细胞培养基的基本知识
细胞培养基种类与基本成分
(1)需要长期保存的血清必须储存于-20C-70C低温冰箱中。4C冰箱中保存 时间切勿超过1个月。由于血清结冰时体积会增加约10%，因此，血清在冻入 低温冰箱前，必须预留一定体积空间，否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。
(5)切勿将血清在37C放置太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中的有效成 分会破会而影响血清质量。
(6)血清中的沉淀物絮状物：主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维
蛋白造成，这些絮状物不会影响血清本身的质量。可用离心3000rpm,5分钟去
除，也可不用处理。
显微镜下 小黑点”经过热处理过的血清，沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀 物在显微镜下观察象 小黑点”常误认为血清受污染。一般情况下，此小黑点不 会影响细胞生长，但如果怀疑血清质量，则应立即停止使用，更换另一批号的血 清。
(2)一般厂商提供的血清为无菌，无需再过滤除菌。如发现血清有悬浮物，则 可将血清加入培养液内一起过滤，切勿直接过滤血清。
(3)瓶装血清解冻需采用逐步解冻法：-20C至-70C低温冰箱中的血清放入4C冰箱中溶解1天。然后移入室温，待全部溶解后再分装。在溶解过程中需不 断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。切
2、MEM细胞培 养基
又称低限量Eagle培养基 (Minimal Essential Medium) ，1959年在Eagle's基础 培养基(BME)上修改而来，删去赖氨酸、生物素，氨基酸浓度增加，适合多 种细胞单层生长，有可高压灭菌品种，是一种最基本、试用范围最广的培养基， 但因其营养成分所限，针对生产之特定细胞培养与表达时， 并不一定是使用效果 最佳或者最经济的培 养基。
DMEM等细胞培养基的基本知识
DMEM、RIPA1640、F12、L15等细胞培养基的基本知识培养细胞的完全培养基由基础培养基（如MEM）和添加剂（如血清或无血清培养用的某些确定的激素及生长因子）组成，培养基的配方一直在改进，其中包括抗生素和抗有丝分裂剂等等。
一、基础培养基绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上，添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。
最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物，其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。
而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸，维生素的范围亦很广，另外常规含有无机盐和代谢添加剂（例如核苷酸）。
MEM/F12 这两种培养基各取1/2，形成神经生物学最通用的培养基。
Dulbecco`s 改良培养基——DMEM，现应用于快速生长的细胞，同MEM含有相同的营养成分，但浓度高出2~4倍。
选择某种培养基，应仔细了解成分表，应知道大多数情形下培养基都有不足。
例如，有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸，而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域，但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言，则并非最佳选择，特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。
F12中含有硫酸亚铁，据报道也有神经毒效应。
在所有这些培养基中，谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度，这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源。
对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸（若培养基中这两种物质缺乏时）。
MEM与F12均要用5%的CO2来平衡，DMEM含更高浓度的NaCO3，要用10%的CO2来平衡，当然也可以在较低CO2浓度下使用。
这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的，但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。
原则上，HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐，以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。
实际操作中并非如此简单。
显然，溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的。
细胞培养基大全
细胞培养基⼤全⼀、细胞培养基的概念和原理细胞培养基是⼈⼯模拟细胞在体内⽣长的营养环境，是提供细胞营养和促进细胞⽣长增殖的物质基础。
培养液或培养基的含义⼏乎相同，英⽂都是medium。
当它是粉剂时，倾向性地称为培养基，⽽将粉剂配成液体后，多称为培养液。
培养液中常常补加⾎清、抗⽣素等成分。
培养基主要包括天然细胞培养基、合成细胞培养基和⽆⾎清细胞培养基等。
天然细胞培养基是⼈们早期采⽤的细胞培养基，直接取⾃于动物组织提取液或体液，如⾎浆凝块、⾎清、淋巴液、胚胎浸出液等。
营养价值⾼，但成分复杂，差异⼤、不稳定，来源也受到限制。
⽔解乳蛋⽩和胶原是两种较好的天然培养基，富含氨基酸。
⾎清是天然培养基中最有效和最常⽤的培养基，但其组成成分复杂，其中⼀些成分与功能不明确。
⾎清的来源有胎⽜⾎清、⼩⽜或成⽜⾎清、马⾎清、鸡⾎清、⽺⾎清及⼈⾎清，最⼴泛应⽤的为胎⽜⾎清和⼩⽜⾎清。
合成细胞培养基是⽤化学成分明确的试剂配制的培养基，组分稳定，主要包括糖类、必需氨基酸、维⽣素、⽆机盐类等。
⾃1950 年199 细胞培养基问世以来，合成细胞培养基发展⾄今已有⼏⼗种，除了沿⽤半个世纪的基础合成细胞培养基之外，近年来还出现了营养成分更加丰富的低⾎清细胞培养基。
由于细胞种类和培养条件不同，适宜的合成细胞培养基也不同，在动物细胞培养中最常⽤基础细胞培养基有6～7 种，如BME、MEM、DMEM、HAM F12、PRMI1640、199 等。
由于天然培养基的⼀些营养成分不能被合成细胞培养基完全代替，因此⼀般需在合成细胞培养基中添加5％～10％的⼩⽜⾎清。
⼩⽜⾎清的加⼊对细胞培养⾮常有效，但⼩⽜⾎清的成分复杂，这对培养产物的分离纯化和检测会带来⼀定的不便，为减少⼩⽜⾎清的影响，开发了营养成分更加丰富的低⾎清细胞培养基，可以将⼩⽜⾎清的使⽤量降低到1～3％。
⽆⾎清细胞培养基（serum free medium， SFM）是指在使⽤中⽆需添加⾎清的细胞培养基，且其组成成分不含有任何动物组分。
生物动物细胞培养知识点
生物动物细胞培养知识点
1. 培养基：生物动物细胞必须在合适的培养基中生长和繁殖。
常用的培养基包括DMEM、RPMI 1640和MEM等。
2. 细胞传代：当细胞密度达到一定程度后，需要进行传代，即将细胞分离并移植到新的培养皿中继续生长。
3. 培养条件：生物动物细胞需要适宜的培养条件才能正常生长。
包括温度、湿度、氧气含量、营养物质等。
4. 细胞病毒污染：生物动物细胞培养容易出现细胞病毒污染，需要采取相关的预防措施，如定期检测、消毒鉴定等。
5. 细胞凋亡：细胞凋亡是一种自我调节的程序性死亡，常出现在细胞密度达到一定程度后。
6. 细胞形态：生物动物细胞的形态和生长状态需要定期观察和记录，以便及时发现和处理问题。
7. 细胞株的建立：通过限制性稀释或筛选，可以获得单克隆的细胞株，方便后续的实验研究。
8. 细胞的鉴定：眼睛观察、免疫细胞化学等方法可以用于鉴定不同类型的生物动物细胞。
9. 细胞破裂：细胞在处理过程中需要破裂释放细胞内物质，通常使用机械方法或超声波等物理方法来破裂细胞。
10. 细胞冻存：为了保存细胞，需要进行冷冻保存，通常在添加冷冻保护剂后，将细胞悬浮液分装于-80°C冰冻保存。
常用细胞培养基配方及缓冲液
常用细胞培养基配方及缓冲液细胞培养基是为了在体外维持细胞生长和增殖所设计的一种营养液。
细胞培养基的配方要求提供细胞所需的基本营养物质，如氨基酸、糖类、维生素和激素，并提供适当的pH和离子平衡。
同时，缓冲液也是细胞培养过程中不可或缺的一部分，用于稳定细胞培养基的pH，维持细胞正常的生长环境。
下面列举几种常用的细胞培养基配方及缓冲液：1. DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium)-细胞培养基配方：-DMEM培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-1%青霉素/链霉素(P/S)-缓冲液：无2. RPMI 1640 Medium (Roswell Park Memorial Institute Medium) -细胞培养基配方：-RPMI1640培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-1%青霉素/链霉素(P/S)-缓冲液：HEPES(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸)溶液，浓度为25mM，用于稳定pH。
3. MEM (Minimum Essential Medium)-细胞培养基配方：-MEM培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-1%青霉素/链霉素(P/S)- 缓冲液：盐酸/NaOH缓冲体系，通常用NaHCO3/N-2-羟乙基piperazine-N'-2-乙磺酸(HEPES)缓冲。
4. Hank's Balanced Salt Solution (HBSS)-细胞培养基配方：-HBSS培养基粉末-对应体积的无菌水-缓冲液：无5. L-15 Medium (Leibovitz's L-15 Medium)-细胞培养基配方：-L-15培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-缓冲液：HEPES溶液，浓度为25mM。
6. DMEM/F12 Medium (Dulbecco's Modified Eagle Medium and Ham's F-12 Medium)-细胞培养基配方：-DMEM/F12培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-1%青霉素/链霉素(P/S)-缓冲液：HEPES溶液，浓度为25mM。
常用细胞培养基配方及缓冲液
常用细胞培养基配方及缓冲液细胞培养基是一种含有适当营养物质和生长因子的液体或凝胶，用于维持细胞的生长与繁殖。
常用的细胞培养基配方和缓冲液如下：一、常用的细胞培养基配方：1. DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）-DMEM是最常用的细胞培养基之一，适用于多种种类的细胞培养。
-基本配方：-高糖DMEM：添加25mM葡萄糖-低糖DMEM：添加5.5mM葡萄糖-高氨基酸DMEM：添加高浓度的氨基酸，以促进细胞生长和蛋白质合成。
2.RPMI1640-适用于淋巴细胞和一些肿瘤细胞的培养。
-基本配方：-高糖RPMI1640：添加25mM葡萄糖-低糖RPMI1640：添加5.5mM葡萄糖-高氨基酸RPMI1640：添加高浓度的氨基酸。
3. MEM（Minimum Essential Medium）-MEM是最早用于细胞培养的培养基。
-基本配方：-高糖MEM：添加25mM葡萄糖-低糖MEM：添加5.5mM葡萄糖4. Ham's F-10-适用于肿瘤细胞和一些原代细胞的培养。
-基本配方：- 高糖Ham's F-10：添加25mM葡萄糖- 低糖Ham's F-10：添加5.5mM葡萄糖5.L-15-适用于多种种类的细胞培养。
-基本配方：- L-15培养基：必须在CO2-free环境下使用。
二、常用的缓冲液：1. 磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffered Saline，PBS）-0.1MPBS的配方：-8gNaCl-0.2gKCl-1.44gNa2HPO4-0.24gKH2PO4-1L去离子水-调pH至7.42.HEPES缓冲液-基本配方：-119mMNaCl-5mMKCl-0.8mMMgSO4-0.4mMKH2PO4-2.4mMNaHCO3-20mMHEPES（pH7.4）-0.6mMCaCl23. Tris缓冲液-基本配方：- 25mM Tris- 192mM glycine-10%甘油-0.1%SDS-pH8.34. Hanks平衡盐液 (HBSS)-基本配方：-8gNaCl-0.4gKCl-0.146gKH2PO4-0.2gMgSO4-0.06gMgCl2-0.35gNaHCO3-0.06gNa2HPO4-pH7.45. Tris-EDTA-基本配方：- 1M Tris-HCl，pH 8.0-0.5MEDTA，pH8.0以上是常用的细胞培养基配方和缓冲液的一些例子，不同细胞类型和实验要求可能需要不同的培养基和缓冲液。
细胞培养基本知识基本技术
医学院 中心实验室 谷景义 85225841
主要内容： •1、细胞培养基本知识 •2、培养细胞生长环境 •3、细胞培养基本技术
•4、培养细胞质量控制
一、 细胞培养
• 把取得的组织用机械或消化的方法分 散成单个细胞，用培养基制成细胞悬 液，在体外适宜条件下，使细胞生长 繁殖，并保留其一定的结构和功能特 性。
二、培养细胞生长环境
Cell Culture Environment
Substrate Gas Medium Serum Supplements
Glass ﹠ Plastic Culture Vessels ……
O2 CO2
……
pH Osmolality Temperature ……
Hormones FBS Growth factors NCS Antibiotic ……
培养细胞的特性1 -生长方式及类型
• 贴附型、悬浮型
培养细胞的特性2 - 增殖特点
• 体外培养的细胞既保持了一定的体内细 胞的基本特性，但也具有本身的一些特 点。 • 贴附-伸展 • 接触抑制-增殖的密度抑制
贴附-伸展
接触抑制
• 当一个细胞被其他细胞围绕导致无处 可去而保持接触时，细胞不再移动， 在接触区域的细胞膜活动将停止。 • 因此，一般正常细胞并不相互重叠于 其上生长。
• 应用： • 软骨和骨组织（软骨细胞和干细胞，再生损伤的软骨、骨） • 循环系统和心脏（有目的地改变血管形成）
细胞培养技术的特点及应用
优点：
1）研究的条件可以人为控制 2）研究的样本均一 3）研究内容方便观察、检测、记录 4）研究的费用相对于经济
缺点：体外培养的细胞不能完全Байду номын сангаас同于体 内的细胞。
培养基的定义及配制培养基的基本原则
培养基的定义及配制培养基的基本原则培养基是一种含有生物体所需的营养物质和条件的培养环境，用于维持和培养细胞、组织或微生物的生长与繁殖。
培养基可分为无机培养基和有机培养基，具体配制需要根据生物体的需求和培养目的进行调整。
培养基的基本原则：1.营养成分：培养基中需要包含生物体所需的各种营养物质，如碳源、氮源、矿物质、维生素等。
这些成分能够提供给生物体进行生长、代谢和繁殖所需的能量和物质。
2. pH调节：培养基的pH值对于生物体的生长和繁殖有着重要的影响。
不同生物体对pH的要求不同，因此需要根据不同生物体的需求进行调节。
一般来说，细菌的适宜生长pH范围为6.5-7.5，细胞培养时一般为7.2-7.4。
3.温度调节：温度对于生物体的生长和繁殖也有重要影响。
不同生物体对温度的要求不同，因此需要根据不同生物体的需求进行调节。
一般来说，细菌的适宜生长温度为37℃，而其他生物体如真菌、植物和动物细胞则可能需要不同的生长温度。
4.氧气供应：氧气是细胞进行呼吸代谢所必需的。
对于需氧生物体，培养基中需含有足够的溶解氧。
而对于厌氧生物体，则需要使用密封容器或添加还原剂来提供不含氧气的培养环境。
5.添加物和抗生素：培养基中有时需要添加一些其他的化合物或抗生素来抑制不需要的微生物的生长，选择适当的添加物和抗生素有助于纯化并选育出特定的生物体。
培养基的配制需要根据具体的培养目的和生物体的需求进行。
一般来说，培养基的配制需要先准备培养基的基础成分，如碳源、氮源、矿物质等，按照一定比例混合后溶解于水中。
然后根据需要进行调节pH值和温度。
最后根据需要添加其他的添加物或抗生素。
无论是无机培养基还是有机培养基，其配制原则都是基于生物体对于营养物质、环境条件和生长繁殖要求的研究，希望能够提供一个最适合生物体生长繁殖的环境。
在配制培养基的过程中，需要考虑生物体的生长特性、代谢途径、对温度、pH和氧气的要求等因素。
同时也需要根据具体的研究目的，添加适当的添加物或抗生素，以满足研究的需要。
cho细胞培养基础知识
cho细胞培养基础知识CHO细胞（Chinese Hamster Ovary cells）是一种在生物医药领域中广泛应用的哺乳动物细胞系。
CHO细胞最早于1957年从中国仓鼠卵巢中分离出来，并在实验室中久经培养和改良。
CHO细胞系具有许多优点，如较高的细胞生长速度、易于培养和维持、对病毒感染的抵抗性等。
因此，CHO细胞系被广泛用于生物医药领域中的蛋白质表达、病毒疫苗生产和药物筛选等方面。
CHO细胞培养基是用于细胞培养的基本培养液。
它提供了细胞所需的营养物质和生长因子，同时维持细胞在体外的自由生长状态。
CHO细胞培养基的主要组成部分包括：基础培养液、补充物和 pH 调节剂。
基础培养液是细胞生长和繁殖所需的基本营养物质的来源。
CHO细胞需要一定的糖类、氨基酸、无机盐和维生素等营养物质来满足其生长和代谢的需求。
常用的CHO细胞培养基基础液包括 Dulbecco's Modified Eagle Medium（DMEM）和Iscove's Modified Dulbecco's Medium（IMDM）等。
CHO细胞培养基的补充物主要包括血清和其他添加剂。
血清是CHO细胞培养中最常用的补充物之一，它提供了细胞生长所需的营养物质和生长因子。
然而，由于血清存在着传染病的风险、批次之间的变异性较大等问题，越来越多的研究者开始使用无血清培养基来代替传统的血清培养基。
无血清培养基通常采用人血浆蛋白替代血清，或添加其他生长因子、激素和细胞因子等来维持细胞生长。
除了血清外，CHO细胞培养基中还可以加入一些其他的添加剂来提高细胞的生长和产物表达。
例如，普通培养基PI值较低，而加入polyethyleneimine（PEI）或lipofectamine（LF）等转染试剂能够提高细胞的转染效率。
此外，亲和调节因子、抗氧化剂和基因选择素等也是常用的培养基添加剂。
pH 调节剂是控制CHO细胞培养基 pH 值的重要组成部分。
DMEM、RIPA1640、F12、L15等细胞培养基的基本知识
尽管很多实验室在细胞系的培养基中常规加入抗生素作继代培养，但仍建议不要在原代培养中加入抗生素，其理由之一是获得的细胞是无菌的，原代培养时的细菌污染很少发生。其次，尽管认为抗生素对细胞代谢的影响可忽略，但最好避免使用它们，以免细胞生长环境的不稳定。最重要的是要意识到培养中主要污染物的类型，它们通常暗示了问题的来源。
在所有这些培养基中，谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度，这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源。对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸（若培养基中这两种物质缺乏时）。MEM与F12均要用5%的CO2来平衡，DMEM含更高浓度的NaCO3，要用10%的CO2来平衡，当然也可以在较低CO2浓度下使用。这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的，但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。
四、抗生素
在细胞培养中最常用的抗生素是青霉素（常用浓度是25~100ui/ml）与链霉素（25~100μg/ml）。这两种抗生素常混合使用。在一些实验室里，它们常规加入所有的培养基中。庆大霉素（10~100μg/ml）通常有广谱抗菌效应，并具有溶液稳定性，故也被一些实验室使用，特别是当有低水平的污染存在时更是这样。以上这些试剂对霉菌与酵母菌的污染均无效。
五、抗有丝分裂剂
某些DNA合成抑制剂对分裂细胞有毒，但对没有DNA合成的细胞仅有轻微影响。由于神经元通常缺乏DNA合成能力，因此对抗有丝分裂剂没有多大反应。这样的试剂常常用于神经元的培养，以消除或减少非神经元群体。若要杀死所有的非神经元细胞，可以先加入血清或生长因子来保证有高比例的非神经元细胞进行DNA合成，此时再加入抗有丝分裂剂。但是，某些细胞在它的细胞周期的某些时相时对抗有丝分裂剂是不敏感的。不过，可以重复的将抗有丝分裂剂使用于增殖的细胞群体。在CNS神经元的培养中抗有丝分裂剂常常在星形细胞形成单层后加入，此时，星形细胞由于接触抑制而终止了DNA的合成（即细胞停止增殖），它们不会因抗有丝分裂剂的加入而死亡。原代培养中用这种方法阻止成纤维细胞的过度增殖是十分必要的。有两种抗有丝分裂剂常用于神经元的培养：Fluorodexyuridine，是胸苷合成酶抑制剂，一般使用浓度为～10μM。尿苷（10μM）也常使用，可阻止不分裂细胞的RNA合成。另外，阿糖胞苷也常被使用，其使用浓度为5～50μM。使用任何一种抗有丝分裂剂，都必须考虑它的神经原毒性，应该确定最低效应的使用浓度。阿糖胞苷在很低的浓度下，也会对某些种类的神经元有毒性，可以造成特定神经原的死亡。其他的抗有丝分裂剂尚未表现出这种毒性。
细胞培养常用培养基及基本特性
细胞培养常用培养基及基本特性The Standardization Office was revised on the afternoon of December 13, 2020常用培养基及基本特性1、RPMI-1640 MediumRPMI-1640广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞的培养，是目前应用十分广泛的培养基。
主要用于悬浮细胞培养。
其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。
2、Minimum Essential Medium（MEM）也称最低必需培养基，它仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。
成分简单，可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。
MEM-Alpha一般用于培养一些难培养细胞类型，而其它没有特殊之处的细胞株则几乎均可采用MEM来培养。
3、DMEM-高糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养,更适合高密度悬浮细胞培养。
适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。
4、DMEM-低糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养。
低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。
5、DMEM/F12DMEM/F12培养基适于克隆密度的培养。
F12培养基成分复杂，含有多种微量元素，和DMEM以1：1结合，称为DMEM/F12培养基（DME/F12medium），作为开发无血清配方的基础，以利用F12含有较丰富的成分和DMEM含有较高浓度的营养成分为优点。
该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。
为了增强该培养基的缓冲能力，改良之一是在DMEM/F12（1：1）中加入15mMHEPES缓冲液。
干细胞培养基说明书
干细胞培养基说明书
干细胞培养基是一种特殊的培养基，用于维持和培养干细胞的
生长和增殖。
干细胞是一种具有自我更新和分化为多种细胞类型的
潜能的细胞。
干细胞培养基的说明书通常包括以下几个方面的内容：
1. 成分和配方，说明书会详细列出干细胞培养基的成分和配方，包括基础培养基、生长因子、细胞因子、补充物等。
这些成分和配
方对于维持干细胞的生长和特性非常重要。
2. 储存和稳定性，说明书会介绍干细胞培养基的储存条件和稳
定性，包括最佳储存温度、避光、避免冻融循环等。
这些信息对于
保证培养基的质量和稳定性至关重要。
3. 培养方法，说明书会详细描述干细胞培养的方法，包括培养
基的配制、细胞的传代和分化等。
这些方法对于使用干细胞培养基
进行实验和研究非常关键。
4. 质量控制，说明书通常也会包括对干细胞培养基质量控制的
描述，包括对培养基的纯度、稳定性和活性的保证。
5. 应用和注意事项，说明书会介绍干细胞培养基的应用领域和
注意事项，包括适用的细胞类型、培养基的限制条件和注意事项等。
这些信息对于正确和有效地使用干细胞培养基非常重要。
总的来说，干细胞培养基的说明书是使用该培养基的重要参考
资料，它提供了关于培养基成分、使用方法、质量控制和注意事项
等方面的重要信息，帮助使用者正确、有效地进行干细胞的培养和
研究工作。
希望这些信息能够对你有所帮助。
培养基的主要成分及作用 -回复
培养基的主要成分及作用-回复培养基是一种用于培养和繁殖细菌、真菌、酵母菌和细胞的基础培养介质。
它提供了细胞生长所需的营养物质和环境条件。
主要成分有碳源、氮源、矿物质盐和生长因子等。
下面将详细介绍培养基的主要成分及其作用。
碳源是培养基中的重要成分之一。
细胞需要碳源来合成生物大分子（如蛋白质、核酸和多糖）。
常用的碳源有葡萄糖、果糖、麦芽糖等。
碳源的添加促进菌落的扩大和生长。
氮源是生物合成蛋白质和核酸的必需元素，也是细胞生长所需的基础成分之一。
常见的氮源有氨基酸、尿素、硝酸盐等。
氮源能够提供氮元素，参与细胞核酸、氨基酸和蛋白质的合成，从而促进生长和繁殖。
矿物质盐是培养基中必不可少的成分之一。
矿物质盐含有细胞所需的各种微量元素，如钙、镁、钾、磷等，可以提供细胞在代谢中所需的离子和微量元素。
它们参与维持细胞内的渗透压和酸碱平衡，调节细胞内外环境，保障细胞正常生长和功能发挥。
生长因子也是培养基重要的成分之一。
生长因子可以促进细胞分裂和增殖，调节细胞生理功能。
根据不同的生物体需求，培养基中可能需添加特定的生长因子。
例如，某些细胞需要维生素、激素或特定的生物活性物质来维持其生长和分化。
除了以上主要成分，培养基还包含其他补充物质，如胶体、色素、抽提物等。
胶体具有增稠的作用，可以增加培养基的黏度和透明度，便于观察细胞的生长情况。
色素的添加可以使培养基有色，便于观察到细菌或酵母菌的生长和营养需求。
抽提物是从天然产物中提取的特定化合物，能够提供特定的生长因子，促进细胞的生长和分化。
综上所述，培养基的主要成分包括碳源、氮源、矿物质盐和生长因子等。
这些成分提供了细胞生长所需的营养物质和环境条件，促进细胞的正常生长、增殖和功能发挥。
不同类型的生物体和特定的实验目的需要不同的培养基配方，因此，掌握培养基的成分及其作用对于科学研究和实验操作都是至关重要的。
细胞培养基配方的制备与调整技巧
细胞培养基配方的制备与调整技巧细胞培养是现代生物学研究中不可或缺的一环，而细胞培养基作为细胞生长和繁殖的基础，其配方的制备和调整技巧对于细胞培养的成功至关重要。
本文将介绍一些关于细胞培养基配方的制备与调整技巧，帮助读者更好地进行细胞培养研究。
一、细胞培养基的基本组成细胞培养基的基本组成包括营养物质、生长因子、血清和缓冲液等。
营养物质是细胞进行代谢所必需的物质，如葡萄糖、氨基酸、维生素等。
生长因子是促进细胞生长和分化的重要因素，如胰岛素样生长因子、表皮生长因子等。
血清则提供了细胞所需的多种生长因子和营养物质。
缓冲液的作用是维持培养基的pH值稳定。
二、细胞培养基配方的制备1. 营养物质的选择和浓度调整根据细胞的需求和培养条件的不同，选择合适的营养物质，并根据需要进行浓度调整。
一般来说，葡萄糖的浓度在1-4g/L之间，氨基酸的浓度在0.2-2g/L之间，维生素的浓度在0.1-1mg/L之间。
2. 生长因子的添加根据细胞的类型和培养要求，选择适当的生长因子，并按照建议的浓度添加到培养基中。
例如，对于肿瘤细胞的培养，可以添加表皮生长因子或胰岛素样生长因子。
3. 血清的添加血清是细胞培养中常用的补充物，提供了细胞所需的多种生长因子和营养物质。
一般来说，培养基中的血清浓度在2-10%之间，可以根据需要进行调整。
4. 缓冲液的选择和调整细胞培养基的pH值需要保持在稳定的范围内，一般为7.2-7.4。
选择合适的缓冲液，并按照建议的浓度添加到培养基中。
常用的缓冲液有Hepes、Tris等。
三、细胞培养基配方的调整技巧1. pH值的调整如果培养基的pH值偏高或偏低，可以通过添加酸或碱来进行调整。
一般来说，向培养基中添加1M盐酸可以降低pH值，添加1M氢氧化钠可以升高pH值。
调整pH值时要小心操作，避免过量添加。
2. 营养物质的调整根据细胞的需求和培养条件的变化，可以适当调整培养基中营养物质的浓度。
例如，细胞的代谢活性较高时，可以增加葡萄糖或氨基酸的浓度；细胞的生长速度较慢时，可以减少营养物质的浓度。
细胞培养基的基本要求
细胞培养基的基本要求体外培养的细胞直接生活在培养基中，因此培养基应能满足细胞对营养成分、促生长因子、激素、渗透压、pH等诸多方面的要求。
营养成分：1. 氨基酸：所有细胞都需要12 种必须氨基酸：缬、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精、胱氨酸。
2. 单糖：六碳糖是主要能源，也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原料。
细胞对葡萄糖的吸收能力最高，半乳糖最低。
体外培养动物细胞时，几乎所有的培养基或培养液中都以葡萄糖作为必含的能源物质。
3. 维生素：生物素、叶酸、烟酰胺、泛酸、吡哆醇、核黄素、硫胺素、维生素B12 都是培养基常有的成分。
4. 无机离子与微量元素：细胞生长除需要钠、钾、钙、镁、氮和磷等基本元素，还需要微量元素，如铁、锌、硒、铜、锰、钼、钒等。
5. 促生长因子及激素：o 各种激素、生长因子对于维持细胞的功能、保持细胞的状态（分化或未分化）具有十分重要的作用。
有些激素对许多细胞生长有促生长作用，如胰岛素，它能促进细胞利用葡萄糖和氨基酸。
有些激素对某一类细胞有明显促进作用，如氢化可的松可促进表皮细胞的生长，泌乳素有促进乳腺上皮细胞生长作用等。
6. 渗透压：细胞必须生活在等渗环境中，大多数培养细胞对渗透压有一定耐受性。
人血浆渗透压290mOsm/kg, 可视为培养人体细胞的理想渗透压。
鼠细胞渗透压在320mOsm/kg左右。
对于大多数哺乳动物细胞，渗透压在260〜320mOsm/kg的范围都适宜。
7. pH、气体：是细胞生存的必需条件之一，所需气体主要是氧和二氧化碳。
氧参与三羧酸循环，产生能量供给细胞生长、增殖和合成各种成分。
一些细胞在缺氧情况下，借糖酵解也可获取能量，但多数细胞缺氧不能生存。
在开放培养时，一般置细胞于95％空气加5％二氧化碳的混合气体环境中培养。
二氧化碳既是细胞代谢产物，也是细胞所需成分，它主要与维持培养基的pH 有直接关系。
动物细胞大多数需要轻微的碱性条件，pH值约在7.2〜7.4，在细胞生长过程中，随细胞数量的增多和代谢活动的加强，二氧化碳不断被释放，培养液变酸，pH 值发生变化。
高三生物培养基知识点
高三生物培养基知识点高三生物学科是高中阶段的最后一门生物学课程，也是很多学生备考高考的重中之重。
其中，生物培养基是生物学中的重要知识点之一。
本文将对高三生物培养基相关的知识点进行探讨和解析。
一、培养基的定义和作用培养基是指培养和繁殖细胞、组织和微生物的基质，其作用是为细胞提供必需的养分、气体和理想的环境条件，为细胞的生长、分裂、分化和繁殖提供合适的环境。
二、培养基的种类1. 基本培养基：基本培养基是指含有维持细胞正常生长必需成分的培养基，如维生素、氨基酸、能量源等。
它提供了细胞所需的最基本的营养物质。
2. 选择性培养基：选择性培养基是指含有一定物质，可以选择性地促进某种特定微生物生长，而抑制其他微生物的生长。
通常用于分离和鉴定特定微生物群落。
3. 差异性培养基：差异性培养基是指通过添加不同化合物，使得不同细菌悬浮液在培养基中呈现出不同的生长特征，从而可以根据这些差异来判定不同细菌的类型。
三、培养基的组成一般来说，培养基含有以下几个主要组成部分：1. 碳源：包括葡萄糖、乳糖等，提供细胞所需的能量。
2. 氮源：包括氨基酸、尿素等，提供细胞合成蛋白质和其他氮化合物的原料。
3. 磷源：提供细胞合成核酸和三磷酸腺苷等磷化合物所需的磷。
4. 硫源：提供合成胱氨酸、半胱氨酸等硫氨基酸所需的硫。
5. 矿质元素：包括铁、钾、镁等，提供细胞所需的微量元素。
四、培养基的制备方法1. 固体培养基的制备：首先，将所需的培养基成分按比例配制，然后加入适量的琼脂或明胶，并在加热条件下溶解。
然后，将溶液分装至培养皿中，并加盖。
最后，加热高温灭菌，使培养基凝固。
2. 液体培养基的制备：将所需的培养基成分按比例配制，并加入适量的蒸馏水。
然后，将混合溶液分装至试管、培养瓶等容器中。
最后，加热高温灭菌，以杀灭其中的微生物。
五、常见的培养基1. 营养琼脂培养基：适用于常见的细菌培养和鉴定，如营养琼脂平皿培养基、营养琼脂管培养基等。
2. 营养液体培养基：适用于微生物学实验室做大量广谱的培养，如液体营养培养基、液体管培养基等。
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细胞培养基的基本知识培养细胞的完全培养基由基础培养基（如MEM）和添加剂（如血清或无血清培养用的某些确定的激素及生长因子）组成，培养基的配方一直在改进，其中包括抗生素和抗有丝分裂剂等等。
一、基础培养基绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上，添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。
最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物，其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。
而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸，维生素的范围亦很广，另外常规含有无机盐和代谢添加剂（例如核苷酸）。
MEM/F12 这两种培养基各取1/2，形成神经生物学最通用的培养基。
Dulbecco`s改良培养基——DMEM，现应用于快速生长的细胞，同MEM含有相同的营养成分，但浓度高出2~4倍。
选择某种培养基，应仔细了解成分表，应知道大多数情形下培养基都有不足。
例如，有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸，而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域，但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言，则并非最佳选择，特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。
F12中含有硫酸亚铁，据报道也有神经毒效应。
在所有这些培养基中，谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度，这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源。
对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸（若培养基中这两种物质缺乏时）。
MEM与F12均要用5%的CO2来平衡，DMEM含更高浓度的Na2CO3，要用10%的CO2来平衡，当然也可以在较低CO2浓度下使用。
这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的，但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。
原则上，HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐，以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。
实际操作中并非如此简单。
显然，溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的。
Leiboviz`s L15培养基可用来在大气环境中令神经细胞生长，该培养基采用了与众不同的BSS作基础，它含有高浓度的氨基酸来提高缓冲能力，培养基中使用半乳糖作碳源，以阻止培养基中乳酸形成，少量溶解的CO2由丙酮酸代谢产生。
这一培养基的优点是明显的，特别是在保持较高CO2有困难时，例如在长时间的显微操作及生理学研究中。
L15培养基已用来成功的培养了外周神经元，但尚未在CNS神经元的发育研究中全面检测过。
二、血清细胞在单纯的基础培养基中不能存活，在特殊类型的细胞培养中必须提供某些痕量营养物质及生长因子才能使细胞得以生长并维持生长状态。
基础培养基常常要添加血清，血清终浓度多为5~20%。
特殊用途的血清来源须用经验确定，广泛应用的血清种类有马血清与胎牛血清。
胎牛血清中富含有丝分裂因子，常选其作增殖细胞用的血清，也用于细胞系和原代培养。
而马血清常常用来作有丝分裂后的神经元培养。
然而，很多人也将胎牛血清用于神经元培养，也有人用马血清来培养胶质细胞。
用大鼠进行神经元培养的某些研究者喜欢使用同型血清；人类的胎盘血清，亦曾用于神经组织的器官类型的培养，也用在一些特殊培养种类中。
血清的不同批号含有不同的成分，所以许多人发现，应该在使用前对血清进行测试。
大多数试剂商提供样品，所满意的批号即可选用，这样可以一次得到足够一年用量的血清，血清在使用前通常在56℃加热30分钟，这一过程称为灭活。
三、无血清培养基1979年神经细胞培养出现了一个重要进展，用化学添加剂即可维持神经细胞存活与生长而不需要在培养基中添加血清。
其工作基础是用合适的激素、营养物和促贴壁的物质的组合置换培养基中的成分，最后找到了适合大多数细胞培养的试剂配方，该配方称为N2，专门用于神经细胞培养，最早是用在B104大鼠神经母细胞瘤细胞系的培养。
它的基础培养基是1：1的DMEM与H12的混合液，添加了胰岛素、转铁蛋白、黄体酮、腐胺和硒。
胰岛素和胰岛素样生长因子对于大多数类型细胞的存活和生长有重要作用，硒是谷胱甘肽产生的合作因子，可能有助于过氧化物和超氧化物的水解，有报道说还能防止细胞的光照损伤。
随后的其他配方如N1N3则含有较低浓度的转铁蛋白。
未料到的是上述配方构成的培养基可以支持神经母细胞瘤细胞系快速增殖，随后又发展了能支持原代培养的各种神经元生长的培养基，这种培养基在许多实验室里已取代了有血清培养。
在某些培养方案中，细胞直接进入无血清培养，这样的培养基可以消除来自血清的不均一性。
更为重要的是，它们可用来检测生长因子以及其他促进神经元存活或生长的因子，或者用来检测那些可保护神经元免遭环境毒物损伤的制剂。
专用于神经元的培养基在某些培养环境中还可以减低非神经元细胞的增殖，故可使神经元纯化。
血清中含有的组分，例如血清蛋白，可作为代谢毒物清除剂使用并能聚集于培养基中。
当缺乏这些成分时，如神经元在无血清培养基中生长时，特别容易为过氧化物及自由基伤害，这已被许多研究者注意到了。
过氧化物酶以及超氧化物歧化酶可阻止培养基中过氧化物和超氧化物的累积，有报道讲可以促进低密度培养细胞的存活。
有学者发现细胞存活可为氧分压的下降而促进。
因而，无血清培养基的配方常含有抗氧化剂的试剂。
例如，维生素E和丙酮酸，可作为过氧化物清除剂使用。
上述这些影响在高密度培养时变小，特别是神经元与胶质共培养时，它们可以吸收和代谢神经元毒性物质如谷氨酸。
应该注意，尽管无血清培养基是有化学限定性的，但在培养过程中它仍有变动，培养起始时可能有些物质缺乏，而后细胞的产物可能积累，从而使培养基的成分改变。
这其实是有另一方面的好处，即条件培养基（已培养过细胞的培养基）的形成，条件培养基常常用来增加神经元和胶质细胞的发育。
生长因子绝大多数哺乳类胚胎神经元有严格的营养要求，若不能提供适宜的生长因子或合适的因子组分，将会使绝大多数神经元在体外培养的数天中死亡。
解决这一问题有两条思路，一是让培养细胞提供自己的营养因子，二是在培养基中加入纯的生长因子。
如果细胞混合物能在高密度时生长，所需的生长因子便会积累到可观的数值，尤其当培养基很少变化时。
若某种细胞混合物生长时有很少的营养需求，可保持培养基在一段时间里不作任何变动，以使营养（生长）因子积累，而最后促使所需要的细胞类型能够生长。
但是，这种对营养（生长）因子自身倚赖性亦有弊端，因为通常在混合细胞群体中细胞很难有同比例增殖，某些细胞会因生长条件的贫乏而受限制。
另外，这种方法只能进行相当高密度的细胞培养。
因为培养基的条件在细胞的较低密度时变的不够有效。
不过某些时候纯化神经元群体的低密度培养可用条件培养基（经过了高密度培养）进行，或在胶质上生长的神经元所用过的培养基来支持。
满足神经元营养需求的第二条途径是向培养基中加入生长因子。
通常用于组培的通用适宜因子是神经生长因子NGF。
不过，只有少数对这种蛋白质有反应的细胞类型的细胞才能生长。
许多PNS类型的神经元在离体状态时表现出简单的营养需求，只需提供单一的营养因子就足以使其在低密度时增殖。
例如，大鼠交感神经元仅需NGF即能存活，在其生存期间，这些神经元可在严格局限条件下生长好几个月（即在无血清培养基中、或缺乏胶质细胞、或在化学限定基质上）。
有证据表明NGF是活体中交感神经元存活的生理调节因子。
然而，交感神经元也对来自胶质细胞的神经营养因子（GDNF）有反应，还有NT3、LIF与CNTF也对其有作用。
在不产生GDNF或NT3的动物中，交感神经元会有损伤。
在离体与活体营养需求之间的差别或许可以用在不同环境中NGF含量和分布的不同来解释，培养中的NGF弥散在整个环境中，而在活体内，大部分区域的含量是有限的。
因此，NGF的重要性在于其合适的浓度。
尽管在大多数实验中已经习惯了营养因子的最大效应使用量，其他营养因子的协同效应在亚优剂量下更容易观察到。
此外，高浓度的营养因子可使细胞更能抵抗毒剂以及其他压力。
相应的，低浓度的营养因子可能用来检查表现型，例如对自由基或氨基酸的毒性刺激剂量的反应。
有许多其他的PNS培养系统只需单一营养因子就可使有实用价值的细胞保持在一定比例，广为人知的有雏鸡睫状自主神经节神经元和大鼠背根神经节感觉神经元。
不过，这些模型也有局限性。
例如，培养中的睫状神经节的神经元加入CNTF时，超过90%的神经元能存活一个很长时期，但并未有迹象表明它属于内源的靶细胞来源的营养因子，而是有争论的相关分子，GPA，扮演了这一角色。
大鼠背根神经节含有好几种细胞群体，其中小细胞群、包括nocioceptive cell，对NGF有反应，但其他神经元，例如大细胞群中的proprioception却对不同的神经营养因子有反应。
因此，在大多条件下培养物的生长并不能忠实反映亲代群体的所有特性，这一问题在CNS的细胞培养中特别突出，因为已有的经验表明，没有一种培养基能适合于所有类型及亚类的神经细胞的生长。
现有的证据已表明，CNS神经元的营养需求比PNS的更复杂。
对脊髓运动神经元与视网膜节细胞神经元的研究表明，这些神经元与外周神经元相比能对更为广泛的营养因子起反应。
例如，至少发现了15种不同的分子可在离体条件下增加神经元的存活。
而且，已观察到运动神经元与视网膜对任何单独的营养因子的存活反应，与PNS中所观察到的典型反应相比，都要小得多。
因此，大多数影响运动神经元及视网膜节细胞的营养因子仅仅只能支持神经元的亚群，而神经元的最佳存活要求诸多因子的结合。
在视网膜节细胞的培养中，因子的最佳组合（如BDNF、CNTF、IGF、bFGF）包括了来自不同生长因子家族的代表。
这一结果的普遍性尚待进一步的证实，但敲除单一的营养因子基因之后，没有表现出对CNS大多类群的神经元的存活产生太大影响，这一观察与上述的事实是一致的。
现已知少突胶质细胞的长期存活也需要众多营养因子的相互作用。
四、抗生素在细胞培养中最常用的抗生素是青霉素（常用浓度是25~100uI/ml）与链霉素（25~100μg/ml）。
这两种抗生素常混合使用。
在一些实验室里，它们常规加入所有的培养基中。
庆大霉素（10~100μg/ml）通常有广谱抗菌效应，并具有溶液稳定性，故也被一些实验室使用，特别是当有低水平的污染存在时更是这样。
以上这些试剂对霉菌与酵母菌的污染均无效。
尽管很多实验室在细胞系的培养基中常规加入抗生素作继代培养，但仍建议不要在原代培养中加入抗生素，其理由之一是获得的细胞是无菌的，原代培养时的细菌污染很少发生。
其次，尽管认为抗生素对细胞代谢的影响可忽略，但最好避免使用它们，以免细胞生长环境的不稳定。
最重要的是要意识到培养中主要污染物的类型，它们通常暗示了问题的来源。
五、抗有丝分裂剂某些DNA合成抑制剂对分裂细胞有毒，但对没有DNA合成的细胞仅有轻微影响。
由于神经元通常缺乏DNA合成能力，因此对抗有丝分裂剂没有多大反应。