真菌

第一节真菌真菌（fungi）是一大类不含叶绿素，无根、茎、叶，多数类群为多细胞，大多数呈分支或不分支的丝状体，能进行有性和无性繁殖，营腐生或寄生生活的真核微生物。

根据形态可分为：酵母菌、霉菌和担子菌三大类群，但这不是真菌学上的分类方法。

真菌属于单独成立的真菌界，第八版《真菌字典》（Ains worth等，1995）将真菌界分为壶菌门、接合菌门、子囊菌门、担子菌门、半知菌门五个门，酵母菌、霉菌和担子菌分属于真菌的各门。

真菌中能引起人、畜的疾病，或寄生于植物造成作物减产，称为病原性真菌。

一）酵母菌酵母菌多数为单细胞。

1、酵母菌的形态大多数酵母菌为球形、卵形、椭圆形、腊肠形、圆筒形，少数为瓶形、柠檬形和假丝状等。

菌细胞比细菌大得多，大小约1~5μm×5~30μm或者更大，在高倍镜下可清楚看到。

不形成真正的菌丝：形成的芽体依次相互连接，就象是丝状，称为假菌丝。

酵母菌有典型的细胞结构，有细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核及其他内含物等。

单独的酵母菌细胞是无色的，在固体培养基上形成的菌落，多数是乳白色，少数是黄色或红色。

菌落表面光滑、湿润和黏稠，一般比细菌的菌落大而厚。

酵母菌细胞生长在培养基的表面，菌体容易挑起。

有些酵母菌表面是干燥粉状的，有些种培养时间长了，菌落呈皱缩状，还有些种可以形成同心环状等。

菌落的颜色、光泽、质地，表面和边缘特征，均为菌种鉴定的依据。

（二）霉菌(Molds)又称丝状真菌，是工农业生产中长期广泛应用的一类微生物。

有些霉菌是人和动植物的病原菌，有的能导致饲料等霉败引起中毒。

霉菌由菌丝和孢子构成。

菌丝(hypha)：由孢子萌发而成，菌丝顶端延长，旁侧分支，互相交错成团，形成菌丝体(mycelium)，称为霉菌的菌落。

霉菌菌丝的平均宽度为3～10μm，菌丝的细胞构造基本上类似酵母菌细胞，都具有细胞壁、细胞膜、细胞核、细胞质及其内含物。

细胞壁结构类似酵母菌，成分有差别，但也含有几丁质，占细胞干物质的2%～26%。

幼年霉菌菌丝胞浆均匀，老年时出现液泡。

霉菌的菌丝分为两种：一种无隔膜，为长管状的分支，呈多核单细胞，称为无隔菌丝，如毛霉和根霉。

另一种有隔膜，菌丝体由分支的成串多细胞组成，每个细胞内含一个或多个核，菌丝中有隔，隔中央有小孔，细胞核及原生质可流动，称为有隔菌丝。

菌丝可有不同的形态，如螺旋状、球拍状、梳状、结节状和鹿角状等数种，具有鉴别意义。

霉菌菌丝在功能上有了一定程度的分化，伸入固体培养基内部或蔓生于固体培养基表面。

具有摄取营养物质功能的菌丝称为营养菌丝或基质菌丝，伸向空气中的菌丝称气生菌丝。

有的气生菌丝发育到一定阶段，分化成能产生孢子的菌丝称为繁殖菌丝。

2、孢子是霉菌的繁殖器官。

是分类鉴定的主要依据：孢子形成过程、形状、大小、排列及色泽等。

无性孢子：不经过两性细胞的结合，直接由营养细胞分裂或营养菌丝分化而形成的孢子称为无性孢子。

可分为厚垣孢子、节孢子、芽孢子、分生孢子、孢子囊孢子等。

厚垣孢子厚垣孢子：是在菌丝顶端或中间的细胞质浓缩变圆、细胞壁增厚形成的休眠体对外环境有较强的抵抗力芽孢子：与酵母出芽相似，由母细胞出芽而形成，长大时脱离母细胞或联在母细胞上呈枝叶状。

有性孢子不同的性细胞（又称配子）或性器官结合后，经减数分裂而形成的孢子称为有性孢子。

配子的结合有质配和核配两种形式。

有性孢子常常是真菌在特定的自然条件下形成的用来渡过不良环境的休眠体，主要有：卵孢子、接合孢子、子囊孢子和担孢子等。

接合孢子：是由菌丝生出形态相同或略有不同的配子囊接合而形成的。

担孢子：是菌丝末端形成的外生性的有性孢子，通常为4个，形状有棒状、球形、管状等。

3、霉菌的菌落霉菌的菌落比细菌、酵母菌的都要大，主要有绒毛状、絮状和蜘蛛网状等，较疏松。

菌落最初呈浅色或白色，当孢子逐渐成熟，菌落相应地呈黄、绿、青、黑、橙等颜色。

有的产生色素，使菌落背面也带有颜色或使培养基变色。

四）微生物学诊断形态学检查：抹处、染色、检查真菌细胞、菌丝、孢子等；分离培养：沙堡弱氏培养基。

二、真菌的繁殖与分离培养1．真菌的繁殖酵母菌大多数是单细胞微生物，可进行无性繁殖和有性繁殖，以无性繁殖为主。

无性繁殖主要以芽殖、裂殖和产生掷孢子。

芽殖是在成熟的酵母菌细胞先在芽痕处长出一个称为芽体的小突起，随后细胞核分裂成两个核，一个留在母细胞，一个随细胞进入芽体。

当芽体逐渐长大到与母细胞相仿时，子细胞基部收缩，脱离母细胞成为一个新的个体。

有的酵母菌的母细胞与子细胞相连成串而不脱离，似丝状，称为假菌丝。

裂殖为少数酵母菌的繁殖方式，其过程与细胞分裂方式相似。

母细胞伸长，核分裂，细胞中央出现横隔将细胞分为两个具有单核的子细胞。

掷孢子是在营养细胞生出的小梗上形成的无性孢子，成熟后通过一种特有的喷射机制将孢子射出。

有性繁殖是指两个性别不同的单倍体营养细胞经接触、细胞壁溶解、细胞膜和细胞质融合，形成的二倍体的细胞核进行分裂（其中一次为减数分裂），形成子囊，子囊破裂后释放孢子。

霉菌以各种无性和有性孢子进行繁殖，而以无性孢子繁殖为主。

霉菌孢子的形态特征也是分类的重要依据。

菌丝的碎片或截段可发育成新的个体，称为断裂增殖。

营养要求低、环境适应能力较强，常用沙堡弱氏培养基，最适pH为5.6-5.8；最适生长温度为22~28℃。

生长缓慢，一般需7天以上。

真菌的酵母细胞、繁殖菌丝和孢子，都可以生长发育成新的个体。

酵母菌的分离方法同细菌。

真菌的分离方法有菌丝分离法、组织分离法和孢子分离法等3类。

菌丝分离法是在无菌条件下设法将目的菌的菌丝片段分离出来，使其在适合的培养基上生长形成菌落，以获得纯菌种。

常用的方法有划线法和稀释法。

组织分离法是在无菌条件下用镊子取出真菌子实体内部的一小块组织，直接放在适宜的培养基上培养，可获得纯菌种。

孢子分离法是在无菌条件下利用无性和有性孢子能在适宜条件下萌发，生长成新的菌丝体以获得纯菌种的一种方法。

常用的方法也是划线法和稀释法。

）培养条件真菌对外界环境适应力强，对营养要求不高。

在一般培养基上均能生长，常用弱酸性的沙保罗氏培养基或马铃薯琼脂培养基。

最适培养温度为20～28℃；pH3～6之间生长良好，最适pH为5.6～5.8；适宜生长在潮湿的环境中，需氧条件下生长良好(酵母菌必须在厌氧条件下才能发酵产生酒精)。

少数是严格厌氧菌，如反刍动物瘤胃中的真菌；寄生于动物内脏的病原性真菌则在37℃左右时生长良好，常需培养数天至十几天才能形成菌落真菌的培养方法有固体和液体培养两种基本方法。

固体培养法实验室中进行菌种分离、菌种培养和研究时常使用琼脂斜面和琼脂平板，真菌在其上呈现菌落或菌苔生长，便于观察和分离。

制曲和作发酵饲料生产时，利用谷糠、麸皮等农副产品为原料，按真菌营养要求搭配好，加适量的水拌和成固体培养基作为发酵培养基，根据需要还要经过蒸煮灭菌后，接入菌种进行培养。

液体培养法有浅层培养和深层培养两类。

浅层培养是把培养基置于浅层容器中，利用较大的液体表面积接触空气以保证液体中的氧量，常用浅盘或浅池进行。

浅层培养为静置培养，真菌多在液体表面呈膜状生长，故又称表面培养。

一般实验室科研工作或数量较小的培养，可用浅层培养。

深层培养是把大量的液体培养基置于深层的容器内进行培养。

深层培养时必须用人工方法通入足够的空气，并作适当的搅拌。

为了保证各种条件的控制和防止外来污染，常常使用密闭式容器，这就是一般所称的发酵罐。

深层液体培养可用于生产单细胞蛋白饲料等。

培养、制备少量液体种子时，常用摇瓶机、摇床等简单设备，这样既可增加空气的溶解，更多地提供真菌生长繁殖中所需要的氧气，也可有利于培养基中营养成分的充分利用。

真菌的生产培养方法有多种，培养以后的发酵产品亦有多样，但其全部生产过程，主要包括斜面菌种培养、液体种子扩大培养、生产发酵和产品检验分装等4个阶段。

三、病原真菌曲霉菌主要存在于稻草、秸秆、谷壳、木屑及发霉的饲料中，菌丝及孢子以空气为媒介污染笼舍、墙壁、地面及用具。

致病性曲霉菌有多种，常见的有烟曲霉和黄曲霉。

一）、烟曲霉1、生物学特性烟曲霉（Aspergillus fumigatus）为需氧真菌，室温下能正常生长，最适温度37～40℃。

在马铃薯培养基、糖类培养基和血琼脂培养基上都能生长。

烟曲霉的菌丝为有隔菌丝，菌丝纵横交错。

在固体培养基上生长时，菌丝初期为无色到灰白色。

经24～30h开始形成孢子，成熟时孢子逐渐变为浅黄色、草绿色、灰绿色甚至黑色。

1、烟曲霉的生物学特性气生菌丝末端分化出厚壁的足细胞，在足细胞上生出直立的分生孢子梗，梗的顶部膨大形成顶囊，形似倒置的烧瓶。

顶囊上长满辐射状排列的小梗，小梗顶端长出成串的球形分生孢子。

孢子呈蓝绿色，2.5～3.0µm，分生孢子梗长250～300µm。

菌落呈绒毛状，初期为白色、圆形，后期变为暗绿色或黑绿色，菌落边缘仍呈白色，菌落反面无色或带褐色。

曲霉菌孢子抵抗力强：120℃干热1h或煮沸5min才能被杀死；常用消毒剂为：5%甲醛、石炭酸、过氧乙酸和含氯消毒剂。

曲霉菌在消毒剂中一般经1～3h才能死亡2、致病性烟曲霉的孢子广泛存在于空气、水和土壤中，极易在潮湿垫草和饲料中繁殖，同时产生毒素。

烟曲霉孢子导致家畜发病较少。

孢子和菌丝进入家禽腔性器官并增殖，常造成器官机械性堵塞，加之毒素的作用，常表现为曲霉菌性肺炎，尤其是幼禽敏感性极高。

潮湿环境下，曲霉孢子穿过蛋壳进入蛋内，不仅引起蛋品变质，而且在孵化期间造成死胚，或者雏鸡发生急性曲霉菌性肺炎。

3、微生物学诊断烟曲霉的检查主要根据菌丝及孢子形态而确定。

取病禽肺、气囊或腹腔上肉眼可见的小结节，尽量剪碎，置载玻片上，加10%～20%氢氧化钾溶液1～2滴，加盖玻片镜检，可见短的分支状有隔菌丝，直径4～6µm，长可达300µm。

据此可做出初步诊断。

经过病原分离才能确诊：分离培养时，取肝脏、肺脏、禽类气囊等组织，接种于马铃薯培养基上，37℃下培养3d，可见菌丝生长。

根据繁殖菌丝末端是否膨大，分生孢子的形态大小及排列特征加以确诊。

4、防治主要措施是加强饲养管理：保持禽舍通风干燥，不让垫草发霉，不用发霉的饲料和垫料。

环境及用具保持清洁，发病时可使用制霉菌素。

（二）、黄曲霉1、生物学特性黄曲霉（Aspergillus flavus）的生物学特性和培养特征与烟曲霉相似，菌丝形态和孢子排列特征也与烟曲霉相似，但分生孢子梗壁厚而粗糙，孢子有椭圆形及球状。

黄曲霉在察氏琼脂培养基上生长较快，最适温度28～30℃，经10～14d菌落直径可达3～7cm，最初带黄色，然后变成黄绿色，老龄菌落呈暗色，表面平坦或有放射状皱纹，菌落反面无色或带褐色。

2、致病性黄曲霉的致病性主要是由于黄曲霉毒素的产生。

黄曲霉菌和寄生曲霉菌均产生黄曲霉毒素，该毒素常见于霉变的花生、玉米等谷物及棉子饼等，在鱼粉、肉制品、咸干鱼、奶和肝脏中也可发现。