兔小肠组织大豆凝集素特异性结合蛋白分布的研究

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仔猪小肠黏膜特异性结合大豆凝集素的免疫组化研究

ＳＡ的反映是不同的［Ｂ２Ｊ。本研究旨在针对ＳＡ与仔Ｂ
（自吉林农业大学春雨种子公司）Ｂ购。ＳＡ的提纯采
用Ｎ一乙酰基一一半乳糖胺一ｐｘ— ｅｈｒｓ６ＤｅｏｙＳｐａｅＢ亲ｏ
和层析方法Ｂ。ＳＡ的纯度和生物活性鉴定采用凝胶
大豆凝集素（ｏｂａｇｌｉｎＳＡ）大豆籽ｓｅｎａｇｔｉ，Ｂ是ｙｕｎ实（子）种中的一种贮存蛋白质，其能使某些动物因的红细胞凝集（聚集合成团）凝而得名。ＳＡ的特异Ｂ
头，重（． ±０２）ｇ体３８．０ｋ。随机分为２组，每组６个重复。Ａ组为对照组，饲喂不含有任何豆科植物的代乳
部对ＳＡ的内吞作用较强。Ｂ
关键词：肠黏膜；豆凝集素；疫组织化学；猪小大免仔
中图分类号：８８５￥２．
文献标识码：Ｂ
文章编号：２８７３（００１－０３００５ — ０３２１）１０５ — ３
以８％的比例替代对照组日粮中的蛋白质，各组饲粮配制参照ＮＣＲｔ。试验期１（２２周２～８日龄）采用，全封闭舍饲，喂、饲饮水及防疫按常规方法进行。试
验期结束后，麻醉放血，立即取十二指肠、空肠前
２１年第４卷第１期００６１
ＮｕｒｉｎａｄＦｅｓｕｆｔｔｎｅｄｔｆｉｏｓ・营荠阉料

大豆凝集素对小肠上皮细胞和红细胞凝集能力的研究

１１固定化红血球的制备（二醛法）．戊从心脏采取新鲜兔血，注入加有肝素（０Ｕ／３ｍＬ）一颗玻璃珠的锥形瓶中，动，脱和摇以去纤维蛋白，并在４ ℃下静置２，２层纱布过～７ｄ用滤。取脱纤维后的血液，２００ｒｍｉ， ℃ 离心在０／ｎ４１ｎ０ｍｉ，用ＰＳ（．２Ｂ００ｍｏ／磷酸缓冲液和ｌＬ０１ｍｏ／Ｃ．ｌＬＮａ１的混合溶液，Ｈ．）涤，ｐ７２洗在
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动物营养学报２０，０２：３．３０８２（）２４２７ＣｉｅｅｏｒａｏｉｌｔｉｏｈｎｓＪｕｎｌｆｍａｒｉＡｎＮｕｔｎ
大豆凝集素对小肠上皮细胞和红细胞凝集能力的研究
凝集素能与特异性糖或糖的复合物专一地、非共价的可逆结合，专一结合是凝集素最基本的特糖性。Ｌｅｅ等ｎ发现大豆凝集素（ｏｂａｇｌｔｉｎｒｓｙｅｎａｇｕｉ．

化量，同时参照传统的红细胞凝集法测定结果，比较
保存３～６个月。
１２大豆凝集素（Ｂ的红细胞凝集能力的测定．ＳＡ）１２１ＳＡ对兔红细胞凝集活力的测定．．Ｂ在“ 型血凝板的第１８列的第１行的孑中ｖ” ～Ｌ
集作用。ＳＡ对兔小肠上皮细胞有结合能力，合率为３％左右。试验结果说明大豆凝集素的血凝活性具种属Ｂ结０

大豆抗营养因子的研究概况

·油脂工程·大豆抗营养因子的研究概况刁恩杰丁晓雯（西南农业大学食品学院）【摘要】大豆具有很高的营养价值，但大豆中存在的抗营养因子阻碍了机体对营养物质的消化吸收和利用。

本文分别介绍了各种抗营养因子的结构、抗营养机理及去除方法。

【关键词】大豆；抗营养因子；研究中图分类号：文献标识码：文章编号：（）大豆抗营养因子（简称）根据耐热性分为热稳定性和热不稳定性。

其中热稳定性包括大豆抗原蛋白、植酸、大豆寡糖等；热不稳定性包括胰蛋白酶抑制剂、糜蛋白酶抑制剂、植物凝集素、致甲状腺肿素、脂肪酶抑制剂、皂甙等。

抗营养因子胰蛋白酶抑制剂大豆胰蛋白酶抑制剂（简称）是大豆中的主要抗营养因子，相对分子量在之间的多肽类或蛋白质，具有生物活性，其在大豆中含量约。

大豆中的胰蛋白酶抑制剂（简称）约有种，但迄今只有种胰蛋白酶抑制剂得到较详细的研究。

蛋白酶抑制剂的主要抗营养机理是它与胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶结合成复合物，使这些酶失去活性。

这样，一方面影响糜蛋白酶的消化，另一方面又可反馈促使胰脏增加这些消化酶的分泌而造成内源蛋白质的大量损失，从而制约了营养成分的利用，使转化率降低。

植物凝集素大豆的植物凝集素是一个四聚体糖蛋白，有数量相等的结构并由不同的种亚基构成。

其抗营养作用机理是通过它与肠粘膜上皮细胞受体结合导致细胞内吞，进而干扰消化和吸收，由于肠粘膜的损伤，会使粘膜上皮的通透性增加，这样，植物凝集素和其他一些肽类便可被人体吸收，可对机体的免疫系统产生影响。

凝血素大豆中的凝血素是一种以高亲和性将聚糖结合在糖蛋白、糖脂或多糖上的糖蛋白。

近来研究表明：大豆凝血素除凝血作用外，还具有刺激肠壁、妨碍消化吸收营养物质以及影响小肠粘膜细胞代谢、肠道内细菌生态及免疫机能等不良作用。

致甲状腺肿素致甲状腺肿素在大豆中含量极微，其前体物质是硫代葡萄糖苷。

它的抗营养机理是：硫代葡萄糖苷在硫代葡萄糖苷酶的作用下发生酶解，生成的配基进一步生成氰、硫氰酸酯、异硫氰酸酯，其中异硫氰酸酯在中性条件下自动环化成恶唑烷硫酮，后种物质主要影响动物甲状腺的形态与功能，是致甲状腺肿大的主要物质。

凝集实验报告

凝集实验报告篇一：细胞凝集反应实验报告细胞生物学实验报告一．二．实验名称：细胞凝集反应实验原理：细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分支状糖外被。

目前认为：细胞间的联系，细胞的生长和分化，免疫反应和肿瘤发生都和细胞表面的分支状糖分子有关。

凝集素（lectin）是一类含糖的（少数例外）并能与糖专一结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。

凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。

凝集素是指一种从各种植物，无脊椎动物和高等动物中提纯的糖蛋白或结合糖的蛋白，因其能凝集红血球(含血型物质)，故名凝集素。

常用的为植物凝集素(Phytoagglutin, PNA)，通常以其被提取的植物命名，如刀豆素A(Conconvalina,ConA)、麦胚素(Wheat germ agglutinin, WGA)、花生凝集素(Peanut agglutinin, PNA)和大豆凝集素(Soybean agglutinin, SBA)等，凝集素是它们的总称。

凝集素不是来源或参与免疫反应的产物，它们具有的某些“亲合”特性，能被免疫细胞化学技术方法所应用。

血型鉴别实验，也是凝集反应的一种。

三．实验用品：土豆块茎显微镜，粗天平，载玻片，滴管2支，离心管2支PBS缓冲液：称取NaCl7.2g，Na2HPO41.48g,KH2PO40.43g,加蒸馏水，定容至1000ml，调pH值到7.2.4.2%的红细胞四．实验步骤：1. 称取土豆去皮块茎2g，加10mlPBS缓冲液，浸泡2h，浸出的粗提液中含有可溶性土豆凝集素。

2. 以无菌方法抽取兔子静脉血液（加抗凝剂），加生理盐水3ml，在1000r/min，离心5min，重复3次离心，最后按压积红细胞体积用生理盐水配成1%红细胞液。

3. 分别用滴管吸取土豆凝集素和1%红细胞液各一滴，置双凹片左孔内，充分混匀。

大豆凝集素的纯化及其凝集不同肿瘤细胞的探讨

ISS N 100727626C N 1123870ΠQ中国生物化学与分子生物学报Chinese Journal of Biochemistry and M olecular Biology2003年6月19(3):401～405・研究简报・大豆凝集素的纯化及其凝集不同肿瘤细胞的探讨荆　剑,　赵　翔,　张　页3(北京大学医学部细胞生物学与遗传学系,北京　100083)Purification of Soybean Agglutinin and Its AgglutinationActivity Tow ard Different C ancer Cell LinesJ I NGJian ,ZH AO X iang ,ZH ANG Y e3(Department o f Cell Biology and G enetics ,Peking University H ealth Science Center ,Beijing 100083,China )Abstract A novel and efficient method for purification of s oybean agglutinin (S BA )from s oybean wasreported.The method was characterized by selective extraction of S BA from s oybean hom ogenate with barbiturate bu ffer (pH 612),rem oval of im purity by hydroxyapatite ,and the final purification of S BA by guaran affinity chromatography.The purified S BA showed a single band of 2715kD by S DS 2PAGE.The lowest concentration of S BA that caused agglutination of the rabbit red blood cells was 0131mg ΠL.Agglutination of different cancer cell lines by the purified S BA was examined.Strong agglutination of the human nas opharyngeal C NE cells ,m ouse Lewis lung carcinoma cells ,and rat mammary adenocarcinoma R3230AC cells was observed.H owever ,S BA could not agglutinate the human hepatocellular carcinoma BE L 27402cells ,suggesting that unlike the above 2mentioned three cell lines ,the BE L 27402cells may not express N 2acetylgalactosamine (G alNAc )or galactose (G al )residues in significant am ount at the non 2reducing terminals of their cell surface glycans.K ey w ords s oybean agglutinin ,affinity chromatography ,hydroxyapatite ,malignant cells 中图分类号　Q94611,Q279收稿日期:2002209203,接受日期:2002211206国家自然科学基金资助项目(N o.30070184)3联系人　T el :(010)62092469,E 2mail :pagezyzhang @荆　剑,男,1975年6月生,硕士Received :September 3,2002;Accepted :N ovember 6,2002Supported by National Natural Science F oundation of China (N o.30070184)3C orresponding author T el :(010)62092469E 2mail :pagezyzhang @ 大豆凝集素(S BA )能特异识别N 2乙酰氨基半乳糖(G alNAc )或半乳糖(G al ),引起兔红细胞凝集[1].正常人体细胞表面糖链上的G alNAc 或G al 通常被唾液酸分子覆盖,不能被S BA 识别.新近研究表明,能被S BA 特异识别的异常糖链可在多种恶性肿瘤细胞上表达,包括:大鼠乳腺癌细胞系R3230AC[2],小鼠乳腺肿瘤细胞系TPDMT 24[3],小鼠T 细胞肝转移淋巴瘤L5178Y 2F9、S L225[4],小鼠Lewis肺癌细胞[5],人类结肠癌细胞系HT29、SW1222[6],人类胰腺癌细胞系Hup 2T3、Hup 2T4[7],人类乳腺癌细胞系T 247D [8],附睾乳头状囊腺癌[9]等.其中,人类原发乳腺癌细胞和人类结肠癌细胞上S BA 所识别结合的糖链结构为αG alNAc 2O 2serine Πthreonine ,即著名的肿瘤相关糖抗原Tn 抗原[10].提示我们有可能利用S BA 研发新型、广谱的肿瘤诊断和靶向治疗用生物制品.另外也有学者利用辣根过氧化物酶标记的S BA 作为示踪物观察了神经损伤后传入神经纤维的生长分布情况[11];运用S BA 2Sepharose 亲和层析柱快速分离C D34阳性造血干细胞[12]等.因此,S BA 已成为一种有广泛应用前景的生物制剂.虽然S BA 的生物来源丰富,极具开发潜力,但目前的多种S BA 提取方法均存在操作步骤烦琐、效率低、成本高的弊病,无法满足大规模研发利用的需要.本文对纯化过程中各关键步骤,包括抽提、沉淀,以及随后的色谱柱分离等,进行了系统性的优化改进,提出了一种新的高效纯化方案.进而利用纯化的S BA 探讨了对几种不同癌细胞系的凝集反应.1　材料和方法111　材料与仪器东北黄豆购自市场.人鼻咽癌C NE细胞系、大鼠乳腺癌SHZ288细胞系购自上海细胞生物所.小鼠Lewis肺癌细胞、肝癌BE L27402细胞为本实验室保存.羟基磷灰石(hydroxyapatite,H A)由本实验室按文献[13]制备;瓜耳胶(guar gum)购自Fluka;S BA纯品(用作标准品)和分子量标准蛋白质购自Sigma公司.所用主要仪器有:垂直电泳仪EPS601 (Amersham Pharmacia Biotech AB),H D23紫外检测仪(上海沪西分析仪器厂),J F29902色谱工作站(北京佳分分析仪器有限公司).兔红细胞制备如下:自新西兰大白兔耳缘静脉取血,以含5000UΠml肝素的生理盐水抗凝,离心分离红细胞,以生理盐水洗涤3次后,用凝集反应液(20mm olΠL巴比妥钠,0185%NaCl,0102%NaN3,1 mm olΠL CaCl2和MnCl2,011%明胶,pH714)配成1%兔红细胞悬液待用.112　方法11211　S BA的粗提　称50g黄豆以蒸馏水浸泡过夜,共加500ml,4℃平衡的匀浆缓冲液(20mm olΠL巴比妥钠,0185%NaCl,0102%NaN3,1mm olΠL CaCl2和MnCl2,1mm olΠL P MSF,pH6120),用家用制豆浆机匀浆(12000rΠmin,2min),所得匀浆液于4℃下搅拌4 h,离心(8000g,20min),收集匀浆上清液共330ml,向上清液中加入磷酸盐颗粒(Na2HPO411136g, NaH2PO4・2H2O3112g),调节pH值至7左右,并确保磷酸盐浓度为100mm olΠL,即为S BA粗提液.11212　H A吸附过滤　将H A(100ml压积)填充于G3砂芯漏斗中,用150mm olΠL磷酸盐缓冲液(P B,含1 mm olΠL CaCl2和MnCl2,pH712)平衡,将粗提液缓慢加入到漏斗中,待粗提液全部滤过后,用250ml150 mm olΠL P B洗涤H A,收集滤过液(含S BA)550ml. 11213　亲合层析　按照文献[14]的方法制备交联瓜耳多糖凝胶,配1L20%异丙醇,加入7g NaOH (终浓度0117m olΠL),完全溶解后加入50g瓜耳胶粉末,剧烈搅拌防止瓜耳胶成团.15min后,加15g 32氯环氧丙烷(终浓度0116m olΠL)于粘稠的瓜耳胶溶解液中.在40℃的恒温水浴中持续搅拌3h后提高温度至70℃过夜.加入1m olΠL HCl溶液以中和碱,用过量的蒸馏水清洗数次,即得交联瓜耳多糖凝胶约600ml.取部分凝胶填充亲和层析柱(312cm×24cm),以20mm olΠL P B(pH712)作为平衡液洗柱.将前述S BA滤过液上样,待平衡液洗涤至A280< 0102时,换用含1%乳糖的平衡液洗脱,紫外检测仪监测并用色谱工作站记录图谱,收集洗脱峰,检测凝集活性.所得S BA洗脱液对5mm olΠL P B(pH712)透析除去乳糖,冷冻干燥后即得S BA纯品.11214　纯度鉴定　以S DS2PAGE鉴定S BA纯度,样品缓冲液含巯基乙醇,凝胶浓度为15%,电泳后用考马斯亮蓝染色,分析各提取阶段S BA的纯度. 11215　蛋白质含量测定　精确称量购自Sigma的S BA纯品,配成标准浓度的溶液,测A280nm吸光值,求得S BA的消光系数ε,并据此用紫外吸光法测定纯化后S BA的含量.对于匀浆粗提液和H A柱滤过液,采用Brad ford法测定其总蛋白质含量.11216　S BA凝集活性及比活性的测定　凝集活性测定参照文献[15],即:向试管(1cm×10cm)中加入待测样品100μl,用凝集反应液作倍比稀释,加入100μl1%兔红细胞悬液,振荡混匀,室温静置3h后观察管底凝集图象,判断凝集程度的强弱.比活性的测定:将纯化S BA与标准S BA(起始蛋白质浓度均为0125mgΠml)分别进行倍比稀释,比较二者的兔红细胞凝集活性.匀浆粗提液和H A柱滤过液亦依次倍比稀释测定凝集活性,以标准S BA的最低凝集浓度为参考,计算样品的S BA含量与比活性.11217　S BA与几种癌细胞的凝集反应　癌细胞用1640培养液加10%小牛血清培养,实验前用0125%胰酶消化使细胞游离,用含血清的培养液终止胰酶后,用含1mm olΠL CaCl2和MnCl2的生理盐水溶液清洗,配制成2×105Πml的细胞悬液,实验组中加入S BA(终浓度40mgΠL),对照组中不含S BA,室温静置10min后于显微镜下观察结果并作记录.2　结果211　SBA的纯化及纯度鉴定S BA纯化过程如下:大豆以巴比妥钠2乙酸缓冲液(pH612)一步匀浆抽提后,经H A过滤和交联瓜耳多糖凝胶柱亲和层析,即可得到S BA纯品.S DS2 PAGE检测S BA纯化过程如Fig11所示:①粗提液(泳道1)、H A色谱柱流出液(泳道2)均有很多杂蛋白区带.②经亲和层析提纯的S BA(泳道3)只有一条蛋白带,位置与Sigma公司S BA纯品(泳道4)相同,分子量为2715kD.用Sigma公司的S BA标准品测算出1mgΠml S BA溶液ε280nm=01936(光程=1cm),根据此值测算204中国生物化学与分子生物学报19卷出从50g 黄豆中可获得6816mg 电泳纯的SBA.Fig.1　Analysis of the sam ples from different purification steps by S DS 2PAGE1:Crude s oybean extract (10μg );2:Filtrate from H A (10μg );3:S BA after affinity chromatography (10μg );4:S BA from S igma212　纯化SBA 的比活性测定S BA 能特异凝集兔红细胞,凝集强度随S BA 的倍比稀释逐渐减弱,直到凝集临界状态(critical agglutination ),即肉眼观察不到明显红细胞凝集,而在显微镜下观察有明显的红细胞凝集块.经测定,纯化S BA 与标准S BA 临界凝集浓度均为0131mg ΠL ,二者的比活性相同,均为312×104U Πmg.各步骤的纯化系数和产率见T able 1.213　SBA 与几种癌细胞的凝集反应S BA 对人鼻咽癌C NE 细胞有明显的凝集作用(Fig 12B ),未加S BA 的对照组(Fig 12A )则无凝集现象.小鼠Lewis 肺癌细胞、大鼠乳腺癌SHZ 288细胞的凝集实验结果与人鼻咽癌C NE 细胞凝集实验结果相似.而在同样条件下S BA 对肝癌BE L 27402细胞无凝集作用.　T able 1　Purification of S BAT otal protein ΠmgT otal activity ΠU 3S pecific activity ΠU ・mg -1Purification factorY ield (%)Crude s oybean (50g )extract 4252.08.5×106 2.0×1031100H A filtrate3227.08.2×106 2.5×103 1.396.5G uaran affinity chromatography68.62.2×1063.2×10416.025.93The agglutination unit (U )is defined as the am ount of S BA that can cause critical agglutination of 200μl rabbit erythrocytes in a concentration of 0.5%(packing v olume )Fig.2　Agglutination of human nas opharyngeal CNE cells by S BA (A )W ithout S BA (×252);(B )W ith 40mg ΠL S BA (×252)3　讨论S BA 的现有纯化方法多采用硫酸铵沉淀法进行第一步初级分离,但我们的预实验表明,当样品体积较大(超过300ml )时,沉淀物的透析脱盐操作很不便,而且透析后的溶液很粘稠,常导致随后的亲和层析柱堵塞.我们曾尝试通过冷乙醇沉淀法和S BA 等电点(pI 5115)沉淀法进行初级分离,但实验发现二者均无明显的分离效果,且当匀浆缓冲液的pH 值为612时,凝集活性集中在离心后的上清液中,而沉淀物用50mm ol ΠL 的磷酸盐缓冲液(pH 716)溶解后,只有极低的凝集活性,表明大量杂蛋白在pH 612时处于沉淀状态.因此,我们设计了在pH 612条件下匀浆抽提S BA 的方案,避免了过多杂蛋白的溶解,有效降低了粗提液的粘度.H A 分子表面有带正电荷的位点,能吸附带有磷酸根或羧基等基团的分子[16].S BA 等电点为5115,在pH 值大于等电点时带负电荷,可被H A 吸304第3期荆　剑等:大豆凝集素的纯化及其凝集不同肿瘤细胞的探讨　附.我们曾探索了多种H A柱层析条件,发现均不能获得电泳纯S BA.因而采用了相反的策略,即在150 mm olΠL磷酸缓冲液条件下,使H A对杂质吸附,但对S BA不吸附.从而使通过H A柱滤过液澄清透亮、粘稠度降低并保留了绝大部分S BA的凝集活性(T able 1),适合下一步的亲和层析分离.瓜耳胶价廉易得,文献曾报道用瓜耳胶制备交联瓜耳多糖凝胶作为过滤介质[14].我们根据瓜耳胶糖含G al残基的特点,在此利用12氯环氧丙烷交联瓜耳多糖凝胶作为亲和层析介质,成功纯化了S BA.国内关于凝集素的研究近年来有较多报道,包括孔石莼凝集素[17]、油麻藤种子凝集素[18]、格拉姆柱花草凝集素[19]、红桂木凝集素[20]、杨树菇凝集素[21]、藏红花凝集素[22]的纯化和活性研究等.传统纯化方法的共同特点是,原材料经匀浆,硫酸铵沉淀法初级分离后,用分子筛色谱柱或离子交换柱进一步分离,最终通过亲和层析柱,得到目的凝集素.以上方法在进行凝集素的大批量制备时不免会遇到诸如操作过程复杂,成本高,效率低等问题.关于大豆凝集素纯化,国内曾有采用疏水作用色谱法[23]的文献,但所得S BA未经S DS2PAGE鉴定纯度.我们提出了一套完整的S BA提纯方案,该方案避免了脱脂处理、硫酸铵分级沉淀和脱盐等繁琐步骤,大大简化了提纯过程.值得注意的是,不同品系大豆的S BA含量也不尽相同.我们曾经比较了黄豆和青豆两种大豆,结果显示黄豆中S BA的含量要明显高于青豆.另外,曾有文献[24]报道,S BA占大豆粗提液的216%,高于我们所使用的黄豆(116%),提示寻找高S BA含量的大豆可进一步提高S BA产率.S BA与几种癌细胞的凝集反应结果说明人鼻咽癌C NE细胞、小鼠Lewis肺癌细胞、大鼠乳腺癌SHZ2 88细胞表面的糖链末端均含有大量的G al或G alNAc残基.而肝癌BE L27402细胞表面的糖链末端不含或低水平含有G alΠG alNAc残基,或处于隐蔽状态,在所测条件下不足以引起凝集反应.人鼻咽癌C NE细胞能被S BA凝集的现象在国内外的文献中还未见报道,为人鼻咽癌C NE细胞表面糖结构的研究提供了新的信息.目前,国内从基因[25,26]、cDNA微阵列[27]和蛋白质[28]的角度研究肿瘤已经取得了显著进展,而从多糖[29]、糖脂[30]和细胞糖链[31,32]的角度探讨糖类与分化和癌变的关系也日益受到重视.发挥我国凝集素资源丰富的优势,对于多方位地开展抗肿瘤研究是十分有益的.参考文献(R eferences)1　G ordon J A,Blumberg S,Lis H,Sharon N.Purification of s oybean agglutinin by affinity chromatography on Sepharose2N2ε2aminocaproyl2β2 D2galactopyranosylamine,FE BS Lett,1972,24(2):193～1962　Carlsen S A,Barry M,Newton K.The identification of a neutral glycosphing olipid antigenic marker for metastatic cells in the R3230AC rat mammary adenocarcinoma.Clin Exp Metastasis,1990,8(2):141～1513　Tsubura A,M orii S,M atsuzawa A.Lectin2binding patterns in transplantable m ouse mammary tum ors and their metastases.Anticancer Res,1991,11(5):1719～17234　Reese M R,Chow D A.Tum or progression in vivo:increased s oybean agglutinin lectin binding,N2acetylgalactosamine2specific lectin expression,and liver metastasis potential.Cancer Res,1992,52(19): 5235～52435　Saito K,Uda H,T anaka S,K uwabara H,Sakam oto H.A light and electron microscopic histochemical study on lectin binding to cells with high metastatic potential in Lewis lung carcinoma.J Exp Pathol,1992, 6(122):123～1326　Jordins on M,E l2Hariry I,Calnan D,CalamJ,Pignatelli M.Vicia faba agglutinin,the lectin present in broad beans,stimulates differentiation of undifferentiated colon cancer cells.Gut,1999,44(5):709～714 7　Nishimura N,Saito S,Y amazaki K,W atanabe A,Sasaki H.Newly established human pancreatic carcinoma cell lines and their lectin binding properties.Int J Pancreatol,1993,13(1):31～418　Brooks S A,Carter T M.N2acetylgalactosamine,N2acetylglucosamine and sialic acid expression in primary breast cancers.Acta Histochem, 2001,103(1):37～519　K ragel P J,Pestaner J,Linehan W M,Filling2K atz M R.Papillary cystadenoma of the epididymis.A report of three cases with lectin histochemistry.Arch Pathol Lab Med,1990,114(7):672～67510　E lsayed A M,Shamsuddin A.Detection of altered glycoconjugate in preneoplastic and neoplastic human large intestinal epithelia by galactose oxidase2Schiff b Invest,1987,56:22A11　Shortland P,W ang H F,M olander C.Distribution of transganglionically labeled s oybean agglutinin primary afferent fibres after nerve injury.Brain Res,1999,815:206～21212　Lebkowski J S,Schain L R,Harvey MJ,Okarma T B.Rapid is olation of human CD34hematopoietic stem cells—purging of human tum or cells.Transplantation,1992,53(5):1011～101913　S pencer M.Hydroxyapatite for chromatography.J Chromatogr,1978, 166:423～44614　G upta K C,Sahni M K,Narang C K,M athur N K.G el filtration medium derived from guar gum.J Chromatogr,1979,169:183～190 15　徐宜为编著.免疫检测技术.第2版,北京:科学出版社(Xu Y i2 wei ed.Immunoassay Techniques.2nd ed,Beijing:Science Press), 1997:45～5816　K awasakI T,T akahashi S,Ikeda K.Hydroxyapatite high2performance liquid chromatography:column performance for proteins.Eur J Biochem,1985,152:361～37117　李丹彤,崔铁军,吕欧,徐忠源,高强龙,许庆陵.孔石莼凝集素404中国生物化学与分子生物学报19卷的分离纯化及性质的研究.中国生物化学与分子生物学报(Li Dan2tong,Cui T ie2jun,LüOu,Xu Zhong2yuan,G ao Qiang2long,Xu Qing2ling.Purification and characterization of lectin from Stylosanthes gracilis seed.Chin J Biochem Mol Biol),2000,16(6):774～77818　周红,曾仲奎,鲍锦库,鲍林.油麻藤种子中凝集素的纯化及性质的研究.生物化学杂志(Zhou H ong,Z eng Zhong2kui,Bao Jin2 ku,Bao Lin.Purification and characterization of lectin from Macuna sempervirens Hemsl.Chin Biochem J),1996,12(3):336～34019　罗刚跃,陈兆平,彭建宗,程双奇,莫熙穆.格拉姆柱花草凝集素的纯化与性质研究.中国生物化学与分子生物学报(Lou G ang2 yue,Chen Zhao2ping,Peng Jian2z ong,Cheng Shuang2qi,M o X i2mu.Purification and characterization of lectin from Stylosanthes gracilis seed.Chin J Biochem Mol Biol),1998,14(2):151～15520　张成禄,周素芳,吴耀生,邓勇,周德义.红桂木凝集素的纯化与性质研究.中国生物化学与分子生物学报(Zhang Cheng2lu,Zhou Su2fang,Wu Y ao2sheng,Deng Y ong,Zhou De2yi.Is olation,purification and properties of lection from Artocarpus lingnanesis.Chin J Biochem Mol Biol),1999,15(1):142～14421　孙慧,赵辰光,仝鑫,齐义鹏.一种新杨树菇(Agrocybe aegerita)凝集素的纯化及生化特性.中国生物化学与分子生物学报(Sun Hui,Zhao Chen2guang,T ong X in,Qi Y i2peng.Purification and characterization of a novel lectin AAVP from fruiting bodies of the edible fungus Agrocybe aegerita.Chin J Biochem Mol Biol),2003,19(1):96～10222　周长林,小田太雄,挂通一晃.藏红花凝集素分子化学修饰与其活性的关系.中国生物化学与分子生物学报(Zhou Chang2lin, Y asuo Oda,K azuaki K akehi.Chemical M odification of Crocus sativus lectin in relation to its activity.Chin J Biochem Mol Biol),2003,19(1):8729123　程悦生,胡洪波,王威,赵国良,苏志国.疏水作用色谱法分离大豆凝集素.色谱(Cheng Y ue2sheng,Hu H ong2bo,W ang W ei,ZhaoG uo2liang,Su Zhi2guo.Separation of s oybean agglutinin byhydrophobic2interaction chromatography.Chin J Chromatogr),1997, 15(6):530～53124　Liener I E.The photometric determination of the hemagglutination activity of s ozin and crude s oybean extract.Arch Biochem Biophys, 1955,54:223～23125　韩克军,杨美香,王　,李燕,陈慰峰.肿瘤相关抗原基因HC A520重组蛋白的表达纯化及其肝癌患者血清中相应抗体的分析.中国生物化学与分子生物学报(Han K e2jun,Y ang M ei2xiang,W ang Y u,Li Y an,Chen W ei2feng.Expression of a tum or related antigen gene HC A520encoded protein and analysis of its serological reactivity to the sera of HCC patients.Chin J Biochem Mol Biol),2003,19(1):31～3526　王　,韩克军,屈伟,陈慰峰.新型肝癌相关性抗原HCA519及其变异体HCA90的基因克隆和表达.中国生物化学与分子生物学报(W ang Y u.Han K e2jun,Qu W ei,Chen W ei2feng.The gene cloning and expression of tw o novel hepatocellular carcinoma ass ociated antigens:HCA519and its variant HCA90.Chin J Biochem Mol Biol), 2003,19(1):46～5227　曾亮,关新元,唐发清,赵燕,胡智,罗非君,顾唤华,曹亚.鼻咽癌转移相关基因的比较基因组杂交和cDNA微阵列研究.中国生物化学与分子生物学报(Z eng Liang,G uan X in2yuan.T ang Fa2qing, Zhao Y an,Hu Zhi,Luo Fei2jun,G u Huan2hua,Cao Y a.M etastasis2 ass ociated gene in nas opharyngeal carcinoma by com parative genomic hybridization and cDNA array.Chin J Biochem Mol Biol),2002,18(5): 588～59328　郑大利,林建银.S M MC27721肝癌细胞67kD层粘连蛋白受体的分离纯化.中国生物化学与分子生物学报(Zheng Da2li,Lin Jian2 yin.Is olation and purification of67kD laminin receptor from S M MC2 7721hepatocellular carcinoma cell.Chin J Biochem Mol Biol),2002,18(5):624～62829　吴洁,张成武,刘义峰.极大螺旋藻多糖IPⅡA、IPⅡB的理化特性及抗肿瘤活性研究.中国生物化学与分子生物学报(Wu Jie, Zhang Cheng2wu,Liu Y i2feng.Physicochemical properties and antitum or activities of polysaccharides IPⅡA,IPⅡB from spirulina maxima.Chin J Biochem Mol Biol),1998,14(6):751～75530　郭祯,李亚丽,马克里,夏泉,崔肇春.神经节苷脂G M3对人白血病J622细胞PK C转位及DAG含量的影响.中国生物化学与分子生物学报(G uo Zhen,Li Y a2li,M a K e2li,X ia Quan,Cui Zhao2chun.E ffects of ganglioside G M3on the translocation of PK C and the content ofDAG in human leukemia J622cell line.Chin J Biochem Mol Biol), 2003,19(1):118～12231　王丽影,雷群英,戴振宇,陈伉丽,陈惠黎,查锡良.N2乙酰氨基葡萄糖转移酶V过表达对人肝癌细胞粘着斑复合物介导的信号转导作用.中国生物化学与分子生物学报(W ang Li2ying,Lei Qun2ying.Dai Zhen2yu,Chen K ang2li,Chen Hui2li,Zha X i2liang.M odulation of focal adhesion com plex mediated signaling in human hepatocarcinoma cells through over expression of N2 acetylglucosaminyltrans ferase.Chin J Biochem Mol Biol),2002,18(2): 240～24432　葛常辉,王玉华,杜昱光,王晗,越瑾瑶,朱正美.不同发育时期小鼠胚泡表面Lewis寡糖抗原的表达.中国生物化学与分子生物学报(G e Chang2hui,W ang Y u2hua,Du Y u2guang,W ang Han,Zhao Jin2yao,Zhu Zheng2mei.Analysis of expression of Lewis olig osaccharide antigens on m ouse embry os.Chin J Biochem Mol Biol),2002,18(3): 342～346504第3期荆　剑等:大豆凝集素的纯化及其凝集不同肿瘤细胞的探讨　。

大豆中的抗营养因子危害

大豆中的抗营养因子危害大豆抗营养因子的主要成分就是大豆胰蛋白酶抑制剂。

这种物质对植物本身能够达到一定的保护的作用，比如说能够避免大豆籽粒出现分解代谢，可以使大豆的种子处于休眠的状态，另外还有一定的抗虫害的效果。

但是要了解这种大豆中的抗营养因子，对人和动物的健康是有危害的，下面我们就来了解一下这方面的内容。

大豆中的抗营养因子危害在这些大豆抗营养因子中胰蛋白酶抑制因子、大豆凝集素、大豆球蛋白以及β-伴大豆球蛋白是大豆中最主要的抗营养因子。

它们能够引起幼龄动物肠道过敏、腹泻、肠道损伤、胰腺增生肥大、免疫机能下降、胃排空速率下降、食物滞留、采食量下降、日增重下降、生长缓慢甚至死亡。

大豆球蛋白：占大豆蛋白质40%左右，六聚体，300-380KDa，12条肽链，6个酸性亚基和6个碱性亚基，亚基之间通过二硫键连接，电泳图谱中有两个条带(B亚基20kDa、A亚基34-44kDa)，与IgE、IgM、IgA，有很强的结合性。

引起过敏反应，最终导致消化吸收障碍和过敏性腹泻β-伴大豆球蛋白：占大豆蛋白质30%左右，糖蛋白三聚体，含有3.8%的甘露糖和1.2%的氨基葡萄糖。

等电点4.8-4.9，180KDa,α、、β，等电点分别为4.9、5.18、5.66-6.0，电泳图谱有三个条带(α亚基57-76KDa、亚基57-72KDa、β亚基42-53KDa)，引起过敏反应，导致小肠绒毛萎缩，隐窝增生等过敏性损伤，最终导致消化吸收障碍和过敏性腹泻。

胰蛋白酶抑制因子：含量约30mg/g，约占大豆种子贮存蛋白质总量的6%，种子蛋白质干重的2%。

分为KTI(含量约1.4%，2个二硫键，一个反应中心-63号精氨酸、64号异亮氨酸)、BTI(0.6%，两个反应中心，7个二硫键)两种，两者的质量比约为4:1，摩尔比为1.5:1，一分子KTI抑制钝化一分胰蛋白酶分子，一分子BTI抑制两分子胰蛋白酶分子。

降低采食量、日增重、饲料转化率凝集素：非免疫球蛋白本质的蛋白或糖蛋白，他能特异性识别并可逆结合复杂糖复合物中的糖链而不改变所结合糖基的共价键结构。

饲料中大豆凝集素的分离纯化与生物活性测定

ｒｍ离心２ｎｐ０ｍｉ，取沉淀物溶子ＰＳｐ．，００Ｂ（Ｈ７６．１
现泪滴状（不倾斜时红细胞沉于孔底，似水中沙粒沉入水底，边缘光滑），为不凝集（）一；以出现＋” ＋的大豆凝集素最高稀释倍数作为凝集效价。２结果与分析
“
大、血细胞凝集等，在一定程度上限制了大豆蛋白
收稿日期：２１－２００１１—７
基金项目：天津市科技攻关项目（５ＦＰｃ１ｏＯＹＧＮ０９０）作者简介：王立红（９２）１７一，女，天津人，博士研究生，研究方向为功能性微生物应用。．
ｐｅａａｉｎｏｏｂｅｎａｇｕｔｎｎ．ｒｐｒｔｏｆｓｙａｇｌｉｉＫｅｒ：ｓｙａｇｌｔｎｎ；ｉｌｇｃｌａｔｖｔｆｅｙｗｏｄｓｏｂｅｎａｇｕｉｉｂｏｏｉａｃｉｉｙ；ｅｄ
ｍｌＬ）ｏ・，装入透析袋，透析过夜，用１ａ１％ＢＣ：溶液检测外透液中Ｓ４的剩余量，直至无白色沉淀０２－析出，离心除杂，得到约粗提取液２０ｍＬ０。
１２．．亲和层析２
２１大豆凝集素提纯曲线．Ｎ乙酰基一一乳糖胺一ｐｘ—ｅｈｒｓＢ亲一Ｄ半ｅｏｙｓｐａｏｅ６
１材料与方法
１１主要试剂和仪器．
物蛋白源，但大豆中含有多种抗营养因子（例如大豆抗原蛋白、胰蛋白酶抑制因子、单宁、植物凝集素、皂苷），其中大豆凝集素（Ｂ）大豆中的主ＳＡ是要抗营养因子之一¨。大豆凝集素胰蛋白酶抑制剂１

大豆凝集素与大鼠和小鼠小肠黏膜上皮细胞结合规律的研究

定是信号分子，但导致的结构改变和信号传导可能类
１组织切片的制作石蜡切片按常规方法制作，．３因为免疫组化染色的程序复杂，所以切片前载玻片需用
粘片剂处理以防止染色过程中脱片，本试验所用的粘片剂为０１．％多聚赖氨酸溶液。１免疫组化染色．４染色的原理是利用生物素标记的
白封闭，然后依次经ＢｏＳＡ孵育３ｉ，ＢｉＢ — ０ｎＡＣ试剂孵ｍ
育３ｉ，．％的ＤＢ（３０ｍｎ０４ｏＡ含％过氧化氢）色１ｍｎ显０ｉ，
大鼠和ＩＲ小鼠，Ｃ单笼饲养（７ｍｘ１５ｍｘ１ｍ，２ｍｍ２０ｍ）９８
说明在大鼠和小鼠刚出生时大豆凝日本小肠结合程度低随着大鼠和小鼠的成长大豆凝集素圈1小肠切片与小肠黏膜上皮细胞的结合程度提高到28日龄时结不同日龄大的小肠大豆凝集素结合位点的平均光密度值合程度最高而后其结合程度有慢慢降低的趋势
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摘要：验分别选择怀孕的６只Ｓ大鼠和ＩＲ小鼠，笼饲养。仔鼠于分娩后１日龄断奶，仔鼠第１７１、试ＤＣ单９在、、４
２、８日龄和第３１２５日龄时分剐从６窝仔鼠中每窝随机取１只，个日龄６只，宰后取十二指肠、每屠空肠和回肠制作
关键词：牧、医科学基础学科；豆凝集素；肠；畜兽大小日龄；鼠；鼠大小中图分类号：８５１０１￥６．３．＋文献标识码：Ａ文章编号：２８７３（Ｏ）７０１ — ３Ｏ５ — Ｏ３２６１－０００Ｏ

大豆凝集素

?对于动物营养领域来讲应进一步研究豆类凝集素对不同种属动物抗营养作用及不同含量凝集素对不同种属动物抗营养作用特别是豆类加工产品中凝集素含量因加工条件差异变化较大而豆类制品是人类食品和畜禽日粮中主要原料之一因此豆类加工产品低含量凝集素对不同种属动物抗营养影响及可能产生病理变化也应引起足够重视
大豆凝集素

3.每个浓度分别取9个 1.5 mL灭菌离心管，每管中加入胃蛋白酶溶液 0.1 mL，37℃保温10 min，然后再向各管中依次加入相应浓度的目的蛋白(SBA)0.1 mL(37℃预热) 。 4.准确计时，反应结束后立即加入0．618 mol／L 的NaCO3，溶液0．05 mL终止酶解反应。

虽然血凝法能够简捷、快速测定凝集素含量，但对所选择的红细胞有严格要求，具有种属特异性，如对兔和人红细胞的凝集反应最敏感，如所选择红细胞不当，则会导致所测大豆凝集素活性偏低。实验选择兔心脏血进行红细胞凝集反应，实验效果良好。
结语：

对于动物营养领域来讲，应进一步研究豆类凝集素对不同种属动物抗营养作用，及不同含量凝集素对不同种属动物抗营养作用，特别是豆类加工产品中凝集素含量因加工条件差异变化较大，而豆类制品是人类食品和畜禽日粮中主要原料之一，因此豆类加工产品低含量凝集素对不同种属动物抗营养影响及可能产生病理变化也应引起足够重视。
其产生抗营养作用的根源，所以有关这方面的研究尤为重要。动物采食大豆凝集素后，消化道内部分未被降解并具有完整生物活性的大豆凝集素会结合到肠道内细胞表面的特异性受体上，进而引发了一系列抗营养作用的产生。
大豆凝集素生物活性的测定：
采用兔红细胞凝集法进行生物活性鉴定。用96孔“V”型血凝板进行细胞凝集试验，观察红细胞的凝集程度。

大豆凝集素的分离纯化和血凝活性研究

大豆凝集素的分离纯化和血凝活性研究
大豆凝集素是植物世界中最常见的蛋白质，它含有大量的氨基酸，熔点高，能够形成
稳定的结构，广泛用于食品、医药和农业行业。

大豆凝集素具有特殊的血凝活性，能够在
人体血液中形成凝聚体，帮助血液聚集。

当血液分子在受损或破裂时，该凝集素可以能快
速形成凝聚体，从而阻止血液外渗，维护封闭性血流。

由于其独特的特性，大豆凝集素已
成为了药物治疗血液凝聚性疾病的热门研究课题。

大豆凝集素的分离纯化及其血凝活性的研究，是了解大豆凝集素的性质和其生物学效
应的重要步骤。

目前，大豆凝集素的纯化常采用溶解凝胶电泳技术，包括蛋白质电泳、亚
硫酸钠硅胶柱电泳、静水硅胶柱电泳以及DEAE柱电泳，结果分别可提纯1~15％和20~60％的纯化该蛋白质，可用于耐受性实验，以及探究大豆凝集素的血凝活性。

研究大豆凝集素的血凝活性，需要对它的家族成员进行系统分析，其中羧基末端及残
基特异性氨基酸的构象，是该蛋白质的血凝活性的重要影响因素。

为了准确测定大豆凝集
素的血凝活性，通常采用Clot Detection Assay（Clot发现试剂盒），以凝血时间和凝
血程度两个指标，考核这种蛋白质在血液血凝中的作用。

大豆凝集素具有特殊的血凝活性，能够有效防止血液损失。

研究它的分离纯化及血凝
活性，对临床上的药物治疗具有重要意义。

但由于其结构复杂，究竟是哪些家族成员更具
血凝活性，仍需要深入的研究才能明确。

豆类植物凝集素抗营养机理研究

中图分类号：Ｓ０．Ｔ２１２
１前言
文献标识码：Ａ
文章编号：０８９７（０８０一ｏ１ —０１０－５８２０）１０６３养作用关键在于它能与动物小肠特异性结合，这种结合导致：１小肠正常结构被破坏，养物质吸收利用（）营
动物具有较强抗营养作用；该文介绍豆类植物凝集素，阐述其抗营养机理。并
关键词：植物凝集素；抗营养；豆类
Ｓｕｉｓｏｅｈｎｓｆｎｉｕｒｔｏａｆｅｔｆｅｔｇｍｅｔｄｅｎｍｃａｉｍｏｔｔｉｎｌａｎｉｅｃｃｉｉｌｕｓｏｌｎｎｅ
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１６
粮食与油脂
２０年第１０８期
豆类植物凝集素抗营养机理研究
娄在祥。洪新王
（江南大学食品学院，食品科学与安全教育部重点实验室，江苏无锡
摘
２４２）１１２
要：植物凝集素是植物在长期进化过程中形成抵御病虫害和动物消化主要成分之一，因此对
ＬＯＵｉｉｎｇ。ＷＡＮＧｎｇ【ｎＺａ－ｘａＨｏ＿】ｉ
（ｙＬａｏａｏｙｏｏｄＳｉｎｅａｄＳｆｔｆｎｓｒｆｕａｉｎ。ｃｏｌｆｏｄＳｉｎｅａｄＫｅｂｒｔｒｆｏｃｅｃｎａｅｙｏｉｔｙｏｃｔＦＭｉＥｄｏＳｈｏｏｃｅｃｎｏＦ
Ｔｃｎｌｇ。ｏｔｅｎＹｇｚｎｖｒｔ。ｉｇｕＷｕｉ１１２ＣｉａｅｈｏｏｙＳｕｈｒａｔｅｉｅｓｙＪａｓｘ２４２。ｈｎ）ｎＵｉｎ

凝集素及其应用的研究进展

凝集素及其应用的研究进展关鑫(综述);梁一(审校)【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2016(013)009【总页数】3页(P1268-1270)【关键词】凝集素;生物学;凝集素应用;糖基【作者】关鑫(综述);梁一(审校)【作者单位】广东医学院检验医学研究所/广东省医学分子诊断重点实验室，广东东莞 523808;广东医学院检验医学研究所/广东省医学分子诊断重点实验室，广东东莞 523808【正文语种】中文实验室，广东东莞523808)凝集素是1类具有特异性糖基结合性糖蛋白。

凝集素通常带有糖识别区域(CRD)[1]，该区域氨基酸序列特性及其三维结构决定该凝集素糖结合活性[2]，不同种类凝集素对不同类型糖基化修饰有识别偏好性。

1888年首次从蓖麻子中发现凝集素，目前已有几百种凝集素从植物、动物、微生物中鉴定分离。

1.1 植物凝集素植物凝集素种类繁多。

根据凝集素受体蛋白激酶(LecRKs)可将有LecRKs区域跨膜糖蛋白大致分为G-、C-、L和LysM等4种类型[3]。

基于凝集素结合区域又将可溶性凝集素分为：苋科凝集素，其与GalNAc和T抗原Galβ(1、3)具有较高亲和性[4]；钙网蛋白凝集素(CRT)和钙联接蛋白凝集素(CNX)，其存在于真核细胞内质网上，可特异性结合葡萄糖而作分子伴侣；EUL相关性凝集素，此类核质糖蛋白分为S型EUL蛋白和D型EUL蛋白；Jacalin相关凝集素，是从凤梨种子中提取对半乳糖有专一性凝集素，分为半乳糖专一和甘露糖专一2个亚族[5]。

此外，还包括Nictaba相关性凝集素、Ricin-B凝集素等家族。

植物凝集素具有重要生物学功能，不仅体现在其自身生长过程中发挥作用(如营养物质储存、生物固氮、抗昆虫、抗植物病毒等)[6]，还表现在与其他物种间相互作用。

有研究表明，苦荞麦凝集素(TBL)可促进人外周血树突状细胞(DCs)增殖与分化，TBL-DCs还可产生IL-10、IL-12等促炎性细胞因子，增强免疫反应[7] 。

凝集素

凝集素(lectin)凝集素（Lectin）是指一种从各种植物，无脊椎动物和高等动物中提纯的糖蛋白或结合糖的蛋白，因其能凝集红血球（含血型物质），故名凝集素。

常用的为植物凝集素（Phytoagglutin，PNA），通常以其被提取的植物命名，如刀豆素A（C onconvalina，ConA）、麦胚素（Wheat germ agglutinin，WGA）、花生凝集素（Peanut agglutinin，PNA）和大豆凝集素（Soybean agglutinin，SBA）等，凝集素是它们的总称。

凝集素是动物细胞和植物细胞都能够合成和分泌的、能与糖结木菠萝凝集素合的蛋白质,在细胞识别和粘着反应中起重要作用,主要是促进细胞间的粘着。

凝集素具有一个以上同糖结合的位点，因此能够参与细胞的识别和粘着,将不同的细胞联系起来。

凝集素（Lectin）是指一种从各种植物，无脊椎动物和高等动物中提纯的糖蛋白或结合糖的蛋白，因其能凝集红血球（含血型物质），故名凝集素。

其常见种类见表6-1。

常用的为植物凝集素（Phytoagglutin, PNA），通常以其被提取的植物命名，如刀豆素A（Conconvalina,ConA）、麦胚素（Wheat germ aggluti nin, WGA）、花生凝集素（Peanut agglutinin, PNA）和大豆凝集素（Soybean agglutinin, SBA）等，凝集素是它们的总称。

凝集素不是来源或参与免疫反应的产物，它们之所以被收入本书，是由于凝集素具有的某些“亲合”特性，能被免疫细胞化学技术方法所应用。

因此，Ponder（1983）提出应称“凝集素组织化学”而不能称为“凝集素免疫组织化学”。

凝集素的特性凝集素具有多方面的特性，在此我们仅简要提及其与免疫细胞化学技术方法应用有关的某些特性。

我们知道，生物膜中含有一定量的糖类，主要以糖蛋白和糖脂的形式存凝集素的标记技术在。

凝集素最大的特点在于它们能识别糖蛋白和糖肽中，特别是细胞膜中复杂的碳水化合物结构，即细胞膜表面的碳脂化合物决定簇。

大豆的抗营养因子介绍

大豆中的抗营养因子大豆因其蛋白质含量高和氨基酸平衡性好而成为动物理想的植物性蛋白质源。

遗憾的是，大豆中含有多种抗营养因子，包括膜蛋白酶抑制子、凝集素、异黄酮、抗原蛋白、抗维生素因子、单宁、皂甙、脲酶、赖丙氨酸、硫葡萄糖甙和生物碱等。

这些抗营养因子通过干扰营养物质的消化吸收、破坏正常的新陈代谢和引起动物不良的生理反应等多种方式危害动物尤其是幼龄动物的生长和健康，从而在一定程度上降低了大豆及大豆制品在动物中的利用。

自从发现大豆中存在抗营养因子以来，人们就一直试图通过化学处理、热处理、挤压处理等方式削弱或去除抗营养因子的活性。

1、大豆抗营养因子的种类和特性按照抗营养作用方式的不同，通常将大豆抗营养因子分为以下6类：抑制蛋白质消化和利用的因子，包括胰蛋白酶抑制因子、糜蛋白酶抑制因子和凝集素等；影响碳水化合物消化的因子，包括酚类化合物(单宁)和寡糖等；降低矿物元素利用的因子，如植酸；抗维生素因子，包括抗维生素A、维生素D、维生素E 和维生素B 12等因子；剌激免疫系统的抗营养因子，如致过敏反应蛋白等以及其它一些抗营养因子，包括致甲状腺肿因子、皂甙、异黄酮和生氧糖甙等。

其中胰蛋白酶抑制因子、糜蛋白酶抑制因子、凝集素、致甲状腺肿因子及抗维生素因子具有对热敏感的特性，而皂甙、单宁、异黄酮、寡糖、致过敏反应蛋白及植酸等对热稳定。

2 、大豆抗营养因子的作用机理2.1 大豆蛋白酶抑制因子大豆蛋白酶抑制因子是指能和蛋白酶的必需基因发生化学反应，从而抑制蛋白酶与底物结合，使蛋白酶的活力下降甚至丧失的一类物质。

通常所说的蛋白酶抑制因子是指蛋白质类胰蛋白酶抑制因子(Trypsin Inhibitors，TI)。

根据其结构组成可分为库尼兹大豆胰蛋白酶抑制因子(kunitz Trypsin Inhibitor，KTI)和包曼-伯克膜蛋白酶抑制因子(Bowmm-Birk Proteinase inhibitor，BBI)两类，生大豆中含有1.4%的KT I和0.6%BBI。

豆类凝集素的功能及其种类分析

体结合是其发挥作用的重要一步ꎮ 本文综述介绍了豆类凝集素的两大主要功能抗菌和杀虫ꎬ围绕受体和作用机理展开分析ꎮ
关键词:豆类凝集素ꎻ抗菌活性ꎻ抗虫活性ꎻ作用机制
性ꎬ以及更多的家养种ꎬ如普通豆科植物和球根豆科
１豆类凝集素
豆类凝集素是最大的碳水化合物结合蛋白家
族ꎬ其理化和生物学特性已被广泛研究ꎮ 使用更新
逆转录酶活性
尽管有相当数量的凝集素已被鉴定ꎬ只有少数
多种复杂碳水化合物能够相互作用ꎮ 人们认为ꎬ植
物凝集素不会改变膜结构或者膜的通透性ꎬ也不会
干扰被微生物入侵的细胞内正常生理过程ꎬ而是会
基于与细胞壁碳水化合物或细胞外多糖的相互作用
对其产生间接影响
[９]
ꎮ 电子显微镜研究表明ꎬ用南
芥菜凝集素处理促进了革兰氏阳性菌细胞膜上的毛
２０２０年第４期
基金项目:国家大学生创新创业训练项目(２０１９１０３８９００９)
作者简介:方妍ꎬ 本科生ꎬ研究方向:分子改造研究ꎮ Ｅ－ｍａｉｌ:
ｆａｎｇｙａｎ００２８＠１６３. ｃｏｍꎮ
７８
相互作用的 [８] ꎮ 因此ꎬ植物凝集素被认为在植物免
疗候选药物ꎮ
２. １细菌
凝集素的抗菌活性是由于它们与细菌细胞壁的
与菌丝结合ꎬ菌丝肿胀ꎬ细胞内容物空泡化ꎬ增强了菌丝对渗透
性休克诱导的细胞壁溶解的敏感性ꎬ产生对其他胁迫条件的敏
感性ꎮ 这种情况会导致营养物质吸收不良ꎬ干扰孢子萌发和细
胞壁破裂
病毒
病毒包膜成分:糖蛋白ｇｐ１２０ / ｇｐ４１ꎬ唾液酸
与糖基化的包膜蛋白结合并阻止细胞进入( 干扰与复制周期)
孔的增多ꎬ以及革兰氏阴性菌细胞壁上气泡的存在
的生长和萌发ꎮ 用大豆和普通扁豆凝集素进行的研

饲料抗营养因子

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四、各种饲料抗营养因子的作用与处理方法
1. 蛋白酶抑制因子 2. 植物凝集素 3. 单宁 4. 非淀粉多糖 5. 饲料抗原蛋白 6. 胀气因子 7. 植酸 8. 抗维生素因子
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第一节蛋白酶抑制因子（protease inhibitors, PIs）
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一、分布及分类
➢ 植物中，大豆、豌豆、菜豆、蚕豆等 ➢ 生大豆中，蛋白酶抑制因子含量30 mg/g ➢ 蛋白酶抑制因子包括胰蛋白酶抑制因子和胰凝
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➢ 凝集素的来源分类:
➢ 植物凝集素
➢ 动物凝集素
➢ 微生物凝集素
➢ 凝集素亚基的结构特征分类:
➢ 部分凝集素: 单一多肽蛋白，只含有1个糖结合结构域，不能凝集细胞和沉积复合糖
➢ 全凝集素: 至少2个相同或高度同源的糖结合结构域，能凝集细胞和沉积复合糖
➢ 嵌合凝集素: 1个或多个糖结合结构域及1个具有酶活性或其他生物活性的结构域组成
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➢ Bowman-Birk蛋白酶抑制因子 ➢ 结构类似于蛋白质 ➢ 相对分子量6000-10000 ➢ 含有大量的Cys ➢ 2个独立的活性中心, 可以和不同的酶结合 ➢ 亚型（I-V）
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➢ Kazal抑制剂相对分子量6000 含有3个二硫键牛胰蛋白酶抑制因子
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三、理化性质
➢ 有助于提高饲料加工处理的效果和效率, 促进饲料加工工艺的改进。
➢ 可以开辟新的饲料资源, 开发和利用更多的非常规饲料原料。
➢ 研究抗营养因子的机理, 对开展动物营养调控理论的研究有重要意义。
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三、抗营养因子的分类
➢ 对蛋白质的消化利用有不良影响的抗营养因子如胰蛋白酶和胰凝乳酶抑制因子、植物凝集素、酚类化合物、皂化物等

凝集素的研究历史及其生物功能

Vol. 14,No. 8 精细与专用化学品第14卷第8期Fine and Specialty Chemicals 2006年4月21日技术进展凝集素的研究历史及其生物功能熊川男3李伟白雪芳杜昱光(中国科学院大连化学物理研究所, 辽宁大连116023)摘要: 介绍凝集素的发现和发展历史,在近20年中,从植物、动物和微生物中提取了多种凝集素,并且结构已经被确定。

同时,对凝集素的结构和生物功能进行了概述,如凝集素的保护和共生作用,凝集素在复杂生物系统中具有识别分子的作用,在细胞与分子间、细胞与细胞间的信号识别起重要作用。

关键词: 凝集素; 葡聚糖; 甘露糖; 生物功能Research History of Lectin and Its Bio2functionsX IONG Chuan2nan, L IW ei, BA I Xue2fang, DU Yu2guang (Dalian Institute of Chemical Physics, Chinese Academy of Sciences, Dalian 116023, China)Abstract: The history on discovery and development of lectin are introduced. In recent twenty years, many lectinswere discovered extracting from the p lants, animals andmicrobes and the structure of them are determined. Meanwhile, thestructure and bio2functions of lectins are narrated, such as the p rotective action and symbiotic action of lectins, indentifyingmolecular actions in the comp lex organism, the important actions of recognition between cell and molecular and intracellularsignal indentification and so on.Key words: lectin; glucan; mannitose; bio2function 凝集素作为一种非酶和非免疫起源的蛋白质或糖蛋白,广泛存在于动物、植物和微生物中。

细胞凝集反应

姓名学号班级组别同组者科目细胞生物学实验题目动物细胞融合【实验目的】1.了解细胞膜的表面结构。

2.掌握凝集素促使细胞凝集的原理。

3.学习研究细胞凝集反映的方法。

【实验原理】凝集素（lectin）是一类含糖的（少数例外）并能与糖专一结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。

目前已发现近千种植物中含有凝集素，在各种真菌、无脊椎动物、脊椎动物，人体的各种组织和器官中及某些病毒体内也含有凝集素。

在细胞表面，组成细胞膜的糖脂和糖蛋白伸出寡糖链，形成细胞外被（又称为糖萼）。

凝集素能与细胞外被中的糖分子连接，在细胞间形成“桥”，从而引起细胞凝集。

凝集素引起的血细胞凝集，其细胞膜结构没有发生变化，与血液凝固中发生的复杂生物化学过程完全不同；另外，凝集素能与不同的糖蛋白特异结合，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集，但是凝集素不是来源或参与免疫反应的产物，因此，Ponder提出应称“凝集素组织化学”而不能称为“凝集素免疫组织化学”。

人们利用凝集素与不同的糖蛋白特异性结合的原理，识别和研究不同类型膜结构的生物学特征，以及进行血型鉴定。

ABO血型鉴定主要用于临床输血，在皮肤、肾等器官移植的时候选择ABO血型相符的供体；不孕症和新生儿溶血症病因的分析及亲子鉴定等。

另外，凝集素在临床疾病防治、机体生理活动调控以及生物工程等方面展示出了十分广阔的应用前景。

如：植物凝集素可抑制受精；芸豆凝集素可直接抑制HIV-1反转录酶的活性，减少HIV感染者的病毒载量；细胞膜表面糖复合物的糖链结构与肿瘤细胞增殖、侵染、转移等发展过程密切相关，凝集素芯片技术实现了对癌症的快速、高通量检测，有助于筛选出癌症相关的糖链标志物。