实验总结细胞培养方法
细胞培养毕业实习报告总结
毕业实习报告总结：细胞培养首先，我要感谢我的导师和实验室的同事们，他们在我的实习期间给予了我无私的帮助和指导。
通过这次实习，我对细胞培养这一领域有了更深入的了解，也积累了宝贵的实践经验。
细胞培养是生物医学和生物技术领域中重要的实验技术，它通过模拟细胞在体内的生长环境，使细胞在体外继续生长和繁殖。
在实习期间，我学习了细胞培养的基本原理和操作技术，包括细胞的复苏、传代、胰蛋白酶消化、细胞计数、铺板等步骤。
我也了解了细胞培养中常用的仪器设备，如二氧化碳培养箱、显微镜、细胞计数仪等。
在实习过程中，我不仅掌握了细胞培养的基本技能，还参与了一些具体的实验项目。
我参与了一项关于细胞凋亡的研究，通过细胞培养技术，我成功地培养了所需细胞，并进行了凋亡实验。
通过观察细胞形态的变化和流式细胞术的分析，我得出了实验结果，并协助导师进行了数据分析和论文撰写。
这个过程中，我不仅学习了实验设计和数据分析的方法，还提高了自己的实验操作能力。
在实习期间，我也遇到了一些挑战和困难。
例如，细胞培养过程中细胞的生长速度较慢，有时需要耐心等待。
另外，细胞的复苏和传代过程中，也有一些技巧需要掌握。
通过请教导师和同事，我逐渐克服了这些困难，并取得了较好的实验结果。
通过这次实习，我不仅学到了专业知识和技能，还锻炼了自己的团队合作和沟通能力。
在实验室中，我与同事们共同合作，互相学习和帮助。
我们也定期进行实验室会议，分享实验进展和心得体会，这让我感受到了团队合作的重要性。
总之，这次细胞培养实习是一次非常宝贵的学习经历。
我不仅掌握了细胞培养的基本技能，还参与了一些具体的实验项目，并取得了较好的研究成果。
同时，我也学会了团队合作和沟通的能力。
我相信这次实习对我未来的学术研究和职业发展将产生积极的影响。
细胞传代培养实验报告
一、实验目的1. 掌握细胞传代培养的基本操作流程。
2. 熟悉细胞传代培养过程中的注意事项。
3. 了解细胞传代培养在生物科学研究中的应用。
二、实验原理细胞传代培养是指将已经生长到一定阶段的细胞，通过特定的方法进行分离、洗涤、消化、计数和稀释等步骤，将细胞转移到新的培养容器中继续培养的过程。
细胞传代培养是维持细胞生长、扩大细胞数量和保持细胞特性的重要手段。
三、实验材料1. 细胞：HeLa细胞2. 培养基：DMEM/F12培养基（含10%胎牛血清）3. 试剂：0.25%胰蛋白酶、10%FBS、PBS缓冲液、酒精4. 仪器：超净工作台、倒置显微镜、细胞培养箱、离心机、移液枪、培养瓶/皿、吸管等四、实验步骤1. 准备阶段（1）将HeLa细胞从培养瓶中取出，用PBS缓冲液轻轻洗涤一次，去除残留的培养基。
（2）准备胰蛋白酶工作液，将其置于37℃水浴中预热。
（3）准备含有10%FBS的培养基，将其置于37℃水浴中预热。
2. 分离细胞（1）用移液枪吸取适量胰蛋白酶工作液，滴加到细胞培养皿中的细胞层上。
（2）将培养皿置于37℃、5%CO2的培养箱中消化2-3分钟。
（3）倒置显微镜下观察细胞，当大部分细胞变圆且亮时，加入等体积含有10%FBS的培养基终止消化。
（4）用移液枪轻轻吹打细胞，使其成为细胞悬液。
3. 计数（1）取适量细胞悬液，使用细胞计数仪或显微镜配合琼脂滴定法计数。
（2）根据计数结果，调整细胞密度至所需的浓度，一般为每毫升105-106个细胞。
4. 传代（1）向含有预热的培养基的离心管中加入细胞悬液，并轻轻混匀。
（2）离心管离心，在1500 rpm速度下离心3-5分钟，以沉淀细胞。
（3）弃去上清液，保留沉淀的细胞。
（4）加入适量的新鲜培养基，将细胞重新悬浮。
（5）将细胞悬液转移到新的培养瓶中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
五、实验结果1. 成功完成细胞传代培养，观察到细胞在新的培养瓶中继续生长。
2. 细胞生长状态良好，细胞密度符合预期。
2018-细胞培养工作总结-范文word版 (13页)
本文部分内容来自网络整理，本司不为其真实性负责，如有异议或侵权请及时联系，本司将立即删除！== 本文为word格式，下载后可方便编辑和修改！ ==细胞培养工作总结篇一：细胞培养技术个人总结总结---细胞培养一．基本理论概论原代培养: 也叫初代培养，指直接从体内取出的细胞、组织和器官进行的第一次的培养。
传代培养：将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶即称为传代或传代培养。
细胞系：原代培养物成功传代后，则称之为细胞系。
(如细胞系的生存期有限，则称之为有限细胞系；已获无限繁殖能力能持续生存的细胞系，称连续细胞系或无限细胞系。
)细胞株：通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物称为细胞株。
培养类型：细胞培养，组织培养，器官培养。
细胞生长的方式：贴附生长，悬浮生长培养细胞的形态（形态不一定，环境改变形态可能改变）：成纤维性型细胞，上皮型细胞（单层膜样生长），游走性细胞（游散生长，常有伪足跟突起）二．培养过程及要点（切记无菌操作）（一）工作环境的处理1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 % 酒精擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。
每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。
实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % 酒精擦拭无菌操作抬面。
操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。
2. 实验用品以70 %酒精擦拭后才带入无菌操作台内。
实验操作应在台面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。
无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。
3. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。
勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。
容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45° 角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
细胞培养实习报告
一、实习目的细胞培养是生命科学领域中一个重要的研究方法，通过对细胞进行体外培养，可以研究细胞生长、分化、遗传等方面的特性。
本次实习旨在通过细胞培养实验，使学生掌握细胞培养的基本原理、操作技术和实验技能，提高学生的动手能力和实验思维。
二、实习时间2022年10月1日至2022年10月10日三、实习地点XX大学生命科学学院细胞培养实验室四、实习内容1. 细胞培养基本原理（1）细胞培养的定义：细胞培养是指将细胞从生物体内取出，在体外的人工条件下，提供适宜的生长环境，使其生长、繁殖的过程。
（2）细胞培养的意义：细胞培养是生命科学研究中的一种重要手段，可以用于研究细胞生物学、遗传学、分子生物学等领域的问题。
2. 细胞培养的基本操作（1）无菌操作：细胞培养要求在无菌条件下进行，以防止细菌、真菌等微生物污染细胞。
（2）细胞传代：将培养的细胞分装到新的培养瓶中，使细胞继续生长、繁殖。
（3）细胞冻存：将细胞在低温下保存，以延长细胞的生命周期。
（4）细胞复苏：将冻存的细胞在适宜条件下解冻，使其恢复活性。
3. 细胞培养实验（1）实验目的：通过细胞培养实验，观察细胞的生长、分化、遗传等方面的特性。
（2）实验材料：细胞株、培养液、培养基、无菌器械等。
（3）实验步骤：①细胞复苏：将冻存的细胞在37℃水浴中解冻，用培养液洗涤2次，然后加入适量的培养液，使细胞浓度为1×10^6个/mL。
②接种：将细胞悬液接种到培养瓶中，置于培养箱中培养。
③观察：每天观察细胞生长情况，记录细胞数量、形态等。
④传代：当细胞生长到一定密度时，进行细胞传代。
⑤冻存：将部分细胞冻存，以备后续实验使用。
五、实习收获1. 掌握了细胞培养的基本原理和操作技术。
2. 学会了无菌操作，提高了实验操作的规范性和安全性。
3. 增强了实验思维和动手能力，为今后从事生命科学研究打下了基础。
4. 培养了团队合作精神，学会了与同学、老师沟通交流。
六、实习总结本次细胞培养实习让我受益匪浅，不仅提高了我的实验技能，还让我对细胞生物学有了更深入的了解。
细胞实验报告反思总结(3篇)
第1篇一、前言细胞实验作为生物学研究的重要手段，在揭示生命现象、探索疾病机制、开发新型药物等方面发挥着至关重要的作用。
本次实验报告针对我所参与的细胞实验进行反思总结，旨在提高实验技能、优化实验设计、提升实验结果的可信度。
二、实验目的本次实验旨在：1. 掌握细胞培养的基本操作技能，包括细胞传代、细胞接种、细胞计数等。
2. 熟悉细胞实验所需的器材和试剂，了解其作用和用途。
3. 分析实验结果，探讨实验现象背后的生物学机制。
三、实验过程1. 细胞传代：在实验过程中，我们严格按照细胞传代操作规程进行，确保细胞在适宜的培养条件下生长。
通过观察细胞生长状态、调整传代比例，保证了细胞的活力和数量。
2. 细胞接种：在细胞接种过程中，我们遵循无菌操作原则，确保细胞在无菌条件下生长。
同时，根据实验需求调整接种密度，为后续实验提供充足细胞资源。
3. 细胞计数：在细胞计数实验中，我们熟练运用血球计数板进行细胞计数，并对计数结果进行统计分析。
通过对比不同处理组的细胞数量，分析实验现象背后的生物学机制。
4. 实验数据分析：在实验数据分析过程中，我们运用统计学方法对实验数据进行分析，探讨实验现象背后的生物学机制。
同时，对实验结果进行合理的解释和推断。
四、实验反思1. 实验操作方面：（1）在细胞传代过程中，我们应严格按照操作规程进行，避免细胞污染和传代失败。
（2）在细胞接种过程中，应注意无菌操作，防止细胞污染。
（3）在细胞计数过程中，应保证计数准确，避免人为误差。
2. 实验设计方面：（1）在实验设计过程中，应充分考虑实验目的和实验条件，确保实验结果具有可重复性和可靠性。
（2）在实验过程中，应密切关注实验现象，及时调整实验参数，优化实验设计。
（3）在实验结果分析过程中，应运用多种统计学方法，提高实验结果的可信度。
3. 实验结果分析方面：（1）在实验结果分析过程中，应充分挖掘实验数据，探讨实验现象背后的生物学机制。
（2）在实验结果解释过程中，应结合相关文献，对实验结果进行合理的解释和推断。
细胞生物学实验技巧总结
细胞生物学实验技巧总结细胞生物学是一门研究细胞结构、功能和生命过程的学科，实验是探索和验证细胞生物学理论的重要手段。
为了更好地进行细胞生物学实验，我们需要掌握一些实验技巧和方法。
本文将总结一些常用的细胞生物学实验技巧，帮助读者更好地开展相关实验。
一、细胞培养技巧1. 细胞选取与分离：在细胞培养实验中，正确选择和分离细胞是非常重要的。
首先，根据实验的要求选择适当的细胞系或原代细胞。
其次，使用无菌技术将细胞转移到培养皿中，并确保培养容器的无菌状态。
2. 培养基的配制：细胞培养基的配制要根据细胞类型和实验要求进行合理的选择。
通常包括基础培养基和补充物。
在配制过程中，要注意严格按照要求添加培养基成分，保证培养基的质量。
3. 细胞培养条件的控制：细胞的生长和繁殖需要特定的环境条件。
在培养细胞的过程中，要注意控制温度、湿度和二氧化碳浓度等参数。
此外，定期更换培养基，并检查细胞的形态和活性。
二、细胞染色技巧1. 原位染色：原位染色是观察细胞形态和分子定位的重要方法。
其中，荧光原位杂交技术（FISH）可以用来检测基因的表达和定位。
使用特定的探针与目标DNA高度特异地结合，然后使用荧光探针显色，利用荧光显微镜观察染色体和核酸分子的位置。
2. 免疫染色：免疫染色是通过特异性抗体与目标分子结合，然后使用荧光标记的二抗进行检测，用于检测蛋白质的定位和表达。
在进行免疫染色时，需要注意选择适当的抗体和染色方法，并进行有效的洗涤步骤，以避免非特异性染色。
三、细胞分离和提取技巧1. 胞内蛋白提取：细胞内的蛋白质提取是许多分子生物学研究的基础。
为了获得高质量的胞内蛋白样品，可以使用细胞裂解缓冲液使细胞破碎，并添加蛋白酶抑制剂来保护蛋白质免受降解。
此外，离心操作可以用来去除细胞碎片和细胞器。
2. DNA/RNA的提取与纯化：DNA/RNA分离是研究基因组和转录组的重要步骤。
对于DNA的提取，可以使用DNA提取试剂盒，按照说明书进行提取和纯化。
细胞培养个人工作总结范文
细胞培养个人工作总结范文细胞培养是生物学实验中非常重要的一个环节，我在进行细胞培养工作中取得了一些经验和收获，现做以下总结：首先，在进行细胞培养实验时，我要保证实验室环境的洁净，经常对实验设备进行消毒和清洁，以防止细菌或其他有害物质的污染。
同时，在进行细胞培养时，要注意无菌操作，避免外界微生物的污染。
其次，我在培养细胞过程中，掌握了种植细胞的最佳条件和方法。
比如，在细胞培养的过程中，我严格控制培养基的pH值、营养物质的添加和细胞密度的控制，以保证细胞的健康生长和增殖。
另外，在细胞培养过程中，我也注意到了细胞的形态学变化和生长速度等指标的监测和记录，及时发现细胞的异常情况，以便及时调整培养条件。
最后，我在细胞培养实验中，还积累了大量的实践经验和技能，这些都将对我今后的科研工作产生积极的影响。
总而言之，通过细胞培养的个人工作总结，我进一步加深了对细胞培养工作的理解，提高了细胞培养技能，为今后的科研工作奠定了更加扎实的基础。
希望在今后的科研工作中，我能够不断积累经验，提高专业素养，为科学研究做出更多的贡献。
在细胞培养的工作实践中，我还学会了如何选择合适的细胞培养基和添加剂，以促进细胞的健康生长。
同时，我也学会了如何判断细胞的状态和纯度，并且掌握了一些常见的检测方法和技术，如细胞计数、细胞鉴定、细胞凋亡检测等。
这些技能不仅为我日常的细胞培养工作提供了坚实的保障，也为我未来的科研探索和学术研究奠定了基础。
在进行细胞培养的工作中，我还注意到了实验中的一些常见问题和解决方法。
比如，细胞在培养过程中出现的感染、细胞质纺锤体形成异常、细胞黏附不良等情况，这些都需要我们认真研究问题的根源，并采取相应的措施解决。
通过对实验过程中遇到的问题进行分析和总结，我得以不断提高自己的动手能力和解决问题的能力，使得我在工作中更加得心应手。
在实验的过程中，我发现了培养过程中一些可能的改进点。
比如，改进培养基的配方、优化培养条件、探索新的细胞培养技术等，这些都是我在细胞培养工作中不断努力的方向。
细胞培养实验总结总结
细胞培养实验总结引言细胞培养是现代生物学研究中常用的实验技术之一，它可以模拟体内环境，为研究细胞的生理生化过程提供便利。
本文对进行的细胞培养实验进行总结，包括实验目的、实验步骤、实验结果及讨论等内容。
实验目的本次实验的主要目的是通过细胞培养技术培养和观察细胞生长情况，了解细胞培养过程中的操作步骤和注意事项。
同时，通过添加不同培养基成分，探究对细胞生长和分化的影响。
实验步骤1.准备实验器材和培养基：将所需的培养基放置在无菌工作台上，同时清洗好所有需要使用的培养器皿和器械，保持无菌状态。
2.细胞传代：将上一代培养的细胞用无菌吸管吸取，移至新的培养器皿中，加入新鲜准备好的培养基。
细胞传代的目的是保持细胞的生长状态和纯度。
3.细胞观察：将培养器皿放置在显微镜下，使用适当倍率进行观察。
检查细胞的生长状况和细胞数量是否符合预期。
4.添加培养基成分：根据实验设计，可以在相应的培养器皿中加入不同的培养基成分，例如细胞分化因子、抗生素等。
目的是观察添加不同成分后细胞的生长和分化变化。
5.细胞采集：当细胞达到一定的生长密度时，可以进行细胞采集。
用无菌吸管吸出细胞悬液，将其置于离心管中，并进行离心处理，获取细胞沉淀。
6.分析实验结果：对培养的细胞进行计数、生长速率分析等统计，观察实验结果是否符合预期。
实验结果根据实验步骤和操作要求，我们成功地进行了细胞培养实验，并获得了一系列实验结果。
首先，观察到细胞在培养基中显示出良好的生长状态。
细胞数量逐渐增多，呈现典型的细胞周期。
观察到细胞的形态变化，细胞逐渐变大，细胞贴壁生长良好。
这说明培养基的成分和培养条件对细胞的生长具有重要影响。
其次，实验中添加了不同的培养基成分，包括细胞分化因子和抗生素。
观察到加入细胞分化因子后，部分细胞呈现出明显的分化现象，形成不同的细胞类型。
而加入抗生素后，观察到细胞数量减少，并且呈现出不同程度的细胞死亡。
这说明细胞分化和细胞存活受到培养基成分的影响。
细胞传代培养实验报告
细胞传代培养实验报告一、实验目的。
本实验旨在探究细胞传代培养的方法和技巧，以及观察细胞在不同代数下的生长情况和形态变化，为细胞生物学研究提供实验数据和参考。
二、实验材料和方法。
1. 实验材料，培养皿、培养基、细胞传代培养液、显微镜等。
2. 实验方法：a. 将细胞传代培养液均匀涂抹在培养皿上；b. 将待传代的细胞悬浮液加入培养皿中；c. 放入培养箱内，控制好温度和湿度；d. 每隔一定时间观察细胞的生长情况和形态变化。
三、实验结果。
经过连续传代培养，我们观察到细胞在不同代数下的生长情况和形态变化。
随着传代次数的增加，细胞的数量逐渐增多，细胞形态也发生了一定的变化。
初代细胞呈现出较大的细胞体积和规则的形态，而随着传代次数的增加，细胞体积逐渐减小，形态也变得不规则起来。
四、实验分析。
细胞传代培养是细胞生物学研究中常用的实验方法之一，通过连续传代培养可以观察到细胞的生长情况和形态变化，为细胞的生物学特性和行为提供了重要的数据。
在实际应用中，细胞传代培养也被广泛应用于细胞培养、细胞生长动力学研究、细胞毒性试验等领域。
五、实验结论。
通过本次实验，我们成功地进行了细胞传代培养实验，并观察到了细胞在不同代数下的生长情况和形态变化。
细胞传代培养是一项重要的实验方法，对于细胞生物学研究具有重要的意义。
六、实验总结。
细胞传代培养是细胞生物学研究中的重要实验方法，通过本次实验，我们对细胞传代培养的方法和技巧有了更深入的了解，也为今后的细胞生物学研究提供了重要的实验数据和参考。
七、参考文献。
1. Alberts B, Johnson A, Lewis J, et al. Molecular Biology of the Cell. 4th edition. New York: Garland Science; 2002.2. Freshney R. Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique. 5th edition. New York: Wiley-Liss; 2005.以上为本次实验的全部内容，感谢各位老师和同学的关注和支持。
实验总结细胞培养方法
一、培养细胞常用配置培养基的配置：基础培养基500ml+胎牛血清50ml+双抗5ml冻存液的配置：10 % DMSO + 90%胎牛血清依次比例酌量配置。
超净工作台常规配置移液器1套（2.5μl、20μl、200μl、1ml），酒精灯1盏，液器1台，斜架1台，酒精喷壶1个，酒精棉球缸1个，污缸1个，常规耗材：培养瓶（50㎝2），定量移液管（5ml、10ml），枪头（1ml、200μl、10μl），培养皿，6/24/48/96孔板，医用脱脂棉球，冻存管所需试剂：培养基，胎牛血清，双抗，DMSO，胰酶，75%酒精……实验前准备：所需的各项高压后的耗材及污物缸放于超净工作台内，用酒精喷壶喷洒实验台面，并关闭工作台打开紫外灯照射30min后开始实验操作。
培养基及胰酶恢复常温后使用，可37℃水浴5-10min二、细胞复苏步骤：1. 紫外消毒30min后关闭紫外灯，开启超净台正常工作状态，用酒精消毒操作者的双手。
2. 培养液（DMEM），恒温水浴箱37℃预热20min，备用。
超净台内准备一支15ml离心管备用。
3.将所需的培养基确保瓶身干净后酒精消毒放于工作台面内，点燃酒精灯，再将瓶口对准在酒精灯上消毒2-3次，旋开瓶盖后需再次分别消毒瓶口和瓶盖。
4. 从液氮保存罐中取出冻存管，立即放入37℃水浴中，快速摇晃，直至冻存液融化至黄豆粒大小后迅速取出。
5. 将细胞悬液移入15ml离心管，缓慢加入4ml培养液，离心（1000r/min，5min）。
6. 取出2个培养皿并做好标记（复苏日期等），提前加入5-10ml培养液；离心结束后用1ml培养液悬液混悬沉淀细胞后分别加入培养皿内。
7. 将培养基瓶口和瓶盖消毒2-3次后拧紧，熄灭酒精灯，整理实验台面，取出实验试剂及污缸等，关闭超净工作台。
8. 将培养瓶放入培养箱内培养注意事项：1. 取细胞的过程中注意带好防冻手套。
此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。
原代细胞培养实验报告总结归纳
(1).原代细胞和传代细胞培养有哪些区别?
(2).总结一下你自己的经验，怎样才能既迅速，又保证无菌操作。
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细胞培养可分为原代培养和传代(继代)培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。
细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。所有离体细胞的生长都受温度、渗透压、pH值、无机盐影响，消毒、配液等均有严格的规范和要求，特别是无菌操作是细胞培养成败的关键。
③．将细胞悬液吸出2ml左右，加到另一个培养瓶中并向每个瓶中分别加3ml左右培养液，盖好瓶塞，送回二氧化碳培养箱中，继续进行培养。
4.2.3结果
一般情况，传代后的细胞在2小时左右就能附着在培养瓶壁上，2～4天就可在瓶内形成单层，需要再次进行传代。
4.3器材及液体的准备和无菌操作的注意事项
4.3.1器材和液体的准备
4.1.3结果
细胞接种后一般几小时内就能贴壁，并开始生长，如接种的细胞密度适宜，5天到一周即可形成单层。
4.2传代细胞培养
4.2.1原理
体外培养的原代细胞或细胞株要在体外持续地培养就必须传代，以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞，并维持细胞种的延续。培养的细胞形成单层汇合以后，由于密度过大生存空间不足而引起营养枯竭，将培养的细胞分散，从容器中取出，以1:2或l:3以上的比率转移到另外的容器中进行培养，即为传代培养。
细胞培养实验报告
一、实验目的1. 熟悉细胞培养的基本原理和操作步骤。
2. 掌握哺乳动物细胞原代培养和传代培养的方法。
3. 了解细胞培养在生物学研究中的应用。
二、实验原理细胞培养是将生物体内的细胞取出，在体外模拟体内生理条件下，使其生长、繁殖或传代的过程。
细胞培养技术的最大优点是能够直接观察活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与体内实验互为补充。
细胞培养技术在生物学研究、医学、生物工程等领域中具有广泛的应用。
三、实验用品1. 仪器：显微镜、细胞培养箱、超净工作台、离心机、移液器、培养皿、载玻片、盖玻片等。
2. 试剂：胰蛋白酶、胎牛血清、DMEM培养基、青霉素、链霉素、D-Hank's液、75%酒精等。
四、实验步骤1. 原代细胞培养（1）取动物组织，用D-Hank's液清洗，去除血污。
（2）将组织剪成1mm×1mm×1mm的小块，加入胰蛋白酶，37℃消化30分钟。
（3）消化完成后，用吸管轻轻吹打组织块，使其分散成单个细胞。
（4）加入胎牛血清终止消化，用离心机离心收集细胞。
（5）用DMEM培养基重悬细胞，调整细胞浓度至1×10^6个/ml。
（6）将细胞接种于培养皿中，放入细胞培养箱培养。
2. 传代培养（1）待细胞长满培养皿后，用吸管轻轻吹打细胞，使其从培养皿壁上脱落。
（2）收集细胞，用离心机离心收集细胞。
（3）用DMEM培养基重悬细胞，调整细胞浓度至1×10^6个/ml。
（4）将细胞接种于新的培养皿中，放入细胞培养箱培养。
五、实验结果1. 原代细胞培养过程中，细胞从组织块中脱落，分散成单个细胞，细胞形态呈梭形或圆形。
2. 传代培养过程中，细胞生长旺盛，细胞形态稳定。
六、实验讨论1. 细胞培养过程中，温度、pH值、气体环境等因素对细胞生长影响较大。
实验中应严格控制培养条件，以保证细胞正常生长。
2. 细胞培养过程中，细胞传代次数过多会导致细胞老化，影响实验结果。
细胞培养个人工作总结
细胞培养个人工作总结在过去的几个月中，我一直在实验室进行细胞培养工作，并取得了一些令人满意的成果。
在这段时间里，我克服了很多挑战，积累了许多宝贵的经验，我认为有必要进行一次个人工作总结。
首先，我在细胞培养方面取得了一定的技术进步。
我熟练掌握了细胞培养的基本操作流程，包括细胞传代、细胞分离和细胞冻存等技术。
我还学会了如何对细胞进行鉴定和检测，确保它们的健康和纯度。
其次，我在实验室管理和协作方面也有所提高。
我学会了如何合理安排实验时间，避免交叉污染和实验失败。
我还跟实验室的同事们建立了良好的合作关系，我们互相学习，共同进步，取得了很好的研究成果。
最后，我在实验设计和结果分析方面也有了不小的进步。
通过参与实验方案的设计和实施，我积累了丰富的实验经验，提高了自己的科研水平。
同时，我还学会了如何正确地分析实验结果，总结经验教训，不断完善自己的工作。
总的来说，这段时间的细胞培养工作对我来说是一次宝贵的经历。
通过努力学习和实践，我取得了一些成绩，也积累了一些经验。
我相信在未来的工作中，我会继续努力，不断提高自己的专业能力，为科研事业贡献我的一份力量。
在细胞培养的工作中，我还遇到了一些挑战和困难，但通过努力和不断的实践，逐渐克服了这些问题。
其中一个挑战是细胞培养的环境和条件对细胞生长的影响。
在实验室中，细胞培养需要严格控制温度、湿度和细菌的污染，以确保细胞的生长环境符合其生长的要求。
我通过认真观察和实验不断调整培养条件，最终找到了适合细胞生长的最佳条件。
另外一个挑战是细胞传代过程中的技术要求，细胞培养中需要进行细胞的传代操作，以维持细胞的生长状态。
但在传代过程中，需要非常细致和精确的操作，以避免引入细菌或其他微生物的污染，同时要确保细胞的生长和分裂情况。
在实验过程中，我通过不断的练习和借鉴他人的经验，逐渐掌握了传代操作的技术要领，取得了令人满意的效果。
在实验设计和结果分析方面，我也遇到了一些困难。
由于细胞培养实验的复杂性和实验结果的多样性，对实验结果的分析需要细致入微和严谨的态度。
细胞原代培养实验总结
细胞原代培养实验总结引言细胞培养是生物科学研究中重要的技术手段之一，通过培养细胞，可以进一步研究细胞的生物学特性，了解其生长规律、代谢特征以及相应的分子机制。
本文将对细胞原代培养实验进行总结，包括实验的过程、关键步骤以及一些经验和技巧。
实验过程材料准备进行细胞原代培养实验，需要准备一系列实验材料，包括培养基、细胞培养酶、培养皿、离心管等。
在准备材料时，需要保证其纯度和质量，以确保实验的可靠性和重复性。
细胞分离首先，从组织或者细胞源中获得待培养的原代细胞。
通过消化组织或细胞样本，使用适当的酶或消化液，将细胞从组织中分离出来。
分离的细胞可以经过离心等方法获得。
细胞传代将分离得到的原代细胞进行传代是细胞培养实验中的重要步骤。
传代可以使细胞得以继续生长和繁殖，以获得足够数量的细胞用于后续实验。
传代的时机需要根据细胞的生长速度和需求进行判断，并在合适的时机进行。
细胞培养将原代细胞和传代细胞置于培养皿中，加入适量的培养基和其他必需的添加剂，建立细胞培养体系。
细胞培养过程需要一定的条件，包括适宜的温度、湿度、气体氛围等。
培养皿需要在无菌条件下操作，以避免细菌或其他微生物的污染。
鉴定和检测进行细胞原代培养实验后，需要对培养的细胞进行鉴定和检测，以验证其纯度和活性。
常用的方法包括细胞形态观察、细胞计数、细胞存活率检测、细胞周期分析等。
这些检测方法可以帮助研究者了解细胞的状态和特征，为后续的实验设计提供参考数据。
关键步骤细胞分离的优化细胞分离是细胞原代培养实验中的关键步骤之一。
为了获得较高的细胞分离效率，可以优化分离条件，如调整消化液的浓度和作用时间，选择合适的分离方法等。
此外，在分离过程中需要注意对细胞的机械刺激要尽量避免，以减少细胞的损伤和死亡。
培养基的选择和优化培养基是细胞培养实验中至关重要的因素之一，直接影响到细胞的生长和活性。
根据不同细胞类型的要求，选择适合的基础培养基，并根据实验需要添加相应的添加剂，如生长因子、血清、抗生素等。
动物细胞培养实验报告
一、实验目的1. 掌握动物细胞培养的基本原理和方法。
2. 熟悉动物细胞培养过程中常用的仪器和试剂。
3. 通过动物细胞培养实验，了解细胞生长、增殖、分化的过程。
二、实验原理动物细胞培养是指将动物组织或器官中的细胞取出，在体外模拟体内环境，使其在适当的营养和条件下生长、增殖、分化。
动物细胞培养是生物学、医学、药理学等领域的重要研究手段。
三、实验材料1. 试剂：胎牛血清、DMEM培养基、青霉素、链霉素、胰蛋白酶。
2. 仪器：超净工作台、细胞培养箱、移液器、培养皿、显微镜等。
四、实验方法1. 细胞复苏：将冻存的细胞取出，用无菌生理盐水洗涤，加入适量DMEM培养基，在37℃、5%CO2培养箱中复苏。
2. 细胞传代：将复苏后的细胞用胰蛋白酶消化，加入适量的DMEM培养基终止消化，用移液器吹打细胞，制成单细胞悬液。
将单细胞悬液接种于培养皿中，在37℃、5%CO2培养箱中培养。
3. 细胞观察：在显微镜下观察细胞的生长状态，记录细胞生长、增殖、分化的过程。
4. 细胞传代：待细胞铺满培养皿底部时，用胰蛋白酶消化细胞，制成单细胞悬液。
将单细胞悬液接种于新的培养皿中，重复上述步骤。
五、实验结果1. 细胞复苏：复苏后的细胞在显微镜下观察到细胞呈圆形，细胞质清晰，细胞核明显。
2. 细胞生长：细胞接种后，在培养箱中培养，细胞逐渐铺满培养皿底部。
细胞生长过程中，细胞体积逐渐增大，细胞核逐渐增多。
3. 细胞增殖：细胞生长过程中，细胞数量逐渐增多，细胞铺满培养皿底部的时间逐渐缩短。
4. 细胞分化：在培养过程中，部分细胞发生分化，形成不同形态的细胞。
如神经细胞、肌肉细胞等。
六、实验讨论1. 细胞培养过程中，温度、CO2浓度、培养基成分等条件对细胞生长、增殖、分化具有重要影响。
实验中应严格控制这些条件，以确保细胞正常生长。
2. 细胞传代过程中，应注意防止污染。
操作应在超净工作台中进行，使用无菌器材，避免细菌、真菌等微生物污染。
3. 细胞培养实验过程中，应定期观察细胞生长状态，及时调整实验条件，以保证细胞正常生长。
细胞培养个人工作总结报告
细胞培养个人工作总结报告一、前言在过去的一年里，我有幸参与了细胞培养实验室的工作，在此期间，我不仅掌握了细胞培养的基本技能，还对细胞生物学有了更深入的了解。
在此，我将对我在细胞培养工作中的个人总结进行汇报，以期为今后的研究和工作提供借鉴。
二、工作内容1. 细胞培养基本技能的掌握在实验室中，我先后接受了细胞培养基本技能的培训，包括细胞的复苏、传代、悬浮、贴壁生长等。
通过对不同细胞系的培养，我熟练掌握了细胞培养的操作流程，并学会了使用细胞培养箱、显微镜等实验设备。
2. 细胞生物学实验操作在细胞培养的基础上，我参与了多项细胞生物学实验，如细胞增殖实验、细胞周期检测、 Western blot等。
通过这些实验，我对细胞生物学的研究方法有了更深入的了解，为今后的研究打下了坚实的基础。
3. 团队协作与交流在实验室工作中，我充分体会到团队协作的重要性。
与导师、同学间的密切配合，使我在解决问题和分享成果时取得了很大的进步。
此外，我还积极参加实验室的学术交流活动，拓宽了自己的学术视野。
三、工作收获1. 技能提升通过细胞培养工作的实践，我熟练掌握了细胞培养的基本技能，提高了自己的实验操作能力。
同时，我也学会了如何查阅文献、设计实验、分析数据，为今后的研究工作奠定了基础。
2. 学术成长在实验室的工作中，我参与了多项细胞生物学实验，积累了丰富的实验经验。
此外，我还学会了如何撰写实验报告、发表学术论文，为今后的学术生涯打下了基础。
3. 团队协作能力的培养在实验室中，我与导师、同学紧密合作，共同推进实验项目的进展。
通过团队协作，我学会了如何与他人沟通、解决问题，提高了自己的团队协作能力。
四、工作展望在今后的工作中，我将继续深入研究细胞生物学领域，提高自己的专业素养。
同时，我将充分发挥团队协作精神，与他人共同推进实验室的研究工作。
此外，我还计划积极参与国内外学术交流，拓宽自己的学术视野，为我国细胞生物学研究贡献力量。
五、结语通过一年的细胞培养工作，我不仅在技能和学术上取得了显著的进步，还培养了团队协作能力。
细胞培养小实验实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握细胞培养的基本操作流程，包括原代培养和传代培养。
2. 了解细胞培养过程中的无菌操作规范。
3. 观察细胞在体外培养过程中的生长、增殖和形态变化。
二、实验原理细胞培养是从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代的过程。
细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与体内实验互为补充。
三、实验用品1. 仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、移液枪、培养皿、无菌操作台、无菌操作箱、细胞培养箱、CO2培养箱、细胞计数器等。
2. 试剂：细胞培养液、胰蛋白酶、胎牛血清、抗生素、无菌水等。
四、实验步骤1. 原代细胞培养（1）取动物组织，剪碎后用胰蛋白酶消化，制成细胞悬液。
（2）将细胞悬液加入培养皿，置于CO2培养箱中培养。
（3）观察细胞生长情况，每隔24小时更换一次培养液。
2. 传代培养（1）当细胞达到一定密度时，用胰蛋白酶消化细胞，制成细胞悬液。
（2）将细胞悬液按1：2的比例传代到新的培养皿中。
（3）观察细胞生长情况，每隔24小时更换一次培养液。
3. 细胞计数（1）取适量细胞悬液，加入细胞计数器。
（2）计数细胞数量，计算细胞密度。
4. 细胞形态观察（1）取细胞培养皿，用盖玻片覆盖。
（2）置于显微镜下观察细胞形态、生长情况。
五、实验结果1. 细胞生长情况：原代细胞在培养皿中生长良好，细胞密度逐渐增加。
传代培养后，细胞生长速度略有下降，但总体状况良好。
2. 细胞形态：细胞呈多边形，细胞核清晰可见，细胞间连接紧密。
3. 细胞计数：细胞密度为1×10^6个/mL。
六、实验结论1. 成功进行了原代细胞培养和传代培养。
2. 细胞在体外培养过程中生长良好，细胞形态正常。
3. 细胞培养技术为生物学研究提供了有力工具。
七、实验总结本次实验成功掌握了细胞培养的基本操作流程，了解了无菌操作规范，并观察了细胞在体外培养过程中的生长、增殖和形态变化。
细胞培养的心得体会
篇一：细胞培养心得1、寄运细胞或者接收细胞，都要做好充足的准备;如果是让其它实验室寄运细胞，或者寄给别人细胞，细胞应该如何处理是主要考虑的问题。
假设细胞在途中要经过48小时，那么可以待细胞长到50%的密度时处理细胞，即将细胞培养瓶内加满培养液，拧紧瓶盖，用封口膜封紧瓶口；然后将培养瓶放进泡沫盒，用纸或泡沫将盒内空间填满，使培养瓶不能随意移动。
因此要确定准备好以下物品：透气的细胞培养瓶；封口膜；足量的培养液；放细胞培养瓶的泡沫盒及填充物；除了细胞的处理，还要注意以下几点：1）提前跟快递公司人员联系，要上门取货（大多快递公司都可以，顺丰确实算是好些；近来觉得韵达速度也很快）2）时间安排（细胞处理尽量安排在下午，因为快递公司一般来说都是晚上统一发货，要是早晨处理细胞交给快递公司，细胞还没上路呢，就已经在培养箱外待了一天）；1）细胞的铺板：以96孔板为例，做细胞实验的同学看文献可能注意到，有较多的文献中提到细胞接种数量是5000个/孔；最初我也是按照这个数量来铺板的，实际上这个接种数量偏高；假设给药时间是48小时，发现空白对照孔中会有细胞无法贴壁，因为太满了，被挤出来了。
如此，则会因为接种密度原因，而不能准确反映细胞的正常生长情况及给药组作用情况。
2）给药：对于水溶性药物就不讲了，只讲难溶于水，而且虽然溶于dmso，但向dmso加水后也会析出的药物；有人是这样做的，在ep管中用dmso溶解药物作为母液，然后用细胞培养液将母液梯度稀释成各个浓度，药物有析出，成结晶了，可能都沉了，严重不均一了，这浓度就没法衡量了；用培养液，在ep管中用dmso梯度稀释药物成各个梯度浓度，然后直接加到含培养液的96孔中，假设96孔中培养液为197微升，那么加药的体积只能是3微升或者小于3微升。
我觉得可以这么做，操作会更麻烦，难度上稍大了点，但不是不能做。
有些药物常温下难溶于水，可能加热溶解性会很好，由于专业涉及面不同，很多人会忽略这方面。
细胞培养实验报告
细胞培养实验报告
细胞培养是一种常见的实验技术，用于细胞生物学和生物医学研究中。
通过细胞培养，可以对细胞进行观察、实验和研究，从而更好地理解细胞的生物学特性和生理功能。
在本次实验中，我们进行了细胞培养实验，并得到了一些有意义的结果和结论。
首先，我们准备了所需的培养基、细胞培养器具和细胞样本。
在实验过程中，我们严格按照操作规程进行操作，保证了实验的准确性和可靠性。
在培养细胞的过程中，我们注意了细胞的密度、培养基的配比、培养条件的控制等因素，保证了细胞的正常生长和稳定性。
接着，我们对培养的细胞进行了观察和实验。
我们观察到细胞在培养基中呈现出良好的形态和生长状态，细胞的数量也在逐渐增加。
通过显微镜观察，我们发现细胞的形态和结构都符合正常的细胞特征，没有出现异常情况。
在实验中，我们还对细胞进行了染色、免疫分析等实验，得到了一些有意义的结果。
最后，我们对实验结果进行了分析和总结。
我们得出了一些关于细胞生长、分化、代谢等方面的结论，这些结论对于我们进一步研究细胞生物学和生物医学具有一定的指导意义。
同时，我们也发现了一些实验中存在的问题和不足之处，为今后的实验工作提出了改进和完善的建议。
综上所述，本次细胞培养实验取得了一些有意义的结果和结论，对于我们的研究工作具有一定的参考价值。
在今后的工作中，我们将进一步完善实验方案，提高实验技术水平，不断深入研究细胞的生物学特性和生理功能，为生物医学研究做出更大的贡献。
实验室培育细胞实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握细胞培养的基本原理和方法；2. 了解细胞培养过程中的无菌操作和细胞传代技术；3. 观察细胞在体外培养过程中的生长和变化。
二、实验原理细胞培养是将细胞从生物体中取出，在体外模拟生物体内环境，使其在适宜的条件下生长、繁殖和传代。
细胞培养技术是生物学研究的重要手段，广泛应用于医学、生物工程等领域。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：小鼠脾脏细胞、胰蛋白酶、细胞培养液、DMSO（二甲基亚砜）、培养瓶、移液器、细胞计数板、显微镜等。
2. 仪器：超净工作台、细胞培养箱、离心机、冰箱等。
四、实验步骤1. 细胞复苏：将冷冻保存的细胞复苏，解冻后用移液器吹打均匀，加入适量培养液，调整细胞浓度；2. 细胞接种：将复苏后的细胞接种于培养瓶中，放入细胞培养箱培养；3. 细胞传代：待细胞长满培养瓶后，用胰蛋白酶消化细胞，调整细胞浓度后，重新接种于新的培养瓶中；4. 细胞观察：定期观察细胞生长情况，记录细胞形态、数量和生长速度；5. 细胞冻存：将细胞传代后，取适量细胞加入DMSO，冷冻保存。
五、实验结果与分析1. 细胞复苏：复苏后的细胞呈圆形，细胞膜完整，无碎片；2. 细胞接种：接种后的细胞在培养箱中生长良好，细胞形态规则，细胞间连接紧密；3. 细胞传代：传代后的细胞生长迅速，细胞数量逐渐增加；4. 细胞观察：细胞在体外培养过程中，形态、数量和生长速度逐渐稳定。
六、实验结论1. 成功掌握了细胞培养的基本原理和方法；2. 掌握了细胞培养过程中的无菌操作和细胞传代技术；3. 观察到细胞在体外培养过程中的生长和变化。
七、实验讨论1. 细胞培养过程中，无菌操作至关重要，应严格遵循无菌操作规程；2. 细胞传代时，应选择合适的胰蛋白酶浓度和消化时间，以减少对细胞的损伤；3. 细胞培养过程中，应定期观察细胞生长情况，及时调整培养条件，以保证细胞生长良好。
八、实验总结本次实验成功进行了细胞培养，掌握了细胞培养的基本原理和方法，为后续的细胞学研究奠定了基础。
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一、培养细胞常用配置培养基的配置：基础培养基500ml+胎牛血清50ml+双抗5ml冻存液的配置：10 % DMSO + 90%胎牛血清依次比例酌量配置。
超净工作台常规配置移液器1套（2.5μl、20μl、200μl、1ml），酒精灯1盏，液器1台，斜架1台，酒精喷壶1个，酒精棉球缸1个，污缸1个，常规耗材：培养瓶（50㎝2），定量移液管（5ml、10ml），枪头（1ml、200μl、10μl），培养皿，6/24/48/96孔板，医用脱脂棉球，冻存管所需试剂：培养基，胎牛血清，双抗，DMSO，胰酶，75%酒精……实验前准备：所需的各项高压后的耗材及污物缸放于超净工作台内，用酒精喷壶喷洒实验台面，并关闭工作台打开紫外灯照射30min后开始实验操作。
培养基及胰酶恢复常温后使用，可37℃水浴5-10min二、细胞复苏步骤：1. 紫外消毒30min后关闭紫外灯，开启超净台正常工作状态，用酒精消毒操作者的双手。
2. 培养液（DMEM），恒温水浴箱37℃预热20min，备用。
超净台内准备一支15ml离心管备用。
3.将所需的培养基确保瓶身干净后酒精消毒放于工作台面内，点燃酒精灯，再将瓶口对准在酒精灯上消毒2-3次，旋开瓶盖后需再次分别消毒瓶口和瓶盖。
4. 从液氮保存罐中取出冻存管，立即放入37℃水浴中，快速摇晃，直至冻存液融化至黄豆粒大小后迅速取出。
5. 将细胞悬液移入15ml离心管，缓慢加入4ml培养液，离心（1000r/min，5min）。
6. 取出2个培养皿并做好标记（复苏日期等），提前加入5-10ml培养液；离心结束后用1ml培养液悬液混悬沉淀细胞后分别加入培养皿内。
7. 将培养基瓶口和瓶盖消毒2-3次后拧紧，熄灭酒精灯，整理实验台面，取出实验试剂及污缸等，关闭超净工作台。
8. 将培养瓶放入培养箱内培养注意事项：1. 取细胞的过程中注意带好防冻手套。
此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。
2. 冻存液的问题：冻存液的配置已是常识，在这里不作详述，但二甲基亚砜（DMSO）对细胞不是完全无毒副作用，在常温下，二甲基亚砜对细胞的毒副作用较大，因此，必须在1-2min内使冻存液完全融化。
如果复苏温度太慢，会造成细胞的损伤，二甲基亚砜（DMSO）最好选择进口产品。
3. 离心前须加入少量培养液。
细胞解冻后二甲基亚砜浓度较高，注意加入少量培养液可稀释其浓度，以减少对细胞的损伤。
4. 离心问题：目前主要有两种见解。
一种是解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养，第二天换液。
因为离心的目的是两个，去除DMSO，去除死细胞，这个是标准流程，但对一般人来说，把握不好离心转速和时间，转的不够活细胞沉底的少，细胞就全被扔掉了，转过了活细胞会受压过大，死亡。
此外在操作过程中容易污染，所以不推荐。
另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜（DMSO），DMSO对细胞有一定的毒副作用，所以须将离心后的液体前倒净，且一定倒干净。
5. 冻存细胞解冻时1ml细胞液要加10ml－15m培养液6. 复苏细胞分装的问题：复苏1管细胞一般可分装到2-3只培养皿中，分装过多，细胞浓度过低，不利于细胞的贴壁。
7. 加培养基的量放入问题：这个量的多少的把握主要涉及到的问题是DMSO的浓度，从如果你加培养基的太少，那么DMSO的浓度就会比较大，就会影响细胞生长，从以前的资料来看，DMSO的浓度在小于0.5%的时候对一般细胞没有什么影响，还有一个说法是1％。
所以如果你的冻存液的浓度是10％DMSO的话那么加10ml以上的培养基就恰好稀释到了无害浓度8. 原理：在不加任何条件下直接冻存细胞时，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等，能引起细胞死亡。
如向培养液加入保护剂，可使冰点降低。
在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞。
贮存在－130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。
细胞复苏时速度要快，使之迅速通过细胞最易受损的－5～0℃，细胞仍能生长，活力受损不大。
目前常用的保护剂为二甲亚砜（DMSO）和甘油，它们对细胞无毒性，分子量小，溶解度大，易穿透细胞。
三、培养液的更换1. 紫外消毒30min后关闭紫外灯，开启超净台正常工作状态，用酒精消毒操作者的双手。
2. 培养液（DMEM），恒温水浴箱37℃预热20min，备用。
3. 将所需的培养基确保瓶身干净后酒精消毒放于工作台面内，点燃酒精灯，再将瓶口对准在酒精灯上消毒2-3次，旋开瓶盖后再次分别消毒瓶口和瓶盖。
4. 将培养皿盖内口朝上放在架子上，将培养皿内的培养液悬空倒进污缸5．拿出1支高压后的5ml定量移液管，在酒精灯上灼烧尾部后装于移液器上，再次放于酒精灯上灼烧整个定量移液管管身2-3次，悬空进入培养基瓶内吸取5-10ml培养基再悬空移入培养皿内，将培养皿盖在酒精灯上消毒2-3次后盖上。
6. 将培养基瓶口和瓶盖消毒2-3次后拧紧，熄灭酒精灯，整理实验台面，取出实验试剂及污缸等，关闭超净工作台。
7. 将培养瓶放入培养箱内培养每天定时观察细胞生长情况，一般72-96h后，细胞生长密度大于90%，即可进行细胞的传代。
四、细胞传代1. 紫外消毒30min后关闭紫外灯，开启超净台正常工作状态，用酒精消毒操作者的双手。
2. 培养液，胰酶，恒温水浴箱37℃预热20min，备用。
3. 将所需的培养基，胰酶确保瓶身干净消毒后放于工作台面内，点燃酒精灯，再将瓶口对准在酒精灯上消毒2-3次，旋开瓶盖后再次分别消毒瓶口和瓶盖，分别放于酒精灯的两侧。
4. 将培养皿盖内口朝上放在架子上，将培养皿内的培养液悬空倒进污缸。
取1ml 移液器快速移动在酒精灯上消毒1-2次，然后再装上枪头吸取1-2ml胰酶液，悬空沿皿壁加入培养皿内。
5. 将培养皿来回倾倒使胰酶浸没整个皿底的细胞层，计时越1-3min（消化时间根据细胞不同时间不同），对着灯光可观察到细胞与细胞之间有针孔样缝隙，并有1-2个细胞脱落，镜下观察到细胞都变圆时为胰酶消化的最适时机。
（若看到成片的细胞从瓶壁脱落为胰酶消化过度；若看不到针孔样缝隙和细胞脱落，或镜下细胞多有菱角则需继续消化）。
用移液器将胰酶吸净。
6. 吸取1ml培养基于培养皿内，并用移液器吸取少量的培养基轻柔的反复冲洗培养瓶壁5-8次，使贴壁细胞完全脱落于培养基内再轻轻吹打2-3次，使细胞尽可能处于单个悬浮状态。
7. 取1或2个新的培养皿，然后将细胞培养基均匀的分到2或3个培养瓶内（注意原来传代时使用的培养瓶可继续传代使用），进行1传2或1传3的培养。
8. 拿出1支高压后的5ml定量移液管，在酒精灯上灼烧尾部后装于移液器上，再次放于酒精灯上灼烧整个定量移液管管身2-3次，悬空进入培养基皿内吸取5-10ml培养基悬空移入每个培养皿内，将培养皿盖在酒精灯上消毒2-3次盖上，在皿盖上做好实验标记。
9. 将培养基瓶口和瓶盖消毒2-3次后拧紧，熄灭酒精灯，整理实验台面，取出实验试剂及污缸等，关闭超净工作台。
10. 将培养瓶放入培养箱内培养。
注意整个培养箱底托盘内一定要放高压后的水，且定期更换确保无菌。
每天定时观察细胞生长情况，一般72-96h后，细胞生长密度大于90%，即可进行细胞的传代或保株。
五、细胞株的保存原理：细胞冻存最常用的技术是液氮冷冻保存法，主要采用加适量保护剂的缓慢冷冻法冻存细胞。
细胞在不加任何保护剂的情况下直接冷冻，细胞内外的水分会很快形成冰晶，从而引起一系列不良反应。
如细胞脱水使局部电解质浓度增高，pH值改变，部分蛋白质由于上述原因而变性，引起细胞内部空间结构紊乱，溶酶体膜由此遭到损伤而释放出溶酶体酶，使细胞内结构成分造成破坏，线粒体肿胀，功能丢失，并造成能量代谢障碍。
胞膜上的类脂蛋白复合体也易破坏引起细胞膜通透性的改变，使细胞内容物丢失。
如果细胞内冰晶形成较多，随冷冻温度的降低，冰晶体积膨胀造成细胞核DNA空间构型发生不可逆的损伤，而致细胞死亡。
因此，细胞冷冻技术的关键是尽可能地减少细胞内水分，减少细胞内冰晶的形成。
采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质分子量小，溶解度大，易穿透细胞，可以使冰点下降，提高细胞膜对水的通透性，且对细胞无明显毒性。
慢速冷冻方法又可使细胞内的水分渗出细胞外，减少胞内形成冰结晶的机会，从而减少冰晶对细胞的损伤。
实验步骤：选择处于对数生长期的细胞，在冻存前一天最好换液。
将多个培养瓶中的细胞培养液去掉，用0.25% 胰蛋白酶消化。
适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。
用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。
悬浮生产细胞则不要消化处理。
然后将细胞收集于离心管中离心(1000r/min，10分钟)。
加入冻存管中，再加入1ml配置好的冻存液后放入梯度降温盒，放入-80℃冰箱中。
1. 紫外消毒30min后关闭紫外灯，开启超净台正常工作状态，用酒精消毒操作者的双手。
2. 培养液，胰酶，二甲基亚砜DMSO，胎牛血清（解冻），梯度降温盒恢复常温，恒温水浴箱37℃预热20min，备用。
3. 将所需的培养基，胰酶确保瓶身干净消毒后放于工作台面内，点燃酒精灯，再将瓶口对准在酒精灯上消毒2-3次，旋开瓶盖后再次分别消毒瓶口和瓶盖，分别放于酒精灯的两侧。
4. 将培养瓶瓶口在酒精灯上消毒2-3次，旋开后分别再次消毒瓶口和瓶盖2-3次，盖放于酒精灯右侧后将培养瓶内的培养液悬空倒进污缸，在酒精灯消毒2-3次瓶口，竖直放好。
取1ml移液器快速移动在酒精灯上消毒1-2次，然后再装上枪头吸取1.5ml胰酶液，悬空移入培养瓶内。
5. 将培养皿盖内口朝上放在架子上，将培养皿内的培养液悬空倒进污缸。
取1ml 移液器快速移动在酒精灯上消毒1-2次，然后再装上枪头吸取1-2ml胰酶液，悬空沿皿壁加入培养皿内。
6. 将培养皿来回倾倒使胰酶浸没整个皿底的细胞层，计时越1-3min（消化时间根据细胞不同时间不同），对着灯光可观察到细胞与细胞之间有针孔样缝隙，并有1-2个细胞脱落，镜下观察到细胞都变圆时为胰酶消化的最适时机。
（若看到成片的细胞从瓶壁脱落为胰酶消化过度；若看不到针孔样缝隙和细胞脱落，或镜下细胞多有菱角则需继续消化）。
用移液器将胰酶吸净。
6. 吸取1ml培养基于培养皿，并用移液器吸取少量的培养基轻柔的反复冲洗培养瓶壁5-8次，使贴壁细胞完全脱落于培养基内再轻轻吹打2-3次，使细胞尽可能处于单个悬浮状态。
7. 将悬浮细胞吸入15ml离心管内，加入4ml培养基离心1000r/min，5min8. 预先配制冻存液：10 % DMSO + 90%胎牛血清。
按需要配置一定数量备用9.弃去培养基，用冻存液进行重悬混匀后，将1ml含有细胞的冻存液移入冻存管内，拧紧瓶盖，做好实验标记。