腾了两天，等拿到实验室已经看不到贴壁的细胞了。
生物的心得体会 生物社心得体会(模板12篇)
生物的心得体会生物社心得体会(模板12篇)（经典版）编制人：__________________审核人：__________________审批人：__________________编制单位：__________________编制时间：____年____月____日序言下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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制作培养基的心得体会(优秀22篇)
制作培养基的心得体会（优秀22篇）（经典版）编制人：__________________审核人：__________________审批人：__________________编制单位：__________________编制时间：____年____月____日序言下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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细胞爬片的一些小心得-概述说明以及解释
细胞爬片的一些小心得-概述说明以及解释1.引言1.1 概述细胞爬片是一种重要的实验技术，用于研究细胞的运动行为和其与周围环境的相互作用。
在细胞爬片实验中，通过操纵细胞底部的基质或表面，观察和记录细胞的迁移、粘附和膜形成等过程，从而揭示细胞的生物学特性和功能。
本篇文章将结合个人实践经验，总结细胞爬片的一些小心得，探讨其在生物医学研究中的应用和发展趋势，分享细胞爬片实验的技巧和注意事项，以期能够帮助读者更好地理解和运用这一实验技术。
述部分的内容1.2文章结构1.2 文章结构本文主要分为引言、正文和结论三个部分。
在引言部分，将会概述细胞爬片的相关内容，介绍文章的结构和目的。
在正文部分，将详细探讨细胞爬片的定义、原理、应用领域以及实验步骤，同时分析其优势、局限性和发展趋势，最后介绍细胞爬片的技巧和注意事项。
在结论部分，将总结细胞爬片的重要性，探讨对未来研究的启示，并分享个人的经验。
通过以上内容的展开，读者将能够全面了解细胞爬片的相关知识和技巧，为其在实验研究中的应用提供帮助。
1.3 目的本文的目的旨在分享细胞爬片的一些小心得，包括其定义、原理、应用领域、实验步骤等方面的知识。
通过深入了解细胞爬片的优势和局限性，以及技巧和注意事项，读者可以更好地掌握这一实验技术，并在实践中取得更好的效果。
同时，本文将总结细胞爬片的重要性，并探讨其对未来研究的启示。
通过分享自身的经验和心得，希望能够为正在进行细胞爬片实验的科研人员提供一些参考和借鉴，促进科学研究的进步和发展。
容2.正文2.1 什么是细胞爬片：细胞爬片是一种常用的细胞实验技术，通过利用细胞的黏附性和迁移性，在培养皿中观察和研究细胞在基质表面上的移动和形态变化。
该技术主要用于研究细胞的运动、黏附和侵袭能力，广泛应用于细胞生物学、癌症研究等领域。
2.1.1 定义和原理：细胞爬片是通过将细胞悬浮在含有适当培养基的培养皿中，让细胞依靠伸展和缩合细胞膜的运动，在培养皿表面上爬行和迁移的过程。
2023年生物实验心得体会15篇_3
2023年生物实验心得体会15篇2023年生物实验心得体会15篇1大三的第二学期块结束了，这个学期操作了四个微生物实验，以及一个自主设计性实验。
通过前阶段对四个实验的操作和认知的基础上，展开第五个实验的自主设计。
实验分别是菌落总数测定，霉菌和酵母的检查和计数，乳酸菌的检验，微生物药敏试验以及探讨环境因素对微生物生长的影响。
这学期的微生物实验是在上学期微生物实验的基础上的累积和扩展延伸：以培养基的制备与灭菌，玻璃器皿的洗涤、包扎和灭菌，微生物接种技术和细菌的革兰氏染色为技术基础进行的，以加强学生基础理论知识和基本技能的培养为目的。
下面我来谈谈我在实验中的心得体会。
第一个实验是菌落总数测定。
让我重新认识了一下这个名词：菌落形成单位，我现在的理解就是：1ml或者1g待测样品中菌落的个数，一定要注意的是单位是CFU/ml或CFU/g。
还有就是要掌握好对高压蒸汽灭菌锅的操作。
实验之前要充分做好预习工作，以便实验的进行。
由于是测定微生物实验，就要尤其小心其他杂菌的混入影响实验结果。
因此要做好实验仪器和各种试剂的灭菌，有培养皿，试管，移液枪头（装在盒子中），按要求配置好的琼脂培养基和生理盐水，按各自要求用纱布和报纸包扎好，送入高压蒸汽灭菌锅进行灭菌。
玻璃仪器在包扎前要进行清洗，并烘干，以免水分沾湿报纸。
灭完菌后取出物品进入超净工作台，超近工作台的紫外灯在进入20分钟前开启，并在进入时关闭，以免影响人体。
要对台面进行消毒处理，用酒精擦拭。
可以在等待琼脂培养基冷却到50摄氏度左右前对待测样品进行10倍系列稀释至需要的浓度。
要注意的是一定要标记好浓度或者按顺序排列在试管架上以免弄混，同一个试管里吸取样本站能用同一个枪头进行移液。
再进行平板接种。
待琼脂培养基冷却好后，用右手打开纱布并将锥形瓶拿住，将瓶口靠近酒精灯再进行灭菌，左手拿培养皿用大拇指和食指稍微打开培养皿盖，将琼脂培养基倒入培养皿中心内，不用倒很多，使琼脂培养基没过培养皿表面即可。
动物细胞培养心得
动物细胞培养·心得在学习动物细胞培养的过程中，我了解到是动物细胞工程中最常用的技术手段，而且动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础点，细胞培养是生物医学中一项重要技术，应用较为广泛，目前已渗透到细胞生物学、生物化学、临床检验学等多个领域。
在这次PPT 制作中，我对无脊椎动物和脊椎动物两大领域细胞培养取得的进展及应用作了较为详细的了解，并在此基础上探讨了动物细胞培养存在的问题以及未来的发展方向。
为相关领域研究者探讨其他种类细胞系的建立及筛选合适的细胞系培养方法作为理论的参考依据我了解到历史上组织培养技术创建于 18 世纪末，之后于 1907 年美国生物学家Harrison在无菌条件下，以淋巴液为培养基在试管中培养蛙胚神经组织宣告成功后，才逐渐发展成为一种从体内组织取出细胞，模拟体内生存环境，在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下，使其生长繁殖并维持结构和功能的实验技术。
这种技术为细胞学、遗传学、病毒学、免疫学的研究和应用做出了重要贡献。
特别是随着近年来现代生物科学领域的迅速拓展，各种分子生物学实验诸如核移植、细胞杂交、DNA 介导的基因转移等，都是借助细胞培养技术而得以实现的。
然而，在种类繁多的动物世界里，细胞培养实验技术的发展并不均衡，构建动物细胞培养体系的研究效率和效果上也存在较大的局限性。
而动物细胞培养，在1907年，哈里森（Harrison）在无菌条件下用淋巴液作培养基，培养蛙胚神经组织存活数周，并观察到神经细胞突起的生长过程，由此创建了盖片覆盖凹窝玻璃悬滴培养法，奠定了动物组织体外培养的基础。
之后，又有人将悬滴培养法改良为双盖片培养，提高了传代效率并减少了污染；1923年，卡雷尔（Carrel）设计了卡氏瓶培养法，扩大了组织生存空间。
1951年，厄尔（Earle）发明了体外培养动物细胞的人工合成培养基。
1951年，波米拉（Pomerat）设计了灌流小室，使细胞生活在不断更新的培养液中，便于作显微摄影和细胞代谢的研究。
七年级生物上册《多细胞生物体》教案、教学设计
一、教学目标
（一）知识与技能
1.描述多细胞生物体的基本特征，了解其结构与功能的基本单位是细胞。
2.识别和列举不同种类的多细胞生物，如动物、植物、真菌等，并了解它们的分类依据。
3.阐述细胞分裂、细胞分化的过程，理解它们在多细胞生物体生长发育中的作用。
4.掌握多细胞生物体的组织、器官和系统的概念，了解它们在生物体内的协调与配合。
b)利用案例分析法，通过具体的生物实例，帮助学生形象地理解多细胞生物体的组织、器官和系统。
c)结合小组合作学习，促进学生之间的交流与合作，提高他们的问题解决能力。
2.教学策略：
a)创设情境：通过图片、视频等资源，展示多细胞生物体的丰富多样性，激发学生的兴趣。
b)梯度教学：针对学生的认知水平，由浅入深地设计教学内容，逐步突破教学重难点。
2.学生分享学习心得，谈谈对本节课知识点的理解和体会。
3.教师布置作业，要求学生结合本节课所学内容，写一篇关于多细胞生物体的短文，进一步巩固知识点。
五、作业布置
为了巩固学生对《多细胞生物体》这一章节知识点的掌握，特布置以下作业：
1.请同学们结合本节课所学内容，选取一个你感兴趣的多细胞生物体，为其绘制一幅生物结构图，标注出其主要组织、器官和系统，并简要介绍它们的功能。
2.写一篇关于细胞分裂与细胞分化的短文，阐述这两个过程在多细胞生物体生长发育中的作用，以及它们在生物体内的具体表现。
3.结合生活实际，举例说明多细胞生物体的组织、器官和系统如何协同工作，维持生物体的正常功能。
4.家庭实验：观察植物的生长，记录细胞分裂、细胞分化的过程，并拍照或绘制观察图。实验报告需包括实验目的、实验步骤、观察结果和结论。
组培实习心得
组培实习⼼得组培实习⼼得 组培实习给了我们⼀次接近⼤⾃然的机会让我感受到⾃然之伟⼤。
下⾯⼩编为⼤家带来组培实习⼼得的内容，希望⼤家喜欢。
篇⼀：组培实习⼼得 ⼀、前⾔ (1)植物组织培养是指在⽆菌和⼈⼯控制的环境条件下，利⽤适当的培养基，对离体的植物器官、组织、细胞及原⽣质体进⾏培养，使其再⽣细胞或完整植株的技术。
该技术能应⽤于植物离体快繁、⽆病毒苗⽊培育、培育新品种或创制新物种、次⽣代谢产物⽣产、植物种质资源的离体保存、⼈⼯种⼦等。
⽽组织培养的实习能够将课本中所学的理论知识应⽤于实践，开拓我们的视野，扩⼤我们的知识⾯，对于提⾼我们的探究意识和创新、动⼿操作能⼒具有很重要的意义。
(2)植物细胞全能性是植物组织培养的理论基础，是指每⼀个植物细胞带有该植物的全部遗传信息，在适当的条件下可表达出该细胞的所有遗传信息，分化出植物有机体所有不同类型的细胞，形成不同类型的器官甚⾄胚状体，直⾄形成完整再⽣植株。
(3)茅膏菜具有较⼤的药⽤价值和研究价值但种⼦萌发率低，因此可利⽤种⼦繁殖获得⽆菌苗后在进⾏快繁。
⼆、实习项⽬ 茅膏菜的组织培养 三、实习⽬的 (1)复习、巩固和植物组织培养的基本理论和基本知识，同时进⼀步丰富所学知识; (2)了解茅膏菜的形态、习性、种类、⽤途的多样性以及它们与环境的关系，激发学习的积极性; (3)理论联系实际，通过⾃主学习和研究性学习培养独⽴⼯作能⼒和创新意识; (4)重点掌握茅膏菜组织培养的基本操作技术及⽅法; 四、实习时间安排： (1)2012-11-18、2012-11-24、2012-11-25在图书馆查阅茅膏菜及组织培养的相关资料; (2)2012-12-1⾄2012-12-2去奇正藏药⼚药材种植基地参观，采集茅膏菜种⼦; (3)2012-12-8⾄2012-12-13在植物组织培养实验室进⾏茅膏菜的快速繁殖实验; (4)2012-12-14⾄2012-12-16撰写实习报告; 五、实习地点 (1)西藏农牧学院图书馆、电⼦阅览室 (2)奇正藏药⼚药材种植基地(奇正藏药⼚药材种植基地位于西藏林芝地区，全地区海拔500⾄7800多⽶，特殊的地形和⽓候，使这⾥各种物种资源⼗分丰富，⽽且没有受过污染。
培养细胞的流程
培养细胞的流程
细胞培养是生物学实验中非常重要的一项技术，它可以用于细胞生物学研究、药物筛选、疾病模型建立等多个领域。
下面将介绍一般细胞培养的流程。
首先，准备工作。
在进行细胞培养前，需要准备培养皿、培养基、细胞传代所需的胰酶等材料。
同时需要消毒工作台和培养箱，确保实验环境的无菌。
接着，解冻细胞。
如果是从冷冻状态中取出细胞进行培养，首先需要将冻存管放入37摄氏度的水浴中迅速解冻，解冻后将细胞转移到预先加热的培养基中。
然后，传代细胞。
当细胞生长到一定密度时，需要进行传代操作，以保证细胞的健康生长。
传代操作需要用到胰酶等酶类物质，可以将细胞从培养皿中剥离出来，然后转移到新的培养皿中。
接下来，细胞培养。
将细胞悬浮在培养基中，放入培养箱中进行培养。
培养箱中需要保持适宜的温度、湿度和二氧化碳浓度，以提供良好的生长环境。
最后，细胞观察和实验。
在细胞培养的过程中，需要定期观察细胞的形态和生长状态，确保细胞的健康生长。
同时可以进行相关的实验，如药物处理、基因转染等。
综上所述，细胞培养是一个复杂而又重要的实验技术，需要严格控制实验条件，确保细胞的健康生长。
通过以上流程，可以有效地进行细胞培养，并为后续的实验提供可靠的细胞基础。
实验总结与心得体会(精选10篇)
实验总结与心得体会(精选10篇)实验总结与心得体会要怎么写，才更标准规范？根据多年的文秘写作经验，参考优秀的实验总结与心得体会样本能让你事半功倍，下面分享【实验总结与心得体会(精选10篇)】，供你选择借鉴。
实验总结与心得体会篇1从12月末进入实验室以来到现在，我概括为第一阶段，感觉上是比较合适的。
今天要去把细胞从-70度冰箱转移到液氮中，然后就可以回家过年了。
大概年初四左右pandamumu姐姐又要来学校了，显然我也必然会在她来学校之后三四天内回来。
为什么我心血来潮想写这么些东西呢?因为，我在我们年级里算比较早进入实验室的，纵向对比、大二寒假进入也是很早的了。
我的同年级的朋友对“进入实验室”还了解得不多，“仰视”的同学经常会问：“你最近在研究什么啊?”“你发现什么奇怪的现象了吗?”“俯视”的同学经常会问：“你今天又洗了多少管子啊?”“杀老鼠好玩吗?”笼统地回答一下：如果一个人进了实验室第一个月内就有自己的课题，然后就开始开始着手研究并且有所发现了，那是大牛人;当然，进实验室以后也不能甘心就学洗管子、杀老鼠，很多东西都是只有在实验室里才能学会的，比如“实验室文化”、哥哥姐姐们项目的具体进展和你可以往哪些方向设计自己的课题、甚至每一种细胞的伺候方法都是不一样的——每一代要养好有什么经验……不了解这些知识，自己设计project会很空泛、很不具有科学性，甚至只是变相的“简单重复”。
我曾经看到过一篇sjtu的人建议刚进实验的小朋友要注意的东西，我看后的确觉得很无聊，似乎是人人皆知的。
比如他说“要多讨教师兄师姐的经验”，废话，哪有先自己摸索经验的人嘛!再比如他说“不要把所有时间花在实验台上，要学会查阅文献”，废话，实验资源有限，你想一直花在实验台上也不现实。
我还是结合自己的经验教训谈谈我的体会。
有些套话比如细心、踏实，没什么好多说的。
第一是要胆大。
刚学习养细胞的时候，一直害怕染菌、加错药……然后pandamumu姐姐还在边上监工，我反而做得很慢，有时拿枪的手也会抖的，然后加完一样，想了半天，才放心。
高中生物培训心得体会8篇
高中生物培训心得体会8篇（经典版）编制人：__________________审核人：__________________审批人：__________________编制单位：__________________编制时间：____年____月____日序言下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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细胞科学心得体会(精选15篇)
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优秀工作总结范文：无菌技术总结
无菌技术总结无菌技术是医疗工作的重要组成部分，是医疗质量及安全的基础之一，是医院感染管理的核心工作。
我院及时的组织了这次无菌技术培训具有重大意义。
全院职工在培训中积极认真对待，对无菌技术的概念、操作原则、细节操作规范、操作注意事项、无菌物品保管原则、自我防护手卫生、预防职业暴露、等等知识认真学习，使自己对无菌技术有了全面认识和提高。
这将对医疗质量有质的提高，从而减少医源感染的几率，降低医院感染的风险，促进医院安全建设，同时保护我们医务工作者安全也起到巨大作用。
总的来说这次培训，培训者准备充分培训耐心认真，受训者积极谦虚受教，达到预期培训效果。
篇二：总结-无菌操作基本技术无菌操作基本技术1.在开始实验前要制定好实验计划和操作程序。
有关数据的计算要事先做好。
根据实验要求，准备各种所需器材和物品、清点无误后将其放于操作场所(培养室、超净台)内，然后开始消毒，以避免往返拿取造成污染机率增大。
超净工作台台面每次实验前用75％酒精擦拭，按照顶板→侧壁→器械→挡风玻璃→操作台面的顺序对超净台内部进行彻底的消毒。
然后开启超净台和无菌培养室的紫外灯照射30min，关闭紫外，启动风机运转15分钟后，方可开始实验操作。
在工作台面消毒时切勿将培养细胞和培养用液同时照射紫外线。
2.无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流流通。
实验用品以75 % 酒精擦拭后放入无菌操作台内。
实验操作应在台面中央的无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。
3.小心取用无菌实验物品，避免造成污染。
勿碰触吸管尖端或容器瓶口，亦不要在开口容器的正上方操作。
容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45°角取用。
4.操作人员应注意自身安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。
对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台。
操作过程中，应避免引起气溶胶的产生，小心毒性药品，例如DMSO，并避免尖锐针头的伤害等。
生物实验心得体会(通用15篇)
生物实验心得体会(通用15篇)生物实验心得体会(通用15篇)生物实验心得体会14月8日市里举办生物教师生物实验培训，这是一个非常难得的机会。
因为自己不是专业生物教师，不论是生物知识，还是实验技能都懂得不多。
这几年的生物教学勉强还能应付，当听说19年要考生物实验，真的感觉压力巨大。
还好有了这次机会我一定把握好机会。
那天我们学习了四节课。
分别是：用显微镜观察洋葱鳞片叶内表皮细胞、用显微镜观察人的口腔上皮细胞、观察人血的永久涂片、观察酵母菌以及观察菜豆、玉米的`结构共六个实验。
老师先讲解，我们随后操作。
在显微镜对光、对焦中，我遇到了困难，尝试几次都没有成功。
后来，在老师的帮助下，终于对好了。
这是一个良好的开端，在以后的操作中，比较很顺利。
到了观察口腔上皮细胞时，又出现了问题：视野中出现了大的条形结构，没有看到细胞。
在老师的操作后，才知道是刮取上皮细胞时，出现了杂质，而且镜头有些不干净，所以出现了失误。
经过培训，心里总算有了一点安慰，希望这样的机会多些，更好地完成教学和中考任务生物实验心得体会2初中生物实验包括观察能力、实验操作能力、分析实验现象能力、实验设计能力、综合应用能力。
因此，组织好实验教学有着相当重要的作用。
我在实验教学中的一些反思如下：1．明确观察目的和任务观察是人对客观事物的一种生动的感性认识形式，它往往通过多种感觉器官的联合活动，并在思维的参与下进行的。
在观察时，必须对观察者预先提出一定的目的或任务，拟定一定的计划，按计划仔细地观察，提出问题，寻求某种答案，这样才能保证注意力集中在所要观察的事物中。
例如：观察洋葱表皮细胞的实验，实验目的是要求学生在观察中认识细胞壁、细胞质、细胞核和液泡。
观察前教师应强调细胞膜紧贴在细胞壁内壁上不易辨认，有些细胞核也不太清楚，要调好光圈，光线强弱要控制适当。
使学生按照老师提出的目的要求去观察。
观察的结果好坏，可由教师检查，检查方法可采取教师提问学生回答，也可让学生绘制观察的标本图示，这样一定能达到观察的目的。
生物科技技术发展总结
生物科技技术发展总结内容总结简要作为一名在生物科技领域工作多年的员工，我有幸见证了这个行业的飞速发展。
本文将结合我的工作经验，对生物科技技术的发展进行总结。
在我的工作环境中，我所在的部门主要负责生物科技产品的研发和生产。
我们通过对基因编辑、细胞治疗、生物制药等领域的深入研究，不断推动着生物科技技术的发展。
案例研究是我们工作中的重要组成部分。
以基因编辑技术为例，我们通过研究CRISPR-Cas9系统，成功地对植物和动物的基因进行了精确编辑。
这一技术的应用前景广阔，不仅能够提高作物的产量和抗病性，还能为医学领域带来革命性的改变。
在数据分析方面，我们利用生物信息学工具对大量基因序列进行分析，揭示了生物体内部的调控机制。
这些发现为疾病诊断、治疗和预防了新的思路和方法。
实施策略是我们工作中的关键环节。
以生物制药为例，我们通过优化生产流程和提高产品质量，成功地将生物制药推向市场。
这些药物在治疗疾病方面展现出显著的疗效，为患者带来了新的希望。
在工作中，我亲身参与了许多令人激动的项目。
其中一个让我印象深刻的是关于细胞治疗的研发。
我们通过对免疫细胞的培养和修饰，成功地为患者了个性化治疗方案。
看到患者病情得到缓解，深感生物科技技术的巨大潜力。
生物科技技术的发展不仅改变了我的工作环境，还让我对人类的未来充满了希望。
我相信，随着生物科技技术的不断进步，我们将能够更好地解决全球性的健康和环境问题。
生物科技技术的发展取得了令人瞩目的成果。
通过案例研究、数据分析和实施策略，我们不断推动着这一领域的前沿。
作为亲历者，深感荣幸和自豪。
未来，继续致力于生物科技技术的发展，为人类创造更美好的未来。
以下是本次总结的详细内容一、工作基本情况在我的生物科技领域工作中，我主要负责基因编辑技术的研究与开发。
参与了细胞治疗、生物制药等项目的实施。
在工作中，始终坚持以科技创新为导向，努力提高工作效率和质量。
二、工作成绩和做法通过不懈努力，我在基因编辑技术方面取得了显著的成果。
细胞培养的心得体会
篇一：细胞培养心得1、寄运细胞或者接收细胞，都要做好充足的准备;如果是让其它实验室寄运细胞，或者寄给别人细胞，细胞应该如何处理是主要考虑的问题。
假设细胞在途中要经过48小时，那么可以待细胞长到50%的密度时处理细胞，即将细胞培养瓶内加满培养液，拧紧瓶盖，用封口膜封紧瓶口；然后将培养瓶放进泡沫盒，用纸或泡沫将盒内空间填满，使培养瓶不能随意移动。
因此要确定准备好以下物品：透气的细胞培养瓶；封口膜；足量的培养液；放细胞培养瓶的泡沫盒及填充物；除了细胞的处理，还要注意以下几点：1）提前跟快递公司人员联系，要上门取货（大多快递公司都可以，顺丰确实算是好些；近来觉得韵达速度也很快）2）时间安排（细胞处理尽量安排在下午，因为快递公司一般来说都是晚上统一发货，要是早晨处理细胞交给快递公司，细胞还没上路呢，就已经在培养箱外待了一天）；1）细胞的铺板：以96孔板为例，做细胞实验的同学看文献可能注意到，有较多的文献中提到细胞接种数量是5000个/孔；最初我也是按照这个数量来铺板的，实际上这个接种数量偏高；假设给药时间是48小时，发现空白对照孔中会有细胞无法贴壁，因为太满了，被挤出来了。
如此，则会因为接种密度原因，而不能准确反映细胞的正常生长情况及给药组作用情况。
2）给药：对于水溶性药物就不讲了，只讲难溶于水，而且虽然溶于dmso，但向dmso加水后也会析出的药物；有人是这样做的，在ep管中用dmso溶解药物作为母液，然后用细胞培养液将母液梯度稀释成各个浓度，药物有析出，成结晶了，可能都沉了，严重不均一了，这浓度就没法衡量了；用培养液，在ep管中用dmso梯度稀释药物成各个梯度浓度，然后直接加到含培养液的96孔中，假设96孔中培养液为197微升，那么加药的体积只能是3微升或者小于3微升。
我觉得可以这么做，操作会更麻烦，难度上稍大了点，但不是不能做。
有些药物常温下难溶于水，可能加热溶解性会很好，由于专业涉及面不同，很多人会忽略这方面。
细胞培养方法
细胞一细胞培养（一）原代培养○1胰蛋白酶消化法1.将组织块用PBS清洗3遍，去除表面血污，移入新的培养皿中用弯头剪剪至1mm3（糊状）后用PBS清洗三遍（洗至PBS澄清透明）2.吸去PBS液，将组织块移入15ml离心管中，加入组织块两倍体积预热至37℃的0.25%含EDTA的胰蛋白酶，在37℃水浴中作用20分钟，每隔五分钟摇晃一下3.加入两倍体积的含血清的培养基终止消化，将消化后的组织块用细胞筛过滤，取过滤液于离心管中，1000r/min离心5分钟4.离心后吸去上清液，加入5ml含10%胎牛血清和1%双抗的培养基，轻轻吹打混匀，细胞计数，调至约5×105个/ml，每个培养皿（6㎝培养皿）加入5ml含细胞的培养基，上下左右移动混匀5.放入37℃，5%CO2的培养箱中培养6.24h后，观察细胞贴壁情况，更换培养基，继续培养，2-3天更换一次培养基7.代细胞融合率达80%-90%时进行传代培养○2组织块法1. 将组织块用PBS清洗3遍，去除表面血污，移入新的培养皿中用弯头剪剪至1mm3（糊状）后用PBS清洗三遍（洗至PBS澄清透明）2.将组织块转移至培养皿中，每个组织块保持一定间距3.向培养皿中缓慢加入培养基至刚好没过组织块，小心放入37℃，5%CO2的培养箱中培养4.24h后，观察贴壁情况，并补加新培养基仪器：6㎝培养皿、弯头剪、15ml离心管、50ml离心管、5ml移液枪、1ml移液枪、5ml枪头、1ml枪头、废液瓶、酒精棉球、离心机、水浴锅、倒置显微镜、细胞培养箱试剂：PBS缓冲液、0.25%EDTA-胰蛋白酶、DMEM （高糖）培养基、胎牛血清、青霉素-链霉素混合液（双抗）（二）传代培养○1贴壁细胞1.先将含10%血清和1%双抗的培养基、0.25%EDTA-胰蛋白酶在37℃水浴锅中预热20min2.观察细胞融合率是否达到80%-90%3.将所需用品放入紫外照射30min的超净工作台中，物品放入前需用75%酒精擦拭或放入后立即用酒精擦拭4.吸去培养基，加入PBS冲洗两遍，洗去残留培养基，加入胰蛋白酶至刚好覆盖培养皿底 （6㎝培养皿约1ml），放入培养箱中消化0.5-2分钟5.加入两倍体积的含血清的培养基终止消化，轻轻吹打混匀，吸入离心管中，1000r/min离心5min6.离心后，小心吸去上清夜，加入5ml培养基轻轻吹打混匀，血细胞计数，调至5×105个/ml7.每个6㎝培养皿加入5ml含细胞的培养基，放入37℃，5%CO2培养箱中继续培养○2悬浮细胞1.将培养皿中的培养基吸至离心管中，1000r/min离心5分钟2.离心后吸去上清液，加入5ml培养基，轻轻吹打混匀，血细胞计数，调至5×105个/ml3.每个6㎝培养皿加入5ml含细胞的培养基，放入37℃，5%CO2培养箱中继续培养仪器：6㎝培养皿、15ml离心管、50ml离心管、5ml移液枪、1ml移液枪、5ml枪头、1ml枪头、废液瓶、酒精棉球、离心机、水浴锅、倒置显微镜、细胞培养箱试剂：PBS缓冲液、0.25%EDTA-胰蛋白酶、DMEM （高糖）培养基、胎牛血清、青霉素-链霉素混合液（双抗）（三）细胞冻存○1贴壁细胞冻存1.配置细胞冻存液2.吸去培养基，加入0.25%EDTA-胰蛋白酶刚好覆盖培养皿底，放入培养箱中消化0.5-2min3.消化后的细胞，转移至离心管中，1000r/min离心5min4．离心后，加入细胞冻存液与细胞混匀，细胞计数，调至5×106个/ml5.每个冻存管加入1.5ml，将冻存管放入程序性降温盒，-80℃过夜，转移至液氮中；若无程序性降温盒，则将冻存细胞依次放置4℃1h，-20℃2h，-80℃过夜，再转移至液氮中○2悬浮细胞冻存1.配置细胞冻存液2.将细胞转移至离心管中，1000r/min离心5min3．离心后，加入细胞冻存液与细胞混匀，细胞计数，调至5×106个/ml4.每个冻存管加入1.5ml，将冻存管放入程序性降温盒，-80℃过夜，转移至液氮中；若无程序性降温盒，则将冻存细胞依次放置4℃1h，-20℃2h，-80℃过夜，再转移至液氮中仪器：15ml离心管、50ml离心管、5ml移液枪、1ml移液枪、5ml枪头、1ml枪头、废液瓶、酒精棉球、离心机、倒置显微镜、程序性降温盒、液氮罐试剂：PBS缓冲液、0.25%EDTA-胰蛋白酶、DMEM（高糖）培养基、胎牛血清、二甲基亚砜（四）细胞复苏1.将冻存的细胞从液氮中小心取出，快速在37℃水浴锅中摇晃解冻，一般在1min内完成，若离水浴锅较远可将细胞放置在干冰上2.将冻存管内液体转移至离心管中，1000r/min离心5min3.去除上清液，加入培养基，轻轻吹打混匀，细胞计数，调至5×105个/ml4.每个6㎝培养皿加入5ml复苏后的细胞，放入37℃，5%CO2培养箱中培养仪器：6㎝培养皿、15ml离心管、50ml离心管、5ml移液枪、1ml移液枪、5ml枪头、1ml枪头、废液瓶、酒精棉球、离心机、水浴锅、倒置显微镜、细胞培养箱试剂：PBS缓冲液、0.25%EDTA-胰蛋白酶、DMEM （高糖）培养基、胎牛血清、青霉素-链霉素混合液（双抗）。
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多种细胞的培养方法HePG2细胞和L-02细胞的传代：HePG2细胞属人肝肿瘤的恒生细胞株，L-02细胞则是人胎肝细胞株，二者所使用的培养基可以是一样的，即最常见的DMEM。
一干使用低糖的。
细胞长满培养瓶时既要传代。
使用胰酶消化即可。
用D-Hank's液配制成0.25%的胰酶。
使用前37度预热，细胞经PBS清洗两遍后，每个中号培养瓶加0.7ml的胰酶，胰酶的量可根据自己培养瓶的大小而定，原则就是能够盖满瓶底。
加入胰酶以后，为使酶的活性最大，将培养瓶盖拧紧后放回培养箱中，3分钟左右即用含血清的培养基终止消化。
如果在室温情况下消化，时间相应加长，可以在显微镜下观察，当细胞界限已十分清楚，即已分离为单个细胞，且有少量细胞漂起，则要终止消化了。
16HBE细胞株的传代方法：镜下观察细胞生长融合达70-80%，准备传代。
常规开紫外照射超净台20分钟，同时把含10%胎牛血清的MEM培养基、0。
25%胰酶、PBS放置37度培养箱中孵育。
20分钟后开始传代。
先弃掉旧培养液，加PBS洗一次，然后加0。
25%胰酶2ml消化（指25乘25cm大小的培养瓶）细胞，镜下观察细胞，细胞突起回缩，细胞变圆，然后将培养瓶放置37度二氧化碳培养箱中孵育3分钟左右（当然时间是随机的，比如：新配的胰酶作用时间短一些，配制时间长的胰酶作用时间会长一些，当然要不断地镜下观察），待细胞大部分消化下来（大部分细胞呈流沙状脱离瓶壁），加4ml含10%胎牛血清的MEM培养基终止消化。
反复吹打瓶壁上残留的细胞，并将已消化下来的细胞吹打均匀，然后吸入离心管中1000转离心1分钟，然后弃掉上清，用手指将离心管中的细胞弹打均匀，加新培养基，吹打均匀，分至3个新的培养瓶中，补足培养液。
将培养瓶平放，小心移入37度二氧化碳培养箱中培养过夜。
次日观察。
胃癌细胞AGS和SGC-7901的培养：细胞传代时不能长的太满,70%-80%就可以传了.实验前先把紫外灯打开照30分钟,然后再把鼓风机开10分钟,同时把培养液和胰酶放入37度水浴箱中,千万记住不要盖上水浴箱的盖子.传代时,我一般把培养瓶口过一下火,就直接把培养液到去,再用0.25%的胰酶(不含EDTA)消化.等细胞变圆,细胞间空隙加大就直接把培养液到去,不用离心,然后再吹打,虽说要轻柔,但很难吹打成单细胞悬液,所以稍用力也没有关系.虽然操作不规范,但节省时间,细胞也没有被污染.AAV-293细胞的传代:AAV-293细胞较喜欢成团生长,比较娇嫩,怕冷,传代时不要一次从二氧化碳培养箱拿出很多瓶,一次只要拿2-3瓶出来传就可以了,否则细胞很容易死掉.细胞在50-60%传代,细胞生长状态最好.用D-Hank's液配制成0.25%的胰酶消化半分钟左右,弃去胰酶.观察培养瓶是否有针孔样缝隙,如有就可以加入培养液吹打细胞.消化过久,对细胞损害很大,而且成团很难吹打成单个细胞.然后加入含有10%小牛血清的DMEM.轻轻放入二氧化碳培养箱中培养.肺癌细胞（人类），其中绝大部分都是贴壁细胞，具体如：（１）Ａ５４９（肺腺癌）（２）ＮＣＩＨ４４６（小肺细胞癌）（３）８０１（非小肺细胞癌）（４）ＮＣＩＨ４６０（大细胞肺癌）在消化传代过程中，步骤基本一致：吸去旧的培养液－＞用Ｈａｎｋｓ＇（１Ｘ）清洗一两次－＞加入一定量的消化液（Ｔｒｐｓｉｎ－ＥＤＴＡ）－＞置显微镜下观察，待细胞大部分变圆时，回到超静台－＞吸去消化液－＞加入一定量的新培养液－＞反复吹打细胞－＞再置显微镜下观察，直到细胞全部悬浮起来－＞吸出一部分加入新的培养瓶中－＞最后再补充加入一定量新的培养液（ＲＰＭＩ１６４０ｗｉｔｈ１０％ＦＢＳ）．注意：吹细胞时尽量多吹边角儿，此处细胞生长的多．另外吸出细胞前要混匀．另注：消化液的配制方法：Trpsin-EDTA(1X)--0.25% Trpsin with EDTA-4Na prepared with 2.5g Trpsin(1:250) and 0.38g EDTA-4Na/L in HBSS小鼠前脂肪细胞（3T3-L1）：吸弃原培养液-->PBS洗一两次-->加入400ul0.125％胰酶（原代最好加0.05% EDTA）消化-->转动培养盘，保证整个盘面都被trypsin液润过->吸弃trypsin后37度消化3min-->以完全培液（DMEM+10% FCS＋1/1000Biotin+1/1000泛酸钙-->吸打（枪的吸力调至最小），1：10接种，前后左右摇晃培养盘，细胞均匀后放入培养箱继续培养（10%CO2 ,37度）MDBK（牛肾细胞）类型：贴壁细胞来源：购自武汉病毒所细胞保存中心由四川农业大学动物生物技术中心繁殖保存传代步骤：弃去旧的生长液-->用无钙镁水(CMF)冲洗贴壁细胞数次(视细胞瓶的大小,3--5次)-->剩少许CMF,滴入ATV 2--3滴-->摇匀细胞瓶中的液体,使ATV均匀的分布到瓶里的没个地方-->放入37度二氧化碳温箱中3--5min消化-->弃去ATV,加入生长液,拍打吸吹下细胞-->镜下观察-->分瓶-->作好记号,放入37度二氧化碳温箱生长细胞特点:该细胞生长力强,而且快速一般24h就可以张到80%,48h不传就会变的很老,所以该细胞传时要勤点;我感觉MDBK还是很好传的,比以前我传的ST、Vero细胞等要好传一些，且不那么容易死亡，所以是我的一个比较好的选择！该细胞适合接种疱疹病毒（如：伪狂犬病毒）！BHK-21：弃除旧的培养液后---用缓冲液冲洗一遍----用0.22%的胰酶消化液消化约两分钟左右可以看到细胞像沙子一样脱落-------赶紧倒掉胰酶加入含10%的牛血清培养液终止消化。
但目前国内能找到的BHK-21细胞大部分都有支原体感染，如果是好的BHK-21细胞能做到1比20的分种率。
补充一点关于BHK-21的培养,先用少量胰酶冲洗一下,弃去,再用胰酶消化1min左右,效果会好一些皮肤成纤维细胞和THP-1细胞：皮肤成纤维细胞是贴壁生长的。
THP-1细胞是悬浮的。
由于我们实验室养细胞的时间也不是很长，所以也只能说说自己平时的操作了。
先说皮肤成纤维细胞。
当细胞铺满瓶底，也就是细胞与细胞之间没有间隙时，就可以传代了。
一般十天左右传一代。
先吸弃旧培养液，用D-Hanks液洗两遍，再加入0.25%的胰酶，加入的量以能覆盖瓶底为准。
加入后轻轻摇晃培养瓶使液体覆盖瓶底，然后静置两分钟左右，最好是能在显微镜下观察，当细胞之间出现间隙且有一部分细胞呈现圆形后即可。
吸去胰酶，加入含血清培养液，摇晃瓶子使培养液覆盖瓶底就行了。
因为血清可以终止胰酶的消化。
然后吹打瓶底各处使细胞脱落。
再分瓶补加培养液。
THP-1细胞的传代就比较简单了。
可以有两种传代方法。
如果镜下观察细胞状态很好，没有其它杂质即细胞裂解物之类的，就可以采用直接传代法。
传代前将细胞培养瓶直立一个半小时使细胞自然下沉。
吸弃上层少量培养液约三分之一，将余下的培养液分成两瓶，再分别补加培养液即可。
如果镜下观察觉得培养液中有杂质即可采用离心传代法。
如果细胞数目较多可以低速离心约600转离心六分钟，细胞可以沉淀下来而且可以去除细胞碎片之类的杂质。
如果觉得细胞数目不多比较宝贵，那就提高转速可以1000转离心六分钟，这样细胞损失很少但可能也有些杂质会一起沉淀下来。
离心后去除上清液，加入新的培养液吹打浑匀即可分瓶传代了。
目前的方法就这些，希望对新手有所帮助BHK－21的经验：吸出培养基，吸得越干净越好，直接加入1ml胰酶（T－25瓶），放到37度培养箱消化。
是否需要用hanks 或pbs之类得缓冲洗细胞并不绝对必要，我都没有洗，感觉应该洗一下更好，但也更麻烦并增加了污染得可能性。
如果细胞长得太老，可以先加入1ml 胰酶在细胞表面浸润一下就吸出来，然后再加入1ml胰酶消化。
胰酶在使用前最好预热到37度。
由于胰酶平时保存在4度，反复预热对胰酶的活性不好，我的经验是将胰酶进行分装，尽可能避免胰酶反复冷却加热。
消化时间的选择要根据实际情况决定，BHK －21还是比较好消化的，5－15min应该足够了，消化时间太长对细胞不利。
可以在显微镜下观察消化情况，必要时可以拍打培养瓶帮助细胞分散，消化结束后直接加入培养基即可，胰酶会被血亲灭活。
一般在T－25瓶中留7－8ml培养基培养。
在90％单层细胞时，1：4传代2天后可长满。
如果使用的培养基偏碱最好先放在CO2培养箱中平衡。
细胞生长中注意观察培养基颜色（加入酚红作指示剂），如出现偏黄表明细胞代谢产酸较多，此时如细胞未长满应更换部分或全部培养基以确保细胞状态不受影响。
几种乳腺癌细胞的培养：我养的细胞都是乳腺癌细胞，就是以下几种，1、MCF-7：是一种很好养的人乳腺癌细胞，培养基用DMEM或RPMI1640均可，10－15％的小牛血清就能长得很好。
一般两到三天传一代。
传代也很常规。
吸出培养基，加入0.25％的胰酶1ml，轻轻晃动培养瓶，使胰酶流遍瓶壁，以去除残余的培养基。
再加入2ml胰酶（25ml培养瓶）静置消化2－5min，待细胞缩起变圆，将胰酶吸出加入培养基3ml吹打成单细胞悬液分瓶即可。
我一般都不用缓冲液冲洗，而直接用胰酶冲洗一下以去除剩余血清的作用，感觉效果还不错。
因为MCF-7消化较快，一般不放到培养箱中消化，以免消化太过。
需要注意的是MCF-7生长较快如不及时传代可出现整瓶细胞浮起，一般都来不及抢救。
2、T47D：也是一种人乳腺癌细胞，培养基用DMEM＋10－15％的小牛血清，培养方法与MCF-7差不多，但这种细胞传代时间长了会极难养。
我曾养过一株新从美国购置的，两三天传一代，长得很旺。
后又从国内购买一株时间较长的，要七天传一代，而且很娇气。
3、MA891 鼠乳腺癌细胞：这种细胞比较特殊的是很难消化，容易消化成一团一团的，如果胰酶的量比常用的多三分之一充分预热并放入培养箱中消化就会好的多。
传到15－20代细胞就易长成团，从此生长缓慢，形态改变，需要复苏重养。
95-D细胞的传代:首先要把0.25%的胰酶和培养液在37度水浴20~30分钟(预热). 从培养箱中拿出培养的细胞瓶(一般我是让它长到90%几再传代的),吸去培养液,可用PBS洗两遍.也可不洗.加入适量0.25%胰酶消化(试瓶子的大小而定,如250毫升的瓶子加1毫升就行了),让它都浸湿细胞就可以吸去了.等个三十秒就在手上拍打,不要太用劲.就可以看到细胞脱落了,再加入3毫升左右的培养液吹打(这时加的培养液不要太多,否则难吹打成单个细胞!),制成细胞悬液,再传至消毒的培养瓶中(我一般是1传三,三天后又可以传代了)再加入适量培养液(如250毫升瓶中加入12~14毫升).再放置在37度5%CO2培养箱中培养.在操作过程中要有酒精灯的,瓶口,镊子等可在火上过一下.其他的地方可用75%的酒精消毒.无菌观念要强!胃癌细胞MKN28和AGS：80%-90%confluency,吸弃原培养液-->PBS洗一次-->加入400ul0.125％胰酶（10cm）-->转动培养盘，保证整个盘面都被trypsin液润过->37度消化5-10min-->以完全培液（RPMI1640+10% FBS-->吸打,1：5接种，前后左右摇晃培养盘，细胞均匀后放入培养箱培养（5%CO2 ,37度，24h一个周期L929细胞：是一种贴壁细胞，贴壁后繁殖迅速，约3－4天传代。