PC12细胞的培养整理总结
细胞培养总结
细胞培养学习总结--贴壁细胞培养技术一、细胞培养一般流程：㈠、复苏：1、实验前做好相关准备工作（水浴锅37℃；超净工作台的无菌环境；准备好实验相关仪器和试剂）。
2、把冻存管从液氮灌中取出来，立即投入37℃（≦40℃）水浴锅中，晃动冻存管，使液体在1min以内全部融解（关键步骤），用酒精棉擦拭其外壁，放到超净工作台里。
3、把上述细胞悬液吸到15ml的离心管中，加入适量培养基，(用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来，转移时不要直接倒，以防污染)，1000转离心1-3min（可根据所培养细胞调整）。
4、吸弃上清液，加适量培养基把细胞吹散成细胞悬液，转移到培养瓶中，加适量完全培养基（常为覆盖培养瓶底面即可）。
5、标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后再换培养基。
6、注意观察细胞生长状态，及时换液或传代。
㈡、换液：1、实验前做好相关准备工作（超净工作台的无菌环境；准备好实验相关仪器和试剂）。
2、取出培养瓶，用75%酒精消毒后放入超净实验台。
3、吸弃旧培养液，用适量（如2ml）PBS（磷酸盐缓冲液）清洗细胞（可根据细胞状态洗1-2遍，一般从没有细胞的那一侧倒掉）。
4、加入适量新鲜完全培养基，放回培养箱继续培养。
㈢、传代：1、实验前做好相关准备工作（超净工作台的无菌环境；准备好实验相关仪器和试剂）。
2、取出培养瓶，用75%酒精消毒后放入超净实验台。
3、吸弃旧培养液，用适量（如2ml）PBS（磷酸盐缓冲液）清洗细胞（可根据细胞状态洗1-2遍）。
（前面步骤同换液）4、加适当的胰蛋白酶（0.05%）(能覆盖细胞就行)，放入细胞培养箱中消化1-2min（根据不同类型细胞而定）。
5、细胞都变圆后加如入等体积的完全培养基终止消化。
6、用滴管缓慢吹打细胞，使细胞都悬浮起来成细胞悬液，吸到15ml的离心管中，1000转离心1-3min。
7、倒掉上清液，加1-2ml完全培养基，将细胞吹散成单个细胞。
多聚赖氨酸（Poly-L-Lysine）的配制、保留、应用总结[最新]
![多聚赖氨酸（Poly-L-Lysine）的配制、保留、应用总结[最新]](https://img.taocdn.com/s3/m/14811bc0185f312b3169a45177232f60ddcce7e5.png)
因为自己做PC12细胞培养，想在接种前将培育皿用多聚赖氨酸包被，到园子里搜索了下，关于多聚赖氨酸的帖子不少，看了一些帖子，将大部分收集在此。
个人觉得关于多聚赖氨酸的配置、保存、使用各方面问题，这些帖子里面都解释了。
注：我只是摘了一个帖子里某段或某句话。
一般一段话来自某一位战友。
一、常用的多聚赖氨酸包被可以用三蒸水，或者PBS，浓度一般为用0.1 mg/ml进行包被。
二、其他常用包被方法比较(以各种免疫分析为例)：49456826.snap三、我配成1mg/ml的储存液，用Mini-Q(超纯水)配制，放在－20℃储存，使用时稀释10倍（也用超纯水），即终浓度100ug/ ml，过滤后使用。
工作液过滤使用，如一次用不完，放在4℃储存。
多聚赖氨酸在水溶液中易分解，所以一次不要配太多工作液。
四、我现在要配多聚赖氨酸,书上写的用PBS配,但没写PH,浓度，向各位请教。
答：PH应该在7.0~7.4，PBS：取氯化钠7.650 g，无水磷酸氢二钠0.724 g，磷酸二氢钾0.210g 溶于蒸馏水1000 mL 中，以1N 氢氧化钠溶液调pH 值为7.0~7.4，经121℃灭菌15 分钟五、我准备用多聚赖氨酸涂片培养细胞,不知道多聚赖氨酸涂过的玻片如何灭菌？能否干烤灭菌？答：Sigma的产品说明书上写的很明白的。
另外，有本书上是这么写的，供参考：Poly-ly sine-coated tissue culture surf acesTo coat cov erslips: Prepare a stock solution by dissolv ing 25 mg/ml poly ly sine in 4.73 ml water (both poly-L-lysine an d poly-D-lysine are used to coat tissue culture surf aces; check specif ic protocol f or choice of isomer) and f ilter sterilize throu gh a 0.22-μm f ilter. Store in 100-μl aliquots at ?20°C. When ready to use, dilute one aliquot in 40 ml water to prepare 13 μg/ml working solution. Sterilize cov erslips by autoclav ing prior to coating. Dip cov erslips in the working solution, then inc ubate 15 min to sev eral hours in a humidif ied 37°C, 5% CO2 incubator. Allow surf ace to dry.To coat culture dishes or 8-well chamber slides: Prepare a stock solution by dissolv ing 100 mg poly-lysine in 100 ml water (both poly-L-lysine and poly-D-lysine are used to coat tissue culture surf aces; check specif ic protocol f or choice of isom er) and f ilter sterilize through a 0.22-μm f ilter. Store in 5-ml aliquots at ?20°C. When ready to use, dilute 1 part stock solutio n with 9 parts water to prepare 100 μg/ml working solution. Fill tissue culture dishes or slide wells with the working soluti on and incubate 1 hr in a humidif ied 37°C, 5% CO2 incubator, then remov e solution by v acuum aspiration and allow surf ace to dry.Store coated tissue culture ware up to 3 months at 4°C. Use diluted solutions only once, but unused diluted aliquots can be stored up to 3 months at 4°C.你可以配置好PLL后单独将其过滤除菌，分装，待用。
PC12细胞诱导分化成神经元样细胞的培养机制研究
PC12细胞诱导分化成神经元样细胞的培养机制研究傅松文;农梦妮;李柯柯;曾高峰【摘要】目的:研究适宜PC12细胞的培养方法及其在神经生长因子(NGF)作用下的分化效果.方法:PC12细胞培养于F12K培养基中,传代时直接将细胞吹打下来,并用注射器吹散成单细胞悬液;PC12细胞接种于6孔培养板中,并用含NGF 50μg/L 的无血清培养基进行诱导分化5d,倒置显微镜下观察细胞的形态特征,Image J软件进行图像分析.结果:PC12细胞生长状态良好,且经NGF作用5d后,细胞体积显著增大,突起增多增长,细胞分化率达(72.60±3.61)％.结论:本实验中对PC12细胞培养的方法简单易行,适用于PC12细胞的培养;NGF能够诱导PC12细胞分化成神经元样细胞,可为神经退行性疾病的研究奠定基础.【期刊名称】《广西医科大学学报》【年(卷),期】2014(031)006【总页数】2页(P919-920)【关键词】PC12细胞;细胞培养;NGF;神经元样细胞【作者】傅松文;农梦妮;李柯柯;曾高峰【作者单位】广西医科大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室南宁 530021;广西医科大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室南宁 530021;广西医科大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室南宁 530021;广西医科大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室南宁 530021【正文语种】中文【中图分类】R322.85PC12细胞是大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤细胞，其在形态、生理和生化等方面具有神经元细胞的特性[1]；因其具可传代特点，故可作为体外研究神经退行性疾病的模型。
然而，PC12细胞存在贴壁能力差，容易聚集成团生长，难以吹散成单细胞悬液等缺点。
而常规培养中，吹散细胞时往往直接采用巴氏吸管进行吹打，难以有效地将PC12细胞吹散成单细胞悬液，以致细胞接种后即可出现较为严重的成团现象，不利于细胞的生长；且PC12细胞接种于普通培养板进行后续实验时，细胞也易聚集成团，并容易脱落，影响实验的顺利进行。
细胞培养小结
CO2培养箱，下面的松开是关，这个阀门只要打开一点点就行，有那么一点儿感觉紧了就可以了，折上管子，看见读数在0.03MPa，先让温度升至37，稳定之后再打开CO2，大概需要4-5个小时。
细胞培养：一、材料：DMEM培养基或1640培养基、胎牛血清、双抗（青霉素，链霉素）、0.25%胰蛋白酶（含0.02%的EDTA），PBS等。
培养液的制备：DMEM（或1640）+10%血清+1%双抗。
（若用50ml的离心管即45ml DMEM+5ml 血清+0.5ml 双抗）二、培养过程：1.复苏：复苏细胞是从零下80℃冰箱或液氮罐中取出冻存管，迅速投入37℃水浴中，使其融化（1分钟左右）（部分融化），用培养基缓慢稀释至原体积的5~6倍，大部分细胞完全贴壁后（4-6小时），吸出含有冻存液的培养基，并换成完全培养基；或取出冻存管以后，放入37℃的水浴至半融化状态，然后将冻存管内的液体移至培养盒，补充培养基4-5ml。
放入培养箱12小时左右使其贴壁生长，第二天换液。
2.换液：首先将培养皿内液体倒出，用PBS冲洗2-3遍（目的是使分泌物和死亡的细胞脱落），然后再加入适量的新的培养基。
3.传代：培养皿内细胞长满后，需要进行传代培养，首先将培养皿内液体倒掉，用PBS冲洗2-3遍，加入2-3ml胰酶，培养一段时间（929为三四分钟，培养箱内）（培养时间可根据文献或经验）【下次试试放在培养箱里】，在显微镜下观察细胞全部悬浮即消化完成（此时细胞成圆形），立即加入3-4ml培养液，使其稀释胰酶（否则会杀死细胞），难脱落的可以敲打培养盒使其悬浮脱落。
用移液管进行吹打，使贴壁细胞完全脱落，吹打的时候要从上往下，从靠近瓶口端向瓶底端吹打。
并且要注意尽量不产生泡沫。
吹打完成后，将液体移至离心管，1000转离心2-3分钟左右，弃上清液。
加入适量新鲜的培养液（2~3ml），吹打混匀，并进行分装，补充培养液。
4.冻存：细胞传到第三代，传代后的第二天，细胞正处于减数分裂期，在这个时期冻存（细胞的活性最大），要冻存的培养盒中保证传代时的浓度比较大。
阿片类物质和天然多酚类化合物对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的生理作用及可能机制
阿片类物质和天然多酚类化合物对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的生理作用及可能机制阿片类物质和天然多酚类化合物对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的生理作用及可能机制谷氨酸是一种重要的神经递质，在中枢神经系统中发挥重要作用。
然而，在某些情况下，高浓度的谷氨酸可以导致神经细胞发生受损和死亡，对神经系统功能产生不良影响。
PC12细胞是一种实验室常用的神经母细胞瘤细胞系，广泛应用于神经细胞损伤的研究中。
通过使用PC12细胞模型，可以探讨细胞毒性因子的作用机制，并研究潜在的治疗方法。
阿片类物质是一类具有镇痛和镇静作用的药物，如吗啡、海洛因等。
研究表明，阿片类物质对谷氨酸诱导的细胞损伤具有保护作用。
阿片类物质可以通过抑制谷氨酸受体的活性，减少谷氨酸的神经毒性作用，从而降低PC12细胞的损伤程度。
此外，阿片类物质还可以调节细胞内钙离子浓度，减少氧化应激反应和减轻细胞发炎反应，进一步减少细胞死亡。
天然多酚类化合物是一类广泛存在于植物中的化合物，如类黄酮、儿茶素等。
天然多酚类化合物被广泛认为具有抗氧化、抗炎和抗肿瘤等多种生理活性。
研究发现，天然多酚类化合物对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤也具有保护作用。
天然多酚类化合物可以通过清除自由基、抑制氧化应激反应和调节细胞凋亡途径，减轻细胞损伤。
阿片类物质和天然多酚类化合物对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的作用机制有许多相似之处。
阿片类物质和天然多酚类化合物都可以通过提高抗氧化能力，减轻谷氨酸引起的细胞氧化应激；抑制细胞凋亡途径，减少谷氨酸诱导的细胞死亡。
此外，阿片类物质和天然多酚类化合物还可以通过调节钙离子平衡，减少PC12细胞内钙离子浓度的增加，从而减轻谷氨酸对细胞的毒性作用。
综上所述，阿片类物质和天然多酚类化合物对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤具有明显的保护作用，并且这一保护作用可能通过多种机制发挥。
这些研究成果为进一步探索神经细胞保护的新途径和药物开发提供了新的思路。
然而，还需要进一步研究阐明阿片类物质和天然多酚类化合物的具体作用机制，并评估它们的安全性和有效性，为临床应用提供可靠的依据综合研究表明，阿片类物质和天然多酚类化合物对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤具有保护作用，可能通过提高抗氧化能力、抑制细胞凋亡途径和调节钙离子平衡等多种机制发挥其作用。
PC12细胞转化为神经元样细胞的培养、鉴定及氧糖剥夺模型的制备
PC12细胞转化为神经元样细胞的培养、鉴定及氧糖剥夺模型的制备何金婷;莽靖;郭洪亮;梅春丽;胥桂华;陈罕;徐忠信【摘要】@@ 本实验采用PC12细胞是由大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤分离并建立起的细胞系,其在体外经NGF刺激诱导后可向交感神经元分化,最终导致PC12细胞在生理、生化方面具有神经元样的功能,同时应用体外氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)来模拟体内脑缺血过程,为探讨缺血缺氧状态下对神经元的活力、凋亡、信号通路机制的研究定物质基础.【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2012(016)005【总页数】3页(P769-771)【作者】何金婷;莽靖;郭洪亮;梅春丽;胥桂华;陈罕;徐忠信【作者单位】吉林大学中日联谊医院,神经内科,吉林,长春130033;吉林大学中日联谊医院,神经内科,吉林,长春130033;吉林大学中日联谊医院,神经内科,吉林,长春130033;吉林大学中日联谊医院,神经内科,吉林,长春130033;吉林大学中日联谊医院,神经内科,吉林,长春130033;吉林大学中日联谊医院,神经内科,吉林,长春130033;吉林大学中日联谊医院,神经内科,吉林,长春130033【正文语种】中文本实验采用PC12细胞是由大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤分离并建立起的细胞系，其在体外经NGF刺激诱导后可向交感神经元分化，最终导致PC12细胞在生理、生化方面具有神经元样的功能，同时应用体外氧糖剥夺（oxygen－glucose deprivation，OGD）来模拟体内脑缺血过程，为探讨缺血缺氧状态下对神经元的活力、凋亡、信号通路机制的研究定物质基础。
1 材料和方法1.1 实验细胞大鼠PC12细胞株购自北京金紫晶生物医药技术有限公司（中国医学科学院肿瘤细胞库）。
鼠神经生长因子（NGF）（Sigma公司，美国）。
1.2 实验方法1.2.1 PC12细胞的培养、传代将细胞悬液加入含有DMEM完全培养基，培养液2－3天更换一次。
细胞培养细节归纳
操作时需小心
3 病毒之间的交叉污染（时刻警惕！！） 养成良好的实验习惯和规范操作。 比如：洗手、操净台预开15min、开紫外灯等 定期用一瓶细胞提DNA检测。 进细胞培养的房间需穿房间内的白大褂！
二 细胞长过头（常见） 细胞分瓶时间的把握： 由于在细胞瓶中，中间细胞长得比较快，所 以要以瓶中间细胞的量为标准，90% 时分， 不要在意瓶子头和尾部的细胞量。 SP2/0细胞尤其要注意：不能以90%为标准， 细胞一个连着一个时即需要分，不能等到细胞 一个挤一个时分。（视野下细胞一个连着一个 时为圆形，一个挤一个时细胞成多边形）。 细胞一旦长过头，即弃掉，已失去价值，不必 浪费时间。
细胞培养细节归纳
常见问题及其原因分析 培养过程的细节 复苏 分皿 接毒 冻存 细胞板的使用 需进一步解决的问题
常见问题及其原因分析
一 污染 配培养液时需小心 1 细菌污染 特点：24h后或分皿细胞全部漂浮、培养液浑浊、镜 下可见细菌穿梭运动、LB上可长出菌落、打开瓶盖 时有味 原因：细菌污染一般比较少见，问题一般出在培养基 上。操作上（ 比如配培养基瓶子未干烤、配培养基 过滤时滤膜松动。） 如果培养液被污染，则未开瓶的培养基在4度放2周后， 会出现发黄，细菌沉淀下来，摇动后，浑浊。
排 枪
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96孔细胞板
六 TCID50测定中的注意点 1 病毒液的梯度稀释 病毒液融化后，立即放冰浴上； 不同稀释度的枪头不能交叉； 稀释后的病毒液加入细胞板时从低浓度到高 浓度依 次进行 2 细胞板的固定 冷甲醇（或其他）100微升/孔，在4度放10min后， 立即排干（可在-20度中保存） 3 免疫荧光测定 一抗、二抗每次作用时是放在37度水浴箱中（湿盒作 用） 一抗、二抗的量也不是越多越好！
CBS基因过表达PC12细胞株的建立及鉴定
ＣＢＳ基因过表达ＰＣ１２细胞株的建立及鉴定尹蔚兰１，２，廖志强２，阳柏成２，姜骆永２，文芳１，邬力祥１（１中南大学基础医学院，长沙４１００８３；２南华大学医学院） 摘要：目的 建立胱硫醚-β-合成酶（ＣＢＳ）基因过表达ＰＣ１２细胞株并进行鉴定。
方法 根据ＧｅｎＢａｎｋ数据库中的ＣＢＳｃＤＮＡ序列设计合成ＣＢＳ基因引物，ＰＣＲ扩增ＣＢＳ基因，并将其克隆到慢病毒过表达载体ＧＶ３４１中，用慢病毒过表达载体连同两种包装病毒载体对２９３Ｔ细胞进行转染，收获含ＣＢＳ慢病毒载体的上清液，用其感染正常的ＰＣ１２细胞，用嘌呤霉素进行筛选得到ＣＢＳ基因过表达ＰＣ１２细胞株。
用实时荧光定量ＰＣＲ法检测所得ＰＣ１２细胞（观察组）、空载体转染的ＰＣ１２细胞（对照组）、正常ＰＣ１２细胞（空白组）中的ＣＢＳｍＲＮＡ。
用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测上述三组细胞中的ＣＢＳ蛋白。
结果 观察组、对照组、空白组ＰＣ１２细胞ＣＢＳｍＲＮＡ表达量分别为１６２．２０±１１．２０、１．００±０．０３、２．３０±０．０７，ＣＢＳ蛋白表达量分别为１．５３±０．０９、１．００±０．１０、０．９６±０．１０。
观察组ＰＣ１２细胞ＣＢＳｍＲＮＡ、蛋白表达量均高于对照组和空白组（Ｐ均＜０．０５），对照组ＰＣ１２细胞ＣＢＳｍＲＮＡ、蛋白表达量与空白组相比差异均无统计学意义。
结论 成功构建ＣＢＳ基因过表达ＰＣ１２细胞株。
关键词：ＰＣ１２细胞；胱硫醚-β-合成酶；慢病毒载体 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２-２６６Ｘ．２０１６．２６．００５ 中图分类号：Ｑ７８２ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００２-２６６Ｘ（２０１６）２６-００１７-０３基金项目：国家自然科学基金资助项目（８１２００９８６）；国家级大学生创新创业训练计划项目（２０１３１０５５５１９６）。
第一作者简介：尹蔚兰（１９７３-），女，硕士，在读博士，副教授，主要研究方向为神经退行性疾病发病机制及防治。
细胞培养技巧与注意事项分享
细胞培养技巧与注意事项分享细胞培养是生物学研究中常用的实验技术之一，它可以帮助研究人员了解细胞的生理功能、疾病发生机制以及药物的作用机制等。
然而，细胞培养过程中存在着一系列的技巧和注意事项，下面将分享一些经验和建议。
首先，细胞培养的基本步骤包括细胞的分离、传代和培养。
在细胞分离过程中，要注意使用合适的酶或缓冲液来解离细胞，避免对细胞造成损伤。
此外，细胞的传代过程中需要注意细胞密度的控制，过高的细胞密度会导致细胞凋亡或细胞间的竞争，影响细胞的生长和健康状态。
其次，培养基的选择也是细胞培养中的重要环节。
常用的培养基包括DMEM、RPMI-1640、MEM等，不同类型的细胞需要选择适合其生长的培养基。
此外，培养基中添加适量的血清、生长因子和抗生素等物质，可以提供细胞所需的营养和生长因子，并抑制细菌和真菌的污染。
细胞培养过程中，细胞的环境条件也需要合理控制。
细胞需要在适宜的温度、湿度和二氧化碳浓度下生长。
常见的细胞培养箱可以提供恒温、恒湿和恒气体环境，确保细胞处于最佳的生长状态。
此外，细胞的培养器皿也需要选择适合的类型，如培养皿、培养瓶、多孔板等，以满足不同实验需求。
细胞培养中还需要注意细胞的检测和鉴定。
细胞的纯度和活性对实验结果的准确性和可靠性有着重要的影响。
常用的方法包括细胞形态观察、细胞计数、细胞凋亡检测、细胞周期分析等。
此外，细胞的鉴定也需要通过免疫组化、PCR等技术来确认细胞的种类和来源。
在细胞培养中，细胞的污染是一个常见的问题。
细胞的污染来源包括细菌、真菌、支原体、病毒等。
为了避免细胞的污染，需要在实验室中建立严格的无菌操作规范，使用无菌器皿和试剂，并定期对培养环境进行消毒和清洁。
此外，细胞培养中的实验数据的记录和管理也是非常重要的。
及时、准确地记录实验操作步骤、培养条件和结果，有助于实验的重复性和可比性。
同时，对细胞的来源、传代次数和培养时间等信息进行管理，可以避免实验数据的混乱和错误。
细胞培养作为一项基础的实验技术，对于生物学研究具有重要的意义。
PC12细胞
PC12细胞培养PC12细胞是大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株，具神经内分泌细胞的一般特征，因其具可传代特点，广泛应用于神经生理和神经药理学研究。
1. PC12细胞有两种：未分化型和分化型。
其中未分化型的PC12细胞贴壁能力强，传代时需要胰酶消化，形状不规则。
分化型PC12细胞传代时不需要胰酶，直接可以吹下来，形状规则。
这两种细胞没有很大的区别，但我在实验中发现，未分化型的PC12细胞对药物的敏感性较之分化型的要差一些。
2. 由于PC12细胞是一种肿瘤细胞，在传代次数较多后，它的形状和性状会发生改变。
这些改变尤见于未分化型PC12细胞。
主要是细胞形状变得更加不规则，对药物的敏感性愈加下降。
因此，建议长期用PC12细胞作实验的战友最好严格控制细胞的传代次数。
3.在复苏细胞时动作一定要迅速，放入温水中1～2min后要马上加入培养液中，培养12～24小时后更换一次培养液，这样不仅可以把DMSO吸掉，而且可以将死亡的细胞也吸掉。
细胞一天一看即可，经常动会有影响。
注意过滤后血清的PH值，因为培养液过滤后PH值会有所改变。
复苏后的换液时间取决于您复苏时是否洗涤离心细胞，去除了冻存液中的DMSO，如果没有去除DMSO，细胞培养过夜后就要彻底换液；如果复苏时洗涤离心过，可以待传代时再换液也可。
（据我个人经验，还是复苏时去除DMSO，细胞的生长状态好一些）4. 状态良好的细胞复苏后 4 h即可贴壁，开始增殖，大约2 d即可传代，接种48h应该到了对数增长期。
5. 每天观察一两次细胞我不认为会对细胞的生长造成不良影响，不过每次观察的时间不易过长。
6. 传代时我认为最好不要用胰蛋白酶，因为胰蛋白酶对细胞有破坏作用。
我以前用胰蛋白酶消化传代过PC12, 结果传代后的细胞虽然贴壁，形态也好，但就是增殖缓慢，所以我现在都是用枪吸取培养液直接吹打，传代后细胞增殖迅速，2 d就长满了（因为长的太快，我只好降低血清浓度，用5%FBS）7. 传代的时机最好选在细胞生长旺盛，占瓶底70%－80%时最好，如果细胞长的太满，细胞的状态会越来越差，最后大片死亡；这种细胞传代后生长也不好；而且长的太满后，细胞贴壁牢，难于吹起来，相反，70%－80%时细胞很容易吹起来。
PC-12细胞培养方案
PC-12细胞的培养一、 [所需溶液]1、细胞冲洗液：磷酸盐缓冲液(PBS)——无Ca、MgNACL 8.00g；KCL 0.20g;KH2PO4 0.20g;Na2HPO4 .。
12H2O 1.15g加水至 1 000mL,将PH调至7.4，高压灭菌。
2、消化液（1）胰酶-PBS结晶胰酶 2.5g;高压灭菌后的PBS 1000ml用磁力搅拌器搅拌均匀，使其完全溶解，通过0.22μm的滤膜过滤除菌，分装备用，放置—20℃保存。
（2）胰酶—EDTA:结晶胰酶 0.5g;EDTA盐溶液 0.2g无Ca、Mg PBS 1 000ml用磁力搅拌器搅拌均匀，使其完全溶解，通过0.22μm的滤膜过滤除菌，分装备用，放置—20℃保存。
3、培养液：用含有体积分数分别为5%FBS、5% HS、青霉素100 U/mL、链霉素100 U/mL的DMEM,于37℃、5% CO2的培养箱中进行培养。
PC12细胞为贴壁状态生长的细胞,当细胞覆盖率达80%左右时,用0.25%胰酶-0.02%EDTA消化传代备用。
配制方法：（1）调整培养液的ＰＨ值，用ＰＨ精密试纸观察ＰＨ７.２～７.４即可。
（2）过滤法除菌，所使用的滤器为Ｏ２加压过滤，０.２２μｍ滤膜，滤膜事先采用高压灭菌消毒。
（3）分装，加盖瓶塞，加封纱布报纸，用绳固定，放置—20℃保存。
二、［细胞的维持和培养］细胞的复苏1、准备一个盛有37℃温水的烧杯，从液氮罐中取出存有细胞的冻存管，放于37℃温水中，用镊子夹住轻轻摇动使其迅速融化。
2、1000～2000 r，3～5min离心。
3、在无菌操作台中采用75%的乙醇彻底擦拭冻存管，然后打开冻存管，注意动作要轻柔。
4、用1ml枪头将上清液去除，加入1ml预热的细胞培养液将细胞吹散开，转移至25cm2培养瓶中。
5、补充4ml的培养基，并且添加10%的胎牛血清。
6、倒置显微镜下观察，37℃、5%CO2培养。
24h后，更换新的培养液。
Mimics转染PC12细胞条件的优化
doidoi:10.3969/j.issn.1002-2481.2022.03.05山西农业科学2022，50（3）：314-318Journal of Shanxi Agricultural Sciences Mimics转染PC12细胞条件的优化任静，郝琴琴，成俊丽，李鹏飞（山西农业大学生命科学学院，山西太谷030801）摘要：PC12作为模式细胞已被广泛应用于多种疾病研究。
为探究高效、低毒的PC12的细胞转染方法，试验采用化学转染法，以带有5′-羧基荧光素（FAM）标记的NC mimics作为外源基因，分别用RFect、D-Portal、Tran‑sIntro TM EL、Lipofectamine3000和Lipofectamine2000等5种转染试剂转染PC12细胞以筛选最佳转染试剂；然后设置NC-FAM mimics浓度为50、60、70、80、90、100nmol/L，通过倒置荧光显微镜观察PC12细胞在最佳转染试剂下的荧光信号对转染效果进行评定。
结果表明，在相同的培养条件下，不同转染试剂对PC12细胞的转染效果之间存在较大差异，其中，TransIntro TM EL转染后荧光强度最高，D-Portal、Lipofectamine3000和Lipofectamine2000转染后荧光信号次之，RFect转染后荧光信号最弱；且不同处理对细胞损害无显著差异。
以TransIntro TM EL作为最佳转染试剂进一步优化NC-FAM mimics转染浓度发现，荧光强度随NC-FAM mimics浓度的增加呈现先增强后降低的趋势，且在NC-FAM mimics浓度为70nmol/L时荧光信号最强；此外不同浓度下的细胞数量无显著差异。
综上可见，以TransIntro TM EL作为转染试剂、NC-FAM mimics浓度为70nmol/L时，转染后PC12细胞荧光强度最高，转染效果最好。
关键词：PC12；化学转染法；TransIntro TM EL；NC-FAM mimics；荧光信号中图分类号：Q78文献标识码：A文章编号：1002-2481（2022）03-0314-05Optimization of Mimics Transfection Conditions in PC12CellsREN Jing，HAO Qinqin，CHENG Junli，LI Pengfei（College of Life Science，Shanxi Agricultural University，Taigu030801，China）Abstract：PC12cells has been widely used as a model for researches on many diseases.To explore transfection methods of PC12cells with high efficiency and low toxicity,in this study,using chemical transfection and taking5'-carboxyfluorescein (FAM)-labeled NC mimics as the foreign gene,five different chemical transfection reagents（RFect,D-Portal,TransIntro TM EL,Lipofectamine3000and Lipofectamine2000）were applied to transfect PC12cells for screening the optimal transfection reagent.Then,concentrations of NC-FAM mimics were set to50、60、70、80、90、100nmol/L,and transfection effects were evaluated by observing fluorescence signal of PC12cells with the optimal transfection reagent under an inverted fluorescence microscope.The results showed that transfection effects between different transfection reagents were significantly different on PC12cells under the same culture condition.The TransIntro TM EL had the highest fluorescence intensity,the group of D-Portal、Lipofectamine3000and Lipofectamine2000took the second place and the RFect had the lowest.In addition,there was no significant difference on injury of cells by different treatments.The further results showed that the trend of fluorescence intensity was first increased and then decreased with increase of the NC-FAM mimics concentration when TransIntro TM EL was taken as the optimal transfection reagent to optimize the NC-FAM mimics transfection concentration.And fluorescence signal was the strongest when the concentration of NC-FAM mimics was70nmol/L.There was also no significant difference on amounts of cells by different concentration.In summary,the PC12cells transfected with the concentraion of70nmol/L of NC-FAM mimics by Transintro TM EL as the optimal transfection reagent in this study had the highest-intensity fluorescence and the best transfection effect.Key words：PC12;chemical transfection;TransIntro TM EL;NC-FAM mimics;fluorescence signal将外源基因导入真核细胞内并使其表达的技术称为细胞转染技术，该技术是研究基因表达调控的重要手段。
多聚赖氨酸(Poly-L-Lysine)的配制、保存、使用总结
因为自己做PC12细胞培养，想在接种前将培育皿用多聚赖氨酸包被，到园子里搜索了下，关于多聚赖氨酸的帖子不少，看了一些帖子，将大部分收集在此。
个人觉得关于多聚赖氨酸的配置、保存、使用各方面问题，这些帖子里面都解释了。
注：我只是摘了一个帖子里某段或某句话。
一般一段话来自某一位战友。
一、常用的多聚赖氨酸包被可以用三蒸水，或者PBS，浓度一般为用0.1 mg/ml进行包被。
二、其他常用包被方法比较(以各种免疫分析为例)：49456826.snap三、我配成1mg/ml的储存液，用Mini-Q(超纯水)配制，放在－20℃储存，使用时稀释10倍（也用超纯水），即终浓度100ug/ ml，过滤后使用。
工作液过滤使用，如一次用不完，放在4℃储存。
多聚赖氨酸在水溶液中易分解，所以一次不要配太多工作液。
四、我现在要配多聚赖氨酸,书上写的用PBS配,但没写PH,浓度，向各位请教。
答：PH应该在7.0~7.4，PBS：取氯化钠7.650 g，无水磷酸氢二钠0.724 g，磷酸二氢钾0.210g 溶于蒸馏水1000 mL 中，以1N 氢氧化钠溶液调pH 值为7.0~7.4，经121℃灭菌15 分钟五、我准备用多聚赖氨酸涂片培养细胞,不知道多聚赖氨酸涂过的玻片如何灭菌？能否干烤灭菌？答：Sigma的产品说明书上写的很明白的。
另外，有本书上是这么写的，供参考：Poly-lysine-coated tissue culture surfacesTo coat coverslips: Prepare a stock solution by dissolving 25 mg/ml polylysine in 4.73 ml water (both poly-L-lysine an d poly-D-lysine are used to coat tissue culture surfaces; check specific protocol for choice of isomer) and filter sterilize throu gh a 0.22-μm filter. Store in 100-μl aliquots at ?20°C. When ready to use, dilute one aliquot in 40 ml water to prepare 13 μg/ml working solution. Sterilize coverslips by autoclaving prior to coating. Dip coverslips in the working solution, then incubate 15 min to several hours in a humidified 37°C, 5% CO2 incubator. Allow surface to dry.To coat culture dishes or 8-well chamber slides: Prepare a stock solution by dissolving 100 mg poly-lysine in 100 ml water (both poly-L-lysine and poly-D-lysine are used to coat tissue culture surfaces; check specific protocol for choice of isom er) and filter sterilize through a 0.22-μm filter. Store in 5-ml aliquots at ?20°C. When ready to use, dilute 1 part stock solutio n with 9 parts water to prepare 100 μg/ml workin g solution. Fill tissue culture dishes or slide wells with the working solution and incubate 1 hr in a humidified 37°C, 5% CO2 incubator, then remove solution by vacuum aspiration and allow surface to dry.Store coated tissue culture ware up to 3 months at 4°C. Use diluted solutions only once, but unused diluted aliquots can be stored up to 3 months at 4°C.你可以配置好PLL后单独将其过滤除菌，分装，待用。
细胞培养技术总结
血清使用问题的总结一、血清灭活问题。
1、问：加到培养基中的血清必须灭活吗？答：不是必须的，看做什么实验了。
2、问：四季青胎牛血清灭活是56℃30分钟吗？答：如果用于培养大多数的肿瘤细胞，血清一般是不需要灭活的，这样可以有效保存血清中的生长因子。
但是如果用于培养一些表面具有补体受体的细胞，如内皮细胞，血清是需要灭活，一般是56℃，30min。
3、问：我要做滋养细胞培养，胎牛血清要灭活吗？答：进口的一般都已灭活，国产的不一定，最好还是灭活一下再用较安全。
4、问：我用病毒上清转染细胞，培养用的血清需要灭活吗？因为血清中可能有些补体和抗体，是不是会影响转染？我想未灭活的血清中含些抗体补体可能会和病毒相结合，影响转染，正确吗？细胞是单核细胞白血病细胞，病毒是病毒包装细胞PT67收集的病毒上清。
为什么要用无血清培养基加病毒孵育几小时，目的是什么？答：血清一定要灭活，可以先用无血清培养基加病毒孵育几小时以后再加血清。
避免杂蛋白对病毒和宿主结合过程的干扰，一般是2-6小时，根据细胞的状态决定。
血清不一定需要灭活，灭活的目的是将血清中的补体灭活！这要根据实际情况而定，如果没有把握那就灭活吧，也不麻烦56度半个小时。
5、问：(1)我买的是杭州四季青的新生牛血清，要灭活吗？有些说法是需要，有些说直接解冻后就可以加入到培养基中；我配制胰蛋白酶液，用的是D-PBS，有关系吗？答：关于血清的热灭活，是很多人感兴趣也存在一定争议的话题。
大多数实验室将血清的热灭活还是作为常规来执行，因为有两个作用，第一是灭活补体，第二是灭活血清中可能存在的支原体。
但是实验者并没有考虑热处理对血清中的生长因子、氨基酸等成分带来的负面影响。
我在实验室处理血清的时候，有一次水浴箱在灭活过程中出现故障，温度升高到80℃，血清变成了凝胶状，我重新处理了另外一份血清，将两份血清对比，发现高温直接影响到血清所含的抗体蛋白。
在56℃下灭活半小时以上，肯定也会对里面的蛋白起到破坏作用。
PC12细胞在抗神经系统退行性疾病药物开发中的应用
PC12细胞在抗神经系统退行性疾病药物开发中的应用作者：赵光涛田清影李傅霞陈丽颖来源：《理科爱好者·教育教学版》2010年第03期摘要:神经系统退行性疾病一直是困扰医学界的难题,因此抗神经系统退行性疾病药物的开发也就成为了研究的重点,而能在该研究中发挥重要作用的体外研究手段也必会受到研究者们的重视,因此,本文就PC12细胞在抗神经系统退行性疾病药物开发中的应用做一综述。
关键词:PC12细胞神经系统退行性疾病帕金森病阿尔茨海默病药物开发【中图分类号】 G644.5 【文献标识码】 A 【文章编号】1671-8437(2010)03-00145-02PC12细胞是来源于Rattus norvegicus(褐家鼠)肾上腺嗜铬细胞瘤,是一种交感神经系统的肿瘤细胞,为儿茶酚胺能细胞,因此该细胞被广泛应用于神经系统疾病的体外研究,并有众多学者利用该细胞制作体外疾病细胞模型来研究不同发病因素在神经系统疾病发病过程中的作用,同时也被用来做抗神经系统退行性疾病药物开发。
一 PC12细胞在治疗帕金森病药物开发中的应用帕金森病(Parkinson’s disease,PD)主要源于中脑黑质致密部(substantia nigra parscompacta,SNpc)多巴胺神经元退行性变导致的神经元死亡,路易小体为其主要病理性特征,而组成这一路易小体的主要成分为α-突触核蛋白(α-synuclein)。
众多学者即以PC12细胞为体外模型较为充分的揭示了α-synuclein在帕金森病发病过程中的作用,并成功模拟了帕金森病的主要病理特征[1-2],也因此许多抗帕金森病的药物开发出来后,PC12细胞也就成为了评价这些药物疗效的必不可少的体外实验手段。
如Tianhong Pan等通过利用PC12细胞研究发现,雷帕霉素可以通过增强细胞的自吞噬作用来清除帕金森病发病过程中的异常蛋白的聚集,如路易小体等[3]。
雷帕霉素也因此发挥着神经保护的作用,可能被用来作为抗神经系统疾病的药物。
微囊化PC12细胞的分泌特征及其致瘤性
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PC12细胞培养
PC12细胞培养PC12细胞是大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株，具神经内分泌细胞的一般特征，因其具可传代特点，广泛应用于神经生理和神经药理学研究。
1. PC12细胞有两种：未分化型和分化型。
其中未分化型的PC12细胞贴壁能力强，传代时需要胰酶消化，形状不规则。
分化型PC12细胞传代时不需要胰酶，直接可以吹下来，形状规则。
这两种细胞没有很大的区别，但我在实验中发现，未分化型的PC12细胞对药物的敏感性较之分化型的要差一些。
2. 由于PC12细胞是一种肿瘤细胞，在传代次数较多后，它的形状和性状会发生改变。
这些改变尤见于未分化型PC12细胞。
主要是细胞形状变得更加不规则，对药物的敏感性愈加下降。
因此，建议长期用PC12细胞作实验的战友最好严格控制细胞的传代次数。
3.在复苏细胞时动作一定要迅速，放入温水中1～2min后要马上加入培养液中，培养12～24小时后更换一次培养液，这样不仅可以把DMSO吸掉，而且可以将死亡的细胞也吸掉。
细胞一天一看即可，经常动会有影响。
注意过滤后血清的PH值，因为培养液过滤后PH值会有所改变。
复苏后的换液时间取决于您复苏时是否洗涤离心细胞，去除了冻存液中的DMSO，如果没有去除DMSO，细胞培养过夜后就要彻底换液；如果复苏时洗涤离心过，可以待传代时再换液也可。
（据我个人经验，还是复苏时去除DMSO，细胞的生长状态好一些）4. 状态良好的细胞复苏后4 h即可贴壁，开始增殖，大约2 d即可传代，接种48h应该到了对数增长期。
5. 每天观察一两次细胞我不认为会对细胞的生长造成不良影响，不过每次观察的时间不易过长。
6. 传代时我认为最好不要用胰蛋白酶，因为胰蛋白酶对细胞有破坏作用。
我以前用胰蛋白酶消化传代过PC12, 结果传代后的细胞虽然贴壁，形态也好，但就是增殖缓慢，所以我现在都是用枪吸取培养液直接吹打，传代后细胞增殖迅速，2 d就长满了（因为长的太快，我只好降低血清浓度，用5%FBS）7. 传代的时机最好选在细胞生长旺盛，占瓶底70%－80%时最好，如果细胞长的太满，细胞的状态会越来越差，最后大片死亡；这种细胞传代后生长也不好；而且长的太满后，细胞贴壁牢，难于吹起来，相反，70%－80%时细胞很容易吹起来。
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一、PC12细胞的折光性本来就比较好，刚传代以及新分裂的细胞都是亮的，至于你说的贴壁的细胞，不知道是否是圆的，在牛血清的刺激下，特别是国产的，会使pc12细胞发生定向的分化，长突起，贴壁就比较牢。
PC12分为未分化的和分化的.前者是球状,成团生长;后者形成很多丝状体;而丁香园里有人说楼主的这种细胞严格来讲已经不能算是PC12了.前几天为自己养的PC12是未分化还是分化型困扰,查了一些资料,现发上来希望能给有同样问题的战友有一点帮助!培养条件:ＰＣ12细胞培养于铺有鼠尾胶原的玻璃培养瓶中,置于ＣＯ2培养箱(37℃,95%空气5%ＣＯ2),培养基选用ＤＭＥＭ(ｐＨ,高糖),加入10%灭活小牛血清及5%灭活马血清。
分化前:ＰＣ12细胞在培养基中多呈圆形,直径15～20μｍ,也有椭圆或多角形的,扁平的细胞少见,倾向于聚集成小团簇状(A图)。
分化后:加入ＮＧＦ后的24ｈ内细胞停止分裂,长出似交感神经元样的突起;第4～14ｄ,细胞体积增大,突起增多并增长,形成网络,数周后,突起可长达500～1000μｍ(B图)。
NGF可促进PC12细胞向类似交感神经元样的形态分化,最终导致PC12细胞在生理、生化方面都具有神经元样的功能[12]。
分化后的PC12细胞对ACh的敏感性增大5~7倍有的战友提到分化的PC12药敏性更好是不是因为分化后的PC12细胞对ACh的敏感性增大5~7倍二、我养这个细胞一年多了，有点经验和大家交流一下。
1.我用的是15％的马血清和%的胎牛，胎牛要用进口的，国产的容易分化。
2.关于表面处理的问题，值得注意的是胶原和多聚赖氨酸使细胞贴壁的原理不太一样。
多聚就是纯粹的物理黏附作用，而胶原则是刺激的细胞，使细胞的表达一些能有助于贴壁的蛋白，这种刺激作用还涉及到MAPK途径，所以如果做细胞信号转导的战友要注意到这点。
相关的文献可以自己到pubmed上查找。
3.完全分化的细胞不能传代，因为贴壁已经很牢固，强迫其脱离可能造成，尤其是细胞的突起断裂，细胞存活率很低。
4.用NGF刺激的24－48h后，细胞可以消化下来传代或者冻存，用于继续培养。
一般这种细胞叫做NGF activated cells。
用于检测待测物的NGF样活性，指标是细胞突起的程度。
5.楼上有照片贴出来细胞呈现梭形，严格讲这种细胞已经不能叫做PC12了。
严肃的话最好放弃。
6.该细胞容易聚集生长，传代种到新瓶子之前最好充分吹打，把细胞弄匀，否则传的细胞也呈现聚集的团，很难看。
我的经验是消化液用EDTA加比较稀的胰酶，这样消化的细胞比较容易成单细胞悬液。
三、我目前已经养PC12一个多月了，经验谈不上很多，不过失败的教训倒是不少，可以拿出来和大家分享一下1.细胞的培养基，我开始用10％FBS国产四季清的，DMEM，没加马血清和多聚赖氨酸什么的，因为条件关系，结果细胞贴壁性很好，生长速度还可以，3天1：2传代，在传到第5代时候，观察细胞状态下降，正常对照组也开始出现调亡，后查文献发现血清用多了，分析其内含有大量刺激生长物质，导致细胞出现分化，状态不稳定，目前改用5％FBS，DMEM，细胞生长速度明显放慢，现5天1：2传代，这和ATCC上PC12的倍增时间92小时比较接近。
2.传代时候的细胞密度，有人说传代时候细胞过密，可能导致细胞分化，但是我在细胞仅50～60％传代，细胞死亡率很高，因此目前改用80％传代，还算稳定，确实有分化的迹象，如，细胞出现多角形等，但属轻度，和楼主说的差不多，可能和我用国内血清有关。
3.胰酶对PC12无效。
我个人提出胰酶消化PC12是个错误观点，其一针对悬浮PC12，胰酶消化的效果不好证实，其二，我养的PC12，性质贴壁，用100％胰酶消化1小时，愣是没动静，细胞甚至不变圆。
最后用力拍打才可以，但代价是细胞损伤非常大，不好恢复。
其三，ATCC上明确建议用细胞刮勺刮取PC12，目前我改用刮勺，细胞传代后状态要比用胰酶消化的好很多。
4.再者关于1640和DMEM的问题，我个人观点，二者的主要区别在于DMEM含糖量高，神经细胞都喜欢这，另外1640含一些离子，是防止培养的细胞贴壁。
1640一开始主要应用于单克隆抗体的制备，其后因其比较适合国内特点，比如价廉物美啊，所以目前在很多细胞上都有应用，ATCC上建议用1640，更多的原因是防止贴壁，诱导分化。
不过，2种培养基我都试过，好像在国产5％血清的条件下，1640培养基不能改变PC12性状。
所以我采用DMEM，能量高啊。
5.因此我个人认为，5％的FBS，DMEM，足够PC12生长需要，4天左右1：2传代，可以不用贴壁处理（国产血清诱导轻度分化），如要求严格未分化，请参照ATCC推荐。
四、ATCC上明确说PC12倍增时间为48小时。
低分化:ＰＣ12细胞在培养基中多呈圆形,,也有椭圆或少量多角形的,扁平的细胞少见,倾向于聚集成小团簇状；高分化:细胞长出似神经元样的突起,培养一定时间后,细胞体积增大,突起增多并增长,可形成网络。
细胞发生的分化的原因无非就是自发和诱发的，你这种情况诱发的可能性较大，我觉的是不是你的血清用的不当比如浓度偏高，再核对一下血清浓度，或者细胞接种密度太高、太低。
由于血清中的各种生长因子和以及细胞代谢的自由基是最常见诱发细胞分化的因素。
张均田主编的<神经药理学研究技术与方法>中提到:在培养液中加入NGF（50ng/ml），可促使PC12细胞分化正像上面的朋友们说的在培养液中加入NGF(50ng/ml)会使pc12分化而具有神经细胞的形态特征但要分化48小时以上才能看出来，表现为细胞体增大，有突触外伸。
但需要注意的是分化后的细胞贴壁能力下降，因此在更换培养液时要小心，最好事先把培养皿用5ug/ml的poly-L-lysin 处理一下，这样即使分化后也不易剥离了。
还有就是NGF对玻璃的粘着性很强，在使用和保存时一定要用塑料容器。
pc12 在未分化时贴壁生长，但最好用5%HS,5%FBS/DMEM培养液，据说PC12在完全没有HS的培养液中贴壁不好。
我用的是CORNING的培养皿，PC12贴壁很好。
已经经过胶原蛋白处理的，因此贴壁很好。
2.为何要自己处理成分化型的呢，上海脑所就有分化型的细胞株买。
3.分化型的不用PLL处理的，但你如果不放心，可以用ml 的PLL处理过夜就可以了。
其实如果经费不足的话，国产的1%明胶同样处理过夜就可以了。
PLL和明胶都用灭菌的去离子水配。
分化的PC12细胞不用胰酶消化，未分化的才需要消化，就用％的胰酶消化就可，消化时在显微镜下观察突起变短，胞体变圆时就直接用培养基终止消化。
五、PC12细胞是大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株，具神经内分泌细胞的一般特征，因其具可传代特点，广泛应用于神经生理和神经药理学研究。
关于这株细胞，血清的使用比例大家是怎么配的？看文献在马血清和胎牛血清的使用上很不同。
大部分文献是10%马血清，5%胎牛。
而ATCC更是15%马+%胎牛1640和DMEM到底有多大区别？绝大部分人都用1640,也有小部分用DMEM,而ATCC是说用F12。
我用的是1640。
10%马血清，5%胎牛血清和双抗。
pc12细胞分为分化的和没有分化的，只有分化了的PC12才具神经内分泌细胞的一般特征，广泛应用于神经生理和神经药理学研究。
在一次性塑料培养皿上包被collagen或PLL都可以使分布均匀,贴壁良好,用我们公司的高结合力培养器皿和包被collagen相当或贴得更牢一些.其他实验我很少做,也就不清楚了.可以看看1976年Greene LA关于PC12细胞建系的文章，PUBMED上有全文：我养的是高分化的pc12细胞，培养基用高糖DMEM+10%HS+5%FBS+双抗，消化用％胰酶＋％EDTA,挺好养的还在养细胞吗？事隔三年了。
呵呵高分化了你当时也加了马血清吗？是的，还是要用10％的马血分化的:10%马血清+5%胎牛血清+1640(DMEM长的稍快)不分化的:10~15胎牛血清+1640(DMEM长的稍快)挺好养的,不能长得太满70%汇合就该传代了第二篇1.用NGF处理后，PC12细胞就会发生分化，所谓分化就是其长出突触，变成一种完全类似交感神经元的一种细胞模型。
因为成为了神经元的细胞模型，所以这种发生分化的细胞是不具有增殖能力的。
2.但是传说中的高分化的PC12的好像是一种细胞株，它类似于处在未分化PC12细胞跟NGF 处理后发生分化的PC12之间的状态。
它仍具有分离增殖的能力，性状长期保存。
还是一种肿瘤细胞株。
但是它在培养过程中贴壁生长，多边形而非圆形；未分化的PC12与之不同表现为悬浮生长，圆形。
但是我到ATCC查了一下只有PC12的介绍，它所描述的PC12就是未分化的PC12，A TCC中并无高分化的PC12。
而我周围同学包括园子里很多帖子讲到作试验所用的高分化的PC12细胞株是在上海典型培养物保藏中心买到的。
我就不知道这个高分化的PC12是不是国内一种细胞株呢？我看的很多外文文献要么是用未分化的PC12，要么使用NGF诱导分化的PC12，但是从来没有见到过高分化的PC12细胞株。
我不知道这个细胞株是不是国际公认的。
细胞英文名称PC-12 [PC12] 细胞中文名大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞形态特性多角形生长特性疏松贴壁，有多细胞聚集体特征特性该细胞系来自可移植的雄性大鼠的肾上腺嗜铬细胞瘤；表达神经生长因子(NGF)受体，NGF可诱导该细胞产生可逆性的神经表型。
该细胞可产生儿茶酚胺、多巴胺和去甲肾上腺素，但不合成肾上腺素。
培养基RPMI 1640 (w/o Hepes)血清5%FBS+10%HS其它因子无传代方法1:3传代；3~4天1次。
传代情况C5冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS支原体检测阴性二、关于PC12的一点看法众所周知,PC12是大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系,属神经嵴源性,具有神经细胞特性.由于具有分化型和未分化型两种形式,因此很多朋友包括我本人在内都困惑过做实验时应该选择哪种类型?根据最近查到的资料发现,无论分化型还是未分化型,都可以作为神经细胞来使用,分化型的PC12可以看待为成熟的神经元,因为无论形态还是生化特征都与神经细胞类似.而未分化型PC12可以看待为未成熟的神经元.值得注意的一个问题是,关于PC12培养液的使用,无论是DMEM还是1640,如果希望保持细胞的未分化状态,一定要添加马血清,用以封闭牛血清中可能促进其分化的某种成分,否则细胞就会渐渐分化.这种分化是一种不完全的分化,其形态并非像加入NGF之后那样完全分化. 有人说这样的细胞不能用于实验,但是通过国内外很多文献发现,许多实验研究都是用没有添加马血清的PC12做的,因此个人观点也认为这样的细胞是可以用于实验的,可以看作是未成熟的神经元向成熟的神经元分化过程中的过度状态.总体来说,PC12的资料很多很多,是国际上公认的神经细胞模型.我本人做的是神经细胞毒性实验,因此选择未分化型细胞即可满足需要.当然也可以选择分化型,没什么不妥.注意PH值，微酸则代谢较慢，不能换液太勤。